Buku Spermatologi Bu Trinil

SPERM A
Spermatologi
Spermatologi
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.
Press
Penulis : Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.
Perancang Sampul : Donny Yudhia Hersanjaya, S.T. (UB
Press) Penata Letak : Ali
Manshur, S.Sos. (UB Press)
Penerbit:
Universitas Brawijaya Press (UB Press)
Anggota IKAPI No. 017/JTI/94
Jl. Veteran (Universitas Brawijaya)
Malang 65145 Indonesia
Telp.: +62341-551611-Pswt 376
Fax. : +62341-565420
Email: ubpress@gmail.com
http://www.ubpress.ub.ac.id
Penerbitan Elektronik Pertama & Terbesar di Indonesia
ISBN: 978-602-8960-04-5
xviii+176 hal, 15.5 cm x 23.5 cm
Dilarang keras memfotokopi atau memperbanyak sebagian atau

seluruh buku ini tanpa seizin tertulis dari penerbit
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahhirrobil alamin, buku yang berjudul
SPERMATOLOGI yang berisikan tentang kajian yang mendasar tentang
isiologi spermatozoa yang meliputi: Kapasitasi, Reaksi Akrosom dan
Fertilisasi, Selain itu di dalam buku ini dilengkapi dengan Inseminasi Buatan
yang merupakan pengembangan teknologi yang berdasar pada Fisiologi
spermatozoa.
Buku ini dibuat banyak berasal dari buku “Farm animal
reproduction” diedit oleh ESE Hafez dan buku “Mammalian
Fertilization“ karangan Yanagimachi 1988, dengan tujuan untuk dapat
membantu mahasiswa S1, S2, dan S3, serta peneliti yang mendalami
tentang proses fertilisasi ataupun yang berkaitan dengan proses fertilisas
serta peneliti atau praktisi yang mendalami teknik Inseminasi Buatan
Pada kesempatan ini saya mengucapkan terimakasih kepada
Mayang Adelia Puspita, S.P., yang bersedia membantu untuk melakukan
editing serta Prof. Dr. Drh. Aulani’am, yang bersedia membaca dan
memberikan kritik dan saran sehingga lebih mudah difahami dan
bermanfaat untuk pembaca.
Besar harapan saya buku ini dapat bermanfaat bagi pembaca, dan
kami mengetahui bahwa buku ini masih jauh dari kesempurnaan, maka
kritik dan saran untuk perbaikan edisi selanjutnya sangat diharapkan.
Penulis
v
viii Daftar
Isi
DAFTAR ISI
Kata Pengantar.....................................................................................................v
Daftar Isi.................................................................................................vii
Daftar Tabel.............................................................................................xi
Daftar Gambar..............................................................................................xiii
Pendahuluan.........................................................................................................1
Bab I. Sel Spermatozoa................................................................................3
1.1. Morfologi Spermaozoa.............................................................3
1. Kepala spermatozoa...........................................................5
2. Akrosom.....................................................................5
3. Ekor spermatozoa...........................................................6
1.2. Komposisi Kimia Spermatozoa...............................................7
1. Unsur Inorganik...............................................................8
2. Komponen Biokimiawi....................................................8
3. Kromosom sex X dan Y pada spermatozoa...............9
4. Spermatozoa X dan Y pada Unggas..............................10
1.3. Seminal Plasma......................................................................11
1. Penghasil seminal plasma (kelenjar assesories)...............12
2. Unsur Biokimia dari seminal plasma..............................14
1.4. Metabolisme Spermatozoa...................................................15
1.5. Respirasi Spermatozoa..............................................................18
BAB II. Spermatogenesis..................................................................................21
2.1. Spermatositogenesis..................................................................24
2.2. Spermiogenesis...........................................................................26
2.3. Peran Hormon pada proses spermatogenesis...................30
vii
2.4. Fungsi Steroidogenic.........................................................32
2.5. Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenensis.....34
2.6. Peran skrotum dalam termoregulasi...............................36
BAB III. Kapasitasi Spermatozoa......................................................37
3.1. Kapasitasi Spermatozoa Secara In Vivo..................40
3.2. Kapasitasi Spermatozoa Secara In Vitro..................41
3.3. Faktor-faktor yang Mempengaruhi Kapasitasi.........42
1. Variasi Individu........................................................42
2. Asal spermatozoa.........................................................42
3. Terdapatnya Kumulus Oophorus..........................43
3.4 Peristiwa-peristiwa yang Terjadi Pada Spermatozoa
Selama Kapasitasi.............................................................44
1. Perubahan-perubahan dalam adenylate cyclase....44
2. Perubahan pada metabolisme...................................45
3. Perubahan dalam ion-ion intraselluler.................46
4. Perubahan pada akrosom...........................................48
5. Perubahan pada Inti...............................................48
6. Perubahan pada selaput Plasma...............................48
BAB IV. Reaksi Akrosom...................................................................51
4.1. Enzim-enzim Akrosom................................................51
4.2. Arti Fungsional Reaksi Akrosom...............................53
4.3. Morfologi dan Kinetika Reaksi Akrosom...................54
1. Perbedaan Nyata antara Reaksi Akrosom “True”
dan “False”..............................................................54
2. Sifat Alamiah Exocytotic pada Reaksi Akrosom.56
3. Waktu Reaksi Akrosom..........................................56
4. Faktor penyebab alami reaksi akrosom....................57
4.4. Mekanisme Reaksi Akrosom...........................................58
4.5. Hiperaktifasi Spermatozoa.........................................61
BAB V. Pembuahan (Fertilisasi)..................................................................65
5.1. Penetrasi Spermatozoa Pada Sel Telur..............................66
5.2. Penetrasi Spermatozoa Dalam Menembus Kumulus Oophorus
67
5.3. Penetrasi Spermatozoa ke Dalam Zona Pellusida............68
1. Karakteristik Kimia Zona Pellusida............................68
2. Penyerangan Spermatozoa Pada Zona.............................69
3. Bagaimana reseptor-reseptor spermatozoa pada zona
dan reseptor-reseptor zona saling berinteraksi satu
dengan lainnya?................................................................72
4. Penetrasi spermatozoa dalam Menembus Zona
Pellusida.............................................................................72
5. Penggabungan Spermatozoa dengan Zona......................75
5.4. tempat-tempat inisiasi fusi spermatozoa dan telur............76
5.5. kejadian-kejadian sesudah fusi.................................................77
5.6 aktivitas sel telur.................................................................78
5.7 exocytosis granula-granula cortical dan hambatan
polysperma................................................................................81
5.8 dekondensasi nukleus spermatozoa dalam sitoplasma
telur................................................................................88
BAB VI. Uji Kualitas Semen................................................................91
6.1. Uji Makroskopis (Volume, Warna dan pH).....................92
6.2. Uji Mikroskopis..............................................................93
1. Uji Motilitas Massa........................................................93
2. Motilitas Individu......................................................95
3. Persentase Hidup Mati (Viabilitas).................................96
4. Konsentrasi Spermatozoa...............................................98
5. Abnormalitas Spermatozoa...........................................103
6. Kualitas semen pada ternak..........................................106
7. Teknik Pemeriksaan kerusakan membran
spermatozoa....................................................................106
8. Pengamatan membran spermatozoa dengan
mikroskop elektron......................................................108
6.3 Pengamatan kapasitasi spermatozoa dengan pewarnaan
Chlortetracycline (CTC)..........................................................112
6.4 Evaluasi status akrosom dengan FITC- Con A dan
Methilen Blue....................................................................113
6.5 Hypoosmotic swelling Test (HOS TES)........................114
6.6. Uji Biokimia..................................................................116
6.7. Uji Biologis...................................................................117
6.8 CASA..................................................................................117
6.9. Uji Kualitas spermatozoa yang lain....................................122
6.10..............................................................................Produksi Semen
122
BAB VII. Pengenceran, Pendinginan dan Pembekuan Semen.................125
7.1. Media Pengenceran.............................................................125
1. Pengencer Tris Aminomethan Kuning telur............128
2. AndroMed®............................................................130
3. Pengencer TCM 199 Kuning Telur...........................131
4. Pengencer Alternatif.......................................................133
7.2. Prosesing semen..................................................................134
7.3. Prinsip-prinsip pembekuan sel ( Cryobiologi)...................135
7.4. Banyaknya pengenceran.........................................................138
7.5. Pembekuan semen sapi......................................................139
7.6. Thawing semen.....................................................................140
7.7. Kebijakan didalam menggunakan teknik Inseminasi
Buatan................................................................................140
BAB VIII. Inseminasi Buatan.....................................................................143
8.1. Penampungan semen..............................................................143
8.2. Libido dan kualitas semen........................................146
8.3. Teknik Inseminasi Buatan........................................149
8.4. Teknik Inseminasi Buatan pada Kambing..............150
BAB IX. Faktor-Faktor Yang Mempengaruhi Inseminasi Buatan.153
9.1. Kualitas semen..........................................................153
9.2. Sumber Daya Manusia...................................................155
9.3. Fisiologi Sapi Betina..................................................158
9.4. Evaluasi keberhasilan Inseminasi Buatan...................160
Daftar Pustaka............................................................................................163
Indeks...........................................................................................................171
DAFTAR TABEL
1.1. Karakteristik dan komponen kimia dalam semen ternak.....................12
1.2. Kelenjar asesoris pada hewan domestik...............................................14
1.3 Umur, Berat dan karakteristik kualitas Semen saat pertama
kali dikawinkan.....................................................................................15
1.4 Manipulasi in vitro pada spermatozoa...................................................19
2.1. Lama siklus epithel seminiferus dan spermatogenesis pada
beberapa spesies mammalia........................................................................25
2.2. Sekresi dan fungsi Sel sertoli..................................................................32
2.3. Waktu Migrasi didalam epididimis.....................................................35
3.1. Kondisi kapasitasi pada spermatozoa yang diejakulasikan.................38
4.1 Enzim-enzim yang terdapat pada Akrosom..........................................52
6.1. Score berdasar gerak massa........................................................................94
6.2. Faktor-faktor endogenous yang mempengaruhi motilitas
spermatozoa..............................................................................................94
6.3. Faktor-faktor eksogenous yang mempengaruhi motilitas
spermatozoa..............................................................................................95
6.4. Nomenklatur dari semen analisis.........................................................102
6.5. Konsentrasi semen domba hubungan dengan konsistensi..............102
6.6. Standar parameter motilitas menggunakan CASA pada beberapa
hewan...................................................................................................121
7.1. Jumlah straw yang dihasilkan, penyimpanan dan hasil IB dengan
menggunakan semen beku dalam kondisi rata-rata..........................128
7.2 Komposisi kimia pengencer tris aminomethan dalam 100 ml..........129
7.3 Komposisi kimia pengencer tris aminomethan pada domba............130
xiii
xiv Daftar Tabel
7.4 Karakteristik bioisika dari beberapa krioprotektan .........................138

8.1 Frekuensi koleksi semen dan persiapan vagina buatan.............189
8.2 Rata-rata lama ejakulasi, jumlah fals mounting dan lama libido
pada berbagai bangsa sapi potong................................................147
8.3 Kualitas semen pada berbagai bangsa sapi potong...................147
8.4 Deteksi berahi dan prosedur Inseminasi Buatan...................149
DAFTAR GAMBAR
1.1 Perbandingan berbagai spermatozoa ternak dan vertebrata lainnya. 3
1.2 Spermatozoa sapi diamati dengan mikroskop Differensial
Inferens Contras (Nomarschi)
4
1.3 Struktur internal spermatozoa sapi...........................................................4
1.4 Potongan sagital pada kepala spermatozoa yang Terdapat
beberapa bagian.........................................................................................5
1.5 Axonema spermatozoa..............................................................................7
1.6 Mitokondria pada bagian leher spermatozoa Diamati dengan
Transmisi Elektron Mikroskop (TEM).................................................7
1.7 Kelenjar-kelenjar penghasil seminal plasma.........................................16
1.8 Jaringan kelenjar asesoris yang sebagai penghasil seminal plasma......13
1.9 Jaringan epididimis tempat pematangan spermatozoa.......................13
2.1 Skematis testis dan aluran reproduksi jantan.......................................21
2.2 Spermatozoa danbagian sel didalam tubuli seminiferi........................22
2.3 Sel-sel di dalam tubuli seminiferi.......................................................23
2.4 Histologi Testis......................................................................................23
2.5 Pembelahan spermatogenesis.....................................................................25
2.6 Tahapan Miosis 1.................................................................................26
2.7 Tahapan Miosis II..........................................................................26
2.8 Perubahan sel dari spermatid hingga spermatozoa............................26
2.9 Tahapan pembelahan spermiogenesis........................................................27
2.10 Proses spermatogenesis pada setiap siklus.........................................29
2.11 Hubungan kontrol fungsi hormon dalam testis................................31
2.12 Fungsi isiologis gonadocrinin pada sel sertoli, leydig dan sel
granulosa....................................................................................................33
xv
xvi Daftar Gambar
2.13 Interaksi paracrine antara sel leydig dan sel sertoli.............................33

2.14 Sistesis dan produksi testosteron oleh sel leydig.................................34
3.1 Gambaran spermatozoa yang belum kapasitasi,.................................39
3.2 Photomicrographs yang menunjukkan kumulus oophorus
yang menyelimuti sel telur (Atas), dan bawah adalah setelah
terjadi
fertilisasi pada Chinese hamster.............................................................44
3.3 Mekanisme molekuler pada proses kapasitasi.....................................45
3.4 Mekanisme molekuler pada peristiwa kapasitasi spermatozoa.........47
3.5 Mekanisme molekuler yang terjadi pada membran Spermatozoa
selama kapasitasi...........................................................................................47
4.1 Terjadinya reaksi akrosom pada saat spermatozoa menempel pada
jelli di luar sel telur........................................................................52
4.2 Spermatozoa yang telah mengalami reaksi acrosom dengan
pewarnaan FITC Concanavalin A...........................................................53
4.3 Diagram yang menunjukkan tahapan reaksi akrosom. (Ac)
Acrosomal cap;(Eg)Equatorial Segment of the acrosome;
(IAM)
inner acrosomal membrane.....................................................................54
4.4 Proses reaksi akrosom pada manusia...................................................55
4.5 Skematis dari proses reaksi Akrosom....................................................56
4.6 Tahapan hilangkan ion kalsium selama proses kapasitasi dan reaksi
akrosom menggunakan pewarnaan CTC..............................................59
4.7 Mekanisme molekuler pada proses reaksi akrosom............................60
4.8 Scanning Electron Microscop spermatozoa tanpa Akrosom..............61
4.9 Pola gerak hiperaktifasi pada spermatozoa..........................................62
4.10 Mekanisme molekuler kapasitasi dan hiperaktifasi..............................63
5.1 Ilustrasi perjalanan spermatozoa sampai fertilisasi.............................66
5.2 Ilustrasi proses penembusan sel-sel kumulus dan oosit oleh
spermatozoa..............................................................................................68
5.3 Masuknya spermatozoa ke Zona dengan adanya pergerakan..........75
5.4 Proses masuknya inti spermatozoa.......................................................75
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S. xvii
5.5 Diagaram reaksi akrosom dan fusi antara sel telur dan p
spermatozoa
a
d
a
t
i
k
u
s
.
(
A
c
)
A
c
r
o
s
o
m
e
;
(
I
A
M
) Inner acrosomal membrane; (MV) Egg microvilli; m
en
(PA) post acrosomal region; (PM) Sperm plasma
gg
membrane; (N) Nucleus; (Z) Zona pellucida................................... un
a-
5.6 Diagram tahapan fusi spermatozoa
selama fertilisasi dan penggabungan ka
n
dengan vittelin. (Eg) Equatorial segment pe
of w
ar
the acrosome............................................................................................. na
5.7 Mekanisme masuknya spermatozoa kedalam sel telur....................... an
C
5.8 Diagram aktivasi sel telur dan perkembangan pronuclear pada T
Tikus............................................................................................................ C
5.9 Secara seri gambaran micrograph da
n
menunjukkan keluarnya intracellular Ca++ di
saat fusi antara spermatozoa dengan sel telur a
m
pada hamster............................................................................................. ati
5.10 Mekanisme molekuler saat terjadinya fertilisasi de
ng
dan block Polyspermi 83 an
5.11 Reaksi molekuler didalam oosit saat spermatozoa mi
kr
menempel pada zona pellusida 84 os
5.12 Sel telur yang telah difertilisasi pada kelinci(A) dan manusia (B) ko
86 p
ep
5.13 Proses masuknya spermatozoa dalam oosit pada proses i
fertilisasi...................................................................................................... lu
5.14 Tahapan proses masuknya spermatozoa ke dalam oosit................... or
es
5.15 Pembelahan sel Setelah terjadinya pertemuan pronuclei en
jantan .....
dan betina.............................................................................................. 10
7
6.1 Pola gerak spermatozoa..........................................................................
6.2 Viabilitas spermatozoa.............................................................................
6.3 Penghitungan spermatozoa dengan haemositometer..............................
6.4 Posisi spermatozoa yang dihitungmenggunakan haemositometer
100
6.5 Penghitungan spermatozoa dengan chamber makler.......................
6.6 Gambar Abnormalitas Spermatozoa....................................................
6.7 Spermatozoa mengalami kelainan.......................................................
6.8 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya
xviii Daftar Gambar
6.9 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya...........107

6.10 Spermatozoa yang mengalami kerusakan akrosom pewarnaan
eosin negrosin dengan pembesaran 1000X.................................108
6.11 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya diamati
dengan scanning electrone microscope........................................108
6.12 Kerusakan mambran spermatozoa................................................109
6.13 Flow cart peparasi spermatozoa untuk pengamatan mikroskop
elektron transmisi.......................................................................109
6.14 Hasil pengamatan status ekrosom dengan methileen Blue.......114
6.15 Spermatozoa Normal dan abnormal pada Integritas membrannya 115
6.16 Hasil uji integritas membran babi.............................................116
6.17 Kecepatan dan Gerak Spermatozoa..............................................118
7.1 Melanisme masuknya cryoprotectan di dalam sel.................137
7.2 Prosedur pembekuan semen hasil sexing menggunakan
pengencer tris Aminomethan Kuning Telur............................141
7.3 Prosedur pembekuan semen hasil sexing menggunakan
pengencer Andromed®....................................................................142
8.1 Penampungan semen menggunakan vagina buatan..................144
8.2 Penampungan semen babi dengan menggunkan pantom........145
8.3 Penampungan semen dengan menggunakan metode massage....145
8.4 Berbagai alat yang digunakan untuk IB kambing..................150
8.5 Tahapan IB pada kambing........................................................152
9.1 Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan IB..............154
9.2 Peralatan penyimpanan semen beku dalan nitrogen cair..........154
9.3 Waktu yang tepat untuk Inseminasi Buatan...........................156
9.4 Waktu yang tepat untuk IB pada sapi......................................156
9.5 Teknik Inseminasi Buatan.........................................................157
9.6 Posisi Deposisi IB......................................................................157
PENDAHULUAN
Spermatozoa sebelum mengalami fertilisasi atau pembuahan mengalami
perubahan struktur dan fungsinya. Perubahan struktur dan fungsi spermatozoa
ini mulai terjadi pada saat spermatogenesis, di dalam saluran reproduksi
jantan dan saluran reproduksi betina, hingga sampai terjadinya proses
fertilisasi di dalam ampulla. Perubahan struktur dan fungsi spermatozoa
saat di dalam saluran reproduksi betina di sebut dengan kapasitasi
spermatozoa yang dilanjutkan dengan reaksi akrosom.
Kapasitasi spermatozoa pada dasarnya adalah perubahan
isiologis yang di dalam buku ini mulai dibahas proses kapasitasi
spermatozoa secara in vivo dan in vitro, faktor-faktor yang mempengaruhi
kapasitasi yang dijelaskan secara in vitro serta peristiwa-peristiwa yang
terjadi pada spermatozoa selama mengalami kapasitasi.
Setelah proses kapasitasi dilanjutkan dengan reaksi akrosom, sehingga
spermatozoa mampu membuahi sel telur. Untuk lebih jelasnya tentang
peristiwa reaksi akrosom ini ,maka di mulai dengan penjelasan tentang enzim-
enzim yang ada di dalam akrosom, arti fungsional terjadinya akrosom,
morfologi dan kinetika reaksi akrosom, mekanisme reaksi akrosom, serta
terjadinya hiperaktivasi spermatozoa yang bersamaan dengan proses
reaksi akrosom.
Proses fertilisasi dimulai dari penetrasi spermatozoa pada lapisan terluar
oosit yaitu kumulus oophorus yang melibatkan proses enzimatis,
selanjutnya adalah penetrasi spermatozoa ke dalam lapisan terluar dari
oosit yaitu zona pellusida, peristiwa penyerangan spermatozoa pada zona
pellusida, Reseptor- reseptor spermatozoa pada zona dan reseptor-reseptor
zona saling berinteraksi satu dengan yang lainnya. Proses penetrasi
spermatozoa dalam menembus zona pellusida dan kejadian-kejadian setelah
terjadinya fusi antara spermatozoa dengan sel telur.
1
2 Pendahuluan
Spermatozoa setelah melakukan penetrasi oosit, menyebabkan aktivasi

dari oosit, selanjutnya terjadi proses exocytosis granula-granula cortical dan
terjadi proses penghambatan polisperma, Sedangkan proses fertilisasi tersebut
diakhiri dengan terjadinya dekondensasi nukleus spermatozoa dalam
sitoplasma.
Fisiologi spermatozoa hingga terjadinya fertilisasi mendasari
perkembangan bioteknologi reproduksi meliputi Inseminasi Buatan
(IB), Transfer Embrio, Fertilisasi In Vitro dan Manipulasi Embrio,
sedangkan tujuan dari Bioteknologi Reproduksi pada ternak bertujuan
untuk memperbaiki Mutu Genetik ternak, sedangkan pada manusia
adalah untuk membantu pasangan suami istri untuk mendapatkan anak
secara bantuan. Hingga saat ini IB yang telah terbukti dapat meningkatkan
mutu genetik ternak dan dapat diterima oleh masyarakat, sehingga saat ini
IB telah dilaksanakan secara swadaya masyarakat. Selain itu IB merupakan
cara yang ampuh untuk meningkatkan populasi ternak dan produksi ternak
baik secara kualitatif maupun kuantitatif, sehingga dapat meningkatkan
pendapatan baik petani maupun pemerintah daerah.
BAB
I
SEL SPERMATOZOA
Spermatozoa dibentuk dalam tubuliseminiferi yang berada di dalam
testes. Tubulus ini berisi rangkaian sel yang kompleks, yaitu perkembangan
atau pembelahan sel dari sel germinal sampai dengan terbentuknya
spermatozoa atau gamet jantan. Bentuk spermatozoa yang sempurna adalah
merupakan sel yang memanjang, yang terdiri dari kepala yang tumpul yang
di dalamnya terdapat nucleus atau inti, dan ekor yang mengandung apparatus
untuk bergerakan sel. Pada kepala terdapat akrosom yang memiliki struktur
dinding yang rangkap yang terletak diantara membran plasma bagian anterior
nucleus, Leher menghubungkan kepala dan ekornya (lagela) yang dibagi lagi
menjadi bagian tengah, pokok dan akhir yang bagian–bagian tersebut
mempunyai struktur yang berbeda.
1.1. MORFOLOGI SPERMATOZOA

Spermatozoa pada masing-masing spesies mempunyai ukuran
yang berbeda-beda akan tetapi bentuknya hampir sama. Perbedaan relatif
ukuran dan bentuk spermatozoa pada berbagai hewan seperti pada
gambar 1.1.
Gambar 1.1. Perbandingan berbagai spermatozoa ternak dan

vertebrata lainnya (Garner and Hafez, 2008)
3
4 Sel Spermatozoa
Gambar 1.2. Spermatozoa sapi diamati dengan mikroskop Differensial

Inferens Contras (Nomarschi) (Susilawati, 2000)
1. Plasma membran 7. Rest of the distal centriole A. Kepala

2. membran akrosom luar 8. Thick outer longitudinal B. Leher
3. Akrosom ibers C. Mid piece
4. membran akrosom 9. Mitokondria D. Principal piece
dalam 10. Aksoneme E. Endpiece
5. Nukleus 11. Anulus
6. sentriol proksimal 12. Ring ibers
Gambar 1.3. Struktur internal spermatozoa sapi.

Pada kepala spermatozoa terdapat akrosom, sedangkan dan pada ekor
secara anatomis terdapat bagian midle piece, principal piece dan bagian ekor
yang terdapat central axonemal yang terdapat 9+2 mikrotubulus, dan di balut
dengan outer ibril, lapisan mitochondria yang membentuk kolom
longitudinal pada dorsal dan ventral dan circumferial ribs.
1.1.1. Kepala spermatozoa
Bentuk utama dari kepala spermatozoa adalah oval, tumpul
mengandung nukleus dengan kromatin yang padat sekali. Kromatin terdiri
dari DNA yang kompleks dari protein dasar yang dikenal sebagai
protamine sperma. Jumlah kromosom spermatozoa adalah haploid atau
setengah dari sel somatik, Sel spermatozoa yang haploid ini dihasilkan
dari pembelahan secara meiosis sel yang terjadi selama pembentukan
spermatozoa atau proses spermatogenesis.
1.1.2. Akrosom
Bagian anterior akhir dari inti spermatozoa dibungkus oleh akrosom
tipis, lapisan membran yang menutup ini terbentuk pada saat proses
pembentukan spermatozoa. Pada akrosom berisi beberapa enzim
hidrolitik antara lain proacrosin, hyaluronidase, esterase dan asam hidrolase yang
dibutuhkan pada proses fertilisasi.
Bagian equator akrosom ini merupakan bagian yang penting pada
spermatozoa, hal ini karena bagian anterior post akrosom ini yang
mengawali penggabungan dengan membran oosit pada proses
fertilisasi.
Gambar 1.4. Potongan sagital pada kepala spermatozoa yang terdapat

beberapa bagian
Akrosom terdiri dari apical (apical ridge), Principal dan bagian
equatorial. Membran bagian luar pada bagial apical dan principal segments
disebut dengan akrosom luar. Juga terdapat hubungan dalam akrosom,
yaitu membran dalam dan membran luar dengan inti dan plasma
membran.
1.1.3. Ekor spermatozoa

Ekor spermatozoa dibagi menjadi leher, bagian tengah, pokok dan
akhir. Leher menghubungkan potongan bagian basal plate bagian posterior dan
bagian terbawah dari nukleus. Bagian basal plate pada bagian leher berlanjut
sampai akhir, dengan sembilan serabut kasar yang mengeras pada seluruh
bagian ekor.
Inti bagian tengah pada ekor bersama dengan seluruh bagian ekor
membentuk aksonema. Aksonema ini terdiri dari sembilan pasang
mikrotubulus yang tersusun di sekitar pusat ilamen. Pada bagian tengah,
susunan mikrotubulusnya adalah 9+2 yang dikelilingi oleh sembilan serabut
kasar padat yang berhubungan dengan sembilan pasang aksonema. Aksonema
dan iber yang padat pada bagian tengah, sekelilingnya dibungkus oleh
mitokondria. Pembungkus mitokondria ini tersusun berupa pilinan yang
mengelilingi serabut longitudinal ekor, Mitokon- dria menghasilkan energi
yang dibutuhkan untuk pergerakan spermatozoa. Pembungkus
mitokondria berakhir pada annulus.
Bagian pokok yang merupakan lanjutan dari annulus dan
memanjang mendekati bagian akhir ekor, terdiri dari aksonema yang terpusat
dan bergabung dengan serabut kasar. Lapisan ibrous diperkirakan
memberikan stabilitas untuk gerakan ekor. Bagian akhir, merupakan batas
posterior dari lapisan ibrous yang hanya berisi aksonema yang dilapisi
membran plasma.
Aksonema bertanggung jawab pada pergerakan spermatozoa.
Sepasang mikrotubulus tersusun dari 9 + 2, umumnya dinding ekor melipat
seperti gelombang dengan gerakan menggeser antara sepasang daerah
yang berdekatan.
Droplet protoplasmic atau sitoplasmik biasanya tidak terdapat spermato-
zoa yang diejakulasikan, tersusun dari residu sitoplasmik. Meskipun
termasuk spermatozoa abnormal yang diejakulasikan dari berbagai spesies,
droplet yang terdapat di daerah leher, yang diketahui sebagai “Droplet
Proximal”, sedangkan yang dekat annulus, disebut “Droplet Distal”.
Gambar 1. 5. Axonema spermatozoa
Gambar 1.6. Mitokondria pada bagian leher spermatozoa Diamati

dengan Transmisi Elektron Mikroskop (TEM)
1.2. KOMPOSISI KIMIA SPERMATOZOA

Komponen kimia spermatozoa adalah asam nukleat, protein dan
lemak. Kurang lebih sepertiga dan berat kering sel spermatozoa adalah
intinya kromatin inti terdiri dari kira-kira setengah DNA dan ½ protein.
Topi akrosom mengandung berbagai protein enzim. Beberapa struktur
protein enzim dan lemak ditemukan di ekor.
1. Unsur Inorganik
Spermatozoa mengandung phospor, nitrogen, dan sulfur yang
banyak. Sebagian phospor berhubungan dengan DNA, sedangkan sulfur
berasal dari komponen protein inti dan keratinoid pada bagian ekor.
2. Komponen Biokimiawi
Inti spermatozoa terdiri dari kromatin yang DNA-nya distabilkan
dengan konjugasi menggunakan protein khusus yaitu sebagai “Spermatozoa
Histone”. Inti spermatozoa pada beberapa spesies mengandung sebagian kecil
spermatozoa histone dengan berat molekul rendah, yang diketahui sebagai
“Protamin”, sedangkan spermatozoa pada spesies lain mengandung
jumlah yang bervariasi pada arginin yang kaya histone. Protein dasar inti
penting untuk kondensasi dan stabilisasi DNA dengan ikatan sulfhidril.
Peningkatan ikatan sulfhydryl berperanan pada perjalanan spermatozoa saat
diepididimis selama perjalanan menuju ke fertilisasi.
Saat spermatozoa mengalami reaksi akrosom yang sebagian
besar bahan dalam akrosom dikeluarkan yang disebabkan penggabungan
plasma dan membran akrosom bagian luar. Fungsi dari masing-masing
enzim adalah sebagai berikut: Hialuronidase menyebabkan menyebarnya sel
kumulus yang mengelilingi ovum yang baru diovulasikan menyebar.
Proakrosin adalah pre- cursor enzim proteolitik akrosin, yang dapat
membantu dalam mempersingkat penetrasi spermatozoa melalui zona
pellusida. Namun secara bioisika, peng- induksian spermatozoa dapat secara
mekanik menetrasi zona pellusida dengan cara gerakannya (gerakan
spermatozoa).
Lapisan mitokondria spermatozoa, yang kaya fosfolipid, dengan
berbagai ukuran mitrokondria pada beberapa spesies dan dalam cairan kimia
yang dibuat. Spermatozoa mengandung enzim cytochrome oksidase pada
system pernafasan dan tahap glikosis. Metabolisme enzim lain, khususnya
laktat dehidrogenase yang dikenal sebagai LDH-X, juga terdapat energi
yang kaya nukleotida ade- nin dan guanin adalah komponen penting
dalam energi spermatozoa sebagai protein aksonema, tubulin dan dynein.
dynein merupakan protein dasar dalam mikrotubulus aksonema yang
ditunjukkan oleh ikatan divalent ATP-ase yang diaktifkan.
3. Kromosom sex X dan Y pada spermatozoa mammalia.
Pejantan pada mammalia menentukan jenis kelamin anak yang dila-
hirkan. Sebagai hasil pembelahan reduksi selama spermatogenesis, spermatozoa
hanya mengandung setengah jumlah DNA pada sel-sel somatik dari
spesies yang sama dan terbentuklah dua macam spermatozoa yaitu
spermatozoa yang berkromosom X dan spermatozoa yang berkromosom Y.
Meskipun diduga kandungan DNA antara kromosom X dan Y pada
spermatozoa hanya sekitar 4% untuk ternak, perbedaan kecil ini dapat
diketahui dengan cara menggunakan pewarnaan luoresen dan Flow
cytometer. Spermatozoa yang mengandung kromosom X (spermatozoa X)
jika terjadi fertilisasi akan menghasilkan embrio betina, sedangkan
spermatozoa yang mengandung kromosom Y (spermatozoa Y) akan
menghasilkan embrio jantan, karena pada kromosom Y terdapat sex
determining Region Y gen (SRY) yang menentukan terbentuknya testis pada
hewan jantan (Bianchi, 1991; Graves, 1994 dan Koopman,1995). Panjang
dan lebar spermatozoa sapi kira-kira 8-10 x 4-4,50 mikron, tebal kepala
0,50 – 1,50 mikron, bagian tengah spermatozoa mempunyai panjang 10 –
15 mikron dan diameternya sekitar 1 mikron, panjang ekor spermatozoa
adalah 35-45 mikron dengan diameter 0,4-0,8 mikron, sedang panjang
keseluruhan mencapai 50-70 mikron (Toelihere, 1985).
Susilawati dkk (1999) Hasil pengukuran kepala spermatozoa sapi
sebanyak 2000 spermatozoa didapatkan rata-rata panjang kepala 8,75 ± 0,25
µm, dan rata- rata lebar kepala 4,12 ± 0,22 µm. Hasil pengukuran besar
kepala spermatozoa (panjang x lebar) pada semen segar diperoleh
rata-rata 32,75 ± 2,36 µm2.
Flow cytometer dimodiikasikan untuk mendapatkan jenis
spermatozoa dengan populasi yang murni (seleksi jenis kelamin). Ketika
spermatozoa yang telah diseleksi mendekati kemurnian 90% diinseminasikan
ke betina. Sehingga rasio sex keturunan hampir sama dengan prediksi
rasio spermatozoa X ke Y hasil identiikasinya . Penemuan ini penting
untuk perkembangan selanjutnya untuk mengontrol jenis kelamin
ternak (Garner dan Hafez, 2008)
Spermatozoa X mengandung kromatin lebih banyak di kepalanya,
sehingga mengakibatkan ukuran kepala spermatozoa X lebih besar
(Garner dan Hafez, 2008), maka Susilawati dkk (1998) melakukan identiikasi
spermatozoa X dan Y berdasarkan pada ukuran kepala yaitu panjang kali
lebar, apabila lebih besar dari rata-rata maka dianggap spermatozoa X,
sedangkan bila lebih kecil
10 Sel Spermatozoa
adalah spermatozoa Y. Berdasarkan cara penentuan tersebut diperoleh

hasil persentase spermatozoa yang diprediksi sebagai spermatozoa X
sebanyak 52,10% dan spermatozoa yang diprediksi sebagai spermatozoa
Y sebanyak 47,9%.
4. Spermatozoa X dan Y pada Unggas

