Ekstraksi, Isolasi dan Identifikasi Flavonoid dari Daun Euphorbia Neriifolia

Abstrak
Flavonoid yang terkandung dalam daun Euphorbia neriifolia diekstraksi, diidentifikasi dan
dikarakterisasi. Ekstraksi soxhlet langsung dan berurutan serta fraksi terkonsentrasinya menjadi sasaran
kromatografi lapis tipis dan kromatografi lapis tipis kinerja tinggi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
hasil maksimal flavonoid (6,53 g) diperoleh dari ekstrak etanol. Nilai Rf skrining flavonoid dan fitokimia
terisolasi telah dibandingkan dengan Quercetin standar. Karakterisasi flavonoid terisolasi dilakukan oleh
IR, 1H NMR, dan MS. Berdasarkan struktur analisis kimia dan spektral dijelaskan sebagai 2- (3,4-
dihydroxy-5-methoxy-phenyl) - 3,5-dihydroxy-6,7-dimethoxychromen-4-one, flavonoid. Senyawa ini
diisolasi untuk pertama kalinya dari tanaman ini.

BAB I
Perkenalan
Phytochemistry melaporkan ribuan molekul atau senyawa organik baru setiap tahun. Pengujian
farmakologis, modifikasi, derivatisasi, dan penelitian tentang produk alami ini merupakan strategi utama
untuk menemukan dan mengembangkan obat baru (Kayser et al., 2000). Selain itu, metabolit sekunder
tanaman memberikan sifat kimia dan farmasi yang menarik untuk kesehatan manusia (Raskin et al.,
2002; Reddy et al., 2003). Senyawa milik terpenoid, alkaloid dan flavonoid saat ini digunakan sebagai
obat atau untuk mencegah berbagai penyakit (Raskin et al., 2002) dan khususnya beberapa senyawa ini
tampaknya efisien dalam mencegah dan menghambat berbagai jenis. kanker (Reddy et al., 2003).

Flavonoid adalah kelompok sekitar 4000 senyawa polifenok alami, yang ditemukan secara universal
dalam asal tanaman. Menurut perbedaan dalam kelompok-kelompok fungsional dan posisi relatif
mereka dari kerangka 15-karbon (aglikon), flavonoid dikelompokkan menjadi beberapa subkelompok
termasuk yang berikut: flavon, flavon, flavonol, isavflonoid, anthocyanidin, dan chalcones (Harborne,
1998) .

Tanaman Euphorbia neriifolia, terutama daun, telah dilaporkan memiliki berbagai sifat obat (Ilyas et al.,
1998; Janmeda et al., 2011; Pracheta et al., 2011; Sharma et al., 2011a, b , 2012a, b), yang telah
mendorong penyelidikan komprehensif daun E. neriifolia. Sejumlah senyawa telah diisolasi (Chatterjee
et al., 1978;Ng, 1990; Ilyas et al., 1998; Yadav et al., 2011), tetapi ini adalah laporan pertama yang
mengisolasi flavonoid dari daun E. neriifolia. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi
kelompok yang paling penting dari kelas fitokimia yaitu flavonoid menggunakan TLC dan HPTLC sebagai
teknik dan dikarakterisasi melalui spektral mereka (IR, 1H NMR dan MS), serta perbandingan dengan
bahan referensi.
 BAB II
Percobaan

2.1. Bahan kimia dan reagen

Semua bahan kimia dan reagen yang digunakan dalam penelitian ini memiliki tingkat analitis dan dibeli
dari perusahaan dan lembaga yang dapat diandalkan [Bahan kimia tertentu, SIGMA, SRL (India), MERCK,
RANB-AXY, dan SUYOG]. Silica gel (G) 60F dan 0,25 readymade aluminum sheets (Merck KGaA, Jerman).
Silica gel 60 F254, lembaran aluminium HPTLC 20 · 20 cm, Merck KGaA, Jerman Ord. No. 1.05554.

2.2. Pengadaan, otentikasi bahan tanaman

Daun E. neriifolia (EN) dikumpulkan dari kebun obat Universitas Banasthali, Banasthali dan daerah
terdekat di Banasthali, Rajasthan, India (Lintang N-26 ° 24014,841400; Bujur E-73 ° 5209,719400), pada
bulan Oktober 2009 dan diidentifikasi secara taksonomi oleh Botanis dari Krishi Vigyan Kendra,
Universitas Banasthali, Banasthali, Rajasthan, India. Spesimen voucher disimpan di herbarium
Departemen Bioscience dan Bioteknologi, Universitas Banasthali (No. BVH – 780141A).

