DOI: https://doi.org/10.22435/mpk.v29i2.1108
Abstrak
Uncaria gambir Roxb., salah satu tanaman asli Indonesia yang mengandung katekin dengan kadar
yang tinggi. Katekin sangat potensial digunakan untuk bahan baku obat karena efeknya terbukti sebagai
antibakteri, antivirus, dan antidislipidemia. Derivatisasi katekin dapat dikembangkan untuk menghasilkan
senyawa obat yang efektif sebagai antivirus untuk HIV. Untuk derivatisasi ini diperlukan isolat katekin murni
sebagai starting material agar diperoleh hasil yang maksimal sehingga proses purifikasi isolat merupakan
salah satu tahap yang penting. Dalam penelitian ini dilakukan isolasi dan pemurnian isolat katekin dari
ekstrak Uncaria gambir Roxb. yang selanjutnya akan menjadi bahan awal dalam derivatisasi katekin.
Ekstrak gambir yang digunakan untuk isolasi katekin adalah ekstrak gambir kualitas 1 yang diperoleh
dari Padang, Sumatera Barat. Ekstrak gambir dikarakterisasi sesuai dengan metode standar yang tertera
dalam Farmakope Herbal Indonesia. Isolasi katekin dari ekstrak gambir dilakukan dengan metode perkolasi
menggunakan pelarut etil asetat. Isolat katekin murni diperoleh menggunakan metode kromatografi cair
vakum (KCV) dengan serangkaian gradien pelarut heksana dan etil asetat. Pemurnian katekin dimonitor
menggunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT) dengan eluen kloroform : etil asetat : asam format
(5:4:1), kemudian diidentifikasi menggunakan High Performance Liquid Chromatography (HPLC),
spektroskopi Nuclear Magnetic Resonance (NMR), dan Liquid Cromatography-Mass Spectroscopy (LC-
MS). Kemurnian isolat katekin yang didapatkan 99,80%± 0,132.
Kata kunci: isolat katekin; purifikasi; Uncaria gambir Roxb.
Abstract
Uncaria gambir Roxb., one of native plants of Indonesia contains high levels of catechins. Catechins are
very potential to be used for medicinal raw materials because theirs effects are proven to be antibacterial,
antiviral, and antidyslipidemic. Derivatization of catechin can be developed to produce drug compounds
that are effective as antiviral agents for HIV. Derivatization process needs pure catechin isolate as a
starting material in order to obtain maximum result so that the isolation process is one of the important
stages. In this study, isolation and purification of catechin isolate from Uncaria gambir Roxb. extract was
carried out, which will then be the starting material in the derivatization of catechin. Gambir extract used for
catechin isolation was a quality 1 gambir extract obtained from Padang, West Sumatra. Gambier extract
is characterized according to the standard method stated in Farmakope Herbal Indonesia. Isolation of
catechin from gambir extract was done by percolation method using ethyl acetate solvents. Pure catechin
isolate was obtained using a vacuum liquid chromatograpy method with a series of solvent hexane and ethyl
acetate gradients. Catechin purification was monitored using Thin Layer Chromatography (TLC) method
with eluent chloroform:ethyl acetate:formic acid (5:4:1, then identified using High Performance Liquid
Chromatography (HPLC), Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Spectroscopy, and Liquid Cromatography-
Mass Spectroscopy (LC-MS). The purity of catechin isolate obtained was 99.80%± 0.132.
Keywords: isolate catechin; purification; Uncaria gambir Roxb
153
Media Litbangkes, Vol. 29 No. 2, Juni 2019, 153 – 160
154
Purifikasi Katekin dari Ekstrak Gambir .... (Arifayu Addiena Kurniatri, Novi Sulistyaningrum, dan Lina Rustanti)
grade, asetonitril HPLC grade, silika gel 60G for dengan prosedur sesuai Farmakope Herbal
column. Alat berupa serangkaian alat perkolasi, Indonesia, didapatkan hasil sebagaimana
oven, seperangkat peralatan kromatografi tercantum pada Tabel 2.