Jenis kelamin ternak ditentukan oleh gen yang terdapat pada salah
satu sex chromosom. Pada mammalia yang menentukan jenis kelamin
adalah kromosom Y, sedangkan pada kelompok burung pada jantan
berkromosom ZZ (homogametik), sedangkan betina ZW (hetero gemetik)
(Ellegren, 2001 ; Hafez and Hafez, 2008; Froman, Kirby and Proudman,
2000). Gen yang menentukan jenis kelamin pada ternak jantan adalah gen
SRY (Grifiths, 1991) Sedangkan pada bangsa burung yang menentukan
jenis kelamin ada gen yang berada di dalam lokus yang belum diketahui
fungsi pengaturannya (Ellegren, 2001).
Hingga saat ini belum diketahui dengan jelas gen mana yang
mengatur jenis kelamin, di lain ihak telah berhasil diidentiikan protein pada
kelompok burung betina yaitu W – linked PKCIW gene yang dapat
mengekspresikan pembentukan gonad betina. Akan tetapi belum jelas
pengaturan pertumbuhan gonad oleh gen DMRT1 dan PKC1W
(Ellegren, 2001).
Gen DMRT1 mengexpresikan genital ridge dan saluran Wolfian per-
tumbuhan alat reproduksi jantan pada tahap ke 25 (Reymon et al ;1999),
DMRT diexpresikan pada burung jantan yang telah dewasa (Shan et
al, 2000).
Biosintesis dan sekresi hormon gonadal berpengaruh terhadap
differensiasi gonad. Pembentukan gonad (gonadogenesis) dipengaruhi
oleh hormon exogenous. Pertumbuhan gonad pada burung lebih labil,
sehingga dapat dipengaruhi oleh manipulasi hormon. Perubahan jenis kelamin
dapat dilakukan dengan injeksi telur dengan estrogen atau oleh produksi
estrogen. Experimen banyak dilakukan pada critical role untuk sintesis
estrogen dalam sex determinasi (Scheib et al, 1983). Sinthetic inhibitors pada
ensim sintetis estrogen, aromatase, dapat menyebabkan betina menjadi
jantan secara permanen (Elbrecht et al , 1992). Gonad sebelah kanan
untuk pembentukan jantan dan gonad sebelah kiri akan membentuk testis
(Vaillant et al, 2001) dan (Smith et al, 2003). Unggas jantan yang
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, 11
M.S.
berkromosom ZZ diberi perlakuan estrogen akan menjadi betina akan
tetapi tidak permanan. Terdapat 2 akhir suatu sintesis estrogen adalah
P-450 aromatase dan 17β HSD diexpresikan hanya pada ZW yang mempunyai
gonad betina yang mengalami defferensiasi morfologi (hari ke 6-6, 5, stage 29-
30) (Kabayashi et al,1998); (Smith et al, 1997) dan Nishikimi et al (2000).
Enzym ini diexpresikan oleh modulary cord pada gonad betina, enzim
yang lain pada pathway steroidogenic yang di expresikan pada medula pada
kedua jenis kelamin (Nishikimi et al, 2000). Aromatase dan 17 βHSD adalah
kunci dari komponen sexual dimorphic. Secara logis bahwa gen W linked pada
penentuan jenis kelamin betina yang mengaktivasi aromatase dan 17 βHSD
yang diexpresikan secara awal pada pembentukan alat kelamin betina. Akan
tetapi tidak konsisten pada peran hormon androgen pada awal
pembentukan jatan. Testosteson dan DHT tidak berpengaruh pada
pembentukan telur dan reseptor androgen diekspresikan pada akhir
dalam pembentukan gonad.
Estradiol berpengaruh selama perkembangan gonad dan terdapat
reseptor. Yang menarik estrogen receptor alpha (Erα) diexpresikan pada kedua
jenis kelamin untuk differensiasi sex dalam embrio ayam (smith et al, 1997)
Tampaknya ekspresi dimulai dari gonadal cortex Ekspresinya adalah
pengaturan di dalam proses pertumbuhan jantan, pada betina juga di
didalam gonad sebelah kiri (smith et al, 1997 dan Andrew et al, 1995).
Pertumbuhan gonad selama proses embryogenesis tampaknya resisten
terhadap sex steroid akan tetapi deferensiasi dapat terjadi tanpa adanya
steroidogenesis (Jost , 1970) dan (Hu et al, 2002)
1.3. SEMINAL PLASMA

Pengertian fungsional dari seminal masih diragukan, hal ini karena
selama proses perjalanan spermatozoa pada uterus dan proses fertilisasi tidak
ada peran dari seminal plasma. Seminal plasma, adalah suatu komponen
essensial yang berfungsi pembawa (Carier) dan pelindung spermatozoa.
Seminal plasma berperan penting pada spesies babi betina dan kuda betina,
hal ini karena seminal plasma bersama dengan spermatozoa sampai ke uterus,
karena diejakulasikan hingga uterus. Pada sapi dan Domba seminal plasma
dibutuhkan oleh spermatozoa, saat spermatozoa di ejakulasikan dan disimpan
dalam vagina (komposisi semen dan karakteristik semen terdapat pada
tabel 1.1).
Tabel 1.1. Karakteristik dan komponen kimia dalam semen ternak
Karakteristik Sapi Domba Babi Kuda Ayam
Volume ejakulasi (ml) 5-8 0,8– 1,2 150-200 60-100 60-100
Konsentrasi spermatozoa (juta/ml) 800-2000 2000-3000 200-300 150-300 150-300
Spermatozoa/ejakulasi (Bilion) 5-15 1,6-3,6 30-60 5-15 5-15
Spermatozoa motil (%) 40-75 60-80 50-80 40-75 40-75
Morfologi spermatozoa normal 665- 95 80-95 70-90 60-90 60-90
(%)
Protein (g/100 ml) 6,8 5,0 3,7 1,0 1,0
pH 6,4-7,8 5,9-7,3 7,3-7,8 7,2-78 7,2-78
Fruktosa 460-600 250 9 2 2
Sorbitol 10-140 26-170 6-18 20-60 20-60
Citric acid 620-806 110-260 173 8-53 8-53
Inositol 25-46 7-14 380-630 20-47 20-47
Glyceryl Phosphoril cholin (GPC) 100-500 1100-2100 110-240 40-100 40-100
Ergothioneine 0 0 17 40-110 40-110
Sodium 225+13 178+11 587 257 257
Potasium 155+ 6 89+4 197 103 103
Calcium 40+2 6+2 6 26 26
Magnesium 8 + 0,3 6+0,8 5-14 9 9
Chloride 174-320 86 260-430 448 448
(Garner and Hafez, 2008)
1.3.1. Penghasil seminal plasma (kelenjar assesories)

Seminal plasma merupakan suatau cairan yang bermacam-macam
yang dihasilkan oleh beberapa kelenjar yaitu Prostat, vesicular seminalis dan
kelenjar bulbouretralis yang dituangkan kedalam uretra, saat ejakulasi mereka
dicampur dengan cairan spermatozoa dan sekresi ampula dan duktus
deferens. Selain itu juga cairan yang berasal dari epididimis.
Gambar 1.7. Kelenjar-kelenjar penghasil seminal plasma

Gambar 1.8. Jaringan kelenjar asesoris yang sebagai penghasil seminal plasma
Gambar 1.9. Jaringan epididimis tempat pematangan Spermatozoa

Tabel 1.2 Kelenjar asesoris pada hewan domestik
Spesies Kelenjar vesikularis Prostata Cowper
Bovine + + +
Kucing - + -
Kuda + + +
Ovine + + +
Procine + + +
Pineda (2005b)
1.3.2. Unsur Biokimia dari seminal plasma

Seminal plasma biasanya berisi asam sitrat kadar tinggi, ergotionine,
fructose, glyseryphosphorylcholine dan sorbitol. Sebagian berupa asam
askorbik, asam amino, peptida, protein, lemak, asam lemak dan beberapa
enzim yang turut berperan (white, 1980). Anti mikroba dan imunoglobulin,
terutama kelas Ig A (Shivaji, 1984 dan Ablin, 1974) terdapat juga substansi
hormon yaitu androgen, estrogen, prostaglandin, FSH, LH, materi seperti
chorionic gonadotropin, juga terdapat dalam kadar rendah insulin,
glukagon, prolaktin, relaksin, hormon pembentuk thyroid (Garner dan
Hafez, 2008).
Selain sebagai media transportasi, fungsi seminal plasma tidak begitu
jelas, hal ini bisa dilihat pada Spermatozoa yang berasal dari kauda
epididimis dapat membuahi telur tanpa penambahan hasil eksresi kelenjar
asesoris. Kandungan biokimia pada semen, dapat digunakan sebagai
indikator penunjuk fungsi khusus kelenjar asesoris yang menghasilkannya,
misalnya Fruktosa dihasilkan oleh vesikula seminalis.
Fruktosa dan asam sitrat merupakan komponen penting kelenjar
veskula pada ruminansia. Asam sitrat sendiri tersusun dalam kelenjar
vesikula kuda jantan, pada kelenjar vesikula babi hutan berisi sedikit
fruktosa tetapi ditandai dengan tingginya kandungan ergothioniene dan inositol.
Glycerylphosphorylcholine merupakan sebuah komponen khusus dari
epididimis. Ergothioniene adalah sebuah keunikan tersendiri pada
kelenjar ampula kuda.
Kelenjar asesori pada banteng dan kuda jantan dapat digetarkan
melalui rektum. Pada banteng gelembung vesika seminalis dan kelenjar
prostatnya tidak dapat diketahui lewat rektum. Kelenjar bulbourethal bangsa
sapi, umumnya tidak dapat diidentiikasikan karena tertutup oleh otot. Pada
babi hutan, ukuran
kelenjar bulbourethalis dapat dipergunakan untuk membedakan
pengebirian pada criptorchid babi hutan. Babi hutan sebelum pubertas
memiliki kelenjar bulbourethalis kecil, panjangnya 5 cm, beratnya kurang
dari 1 gram. Cryptor- chid babi hutan umumnya mempunyai ukuran
kelenjar yang normal, kira-kira panjangnya 10 cm dan beratnya 45
gram.
Tabel 1.3. Umur, Berat dan karakteristik kualitas Semen saat pertama kali
dikawinkan (Garner dan Hafez, 2008)
Mulai dapat mengawini Volume Konsentrasi
Spesies Ejakulasi spermatozoa
Bulan Berat badan (ml) (108/ml)
(Kg)
Babi 5-8 250 100-150 0,1-0,2
Sapi 12-14 500 3-5 0,8 – 1,2
Domba 6-8 Bervariasi 0,3-1 1,2 – 1,5
Kuda 20-24 500 50-100 0,1- 1,5
Ayam 4-6 Bervariasi 0,10- 0,3 50-90
Kucing 9 3,5 0,01-0,3 1,5- 28
Anjing 10-12 Bervariasi 2-25 0,6-5,4
Marmut 3-5 0,450 0,4-0,8 0,05-0,2
Kelinci 4-12 Bervariasi 0,4-0,6 0,5 – 3,5
Kualitas semen saat ejakulasi pada sebagian besar ternak adalah

berubah- ubah, hal ini karena bervariasinya sekresi dari beberapa organ
asesoris termasuk epididimis (caput, corpus epididimis dan caudal
epididimis), kelenjar ampular (AMP), kelenjar vesicular, kelenjar prostat dan
kelenjar bulbourethal. Besarnya sekresi dari kelenjar assesori bervariasi tidak
hanya diantara spesies, tetapi juga diantara individu pada spesies yang
sama dan diantara ejakulasi dari individu yang sama.
1.4. METABOLISME SPERMATOZOA

Karakter motilitas (pergerakan) dari spermatozoa memudahkan
dalam melihat kondisi isiologis spermatozoa. Tetapi motilitas dengan
sendirinya bukan identik dengan kemampuan dalam memfertilisasi. Energi
yang dibutuhkan untuk motilitas diperoleh dari persediaan intraseluler dari
ATP. Penggunaan ATP terlihat diatur oleh tingkat endogenous dan siklus
Adenosine Monophosphate (cAMP). cAMP tidak hanya mengatur pelepasan
ATP tetapi juga mempunyai pengaruh pada motilitas spermatozoa.
Pengaruh cAMP ini kompleks pada pergerakan
spermatozoa yang ditunjukkan secara in vitro dengan menambahkan dibutyryl
cAMP atau inhibitor methyl xanthines yang menghalangi degradasi
intraseluler normal dari cAMP pada spermatozoa.
Meskipun banyak kehilangan organel pada spermatozoa yang
berhubungan dengan proses metabolisme pada proses pembentukan
spermatozoa, spermatozoa tetap aktif dalam metabolisme karena
mempunyai enzim yang penting untuk reaksi biokimia dari glikolisis, siklus
asam trikarboksilat, oksidasi asam lemak, transport electron, dan
mungkin heksosa monophospat.
Energi yang langsung digunakan untuk pergerakan spermatozoa dihasi-
lkan oleh serabut ekor berasal dari uraian ATP, yang diduga terdapat di
dalam serbuk spiral yang mengikat berkas serabut. Nucleotid ini tersusun
dari basa adenosin, yaitu ikatan lingkaran dari karbon ribose dan tiga
ikatan fosfat, kedua dari yang terakhir mengandung banyak energi (P-P)
dan hanya dapat tersusun menjadi suatu kelompok dengan tambahan
energi yang sangat banyak. Jika ATP diaktifkan oleh enzim tertentu, maka
ikatan fosfat terutama yang banyak mengandung banyak energi akan
terurai, dilepaskan energi, tersisa ADP dan terbentuk fosfat anorganik.
Selanjutnya ADP (ikatan kaya energi kedua) terurai, melepaskan
energi untuk kontraksi ibril, tersisa AMP (Adenosin mono phosphat) serta
terbentuk fosfat anorganik lagi. Bila ATP dan ADP telah habis, kontraksi
ibril spermatozoa akan terhenti. Supaya motilitas masih dapat
berlangsung, maka ADP dan ATP harus dibangun kembali. Karena
reaksi ini dapat berbalik, maka pembentukan ADP dari AMP dengan
menambahkan kelompok fosfat, yang berasal sumber energi dari luar.
Kebanyakan aktiitas isiologi disertai dengan pelepasan energi dari reaksi
bahan organik seperti karbohidrat dan lemak.
Metabolisme spermatozoa tidak selalu membutuhkan oksigen. Oksigen
hanya diperlukan bila aktiitas metabolisme tidak dapat terjadi tanpa
adanya oksigen. Faktor lain dapat mengatur kebutuhan derajat kebutuhan
oksigen untuk menghasilkan energi untuk gerak. Jadi meskipun produksi
energi tiap unit karbon jauh lebih eisien bila disertai dengan oksidasi
daripada hanya dengan glikolisis, tetapi ternyata hasil percobaan dalam
kondisi tertentu menghasilkan produksi energi dari glikolisis sama
cepatnya di bawah pengaruh oksigen atau tanpa oksigen. Jalur pertukaran
energi dan penyimpanan energi melewati sistim adenil, sesudah
dihasilkan oleh proses glikolisis maupun respirasi.
Glikolisis terjadi pada kondisi an aerob, dengan tidak adanya
oksigen, spermatozoa memecah glukosa, fruktosa atau mannosa menjadi
asam laktat. Pada proses kegiatan fruktolisis lebih baik dari pada
glukolisis, sebab fruktosa adalah gula dasar dari seminal. Spermatozoa dapat
hidup dalam kondisi an aerob. Karakteristik ini penting selama penyimpanan
saat proses Inseminasi Buatan. Jalur metabolisme glikolisis dengan dua
bahan baku yaitu fruktosa dan glukosa. Pertama, Fruktosa-1,6-difosfat
diuraikan enzim aldolase menjadi dua molekul dari 3 karbon triofosfat,
yaitu 3-fosfo-glyserin aldehid (G-3-P) dan dygydroxyaceton fosfat. Dalam
proses oksidasi G-3-P dengan pemindahan unsur hydrogen yang diikuti
dengan pernyenyawaan fosfat anorganik, terbentuklah asam 1,3
difosfoglycerin. Dehidrogenase G-3-P membutuhkan suatu enzim (di- fosforidin
nucleotid,DPN) yang akan bereaksi dengan ion hydrogen dan merubah
aldehid menjadi asam dan mereduksi DPN menjadi DPNH2. Penguraian
dari asam difosfat glyserin menjadi asam monofosfat glyserin menghasilkan
energi
yang terpakai untuk membangun ADP dan ATP.
Selanjutnya fosfoglyceromutase, memisahkan fosfat dari satu atom
karbon lainnya untuk membentuk asam 2-fosfoglycerat yang diaktiisir
dengan katalisator enolase, melepaskan air dan menjadi asam fosfopiruvat.
Enzim transfosforylase sebagai katalisator reaksi yang lebih lanjut dan ikatan
fosfat kaya energi dari asam fosfopiruvat. Enzim transfosforilase sebagai
katalisator reaksi yang lebih lanjut dan ikatan fosfat kaya energi dari asam
fosfopiruvat memerlukan unsur magnesium dan kalium. Enzim ini akan
memindahkan fosfat ke AMP atau ADP membentuk ADP atau ATP dan
mengisi kembali substansi energi dengan pembentukan asam piruvat. Jadi
dalam lingkungan an aerob asam piruvat mengikat dua ion hydrogen dari
DPNH2 dengan katalisator enzim, asam laktat dehydrogenase membentuk
produk akhir anaerob asam laktat. Selanjutnya DPN menjadi bebas untuk
mengikat hydrogen baru dari proses oksidasi G-3-P, sehingga
memungkinkan keseimbangan proses fruktolisis.
Kedua, dengan menggunakan glukose sebagai bahan baku
dikemukakan bahwa reaksi pertama menghasilkan pembentukan glukose 6-
fosfat (G-6-P) dari glukosa 6 –fosfat (G-6-P) dari glukosa dan ATP.
Spermatozoa merubah G-6-P menjadi fruktosa-6-P dan dengan batuan
ATP dirubah menjadi fruktose –6-P dan dengan bantuan ATP dirubah
menjadi fruktose –6-P dan dengan bantuan ATP dirubah menjadi fruktose
–1-6-difosfat. Selanjutnya mengikuti proses dari
bahan pertama (Fruktose).
Setelah proses glikolisis selesai dilanjutkan dengan siklus kreb asam
sitrat. Sesuai dengan hasil-hasil penelitian mengenai sistem prima
ketergantungan oksigen metabolisme sel dan jaringan adalah siklus kreb
asam sitrat. Jalur metabolisme ini merupakan jalan reaksi utama proses
oksidasi bahan pokok normal spermatozoa. Bahan pokok ini merupakan
produksi akhir glikolisis, asam laktat dan produksi dehidrogenase adalah
asam piruvat. Reaksi keseimbangan, asam piruvat dan asam laktat, lebih
berat berjalan ke arah asam laktat bila tanpa oksigen. Dalam lingkungan
oksigen asam laktat diteruskan melewati piruvat ke acetil koenzim A (Acetyl
Co A) yang akhirnya bersenyawa dengan oxaliasetat membentuk sitrat.
Reaksi ini berkesinambungan melewati siklus krebs.
Faktor-faktor yang mempengaruhi metabolisme spermatozoa antara lain
temperatur, konsentrasi semen, fosfat an organic, pH, kation dan anion,
tekanan osmose, hormon, zat anti bakteri dan gas. Spermatozoa yang
didinginkan di bawah temperatur badan menunjukkan motilitas menurun
dan berhenti sama sekali bila temperatur berada beberapa derajat di atas
titik beku. Walaupun motilitas berhenti sama sekali, metabolisme berlangsung
terus secara perlahan- lahan.
Pengaruh kepadatan sel tidaklah merupakan suatu yang pasti,
karena konsentrasi sel tidak memiliki arti penting dalam proses pernafasan
dan glikolisis. Pengaruh konsentrasi sel terhadap konsumsi oksigen tidaklah
disebabkan oleh jumlah oksigen yang terbatas dalam konsentrasi lebih
padat, tetapi karena konsentrasi ion kalium yang lebih tinggi yang
merupakan penghambat alamiah dan terdapat dalam pengatur
metabolisme.
1.5. RESPIRASI SPERMATOZOA

Spermatozoa menggunakan berbagai substrat sebagai sumber oksigen.
Respirasi menggunakan asam laktat dan piruvat yang berasal dari break
down fruktosa untuk menghasilkan CO2 dan air. Jalur oksidasi (Oxidatif
Path Ways) berada di mitokondria yang lebih eisien menghasilkan energi
dibandingkan pada proses fruktolisis. Proses katabolisme ini spermatozoa
merubah menjadi ATP dan digunakan untuk bergerak yang sebagian
untuk memelihara proses transport aktif dari membran. Transport aktif ini
vital dibutuhkan untuk transport ion di dalam sel. Tanpa subtrat luar,
spermatozoa dapat menggunakan
Dr. Tjahjanulin Domai, M.S. 19
p
e
n
yi
m
p
a
n
a
n
in
tr
a
s
el
ul
e
r
p
a
d
a
pl
a
s
m
al
o
g
e
n
y
a
n
g
d
apat digunakan anergi dalam waktu pendek.
Tabel 1.4. Manipulasi in vitro pada spermatozoa (Garner dan
Hafez, 2008)
Teknik Prosedur Penyebab
Pencucian Spermatozoa Percoll@, isolat sperma@, - Ejakulasi jelek (retrogard)
Me- dium modiied Ham’s - Semen beku
F 10, Larutan garam - Oligozoosperma,
Tyrodes atau media isotonis motilitas spermatozoz
lain, sebelumya dihangatkan rendah.
dan di ilter sebelum - Menghilangkan antibodi
digunakan anti sperma
- Persiapan IB uterus
Spermatozoa Swim -Seleksi spermatozoa - Motilitas menurun
up -Meningkatkatkan kualitas - Menghilangkan potensi
spermatozoa patogen dan leucosit
Sper matozoa swim - Meningkatkan kualitas - Oligospermia
down spermatozoa
Manipulasi semen untuk - Swim up dan swim down Mengurangi bahan-bahan
IVF - Kapasitasi in vitro di dalam media cryopre-
servasi
Manipulasi Semen dan Mikrofertilisasi Spermatozoa dimasukkan

oosit untuk keberhasilan ke dalam oosit
fertilisasi
Mikromanipulasi sper- Intrasitoplasmic Sperm Micromanipulator diguna-
matozoa Inser- tion (ISCI) kan untuk mengawali
spermatozoa ke
oosit
Semen Sexing Flow Cytometric Sorting Memisahkan spermatozoa
X dan Y
BAB
II
SPERMATOGENESIS
Spermatogenesis adalah suatu proses pembentukan spermatozoa (sel
gamet jantan) yang terjadi hanya di Tubuli seminiferi yang terletak di
Testes. Testes 90 % tersusun oleh tubuli seminiferi, sedangkan yang 10%
adalah sel intertitiel dan jaringan ikat.
Gambar 2.1. Skematis testis dan aluran reproduksi jantan (Hafez, 2008a)
Spermatozoa yang dihasilkan oleh tubuli seminiferi dikeluarkan ke

saluran reproduksi jantan yang terdapat silia dan muskulernya yang
dapat meng- gerakan spermatozoa dalam proses transportasi, saluran
reproduksi jantan tersebut adalah retetestes, vas defferens epididimis, vas
efferens dan terakhir di uretra, gambar silia dan muskuler pada saluran
reproduksi jantan terdapat pada gambar 2.1.
21
22 Spermatogenesis
Gambar 2.2. Saluran transportasi spermatozoa dan bagian sel di dalam

tubuli seminiferi (Garner dan Hafez, 2008).
Epithel seminiferi adalah bagian terluar dari tubuli seminiferi,
yang terdiri dari 2 tipe sel yaitu sel sertoli dan sel germinal yang
tumbuh dan berkembang. Sel germinal mengalami pembelahan secara
berseri dan mengalami perkembangan, dimulai dari arah tepi menuju ke
lumen. Spermatogonia adalah sistem sel yang membelah beberapa kali
sebelum terbentuknya spermatosit. Spermatosit mengalami miosis dengan
berkurangnya kandungan DNA menjadi setelah dari sel tubuh.
Tubuli seminiferi adalah tempat untuk proses spermatogenesis atau
pembelahan sel gamet. Proses spermatogenesis merupakan 2 proses pembe-
lahan 1) pembelahan mitosis dan miosis disebut dengan
spermatositogenesis (Dari 2 n menjadi 2n), yaitu pembelahan dari
spermatogonium sampai dengan spermatosit primer. Miosis I adalah
pembelahan dari spermatosit primer ke spermatosit sekunder (Dari 2n
menjadi n), sedangkan Miosis II adalah pembelahan dari spermatosit
sekunder menjadi spermatid (Dari n menjadi n). 2) Perubahan spermatid
menjadi spermatozoa disebut dengan spermiogenesis
Gambar 2.3. Sel-sel di dalam tubuli seminiferi
Gambar 2.4. Histologi Testes

Di dalam tubuli seminiferi terdapat sel-sel mulai spermatogonium hingga
spermatozoa, selain itu juga terdapat sel sertoli yang secara umum disebut
berfungsi memberi makan spermatozoa akan tetapi sebetulnya berfungsi
sebagai blood testes barier, penghasil hormon in hibin dan aromatisasi
hormon testosteron menjadi estradiol 17β (estrogen), sedangkan di antara
tubulus terdapat sel intertitiel yang diantaranya terdapat sel leydig. Sel
leydig berfungsi menghasilkan hormon testosteron yang selain berfungsi
untuk proses spermatogenesis juga berfungsi didalam pematangan
spermatozoa dalam epididimis (dalam bentuk dihidro testosteron) dan
meningkatkan libido untuk mengawini betina.
2.1. Spermatositogenesis
Selama perkembangan embrio, sel khusus germinal primordial
berpindah dari bagian kantong kuning telur pada gonad embrio yang tidak
terdeferensiasi. Setelah fetus sel primordial berubah menjadi gonosit pada
ternak jantan dan terus mengalami deferensiasi (garner dan Hafez,
2008)
Sebelum pubertas sudah terbentuk spermatogonia type Ao yang berasal
dari germ layer. Spermatogonia type A1 secara progresif membelah menjadi
A2, A3 dan A4. Kemudian membentuk type intermediate dan selanjutnya
membelah menjadi spermatosit. Proses pembelahan diatas adalah
pembelahan mitosis (2N menjadi 2N). Selanjutnya spermatosit primer
membelah miosis menjadi spermatosit sekunder disebut dengan miosis I,
sedangkan miosis II adalah pembelahan dari spermatosit sekunder
menjadi spermatid.
Menurut Garner dan Hafez (2008) sel tipe A4 membelah
membentuk intermediate spermatogonia (tipe In) dan selanjutnya membentuk
spermatogonia tipe B. Variasi bentuk spermatogonia ini dapat dilihat
engan membuat irisan histologi epithel seminiferi yang berbasis proliferasi
dari lapisan germ sel. Sel tipe A2 tidak hanya membelah yang akhirnya
menjadi spermatozoa kan tetapi juga membentuk stem sel yaitu
spermatogonia tipe A1, walau masih tetap ada spermatogonia tipe Ao
yang merupakan cadangan dan populasi dari stem sel (Garner dan
Hafez, 2008).
Spermatogonia tipe B membelah menjadi lebih kecil dan mejadi
2 spermatosit primer. Spermatosit primer mengalami pembelahan miosis
yaitu profase yang terdapat tahapan pre leptotene, laptotene, Zygotene,
pachytene dan diplotene sebelum menjadi spermatosit sekunder tanpa sintesa
lebih lanjut,
sehingga hasilnya adalah spermatosit sekunder yang membelah menjadi
sel haploid yaitu spermatid.
Tabel 2.1. Lama siklus epithel seminiferus dan spermatogenesis pada bebera-
pa mammalia
Lamanya hari
Spesies Siklus Spermatogenesis
Babi 8,6 34,4
Sapi 13,5 54
Anjing 13,6 54,4
Manusia 13,6 54,4
Kera (Macaca fasicularis) 9,3 37,2
Kera (Macaca malata) 10,5 42
Domba 10,4 49
Tikus (spraque-dawley) 12,9 51,9
Tiskus (Wistar) 13 52
Kuda 12,2 48,8
(Pineda, 2005 b)
Gambar 2.5. Pembelahan spermatogenesis

Gambar 2.6. Tahapan Miosis 1
Gambar 2.7. Tahapan Miosis II
2.2. Spermiogenesis.
Round spermatid yang berubah menjadi spermatoza yang melalui
perubahan secara seri yang bersama-sama disebut dengan spermiogenesis.
Perubahan meliputi kondensasi kromatin inti, pembentukan ekor
spermatozoa atau lagear apparatus dan perkembangan acrosome cap, seperti
pada gambar 2,8 dan 2,9

Gambar 2.8. Perubahan sel dari spermatid hingga spermatozoa.
Gambar 2.9. Tahapan Spermiogenesis
Tahapan perubahan bentuk spermatid dibagi menjadi 4 fase yaitu

fase golgi, Cap, Akrosom dan fase maturasi.
1. Fase Golgi
Fase golgi pada tahap spermiogenesis adalah ditandai dengan
pembentukan granul (butiran) proakrosomal dengan golgiaparatus,
peleburan granul kedalam single granule acrosome sehingga
menghasilkan penutup inti (nuclear envelope) dan tahap awal
pertumbuhan ekor pada bagian ujung lain dari akrosom. Sentriol bagian
proksimal menghilang dari inti sebagai dasar pembentukan ekor dari
kepala.
2. Fase Cap
Fase ‘cap’ ditandai dengan menyebarnya granul ke permukaan
nukleus spermatid, proses dilanjutkan menuju ke bagian 2/3 bagian
enterior pada masing-masing inti spermatid tertutup oleh lapisan
tipis doble layer.
Selama fase ‘cap’ ini terjadi perkembangan komponen axonema
pada bagian ekor yang dibentuk dari elemen-elemen pada distal
sentriol mengalami pemanjangan di bagian sitoplasma sel. Selama awal
perkembangan struktur axonema irip dengan silia yang didalamnya
terdapat 2 tubulus di tengah yang dikelilingi bagian tepinya dengan
9 pasang tubulus.
3. Fase akrosom
Fase akrosom pada proses spermiogenesis secara umum ditandai
dengan perubahan inti, akrosom dan pertumbuhan ekor spermatid.
Pertum- buhan difasilitasi oleh pemutaran pada masing-masing
spermatid, akroom menuju ke bagian ujung sedangkan ekornya
menuju ke bagian lumen.
Perubahan inti meliputi kondensasi kromosom pada butiran tebal
dibagian kepala menjadi pipih, saat ini terjadi pertumbuhan histon
secara progresif diganti dengan protein yang bentuknya ikut
memanjang. Modiikasi bentuk kepala dan akrosom ini berada di sekitar
sel sertoli. Proses ini berbeda-beda pada masing-masing spesies.
Perubahan morfologi inti seiring dengan menghilangnya
sitoplasma di bagian kepala juga bagian cauda dan bagian proximal
tumbuh ekor yang bagian sitoplasmanya tumbuh silinder sheat.
Metochondria yang awalnya terdistribusi di spermatid mulai
terkonsentrasi di bagian axonema yang membentuk sheat di bagian
midle piace pada ekor.
4. Fase Maturasi
Fase maturasi pada spermiogenesis ini adalah suatu tahap akhir
dari proses peanjangan dan menuju lumen tubulus seminiferus.
Pemanjangan spermatid ini mempunyai proses yang bervariasi sehingga
bentuk pada berbagai spesies menjadi berbeda. Di dalam intinya
terdapat granula kromatin yang secara progressif mengalami
kondensasi merubah protein menjadi protamin dan membentuk materi
homogenous yang seragam pada inti spermatozoa.
Selama fase maturasi ibrous sheeth dan 9 course iber (serabut kasar)
membentuk lingkaran axonema dan terus menerus kolom ini mejadi
leher. 9 serabut kasar yang dikelilingi axonema terbentuk mulai leher
sampai ujung ekor. Mitokondria secara kuat dan terus menerus
berkembang di bagian ekor.
Pada sel spermatid yang berbentuk bulat terdapat organel-organel an-
tara lain apparatus golgi, mitokondria, sentriol dan nukleus (inti), di
dalam proses pembentukan spermatozoa terjadi perubahan bantuk
dari sel dan juga terjadi perpindahan lokasi dari masing-masing organel-
organel tersebut, sehingga terbentuk spermatozoa yang lengkap.
Aparatus golgi terletak di dalam akrosom, inti terletak pada kepala
spermatozoa, mitokondria terletak di bagian leher sedangkan sentriol
berkembang membentuk lagelum
pada ekor, sehingga fungsi dan bagian-bagian tersebut masih sama
dengan penyusunnya.
Lamanya Spermatogenesis
Pada irisan melintang tubuli seminiferi terdapat sel yang bervarasi
dan bergabung membetuk perubahan berupa siklus terdapat 14 macam.
Sel yang bergabung atau tahapan (stage) yang diidentiikasi pada spesies yang
sama dan pada manusia terdapat 12 stage pada suatu siklus (Gambar
2.11). Secara menyeluruh waktu yang dibutuhkan dalam satu siklus
dapat diketahui, satu siklus adalah satu seri perubahan epithel seminiferi
antara tahapan perubahan.
Setiap tahapan spermiogenesis ini digunakan untuk mengklasiikasi
tahapan sikus yang bervariasi. Waktu siklus seminiferi bervariasi di
masing-masing spesies. Pada Babi lamanya 9 hari, domba 10 hari, Kuda
12 hari dan Sapi 14 hari dan terdapat 4-5 siklus bervariasi pada spesies yang
berbeda, sebelum terbentuk spermatozoa pada satu siklus mengalami
metamorfosa selama spermatogenesis. Setia siklus epithel seminiferi
diibaratkan sistem pendidikan SD mulai kelas 1 sampai lulus, dilanjut SMP
mulai kelas 1 sampai lulus dan seterusnya hingga lulus setelah semua
kurikulum dilaluinya dan waktu yang dibutuhkan pada masing- masing
spesies berbeda untuk menyelesaikan perkembangannya.
Gambar 2.10. Proses spermatogenesis pada setiap siklus