2.3. Ekstraksi

Daun kering teduh bubuk (250 g), soxhlet diekstraksi dengan 70% (v / v) etanol dan vakum
terkonsentrasi hingga kering di bawah tekanan berkurang pada 60 ° ± 1 ° C. Setelah pengeringan dalam
oven udara panas (40–45 ° C), disimpan dalam wadah kedap udara dalam lemari es pada suhu 5 ° C.
Residunya ditunjuk sebagai ekstrak hidro-etanol dari E. neriifolia (HEEN).

Daun kering E. neriifolia (250 g) diekstraksi secara sukses dengan pet-eter, benzene, kloroform, etil
asetat, dan etanol dan akhirnya dimaserasi dengan air suling (non-polar ke polar) untuk mendapatkan
ekstrak masing-masing. Konten flavonoid dan keberadaannya ditentukan oleh metode Harborne (1998),
menggunakan quercetin sebagai standar. Ekstrak dianalisis dengan menggunakan TLC.

2.4. Kromatografi lapis tipis (KLT)

Kromatografi lapis tipis dilakukan dengan menggunakan metode standar (Harborne, 1998). Sejumlah
kecil sampel (2 mg / ml) dilarutkan dalam pelarut masing-masing. Standar kuersetin (1 mg) dilarutkan
dalam metanol. Fase gerak yang berbeda dengan konsentrasi yang berbeda digunakan dalam program
penyaringan dan memilih fase di mana pemisahan flavonoid menjadi jelas: n-butanol: asam asetat: air
(2: 2: 6). Semua pelat divisualisasikan secara langsung setelah pengeringan dan dengan bantuan UV
pada 254 nm dan 366 nm pada penampil UV TLC. Nilai Rf dari berbagai tempat yang diamati dihitung.
Pita coklat yang diproduksi setelah menjaga piring di ruang yodium tergores dan digantung dalam fase
gerak secara terpisah selama 3-4 hari. Setelah fase gerak disedot, vakum diuapkan dan residu yang
tersisa dikumpulkan sampai jumlah yang cukup untuk dosis dan analisis spektrofotometri diperoleh.
Bahan murni yang dipilih menjadi sasaran HPTLC dan spektral IR-nya.

2.5. Penapisan fitokimiawi senyawa yang diisolasi

Tes kimia seperti yang dijelaskan oleh Harborne (1998) dilakukan pada senyawa yang diisolasi
menggunakan prosedur standar.

2.6. Metode HPTLC untuk estimasi flavonoid

Peralatan CAMAG TLC yang lengkap terdiri dari aplikator sampel Linomat V yang sepenuhnya otomatis,
ruang pengembangan. Akhirnya, pemindai Camag TLC tersedia yang memungkinkan evaluasi
densitometrik kromatogram dan perangkat lunak CATS 4 untuk interpretasi data. Sekitar 10 mg ekstrak
EN diambil dan dilarutkan dalam masing-masing pelarut dan volumenya dibuat hingga 10 ml dalam
campuran standar (1000 lg / ml). Standar (10 mg) diambil dan dilarutkan dalam metanol. Ini ditransfer
ke permintaan standar dan volume dibuat hingga 100 ml untuk menyiapkan 100 lg / ml larutan. Silika gel
60 F254 dan lembaran aluminium HPTLC digunakan sebagai adsorben (fase stasioner). Ekstrak
diterapkan titik-bijaksana dari 1000 lg / ml larutan sampel, 10 ll sampel diterapkan pada lembaran
aluminium HPTLC sebagai trek yang berbeda dalam bentuk pita lebar 6 mm dengan menggunakan
Camom semi-otomatis Linom- pada 5 spotter di jarak 12 mm. Gas nitrogen juga disediakan untuk
pengeringan band secara simultan dan kemudian menggunakan pengering untuk pengeringan band
sepenuhnya. HPTLC dari berbagai ekstrak dilakukan dengan menggunakan fase gerak n-butanol: asam
asetat: air (2: 2: 6).