kolom cair vakum, vacuum rotary evaporator Berdasarkan hasil karakterisasi, kadar
(Buchi), lampu UV 256 dan 366 nm, sonicator, katekin dalam ekstrak gambir sebesar 92,45% ±
spektrofotometer UV, HPLC analitik (Waters), 0,247. Setelah dilakukan perkolasi menggunakan
NMR (JEOL), dan LC-MS. etil asetat, dihasilkan isolat katekin sebanyak
Ekstrak gambir dikarakterisasi sesuai 80,74% dengan kadar 99.80%± 0.132. Hasil
dengan metode standar yang tertera dalam monitoring dengan KLT menunjukkan masih
Farmakope Herbal Indonesia.20 Isolasi katekin terdapat pengotor dalam isolat ini, sehingga
dari ekstrak gambir dilakukan dengan metode dilakukan proses purifikasi dengan Kromatografi
perkolasi menggunakan pelarut etil asetat Cair Vakum (KCV).
dan diuapkan pelarutnya. Purifikasi katekin Proses KCV menghasilkan fraksi-
dilakukan dengan metode Kromatografi Cair fraksi, yang selanjutnya dimonitor dengan
Vakum (KCV) menggunakan gradien eluen KLT menggunakan eluen kloroform:etil asetat:
heksan-etil asetat (Tabel 1). Keberadaan asam format (5:4:1). Fraksi yang memiliki
senyawa katekin dalam setiap fraksi proses KCV spot dengan Rf sama dikelompokkan menjadi
dimonitor dengan Kromatografi Lapis Tipis satu dan dibandingkan dengan baku standar
(KLT). Fraksi dengan Rf yang sama dan spot KLT katekin dan dievaporasi. Sedikitnya terdapat 4
tunggal dikumpulkan dan dievaporasi. Kadar fraksi gabungan hasil KCV. Hasil monitoring
katekin ditentukan dengan spektrofotometer menggunakan KLT, katekin terdapat pada fraksi
UV. Isolat yang sudah kering diidentifikasi dan gabungan nomor 2 (Gambar 2). Katekin murni
dikarakterisasi dengan HPLC, LC-MS, dan yang diperoleh dari proses KCV penelitian ini
NMR. sebanyak 74,79%.
Karakterisasi ekstrak gambir dilakukan
Tabel 1. Prosentase Perbandingan Eluen (Gradien Eluen) dalam Proses KCV Purifikasi Katekin
dari Ekstrak Uncaria gambir Roxb.
% Perbandingan Eluen
No.
Heksan Etil Asetat Metanol
1. 100 0 0
2. 80 15 5
3. 60 35 5
4. 50 45 5
5. 45 55 5
6. 0 100 0
7. 0 0 100
155
Media Litbangkes, Vol. 29 No. 2, Juni 2019, 153 – 160
Gambar 2. Profil KLT Fraksi Gabungan Gambar 4. Profil LC-MS Isolat Katekin
Hasil KCV, Eluen Kloroform:Etil dengan ES(+) Ion Parent m/z
Asetat:Asam Format (5:4:1). 291,03
Kiri-Kanan: Ekstrak Gambir; (1)
Fraksi 1; (2) Fraksi 2; (3) Fraksi 3; Hasil NMR proton dan karbon isolat katekin yang
(4) Fraksi 4 didapat adalah sebagai berikut ini:
156
Purifikasi Katekin dari Ekstrak Gambir .... (Arifayu Addiena Kurniatri, Novi Sulistyaningrum, dan Lina Rustanti)
157
Media Litbangkes, Vol. 29 No. 2, Juni 2019, 153 – 160
untuk pengenalan awal secara sederhana yang di dalamnya. Kromatogram hasil analisa HPLC
masih bersifat subjektif. Berdasarkan hasil menunjukkan waktu retensi dan profil isolat
spektrofotometri, kadar katekin dari ekstrak katekin yang sama dengan baku standar katekin,
diperoleh sebesar 92,45% ± 0,247%. Kadar ini memperkuat hipotesa bahwa benar senyawa
telah memenuhi persyaratan Farmakope Herbal yang didapat adalah katekin dengan kemurnian
dimana kadar katekin pada ekstrak gambir yang relatif tinggi. Hasil analisa LC-MS isolat
kualitas 1 tidak boleh kurang dari 90%.20 Hal ini (Gambar 4) dengan ion parent m/z 291,03 [M+1]
menunjukkan sampel ekstrak Uncaria gambir menunjukkan berat molekul senyawa yang
Roxb. yang digunakaan memiliki kualitas yang didapat adalah benar katekin m/z 290. Hasil
baik. LC-MS diperkuat dengan data analisa 1H dan
Kandungan kimia terbanyak dari ekstrak 13C-NMR (Gambar 5 dan 6) bahwa senyawa
gambir adalah katekin.21 Isolasi katekin dilakukan yang didapatkan adalah benar merupakan
berdasarkan perbedaan kelarutan menggunakan senyawa katekin.
pelarut dengan berbagai tingkat kepolaran.