Pada gambar di atas terdapat tabel di tengah mengindikasikan terdapat
12 tahapan (stage) dalam setiap siklus epithel seminiferi. Variasi tipe selnya
adalah A,I,B adalah tahap keberuntuhan spermatogonia, PL pre leptotene
spermatocyte, L, leptotene spermatocyt, Z, zygotene spermatocyte, P, Pachitene
spermatocyte dari tage 1,5 dan X. II, Secondary spermatocyte. Step 1-14 suatu
tahapan spermiogenesis yang ditunjukkan pada fase golgi (step 1-3), fase
cap (step 4-7), fase akrosom (step 8- 12) dan fase maturasi (step 13-14)
diadaptasi dari Bearnrson WE, Desjardins C,Am.J. Anat :1974 :140 ; 167-
180 (Garner dan Hafez, 2008)
2.3. Peran Hormon pada proses spermatogenesis

Proses pembentukan spermatozoa dan fungsi hormon steroid diatur
oleh gonadotropin yang disekresi oleh sel adenohipoisa yang
dikeluarkan secara pulsatif. Fungsi tersebut telah dibuktikan dengan metode
hipoisektomi dan replecement terapi.
Pada saat masih bayi (juvenil), ternak janan tidak respon terhadap gonado-
tropin. Setelah dewasa terdapat respon, peristiwa ini belum jelas diketahui apakah
yang menyebabkan sel-sel germinal sensitif terhadap stimulasi gonadotropin.
Spermatogenesis yang normal sinergis dengan aktiitas Luteinizing
Hormaon (LH, pada jantan juga disebut dengan Instertitiel Cell Stimualting
Hormoe, ICSH), Folikel stimulating Hormon (FSH), prolaktin, Androgen dan
hormon yang lain. Hal ini seperi penjelasan di gambar 2.13.
Fungsi masing-masing hormon FSH dan LH terhadap proses
spermatogenesis masih dipertanyakan, karena tambak fungsi yang
bersamaan keduanya. Hasil percobaan menunjukkan bahwa LH berfungsi
untuk menstimulasi aktivitas steroidogenesis dan fungsi pembentukan sel
gamet. LH berfungsi langsung pada sel leydig didalam menghasilkan
hormon testosteron. FSH berfungsi di dalam spermiogenesis yang
aktiitasnya hasil sekresi dari sel sertoli. Lebih lanjut IGF-1 juga diproduksi
oleh sel sertoli yang berperanan penting dan tidak dapat keluar darii blood
testis barier. Sehingga IGF-1 diproduksi secara lokal yang menstimulasi
terjadinya pembelahan miosis pada ephitel seminiferi.
Pada sel sertoli dan sel germinal terdapat reseptor IGF-1 dan
untuk insulin Like Growth Factor-2 (IGF-2) walau ekspresinya masih belum
ditemukan didalam sel sertoli. Unilateral kastrasi pada jantan di
beberapa spesies meningkatkan level LH dan FSH dalam darah dan
menstimulasi kompensasi
hipertropi pada testis.
Aktiitas gonadotropin hormon pada testis, pembentukan
spermatozoa dan steroidogenic di bawah kontrol interaktif paracrine di
dalam testes merupakan faktor pertumbuhan.
Gambar 2.11. Hubungan kontrol fungsi hormon dalam testis
Luteinizing hormon (LH) menstimulasi (+) sel leydig untuk
sekresi
testosteron, sedangkan FSH menstimulasi (+) pembelahan sel germinal.
FSH juga menstimulasi sel sertoli untuk meningkatkan metabolisme
Androgen pada organ jantan dan feed back negatif (-) pada hipothalamus,
menurunkan keluarnya GnRH (FSH/LH-RH). Konsentrasi testosteron
secara lokal tinggi menstimulasi pertumbuhan germinal epithelium. FSH
menstimulasi sintesa Androgen Binding Protein (ABP). Inhibin disekresi sel
sertoli untuk menekan level FSH.
Tabel 2.2. Sekresi dari fungsi sel sertoli
Produk Fungsi
ABP, Androgen Binding Protein Transport Androgen ke organ reproduksi
jantan
Estrogen, Estradiol 17β Kontrol sekresi FSH, menghambat sekreasi
androgen oleh sel leydig
Koponen nutrisi esensial, termasuk Kebutuhan untuk metabolisme dan
enzim dan asam amino tidak hidupnya sel germinal dan memfasilitasi
dapat terjadinya mio-
melintasi Blood testis barier sis pada epithel seminiferi
Gonadocrinin Mengatur sekresi LH, penurunan reseptor
LH
dan mengikat LH pada sel leydig
Inhibin Kontrol sekreasi FSH
IGF-1, insulin – like growth Pertumbuhan dan deferensiasi sel germinal,
factor 1 kemungkinan interaksi sel leydig untuk pro-
duksi steroid.
IGF2, insulin- like growth factor Androgen diterima oleh sel sertoli
2
MIH, Mullerian Inhibiting Menghalangi pertumbuhan organ muller
Hormon, pada
diproduksi oleh sel sertoli fetus fetus jantan
Diambil dari MK Skinner, Endocrine Rev 12:45, 1991; and B.P Bullaney and
M.K. Skinner Bailliere’s clin. Endocrinol metab 5 :771.1009 (Pineda, 2005a).
2.4. Fungsi Steroidogenic

Sel leydig pada instertitiel menghasilkan androgen, termasuk di
dalamnya adalah testosteron adalah respon dari stimulasi LH (ACSH) yang
bersinergi dengan FSH dan kemungkinan prolaktin. Prolaksi berfungsi
mengatur sekresi testosteron yaitu dengan meningkatkan jumlah dan
meningkatkan ainitas reseptor LH di sel leydig.
Interaksi antara LH dengan sel leydig karena aktiitas adenil
siklase, termasuk aktiitas protein kinase dan sintesa RNA menghasilkan
peningkatan produksi pregnelolon dari kolesterol oleh mitokondria
didalam sel leydig (Gambar 2.14).
Enzim didalam sel menyebabkan mitochondria mensintesa pregnenolon
sampai akhirnya dikeluarkan testesteron oleh sel leydig. Hanya sel leydig
yang dapat mensintesa cholesterol menjadi testosteron.
Testosteron yang dihasilkan sel leydig oleh parachin sel sertoli
dirubah menjadi estradiol 17β kaena pengaruh FSH, hal ini terjadi pada
banyak spesies (Gambar 2.15)
Perubahan testosteron menjadi estrogen karena adanya reseptor
spesiik dapa sel sertoli. Pada proses spermatogenesis yang normal
terdapat interaksi yang komplex antara sel germinal epithelium, sel leydig dan
sekresi testosteron, sel sertoli dan sekresi estrogen dan gonadotropin
dari pituitary.
Faktor pertumbuhan IGF-1 & 2 dan regulasi lokal lain, merupakan
kerja autokrin dan juga kontrol sel leydig dan sekresi sel sertoli, adrenal
cortex juga mensekresi androgen dalam jumlah yang sedikit.
Gambar 2.12. Fungsi isiologi gonadocrinin pada sel sertoli, leydig dan sel
granulosa (didaptasi dari sumber yang berbeda-beda termasuk R.M. Sharp,
J.Reprod. Fertil. 64 : 517, 1982) (Pineda, 2005a)
Gambar 2.13. Interaksi paracrine antara sel leydig dengan sel sertoli (Pineda, 2005a)
Gambar 2.14. Sistesis dan produksi Testosteron oleh Sel Leydig (diambil dari
A.H. Payne & Young Hood. Biol. Reprod, 52 :217, 1995) (Pineda, 2005a)
2.5.Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenesis

1. Bahan beracun
Pada umumnya, sel germinal epithelium sensitif terhadap
kondisi panas terutama pada perkembangan spermatid, sedangkan
pengaruh radiasi panas selain pada perkembangan spermatid juga
pada pembelahan spermatogonia. Apabila testis rusak masih
ada spermatozoa yang berada pada epididimis, waktu spermatozoa
berada di epididimis selama 2-5 hari. Sebagian besar spesies waktu
maturasi di epididimus kurang dari 5 hari. Jika spermatozoa
abnormal bukannya dipengaruhi saat di epididimis tetapi saat
spermatozoa yang merupakan akibat dari stress beberapa
minggu yang lalu.
Tabel 2.3. Waktu migrasi di dalam spididimis pada berbagai spesies
Spesies Waktu migrasi (Hari)

Babi 9-14
Sapi 8-11
Domba 13
Kuda 3-7
2. Pengaruh Nutrisi
Deisiensi makanan yang spesiik berpengaruh pada
eisiensi reproduksi yang meliputi siklus estrus, kebuntingan,
produksi susu dan sifat keibuan adalah dampak panjang dari
kekurangan energi pada betina, sedangkan pada jantan adalah
kemampuan didalam mengawini, juga penurunan berat badannya
berdampak besar apabila sebelum pubertas dibandingkan setelah
pubertas, yaitu hipoplasia pada testis, kelenjar asesoris dan
keterlambatan pubertas.
Kekurangan energi dalam makanan berpengaruh terhadap
sekresi gonadotropin, pendewasaan jadi tertunda (berat badan
turun 25 – 35%) penurunan libido, epithel seminiferus tahan terhadap
kerusakan, volume dan kualitas semen yang jelek.
Kekurangan Vitamin A berpengaruh terhadap Germinal
epithel dan sel leydig yang menyebabkan rendahnya kualitas
spermatozoa, atropi testis, pengecilan kelenjar asesoris dan
pubertas terhambat.
Kekurangan vitamin E menyebabkan kerusakan testis pada
tikus, tetapi tidak pernah ada kasus infertility pada ternak yang
disebabkan oleh kekurangan vitamin E. Kekurangan vitamin
E lebih banyak mempengaruhi metabolisme terutama bila terjadi
sebelum pubertas. Kekurangan mineral atau mengkonsumsi yang
berlebihan itoestrogen,goitrogen dan nitrat secara bersam-sama
berpengaruh terhadap penampilan reproduksi jantan dan bila
terjadi dalam waktu yang lama akan menyebabkan testis
degeneratif (mengecil).
Eksogenous sex steroid dapat berpengaruh terhadap fungsi testis
atau sekresi gonadotropin oleh pituitry, akan tetapi bila diberikan
dalam jumlah yang tinggi dan jangka waktu yang lama, justru akan
menekan
gonadotropin dan testosterin yang diinjesikan akan menekan
kualitas semen hingga 11 minggu.
2.6. Peran skrotum dalam termoregulasi

Proses spermatogenesis bisa berjalan dengan baik apabila suhu
dalam testis 5oC di bawah suhu tubuh, oleh sebab itu pada bagian skrotum
terdapat suatu proses thermoregulasi yang diatur oleh sistem kerja:
1. Otot kremaster, pada saat panas akan menjauhkan dari tubuh,
sedangkan bila dingin mendekat ke tubuh.
2. Tunika dartos, Otot yang mengatur apabila panas akan
merenggang,sedangkan apabila dingin akan mengkerut.
3. Pleksus Pumpiniformis, yaitu vena dan arteri yang saling berbelit untuk
proses pengaturan suhu.
Proses termoregulasi ini tidak terjadi pada ternak sebelum pubertas, oleh
sebab itu untuk mengamati seekor ternak telah pubertas atau telah
mengalami spermatogenesis dapat diamati pada fungsi-fungsi
diatas.
BAB
III
KAPASITASI SPERMATOZOA
Spermatozoa yang diejakulasikan ke dalam saluran reproduksi
betina bertujuan untuk dapat memfertilisasi oosit. Di dalam alat
reproduksi betina membutuhkan waktu agar dapat melakukan fertilisasi.
Cairan uterus, bahan- bahan dari oviduk dan cairan folikel saat ovulasi
berperanan dalam proses kapasitasi (Pineda, 2005).
Spermatozoa mammalia yang telah mengalami pemasakan di dalam
epididimis dan terejakulasi belum dapat membuahi sel telur. Spermatozoa
tersebut haruslah menetap di dalam saluran kelamin betina selama beberapa
saat sebelum membuahi sel telur. Spermatozoa mengalami beberapa
perubahan isiologis (fungsional) di dalam saluran kelamin betina,
Perubahan-perubahan tersebut menyebabkan spermatozoa mampu
melakukan pembuahan, peristiwa ini yang disebut dengan KAPASITASI.
Sejak penemuan kapasitasi oleh Chang, hingga saat ini para peneliti
masih menyimpan keraguan akan perlunya kapasitasi pada spermatozoa. Hal
ini karena spermatozoa yang baru terejakulasi, belum diketahui
kemampuannya dalam membuahi sel telur. Bila kapasitasi dideinisikan
sebagai fenomena yang hanya terjadi di dalam saluran betina, maka keraguan
mereka dapat dibenarkan. Untuk pembuktiannya lebih mudah bila digunakan
media buatan yang menyerupai disaluran kelamin betina untuk proses
inseminasi sel telur.
Bila kapasitasi tidak dibutuhkan, maka spermatozoa yang baru
terejakulasi dapat membuahi sel telur sesegera mungkin. Dalam
kenyataannya, selalu terjadi selang waktu antara Inseminasi dan awal dari
pembuahan. Selang waktu ini bisa terjadi selama kurang dari 1 jam atau
lebih dari beberapa jam, tergantung pada spesiesnya, selang waktu ini
dapat digunakan untuk menentukan waktunya kapasitasi.
Waktu kapasitasi dapat ditentukan dengan bermacam metode. Salah
satunya adalah dengan mengawinkan atau melakukan Inseminasi Buatan pada
37
38 Kapasitasi
Spermatozoa
betina yang baru berovulasi Misalnya terdapat selang waktu selama 2 jam
diantara Inseminasi dan awal pembuahan, maka 2 jam adalah waktu
minimum untuk berkapasitasi. Waktu 2 jam tersebut merupakan waktu
minimum dari spermatozoa untuk berpindah menuju tempat pembuahan.
Sedangkan proses kapasitasi spermatozoa mungkin berlangsung lebih
awal. Suatu pendekatan alternatif adalah dengan menginkubasi terlebih
dahulu spermatozoa di dalam saluran kelamin betina atau media buatan
dengan selang waktu yang berbeda, kemudian oosit yang baru ovulasi
dicampurkan secara in vitro, kemudian ditentukan waktu fertilisasinya.
Jika spermatozoa tidak kapasitasi sama sekali atau hanya sebagian
saja, maka akan terjadi kegagalan pembuahan atau terjadi pembuahan
beberapa jam kemudian. Sebaliknya bila spermatozoa berkapasitasi secara
penuh, maka mereka akan membuahi sel telur tanpa selang waktu
(setidaknya dalam waktu 30-60 menit setelah inseminasi, atau waktu di
diperlukan spermatozoa untuk menembus sel telur).
Penting untuk dicatat bahwa waktu kapasitasi tiap-tiap spesies tidak
dapat ditentukan dengan pasti. Hal ini secara pasti dipengaruhi oleh
berbagai hormon reproduksi, macam dan komposisi medium di tempat
pematangan spermatozoa dan terdapatnya seminal plasma pada
spermatozoa mempengaruhi waktu kapasitasi spermatozoa.
Kapasitasi adalah proses pelepasan bahan-bahan pelapis membran
spermatozoa secara bertahap, terutama pada bagian akrosom. Hal ini
menyebabkan reseptor spermatozoa dapat berinteraksi dengan reseptor
sel telur, atau Zona pellusida.
Tabel 3.1. Kondisi kapasitasi pada spermatozoa yang diejakulasikan
Spesies Keadaan kapasitas Faktor dekapasitasi dalam semen
Babi Ya Ya
Sapi ya ya
Kucing ya ya
Anjing mungkin ya
Manusia mungkin ya
Domba mungkin ya
Kuda mungkin ya
(Pineda, 2005b)
Istilah kapasitasi pada dasarnya adalah perubahan isiologis
spermatozoa dan dilanjutkan dengan reaksi akrosom, sehingga mampu
membuahi sel telur. Ada yang menyebutkan bahwa reaksi akrosom adalah
bagian dari kapasitasi, akan tetapi sebetulnya kapasitasi dan reaksi akrosom
merupakan fenomena yang terpisah. Kapasitasi adalah serentetan perubahan
yang membuat spermatozoa mampu mengalami reaksi akrosom. Reaksi
akrosom terjadi pada sebagian besar binatang, sedangkan kapasitasi
merupakan fenomena yang unik pada mammalia dan sebagian pada non
mammalia.
Gambaran spermatozoa yang mengalami kapasitasi dengan pewarnaan
Chlortetracycline dan diamati menggunakan mikroskop epi luoresen
dengan Exitation Blue Violet adalah seperti gambar 3.1.
Gambar 3.1. Gambaran spermatozoa yang belum kapasitasi, Kapasitasi

dan setelah reaksi akrosom pada sapi (Susilawati, 2000)
A. Spermatozoa yang utuh (Belum kapasitasi)
B. Spermatozoa kapasitasi
C. Spermatozoa telah selesai Reaksi akrosom
Gambaran tersebut juga terjadi pada Kambing, Domba, Kerbau dan

juga manusia. Pendaran warna kuning tersebut adalah karena
chlortetracycline yang bisa berpendar mengikat ion kalsium yang ada pada
membran spermatozoa, sehingga dengan menggunakan mikroskop epi
luorescent terjadi pendaran warna kuning pada bagian membran yang
terdapat ion kalsium, semakin tinggi
konsentrasi ion kalsium maka pendarannya semakin jelas.
Spermatozoa yang belum kapasitasi menunjukkan pendaran kuning
(luoressen) pada seluruh kepala dan ekor spermatozoa. Hal ini karena ion
kalsium berada merata di kepala spermatozoa. Spermatozoa yang
kapasitasi ditunjukkan dengan pendaran pada bagian atas kepala atau bagian
akrosomnya, selain itu pendaran kuning juga terkonsentrasi pada bagian
leher yang banyak mitokondrianya. Peningkatan ion kalsium pada bagian
akrosom menyebabkan aktifnya pro enzim yang ada di akrosom menjadi
enzim yang aktif sehingga selanjutnya akan terjadi reaksi akrosom,
sedangkan peningkatan konsentrasi ion kalsium pada bagian leher yang
banyak mengandung mitokondria menyebabkan gerak progresif spermatozoa
menjadi gerak hiperaktifasi. Perbedaan gerak progresif dan hiperaktifasi
adalah amplitudi geraknya lebih besar pada saat hiperaktifasi. Kepastian
gerak hiperaktifasi pada saat kapasitasi atau setelah kapasitasi masih
menjadi pertanyaan, akan tetapi yang pasti apabila spermatozoa sudah
hiperaktifasi dan tidak terjadi fertilisasi maka spermatozoa tersebut akan
segera mengalami kematian.
3.1. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VIVO

Kapasitasi secara normal terjadi pada saluran reproduksi betina
yang sedang estrus dan kapasitasi mulai terjadi saat spermatozoa melalui
servik atau lendir servik, sedangkan pada kelinci adalah paling eisien, karena
spermatozoa mengalami pematangan di uterus dan oviduk.
Pada hewan mengerat dan babi, tempat utama kapasitasi adalah di
oviduk, kemudian berjalan ke arah ampulla yang merupakan tempat terjadinya
pembuahan. dan tidak diketahui kapan dan spermatozoa menyelesaikan
kapasitasi.
Belum diketahui faktor-faktor yang secara langsung mengontrol kapasitasi
spermatozoa di dalam saluran kelamin betina. Ada beberapa substansi
yang diduga sebagai faktor yang menyebabkan kapasitasi yaitu beta-amylase
dan beta Glucoronidase, Protein dan Neuraminidase arysulfatase, fucodinase,
acetylhexosaminidase carbonic, anhydrose dan steroid, sulfatase, glikosaminoglican,
catechlamine dan taurine dan hypotaurine. Studi lebih lanjut mutlak diperlukan
untuk menentukan apakah zat-zat tersebut diatas benar-benar terlibat dalam
proses kapasitasi spermatozoa secara in vitro, karena faktor-faktor tersebut
tidak spesiik spesies.
Pada pembuahan secara in vitro, kapasitasi terjadi tanpa adanya kontribusi
sistim saluran kelamin betina Akan tetapi tidak berarti bahwa kondisi-
kondisi yang menyebabkan kapasitasi in vitro identik dengan kapasitasi in vivo.
Apa yang terjadi pada in vitro dan in vivo bisa jadi berbeda. Terdapat beberapa
pernyataan bahwa spermatozoa yang berkapasitasi secara in vivo membuahi
sel telur jauh lebih eisien dari in vitro. Alam semesta telah bekerja selama
jutaan tahun, sementara para ilmuwan baru mulai mengikuti jejaknya,
banyak hal yang masih harus di pelajari dari alam ini.
3.2. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VITRO

Chang pertama kali melaporkan bahwa spermatozoa mammalia
dapat berkapasitasi secara in vitro pada tahun 1963. Sel telur dikumpulkan
dari tupai bulu emas yang mandul dengan mengambil oviduk betina yang
baru berovulasi. Saat sel telur diinseminasikan dengan spermatozoa yang
berasal dari epididimis, 55% sel telur dipenetrasi oleh spermatozoa.
Keberhasilan pembuahan secara in vitro tersebut mengindikasikan
keberhasilan kapasitasi secara in vitro. Pada tahap awal penelitian digunakan
cairan oviduk, cairan folikular atau serum darah yang mempunyai
komposisi yang rumit. Pertama kali yang berhasil melakukan pembuahan
secara in vitro dengan memakai bahan kimia tertentu adalah Toyoda dkk
(1971), sehingga kemudian proses pembuahan secara in vitro termasuk
kapasitasi in vitro menjadi semakin mudah dan mekanisme kapasitasi lebih
mudah dari pada sebelumnya. Media yang lazim digunakan untuk kapasitasi
secara in vitro adalah modiikasi larutan Tyrode dan Kreb-Ringer yang
ditambahkan sumber energi yang cukup ( misalnya Glukosa, laktat dan
Piruvat ) dan albumin. Media kultur jaringan yang tersedia di pasaran
(Misalnya Ham F-10) yang disuplemen dengan serum darah juga sering
digunakan terutama pada manusia. Sampai saat ini belum ada media yang
dapat digunakan untuk semua spesies, karena spermatozoa dan oosit tiap
spesies mempunyai lingkungan yang tersendiri untuk berfungsi secara
eisien.
Tujuan utama mempelajari secara in vitro adalah melihat hasil
pembuahan secara in vitro bukannya menganalisa mekanisme kapasitasi
spermatozoa. Meskipun semua informasi itu bermanfaat, akan tetapi harus
hati-hati dalam menyimpulkan masalah kapasitasi. Misalnya beberapa peneliti
menyimpulkan adanya beberapa jenis reagen yang memblokir terjadinya
kapasitasi spermatozoa secara total, sehingga tidak bisa terjadi pembuahan
secara in vitro. Kesimpulan
tersebut bisa benar atau salah, sebab kapasitasi bukanlah proses satu-satunya
yang menyebabkan keberhasilan pembuahan. Untuk pembuahan sel telur,
spermatozoa harus mampu bergerak, sanggup menjalani reaksi akrosom,
berpenetrasi ke dalam sel telur dan penggabungan sel kelamin jantan dan
betina dengan baik. Bila pembuahan secara in vitro tidak berhasil, belum
tentu disebabkan spermatozoa gagal melakukan kapasitasi, karena masih
terdapat faktor-faktor lain yang mempengaruhi fertilisasi.
Sangat lazim menganggap reaksi akrosom sebagai lengkapnya
proses kapasitasi, sebab spermatozoa tidak akan mengalami reaksi
akrosom kecuali telah selesai kapasitasi secara penuh. Reaksi akrosom dapat
digunakan sebagai indikator yang layak dari keberhasilan kapasitasi. Akan
tetapi kita mesti hati- hati, sebab kondisi-kondisi yang tidak lazim atau
reagen-reagen tertentu dapat menyebabkan reaksi akrosom tanpa melewati
proses kapasitasi. Tidak terjadinya reaksi akrosom tidak berarti spermatozoa
gagal dalam menjalani kapasitasi, karena spermatozoa tersebut mungkin
berkapasitasi namun tidak mampu menjalani reaksi akrosom. Mengingat
kenyataan ini dibuat rangkuman singkat tentang faktor-faktor yang
mempengaruhi kapasitasi secara in vitro.
3.3. FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI KAPASITASI

(Dijelaskan secara in vitro)
Suhu mempunyai pengaruh yang besar pada proses kapasitasi,
sehingga hampir semua laboratorium menetapkan suhu inkubasi berkisar
antara 37-38oC untuk kapasitasi secara in vitro. Akan tetapi, pada babi dan
domba lebih baik pada temperatur yag lebih tinggi. Selain suhu juga
terdapat faktor-faktor yang mempengaruhi proses kapasitasi yaitu:
1. Variasi Individu
Spermatozoa dari beberapa pejantan berkapasitasi lebih cepat
pada spesies yang sama. Karena pada spesies yang sama terdapat
variasi didalam individu.
2. Asal spermatozoa
Spermatozoa dari epididimis dan spermatozoa hasil ejakulasi
mempunyai sifat yang tidak sama secara in vitro. Pada umumnya
spermatozoa epididimis lebih mudah membuahi sel telur secara in vitro
dari pada spermatozoa hasil ejakulasi. 71-75% sel telur babi dapat dibuahi
secara in vitro oleh spermatozoa
yang berasal dari cauda epididimis, dan sebaliknya tak satu pun yang
berhasil dibuahi oleh spermatozoa hasil ejakulasi. Spermatozoa dari epididimis
menjadi infertil saat menempel atau masuk didalam seminal plasma.
Spermatozoa hasil ejakulasi lebih lama kapasitasinya dari pada
spermatozoa dari epididimis secara in vitro. Hal ini karena plasma
spermatozoa epididimis cukup stabil setelah tingkatan absorbsi dan atau
integrasi glikoprotein dari epididimis, cukup banyak bukti yang
menyatakan bahwa komponen- komponen seminal plasma (misalnya:
glikoprotein, polipeptida dan protein semacam ibronektin) menempel
dengan kuat pada permukaan spermatozoa terejakulasi. Ikatan tersebut
begitu kuat, sehingga tidak bisa dilepas dengan mudah dengan pencucian
yang berulang-ulang dengan larutan isiologis biasa. Pelepasan atau
perubahan material lapisan permukaan spermatozoa merupakan bagian
terpenting dari proses kapasitasi. Tampaknya saluran kelamin betina yang
berahi dapat menyebabkan kapasitasi spermatozoa. Pada bagian tersebut
terdapat mekanisme yang sangat eisien untuk merubah material lapisan
pelindung spermatozoa yang berasal dari epididimis (lapisan permukaan
primer) dan dari seminal plasma (lapisan sekunder). Lapisan primer pada
spermatozoa yang berasal dari epididimis mudah diubah dengan
menggunakan media yang dinamakan “media kapasitasi sperma”., akan
tetapi tidak efektif untuk melepas lapisan sekunder, sehingga supaya terjadi
kapasitasi secara in vitro, dilakukan sentrifugasi terlebih dahulu.
3. Terdapatnya Kumulus Oophorus.
Sel-sel telur yang matang dikelilingi oleh kumulus oophorus.
Kumulus tetap berfungsi tidak hanya selama pembuahan, tapi juga beberapa
saat sebelum pembuahan. Adanya kumulus oophorus di sekeliling sel telur
dapat membantu proses pembuahan, terutama bila media yang ada
kekurangan albumin, selain itu beberapa komponen dari kumulus
memicu terjadinya reaksi akrosom.
Secara in vitro sel kumulus mengkapasitasi spermatozoa, akan tetapi
secara in vivo tidak terjadi, hal ini ditunjukkan bahwa spermatozoa
hamster yang memasuki kumulus oophorus sudah mengalami kapasitasi,
sehingga dapat dikatakan bahwa yang menyebabkan kapasitasi adalah
saluran kelamin betina (Yanagimachi, 1988).
Gambar 3.2. Photomicrographs yang menunjukkan kumulus oophorus yang
menyelimuti sel telur (A), dan (B) setelah terjadi fertilisasi pada Chinese
hamster. (Gambar diambil dari Buku yanagimachi, 1988).
3.4 PERISTIWA-PERISTIWAYANGTERJADIPADA
SPERMATOZOA SELAMA KAPASITASI
Selama kapasitasi terjadi perubahan-perubahan pada adenylat cyclase, me-
tabolisme, ion-ion intra selluler, akrosom, Inti dan selaput plasma.
1. Perubahan-perubahan dalam adenylate cyclase
Tingkat fertilitas spermatozoa secara temporer berkurang atau
hilang pergerakannya saat berada pada bagian tertentu di saluran
reproduksi betina. Spermatozoa akan bergerak sangat cepat pada saat
permulaan dan akhir kapasitasi, hal ini menunjukan bahwa adenylate cyclase dan
sistim protein kinase (pada fungsi cAMP nya) berperanan penting dalam menjaga
motilitas. Terdapat bukti tentang peningkatan aktiitas adelylate cyclase selama kapasitasi,
meningkatnya aktiitas adenilat seklase mungkin karena meningkatnya jumlah cAMP.
Selanjutnya protein kinase terstimulasi merubah struktur tersier dan kuartener selaput
spermatozoa melalui phosporilasi protein-protein membran yang menghasilkan perubahan
pada sifat isik selaput (Misalnya permeabilitas ion).
Gambar 3.3. Mekanisme molekuler pada proses kapasitasi
2. Perubahan pada metabolisme

Spermatozoa mengalami peningkatan metabolisme (Misal:aktiitas glikoli-
tik dan konsumsi oksigen) setelah inkubasi di dalam saluran kelamin
betina atau dalam media yang mengandung cairan yang berasal dari
uterus, oviduk atau cairan follikular yang berperanan dalam kapasitasi.
Peningkatan respirasi spermatozoa dalam media kapasitasi disebabkan
adanya substrat-substrat yang dapat teroksidasi dan merupakan suatu iring-
iringan dari proses kapasitasi dan bukan merupakan faktor pembawa,
meskipun tampak pasti bahwa spermatozoa tikus tidak merubah laju
respirasinya sebelum dan sesudah kapasitasi. Kapasitasi mungkin
mengakibatkan perubahan pada selaput plasma (Phosporilasi) hingga
energi menjadi lebih dapat digunakan untuk perangkat motor
spermatozoa. Peningkatan laju metabolisme selama dan sesudah kapasitasi
masih belum dapat dijelaskan secara detil.
3. Perubahan dalam ion-ion intraselluler

Spermatozoa yang hidup, secara eisien menjaga gradien ion di
sepanjang selaput plasmanya. Konsentrasi K+ di dalam spermatozoa lebih
tinggi dari pada di luar, sementara Na+ sebaliknya. Gradien ionik ini
diyakini diatur oleh pompa penukaran Na+/ K+ yang bermedia ATP ase.
Konsentrasi Na+dan K+ intra selluler spermatozoa mammalia pada cauda
epididimis adalah sekitar 20 dan 14 mM. Perubahan konsentrasi selama
kapasitasi masih belum diketahui.
Arus masuk secara besar-besaran dari Ca2+ ekstraselluler melalui
selaput kepala spermatozoa menyebabkan terjadinya reaksi akrosom, akan
tetapi masih sedikit diketahui tentang kinetika Ca2+ intraselluler selama
kapasitasi. Pada umumnya diterima anggapan bakwa konsentrasi Ca2+
intraselluler dalam spermatozoa adalah cukup rendah, baik pada kepala
maupun ekornya, disebabkan adanya mekanisme pemompa Ca2+ bermedia
ATP ase dan pembuluh balik Na+/ K+ pada selaput plasma. Hilangnya
ikatan Ca2+ pada permukaan spermatozoa, bukan karena penetrasi ke dalam
spermatozoa, dengan menggunakan queen2, indikator luoresen yang selektif
terhadap kalsium diketahui bahwa konsentrasi ion Ca2+ intraselluler di dalam
spermatozoa kelinci tidak berubah saat kapasitasi secara in vitro. Teknik
tersebut digunakan untuk menghitung kandungan ion Ca2+ spermatozoa
secara kelompok, bukan individu. Para peneliti menyebutkan bahwa
konsentrasi ion Ca2+ mungkin berubah pada daerah tertentu atau
terlokalisir pada daerah tertentu. Hal ini merupakan hipotesa yang
menarik, karena peningkatan konsentrasi Ca2+ intraselluler selama kapasitasi
menstimulasi adenilate cyclase spermatozoa yang mendukung pentingnya
cAMP yang pada awal nya dibutuhkan untuk pembuahan. Seperti pada
gambar 23, sedangkan mekanisme molekuler yang lain terdapat pada
gambar 24.
Gambar 3.4. Mekanisme molekuler pada peristiwa kapasitasi Spermatozoa
Gambar 3.5. Mekanisme molekuler yang terjadi pada membran