Untuk menjenuhkan ruang, 10 ml fase gerak ditempatkan di masing-masing Camag twin t bottom-
bottomed melalui ruang TLC, 30 menit sebelum pengembangan pelat PTLC. Ruangan itu disegel dengan
film dan ditutup dengan tutup baja. Pelat yang dikembangkan kemudian dikeringkan dan dipindai
menggunakan pemindai TLC 3 dengan perangkat lunak Wincats di bawah 364 nm (Wagner dan Bladt,
1996). Semua pelat divisualisasikan langsung setelah pengeringan dan profil sidik jari foto
didokumentasikan menggunakan Camag Reproster - 3 di bawah 254 nm dan 366 nm dalam UV dan
cahaya tampak. Gambar digital dari chromatograms dievaluasi dengan program CAMAG Video Scan.
Gambar yang diambil menjadi sasaran inspeksi visual pada layar komputer. Perbedaan yang ditemukan,
ditentukan oleh sistem HPTLC di mana perbedaannya terdeteksi dan oleh nilai Rf (dan warna) suatu
senyawa dalam sistem.

2.7. Karakterisasi majemuk

Untuk karakterisasi senyawa IR, NMR dan spektrum massa dilakukan. IR diperoleh untuk flavonoid
terisolasi. Sampel (1-2 mg) dihancurkan dalam pelet KBr (3-4 mg) menggunakan FTIR (Fourier transform
Infrared spectroscopy; Model - Varian 3600) dengan bantuan tekanan mekanis. Mereka direkam dalam
kisaran bilangan gelombang 4000-400 cm — 1 dalam instrumen FTIR. Spektra 1H NMR direkam pada
DRX-Bruker 300 MHz (Mega Hz), Swiss. Medan magnet nuklir diperoleh untuk flavonoid terisolasi.
Senyawa terisolasi dilarutkan dalam pelarut CDCl3 dan sekitar 600 ll dituangkan dalam tabung NMR dan
diamati pada bidang magnet yang diterapkan.

Misalnya diperoleh oleh TOF MS ES + 5.18e4, TOF MS ES + 477 dan TOF MS

ES + 174.80ES + 3 (ABHAY_BIOTECH 28).

Hasil dan Pembahasan

Metode kromatografi (TLC & HPTLC) untuk deteksi flavonoid dari E. neriifolia, belum dilaporkan dalam
literatur.

3.1. Pemisahan kromatografi

Di antara semua itu, hasil ekstrak etanol (48,9 g) dan air (89,5 g) ditemukan lebih banyak dibandingkan
semua (Gbr. 1). Tersedia semua tujuh ekstrak, ekstrak etanol yang mengandung sebagian besar
flavonoid dan ekstrak etanol semi padat lengket berwarna coklat tua (48,9 g) digunakan untuk
pemisahan kromatografi menggunakan kuersetin sebagai standar. Awalnya, berbagai fase pelarut
dengan rasio yang bervariasi dicoba (Sharma dan Janmeda, 2013a), untuk semua fraksi E. neriifolia. Dari
semua n-butanol: asam asetat: air (BAW, 2: 2: 6) ditemukan menjadi sistem pelarut yang paling tepat
untuk pemisahan flavonoid dari ekstrak etanol EN. Setelah TLC tiga tempat diselesaikan yang
dinominasikan sebagai F1, F2 dan F3 memiliki nilai Rf masing-masing 0,60, 0,79 dan 0,90 (Gambar 1).
Persentase hasil senyawa yang diisolasi dari ekstrak etanol EN ditunjukkan pada Tabel 1. Hasil
maksimum diperoleh dalam fraksi F2 (0,65 g). Nilai Rf standar kaempferol lebih besar dari quercetin dan
rutin, sehingga diduga bahwa senyawa F3 (0,90) terkait dengan kaempferol dan F1 bertepatan dengan
rutin. Ketika pelat yang dikembangkan disemprot dengan amonia dan uap yodium, itu menunjukkan
warna quercetin berwarna kuning tua. Nilai Rf (0,79) dari F2 diisolasi dari tabel 1 Hasil persentase
senyawa yang diisolasi dari 500 g ekstrak etanol E. neriifolia.

Table 1 Percentage yield of compounds isolated from 500 g

ethanolic extract of E. neriifolia.
IC Rf Value Yield of IC (g) % yield of IC
IF1 0.60 2.121 0.424
IF2 0.79 6.532 1.306
IF3 0.90 5.263 1.052
IC: Isolated compounds.