Pelarut yang kepolarannya mendekati kepolaran KESIMPULAN
air seperti metanol, alkohol, eter, atau aseton dapat Penelitian ini telah berhasil mendapatkan
digunakan untuk melarutkan katekin. Demikian isolat katekin dari ekstrak Uncaria gambir Roxb.
pula dengan pelarut jenis semi polar seperti etil dengan kadar 99,80%±0,132. Isolat katekin
asetat dan kloroform, pelarut jenis ini masih yang diperoleh setelah dimurnikan dengan
dapat melarutkan katekin dengan baik. Senyawa metode kromatografi kolom vakum telah berhasil
yang diduga bukan katekin tidak akan larut. Hasil diidentifikasi dan dikarakterisasi dengan HPLC,
percobaan yang telah dilakukan sebelumnya LC-MS, dan NMR.
diperoleh bahwa katekin dapat larut paling baik
dalam etil asetat, sehingga dalam penelitian ini SARAN
digunakan metode perkolasi dengan pelarut etil Pengembangan derivat katekin sebagai
asetat untuk hasil isolat mengisolasi katekin dari kandidat bahan baku senyawa antiretroviral
ekstrak gambir. Hal ini sesuai dengan penelitian memerlukan penelitian lanjut untuk menghasilkan
yang dilakukan Widiyarti22 bahwa ekstraksi isolat katekin murni pada skala produksi
katekin dari gambir dengan pelarut etil asetat agar derivat katekin bisa lebih berpotensi
memperoleh hasil yang tinggi dan ekstraknya dikembangkan secara mandiri di Indonesia.
memiliki aktivitas antioksidan. Penelitian
lain menyebutkan ekstraksi katekin dari daun UCAPAN TERIMA KASIH
teh memperoleh hasil yang optimum dengan Terima kasih diucapkan kepada semua
kombinasi pelarut etil asetat-diklorometana.23 pihak yang telah berperan serta dalam mendukung
Proses isolasi katekin yang dilakukan diperoleh terlaksananya penelitian ini, antara lain Badan
rendemen sebesar 80,74%, dengan kadar katekin Litbang Kesehatan atas pendanaan, Pusat Kimia
99,80%± 0,132. Hasil KLT terhadap isolat katekin Terapan LIPI, serta semua anggota tim penelitian
menunjukkan bahwa isolat tersebut masih belum yang telah bekerja sama sehingga penelitian ini
murni, sedangkan untuk keperluan derivatisasi dapat terlaksana dengan baik.
diperlukan isolat katekin murni. Oleh karena itu,
dilakukan pemurnian dengan metode KCV untuk DAFTAR PUSTAKA
menghilangkan senyawa selain katekin di dalam 1. Badan Litbang Kesehatan. Laporan Nasional
isolat. Riset Kesehatan Dasar Tahun 2010. Jakarta:
Hasil monitoring KLT dari tiap fraksi Kemenkes RI; 2010. [Diunduh 2 Maret
dibandingkan dengan katekin baku menunjukkan 2011]. http://www.litbang.depkes.go.id.
keberadaan senyawa katekin dalam fraksi 2. Nasution AH, Asmarantaka RW, Baga LM.
gabungan nomor 2 (Gambar 3). Fraksi dengan Efisiensi pemasaran gambir di Kabupaten
spot KLT tunggal menunjukkan satu senyawa Lima Puluh Kota, Sumatera Barat. Buletin
di dalam fraksi, diperkirakan katekin murni ada Ilmiah Litbang Perdagangan. 2016;9(2):221-
39.
158
Purifikasi Katekin dari Ekstrak Gambir .... (Arifayu Addiena Kurniatri, Novi Sulistyaningrum, dan Lina Rustanti)
3. Rauf A, Rahmawaty, Siregar AZ. The etil asetat ekstrak daun gambir (Uncaria
condition of Uncaria gambir Roxb. as one of gambir Roxb.) sebagai antihiperlipidemia.
important medicinal plants in North Sumatra Jurnal Kefarmasian Indonesia. 2015;5(1):1-
Indonesia. Procedia Chemistry. 2015;14:3- 10.
10. 13. Velayutham P, Babu A, Liu D. Green tea
4. Evalia NA, Sa’id EG, Suryana RN. Strategi catechins and cardiovascular health: an
pengembangan agroindustri dan peningkatan update. Curr Med Chem. 2008; 15(18):
nilai tambah gambir di Kabupaten Lima Puluh 1840–50.