Spermatozoa selama kapasitasi
4. Perubahan pada akrosom
Struktur akrosom pada banyak spesies tidak berubah secara nyata
selama kapasitasi. Perkecualian dari tupai bulu emas, matriks akrosomnya
berubah segera setelah spermatozoa mengalami kapasitasi. Alasannya belum
jelas, namun mungkin disebabkan keluarnya beberapa molekul-molekul
kecil melalui plasma dan selaput akrosom terluar dan tidak diketahui
mulainya dari proses reaksi akrosom. Proses reaksi akrosom adalah
perubahan pro akrosin yang tidak aktif secara enzim di dalam akrosom menjadi
aktif secara enzim di dalam akrosom. Hal ini dilakukan oleh glycosaminoglicans
dalam uteri, tapi bagaimana cara molekul besar glycosaminoglicans berpenetrasi ke
dalam akrosom melalui selaput akrosom dan plasma spermatozoa belum diketahui. Dan
apakah enzim-enzim akrosom tetap dalam bentuk inaktif atau berubah aktif selama
kapasitasi berlangsung (sebelum reaksi akrosom) masih menjadi pertanyaan.
5. Perubahan pada Inti

Inti spermatozoa pada kebanyakan mammalia merupakan struktur yang
sangat stabil disebabkan cross-link oleh ikatan 5-5, tapi sedikit ekstensif
dibandingkan dengan spesies lain. Pada plasma semen terdapat Zn2+ yang
berasal dari kelenjar prostat mengikat radikal bebas 5H+ dari protein inti
spermatozoa saat ejakulasi menyebabkan stabilitas temporer pada protein
inti. Selama kapasitasi inti kehilangan ion Zn2+ dan stabilitasnya meningkat
yang mungkin disebabkan oleh oksidasi pada radikal 5 H+ yang lepas
pada ikatan disulida (Lelannou et al, 1985)
6. Perubahan pada selaput Plasma

Selaput plasma berhubungan langsung pada lingkungan kapasitasi, se-
hingga terjadi perubahan mencolok pada selaput tersebut selama
kapasitasi. Pelepasan atau perubahan material-material pelapis permukaan
spermatozoa merupakan bagian terpenting dari kapasitasi, bukti-bukti yang
mendukung pendapat ini telah banyak.
Akrosom spermatozoa yang berasal dari kauda epididimis tikus
mengandung antigen yang tak dapat dilepas dengan mudah dari
permukaan spermatozoa dengan pencucian berulang-ulang, akan tetapi
tidak ada saat spermatozoa memasuki ruang vittelin sel telur dan antigen
ini harus dilepas atau dirubah
selama kapasitasi.
Menurut model “mosaik cairan” yang secara luas diterima pada
selaput- selaput biologis, protein-protein (atau glikoprotein) secara non
kovalen berhubungan dengan lapisan ganda lipida yang membentuk
matrik selaput. Protein- protein intrinsik yang menempel dengan kuat pada
lapisan ini dapat dilepas hanya dengan perlakuan kasar (misalnya dengan
detergen), sementara protein-protein pembungkus yang berhubungan
dengan selaput terutama melalui interaksi elektrostatika dapat dilepaskan
dengan sedikit penambahan “Chelating agent” atau dengan penambahan pH
atau kekuatan ionic. Glikoprotein-glikoprotein yang dilepas dari dan atau
ditambahkan pada permukaan spermatozoa selama kapasitasi masih belum
pasti diketahui. Salah satunya adalah mungkin ibronectin atau semacam
ibronectin. Diduga ibronectin akan membekukan pergerakan late- ralnya pada
lapisan ganda lipida. Pelepasannya dari selaput ini menyebabkan protein
intrinsik bergerak dengan bebas dalam lapisan ganda lipida.
Pengujian kerusakan selaput plasma sebelum dan setelah kapasitasi
adalah melalui Partikel-Partikel Intra Membran (IMPs) yang merupakan
protein-protein intrinsik pada lapisan ganda lipida berubah penyebarannya
pada daerah kepala maupun ekornya. IMPs yang menyebar hampir merata
pada plasma membran diatas akrosom spermatozoa marmut yang tidak
kapasitasi, sedangkan pada spermatozoa yang kapasitasi terdapat
potongan-potongan kecil yang bebas IMPs, demikian juga pada
spermatozoa manusia. IMPs terkonsentrasi di dekat helix mitokondria
hanya ada pada spermatozoa yang tidak kapasitasi, selama kapasitasi
terjadi perubahan isika dan kimia pada lapisan ganda lipida.
Komposisi phospholipid membran plasma mengalami perubahan selama
kapasitasi, akan tetapi perhatian banyak tercurah pada kandungan kolesterol
pada plasma membran. Hal ini karena kolesterol menyebabkan pengaruh yang
sangat jelas pada sifat semua sel biologis (Misalnya permeabilitas ion aktif
dan pasif) dengan mengatur luiditas dan ketebalan selaput lipida.
Spermatozoa tikus pada media kapasitasi akan kehilangan sebagian kolesterol,
ini merupakan hal yang penting pada proses kapasitasi, hal ini disebabkan
karena terdapatnya albumin yang menyebabkan penipisan kolesterol. Penipisan
kolesterol ini tidaklah merata dan hanya sedikit bagian yang bebas kolesterol.
Hal ini mungkin karena pemisahan selaput lipida dan kolesterol secara
lateral dari molekul-molekul tersebut didalam lapisan ganda lipida untuk
membantu domain dan bukannya terjadi
arus keluarnya kolesterol dari selaput. Fluiditas lipida dari selaput
membran plasma kepala dan ekor spermatozoa mengalami perubahan akibat
kapasitasi. Perlu diingat bahwa sering kali dilakukan penelitian secara
mikroskopis yang ringan, perubahan luiditas yang kecil pada area terlokalisir
mungkin merupakan bagian terpenting yang sulit dideteksi
(Yanagimachi, 1988)
BAB
IV
REAKSI AKROSOM
4.1. ENZIM-ENZIM DALAM AKROSOM
Bentuk ikatan membran akrosom dengan struktur mirip topi yang
menyelubungi daerah permukaan inti spermatozoa. Meskipun ukuran
dan bentuk dari akrosom bermacam-macam diantara spesies akan tetapi
struktur dasarnya sama. Akrosom diyakini analog dengan lysosom atau granul
zymogen dari sel-sel pancreas. Sebenarnya zat ini mengandung susunan
enzim hydrolitik yang besar. Meski beberapa dari enzim-enzim ini dapat
terlokalisir di dalam atau permukaan akrosom, bukan di dalam matriks
akrosom, enzim tersebut mempunyai kemampuan hidrolisa yang kuat.
Hyaluronidase dan akrosin adalah dua jenis enzim akrosom yang
telah dipelajari secara luas dan terkarakteristik dengan baik. Keberadaannya di
dalam matrik akrosom telah ditunjukkan secara meyakinkan dengan teknik
citokimia atau immunocitokimia dengan menggunakan mikroskop
elektron. Meski beberapa peneliti menyatakan bahwa sebagian hyaluronidase
akrosom dan akrosin bergabung dengan kuat pada selaput akrosom, akan
tetapi bukti dengan mikroskop elektron belum dapat ditunjukkan.
Karbohidrat merupakan komponen utama dari akrosom. Selaput
tipis glikoprotein yang menyelubungi permukaan sebelah dalam selaput terluar
akrosom mungkin berfungsi untuk menjaga agar terjadinya plasma
tervesukulasi dan selaput akrosom secara bersama-sama selama reaksi
akrosom. Glikoprotein- glikoprotein lainnya dan zat-zat yang mengandung
karbohidrat di dalam matriks akrosom bisa membantu konversi enzim-enzim
akrosom dari bentuk ion aktif (misalnya proakrosin) menjadi bentuk
aktif (misalnya akrosin).
51
52 Reaksi
Akrosom
Gambar 4.1. Terjadinya reaksi akrosom pada saat spermatozoa

menempel pada jelli di luar sel telur
Tabel 4.1. Enzim-enzim yang terdapat pada Akrosom
Diketahui sebelum tahun Yang ditemukan setelah

1980 1980
Hyaluronidase β-N-Acetylhexosaminidase
Acrosin β-Galactosidase
Pro acrosin β-Glucuronidase
Asam proteinase α-L Fucosidase C
Esterase Cathepsin D
Neuraminidase Peptidyl peptidase
Phisphatase Ornithin decarboxylase
Phospholipase A
βN acetylglucosaminidase
Arylsulfatase
Collagenase
4.2. ARTI FUNGSIONAL REAKSI AKROSOM
Sel telur dari kebanyakan binatang diselubungi oleh gliko protein,
sehingga spermatozoa harus menembusnya sebelum mencapai selaput
plasma sel telur. Pada beberapa invertebrata, “Lysin” yang dilepaskan
akrosom spermatozoa akan melarutkan lapisan sel telur secara lokal untuk
menghasilkan lubang tempat spermatozoa memasuki oosit.
Pelarutan lapisan oleh lysin dilakukan secara enzimatis atau
interaksi inter molekuler hidrofobik. Pada mammalia lapisan tebal
glikoprotein tersebut disebut dengan zona pellusida. Zona pellusida
tersebut masih diselimuti oleh kumulus oophorus yang tersusun dari sel-
sel kumulus. Komponen utama kumulus adalah asam hyaluronic.
Hialuronidase yang dilepas oleh spermatozoa bereaksi dengan akrosom,
mencerna kumulus dan akrosin yang terbawa di permukaan spermatozoa
bereaksi dengan zona, sehingga spermatozoa dapat masuk kedalam sel
telur. Atau dengan kata lain reaksi akrosom sedikitnya bertujuan untuk
(1) membantu spermatozoa menembus zona dan (2) Meleburkan selaput
plasma sel telur.
Gambaran Spermatozoa yang telah mengalami Reaksi Akrosom dengan
pewarnaan FITC Concanavaline A seperti pada gambar 4.2.
Gambar 4.2. Spermatozoa yang telah mengalami Reaksi Akrosom

dengan pewarnaan FITC Concanavalin A (Susilawati,
2000)
Pewarnaan FITC Concanavalin A pada prinsipnya adalah
pewarnaan D-Mannosa yang terikat pada inner membrane akrosom,
apabila membrane akrosom masih intak, maka pewarna/luoresen akan
mewarnai bagian akrosom dan apabila spermatozoa sudah tidak terdapat
akrosom, maka bagian atas kepala spermatozoa berwarna gelap atau tidak
ada pendaran luoresen.
4.3. MORFOLOGI DAN KINETIKA REAKSI AKROSOM.

1. Perbedaan antara Reaksi Akrosom “True” dan “False”.
Karena akrosom mengandung bermacam-macam enzim penghidrolisa
yang kuat, maka spermatozoa yang mati atau sekarat akan rusak membrannya
atau akrosomnya.
Gambar 4.3. Diagram yang menunjukkan tahapan reaksi akrosom.

(Ac) Acrosomal cap ; (Eg) Equatorial Segment of the acrosome ; (IAM) inner
acrosomal membrane. (Gambar diambil dari buku Yanagimachi,R,1981).
Gambar 4.4. Proses reaksi akrosom pada manusia. (Gambar diambil
dari Nagae et al,1984)
Membran akrosom yang terluar relatif stabil dan selaput plasma

bagian atas dapat dihancurkan sebagian atau keseluruhannya atau
lepaskan dari bagian utama spermatozoa. Spermatozoa tanpa akrosom
bila diamati dengan mikroskop cahaya sama dengan spermatozoa setelah
reaksi akrosom. Sangat penting membedakan akrosom yang degeneratif
dengan reaksi akrosom secara isiologis
Gambar 4.5. Skematis dari proses reaksi Akrosom
Banyak teknik untuk mengamati hilangnya, tetapi semua dilakukan
pada spermatozoa pada kondisi mati. Sangat diharapkan agar
dikembangkan suatu teknik baru yang dapat mengamati reaksi akrosom
pada kondisi spermatozoa hidup, sehingga dapat dibedakan spermatozoa
tanpa akrosom karena faktor degeneratif atau secara fungsional terjadi
reaksi akrosom.
2. Sifat Alamiah Exocytotic pada Reaksi Akrosom

Reaksi akrosom selaput akrosom terluar dan selaput plasma bagian atas
yang memungkinkan isi akrosom untuk lepas.
Lokasi tempat penggabungan antara selaput plasma dan akrosom
terluar bermula terjadi dapat bervariasi menurut jenis spesies. Pada kelinci,
letaknya didaerah depan dan sekeliling daerah pembungkus akrosomal. Pada
Tupai bulu emas, biri-biri dan manusia letaknya di dekat perbatasan dari
pembungkus akrosom dan equatorial akrosom. Hal ini tidak
mengherankan sebab spermatozoa pada banyak spesies selaput terluar
akrosom dan selaput plasma tidak stabil, dan selaput plasma terluar
tersebut sangat kaya akan kalsium.
3. Waktu Reaksi Akrosom

Kecepatan reaksi akrosom tergantung dari spesiesnya, kondisi sperma-
tozoa dan lingkungannya. Spermatozoa marmut dalam medium yang
mengandung ion kalsium selesai dalam 2 menit. Spermatozoa tikus dan
dipreinkubasi dalam media kapasitasi selama 1 jam dapat berpenetrasi
kedalam zona sebesar
15% menjelang 11 menit, setelah 9 menit berikutnya 80% sel telur
terpenetrasi. Kemungkinan besar spermatozoa melebur seluruhnya pada
saat pertama kali menyentuh zona pellusida. Setidaknya beberapa
spermatozoa memulai dan menyelesaikan reaksi akrosom 10-15 menit saat
bersentuhan dengan zona. Semua fakta tersebut kelihatannya
mengindikasikan bahwa spermatozoa berkapasitasi dan mengalami reaksi
akrosom secara tepat.
4. Faktor penyebab alami reaksi akrosom

Sel telur landak laut diselubungi selaput tipis glycoprotein yang
disebut dengan lapisan vitelline dan masih diselubungi lagi dengan lapisan
jelly yang tebal. Lapisan vitelline tersebut homolog dengan zona
pellusida dari sel telur mammalia, sedangkan jelly tersebut homolog
dengan sel-sel kumulus dari mammalia. Pada banyak spesies landak laut,
reaksi akrosom terjadi saat spermatozoa menyentuh jelly atau saat
spermatozoa melewatinya. Secara biokimia, jelly adalah campuran
glycoprotein dan polimer sulfat fucose. Reaksi akrosom terjadi karena jelly
mengandung sulfa, sedangkan mekanismenya masih belum jelas.
Pengikatan komponen-komponen jelly yang aktif pada protein selaput
plasma spermatozoa menyebabkan perubahan permeabilitas ion kalsium
temporer.
Faktor yang menyebabkan reaksi akrosom pada mammalia
tampaknya adalah kumulus oophorus dan atau zona pelusida. Pada waktu
spermatozoa menempel pada zona pellusida kemudian mengalami reaksi
akrosom, karena materi-materi pada zona memicu terjadinya reaksi
akrosom dengan eisien. Satu dari tiga glikoprotein zona yaitu ZP3 yang
mengikat selaput plasma di luar pembungkus akrosom. Rantai
polypeptida dalam molekul ZP3 tampaknya berfungsi sebagai pemicu
dari reaksi akrosom.
Apakah kumulus oophorus mempunyai kemampuan untuk
memicu terjadinya reaksi akrosom masih kontroversial, Adanya kumulus
pada media yang kekurangan albumin dapat meningkatkan keberhasilan
pembuahan, akan tetapi tidak ada bukti yang jelas tentang pengaruh sel
kumulus terhadap reaksi akrosom, akan tetapi kemungkinan komponen
kumulus mengawali terjadinya reaksi akrosom dan komponen ini
bekerjasama dengan zona untuk menyelesaikan reaksi akrosom.
Pemicu reaksi akrosom bukannya suatu substansi khusus, sebagai contoh
reaksi akrosom landak laut dapat dipacu dengan bahan kimia dan isika,
sedangkan mamalia dapat mengalami reaksi akrosom tanpa adanya sel telur
dan materi yang berhubungan dengan sel telur (Misal sel kumulus dan zona).
Bahan-bahan yang secara langsung atau tidak langsung merubah
permeabilitas membran akrosom terhadap ion-ion (Misal Ca++ dan Na++),
sehingga spermatozoa yang berkapasitasi mengalami reaksi
akrosom.
Reaksi akrosom diinduksi oleh bertemunya reseptor membran
spermatozoa dengan ZP3, salah satu protein dalam ZP3 adalah galaktosil
transferase 1 (GaLT-1), suatu enzim intra membranosa yang memiliki
lokasi aktif di permukaan dan selanjutnya akan mengikat residu
karbohidrat pada ZP3. Setiap ZP3 dapat mengikat dua atau tiga molekul
GaLT-1 (Miller et al , 1992). Ikatan tersebut mengaktifkan G-protein spesiik
pada membran spermatozoa serta phospholipase C (PLC) yang
mengakibatkan depolarisasi membran, sehingga membukanya channel Ca2+.
Kondisi ini akan meningkatkan konsentrasi Ca2+ dalam sitoplasma dan pH
meningkat, sehingga vesikula akrosom mengalami eksositosis (Shi et al ,
2001; Florman et al , 1998) Selanjutnya beberapa komponen signal
transduksi yang berperan dalam inisiasi reaksi akrosom yaitu G protein,
inositol-3,4,5 triphosphat (IP3) dan reseptor IP3, Phospholipasi C, Ca2+,
saluran Ca2+ (channel Ca2+/tipe T) yang sensitif terhadap permeabilitas
membran sel (Florman et al, 1998).
Eksositosis dari vesikula akrosom melepaskan bermacam-
macam protease, sehingga melisiskan Zona Pellusida. Enzim ini
menimbulkan suatu lubang/pori yang akan dilewati spermatozoa sehingga
sapat masuk ke membran sel telur (Shi et al, 2001)
4. Mekanisme Reaksi Akrosom

Spermatozoa landak laut tidak mengalami kapasitasi seperti pada
mammalia, spermatozoa siap membuahi sel telur setelah keluar dari
pejantan. Pada kebanyakan spermatozoa dari spesies landak laut
mengalami reaksi akrosom di dalam jelly sel telur. Jelly sel telur yang
diduga berinteraksi dengan reseptor selaput plasma melewati dua lintasan
parallel. Salah satunya adalah lintasan yang tak bergantung ion kalsium yang
mengarah pada peningkatan pH intraselluler lewat arus masuk Na++ dan
arus keluar H+. Satunya adalah depolarisasi selaput yang bergantung pada
ion Ca++ dan peningkatan pH intraselluler yang meng-
hasilkan arus besar-besaran ion Ca++ ekstraselluler. Ion Ca++ yang berpenetrasi
pada selaput plasma memicu penggabungan antara plasma dan selaput
akrosom terluar, mencapai puncaknya dalam suatu eksositosis kandungan
akrosom. Meski konsentrasi cAMP intraselluler dari spermatozoa landak laut
dalam kondisi yang mendukung reaksi akrosom dan hubungan yang pasti
antara cAMP dengan reaksi akrosom belum jelas.
Gambar 4.6. Tahapan hilangkan ion kalsium selama proses kapasitasi

dan reaksi akrosom menggunakan pewarnaan CTC (Susilawati,
2000)
Arus masuk nya ion Ca++ merupakan tahap penting dari reaksi
akrosom spermatozoa mammalia. Jelas sekali bahwa semua komponen yang
berada di dalam dan di luar akrosom terlibat langsung pada proses reaksi
akrosom. Untuk menjalani reaksi akrosom pada waktu dan tempat yang tepat,
maka spermatozoa mammalia harus dapat bertahan hidup lama.
Konsentrasi ion K+ intraselluler dijaga tetap tinggi dan konsentrasi ion Ca++
dan Na+ intraselluler dijaga tetap rendah, hal ini sangat penting untuk
kelangsungan hidup spermatozoa dan perlindungan spermatozoa dari
reaksi akrosom dini. Semua ini dilakukan oleh ikatan membran Na+ - K+
ATP ase (yang memompa ion Na+ keluar dan ion K+ ke dalam sel) dan
Ca++ -ATP ase ( yang memompa Ca++ keluar dari sel). Selama kapasitasi,
lapisan permukaan makromolekul spermatozoa dilepas atau dirubah,
sehingga protein-protein membran intrinsik (termasuk zona atau reseptor
kumulus dalam selaput plasma spermatozoa diatas akrosom) menjadi berubah.
Pelepasan tersebut menyebabkan protein membran intrinsik dapat
bergerak lebih bebas di dalam lapisan ganda lipida. Lapisan ganda lipida
sendiri merubah susunan molekulernya selama kapasitasi yang dilakukan
oleh faktor-faktor en- dogen dan eksogen. Albumin merupakan satu dari
faktor-faktor eksogen yang bertanggung jawab pada pengorganisasian
kembali lipida-lipida membran saat
spermatozoa kapasitasi menyentuh kumulus atau zona.
Gambar 4.7. Mekanisme molekuler pada proses reaksi akrosom
Glicosaminoglicans sel kumulus atau glicoprotein zona pellusida mengikat

reseptor. Zona atau reseptor kumulus ini berupa protein pembawa ion Ca+
+
, reseptor membantu difusi ion Ca++ ekstra selluler. Arus masuk ion Ca++
besar- besaran menonaktifkan Na+-K+-ATP ase, sehingga meningkatkan
konsentrasi ion Na+ intraselluler. Hal ini menyebabkan arus keluar ion
H+ (melalui pembuluh balik Na+/H+) yang menyebabkan pH intra
selluler naik. Ion Ca++ yang telah berpenetrasi akan bekerja dengan atau
tanpa calmodulin pada selaput plasma. Ion Ca++ membantu penggabungan
antara kedua membran dengan perlekatan pada phospolipid dan memicu
pemisahan phospoliphid membran. Phospholidase-phospholidase aktif
menyerang phospolipid-phospolipid untuk menghasilkan produk-produk
gabungan (misalnya asam arachidonic dan phospholipid). Saat membran
akan bergabung atau telah bergabung, ion Ca++ masuk dan ion H+ keluar
dari matrik akrosom. Hal ini menyebabkan perubahan proacrosin menjadi
akrosin aktif secara enzim dan mendispersi akrosom yang mengandung
enzim-enzim lainnya.
Spermatozoa mammalia memulai reaksi akrosomnya secara
spontan dalam media kapasitasi spermatozoa, hal ini disebabkan oleh (a)
Aktivasi spon-
tan dari zona oleh reseptor-reseptor kumulus atau protein pembawa ion
Ca++ dalam membran plasma spermatozoa atau oleh (b) Penonaktifan
mekanisme pemompa ion Ca++ (Ca++-ATP ase). Pada spermatozoa yang
sekarat atau mati, ion-ion intraselluler akan mengalir keluar dan ion-ion
eksternal berpenetrasi dengan bebas ke dalam sel. Hal ini disebabkan oleh
lemah atau non aktifnya ATP ase. Acrosin dan enzim-enzim akrosomal
lainnya akan menyerang membran spermatozoa yang mengakibatkan
hilangnya sebagian atau seluruh pembungkus akrosom. Hal ini disebut
dengan reaksi akrosom “false”.

Gambar 4.8. Scanning Electron Microscop spermatozoa tanpa Akrosom
4.5. Hiperaktifasi Spermatozoa

Spermatozoa pada beberapa spesies mulai bergerak sangat aktif
sebelum berlangsungnya reaksi akrosom yang disebut hiperaktivasi. Istilah
ini untuk membedakan dengan kata aktivasi yang menunjukkan gerak aktif dari
epididimis saat bertemu dengan seminal plasma.
Spermatozoa mulai bergerak sangat aktif saat kontak dengan media
kapasitasi, beberapa jam bergerak sangat kaku kemudian bergerak bebas.
Mula-
mula spermatozoa berenang dalam bentuk linier mulai menunjukkan
gerakan tunggal yang ditandai dengan gerakan ekor seperti tali cambuk
dan dihentikan dengan gerakan lurus-lurus pendek. Kedua tipe ini secara
gabungan disebut hiperaktivasi. Motilitas spermatozoa terhiperaktivasi secara
in vitro sama dengan secara in vivo yaitu pergerakan dalam oviduct
saat fertilisasi.
Gambar 4.9. Pola Gerak hiperaktivasi pada spermatozoa
Spermatozoa secara in vivo memulai gerakan hiperaktivasi, terjadi di

beberapa tempat dan beberapa spesies terjadi di dalam istmus. Saat
hiperaktivasi ini spermatozoa mempunyai daya dorong yang tinggi, hal ini
selain untuk bergerak menuju ampulla juga untuk menembus zona
pellusida yang keras, dan ada korelasi positif antara motilitas spermatozoa
terhiperaktivasi dengan kemampuan spermatozoa menembus zona.
Komponen-komponen medium secara keseluruhan mempengaruhi inisiasi
dan mempertahankan motilitas spermatozoa yang hiperaktivasi, misalnya
Ca++, HCO3, K+, substrat energi dan albumin, semuanya untuk
mengontrol hiperaktivasi.
Tidak ada basis molekuler pada hiperaktivasi, sebab beberapa mak-
romolekul yang menutup membran plasma dipindahkan selama kapasitasi.
Membran plasma ekor spermatozoa pre hiperaktivasi mengalami
perubahan karakteristik isik dan kimia lipida membran ekor selama
kapasitasi. Salah satu
perubahan lipid membran adalah methylsi phospholipid. Methylsi phospho-
lipid membantu masuknya Ca++ ke dalam sel, peningkatan Ca++ yang
masuk kedalam membran spermatozoa merangsang adenylate cyclase yang
menghasilkan cAMP. Ca++ dan cAMP adalah yang mengatur pergerakan
ekor spermatozoa. Spermatozoa hiperhativasi pergerakan ekornya kaku,
sedangkan spermatozoa yang telah hiperaktivasi bergerak lentur atau
terbebas dari kebekuan. Hal ini disebabkan oleh menghalusnya serat
kasar bagian luar oleh Mg-ATP, hal ini dibuktikan dengan terhiperaktivasinya
kembali spermatozoa setelah diberi Mg- ATP ke serat-serat spermatozoa.
Gambar 4.10. Mekanisme molekuler kapasitasi dan hiperaktifasi

BAB
V
PEMBUAHAN (FERTILISASI)
Proses fertilisasi adalah suatu peristiwa secara seri mulai dari
penempelan spermatozoa pada oosit, penembusan zona pelusida,
perivitellin, sitoplasma hingga fusinya pronuclei yang berasal dari
spermatozoa dengan pronuclei yang berasal dari oosit.
Spermatozoa banyak mengalami perubahan isiologi di membran
sel mulai dari proses spermatogenesis hingga terjadinya fertilisasi. Fertilisasi
merupakan awal dimulainya proses perubahan dari sel tunggal menjadi
organisme multi selluler (Evans, 2001).
Perubahan atau perkembangan dari spermatozoa tersebut terjadi
beberapa mekanisme yaitu: 1) Proses biosintesis sel-sel spermatogenik
sebelum proses meiosis (2) Mekanisme kontak langsung antara sel sertoli
pada proses spermatogenesis (3) interaksi spermatozoa dengan seminal
plasma dan proses pematangan di epididimis serta saat interaksi dengan
cairan dalam saluran reproduksi betina dan kapasitasi (4) mekanisme
fertilisasi (Thaller and Cardullo, 1990)
Proses fertilisasi terdiri dari 4 tahap yaitu: (1) Kontak dan
pengenalan antara spermatozoa dengan sel telur (2) Proses masuknya
spermatozoa sel telur
(3) Fusi materi genetik spermatozoa dengan sel telur serta (4) aktivasi
metabolisme zigot untuk memulai perkembangannya (Hinsch et al,
1994)
65
66 Pembuahan
(Fertilisasi)
Gambar 5.1. Ilustrasi perjalanan spermatozoa sampai fertilisasi
5.1. PENETRASI SPERMATOZOA PADA SEL TELUR

Sel telur dilindungi oleh sel pelindung, sel pelindung terluar adalah
zona pelusida yang relatif tebal yang bersifat elastis dan tersusun oleh
glicoprotein.
Pada mammalia zona pelusida masih dikelilingi oleh kumulus oophorus
saat terjadinya fertilisasi in vitro. Kumulus tersusun dari komponen
selluler dan aselluler. Karbohidrat (termasuk asam hyaluronat) dan protein
merupakan komponen utama dari kumulus. Pada domba, sapi dan
binatang berkantung terdapat kumulus setelah ovulasi dalam waktu singkat,
sehingga zona merupakan satu-satunya pelindung sel telur dan spermatozoa
harus mampu menembusnya sebelum mencapai plasma telur.
5.2. PENETRASI SPERMATOZOA DALAM MENEMBUS KUMU-

LUS OOPHORUS
Di saat banyak spermatozoa berenang mengelilingi masing-masing
sel telur untuk menghamburkan kumulus, maka salah satu spermatozoa
melakukan penetrasi ke dalam sel telur. Sering kali spermatozoa tidak
dijumpai pada lumen kumulus akan tetapi sudah terjadi penetrasi, hal ini
menunjukkan bahwa proses penetrasi tersebut sangat eisien di dalam
ampulla.
Spermatozoa yang menembus ke dalam sel kumulus harus sudah
mengalami kapasitasi dan terdapat acrosomal caps, hal ini karena apabila
spermatozoa berada di dalam sel kumulus dalam keadaan belum kapasitasi,
maka spermatozoa tersebut tidak akan mampu melakukan penetrasi ke
dalam zona.
Bagaimana spermatozoa terkapasitasi menembus kumulus untuk men-
capai permukaan zona pellusida? Apakah reaksi akrosom dan enzim-
enzim akrosom terlibat dalam proses ini? Membran plasma spermatozoa
membawa enzim hyaluronidase untuk penetrasi kedalam kumulus, Hal
tersebut banyak diyakini orang, akan tetapi tidak ada bukti yang kuat.
Kemungkinan enzim- enzim akrosom keluar melalui akrosom luar dan
membran plasma, sedangkan enzim-enzim selain hyaluronidase adalah
yang dapat melisis kumulus belum diketahui.
Fungsi yang tepat dari hyaluronidase dalam fertilisasi masih
kontrover- si. Hyaluronidase sudah lama sekali dapat teridentiikasi dan
terkarakterisasi. Hyaluronidase sapi tidak mempunyai fungsi biologis
karena (a) Hyaluronidase tidak mampu menghamburkan sel-sel kumulus
yang menyelubungi oosit (b) Oosit mengalir secara spontan di dalam oviduct
tanpa pengaruh hyaluronidase, sehingga para peneliti menyimpulkan enzim
dari akrosom ini tidak berfungsi pada spesies ini. Hyaluronidase berfungsi
dalam depolimerisasi asam hyaluro-
nat dari sel kumulus sehinga dikatakan hyaluronidase juga berperanan
dalam penetrasi spermatozoa.
Aksi penghambatan fertilisasi oleh andibodi-antihyaluronidase lebih
banyak di zona dari pada sel kumulus. Myocrisin (Na-aurothiomalat suatu
inhibitor hyaluronidase) menghambat masuknya spermatozoa yang
terkapasitasi walaupun motilitasnya tinggi. Dengan daya ini spermatozoa
lengket pada sel kumulus, sehingga tidak dapat menerobos ke dalam sel
kumulus. Hialuronidase dapat bertindak sebagai lumbrikan bagi
spermatozoa yang masuk melalui sel kumulus. Jika hialuronidase
diperlukan untuk penetrasi kumulus, maka berarti terdapat ikatan diantara
keduanya yang mengembalikan kemampuan spermatozoa untuk
menembus kumulus.
Gambar 5.2. Ilustrasi proses penembusan sel-sel kumulus dan oosit

oleh Spermatozoa
5.3. PENETRASI SPERMATOZOA KE DALAM ZONA PELLUSIDA.