IC Rf Nilai Hasil IC (g)% hasil IC

IF1 0,60 2,121 0,424

IF2 0,79 6,532 1,306

IF3 0.90 5.263 1.052

IC: Senyawa terisolasi.

ekstrak etanol yang bertepatan dengan nilai Rf standar quercetin. F2 secara hati-hati dikristalisasi
dengan etanol, menghasilkan kristal kuning pucat padat, larut dalam air dan dalam pelarut organik dan
dirancang sebagai E. neriifolia terisolasi flavonoid (ENF). Senyawa ENF dipilih untuk penelitian lebih
lanjut yang mencakup KLT berulang, mengidentifikasi sifat senyawa dengan melakukan beberapa tes
kualitatif, konfirmasi oleh HPTLC dan IR senyawa ini. Meena dan Patni (2008) mengadopsi prosedur yang
sama untuk isolasi & identifikasi flavonoid ‘‘ quercetin ’dari Citrullus colocynthis. (Lihat Gambar 2)

3.2. Penapisan fitokimia senyawa terisolasi (ENF)

Hasil berbagai tes kualitatif yang dilakukan di laboratorium diuraikan dalam Tabel 2. Kehadiran flavonoid
(ENF) dikonfirmasi oleh tes skrining, yang menggambarkan tes positif untuk flavonoid dan negatif untuk
steroid, terpenid, dan alkaloid.

3.3. Profil pencetakan sidik jari HPTLC

Penanda flflonol (quercetin) otentik yang diperoleh secara komersial dikromatografi bersama.
Kromatogram HPTLC menunjukkan jumlah komponen maksimum
Gambar 1 Diagram skematis untuk isolasi flavonoid dari E. neriifolia.

Gambar 2 tampilan awal HPTLC dari etil asetat, etanol, ekstrak air dan flavonoid terisolasi (ENF)
dibandingkan dengan quercetin.

Table 2 Analysis of phytochemicals in compound isolated

from ethanolic extract of E. neriifolia leaves and standard.
S. no. Phytochemicals ENF Standard (quercetin)
1 Phenols ++ ++
2 Steroids – –
3 Alkaloids – –
4 Flavonoids +++ +++
5 Terpenoids – –

Tabel 2 Analisis fitokimia dalam senyawa yang diisolasi dari ekstrak etanol daun E. neriifolia dan standar.

S. no. Phytochemicals ENF Standard (quercetin)

1 Fenol ++ ++

2 Steroid - -

3 Alkaloid - -

4 Flavonoid +++ +++

5 Terpenoid - -
diamati pada mode UV dan absorbansi fluoresensi. Gambar. 2 mengkonfirmasi hasil yang diperoleh oleh
TLC, di mana spektral kromatogram dengan jelas menunjukkan bahwa nilai Rf dari semua ekstrak yang
disebutkan dan senyawa yang diisolasi (ENF) bertepatan dengan standar quercetin. Hasilnya didukung
oleh laporan sebelumnya (Lakshmi et al., 2012; Sharma dan Janmeda, 2013a; Sharma dan Pracheta,
2013a). Efek terapi yang diduga dari banyak obat-obatan tradisional mungkin dianggap berasal dari
kehadiran flavonoid (Schultz et al., 2008). Kehadiran anti-karsinogenik (Janmeda et al., 2011; Sharma et
al., 2011b; Sharma et al., 2012b) dan antioksidan (Pracheta

Gambar 3 Spektrum massa senyawa yang diisolasi.

Sifat ekstrak daun Euphorbia neriifolia dapat dikaitkan karena adanya flavonoid.

3.4. Identifikasi dan analisis spektral flavonoid terisolasi

Jarum kuning pucat diperoleh setelah pemurnian: m.p. 191–193 ° C, Rf: 0,79 (BAW). Spektroskopi IR
memberikan sidik jari obat yang melaluinya kita dapat mengidentifikasi tingkat ikatan dan jenis
kelompok fungsional dalam sampel. Semua nilai IR dan NMR berada dalam urutan menurun. Spektrum
IR ENF dalam pelet KBr menunjukkan puncak pada 3624, 3473, 3286 cm — 1 (OH), 1707 cm — 1 (> C‚O),
1649 cm — 1,

1408 cm — 1 (CAC‚C), 1275, 1245, 1045 cm — 1 (OCH3), dan

769,8 cm — 1 (CAH). Puncak mengungkapkan jumlah kelompok fungsional yang memiliki signifikansi
besar terhadap prospek obat E. neriifolia.
Spektrum 1H NMR dari ENF diambil sebagai frekuensi operasi 300 MHz dalam CDCl3 dan spektrum dari
ENF menampilkan sinyal yang sesuai dengan cincin-b yang disubstitusi dari inti flavonoid pada d ppm:
8.04 (9H, s, –OCH3), 7.27 ( 3H, s, Ar – H), 6.73 (4H, s, –OH), dan 2.89–2.97 (2H, d, Non-Ar – H).