Kota Sumatera Barat. Jurnal Manajemen dan 14. Adelina R, Kurniatri AA. Mekanisme katekin
Agribisnis. 2012;9(3):173-82. sebagai obat antidislipidemia. Buletin
5. Isnawati A, Raini M, Sampurno OD, Penelitian Kesehatan. 2018;46(3):147-54.
Mutiatikum D, Widowati L, Gitawati R. 15. Xu J, Xu Z, Zheng W. A Review of the
Karakterisasi tiga jenis ekstrak gambir antiviral role of green tea catechins.
(Uncaria gambir Roxb) dari Sumatera Barat. Molecules 2017;22:1337. doi:10.3390/
Buletin Penelitian Kesehatan. 2012;4(4):201- molecules22081337.
8. 16. Marzolini C, Elzi L, Gibbons S, Weber
6. Isnawati A. Analisa kualitatif dan kuantitatif R, Fux C, Furrer H, et al. Prevalens of
senyawa katekin dan kuersetin pada 3 kualitas commedications and effect of potensial of
mutu ekstrak gambir. Laporan Penelitian. drug-drug interactions in the swiss hiv cohort
Jakarta: Pusat Penelitian dan Pengembangan study. Antiviral Theraphy. 2010;15:413-23.
Biomedis dan Farmasi, Badan Litbang 17. Rhee SY, Blanco JL, Jordan MR, Taylor J,
Kesehatan. 2009. Lemey P, et al. Correction: geographic and
7. Sulistyaningrum N, Rustanti L, Alegantina S. temporal trends in the molecular epidemiology
Uji mutagenik ames untuk melengkapi data and genetic mechanisms of transmitted hiv-
keamanan ekstrak gambir (Uncaria gambir 1 drug resistance: an individual-patient-
Roxb.). Jurnal Kefarmasian Indonesia. and sequence-level meta-analysis. PLOS
2013;3(1):36-45. Medicine. 2015;12(6): e1001845. https://doi.
8. Silvan JM, Mingo E, Hidalgo M, Pascual- org/10.1371/journal.pmed.1001845.
Teresa S, Carrascosa AV, Martinez- 18. Shekelle P, Maglione M, Geotz MB, Wagner
Rodriguez AJ. Antibacterial activity of G, Wang Z, Hilton L, et al. Antiretroviral
a grape seed extract and its fractions (ARV) drug resistance in the developing
against Campylobacter spp. Food Control. world. evidence report/technology
2013;29(1):25-31. assessment. 2007; (156):1-74.
9. Yang ZF, Bai LP, Huang WB, Li XZ, Zhao 19. Zhao Y, Jiang F, Liu P, Chen W, Yi K.
SS, Zhong NS, et al. Comparison of in vitro Catechins containing a galloyl moiety as
antiviral activity of tea polyphenols against potential Anti-HIV-1 compounds. Drug
influenza A and B viruses and structure– Discovery Today. 2012;17(11-12):630-35.
activity relationship analysis. Fitoterapia. 20. Dirjen Pelayanan Farmasi dan Alat Kesehatan.
2014;93:47-53. Farmakope herbal Indonesia. Edisi I. Jakarta:
10. Zhong Y, Ma CM, Shahidi F. Antioxidant Kementerian Kesehatan RI; 2008. p. 17-20.
and antiviral activities of lipophilic 21. Andasuryani, Purwanto YA, Budiastra IW,
epigallocatechin gallate (EGCG) derivatives. Syamsu K. Determination of catechin as main
Journal of Functional Foods. 2012;4(1):87- bioactive component of gambir (Uncaria
93. gambir Roxb) by FT-NIR Spectroscopy.
11. Kurniatri AA, Adelina R, Setyorini HA, 2013;7(41)3076-83.
Sulistyowati I. Formulasi tablet salut selaput 22. Galuh W, Sundowo A, Hanafi M. The free
katekin dari ekstrak gambir (Uncaria gambir radical scavenging and anti-hyperglycemic
Roxb.). Jurnal Kefarmasian Indonesia. activities of various gambiers available
2015;5(2):83-9. in indonesian market. Makara Journal of
12. Yunarto N, Elya B, Konadi L. Potensi fraksi Science. 2011;15(2):129-34.
159
Media Litbangkes, Vol. 29 No. 2, Juni 2019, 153 – 160
160