1. Karakteristik Kimia Zona Pellusida
Zona pelusida merupakan suatu glikoprotein. Sebagai contoh zona
babi meliputi protein 71%, Heksosa netral 19%, asam sialat 2,7% dan
sulfat 2,7%.
Zona babi terdapat empat golongan glycoprotein yaitu: ZP1 (BM=82.000);
ZP2 (BM=61.000); ZP3 (BM=55.000) dan ZP4 (BM=21.000). Zona
Tikus
mempunyai 3 macam zona yaitu ZP1 (BM=200.000), ZP2
(BM=120.000), ZP3 (BM=83.000), zona hamster juga ada tiga yaitu
ZP1 (BM=240.000), ZP2 (BM=150.000) dan ZP3 (BM=80.000). Pada tiap
spesies juga terdapat perbedaan berat molekul, perbedaan tersebut bisa
terjadi apabila menggunakan teknik yang berbeda. Integritas struktur
zona tampaknya dipertahankan oleh kekuatan non kovalen meskipun ada
beberapa ikatan disulida molekuler. Bagaimana golongan glykoprotein
yang berbeda di distribusikan dalam zona masih belum diketahui
sepenuhnya, tetapi sebagai contoh glikoprotein ZP2 dari zona tikus
didistribusikan pada zona yang paling tebal. Pada babi ZP1, ZP2 dan ZP3
semua terletak pada permukaan yang bila diamati dengan mikroskop
scanning luar pemukaannya terdapat tempat untuk penetrasi berupa kisi-
kisi yang tidak teratur.
Zona tidak mengalami perubahan selama proses maturasi sel telur
sampai terjadinya ovulasi, zona kehilangan glycosaminoglicans beberapa jam
sebelum ovulasi. Pada saat sel telur ditransportasikan dari ovarium ke
oviduk, maka oleh oviduk ditambahkan glikoprotein. Diketahui pada
banyak spesies penyusun zona berubah drastis pada saat fertilisasi,
sehingga spermatozoa yang lain tidak bisa menerobosnya. Hal ini disebut
dengan reaksi zona. Pada reaksi ini adalah hidrolisis glikoprotein ZP2
dan ZP3 oleh granula cortical. Akan tetapi pada mammalia reaksinya
tidak kuat. Pada beberapa spesies, misalnya tikus dan kelinci zona kembali
dapat dipenetrasi oleh beberapa spermatozoa pada beberapa jam setelah ada
spermatozoa yang masuk ke dalam sel telur. Meskipun susunan kimia zona
berubah karena hasil hidrolisa dari granula cortical.
2. Penyerangan Spermatozoa Pada Zona

Spermatozoa yang fertil akan menempel erat pada zona sebelum
penetrasi kedalamnya. Ikatan zona-spermatozoa yang kuat ini karena
adanya interaksi antara molekul spermatozoa dengan zona. Gwatkin dan
Williams berpendapat bahwa keberadaan zona terlarut dalam media fertilisasi
akan mencegah kapasitasinya spermatozoa. Zona terlarut tampaknya tidak
mempengaruhi pergerakan spermatozoa. Hal ini karena permukaan
spermatozoa terjadi penjenuhan reseptor molekul-molekul zona yang
mengakibatkan spermatozoa tidak mengenali
zona yang asli, sehingga dapat dikatakan bahwa membran spermatozoa mem-
bawa glikoprotein dengan ainitas yang kuat ke molekul zona.
Molekul-molekul zona yang bertanggung jawab terhadap ikatan
spermatozoa dan zona telah diteliti secara luas pada tikus oleh
Wassarman dan kelompoknya. Glikoprotein ZP3 dan ZP2, bukan ZP1 yang
mempunyai aktivitas reseptor spermatozoa. ZP3 adalah reseptor spermatozoa
yang utama, sedangkan ZP2 adalah reseptor sekunder. ZP3 adalah reseptor
sperma yang mempunyai aktivitas menginduksi reaksi akrosom pada
bagian rantai sakarida-O. ZP3 bertanggung jawab terhadap aktivitas
reseptor utama, sedangkan polipeptidanya terlibat dalam fungsi induksi-
reaksi akrosom glikoprotein.
Spermatozoa hasil ejakulasi atau dari epididimis mengikat sel telur
secara homolog atau heterolog. Tampaknya spermatozoa yang belum
masak dari epididimis mampu menempel erat pada zona. Apakah ini
berarti bahwa reseptor- reseptor zona pada spermatozoa disusun pada
permukaan spermatozoa dan siap mempengaruhi zona jauh sebelum
spermatozoa membuahi sel telur? Paling tidak ada beberapa materi penutup
permukaan spermatozoa yang dirubah selama pematangan. Pada kondisi
alami, hanya spermatozoa yang mengalami kapasitasi spermatozoa secara
penuh saja yang dapat bertemu dengan zona, sehingga untuk mengenali
reseptor zona harus pada spermatozoa yang terkapasitasi.
Keberadaan material pengikat pectin pada membran spermatozoa
terkapasitasi dan pada plasma membran akrosom bagian dalam dari
spermatozoa yang telah reaksi akrosom terdapat beberapa glikoprotein
integral yang didapatkan selama kapasitasi dan reaksi akrosom. Sampai
saat ini masih belum jelas secara keseluruhan apakah reseptor zona pada
spermatozoa berupa protein, glikoprotein atau komponen-komponen
glikoprotein. Sakarida-sakarida terminal glikoprotein misalnya N-asetil-D-
glukosamin, mannosa, fruktosa, galaktosa dan asam sialat mempunyai
aktiitas-aktiitas reseptor. Beberapa peneliti yang lain mengatakan
berpendapat bahwa protein-protein membran mempunyai aktiitas reseptor
zona. Ikatan protein-fruktosa pada membran spermatozoa babi merupakan
reseptor zona, tetapi ada lagi yang menyatakan bahwa protein dengan
glikoreansferase atau dengan aktiitas protein dapat bertindak sebagai
reseptor zona pada spermatozoa. Peptida-peptida yang dihasilkan dari autoka-
talisis akrosin bertindak sebagai reseptor zona pada spermatozoa.
Di mana letak reseptor-reseptor zona pada spermatozoa? Sebelum
menjawab pertanyaan ini ada baiknya bila kita membicarakan struktur
mana pada spermatozoa yang melakukan kontak dengan zona. Pada tikus
terdapat pada membran plasma diatas akrosom. Hanya spermatozoa yang
mempunyai akrosom sempurna yang dapat melekat pada permukaan zona.
Spermatozoa yang telah tereaksi yaitu yang telah hilang membran plasma
bagian luar penutup akrosom tidak akan mampu mengikat zona. Dengan
kata lain bahwa membran plasma di atas penutup akrosom adalah reseptor
zona, akan tetapi dengan men- cuci spermatozoa dengan sentrifugasi gradien
dextran, sehingga akrosomnya tereaksi, kemudian spermatozoa dipertemukan
dengan sel telur sehingga terdapat ikatan yang lemah antara spermatozoa
dengan zona. Pada Golden Hamster, pada spermatozoa yang belum dan
sudah tereaksi akrosom dapat menyerang zona, dengan kata lain reseptor
zona yang ada di spermatozoa tidak hanya pada plasma membran diatas
penutup akrosom, tetapi juga pada tempat yang lainnya dari kepala
spermatozoa atau membran akrosom bagian dalam.
Apakah tempat reseptor zona berbeda diantara spesies? reseptor zona
pada spermatozoa yang terkapasitasi terletak pada bagian atas akrosom,
sedangkan reseptor ZP terletak pada bagian dalam akrosom. Hal ini
menunjukkan bahwa pada permukaan spermatozoa terdapat tipe reseptor
yang berbeda yang menjadi aktif dan tidak aktif selama interaksi antara zona
dengan spermatozoa. Jika spermatozoa hanya memiliki satu type reseptor
zona pada membran plasma di atas penutup akrosom, maka spermatozoa
yang telah mengalami reaksi akrosom yaitu spermatozoa yang telah
kehilangan membran plasma penutup akrosom tidak akan dapat
melakukan penetrasi sel telur. Yang penting reseptor spermatozoa
terdapat pada permukaan spermatozoa yang akan tereaksi dan terjadi
ikatan yang lunak dengan sel telur, sebab bila ikatan itu kuat maka
spermatozoa tidak bisa menembus sel telur dan hanya menempel pada
zonanya saja
Membran plasma di seluruh kepala spermatozoa kelinci mempunyai
reseptor zona. Setelah reaksi akrosom, reseptor-reseptor zona ini terdapat
di sisi depan. Segmen equatorial dan bagian depan daerah pasca akrosom.
Selama fertilisasi spermatozoa kelinci harus menggunakan reseptor zona pada
membran plasma akrosom pertama, kemudian membran plasma setengah
bagian belakang spermatozoa untuk mengikat zona. Spermatozoa harus
menggunakan reseptor zona yang terletak pada membran plasma bagian
belakang kepala spermatozoa untuk mengikat zona.
3. Bagaimana reseptor-reseptor spermatozoa pada zona dan reseptor-
reseptor zona saling berinteraksi satu dengan lainnya?
Reseptor spermatozoa pada zona dan reseptor zona pada spermatozoa
menjadi pelengkap satu dengan lainnya. Aktivitas reseptor spermatozoa
menempati oligosakarida pada rantai O pada salah satu glikoprotein
zona yaitu ZP3. Oligo sakarida tersebut mengandung N-acetyl-D-
Glucosamine, asam sialat, fruktosa dan atau galaktosa yang menyusun
bagian-bagian aktif reseptor spermatozoa pada zona.
Reseptor-reseptor zona pada spermatozoa merupakan lectin protein
dengan sakarida sebagai aktivitas pengikat. Beberapa protein yang
diisolasi dari spermatozoa diketahui mempunyai kemampuan untuk
mengikat molekul- molekul zona, tetapi tidak jelas apakah reseptor zona
merupakan protein murni atau protein konjugasi. Banyak yang menyatakan
reaksi zona menempati bagian protein, tetapi Shur dan kelompoknya
menyatakan bahwa galactose transferase merupakan reseptor zona pada zona
dan terminal N-acetyl-D-Glucosamine merupakan reseptor spermatozoa
pelengkap zona. Ikatan spermatozoa–zona terjadi dalam bentuk enzim substrat
yaitu sialil transferase spermatozoa dan asam sialat zona berinteraksi pada
ikatan zona-spermatozoa.
Terdapat keterlibatan tripsin pada ikatan spermatozoa-zona dan
terdapat inhibitor dari proteinase. Molekul-molekul non enzim dapat
sebagai pengikat zona yang kemungkinan berada di membran plasma,
karena spermatozoa yang terkapasitasi setelah menempel pada zona akan
menyelesaikan reaksi akrosomnya. Macam dari molekul tersebut masih
dalam pertanyaan.
4. Penetrasi spermatozoa dalam Menembus Zona Pellusida

Spermatozoa yang mengalami reaksi akrosom dalam aksinya
menembus zona akan kehilangan semua komponen akrosomnya, kecuali
segmen equator dan membran akrosom bagian dalam yang menutup
bagian depan. Setengah kepala yang berhubungan langsung dengan
material zona dan menembus zona dengan menggerakkan ekornya secara
kuat. Gerakan ekor yang kuat tersebut penting untuk keberhasilan
penetrasi zona, yang diikuti dengan gerakan memotong sisi ke sisi dan
gerakan maju dan mundur dari kepala spermatozoa. Spermatozoa yang
membuahi selalu meninggalkan celah penetrasi yang tajam dan tipis secara
vertical dalam menembus zona.
Ada beberapa hipotesis tentang penembusan spermatozoa ke zona:
1. Hipotesa mekanik
Penembusan spermatozoa dalam sel telur benar-benar secara mekanik.
Satu-satunya tujuan reaksi akrosom adalah membuka lubang pada
akrosom. Kemudian membuat titik lubang yang tajam dan membuka zona
secara mekanik sejalan dengan cara menggerakkan ekor spermatozoa
secara kuat.
2. Hipotesa enzimatis
Berlawanan dengan hipotesis diatas, setiap tahap alasan
spermatozoa dalam menerobos pelindung telur tergantung enzim.
Hyaluronidase akrosom dilepas selama aliran spermatozoa menembus
kumulus. Beberapa enzim lain di permukaan spermatozoa membantu ikatan
antara zona dengan spermatozoa.
Akrosin tidak menghancurkan zona, tetapi menghidrolisa
glikoprotein zona yang spesiik untuk melunakkan zona. Ikatan enzim-enzim
ini memecah molekul zona sejalan dengan gerakan spermatozoa yang
kuat. Kemungkinan ikatan lisin itu meliputi akrosin, proteinase yang bukan
akrosin, hyaluronidase, Aryesulfatase, glycosulfatase dan N-asetylhexosaminidase.
Hipotesis mekanik berdasarkan pertimbangan sebagai berikut:
Secara teoritis, tenaga yang digunakan spermatozoa bisa sebesar 100PN. Hal
ini cukup besar untuk pembebasan tekanan dari hubungan non kovalen
glikoprotein zona yang bertindak sebagai cairan viscoelastis.
1. Celah penetrasi spermatozoa mempunyai batas yang jelas, seolah-
olah memotong zona.
2. Zona kelinci setelah dicerna tripsin dan akrosin masih dapat dipenetrasi.
3. Protein inhibitor menghalangi penempelan spermatozoa di permukaan
zona, tetapi sekali ikatan terjadi maka spermatozoa dapat menerobos
zona.
Jika spermatozoa mammalia menerobos pelindung tanpa bantuan enzim,
mengapa akrosom mempunyai enzim-enzim yang kuat, seperti
hyaluronisade dan akrosin yang mampu menghidrolisa matrik kumulus dan
zona. Jika akrosom dan enzim merupakan kekuatan evolusi, maka kita harus
menemukan beberapa spesies mammalia yang spermatozoanya secara
total tidak mempunyai akrosom atau enzim-enzim akrosom. Oleh sebab
itu akrosom dan enzimnya harus mempunyai fungsi yang sangat
penting.
Hipotesa enzimatis juga mempunyai titik kelemahan, jika penetrasi kumu-
lus tergantung sepenuhnya pada hyaluronidase, maka pada spermatozoa yang
tidak mempunyai enzim ini (Sea urching dan Rooster) pasti tidak
menembus kumulus. Spermatozoa binatang berkantung dan burung
melepaskan enzim akrosom (termasuk hyaluronidase dan akrosin) pada
permukaan zona untuk melunakkan zona sebelum spermatozoa
memasukinya.
Enzim-enzim pada akrosom berperanan penting pada tahap awal pema-
sukan spermatozoa kedalam zona. Spermatozoa manusia melakukan
penetrasi ke dalam lendir servik lebih eisien jika spermatozoa dalam seminal
plasma dari pada jika berada dalam larutan garam buatan. Enzim-enzim
seminal membantu spermatozoa ke dalam lendir servik. Enzim akrosom
yang dilepaskan oleh spermatozoa pada permukaan zona akan membantu
masuknya spermatozoa ke dalam zona. Jumlah enzim akrosom yang
diperlukan untuk pemasukan awal ini bervariasi pada spesies yang
berbeda.
Yang paling mungkin adalah spermatozoa menggunakan sarana
mekanik dan enzimatis untuk menembus zona. Spermatozoa tidak
pernah bisa menerobos zona yang keras jika dalam keadaan immotil atau
sedikit motil. Spermatozoa harus memiliki daya dorong yang kuat untuk
dapat menembus zona. Materi-materi akrosom termasuk enzim yang jalan
aliran spermatozoa. Beberapa materi akrosom yang dilepas bisa merubah
molekul-molekul zona atau melunakkan zona agar dapat dipenetrasi.
Arand dkk mengusulkan hipotesis ikat lepas interaksi spermatozoa.
Pertama-tama protein terikat zona-spermatozoa (ZBP) yang mempunyai ikatan
dengan ainitas tinggi diikuti dengan degradasi tinggi dan pelepasan ikatan ZP
oleh enzim-enzim spermatozoa. ZBP tersebut mengikat ZP yang baru
tanpa gerak maju spermatozoa. penetrasi tidak akan terjadi jika aktiitas
enzimatis spermatozoa atau kemampuannya untuk memindahkan ikatan
ligand dihalangi (missal penambahan inhibitor), maka ikatan ZP tidak akan
didegradasi. ZBP akan kembali jenuh dengan reseptor dan penetrasi tidak
terjadi. Hipotesis ini dapat menjelaskan kekhasan spesies dalam
penetrasi zona.
Gambar 5.3 Masuknya spermatozoa ke Zona dengan adanya Pergerakan
Gambar 5.4. Proses masuknya inti spermatozoa
5. Penggabungan Spermatozoa dengan Zona.

Selama menembus zona pelusida, kepala spermatozoa menerobos
ruang vitellin, menuju ke vitelus dan secara bertahap bergabung ke dalamnya.
Proses dinamis ini dapat diamati secara kontinyu pada kondisi in vitro
secara cermat.
Pada binatang berkantung, Burung dan hewan laut juga invertebrata
laut fusi sel telur dengan spermatozoa dimulai antara membran akrosom
bagian dalam dan membran plasma telur. Keadaan yang berbeda terjadi
pada mammalia, yaitu pada membran plasma spermatozoa tidak pada
membran akrosom bagian dalam yang bergabung pertama kali dengan
membran plasma telur. Ini
pertama kali ditemukan pada tikus. Pemasukan kepala spermatozoa ke
dalam sel telur diikuti oleh penggabungan secara bertahap ekor
spermatozoa secara keseluruhan.
5.4. TEMPAT-TEMPAT INISIASI FUSI SPERMATOZOA DAN

TELUR
Mula-mula disebutkan fusi dimulai pada membran plasma
spermatozoa bagian post akrosom. Akan tetapi bila diamati secara cermat
aksi penggabungan terletak pada segmen equator. Hal ini bisa terjadi setelah
spermatozoa mengalami reaksi akrosom. Bila spermatozoa telah kapasitasi
sempurna tetapi tidak reaksi maka tidak dapat bergabung dengan sel telur.
Perubahan isiologis yang penting yang harus terjadi pada membran plasma
segmen equatorial sebagai hasil dari reaksi akrosom, walaupun terjadi
pada membran masih belum jelas.
Permukaan telur mempunyai sejumlah mikrovili, kecuali daerah di
atas spindle setelah pembelahan meiosis ke dua. Daerah bebas mikrovilli kaya
akan aktin yang terpolarisasi. Fusi antara spermatozoa dengan sel telur
tidak akan atau jarang terjadi pada daerah yang gundul ini. Meskipun
spermatozoa menuju ke kelompok mikrovilli, tetapi banyak peneliti yang
beranggapan bahwa yang berperanan pada fusi adalah daerah intermicrovilli,
karena membran plasma microvilli bukan diperuntukkan untuk fusi antara
spermatozoa dengan sel telur.
Gambar 5.5. Diagram reaksi akrosom dan fusi antara sel telur dan
spermatozoa pada tikus. (Ac) Acrosome;(IAM) Inner
acrosomal membrane; (MV) Egg microvilli; (PA) post
acrosomal region; (PM) Sperm plasma membrane; (N)
Nucleus; (Z) Zona pellucida. (Gambar diambil dari Piko
L,1967 dan Piko L et al, 1964)
Gambar 5.6. Diagram tahapan fusi spermatozoa selama fertilisasi dan
penggabungan dengan vittelin. (Eg) Equatorial
segment of the acrosome (Gambar diambil dari Bedford
SB et al, 1978)
5.5. KEJADIAN-KEJADIAN SESUDAH FUSI

Sel telur setelah dipenetrasi oleh spermatozoa secara metabolis
bangkit untuk serangkaian peristiwa morfologi dan biokimia yang
mengarah ke deferensiasi dan formasi individu baru, pembangkitan
dianggap sebagai aktivitas. Indikasi yang mudah dikenal dalam aktivasi sel
telur pada mammalia adalah exocytosis granula-granula cortical dan
rangkaian meiosis. Nukleus sel telur yang setelah metafase II istirahat, maka
mulai meiosis lagi setelah fusi antara sel telur dan spermatozoa. Nukleus
haploid mentransformasi ke dalam pronukleus sel telur. Sementara
nukleus spermatozoa merata dan mentransformasi ke dalam pronucleus
spermatozoa. Sintesa DNA (duplikasi akrosom) terjadi setelah peng-
gabungan kedua pronukleus. Pembungkus intinya meluruh dan
akrosomnya bercampur.
Untuk pembelahan meiosis pertama, pencampuran kromosom dapat
dianggap sebagai akhir fertilisasi dan awal perkembangan embrio. Pada
beberapa invertebrata dan vertebrata non mammalia, interval antara fusi
spermatozoa dengan telur dan inisiasi pembelahan pertama adalah dalam
beberapa jam, sedang mammalia biasanya memerlukan 12 jam atau
lebih.
Gambar 5.7. Mekanisme masuknya spermatozoa kedalam sel telur
5.6. AKTIFITAS SEL TELUR

Fisiologi dan biokimia aktivasi telur telah diteliti secara luas pada
mammalia dan invertebrata terutama sea-urchin. Namun aktivasi tersebut
belum diketahui secara menyeluruh. Fusi spermatozoa dan sel telur
menyebabkan pelepasan ion Ca2+ dari intra selluler (Misalnya retikulum
indoplasma). Ca2+ intra selluler meningkatkan masuknya Na+/H+ yang
menyebabkan pH intra selluler meningkat temporer. Peningkatan pH
temporer ini tampaknya menutup protein penghambat dalam sitoplasma
sel telur yang menghasilkan aktivasi irreversible jalur oksidatif telur,
metabolisme lipid, reduksinucotinamide serta sintesis protein DNA.
Sangat sedikit diketahui tentang mekanisme aktivasi sel telur pada mam-
malia. Pada sel telur Hamster, pelepasan secara eksplosif Ca2+ terjadi 10 –
30 detik setelah penetrasi spermatozoa ke dalam membran plasma sel
telur. Yang menarik, ledakan atau keluarnya Ca2+ terjadi secara berulang
dengan interval sekitar 3 menit selama 100 menit. Signiicansi biologis
pelepasan Ca2+ berulang
tidak diketahui, tetapi dapat dihubungkan dengan beberapa aktivitas sistim
cytoskeleton, sebagai contoh depolimerisasi dan polimerisasi tubulin.
Komponen sel telur termasuk membran plasma telur berubah
karakter biologis dan biokimianya setelah terjadi aktivasi telur. Contohnya
permeabilitas membran plasma sel telur tikus terhadap gliserol meningkat
secara dramatis dalam waktu 3 jam setelah fertilisasi/aktivasi sel
telur.
Gambar 5.8. Diagram aktivasi sel telur dan perkembangan pronuclear
pada tikus. (a-d)Fusi antara spermatozoa – sel telur dan
cortical granule exocytosis. (d-h) meisis ke dua secara lengkap.
(I-k) perkembangan pronuclear.(I-m) penampakan kembali
kromosom spermatozoa dan sel telur. (n) prometafase pada
cleavage yang pertama (Gambar diambil dari Austin, 1984)
Sejumlah chanel voltage-gated Ca2+ dalam membran plasma telur meningkat
secara nyata selama satu jam pertama diikuti dengan aktivasi sel telur.
Fertilisasi atau aktivasi telur mempunyai sedikit pengaruh terhadap
permeabilitas membran plasma sel telur tikus. Juga mobilitas molekul-
molekul lipid dalam membran plasma membran sel telur tidak berubah secara
nyata selama aktivasi sel telur.
Sel telur mammalia dapat diaktivasi oleh variasi rangsangan isik dan
kimia. Semua rangsangan pengaktifan ini tampak menyebabkan
peningkatan konsentrasi Ca2+ intraselluler. Kebanyakan rangsangan ini tampak
menginisiasi beberapa respons pada level membran plasma sel telur. Tak
seorangpun tahu secara tepat bagaimana spermatozoa memulai aktivasi sel
telur. Spermatozoa membawa substansi pengaktifasi telur yang spesiik ke
dalam sel telur sudah lama diketahui, akan tetapi juga diketahui bahwa
pada serangga, ikan dan kadal diketahui sel-sel telur dapat teraktivasi tanpa
adanya spermatozoa, mereka telah memproduksi generasinya secara
parthenogenesis untuk mendapatkan ketu- runannya. Meskipun sel telur
mammalia secara potensial mampu menginisiasi perkembangan tanpa
spermatozoa, maka tidak berarti bahwa spermatozoa tidak mempunyai fungsi
dalam aktivasi sel telur, sebab pada kondisi yang normal, spermatozoa
yang mengaktivasi sel telur. Pada landak laut dan tikus penyuntikan Ca2+ ke
dalam sitoplasma sel telur akan mengaktivasi sel telur secara eisien, akan
tetapi kita masih belum bisa secara pasti mengatakan pengaktifasi sel telur
adalah ion Ca2+ masih membutuhkan pendukung yang lebih kuat.
Lamina tebal post acrosome domba sangat kaya kalsium, dapat dibayangkan
bahwa ion Ca2+ yang dilepaskan dari lamina setelah fusi spermatozoa
dengan sel telur memicu aktivasi sel telur. Inositol triphosphattase yang
diinjeksikan secara microsurgical ke dalam sel telur landak laut akan
mengaktivasi sel telur dengan sangat eisien.
Gambar 5.9. Secara seri gambaran micrograph menunjukkan keluarnya
intracellular Ca++ saat fusi antara spermatozoa dengan sel
telur pada hamster. Sel telur yang diinjeksi dengan aequorin,
kemudian diinjeksi dalam gelap. Luminescence emitted oleh
adanya interaksi aequorin dengan Ca++ yang diamati tiap 0,5 detik.
Menggunakan high-sensi- tivety video canera. Gambar tersebut
menunjukkan pengumpulan secara terus menerus Ca++ yang
ditunjukkan dengan spot putih. (Gambar diambil dari Miyazaki
S et al, 1986 dari buku Yanagimachi
1988)
5.7. EXOCYTOSIS GRANULA-GRANULA CORTICAL

DAN HAMBATAN POLYSPERMA
Granula-granula kecil yang berbentuk bola pada membran
pembatas organel ditemukan di bawah membran plasma sel telur
masak yang tidak dibuahi, hal ini banyak dijumpai pada kebanyakan
vertebrata dan kebanyakan invertebrata. Dengan menggunakan mikroskop
fasekontras ditemukan adanya granula-granula tersebut juga pada mammalia.
Banyak granula kecil pada bagian korteks telur hamster yang tidak dibuahi
dan akan hilang selama fertilisasi, dengan demikian dapat disimpulkan
bahwa granula-granula ini homolog dengan granula-granula cortical
landak laut yang berperan dalam modiikasi penutup sel telur selama
fertilisasi.
Pada landak laut dan ikan, eksositosis dimulai pada dekat titik fusi
spermatozoa dan akan segera menyebar dalam bentuk seperti gelombang
ketempat yang berlawanan pada sel telur. Gelombang eksositosis granula
cortical landak laut ini didahului oleh gelombang intraselluler Ca 2+ yang
dilepaskan. Eksositosis granula cortical adalah suatu proses yang tergantung
pada Ca2+. Pada hamster pelepasan Ca2+ intraselluler mulai dekat fusi
spermatozoa sel telur, tetapi gelombang seperti penyebaran exocytosis
granula cortical belum dapat dibuktikan.
Granula cortical sel telur mammalia mengandung enzim-enzim
hidrolitik dan komponen-komponen sakarida. Pada beberapa spesies
kandungan granula cortical yang dilepaskan dari korteks sel telur selama
fertilisasi atau aktivasi sel telur akan merubah karakteristik isik dan kimia
zona pellusida, sehingga zona dapat dipenetrasi oleh spermatozoa, ini yang
disebut dengan reaksi zona. Reaksi zona adalah hidrolisis (inaksivasi)
glikoprotein zona oleh proteinase atau glikosidase yang dilepaskan oleh
germinal cortical selama aksositosis. Sper- matozoa bertanggung jawab
pada penyerangan yang kuat terhadap zona, sehingga spermatozoa
mengalami hidrolisis dan zona tidak dapat menangkap spermatozoa
dengan kuat. Reaksi akrosom yang mempunyai kemampuan untuk
menginduksi zona juga dihilangkan, akibatnya spermatozoa tidak mampu
lagi menembus zona.
Germinal cortical juga untuk menghambat polyspermi. Membran
plasma telur juga memiliki kemampuan untuk membuang kelebihan
spermatozoa. Penghambatan polyspermi ini pada level membran plasma
disebut dengan Vittelline Block atau egg plasma membrane block. Sayangnya
sifat dan mekanisme vitteline block ini masih sedikit diketahui, meskipun
beberapa peneliti telah menyebutkan kemungkinan keterlibatan material
germinal cortical dalam pembentukan vitteline block masih belum ada
bukti yang kuat untuk mendukung pernyataan ini. Pada landak laut,
membran plasma sel telur menolak kelebihan spermatozoa dalam
beberapa detik setelah penyerangan spermatozoa yang pertama.
Panghambatan yang cepat terhadap polyspermi ini bersifat elektrik.
Peningkatan potensial membran yang tiba-tiba disebabkan oleh fusi antara
spermatozoa dengan sel telur, hal ini mencegah terjadinya fusi yang
berlebihan dari spermatozoa. Sampai saat ini belum ada bukti yang kuat
bahwa vitteline block pada mammalia dicapai oleh mekanisme elektrik
yang sama.
Gambar 5.10. Mekanisme molekuler saat terjadinya fertilisasi dan block
polyspermi
Eisiensi reaksi zona dan vitteline block dapat disimpulkan dengan

mempelajari sejumlah spermatozoa yang memasuki ruang perivittelin dan
sitoplasma sel telur yang diikuti perkawinan alami atau Inseminasi Buatan.
Dengan cara ini telur-telur hamster, anjing, domba diketahui mengalami
reaksi zona yang sangat kuat. Sedangkan telur-telur kelinci dan tikus
sebaliknya, yaitu tidak tampak mengalami reaksi zona atau hanya reaksi
lemah pada kondisi alami. Telur-telur tersebut hampir sepenuhnya
tergantung dari vittelin Block untuk menghindari polyspermy. Sel-sel telur
tikus besar, mencit, marmut, kucing secara in vitro sama dengan manusia
yaitu mengalami reaksi zona yang kuat, bahkan ketika diinseminasikan
dengan sejumlah spermatozoa, maka sebagian besar spermatozoa mengikat
permukaan zona lebih dari jumlah yang biasa pada bagian dalam zona.
Sangat mungkin zona bagian dalam merupakan tempat reaksi zona,
sehingga fertilisasi polispermi bisa terjadi. Salah satu sebab yang mungkin
polyspermi pada manusia adalah penundaan eksocytosis germinal cortical
dan mengakibatkan penundaan terjadinya reaksi zona. Kerusakan zona
bertanggung jawab
terhadap ketidak eisienan atau bagian penghambat terhadap polyspermi pada
level zona.
Gambar 5.11. Reaksi molekuler di dalam oosit saat spermatozoa

menempel pada zona pellusida
Sel telur tikus mensekresikan suatu faktor yang disebut dengan

ovum faktor yang secara langsung atau tidak langsung merangsang produksi
progesterone induk. Ovum faktor bukan merupakan ovum tunggal, dia
dalam bentuk molekul ganda. Ovum faktor pertama kali dilepaskan sel telur
pada saat fertilisasi (aktivasi parthenogenesis) dan terus diproduksi sedikitnya
pada tahap blastosit. Sehingga diduga ovum faktor adalah komponen germinal
cortical yang dikeluarkan. Ovum faktor juga terus dikeluarkan oleh embrio
selama perkembangan preimplantasi, sehingga diduga ovum faktor tidak
saja merupakan komponen germinal kortical tetapi yang lainnya.
Exositosis germinal kortical juga terjadi saat fertilisasi, akan tetapi
jumlahnya lebih banyak dikeluarkan selama telur berada di
ovarium.
Exocytosis germinal cortical premature mempunyai dua fungsi:
1. Dapat mendukung pembentukan perivitellin. Sangat mungkin bahwa prek-
sistensi ruang perivittelin membentau sperma telur pada mammalia.
Jika ruang perrivittelin tidak ada sebelum fertilisasi, ujung akrosom
spermatozoa tereaksi yang telah menembus zona menjadi lengket pada
permukaan kortek telur. Dengan dicegah dari kemajuan lebih lanjut,
spermatozoa tidak akan fusi membran plasma telur karena membran
akrosom bagian dalam yang menutup bagian depan akrosom
spermatozoa tereaksi bersifat nonfusigenik. Sebaliknya jika ruang
vittelin ada kepala spermatozoa yang telah menembus zona dapat
bergerak bebas. Membran plasma sperma fusigenik pada equatorial
akrosom bisa bergabung dengan membran plasma telur tanpa kesulitan.
2. Exositosis premature sedikit merubah karakteristik isik dan kimia zona
pellusida dan membran plasma telur dengan cara sedemikian rupa
sehingga hanya spermatozoa yang motil dan sangat kuat yang dapat
melakukan penetrasi telur. Ini beralasan untuk berpendapat bahwa
exositosis CG premature selama fertilisasi dan pemecahan pada
exositosis CG selama fertilisasi bekerja secara sinergis dalam melindungi
telur dari bahaya polispermi atau fertilisasi oleh spermatozoa yang
lemah.
Gambar 5.12. Sel telur yang telah difertilisasi pada kelinci (A) dan manusia
(B). Pada kelinci, beberapa sisa spermatozoa terdapat pada
bagian perivitteline (PVS) pada oosit yang ifertilisasi oleh
satu spermatozoa. Pada manusia juga terdapat sisa
spermatozoa pada bagian perivitelline pada sel telur yang
difertilisasi secara normal. Micrograph B menunjukkan hanya
dua spermatozoa (panah) yang dapat masuk kedalam zona
pellucida (ZP) tetapi gagal untuk masuk (dihasilkan oleh
Dr.J.Micheal Bedford (A) dan DR.Philip Matson (B).
(Gambar diambil dari buku Yanagimachi, 1988)
Gambar 5.13. Proses masuknya spermatozoa dalam oosit pada proses
fertilisasi.
Gambar 5. 14. Tahapan proses masuknya spermatozoa ke dalam oosit