Spektrum 1H NMR dari senyawa yang diekstraksi mengungkapkan sinyal proton aromatik, yang dekat
dengan yang dilaporkan untuk gugus Quercetin (Harborne dan Mabry, 1982; Agrawal dan Bansal, 1989).
Oleh karena itu, senyawa ENF yang diisolasi dapat berupa flavonoid terkait kuercetin yang sebelumnya
tidak dilaporkan dalam tanaman judul.

Berat molekul dari senyawa yang diekstraksi diamati oleh TOFMS ES + m / z 378,33 dihitung untuk
C18H18O9 (m / z 378) seperti yang digambarkan pada Gambar. 3. Puncak ion molekul dengan puncak
basa karena ion molekul paling stabil diamati. pada 240,25 dihitung untuk C15H12O3 (m / z 240).
Puncak ion basa sesuai dengan bagian dasar flavonol. Komponen utama dari ekstrak dicirikan sebagai 2-
(3,4-dihydroxy-5- methoxy-phenyl) -3,5-dihydroxy-6,7-dimethoxychromen-4-one dan dirancang sebagai
ENF (E. neriifolia flavonoid) flavoid dengan menggunakan spektrometri massa seperti yang digambarkan
pada Gambar. 4.

Kita telah melihat aktivitas anticarcinogenik dari flavonoid novel ini pada tikus dan diketahui bahwa
flavonoid terisolasi mampu melindungi arsitektur jaringan dan mampu meminimalkan kelainan dan
karsinogenisitas yang disebabkan oleh N-nitrosodiethylamine (Sharma dan Janmeda, 2013b) ; 2014). Ini
mungkin karena penghambatan radikal ROS & menetralkan radikal bebas yang memberikan bukti ilmiah
tentang penggunaan terapeutik etno-obat dari ENF untuk mengobati kanker. Spektrum IR dari flavonoid
terisolasi mengkonfirmasi keberadaan kelompok OH dalam keadaan bebas dan mengikat yang bertindak
sebagai tempat pengikatan enzim karena flavonoid terisolasi menunjukkan aktivitas anti-karsinogenik
sejauh mungkin dengan memperlambat dan memodulasi enzim fase I (sitokrom P450 dan b5) tingkat
peroksidasi, enzim biokimiawi (katalase, superoksida dismutase, aspartat transaminase, alanine
transaminase, alkaine fosfat, total protein dan kolesterol total) diubah oleh N-nitrosodiethylamine
(Sharma dan Janmeda 2013b; 2014; Sharma dan Pracheta, 2013b).

Hubungan struktur-aktivitas kuantitatif (QSAR) adalah cara yang diterima untuk membangun hubungan
kuantitatif antara aktivitas biologis dan deskriptor yang mewakili sifat fisikokimia senyawa menggunakan
metode statistik (Kiralj dan Ferreira, 2009) dan membantu untuk secara tepat

Gambar 4 Struktur flavonoid 2- (3,4-dihydroxy-5-methoxy-phenyl) -3,5-dihydroxy-6,7-

dimethoxychromen-4-one (C18H18O9).
memprediksi aktivitas biologis dari analog yang baru dirancang (de Melo et al., 2010). Prediksi yang
sukses dari anti-HIV (Alves et al., 2001) dan aktivitas anti-tumor (Moriani et al., 2002) senyawa flavonoid
telah dilaporkan. Menurut penelitian ini, aktivitas antioksidan flavonoid sangat bergantung pada jumlah
dan posisi gugus hidroksil dalam molekul. Pada penemuan ini cincin B dihidroksilasi (struktur katolik),
adanya gugus fungsi hidroksil dan metoksi dan pada cincin C dari gugus hidroksil juga diduga
meningkatkan kapasitas antioksidan. Kehadiran gugus hidroksil pada 3, 5, 30 dan 40 digambarkan untuk
meningkatkan aktivitas antioksidan flavonoid terisolasi.