5.8. DEKONDENSASI NUKLEUS SPERMATOZOA DALAM
SITO- PLASMA TELUR
Pada tahap akhir ketika berlangsungnya pemadatan nucleus
sperma, hampir semua histon somatic di dalam sperma dipindahkan oleh
sekelompok tertentu histon atau protemine-protemine yang kaya akan
arginine, serine cysteine. Diyakini bahwa, kekompleksan DNA
spermatozoa terhadap muatan asam amino merupakan dasar yang
memungkinkan kromatin beraktiitas.
Salah satu gambaran tunggal tentang nucleus spermatozoa
mammalia adalah rantai silang SS ekstensif protamine-protamine inti yang
terjadi selama spermatozoa di epididimis. Hasilnya, nucleus spermatozoa
yang sudah masak mempunyai kekuatan yang elastis. Hal ini
menguntungkan untuk aliran spermatozoa secara mekanik melalui zona
pellusida yang tebal dan agak ulet. Rantai silang yang berlebihan akan
menyulitkan nukleus untuk mengkondensasi kedalam sitoplasma telur. Pada
manusia Zn2+ yang berasal dari prostat dapat bertindak dalam pencegahan
pembentukan rantai silang SS yang berlebihan dari protein/protamin yang
terjadi selama kapasitasi spermatozoa.
Salah satu kejadian ketika nucleus bergabung kedalam sitoplasma telur
adalah disintegrasi yang cepat menutup inti. Kromatin spermatozoa secara
langsung membuka sitoplasma telur. Ini memungkinkan faktor-faktor
dalam sitoplasma telur untuk mencapai jalan masuk ke kromatin dan
dengan demikian merubah komposisinya. Sifat dari faktor-faktor inilah
yang bertanggung jawab terhadap disintegrasi telur secara cepat
pada telur setelah dibuahi.
Sekali penutup sel telur disintegrasi, kromatin spermatozoa mulai
kehilangan protamin-protamin dengan cepat, bahwa sebelum dekondensasi
kromatin terbukti. Meskipun protein-protein dasar yang baru disintesis akan
menggantikan protamin-protamin pada suatu periode tertentu (Misalnya
selama tahap akhir dekondensasi kromatin). Ketika kromatin spermatozoa
tanpa protamin dan histon-histon somatic. Jika ini benar ia mewakili kondisi
tunggal, sebab seperti pada pembelahan sel secara cepat, histon-histon
disimpan dengan cepat dalam DNA. Sintesa DNA mulai setelah
perpindahan protamin dan dekondensasi kromatin selesai.
Nukleus spermatozoa mammalia didekondensasi oleh duhiothreito
(DDT) dan sodium dodecyl sulfat, banyak senyawa tambahan ditunjukkan
untuk dekondensasi nucleus spermatozoa dengan cara yang kurang
lebih sama.
Dekondensasi didalam sel telur (secara in vitro) nucleus spermatozoa
dibantu oleh reduksi SS protein inti. Reasgen yang keras seperti DDT
dapat menjadi faktor dekondensasi inti alami dalam bentuk reduksi
glutathionine (GSH). Ke- nyataannya reduksi buatan GSH didalam sel telur
(dengan menghambat GSH sinhefase) menyebabkan sel telur tak mampu
mengkonsendasi sel spermatozoa. Bagaimanapun juga GSH tidak dapat
menjadi satu-satunya faktor yang bertanggung jawab pada dekondensasi
inti secara in vitro, karena sitoplasma telur hamster yang tidak masak (pada
tahap germinal vesikel) dan telur hamster yang masak sepenuhnya kaya
akan GSH, namun yang pertama tidak sama dengan yang berikutnya yaitu
tidak mampu mengkondensasi nucleus spermatozoa.
Karena nucleus-nukleus spermatozoa hamster yang diperlakukan
dengan DDT dapat mengkondensasi dalam sitoplasma telur yang tidak
masak pada tahap germinal vesicle dapat dibayangkan bahwa (a) Sesuatu di
dalam sitoplasma telur yang tidak masak menghalangi GSH dari aksi
protein ini. (b) Sesuatu selain GSH hilang dari sitoplasma. Nukleus-
nukleus katak, tikus dan hamster tidak dikondensasi sama sekali atau
mereka hanya dikondensasi sangat kecil tanpa keberadaan bahan germinal
vesicle (GV) dalam sitoplasma telur. Material GV (atau beberapa produk
interaksinya dengan komponen sitoplasma sel telur) harus
memindah/menutup beberapa faktor penghalang yang diperlukan untuk
suatu kondensasi nucleus spermatozoa yang eisien. Kemungkinan lain
faktor dekondensasi nucleus spermatozoa secara bertahap diakumulasikan ke
dalam sitoplasma pertumbuhan telur dan diaktifasi oleh material GV
setelah pemecahan GV. Penting untuk dicatat bahwa sitoplasma untuk
binatang lain (Misal : anjing, Ikan, Moluska) dapat mengkondensasi
nucleus spermatozoa sebelum pemecahan GV atau ketika pemecahan GV
dihambat pada kondisi eksperimen. Tampaknya pada telur-telur binatang ini
faktor dekondensasi sperma aktif atau menjadi aktif sebelum material
GV bercampur dengan sitoplasma telur. Ini adalah suatu pemikiran bahwa
suatu proteinase yang bergabung dalam nucleus spermatozoa terlibat dalam
dekondensasi inti spermatozoa, tetapi penelitian selanjutnya belum
mampu mendukung penelitian tersebut.. Namun demikian keterlibatan
secara langsung atau tidak langsung proteinase-proteinase dalam sitoplasma
sel telur masih merupakan suatu kemungkinan. Sel Telur Hamster yang
tidak dibuahi mempunyai amino peptidase dan aktiitas-aktiitas seperti
elastase. Apakah aktiitas-aktiitas enzim sedemikian berperan dalam
dekonden-
sasi nucleus plasma tinggal ditentukan. Gulationine reduktase dan protein
kinase terdapat pada sel telur yang dihomogenisasi. Beberapa peneliti
berpendapat
(a)Phosphorilase antara protein kinase, protamine inti spermatozoa membantu
melepaskan protamine-protamine dari DNA (b) GSH yang diproduksi
dan dipertahankan oleh gluthationine reduksi ikatan SS molekul-molekul
protamine yang dilepaskan.
Gambar 5.15. Pembelahan sel Setelah terjadinya pertemuan pronuclei

jantan dan betina.
BAB
VI
UJI KUALITAS SEMEN
Metode standard untuk evaluasi fertilitas pejantan adalah
kemampuan membuntingi yang dapat diprediksikan dengan memastikan
kualitas semennya. Ax et al (2008) menyatakan Tidak ada satu uji kualitas
pun yang dapat memprediksi fertilitas secara akurat. Pedoman berdasar pada
persatuan theriogenology minimal dari karakteristik kualitas semen pada
pejantan yang diper-
gunakan untuk breeding pada sapi dengan klasiikasi:
1. Jumlah spermatozoa lebih dari 500 juta/ml
2. Lebih dari 50% bergerak progressif
3. Lebih dari 80% mempunyai morfologi normal
Ternak dinyatakan steril kalau tidak ada spermatozoa yang motil.
Analisa diagnostik yang menunjukkan fungsi testis dan epididimis yang diperiksa
beberapa kali dan minimum disebut fertil apabila sampel semennya:
1. Motilitas tidak kurang dari 65%
2. Kurang dari 20% morfologi spermatozoa abnormal
3. Tidak kurang 100 juta spermatozoa per mililiter dengan 60-75 mililiter
per ejakulasi.
Ax et al (2008) Semen hasil ejakulasi pada babi terdapat beberapa fraksi
yaitu cairan pada fraksi I adalah tidak mengandung spermatozoa (pre
spermatic fraction), fraksi II adalah bagian yang kaya spermatozoa (sperm rich
fraction) dan fraksi III adalah sedikit spermatozoa (post fraction fraction).
Bagian post spermatic fraction mengandung plasma semen yang berasal
dari kelenjar asesori yang nantinya akan menstimulasi spermatozoa
untuk fertilisasi.
Total volume semen babi rata-rata 240-250 ml, 20% merupakan
larutan yang mengandung gelatin, 20-30% mengandung spermatozoa dan
terdapat perbedaan antara pre-sperm dan post-sperm. Total volume dan
konsentrasi dipengaruhi oleh umur, lingkungan, status kesehatan, prosedur
koleksi semen, musim, jumlah penampungan dan bangsa yang berbeda.
Kualitas dan kuantitas semen kuda dapat segera diamati setelah penam-
91
92 Uji Kualitas Semen
pungan semen, gel dapat segera dipisahkan dengan bagian yang tidak mengan-
dung gel dengan menggunakan siring jika tidak ada ilter di dalam vagina
buatan. Filtrasi ini juga perlu untuk menghilangkan debris-debris, rambut dan
debu. Volume dari semen yang mengandung gel dan tidak dapat dilihat
melalui warna dan konsistensinya. Volume semen tidaklah penting di dalam
fertilisasi akan tetapi total spermatozoa per ejakulasi yang menentukan
keberhasilan fertilisasi.
Semen domba berwarna putih susu atau krem muda. Warna
merah muda mengindikasikan terjadinya perdarahan pada penis saat
penampungan, sedangkan terdapatnya warna abu-abu atau kecoklatan
mengindikasikan terdapatnya infersi pada saluran reproduksi jantan dan
dengan melihat bau dapat mendukung diagnosa. Volume yang diejakulasikan
dipengaruhi umur pejantan, kondisi isik, musim, ketrampilan, kolektor dan
frekuensi penampungan. Jika penampungan dengan menggunakan vagina
buatan dibutuhkan fals mounting untuk meningkatkan volume dan jika sering
dilakukan penampungan yaitu lebih dari 3X seminggu maka volume akan
menurun. Volume semen domba dewasa berkisar antara 0,5–2 ml,
sedangkan yang masih muda berkisar antara 0,5-0,7 ml.
Semen kambing berwarna abu-abu hingga kekuningan dan diantara
pejantan warna bervariasi juga pada pejantan yang sama. Volume ejakulasi
rata-rata 1 ml dengan range antara 0,5 s/d 1,2 ml.
Uji kualitas semen dilakukan segera setelah penampungan atau
sebelum diencerkan yang meliputi pemeriksaan makroskopis: Volume,
Warna, Kon- sistensi, pH dan pemeriksaan secara mikroskopis meliputi:
Motilitas massa, Motilitas Individu, Persentase hidup-mati, Konsentrasi dan
Abnormalitas.
6.1. Uji Makroskopis (Volume, Warna dan pH)

Volume semen sapi bervariasi setiap penampungan antara 1-15
mililiter atau 5-8 mililiter (Lindsay et al, 1982 dan Garner and Hafez,
2008) Dengan melihat pada skala tabung yang digunakan untuk
menampung semen, maka dapat ditentukan volume semen yang
diejakulasikan.
Pada umumnya semen sapi berwarna putih kekuning-kuningan atau
hampir seputih susu, hal ini karena adanya ribolavin didalam semen. Warna
tersebut sering dikacaukan apabila tercampur urine, oleh sebab itu bau
M.S.
dapat membedakannya.
Derajat kekeruhannya tergantung pada konsentrasi sel spermatozoa. Se-
makin keruh biasanya jumlah spermatozoa per milliliter semen semakin
banyak. pH semen sapi berkisar antara 6,4-7,8. Pada hewan muda volume
lebih sedikit (Ax et al, 2008)
Teknik pemeriksaan makroskopis adalah:
a. Volume: volume semen yang sudah ditampung pada 1 kali
penampungan diukur dengan melihat langsung pada tabung
berskala.
b. pH : diukur dengan cara mengambil sedikit semen segar dengan
menggunakan ose dan diletakkan pada kertas lakmus atau pH meter
kemudian dilihat pH-nya pH semen diuji dengan menggunakan pH
BTB paper, pH normal semen = 6,2 – 6,8.
c. Warna: dilihat pada tabung penampung (abnormal = mengandung air,
darah, rambut preputium, nanah air kotor dan bau yang tidak
normal). Semen normal berwarna putih kekuningan atau putih
susu.
d. Konsistensi: konsistensi berkorelasi dengan konsentrasi spermatozoa. Peni-
laiannya bisa encer (< 1000.106 spermatozoa/ml semen), sedang
(1000.106- 1500.106 spermatozoa/ml semen), dan pekat (>1500.106
spermatozoa/ml semen).
6.2.Uji Mikroskopis
Uji mikroskopis adalah uji kualitas semen yang menggunakan
mikroskop, Uji mikroskopis ini terdiri dari: Uji motilitas massa, motilitas
individu, kon- sentasi dengan metode thoma, Viabilitas (Persentase
hidup), Uji Morfologi (Abnormalitas spermatozoa)
Parameter motilitas adalah sebagai berikut:
a) Persentase spermatozoa yang motil dalam keadaan normal adalah 70-
90 motil.
b) Persentase spermatozoa yang bergerak progresif
c) Kecepatan spermatozoa (velocity) dengan dasar skala 1-2 (Cepat)
d) Umur spermatozoa (longevity) semen segar dengan suhu ruang (20-250C),
sedangkan semen yang diencerkan dapat menggunakan suhu ruang atau
refrigrator 4-6oC.
1. Uji Motilitas Massa
Penilaian motilitas spermatozoa dilakukan setelah semen diencerkan
atau setelah freezing dan thawing. Motilitas massa diamati dengan
menggunakan
mikroskop tanpa cover glass dengan pebesaran 400× atau 100× pada suhu yang
dijaga konstan 37ºC.
Kriteria penilaian gerak massa spermatozoa antara lain:
1. Sangat baik (+++) terlihat adanya gelombang besar, banyak, gelap,
tebal, dan aktif seperti gumpalan awan hitam dekat waktu hujan yang
bergerak cepat berpindah-pindah tempat.
2. Baik (++) bila terdapat gelombang-gelombang kecil tipis, jarang,
kurang jelas dan bergerak lamban.
3. Kurang baik (+), jika tidak terlihat gelombang melainkan gerakan-
gerakan individual aktif progresif.
4. Buruk (0), bila hanya sedikit ada gerakan-gerakan individual.
Ax et al (2008) penentuan berdasarkan gerak gelombang adalah sebagai
berikut:
Tabel 6.1. Score berdasarkan gerak masa
Score Gelombang
0 Tidak ada yang bergerak
1 Bergerak individual
2 Pergerakan sangat pelan
3 Secara umum bergerak dengan amplitudo yang pelan
4 Gerak gelombang cepat dan tidak ada pusaran
5 Gerak gelombang cepat dan terdapat pusaran
Tabel 6.2. Faktor-faktor Endogenous yang mempengaruhi motilitas

Spermatozoa
Penyimpanan dalam epididimis
1 Umur Umur donor
Waktu antara setelah ejakulasi
Morfologi
2 Pematangan Sperma Fisiologi
Biokimia
Transport membran
Transport ion
3 Penyimpanan energi (ATP) Pergerakan lagela
Contractile protein
Faktor aglutimasi
Antibody
Bahan aktif di permukaan Detergents
4
Sper- matozoa Integritas membrane
Reseptor
Tabel 6.3. Faktor-faktor Eksogenous yang mempengaruhi motilitas
Spermatozoa
Hydrodynamics
Viscositas
Osmolaritas
1 Faktor bioisika dan isiologi Ph
Temperature
Komposisi ion
Cairan epididimus
Seminal plasma
Media cairan pendukung Lengkungan vagina
2 Lendir servix
Cairan uterus
Cairan oviduk
Bagian perivitelum
Ion in organic (Cu, Zn, Cd, Mn,
Hg)
Produk sekretory
Neuro-phormacolgicals
3 Stimulasi-penghambat Hormone
Cyclic nucleotides
Kinins
Prostaglandins
Polusi lingkungan
Faktor imuno kimia
2. Motilitas Individu
Penghitungan motilitas spermatozoa lebih bersifat subyektif
dibandingkan dengan viabilitas, oleh sebab itu untuk mengeliminir
subyektiitas pengamat, maka perlu dilakukan pelatihan atau diuju lebih dari
satu orang. Evaluasi semen dapat dilakukan pada semen segar atau semen
yang telah diencerkan (Ax et al, 2008). Evaluasi motilitas semen segar ini
juga penting untuk mengamati fungsi kelenjar asesoris didalam
menghasilkan seminal plasma. Pada semen segar dengan konsentrasi
yang tinggi sulit untuk diamati sehingga perlu diencerkan Gerak individu
spermatozoa dapat diamati dengan menggunakan mikroskop dengan
perbesaran 400x pada suhu yang dijaga konstan 37ºC dengan
menggunakan cover glass ,kemudian menentukan proporsi (persentase) spermato-
zoa yang bergerak progresif. Toelihere (1993) mengklasiikasikan gerak
individu spermatozoa mulai dari pergerakan progresif atau gerak maju yang
merupakan
gerak terbaik, gerak mundur dan gerak melingkar sering merupakan tanda-
tanda cold shock, gerakan berayun atau berputar–putar di tempat sering
terlihat pada semen yang tua, kemudian apabila spermatozoa banyak yang
berhenti bergerak dianggap mati. Gerakan maju yang kuat pada
spermatozoa merupakan indeks daya hidup yang penting dalam
populasi spermatozoa.
Gambar 6.1. Pola gerak spermatozoa (A dan B) spermatozoa dengan

gerak progresif (C dan D) Spermatozoa tidak bergerak progresif
Beberapa prosedur yang dikembangkan agar pengujian motilitas tidak bias
atau tidak subyektif adalah dengan Time-lapse photograph, frame by frame
playback video micrography,spectrophotometer dan computerized analisis.
3. Persentase Hidup Mati (Viabilitas)

Spermatozoa yang hidup dan mati dapat dibedakan reaksinya
terhadap warna tertentu, sel spermatozoa yang tidak motil dan dianggap
mati menghisap warna dan sel spermatozoa yang motil dan yang hidup
tidak berwarna. Bahan pewarna yang biasa digunakan adalah eosin
negrosin. Eosin dan negrosin adalah pewarna sel yang paling baik
dipergunakan, untuk prosedur ini sehingga pengamatan sel spermatozoa yang
berwarna dan tidak berwarna menjadi jelas dan spermatozoa yang
berwarna sebagian juga dianggap mati.
Teknik penghitungan persentase hidup spermatozoa dilakukan
dengan menggunakan pewarna yaitu eosin-negrosin. Adapun cara
kerjanya adalah sebagai berikut:
* Satu tetes semen segar diteteskan pada ujung obyek glass dengan
menggunakan ose. Larutan eosin-negrosin diteteskan satu tetes di dekat
semen segar, kemudian keduanya dicampur. Campuran tersebut
kemudian ditutup dengan obyek glass lain pada ujungnya yang
membentuk sudut 45ºC dan ditarik ke arah ujung yang lain.
* Hasil olesan diamati pada mikroskop dengan perbesaran 400X,
spermatozoa yang menyerap warna berarti spermatozoa tersebut mati
sedangkan yang tidak menyerap warna berarti hidup.
Gambar 6.2. Viabilitas spermatozoa (A) Hidup (tidak berwarna) dan (B) Mati
(Berwarna) (Susilawati, 2000)
Spermatozoa yang hidup membrannya masih baik, sehingga

pewarna tidak dapat masuk, sedangkan spermatozoa yang mati adalah
membrannya tidak berfungsi, sehingga pewarna dapat masuk ke dalam
membran spermatozoa.
4. Konsentrasi Spermatozoa
Konsentrasi semen sapi bervariasi dari 1000-1800 juta spermatozoa
tiap milliliter atau 800-2000 juta spermatozoa tiap milliliter (Garner and
Hafez 2008). Bearden dan Fuquay (1984) membedakan konsentrasi antara
sapi perah dan sapi potong, yaitu 1200 juta spermatozoa tiap milliliter untuk
sapi perah dan 1000 juta spermatozoa tiap milliliter pada sapi potong.
Penilaian konsentrasi spermatozoa tiap milliliter semen sangat penting,
karena faktor ini dipakai sebagai criteria penentu kualitas semen dan
menentukan tingkat pengenceran- nya. Konsentrasi semen dapat dihitung
dengan menggunakan haemositometer, colorimeter atau
spectrophotometer.
Teknik penghitungan spermatozoa adalah konsentrasi spermatozoa
dihitung menggunakan haemocytometer dengan cara kerja sebagai berikut:
Semen dihisap dengan pipet eritrocyt sampai angka 0,5 kemudian NaCl 3%
dihisap sampai angka 10,1. Pipet eritrocyt digoyang-goyang tetes yang
selanjutnya digoyang lagi selama 2-3 menit lagi. Setelah itu semen membentuk
angka delapan selama 2-3 menit. Kemudian semen dibuang 1-2 dibuang 1-
2 tetes lagi, yang kemudian baru dituang pada kamar hitung yang diatasnya
sudah ditutupi dengan cover glass sebanyak satu tetes. Spermatozoa
dihitung pada 5 kotak (kamar hitung) yaitu pada sudut kanan dan kiri
atas, sudut kanan dan kiri bawah, dan tengah.
Seperti gambar 6.2, perhitungan menggunakan hemocytometer
dalam menghitung spermatozoa yang ada didalam slide dengan jumlah skor
yang pasti di setiap kamarnya, jumlah spermatozoa dalam kotak dihitung
secara manual. Saat ini metode ini digantikan dengan spektrophotometer atau
colorimeter yang telah dikalibrasi dari perhitungan menggunakan
haemositometer. Spektropho- tometer ini dapat menggantikan penentuan
konsentrasi spermatozoa dengan mesin di kalibrasi pada 550 nm. Larutan
yang digunakan pada semen adalah sodium sitrat 2,9% dan 5 ml pada
10% formalin/liter. Kurva standar untuk menghitung konsentrasi
dibandingkan dengan pengencer 0,5% dengan cahaya transmeter yang
merupakan range untuk mengukur konsentrasi, akan tetapi fotometer tidak
akurat digunakan pada semen yang terkontaminasi sehingga hasilnya
tidak benar.
Range konsentrasi:
Sapi muda : 2x108 sperm/ml 8x109 sperm/ml
Babi : 6-10x108 sperm/ml
Kuda : 100-150x106 sperm/ml
Gambar 6.3 Penghitungan spermatozoa dengan haemositometer (Hafez,

2000)
100 Uji Kualitas Semen
Gambar 6.4 Posisi spermatozoa yang dihitung dengan menggunakan hae-

mositometer (Sumber The Royal Australian College of
General Praktitionares, 22 sept 2010)
Gambar 6.5 Penghitungan spermatozoa dengan chamber makler Hafez, 2000
Tabel 6.4 Nomenklatur dari hasil semen analisis
Parameter Kriteria evaluasi Nomenklatur
Tidak ada Aspermia
Volume Kurang Hipospermia
Kelebihan Hiperspermia
Tidak ada Azoospermia
Kurang Oligozoospermia
Konsentrasi spermatozoa Normal Normozoospermia
Kelebihan Polyzoospermia
Pergerakan spermatozoa Turun /kurang Asthenozoospermia
Spermatozoa hidup Semua mati Necrozoospermia
Spermatozoa abnormal Persentasenya tinggi Teratozoospermia
(Ax, et al, 2008)
Konsentrasi semen pada berbagai ternak adalah sebagai berikut:
a. Konsentrasi semen pada sapi dengan kisaran 2 X 10 8 spermatozoa/ml
pada pejantan muda sampai 1,8 X 109 spermatozoa/ml pada pejantan
dewasa.
b. Konsentrasi spermatozoa pada fraksi yang kaya spermatozoa 6-10 X
108 spermatozoa/ml dengan inal konsentrasi dipengaruhi oleh volume
fraksi pre spermatozoa dan post spermtozoa lebih sedikit.
c. Jumlah spermatozoa kuda antara 100 X 106 sampai 150 X 106
spermatozoa/ ml, dengan total volume antara 60-100, sehingga total
spermatozoa 7- 15 bilion per ejakulasi. Total spermatozoa ini
dipengaruhi oleh musim, umur, frekuensi ejakulasi, ukuran testes
dan penyakit reproduksi.
d. Normal konsentrasi semen domba berkisar antara 3,5 X 109 sampai
6,0 X 109 spermatozoa/ml. Domba pejantan dengan skore 0-2 tidak
dapat digunakan (Sesuai tabel 6.2)
Tabel 6.5. Konsentrasi semen domba hubungannya dengan konsis-
tensi.
Jumlah spermatozoa (X109)
Skor Konsistensi Rata-rata Kisaran
5 Kental cream 5,0 4,5 – 6,0
4 cream 4,0 3,5 – 4,5
3 Encer cream 3,0 2,5 – 3,5
2 Susu 2,0 1,0 – 2,5
1 Susu encer 0,7 0,3 – 1,0
0 Bening (air) Tidak terhitung
e. Colorimeter tidak dapat untuk menghitung konsentrasi semen kambing
karena warnanya bervariasi. Konsentrasi semen kambing lebih rendah dari
domba. Konsentrasi semen kambing antara 2,5 – 5,0 X 109
spermatozoa/ml (Ax et al, 2008).
5. Abnormalitas Spermatozoa
Abnormalitas spermatozoa dapat dibedakan menjadi dua yaitu
abnormalitas primer (seperti pada gambar 6.6) dan abnormalitas
sekunder.
Setiap sampel semen terdapat sel spermatozoa yang abnormal
seperti pada gambar 6.6. Morfologi abnormal pada spermatozoa berhubungan
dengan fertilitas ternak. Stres panas yang paling banyak pengaruhnya
terhadap kerusakan spermatozoa. Periode pada temperatur yang tinggi
dan kelembapan yang tinggi lebih dari 6 minggu akan menyebabkan
jantan steril. Besarnya jumlah spermatozoa yang abnormal juga terjadi
pada saat periode recovery.
Abnormalitas sperma pada sapi sekitar 20% fertilitas akan menurun.
Abnormalitas dibedakan menjadi primer, sekunder atau tersier.
Abnormalitas primer yang berhubungan dengan kepala dan akrosom.
Abnormalitas sekunder terjadi ketika adanya sitoplasmic droplet pada mid
piece pada ekor. Abnorma- litas tersier adalah kelainan pada ekor pada babi,
persentase spermatozoa yang intak akromosomnya adalah penting untuk uji
kualitas spermatozoa. Beberapa prosedur pewarnaan digunakan untuk
pengaman morfologi. Integritas membran spermatozoa dapat dievaluasi
menggunakan mikroskop fase kontras dengan memiksasi sperma
menggunakan Glurakal dehide. Apical ridge akrosom dapat dengan mudah
diamati dan diklasiikasi yang tidak intak. Metode lain untuk melihat
integritas membran juga dapat diamati menggunakan Fluorochrome
H33258 juga mengamati morfologi dan viability. Pewarnaan menggunakan
Giemsa digunakan untuk mengamati morfologi. Morfologi spermatozoa
dapat diamati dengan mikroskop cahaya 1000x dengan menggunakan smear
sperma yang dikeringkan cahaya. Pewarnaan yang spesiik dikembangkan
secara umum menggunakan pewarna sel misalnya Giemsa, Hematoxyllin-
eosin juga dapat digunakan pada sel germal dan sel somatis dalam smear
semen dengan menggunakan pewarna background misalnya eosin-negrosin
dan tinta india. Metode ini sering digunakan karena penggunaannya
mudah.
Visualisasi secara mendetail dapat ditingkatkan dengan memiksasi sel
menggunakan Formol-salinatal larutan buffer Glutarol dehide. Pada sel yang
tidak diwarnai menggunakan mikroskop fase kontras atau mikroskop
differ- eus infokus kontras. Metode dengan ixasi untuk mencegah
perubahan atau kerusakan akibat pewarnaan.
Gambar 6.6. Gambar Abnormalitas Spermatozoa (Ax et al, 2008)

Dua ratus spermatozoa dievaluasi ada tidaknya abnormalitas
morfologi yang spesiik adalah kerusakan akrosom, protoplasmic droplet
bagian proximal, pengelembungan bagian midpiece dan melingkar pada
bagian ekor. Pesentase morfologi normal dalam sampel semen mirip atau
sesuai dengan perentase motilitas. Bila motilitasnya rendah tetapi
morfologinya normal menunjukkan terjadinya kesalahan pemeriksaan
laboratorium pada rendahnya motilitas.
Pada domba, terdapat korelasi positif antara morfologi normal
dengan motilitas spermatozoa pada setiap semen yang diejakulasikan
terdapat spermatozoa abnormal, ketika sudah 20% atau lebih maka
fertilitas pejantannya
dipertanyakan, semen yang mempunyai abnormalitas 15% tidak dapat digunakan
untuk IB (Ax et al, 2008). Morfologi spermatozoa dapat diuji dengan
pewarnaan eosin negrosin atau pewarnaan Wright’a dan Williams’stains
dengan menggunakan mikroskop dengan pembesaran 400X. Paling kurang
150 spermatozoa yang diamati dan kategori spermatozoa yang abnormal
ada 5 kategori yaitu:
a. Tidak ada ekor.
b. Abnormal kepala
c. Bentuk ekor abnormal
d. Bentuk ekor abnormal dengan adanya sitoplasmic droplet pada bagian
proximal.
e. Bentuk abnormal ekor dengan distal droplet.
Abnormalitas spermatozoa primer adalah terjadi saat proses
spermatoge- nesia, sedangkan abnormalitas sekunder adalah setelah proses
spermatogenesis hingga ejakulasi juga saat proses prosesing
spermatozoa.
Gambar 6.7. Spermatozoa mengalami kelainan (Ax et al, 2008)
6. Kualitas semen pada ternak
Pada sapi, uji kualiats semen beku adalah gabungan antara
motilitas spermatozoa dan akrosom intak. Dua straw yang 0,5 ml atau
0,25 ml di thawing dalam 95oC dalam water bath setelah 45 detik, satu
straw diangkat dan dikeringkan dengan handuk disisi yang tidak ada
penutup kapasnya dipotong. Setetes semen ditaruh di slide yang tutup
dengan cover glass, selanjutnya diamati menggunakan mikroskop dengan
pembesaran 100-400 X. Mikroskop dengan optik inferens Contras (nomarski)
1000X dengan menggunakan minyak emersi dapat digunakan untuk
menentukan abnormalitas sermatozoa dan intak akrosom. Setelah itu
straw yang kedua diinkubasi 3 jam pada suhu 95oC untuk melihat penutup
akrosom yang terletak di bagian 2/3 anterior kepala. Pada akrosom terdapat
korelasi antara persentase akrosom intak setelah 3 jam inkubasi dengan
fertilitas.
Tes yang paling akurat untuk mengukur fertiliats babi jantan yang
menentukan adalah kebuntingan dan lahir hidup. Walaupun banyak
kriteria yang dapat menentukan status tingginya kualitas spermatozoa
yang sub optimal, tidak ada satu parameter in vitro yang dapat
digunakan untuk prediksi babi jantan (Ax et al, 2008).
Semen domba dengan kualitas tinggi yaitu sebagian besar motilitas
85% , abnormalitas < 10%. Total spermatozoa yang motil per inseminasi
lebih penting dibandingkan persentase abnormalitas, karena hanya satu
spermatozoa yang melakukan penetrasi zona pelusida ovum dan telah
dipercaya bahwa bukan satu faktor yang mempengaruhi fertilitas
semen.
7. Teknik Pemeriksaan kerusakan membran spermatozoa
Membran merupakan bagian terluar dari spermatozoa yang
berfungsi untuk melindungi spermatozoa, sehingga apabila membrannya
fungsi dan atau strukturnya rusak maka spermatozoa akan mati, dan hanya
spermatozoa yang membrannya utuh sajalah yang mampu melakukan
fertilisasi. Oleh sebab itu didalam proses penyimpanan spermatozoa
harus dijaga membrannya.
Kerusakan membran pada umumnya dengan menggunakan mikroskop
elektron karena harus dilakukan pada pembesaran 10.000 kali, akan tetapi
juga dapat dilakukan pengamatan kerusakan membran dengan pembesaran
1000 kali yaitu bagian lensa objektif 100 kali sedangkan okuler 10 Kali.
Pada gambar 51 ditunjukkan dengan pewarnaan chlortetrasiclin dan
diamati dengan mikroskop
epiluorescen dapat diamati membran yang utuh dan yang rusak .
Gambar 6.8. Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya

menggunakan pewarnaan CTC dan diamati dengan
mikroskop epi luorescent (A) Normal, (B) kerusakan membran
(Susilawati, 2000)
Kerusakan membran juga dapat dilakukan dengan pewarnaan eosin
negroin dengan pengamatan 1000 kali dengan mikroskop cahaya seperti
gambar B.
Gambar 6.9. Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya

(Susila- wati, 2000) Normal (B) membran menggelembung
pewarnaan eosin negrosin (C) Membran yang rusak sedang
(D) membran
yang utuh menggunakan pewarnaan CTC dan diamati dengan
mikroskop epi luorescent.
Gambar 6.10 Spermatozoa yang melalami kerusakan akrosom Pewarnaan eosin

negrosin dengan pembesaran 1000X
Dead Sperm
Stained with PI
Live
Stained with SYBR
Active Mitochondrial Activity

Stained with JC-1
Gambar 6.11. hasil evaluasi integritas sperma dengan menggunakan
mikroskop luoressen.(Gambar dibuat Dr. Duane L. Garner,
University of Nevada)
8. Pengamatan membran spermatozoa dengan mikroskop elektron
Mikroskop cahaya mempunyai batas maksimal yaitu 1000 kali
sehingga
bila digunakan untuk mengamati spermatozoa secara detil sangat
terbatas. Struktur abnormalitas spermatozoa dapat di deteksi dengan
scanning dan atau transmisi electron microscopy (SEM/TEM), akan tetapi
sangat mahal . Dengan menggunakan kedua alat ini didapaikan detail resolusi
yang tinggi untuk menentukan morfologi spermatozoa, visualisasi 3
dimensi dapat menggunakan SEM ,
sedangkan jika menggunakan TEM potongan spermatozoa dapat diamati
ultra struktur secara detail.
Kerusakan membran spermatozoa lebih jelas dapat menggunakan
mikroskop elektron yaitu dengan menggunakan Scanning Elektron Microskop
(SEM), selain itu juga dengan Transmisi Elektron Microskop (TEM)
B C
Gambar 6.12. Kerusakanmembran spermatozoa diamati dengan Scanning
elektron Microskop (A) Normal, (B,C) kerusakan membran
(Susilawati, 2000)
Gambar 6.13. Kerusakan mambran spermatozoa diamati Pengamatan

Meng- gunakan Transmisi electron mikroskop (Susilawati,
2000)
PREPARASI SPERMATOZOA UNTUK PENGAMATAN MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISI
Spermatozoa yang akan diamati dicuci dengan PBS, kemudian

di sentrifugasi 1000G dan supernatan dibuang
Tambahkan Glutaraldehyde 
Fixasi dengan OsO4 ( Osmium
cuci dengan PB
Tetraoksid
Agar 1-2% dipanaskan pada

Cuci dengan PB 3X selama
Suhu 40-50oC  sel ditanam
5 menit
Dihidrasi 2-3 X : pada alkohol 50%,

Dipotong dan di proses 60%,70%,80%,85%,90%,95% dan
99,9%
Epon campur :PO =3:3 Propilene okside absolut 2-3X

Epon campur:PO = 3:1
Epon campur
Epon campur:PO = 1:3
Embedding ditanam (alat cetak)

Setelah padat dilakukan pemotongan
Menggunakan ultra mikrotome
Dengan ukuran 1µm, kemudian diamati
Dipanaskan bertahap 45oC,50oC
menggunakan mikroskop
60oC sehingga terbentuk polimer
Inverted sampai terdapat sampel yang
akan diamati
Biru = 240 – 190 nm Supaya Tidak timbul gelembung