Kesimpulan

Kesimpulan dari studi tersebut dianalisa bahwa tanaman yang diteliti mengandung flavonoid. Flavonoid
2- terisolasi (3,4-dihidroksi-5-metoksi-fenil) -3,5-dihidroksi-6,7-dimetoksi-oksichromen-4-one
(C18H18O9) yang diekstraksi dari Euphorbia neriifolia memiliki potensi yang signifikan untuk mencari
radikal bebas, ROS dan juga menghambat peroksidasi lipid dan karenanya memiliki potensi
antikarsinogenik. Kehadiran flavonoid konsentrasi tinggi dalam Euphorbia neriifolia yang digambarkan
dari hasil kami, bertanggung jawab untuk menanamkan mekanisme antioksidan yang inturn adalah
faktor penyebab berbagai penyakit degeneratif.

Kontributor

Kedua penulis telah berpartisipasi secara material dalam penelitian dan atau persiapan artikel. Veena
Sharma membantu merancang percobaan dan menulis artikel. Pracheta Janmeda melakukan pekerjaan
eksperimental.

Ucapan Terima Kasih

Para penulis berterima kasih kepada CDRI, Lucknow atas bantuan mereka dalam menyediakan IR, 1H
NMR dan spektrum massa. Salah satu penulis (P. Janmeda) berterima kasih kepada University Grants
Commission (UGC) untuk memberikan bantuan keuangan (Hibah / F. No. 37-68 / 2009; SR) dan otoritas
dari Universitas Banasthali, Rajasthan untuk menyediakan sisa fasilitas yang diperlukan.
 Referensi

Agrawal, P.K., Bansal, M.C., 1989. Glikosida flavonoid. Dalam: Agrawal,

P.K. (Ed.), Karbon-13 NMR dari Flavonoid. Elsevier, Amesterdam, hlm. 283-364.

Alves, C.N., Pinheiro, J.C., Camargo, A.J., Ferreria, M.M.C., Romero, R.A.F., da Silva, A.B.F., 2001. Sebuah
studi regresi linier berganda dan sebagian kuadrat terkecil senyawa flavonoid dengan aktivitas anti-HIV.
J. Mol. Struct. 541, 81-88.

Chatterjee, A., Saha, S.K., Mukhopadhyay, S., 1978. Pengaturan asam Lewis mengkatalisis glut-5-en-3 $ -
y1 asetat dan glut-5 (10) - en-3 $ -y1 asetat. India J. Chem. 16, 1038–1039.

de Melo, E.B., Martins, J.P.A., Jorge, T.C.M., Ferreira, M.M.C., 2010. Studi QSAR multivariat pada
aktivitas antimutagenik flavonoid terhadap 3-NFA pada Salmonella typhimurium TA98. Eur. J. Med.
Chem 45, 4562–4569.

Harborne, J.B., 1998. Metode Fitokimia, Panduan untuk Teknik Modern Analisis Tumbuhan, edisi ke-3.
Springer Pvt. Ltd., New Delhi, India.

Harborne, J.B., Mabry, T.J., 1982. The Flavonoids Maju dalam Penelitian. Chapman & Hall, London, New
York.

Ilyas, M., Parveen, M., Amin, K.M.Y., 1998. Neriifolione, seorang triterpen dari Euphorbia neriifolia.
Phytochemistry 48 (3), 561–563.

Janmeda, P., Sharma, V., Singh, L., Paliwal, R., Sharma, S., Yadav, S., Sharma, SH, 2011. Efek
chemopreventive dari ekstrak hidro-etanol daun Euphorbia neriifolia terhadap DENA- diinduksi
karsinogenesis ginjal pada tikus. Pac Asia. J. Kanker Sebelumnya. 12, 677–683.

Kayser, O., Kidderlen, A.F., Croft, S.L., 2000. Produk alami sebagai obat anti-parasit yang potensial. Acta
Trop. 77, 307–314.

Kiralj, R., Ferreira, M.M.C., 2009. Prosedur validasi dasar untuk model regresi dalam studi QSAR dan
QSPR: teori dan aplikasi. J. Braz. Chem Soc. 20, 770–787.

Lakshmi, T., Rajendran, R., Madhusudhanan, N., 2012. Analisis sidik jari grafik kromatografi ekstrak
etanol Acacia Catechu dengan teknik HPTLC. Int. J. Obat Dev. Res. 4, 180–185.

Meena, M.C., Patni, V., 2008. Isolasi dan identifikasi flavonoid ‘‘ ouercetin ’dari Citrullus colocynthis
(Linn.) Schrad. Asian J. Exp. Sci. 22, 137–142.
Moriani, M.Z., Galati, G., OBrien, P.J., 2002. Hubungan toksisitas struktur kuantitatif komparatif untuk
flavonoid dievaluasi dalam hepatosit tikus terisolasi dan sel tumor HeLa. Chem Biol. Berinteraksi 139,
251–264.

Ng, A.S., 1990. Diterpenes dari Euphorbia neriifolia. Fitokimia 29, 662-664.

Pracheta, Sharma, V., Paliwal, R., Sharma, S., 2011. Pembilasan radikal bebas in vitro dan potensi
antioksidan dari ekstrak etanol Euphorbia neriifolia Linn. Int. J. Pharm. Pharm Sci. 3, 238–242.

Raskin, I., Ribnicky, DM, Komarnytsky, S., Ilic, N., Poulev, A., Borinker, N., Moreno, DA, Ripoll, C., Yakoby,
N., 2002. Tanaman dan kesehatan manusia di abad kedua puluh satu. Tren Bioteknol. 20, 522–531.

Reddy, L., Odhav, B., Bhoola, K.D., 2003. Produk alami untuk pencegahan kanker: perspektif global.
Farmakol Ada 99, 1–13. Schultz, S.C., Bahraminejad, S., Asenstorfer, R.E., Riley, I.T., 2008. Analisis
aktivitas antimikroba flavonoid dan saponin yang diisolasi dari tunas gandum (Avena sativa L.). J.
Phytopathol.

156, 1–7.

Sharma, V., Janmeda, P., 2013a. Studi profil sidik jari kromatografi pada flavonoid daun Euphorbia
neriifolia (Linn.). Int. J. Obat Dev. Res. 5 (1), 286–296.

Sharma, V., Janmeda, P., 2013b. Perubahan histopatologis ginjal yang diinduksi N-nitrosodiethylamine
pada tikus dilemahkan oleh Euphorbia neri- folia (Linn). Toxicol. Int. 20 (1), 101-107.

Sharma, V., Janmeda, P., 2014. Penilaian perlindungan Euphorbia neriifolia dan flavonoid yang diisolasi
terhadap karsinogenesis hepatik yang diinduksi N-Nitrosodiethylamine pada tikus jantan: analisis
histopatologis. Toxicol. Int. 21 (1), 56-62.

Sharma, V., Janmeda, P., Singh, L., 2011a. Ulasan tentang Euphorbia neriifolia (sehund). Spatulla DD 1,
107-111.

Sharma, V., Pracheta, 2013a. Studi mikroskopis dan evaluasi farmakognostik awal daun Euphorbia
neriifolia (L.). India J. Nat. Melecut. Res. 4 (4), 348–357.

Sharma, V., Pracheta, Paliwal, R., Sharma, C., 2012a. Penjelasan aktivitas analgesik ekstrak hidro-etanol
daun Euphorbia neriifolia pada tikus swiss albino. J. Plant Dev. Sci. 4, 183–189.

Sharma, V., Janmeda, P., Paliwal, R., Sharma, S.H., 2012b. Aktivitas anti hepatotoksik ekstrak Euphorbia
neriifolia terhadap hepatokarsinogenesis yang diinduksi N-nitrosodiethylamine pada tikus. J. Chin.
Integr. Med. 10, 1303–1309.

Sharma, V., Pracheta, 2013b. Efek perbaikan daun Euphorbia neriifolia dan flavonoid terisolasi terhadap
N-nitrosodiethylamine menginduksi karsinogenesis ginjal pada tikus. India J. Biochem. Biophys. 50, 521–
528.

Sharma, V., Pracheta, Paliwal, R., Singh, L., Sharma, V., Sharma, S.H., 2011b. Potensi antikarsinogenik
daun Euphorbia neriifolia terhadap nefrotoksisitas yang diinduksi N-nitrosodiethylamine pada tikus. J.
Biochem. Sel. Lengkungan. 11, 393–398.
Wagner, H., Bladt, 1996. Analisis Obat Tumbuhan: Atlas kromatografi lapis tipis, 2nd Edn. Springer-
Verlag, Berlin Heidelberg Londo