Ungu = 190-150 nm Di facum/ diaduk
Kuning = 150 -90
nm
Silver = 90- 60 nm Dilakukan pemotongan dengan
Pewarna single: Uranyl asetat Ukuran 90-60 nm untuk
Pewarna dobel:Uranyl kepastiannya Diberi warna toluide
asetat+BB sitrat Blue
Ditempel di grade Air dihisap dengan

Kertas saring/tissue
Grade dikeringkan  diamati
Menggunakan mikroskop elektron
Gambar 6.14. Flow cart preparasi spermatozoa untuk pengamatan

mikroskop elektron transmisi (Susilawati, 2000)
PREPARASI SPERMATOZOA UNTUK PENGAMATAN
MIKROSKOP ELEKTRON SCANNING
Spermatozoa yang siap diamati
Glutaral dehide 2-4% pada 4oC 5 menit (3

kali) kemudian dicuci dengan Posphat
buffer
Osmium 1-2 % 1 jam

Fix II & meningkatkan kontras
Dehidrasi dengan alkohol 50%,

60%, 65%, 70%, 75%,
80%,85%
,90%,95%,99,5% Absolut,
absolut, absolut
(15 –10%)
Amilasetat 2X (15-20 menit)
Teteskan pada gelas objek

selanjutnya dilakukan CPD
Cek dengan mikroskop inverted

untuk melihat permukaan
Tempelkan di Holder : Stub

Coating dengan emas
Diamati dengan mikroskop

elektron scanning
Gambar 6.14. Flow cart preparasi spermatozoa untuk pengamatan

mikroskop elektron scanning (Susilawati, 2000)
6.3 Pengamatan kapasitasi spermatozoa dengan pewarnaan
Chlorte- tracycline (CTC)
1. Persiapan Reagen
Langkah 1 : Pembuatan Larutan DABCO
1. 250 mg DABCO (D-2522) dilarutkan dalam 9 ml gliserol
(ditempatkan dalam tabung yang dibungkus aluminium foil agar
terlindung dari sinar).
2. Diletakkan pada waterbath dengan temperatur 37oC selama 3-4
jam dan dikocok dari waktu ke waktu.
3. Tambah 1 mililiter PBS dulbecco’s ke dalam larutan dan
dicampur hingga merata.
4. Larutan dibagi dalam 3 tabung tertutup yang dibungkus dengan
aluminium foil dan disimpan di Freezer.
Langkah 2 : Pembuatan CTC Buffer 20mM NaCL
1. 0.2422 gram tris (Trizma base, Sigma T-1503) dan 0.7592 gram
NaCL dilarutkan kedalam 100 mililiter Diionized water.
2. Kemudian dicampur, disaring dan disimpan dalam refrigerator.
Langkah 3 : Fixative Buffer : 1 M Tris (Trizma base Produksi
Sigma T-1503)
1. 6.057 gram Tris dilarutkan dalam 50 mililiter Diionized Water.
2. Kemudian dicampur, disaring dan disimpan dalam refrigerator.
Langkah 4. Paraformaldehyde 25% (Sigma P-6148).
1. 12.5 gram paraformal dehyde dilarutkan dalam 50 mililiter Diionize Water
yang dikerjakan di ruang asam (lemari uap).
2. Larutan dipanaskan sambil distirer sampai berwarna putih susu (5
sampai 10 menit) dan di tambahkan 1 M NaOH sampai larutan
menjadi terang .
Langkah 5. CTC Fixative : 12.5% Paraformaldehyde dalam 0.5 Tris.
1. Larutan paraformaldehyde (langkah 4) dicampur dengan larutan buffer
1 M Tris (langkah 3 ) 1: 1.
2. PH diatur sampai 7.4 dengan 0.2 M HCL secara hati-hati,
selanjutnya disimpan dalan refrigerator..
Langkah 6. Larutan Pewarna CTC
1. 0.0044 gram CTC powder (Sigma C-7880) dimasukkan dilam tabung
yang dibungkus dengan aluminium foil ditambahkan 0.0044
gram L-Systein (Hydrochloride Monohydrate) dan ditambahkan 5
mililiter CTC Buffer (Langkah2).
2. PH diatur sampai 7.8 dengan 0.2 M HCL secara hati-
hati. Catatan: Ada 3 reagen akhir yaitu:
1. Larutan DABCO
2. Larutan CTC Fixative
3. Larutan Pewarna CTC
Metode yang digunakan adalah modiikasi metode yang diuraikan
oleh Fraser (1995) dengan cara sebagai berikut : 45 µl larutan pewarna CTC
dimasukkan dalam tabung ependorf kapasitas 1,5 ml yang ditutup dengan
aluminium foil, lalu ditambah 8 µl CTC iksatif dan di vortex selama 1 menit,
larutan tersebut diambil 10 µl dan ditempatkan pada objek glass ,
kemudian ditambahkan 10 µl DABCO dan dicampur secara hati-hati
kemudian ditutup dengan cover glass, selanjutnya ditutup dengan kertas tissue
yang tebal dan ditekan secara hati-hati, selanjutnya tepi cover glass ditutup
dengan cutex. Gambaran yang tampak adalah :
1) Kepala spermatozoa keseluruhan berwarna terang adalah spermatozoa
yang belum kapasitasi 2) Kepala spermatozoa separo bagian atas
berwarna terang adalah spermatozoa yang mengalami kapasitasi 3)
Kepala spermatozoa tidak berwarna terang dan hanya bagian tengah saja
yang terang adalah spermatozoa yang mengalami reaksi akrosom .
6.4 Evaluasi status akrosom dengan FITC- Con A dan methileen

Blue
Spermatozoa diiksasi dengan 4% formal dehyde, kemudian dicuci
dengan penambahan PBS 3 ml dan disentrifugasi 4000 G selama 30
menit , kemudian dibuang supernatannya dan dimasukkan 0,1 ml FITC
con A (Sigma) yang mengandung 10 µg/ml dalam PBS dulbeccos.
Staining dilakukan selama 25 menit pada suhu ruangan, selanjutnya
dicuci 2 kali dengan sentrifugasi 4000G selama 10 menit, supernatan
dibuang dan endapan ditaruh pada slide, ditetesi 90% gliserol selanjutnya
diamati dengan pembesaran 400 kali dengan mikroskop Fluorescent (
Nikon, Japan). Tiap spesimen diamati dengan epiluorescen ellumination
dengan excitation B (Excitation 490 nm dan Emisi 525 nm) untuk
mengamati terdapatnya luorescent pada spermatozoa hasil FITC dengan
menggunakan modiikasi dari metode Nishikima (1997).
Metode dengan menggunakan methileen blue juga dapat digunakan untuk
melihat status akrosom yaitu menempatan semen yang akan dinilai dan
ditempatkan ke water bath bersuhu 37oC selama 10 menit, kemudian
diatas objek glass ditambahkan methileen blue atau eosin 2,9% kemudian
diamati dengan mikroskop cahaya dengan pembesaran 400 -1000 kali
(Bamba, 1988).
Gambar 6.14. Hasil pengamatan status ekrosom dengan methil een Blue
(Pewarnaan akrosom jurnal, ile 18 oktober 2010)
6.5 Hypoosmotic swelling Test (HOS TES).

Integritas membrane sel dapat diuji menggunakan Hypoosmotic swelling
(HOS)-test dan akrosom utuh. Uji HOS dilakukan menggunakan
modiikasi mengikuti metode Jeyendran et al (1984), serta Correa dan Zavos
(1994). Secara prinsip Hos tes untuk melihat status membrane, karena
integritas membrane berpengaruh terhadap viabilitas spermatozoa (Lenchniak
et al,2002). Sperma- tozoa dengan membrane utuh, jika ditempatkan pada
media hipoosmotik akan berusaha meningkatkan volume air didalam
tubuhnya agar cairan di dalam dan di luar spermatozoa tetap seimbang.
Upaya ini menyebabkan terjadinya penyempitan pada membrane yang
menutupi ekor, sehingga memaksa ekor
spermatozoa melingkar didalam membrane spermatozoa (Cabrita et al, 1999).
Proses menggelembung diawali pada bagian ujung ekor, dilanjutkan
bagian tengah dan kepala sehingga menyebabkan kepala menggelembung
(Jeyendran et al, 1984). Sehingga jika ekornya menggelembung atau
melingkar merarti membrannya utuh atau spermatozoa motil, bisanya
untuk pengalamatan diberi pewarna eosin untuk menilai integritas
membrannya (Roca et al, 2000 ; Neild et al, 1999).
Urutan kerja HOST test sebagai berikut : 1 ml larutan hipoosmotik
150 m osmol (yang dibuat dari 7,35 gram natrium sitrat. 2H2O, 13.52
gram fruk-
tosa dilarutkan dalam 1000 ml aquades) ditambah dengan 0.1 ml spermatozoa
kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 30 menit, selanjutnya diamati
dengan pembesaran 400 X perubahan yang khas yaitu adanya pembengkakan
atau ekornya melingkar pada bagian ujungnya.
Gambar 6.15. Spermatozoa Normal dan abnormal pada Integritas

membrannya (Susilawati, 2000) Pengamatan dengan teknik Hipo
osmotik sweling tes (Host-tes) Normal (Bagian ekor
melingkar dan membran menggelembung) (B) membran
tidak normal ( Ekor lurus)
Gambar 6.16. Hasil Uji Integritas membran babi (Rahmawati dkk, 2010)
Penga- matan dengan teknik Hipo osmotik sweling tes (Host-
tes) (A,B,C) spermatozoa normal (Bagian ekor melingkar dan
membran menggelembung) (D,E) membran tidak normal
(Ekor lurus dan tampak membran pada kepalanya
menggelembung)
6.6. Uji Biokimia

Uji biokimia adalah digunakan untuk mengamati penyebab-penyebab
kematian spermatozoa atau berfungsinya organ reproduksi, misalnya:
1. Kandungan Fruktosa sebagai indikator berfungsinya kelenjar vesiculasemi-
nalis, karena Fruktosa di produksi oleh kelenjar vesicula seminalis.
2. Kandungan Mineral sebagai indikator berfungsinya kelenjar prostata.
3. Kandungan Glyseril Phosporil Cholin sebagai indikator berfungsinya epidi-
dimis.
Selain itu biokemis juga dapat digunakan sebagai indikator kondisi
seminal plasma atau pengencer, sehingga berpengaruh terhadap proses
metabolisme spermatozoa, yaitu pH atau keasaman. hal ini karena
spermatozoa dapat melakukan metabolisme yang normal apabila pada pH
normal, apabila terlalu asam atau terlalu basa akan menyebabkan toxic
dan metabolisme tidak bisa berjalan dengan baik.
6.7. Uji Biologis

Uji biologis adalah uji untuk melihat kandungan mikroba di dalam
semen. Uji biologis ini tidak dilakukan secara rutin, akan tetapi dilakukan
secara berkala atau apabila saat pengalatan mikroskopis dijumpai
banyak mikroba.
Uji biologis dilakukan dengan cara kultur mikroba dan apabila
melebihi dari jumlah yang ditentukan maka pejantannya harus dilakukan
pengobatan dan sterilisasi peralatan perlu ditingkatkan.
6.8. CASA
Ax et al (2008) menyatakan Beberapa prosedur telah dikembangkan
untuk pengujian yang obyektif antara lain: time-lapse photomicrography, frame-
by-frame playback videomicrography, spectrophotomicrography dan computerize
analysis. Computer Assisted Semen Analysis (CASA) sistem digunakan pada
laboratorium rujukan. Dengan CASA, produksi semen beku oleh
produsen dapat berjalan lebih profesional dan eisien .Beberapa parameter
CASA diantaranya adalah VAP (average path velocity, µm/detik) adalah waktu
rata-rata kecepatan dari spermatozoa sepanjang alur jalannya; VCL (straight
line velocity, µm/detik) adalah waktu kecepatan rata-rata spermatozoa
pada garis lurus diantara awal gerak sampai akhir gerak saat deteksi; VCL
(curve linear velocity, µm/detik) adalah kecepatan rata-rata dari setiap titik
gerak sepanjang alur; ALH (amplitude of lateral head movement, µm)
adalah jarak dari lateral letak gerakan kepala sperma pada setiap rata-rata
alur; LIN (Linearity, %) adalah linearity dari alur curve linear (hasil dari
VSL/VCL); STR (Straightness,%) adalah linearity dari rata-rata alur (hasil
dari VSL/VAP); BCF (beat cross frequency, hertz) adalah rata-rata alur
curve linear spermatozoa melewati rata-rata alurnya (Gambar 6.17).
VAP Actual Paths
VCL
AHL
VSL
LIN : Linearity (ratio of VSL/VCL)

STR: Straighties (ratio of VSL/VAP)
Gambar 6.17. Kecepatan dan Gerak Spermatozoa

CASA memberikan analisis yang cepat, obyektif, akurat dan
repeatable dari beberapa ratus spermatozoa per sampel konsisten,
lengkap, permanen, dan aman. Sampel semen dapat dievaluasi tidak
hanya motilitas secara umum saja, juga dapat membedakan setiap pola
gerakan yang menyediakan nilai awal diagnose kemampuan fertilitas
(Anonimous, 2004).
Analisa dilakukan dengan mengalikan lapang pandang (screen), lebih
dari 95 spermatozoa per lapang pandang sebanyak 20 kali, ke dalaman
chamber 10 – 80 µ, parameter motilitas yang digunakan sesuai dengan
criteria WHO (World Health Organization), memberikan data analisis per
individu sel, per lapangan dan per sample, dengan analisis dilakukan
dalam waktu kurang dari 2 detik per lapangan pandang (Anonimous,
2004).
Pada analisis 18 parameter motilitas dilakukan dengan
menggunakan CASA secara otomatis dengan jumlah sel yang dapat
dianalisis minimal 200. Langkah pertama analisis akan didapatkan
klasiikasi sel pada level 1 yaitu motilitas dan motilitas progresif. Motilitas
adalah semua sel yang motil tidak termasuk sel yang tidak motil. Motilitas
progesif adalah semua sel yang bergerak maju ke depan tidak termasuk
yang bergerak lokal (motil lokal). Lokal motil adalah sel yang hidup
tetapi bergerak maju sangat sedikit. Pada level ini setiap
kriteria sel ditandai dengan warna tertentu, pada sel yang motil
progresif terdapat tanda warna hijau, tidak motil berwarna merah, lokal
motil berwarna biru dan hiperaktif berwarna ungu. Pada klasiikasi level 2
terdiri dari evaluasi hiperaktif, linear, non linear dan curve linear yang
merupakan informasi motilitas sampel yang dianalisis. Selanjutnya analisis
dilanjutkan untuk data sel secara detail yang meliputi DCL, DAP, DSL,
VCL, VAP, VSL, LIN, STR, WOB, BCF, ALH, AOC (Anonimous,
2004).
Spermatozoa juga diklasifikasikan dalam tiga grup berdasarkan
kecepatannya yaitu total motil (semua spermatozoa yang bergerak lebih dari
10 µm per detik), progresif motil (semua spermatozoa yang bergerak maju
lebih dari 20 µm per detik) dan local motil (semua spermatozoa yang
bergerak pada 10 – 20 µm per detik). Motil progresif dibagi dalam tiga
grup tergantung dari nilai S/V (straight line velocity <µm/detik>), bila nilai
0,9–1,0 dikategorikan Linear Forward; bila nilai 0,8–0,9 dikategorikan Non
Linear Forward dan bila 0,0–0,8 dikategorikan pola gerakan lain
(Engelmann, 1997).
Terdapat tiga kelompok pola motilitas spermatozoa yang dapat dianalisis
menggunakan CASA yaitu kelompok hiperaktifasi yang memiliki nilai
VCL>100 µm/detik, LIN<60% dan ALH>5 µm; kelompok non hiperaktifasi
apabila nilai VSL>40 µm/detik, LIN>60% dan ALH<5 µm/detik serta
kelompok transisi yang memiliki nilai diantaranya. Angka fertilitas pada
kelompok hiperaktifasi memiliki keberhasilan yang lebih tinggi
dibandingkan dengan kelompok non hiperaktifasi. Dinyatakan bahwa
pengujian pola motilitas hiperaktifasi menggunakan CASA dapat
menjadi upaya yang baik untuk memprediksi kemampuan fertilisasi
spermatozoa. Ripp et al. (2003) menyatakan bahwa hiperaktifasi ditandai
dengan LIN>65%, VCL>100 µm/detik dan ALH>7.5 µm/detik.
Susilawati dkk (2000) menyatakan bahwa hiperaktifasi spermatozoa
diperlukan sesaat sebelum reaksi akrosom secara in vitro sama dengan secara
in vivo yaitu pergerakan dalam oviduk saat fertilisasi. Mula-mula
spermatozoa berenang dalam bentuk linear mulai menunjukkan gerakan
tunggal yang ditandai gerakan ekor seperti tali cambuk dan dihentikan
dengan gerakan lurus-lurus pendek. Saat hiperaktifasi spermatozoa
mempunyai daya dorong yang tinggi, hal ini untuk bergerak menuju ampula
dan untuk menembus zona pellucida yang keras. Terdapat korelasi positif
antara motilitas spermatozoa terhiperaktifasi
dengan kemampuan spermatozoa menembus zona.
Hiperaktifasi spermatozoa ditandai dengan perubahan pola gerakan
yang cepat dengan amplitudo yang luas/lebar dan membentuk gerakan
whiplash dari lagelum (Shibahara et al., 2003). Selama hiperaktifasi
spermatozoa menunjukkan peningkatan VCL dan penurunan linearity.
Untuk keberhasilan fertilisasi spermatozoa harus mampu merespon secara
baik rangsangan eksternal yang meliputi protein kinase yang mengatur fungsi
lagelar.
Hiperaktifasi spermatozoa ditunjukkan dengan gerak maju cepat non
linear, selama hiperaktifasi terjadi perubahan drastis pada pola gerak
spermatozoa. Pola gerakan berubah menjadi random dan sirkuler tidak
progresif dan dinyatakan sebagai whiplash atau gambar angka 8.
Peningkatan amplitudo dari ALH, peningkatan VCL dan penurunan LIN.
Terdapat korelasi positif diantara VSL, LIN, BCF dengan
motilitas spermatozoa dan korelasi negatif diantara MAD (Mean Angular
Displacement) dengan motilitas spermatozoa. Velocity dan linearity
spermatozoa memberikan kontribusi pada motilitas spermatozoa dan
merupakan karakteristik penting dari fungsi spermatozoa.
Beberapa standar parameter motilitas menggunakan CASA pada berbagai
jenis ternak sebagaimana dapat dilihat pada Tabel 6.3. Tidak ada perbedaan
pada VAP, VSL, VCL, ALH, STR, LIN dari semen yang dikoleksi
menggunakan vagina buatan dan elektroejakulator, namun konsentrasi
spermatozoa menggunakan vagina buatan lebih tinggi daripada
elektroejakulator.
Tabel 6.6. Standar Parameter Motilitas Menggunakan CASA pada
Beberapa Hewan
Spesies Jangkauan Klasifikasi Level 1 Klasifikasi Level 2
Area [µm] Non Lokal Hiperaktif Linear Non- Curve-Linear

dari smp. motil motil Linear
Babi 25 120 AOC<2,2 DSL<4,5 VLC>80 STR>0,9 STR=0,9 DAP/

LIN<0,65 LIN>0,5 LIN<0,5 Diameter =30
ALH>6,5 LIN<0,5
Sapi 22 88 AOC<5,0 DSL<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

ALH>6,5 and LIN<0,5
Tikus 10 70 AOC<5,0 DSL<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

ALH>6,5 and LIN<0,5
Kuda 14 80 AOC<9,5 DSL<6,0 VLC>80 STR>0,9 STR=0,9 DAP/

ALH>6,5 and LIN<0,5
Domba 28 50 AOC<5,0 DSL<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

ALH>6,5 LIN<0,5
Kambing 20 70 AOC<5,0 DSL<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

LIN<0,65 LIN>0,3 LIN<0,3 Diameter = 30
ALH>6,5 LIN<0,5
Rusa 22 60 AOC<5,0 DSL<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

LIN<0,65 LIN>0,4 LIN<0,35 Diameter = 30
ALH>5,0 LIN<0,5
VAP, VSL, LIN, STR merupakan indikator motilitas progresif

sedangkan VCL, ALH dan BCF merupakan indikator vigor spermatozoa.
STR dan LIN juga menjelaskan swimming pattern spermatozoa. Kemampuan
fertilisasi spermatozoa berhubungan dengan penurunan VSL, namun belum
jelas bagaimana parameter motilitas spermatozoa berhubungan dengan
penurunan atau peningkatan fertilitas. Penurunan motilitas spermatozoa
akan menyebabkan penurunan angka fertilitas. CASA dapat digunakan
untuk mendeteksi pengaruh beberapa faktor seperti pH air, temperatur,
penghambat motilitas dan uji keracunan yang merupakan pengaruh
potensial dari lingkungan spermatozoa serta kemampuan reproduksinya.
6.9.Uji Kualitas spermatozoa yang lain.
1. Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA)
Metode lowcytometry dapat dikembangkan untuk mengevaluasi
struktur integritas membrane pada kromatin spermatozoa dengan mengukr
jumlah double stranded dan single stranded DNA didalam populasi
spermatozoa. SCSA dapat digunakan untuk mengidentiikasi spermatozoa
sapi atau kda yang sub fertile. SCSA dapat di “screen” 5000 sampai 1000
spermatozoa dalam beberapa menit.
2. Fluoresen yang lain.
Pemeriksaan luoressen yang lain yang dapat digunakan untuk
mengevaluasi fungsi spermatozoa dengan menggunakan mikroskop atau
lowsitometer. Penghitungan ini sangat berarti karena memberikan
informasi yang mendetail gambaran integritas membrane dan potensi
membrane mitochondria.
3. Analisis biokimia seminal plasma atau sekresi pada saluran
reproduksi betina
Dengan mengetahui konsentrasi elektrolit, konsentrasi protein atau
komposisi protein spesiik pada seminal plasma bukannya metode yang
baik untuk memprediksi informasi motilitas post thawing pada medium
pembekuan spermatozoa. Dua protein yang berasal dari epididimis adalah
penanda potensial fertilitas yaitu osteopontin dan lipocalin- 1 – like
prostaglandin D synthase Deoxyribonuclease – 1 like enzim dan tipe 2
tissue inhibitor of metallopro- teinase (TIMP-2) disekresai oleh kelenjar
asesori saat ejakulasi dan mengikat spermatozoa saat melewati alat
reproduksi jantan dan juga bergabung dengan faktor-faktor penyebab
fertilitas jantan.
Glycosaminoglycan adalah komponen yang dihasilkan oleh
saluran betina, bergabung dengan spermatozoa sapi dapat menyebabkan
reaksi spermatozoa secara in vitro. Korelasinya besar antara stimulasi reaksi
akrosom oleh slycoaminoglycans dan pejantan setelah NRR 60-90
(Ax et al, 2008)
6.10. Produksi Semen

Evaluasi tentang kualitas semen tidak dapat dilakukan hanya dengan
satu parameter uji kualitas saja, akan tetapi lebih sesuai jika menggunakan
penggabungan dari beberapa parameter diatas, sehingga lebih mudah
didalam melakukan evaluasi, terutama didalam menguji produksi semen
dari seekor ternak.
Total spermatozoa = Volume semen X Konsentrasi
Total Spermatozoa yang motil = Volume semen X Konsentrasi
X Persentase motilitas Individu
Total spermatozoa yang hidup = Volume semen X Konsentrasi

X Persentase spermatozoa yang hidup
Total Spermatozoa yang abnormal = Volume semen X

Konsentrasi X Persentasi spermatozoa yang abnormal.
BAB
VII
PENGENCERAN, PENDINGINAN
DAN PEMBEKUAN SEMEN
Semen yang didapat saat penampungan setelah memenuhi kualitasnya
dilakukan pengenceran agar didapat semen beku yang banyak.
Pengenceran semen ini dibutuhkan pengencer yang dapat menjamin
terjadinya proses metabolisme dan respirasi spermatozoa selama proses
pendinginan, pencetakan ke dalam straw ataupun selama pembekuan.
7.1. Media pengenceran

Terdapat 2 alasan pokok semen perlu diencerkan sebelum
pembekuan yaitu: 1) alasan teknis dan 2) alasan biologis. Alasan teknis
adalah untuk dapat menginseminasi lebih banyak betina dari semen
pejantan unggul, sedangkan alasan biologisnya agar dapat memberikan
medium yang cocok sebagai sumber nutrisi, control pH serta
mempertahankan tekanan osmotik spermatozoa.
Syarat penting yang harus dimiliki oleh setiap pengencer adalah: (1)
mempunyai daya preservasi tinggi, (2) Mengandung unsur yang sifat isik dan
kimiawinya hampir sama dengan semen dan tidak mengandung zat yang
bersifat racun bagi spermatozoa dan saluran kelamin betina, (3) Tetap dapat
mempertahankan daya fertilisasi spermatozoa, tidak terlalu kental sehingga
menghambat fertilisasi.
Syarat dari pengencer adalah:
1. Bahan tidak bersifat toxic terhadap spermatozoa.
2. Mengandung sumber energi
3. Bersifat isotonis
4. Mengandung buffer
5. Melindungi dari pengaruh pendinginan secara cepat
6. Menghambat pertumbuhan bakteri
7. Meningkatkan volume sehingga bisa digunakan beberapa kali IB
8. Melindungi spermatozoa dari semen beku
125
126 Pengenceran, Pendinginan Dan Pembekuan Semen
Beberapa tambahan persyaratan yang lain adalah:

1. Mudah membuatnya
2. Tidak menghalangi saat uji kualitas
3. Harganya terjangkau
Bahan-bahan dan peralatan yang dipergunakan untuk media pengenceran
semen harus terhindar dari bahan-bahan yang mematikan spermatozoa.
Pengen- cer yang dibuat harus antiseptik dan disimpan di suhu dingin atau
refrigerator, akan tetapi tidak dalam kondisi beku. Bahan-bahan yang ada
di pengencer (extender) adalah gula sederhana (misal glukosa , laktosa atau
rainosa) sitam- bahkan sebagai sumber energi dari spermatozoa. Kuning
telur dan skim milk digunakan untuk melindungi dari cold shock. Pada saat
pendinginan dari suhu tubuh sampai dengan 5oC, subtansi tersebut juga
sebagai nutrisi spermatozoa. Bermacam-macam bahan yang digunakan
sebagai buffer sehingga pH mendekati netral dan tekanan osmose sekitar
300 mMol yang equivalen (sama) dengan semen, plasma darah dan susu,
sedangkan untuk menghambat pertumbuhan mikroorganisme didalam
semen ditambahkan penisilin, streptomisin, polymyxin
–B atau kombinasi lain antibiotik.
Semen sapi biasa digunakan pengencer larutan kuning telur,
homogenized whole milk, susu segar, skim milk dan santan (coconut milk) dan
larutan laktose, semen juga telah dapat dibekukan dengan buffer organik yaitu
tris hydroximethyl amino methan.
Larutan buffer fosfat atau 3,2%, 2,9 trisodium citrate dihydrate pada pH
6,9 ditambahkan asam sitrat dikombinasikan dengan kuning telur , sebetulnya
tidak perlu ditambahkan asam sitrat sebab komposisi kuning telur (20%
dari volume) cukup kapasitasinya sebagai buffer agar pH menjadi
netral.
Tujuan utama membuat semen beku yang baik adalah
meningkatkan keberhasilan kebuntingan yang sama dengan kawin alam.
Banyak faktor yang mempengaruhinya untuk menuju ke tujuan tersebut.
Semen ternak sudah dapat dibekukan 30 tahun yang lalu. Teknik
pembekuan secara terus menerus dimodiikasi dan diperbaiki hingga
sekarang. Pembekuan semen diawali dengan menggunakan CO2 cair (-
79oC , kemudian diganti dengan N2 cair (-196oC)
karena kondisinya lebih stabil pada semen beku. Prosedur cryopreservasi pada
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati,127
M.S.
semen sapi keberhasilannya lebih tinggi dibandingkan pada ternak atau hewan
yang lainnya.
Kemampuan hidup semen beku (Freezability) pada semen beku
setelah thawing bervariasi antar spesies dan individu jantan dalam spesies
yang sama. Variasi dalam spesies dan individu berhubungan dengan bioisika
dan biokimia dari karakter membran spermatozoa. Fungsi integritas pada
semen setelah thawing dari pembekuan dapat dievaluasi dengan
kemampuan memvertilisasi ovum dan bertahannya didalam
embriogenesis.
Kemampuan hidup spermatozoa setelah diejakulasikan didalam
media seminal plasma hanya dapat bertahan dalam waktu yang pendek.
Spermato- zoa dapat hidup lama pada suhu dingin atau dibekukan
membutuhkan media pelindung. Setiap pengencer yang berbeda
mempunyai kemampuan untuk mempertahankan semen dengan
formulasi yang berbeda.
Kallikrein dan kafein dapat menstimulasi motilitas spermatozoa
dengan ditambahkan setelah semen beku di thawing. Kerja kafein adalah
menstimulasi ciclic adenosine monophosphate (cAMP) didalam spermatozoa
dengan penambahan ini kemungkinan dapat membedakan selama transport
dari saluran reproduksi betina.
Gliserol ditambahkan untuk sebagai bahan yang melindungi
spermatozoa dari efek pembekuan. Dimethylsulfoxide (DMSO) dan gula
yaitu laktosa dan rainosa juga baik dan semua bahan tersebut bersifat
degidrasi atau menyerap air.
Dalam prakteknya, pengencer untuk pengenceran atau pembekuan semen
menggunakan kuning telur atau susu yang dipanaskan atau kombinasi
keduanya, kuning telur secara mudah juga dapat dikombinasikan dengan
sodium sitrat atau buffer organik dan susu yang dipanaskan atau skim
milk, dapat digunakan secara luas pada sapi dan dengan modiikasinya untuk
semen domba, kambing, babi dan kuda.
Tabel 7.1 Jumlah straw yang dihasilkan, penyimpanan dan hasil IB dengan
menggunakan semen beku dalam kondisi rata-rata (Hafez, 2008 b)
Parameter Semen beku

sapi domba kambing babi kuda
Jumlah yang dida- 10-75 5-10 10-25 4 2
pat pada 1 ml se-
men (ml)
Dosis Inseminasi
Volume (ml) 0,2-1 0,05-0,2 0,5 50 20-50
Spermatozoa motil 15 200 20 5000 1500
(106)
Waktu terbaik untuk 9 jam set- 10-12 set- 12-36 jam 15-30 jam Hari kedua,
IB selama estrus elah akhir elah setelah tan- s e t e l a dimulai
estrus tanda da estrus h tanda hari ke 2
estrus es- pada
trus estrus
Posisi deposisi se- Uterus atau Uterus jika Uterus jika Servik ke uterus
men servik mungkin mungkin dalam ute-
rus
Jumlah kemampuan
pejantan
Per ejakulasi 300 15 15 10 5
Per minggu 1000 150 150 30 15
Berbagai macam pengencer yang sering digunakan:

1.Pengencer Tris Aminomethan Kuning telur
Bahan yang dapat digunakan sebagai media pengencer antara lain
Tris aminomethan kuning telur. Pengencer ini memiliki bahan atau zat
yang diperlukan oleh spermatozoa yang merupakan sumber makanan
baginya, antara lain yaitu seperti fruktosa, laktosa, rainosa, asam-asam amino
dan vitamin dalam kuning telur sehingga spermatozoa dapat memperoleh
sumber energi dalam jumlah yang cukup untuk motilitasnya.
Pengencer Tris aminomethan kuning telur terdiri dari tris
aminomethan, asam sitrat, laktosa/levulosa, fruktosa, rafinosa, penicillin
dan streptomycin. Fungsi dari masing-masing bahan tersebut adalah:
a. Tris aminomethan kuning telur: sebagai buffer untuk mencegah perubahan
pH akibat metabolisme spermatozoa berupa asam laktat dan
mempertahankan tekanan osmotik dan keseimbangan
elektrolit.
b. Asam sitrat: sebagai buffer pengikat butir-butir lemak kuning telur
dan mempertahankan tekanan osmotik dan keseimbangan
elektrolit.
c. Laktosa/levulosa: sebagai sumber energi spermatozoa.
d. Kuning telur: sebagai pelindung spermatozoa terhadap cold shock dan
sumber energi spermatozoa.
e. Rafinosa : sebagai sumber energi dan mencegah efek lethal pembekuan.
f. Penicilin streptomycin: mencegah pertumbuhan mikroorganisme dan
meningkatkan daya tahan spermatozoa (Susilawati, 2000).
Khasiat kuning telur terletak pada lipoprotein dan lechitin yang
terkandung
di dalamnya yang bekerja mempertahankan dan melindungi integritas selubung
lipoprotein dari sel spermatozoa. Kuning telur juga mengandung glukosa,
yang lebih baik digunakan oleh spermatozoa sapi untuk metabolismenya
daripada fruktosa yang terdapat di dalam semen, berbagai protein,
vitamin-vitamin yang larut dalam air maupun yang larut dalam minyak, dan
memiliki viskositas yang mungkin menguntungkan spermatozoa. Kuning telur
mengandung asam-asam amino L-tyrosin, L-tryptohan, dan L-phenilalanin
yang menghasilkan hydrogen peroksida pada deaminasi oksiatif. Kuning
telur juga mengandung bahan diantaranya lipoprotein dan lechitin yang
berfungsi melindungi spermatozoa terhadap cold shock, karena
kemampuannya mempetahankan dan melindungi integritas selubung
lipoprotein dari membran sel spermatozoa.
Pembuatan Pengencer Tris aminomethan kuning telur
Tabel 7.2. Komposisi Kimia Pengencer Tris Amino Methan dalam 100
Bahan Penyusun Jumlah
Tris Amino Methan 1.363 g
Citric Acid/asam sitrat 0.762 g
Lactose 1.500 g
Fructose 0.500 g
Kuning telur 20.00 ml
Rafinose 2.700 g
Streptomycin 0.100 g
Aquadest 80.00 ml
Penicillin 0.100 g
Cara pembuatan pengencer Tris Amino Methan adalah sebagai berikut:
 Bahan-bahan yang terdiri dari Tris aminomethan, asam sitrat, laktosa,
rafinosa dan fruktosa dimasukkan dalam Erlenmeyer dan ditambahkan
aquadest 80 ml serta dihomogenkan dengan magnetik stirer selama
10-15 menit.
 Setelah dihomogenkan kemudian dimasukkan ke dalam panci dan
dipanaskan sampai mendidih dengan tujuan untuk sterilisasi.
 Diturunkan suhunya dari 100 0C ke 370C.
 Ditambahkan penicillin dan streptomycin dan dihogenkan lagi
selama 10-15 menit
 Dimasukkan dalam refrigerator dan setelah 3 hari dipisahkan antara
endapan dan supernatan serta yang digunakan hanya supernatannya
sedeangkan endapan dibuang.
Tabel 7.3. Tris fruktose kuning telur pengencer untuk domba
Komponen Jumlah
Tris (hydroxymethyl) aminomethan 3.634 g
Fruktosa 0.50 g
Kuning telur 14 ml
Aquades Dibuat sampai 100
ml
(Ax et al, 2008)
2. AndroMed®
AndroMed® merupakan suatu medium tanpa kuning telur untuk
semen beku dan cair yang mempunyai angka fertilitas tinggi walaupun
tanpa kandungan dari hewan aslinya. Selain itu juga tidak mempunyai
resiko kontaminasi mikroorganisme serta mudah dalam penanganan dan
waktu penyimpanan. Bahan pengencer instant ini berupa cairan tersusun
atas aquabidest, fruktose, glyserol, asam sitrat, buffer, phosfolipid,
spectynomycine, lincomycine 15 mg, tylocin 5 mg, gentamycine 25 mg.
AndroMed® adalah pengencer alternatif baru, hasilnya lebih baik jika
dibandingkan dengan pengencer tris kuning telur. Selain itu andromed bisa
menghasilkan motilitas dan ketahanan spermatozoa yang lebih baik
daripada media tris kuning telur. AndroMed® berisi bukan protein
hewani seperti protein kuning telur. motilitas progresif post thawing
AndroMed® juga lebih baik dari Triladyl™.
Salah satu komposisi AndroMed® adalah gliserol. Gliserol
merupakan krioprotektan intraseluler yang memiliki berat molekul 92,10
kd, rumus kimia C3H5(OH)3 dan berat jenis 1,25 g/cm3 pada suhu 200C
(Garner dan Hafez,
2008). Gliserol adalah suatu zat yang dapat berdifusi ke dalam sel-sel sperma-
tozoa dan dapat dimetabolisir dalam proses-proses yang menghasilkan energi
dan membentuk fruktos. Jadi dalam keadaan aerob, gliserol berfungsi
sebagai penghasil fruktosa; lebih sedikit asam laktat yang terbentuk; tetapi
spermatozoa menunjukkan aktiitas yang optimum (Toelihere, 1985).
Peranan gliserol sebagai bahan krioprotektan dalam alur
mekanisme reaksi preservasi sel adalah sebagai penurunan titik beku
medium krioprotektan, perlindungan terhadap membran sel, menekan
laju pengaruh peningkatan konsentrasi, serta merubah bentuk dan ukuran
kristal es. Disamping perlunya penambahan gliserol dalam pengencer, juga
dibutuhkan penambahan antibiotik. Antibiotik ini berfungsi untuk
mengeleminir organisme Vibrio foetus serta akan meninggikan daya tahan
hidup spermatozoa. Gliserol dengan pengencer seharusnya dimasukkan
ke dalam semen yang telah bercampur pengencer tanpa gliserol setelah
didinginkan mencapai suhu 50C tidak lebih dari 2 jam (Anonymous, 2001).
Pembuatan pengencer AndroMed®:
1. Dimasukkan dalam gelas ukur 50 ml.
2. ditambahkan aquabidest dengan perbandingan antara Andromed dan
Aquabidest = 1 : 4, lalu dihomogenkan
3. dimasukkan dalam wadah waterbath dengan suhu 38ºC.
4. Siap untuk digunakan sebagai pengencer semen.
3. Pengencer TCM 199 Kuning Telur

TCM 199 adalah sebutan dari Tissue Culture Medium 199 adalah media
yang biasa digunakan untuk Culture sel atau embrio, produk dari Sigma
Medium ini mengandung bahan-bahan yang lengkap untuk kebutuhan
hidup sel.
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan hasilnya menunjukkan
bahwa TCM 199 kuning telur lebih baik dari pada Tris aminomethan
kuning telur. Medium pengencer TCM 199 kuning telur ini adalah
merupakan hasil pemcam- puran dari: 1). TCM 199 produk dari Sigma
2). Serum dan 3). Kuning Telur. Sedangkan Cara Pembuatannya
adalah sebagai berikut:
1. TCM 199
TCM 199 adalah produk dari sigma yang berupa cairan atau
dalam bentuk powder, Perbedaan harganya sangat besar sehingga
disarankan menggunakan yang dalam bentuk powder yang lebih
murah.
Satu sachet TCM 199 dapat untuk 1000 ml larutan, oleh karena
cairan
ini banyak kandungan nutrisinya maka cenderung mudah kontaminasi, oleh
sebabnya sebaiknya pembuatan larutan disesuaikan dengan kebutuhan.
Cara Pembuatan:
1. Misalnya yang dibutuhkan 100 ml maka ambil seper sepuluhnya
dengan cara ditimbang dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer.
2. Tambahkan aquabides sebanyak 100 ml, maka larutan akan berwarna
kuning yang menandakan pH sekitar 6
3. Tambahkan NaH2PO4 atau NaH2CO3 sedikit demi sedikit hingga
warna menjadi orange, sehingga pH menjadi sekitar 7.
2. Serum
Serum dapat berasal dari produk perusahaan misalnya Fetal Bove
Serum produk dari Sigma, akan tetapi harganya mahal, maka dapat diganti
dengan serum buatan sendiri, cara pembuatannya adalah sebagai
berikut:
1. Ambil darah sapi atau kambing dari ternak yang sehat, dengan
tabung venoject yang telah berisi EDTA. Hindari guncangan dan
suhu panas, sehingga segera tabung dimasukkan dalam termos yang
telah berisi es batu dan hindari banyak goncangan.
2. Sentrifugasi 3000 Rpm selama 20 menit.
3. Ambil serum (Cairan yang bening) dengan menggunakan pipet
pasteur secara hati-hati, jangan sampai tercampur darah
merahnya
4. Setelah jumlahnya telah terkumpul banyak, maka dilakukan in activasi.
Proses in activasi ini gunanya agar kerja enzim-enzim tidak aktif,
sehingga tidak berpengaruh terhadap spermatozoa, karena yang
diambil hanya bahan-bahan yang terkandung dalam serum.
5. Cara in activasi adalah: Masukkan erlenmeyer yang telah berisi serum
ke dalam air dengan suhu sekitar 58oC selama 20 menit,
selanjutnya simpan di freezer dalam tabung kecil-kecil, sehingga
dapat dithawing sesuai dengan kebutuhan.
3. Kuning Telur
Kuning telur yang sering digunakan sebagai ekstraseluler
krioprotektan adalah kuning telur ayam ras dengan umur kurang dari 3
hari, sedangkan teh ayam beras, dan itik juga tepat dapat digunakan
asalkan umur telur kurang dari
3 hari agar kualitasnya masih
baik. Cara pencampuran
medium:
1. Siapkan larutkan TCM 199 dengan pH netral sekitar 7.
2. Tambahkan serum 4 – 10 % dari cairannya
3. Ambil cairan sebanyak 4% dan dibuang, diganti
dengan kuning telur ayam sebanyak 4% kemudian di
homogenisasi.
4. Setelah homogen, maka pengencer siap digunakan.
5. Apabila akan digunakan pembekuan, sistem pencampuran Gliserol
sama dengan pembuatan medium B pada tris amino methan kuning
telur.
4. Pengencer semen alternatif.

Pengencer semen alternatif yang dimaksudkan adalah pengencer
semen dengan menggunaan bahan bahan yang ada di lingkungan sekitarnya,
misalnya pemanfaatan air kelapa atau air garam isiologis, banyak sekali
penelitian yang menggunakan produk tanaman akan tetapi anya berupa
penelitian yang hingga saat ini belum ada yang diaplikasikan. Misalnya
menggunakan sari buah (Pisang, apokat, tomat, wortel, dll), susu, kuning
telur itik, entok, dan madu. Di dalam perkembangan pengetahuian tentang
pengencer alternatif, diucapayakan tidak mnggunakan produk dari hewan
akan tetapi bahan-bahan dari tanaman.
Berdasarkan kebutuhan spermatozoa hidup dengan mengunakan
medium yang sesuai untuk kehidupannya dan juga geraknya, maka di
dalam membuat pengecer perlu diperhitungkan kedua macam fungsi tersebut,
selain itu juga daya simpan dari pengencer tersebut dan yang paling
penting adalah diketahuinya bahan aktif yang terkandung didalam bahan
tersebut, sedangkan yang tak kalah pentingnya terdapatnya bahan ikutan
yang bersifat toxic.
Beberapa tahun ini direkomendasikan IB dengan menggunakan
semen air (Tidak beku) dan beberapa pengencer telah direkomendasikan.
Pengencer yang palin banyak digunakan pada sapi adalah kuning telur
dengan Na Sitrat atau Tris, atau susu yang dipanaskan, pengencer ini juga
dapat digunakan oleh spesies lain. Bila untuk semen beku tinggal
menambahkan gliserol, akan tetapi hasil IB menggunakan semen beku
tidak pernah lebih baik dari semen cair, sebab beberapa spermatozoa
akan mati setelah dilakukan pembekuan.
Semen yang disimpan dalam suhu sedang (ambien) dapat
digunakan kuning telur + karbonat yang disebut dengan pengencer Illinois
Variabel Tem-
peratur (IVT) atau santan (coconut milk) memberikan fertilitasyang memuaskan
sehingga semen dapat disiman beberapa hari pada suhu sedang (Hafez,
2008 b). Semua sapi dapat di IB dengan semen beku yang telah disimpan
lama dalam suhu -196oC dalam keadaan terendam nitrogen cair.
Semen sapi dalam bentuk pelet yang dibekukan dalam CO2 padat (dry
ice) telah digunakan dibeberapa negara, di dalam pengencer digunakan gula
rainosa atau 11% laktosa. Penggunakan pelet adalah suatu teknik
penyimpanan yang
tidak mahal, tetapi sangat suit untuk diaplikasikan bila dengan menggunakan
pejantan yang banyak teutama dalam hal identiikasinya.
Semen beberapa spesies sulit dibekukan dalam bentuk pelet, akan
tetapi semen kambing berhasil dikebukan dengan menggunakan skim milk
dengan 9 gram glukosa per liter dan 7% gliserol dari semua volume. Kadar
gliserol yang tinggi dapat menurunkan fertilitas semen babi, sehingga
hanya diberikan 2 % atau lebih kecil dari 2% dalam pengencer dan semen
beku babi telah berhasil dikomersiilkan (Hafez, 2008b).
Semen kuda juga dapat dibekukan dalam bentuk pelet atau semen
beku. Pengencer kuning telur- tris cream-gelatin dapat digunakan sebagai
pengencer, penambahan gliserol akan menurunkan fertilitas semen kuda
dan beberapa semen kuda kualitas semen bekunya akan rendah karena
belum adalah metode yang baku, walaupun saat ini IB pada kuda telah
berhasil dilakukan.
7.2.Prosesing semen
Prosesing untuk semen cair atau semen beku sampai dengan suhu
5 C adalah sama
o
Cooling adalah proses pendinginan semen setelah diencerkan,

dimasukkan dalam gelas ukur tertutup dan ditempatkan pada beaker glass
berisi air dengan suhu 370C kemudian diletakkan di dalam alat pendingin
(cool top) (Bearden dan Fuquay, 1984 dan Hafez, 2008b). Cooling harus
berjalan secara perlahan dan minimal 1 jam untuk menurunkan suhu
semen dari 370C menjadi 50C dan semen harus direndam air untuk
mencegah cold shock. Proses pendinginan menyebabkan stress isik dan
kimia pada membran spermatozoa yang dapat menurunkan viabilitas dan
kemampuan memfertilisasi spermatozoa. Hafez (2008b)
merekomendasikan selama 30 menit dalam suhu 30 C agar antibiotik
o
dapat bekerja didalam pengencer, kemudian diturunkan pelan-pelan
hingga
5oC, sedangkan pada babi hingga pada suhu 15oC.
Prosesing semen kambing perlu beberapa kali sentrifugasi untuk
mencegah terjadinya koagulasi (Corteel, 1977) kemudian didinginkan paling
cepat 1 jam dari suhu 35oC hingga 5oC, prosesing pendinginan ini selalu
menggunakan perlindungan air agar tidak cold shock kalau dilakukan
kontak langsung antara semen dengan suhu refrigerator.
Masuda (1992) berpendapat bahwa proses pendinginan semen
pada suhu 5OC sesuai prosedur meliputi: (1) penambahan pengencer A
yang dilakukan pada suhu 30 OC kemudian (2) pendinginan pada suhu 5
O
C dilakukan selama 1,5-2 jam (3) penambahan pengencer B yang
mengandung gliserol (4) dilanjutkan proses pembekuan setelah 2-3 jam
dari proses glisero-ekuilibrasi. Pendinginan semen pada suhu 5 OC
sebelum penambahan pengencer B atau pengencer yang mengandung
gliserol, dapat meningkatkan daya hidup sel setelah proses pembekuan atau
pencairan (thawing). Gliserolisasi di suhu dingin (50C) memberikan hasil
yang lebih baik.
Proses Pendinginan untuk semen cair adalah semen yang telah
ditampng diuji kualitasnya, bila motilitas diatas 70% dapat diproses lebih lanjut.
Pengencer yang telahditetukan (tris aminomethan kuning telur atau andromed)
dimasukkan ke air hangat 37oC. Semen diencerkan sehingga
konsentrasinya menjadi 100 juta/mililiter, kemudian dimasukkan ke
dalam refrigerator.
Setelah suhu mencapai 5oC, semen dimasukkan ke dalam straw dan
bisa langsung digunakan untuk IB semen cair ini dapat digunakan selama
3 hari.
7.3.Prinsip-prinsip pembekuan sel (Cryobiologi)

Prinsip pembekuan sel, jaringan, embrio dan sel gamet adalah
prinsip bioisika. Sel atau spermatozoa akan mengalami kerusakan pada saat
proses pembekuan dan thawing, karena terbentuknya kristal es didalam sel,
pada proses pembekuan yang cepat akan memperkecil kristal es, sedangkan
sistem pembekuan yang lama akan memperbesar kristal es sehingga
tingkat kerusakannya lebih tinggi, Proses pembekuan yang optimal adalah
agar sel toleransi terhadap efek kristal dan efek racun dari pengencer.
Pada saat sel disuhu 0oC bentukan es intra selluler akan terbentuk
karena sebagian besar spermatozoa tersusun oleh air, dengan penambahan
intra seluler krioprotektan (misal gliserol, DMSO, ethileen glicol) akan
menurunkan
titik beku sel sepemarozoa hingga – 196OC. Mekanisme perubahan titik
beku disebabkan oleh peristiwa masuknya kripprotektan didalam sel
seperti yang digambarkan oleh gambar 8.1. yaitu intraseluler krioprotektan
yang bersifat higroskopis, akan menarik air yang ada didalam sel,
kemudian digantikan oleh intraseluler krioprotektan. Selain dibutuhkan
intraseluler krioprotektan juga dibutuhkan ekstraseluler krioprotektan yaitu
dapat berupa phospolipid atau glucose, oleh sebab itu bahan-bahan
ekstraseluler krioprotektan adalah lesitin (sehingga sering dipakai kuning
telur yang mengandung lesitin), ekstraseluer lainnya adalah golongan gula
yaitu fruktosa, glucosa, rainosa dll. Range temperatur kritis untuk hidupnya
sel adalah -4oC menjadi -60oC saat pembekuan, sedangkan saat
thawing antara suhu -70oC menjadi – 20oC.
Proses pendinginan, pembekuan dan thawing mengakibatkan stress
isik dan kimia pada membran spermatozoa yang dapat menurunkan viabilitas
dan kemampuan memfertilisasi spermatozoa. Spermatozoa yang
mengalami cold shock diakibatkan adanya stress oksidatif oleh ROS (Reactive
Oxygen Species). Semen beku juga dilaporkan menyebabkan penurunan
viabilitas spermatozoa, perubahan fungsi spermatozoa, komposisi lipid, dan
susunan plasma membrane spermatozoa dan perubahan kelompok
sulfhydryl pada membran protein .
Selama pendinginan, konsentrasi konsentrasi intra-dan extraseluler laru-
tan terjadi perubahan sebagai hasil pembentukan es eksternal dan
pengeluaran air dari dalam sel. Bermacam penelitian dilaksanakan pada
system pendinginan suhu 5 OC selama 20-22 jam sebelum penambahan
pengencer B dengan hasil motilitas spermatozoa jauh lebih baik dari
prosedur beku dan lebih baik dari metode berikut ini yaitu semen yang
disimpan setelah proses glisero-ekuilibrasi atau setelah penambahan
pengencer B selama 20-22 jam (Masuda, 1992).
Gliserolisasi adalah penambahan gliserol pada pengencer berfungsi
melindungi dari efek lethal selama proses pembekuan. Penambahan
cryoprotectan gliserol dilakukan beberapa jam sebelum pembekuan agar sel
spermatozoa berkesempatan untuk berekuilibrasi dengan gliserol. Gliserol
dipakai sebagai zat pelindung pada proses pembekuan semen dan
ditambahkan secara bertahap pada semen setelah cooling.
HIGROSKOPIS
Air kelu
SEL
INTRASELULER
KRIOPROTEKTAN
MEDIA PENGENCER
Gambar 7.1. Mekanisme masuknya krioprotektan didalam sel.
Pada proses pembekuan spermatozoa, menempatkan straw 8-10

cm diatas permukaan nitrogen cair dan dengan menggunakan rak dinamis
menghasilkan persentase motilitas dan spermatozoa hidup nyata lebih
baik. Keru- sakan sel spermatozoa akan terjadi apabila dibiarkan -800C
selama lebih dari 4 detik. Setelah semen dimasukkan dalam N2 cair maka
motilitas dan viabilitas semen beku dapat dapat dievaluasi sebelum 48 jam
setelah pembekuan dengan dithawing dalam air suhu 370C selama 15-30
detik .
Kemampuan memfertilisasi semen beku lebih rendah dari semen
segar. Hal ini disebabkan adanya kerusakan sel yang dapat menurunkan
kemampuan memfertilisasi. Kerusakan tersebut umumnya terdapat pada
akrosom dan mitokondria. Selama pembekuan, ada dua proses penting
yaitu yang pertama adalah produksi dari ROS yang dapat merubah fungsi
dan struktur membran. Kedua adalah perubahan sistem pertahanan
antioksidan berdasarkan penurunan isi glutathionine intraseluler. Kerusakan
membran spermatozoa banyak terjadi karena pembentukan kristal es
khususnya selama titik kritis 0-100C. Kerusakan terbesar pada plasma
membran dan tudung akrosom terjadi selama pembekuan dan thawing yang
diikuti oleh equilibrasi.
Tabel 7.4. Karakteristik bioisika dari beberapa krioprotektan
Parameter DMSO Gliseol Ethylene Glycol
Formulasi kimia (CH3)2SO4 C3H3(OH)3 (CH2OH)2
Berat molekul 78,13 92,10 62,07
Speciic gravity 1,10 1,25 1,11
(g/cm pada 20 C)
3 o
Mass ( g/L)
1,0 M 78,13 92,10 62,07
3,0 M 234,39 276,30 186,21
Volume (mL/L)
0,1 M 71,00 73,70 5,90
3,0 M 21,10 221,10 167,70
Sigma chemical
Catalog No D-5879 G-7757 E-9129
 Specivic gravity: ratio berat dengan volume dibandingkan dengan
berat
dan air pada 0oC
7.4.Banyaknya pengenceran
Semen diencerkan dengan tujuan unttuk memperbanyak volume,
sehingga satu pejantan dapat dimanfaatkan oleh banyak betina dalam
satu kali ejakulasi. Jumlah pengenceran untuk semen cair lebih banyak
dari pada pada semen beku. Semen cair dapat diencerkan 200-300 X
dengan jumlah spermatozoa yang motil lebih rendah, yaitu 5 juta
spermatozoa yang motil per IB masih mempunyai fertilitas yang tinggi.
Proses pengenceran semen sampai dengan 5oC (atau 15oC pada
babi) adalah dengan cara yang sederhana hanya ditabahkan pengencer
padasuhu yang sama. Semen cair pada sapi, kambing, domba dan babi,
fertilitas akan menurun beberapa hari setelah dikoleksi, sehingga Hafez
(2005b) merekomendasikan pada hari berikutnya.
Penambahan gliserol untuk pembekuan dengan cara menambahkan
pada pengencer sesuai dengan metode pembekuannya yaitu ditambahkan
pada suhu 5oC, hal ini karena gliserol akan melindungi sebelum dibekukan.
Jumlah akhir gliserol adalah 5% pada media gula-kuning telur dan 10 %
untuk susu. Penambahan dilakukan pelan-pelan selama 1 jam akan tetapi
bebetapa peneliti telah merekomendapasi dapat dilakukan 1 kali penambahan
dalam pengencer.
Proses penyesuaian atau equilibrasi yang optimal adalah 4-6 jam
tergantung media yang digunakan.
Semen beku dapat di kemas dalam 3 cara yaitu:
1. Straw Polyvenyl chloride yang berisi 0,25 – 0,5 ml pengencer semen.
2. Glass ampules yang berisi 0,5 – 1 ml
3. Pelet yang berisi kira-kira 0,1 – 0,2 ml
Semakin kecil kemasan, konsentrasinya semakin tinggi sebab yang
dihitung adalah total spermatozoa tiap dosis IB
7.5.Pembekuan semen sapi

Bahan untuk pembekuan yang dapat digunakan adalah dry ice, liquid
cair, O2 cair dan N2 cair yang paling populer sebab merupakan pilihan yang
cocok karena dapat disimpan dalam waktu yang lama dengan teknik
penyimpanan yang mudah dengan menggunakan kontainer (Hafez,
2008b).
Metode pembekuan dengan mengunakan pelet , straw atau ampul
selalu didinginkan lebih dulu dalam suhu 5oC , kemudian diuapkan 2
diatas N cair sebelum di masukkan di dalam N2 cair, Hal ini karena starw
atau ampul mempunyai dinding yang kuat, sehingga memberikan
kesimpatan agar dinginnya masuk terlebih dahulu dalam waktu yan cepat.
Bila menggunakan ampul kira-kira 3oC per menit hingga – 15oC, biasanya
titik bekunya sekitar -150 2
o
C dan ampul juga dimasukkan dalam N cair
dengan suhu -196 C. Pembekuan yang sangat cepat akan menyebabkan
o
cold shock dan pembentukan kristal es, pembekuan dengan cara lambat
dapat menyebabkan konsentrasi garam meningkat saat keluarnya air pada
saat pembekuan dan meningkatnya tekanan osmose pada periode
pembekuan aan merusak protein dan lipo protein didalam spermatozoa dan
akrosom.
Hal yang sangat penting adalah selalu melakukan kontrol nitrogen
cair secara periodik dengan melhat volume didalam kontainer, karena bila
kurang akan mematikan spermatozoa yang telah dibekukan.
Recovery Rate = (Motilitas semen beku) X 100%

Motilitas sebelum pembekuan
Recovery rate = Penurunan motiliats pada proses pembekuan

7.6.Thawing semen
Semen beku teta dapat digunakan selama disimpan(terendam) dalam
N2 cair. Apabila semen beku sudah pernah dithawing, maka harus segera
di IB kan dan tidak dapat disimpan lagi .
Straw dapat dithawing dengan suhu antara 0oC – 65oC ataulebih
tingi. Proses thawing harus dilakukan dengan hati-hati karena dampak
kematian sel saat thawing sama besarnya dengan proses pembekuan,
sehngga direkomendasikan oleh Hafez (2008a) pada kemasan ampul di
thawing 8 menit pada suhu 37oC atau lebih, sedangkan dalam bentuk pelet
di thawing padasuhu 40oC tapi dalam praktek sering digunakan
dengan menggunakan air es.
Prinsip dari thawing adalah semakin dingin suhu thawing maka
waktunya semakin lama, sebaliknya semakin tinggi suhu thawing maka
waktunya semakin cepat. Problem yang ada di insemiantor di Indonesia
adalah lokasi antar peternak yang berjauhan sehingga apabila harus
membawa kontainer menjadi beban yan berat, maka dilakukan uji coba
thawing dilakukan di laboratorium semen beku kemudian dimasukkan
didalam termos es maka selama 3 jam masih dalam kondisi layak untuk IB, uji
coba ini dapat diaplikasikan oleh inseminator yang sulit mencari nitrogen
cair atau lokasi yang saling berjauhan.
7.7.Kebijakan didalam menggunakan teknik Inseminasi Buatan

Tujuan utama dari pemanfaatan Inseminasi Buatan adalah
meningkatkan mutu genetik ternak, sehingga ternak atau sapi yang dengan
kualitas unggul hanya berada di Balai Inseminasi Buatan dan
dimanfaatkan semennya untuk memperbaiki sapi-sapi yang berada di
peternak.
Kebijakan menentukan semen semen beku yang digunakan perlu
di- pertimbangkan untuk lokasi yang sulit pengadaan nitrogen cairnya dan
lokasi yang saling berjauhan, hal ini karena sekali saja nitrigen cair habis
atau kurang dari separo tingginya straw di dalam kontainer akan
menyebabkan kematian spermatozoa. Kode didalam kontainer perlu
diperhatikan 43 berarti setiap 43 hari kontainer tersebut perlu diisi nitrogen
cair, paling lama waktu pengisian nitrogen cair adalah 1 bulan apabila
kondisi kontainer baik (tidak ada prembe- san atau kebocoran). Apabila
depo penyimpanan semen tidak bisa mensuplai nitrogen cair secara rutin
maka perlu dipertanyakan kulitas semen beku yang disimpannya. Kondisi
yang tidak pasti tersebut mengharuskan para petugas
didaerah dan inseminator mampu melakukan uji kualitas semen (minimum
motilitasnya), agar semen beku yang di IB kan kepada sapi di masyarakat
benar- benar dengan kualitas standar Nasional Indonesia (SNI)
Lokasi yang demikian bisa menggunakan semen cair yang dilakukan
oleh UPT pembibitan setempat atau menggunakan sistem intensiikasi
kawin alam, asalkan pejantan yang dipergunakan dengan mutu
PROSEDUR PEMBEKUAN SEMEN
DENGAN PENGENCER TRIS AMINO METHAN KUNING TELUR
genetik unggul.
Semen
Pendinginan dari suhu 37oC ke 5oC selama 2 jam
Pendinginan pada suhu 5oC selama 2 jam atau 22 Jam
Gliserolisasi
Penambahan gliserol (diluterB) dengan 3 tahap masing- Masing 2 tahap

berselang waktu 15 menit
Pencetakan
Pengemasan ke dalam mini straw dilakukan di dalam Cool tub
Equilibrasi
Proses adaptasi spermatozoa terhadap pengencer (2 jam) pada cool tub

Pre Freezing
Straw yang telah dikemas dalam rak kemusian dimasukkan ke dalam uap
Nitrogen cair (4-5 cm diatas Nitroge cair) selama 9 menit
Freezing
Straw direndam dalam nitrogen cair

Uji Post Thawing Motility (PTM)
Trinil susilawati
Gambar 7.2. Prosedur pembekuan semen hasil sering menggunakan

pengencer Tris Aminomethan Kuning Telur
PROSEDUR PEMBEKUAN SEMEN DENGAN PENGENCER ANDROMED@
Semen
Pendinginan dari suhu 37oC ke 5oC selama 2 jam
Pendinginan pada suhu 5oC selama 2 jam atau 22 Jam
Pencetakan
Pengemasan ke dalam mini straw dilakukan di dalam Cool tub
Equilibrasi
Proses adaptasi spermatozoa terhadap pengencer (2 jam) pada cool tub

Pre Freezing
Straw yang telah dikemas dalam rak kemusian dimasukkan ke dalam uap
Nitrogen cair (4-5 cm diatas Nitroge cair) selama 9 menit
Freezing
Straw direndam dalam nitrogen cair

Uji Post Thawing Motility (PTM)
Trinil susilawati
Gambar 7.3. Prosedur pembekuan semen menggunakan

pengencer Andromed®.
BAB
VIII
INSEMINASI BUATAN
Inseminasi Buatan (IB) adalah salah satu teknologi Reproduksi yang
mampu dan telah berhasil untuk meningkatkan perbaikan mutu genetik
ternak, sehingga dalam waktu pendek dapat menghasilkan anak dengan
kualitas baik dalam jumlah yang besar dengan memanfaatkan pejantan
unggul sebanyak- banyaknya, Inseminasi Buatan ini sangat kontras dengan
keberhasilan Transfer Embrio didalam perbaikan mutu genetik. Perbaikan
mutu genetik menggunakan IB pada sapi perah dapat digunakan sebagai
progeni tes untuk menghasilkan pejantan unggul yang dapat dimanfaatkan
menghasilkan spermatozoa salah satunya berdasar pada seleksi
ukuran testisnya.
Secara umum IB berfungsi untuk: 1) Perbaikan mutu genetik 2)
Pen- cegahan penyakit menular 3) Rekording lebih akurat 4) Biaya
lebih murah
5) mencegah kecelakaan yang disebabkan oleh pejantan. IB dapat
difasilitasi dengan menggunakan sinkronisasi estrus dan dapat dilakukan
pengaturan jenis kelamin dengan pemanfaatan pemisahan spermatozoa X
dan Y (Ax et al 2008, Susilawati, 2000).
Kelemahan dari IB jika tidak dikelola dengan baik adalah: 1) Bila
seleksi pejantan salah maka bisa menyebarkan sifat jelek 2)
Membutuhkan ketrampilan yang tinggi dari Balai Inseminasai Buatan,
Penympanan selama transport, Inseminator juga peternaknya 3)Bisa
menghilangkan sifat bangsa lokal dalam waktu yang cepat.
8.1. PENAMPUNGAN SEMEN

Pejantan Sapi muda pertama kali dapat ditampung pada umur 12
bulan, Domba, Kambing dan Babi adalah 7 bulan sedangkan kuda 24
bulan (Ax et al, 2008).
Penampungan semen terdapat 3 metode yaitu: Ada beberapa metode:
1) Massage ( Pemijatan/pengurutan) 2) Vagina Buatan dan 3) Elektro
ejacula- tor. Metode Massage digunakan pada unggas, Babi dan lainnya,
vagina buatan
143
144 Inseminasi Buatan
digunakan untuk penampungan semen ternak secara rutin sedangkan

elektro ejakulator digunakan untuk hewan langka atau ternak yang tidak
dapat ditampung menggunakan vagina buatan karena kecelakaan
misalnya.
Secara rutin pejantan sapi dapat ditampung setiap hari senin, rabu
dan jumat, akan tetapi untuk menghasilkan kualitas yang baik dapat
dilakukan seminggu dua kali rata-rata total spermatozoa yang didapatkan
adalah 8-16 bilion. Rata-rata per minggu dihasilkan 30 bilion spermatozoa.
Ternak jantan dapat dilakukan penampungan dengan menggunakan
pemancing ternak betina, sesama jantan maupun pantom. Masing-masing
individu mempunya kesukaan atau kebiasaan sendiri-sendiri. Begitu juga
dengan lokasi penampungan dan tempat juga mempengaruhi mau
tidaknya pejantan ditampung semennya.
Sebelum penampungan semen lokasi tempat penampungan
dibersihkan dengan desinfektan, ternak dimandikan dan bagian prenulum
prepution dibersih-kan, hal ini penting sebab apabila terdapat penyakit
menular akan ditu- larkan ke banyak betina, atau bila tercampur dengan
semen akan menyebabkan kerusakan semen dengan banyaknya
mikroba di dalam semen.
Gambar 8.1. Penampungan semen dengan menggunakan Vagina Buatan

Sebelum dilakukan penampungan pejantan dilakukan fals mounting
3-5 kali yang bertujuan untuk meningkatkan libidonya. Vagina Buatan yang
telah dipersiapkan sesuai dengan suhu badan dan telah diberi vaselin dibagian
ujung karetnya, dengan menggunakan sudut kemiringan 45o dan ujungnya
terdapat tabung reaksi yang telah ditutup bahan gelap agar semen yang
dihasilkan tidak terkena sinar matahari langsung. Semen yang dihasilkan
dilakukan uji kualitas semen, pengenceran dan pembekuan sehingga
dapat digunakan untuk IB.
Gambar 8.2. Penampungan semen babi menggunakan pantom di BIBD

Baturiti Bali
Gambar 8.3. Penampungan semen dengan menggunakan metode masage

dan semen di lakukan penyaringan di BIBD Baturiti Bali.
Tabel 8.1. Frekuensi koleksi semen dan persiapan Vagina Buatan (Ax et al,
2008)
Frekuensi koleksi/
Persiapan Vagina Buatan
penampungan semen
SAPI
Semen ditampung 2-3 kali per Temperatur vagina buatan lebih
minggu penting
dari pada tekanan di penis, sehingga
suhu air perlu dikontrol.
Tekanan perlu dipertahankan hingga
selesai, temperatur di dalam VB
45oC atau berkisar antara 38 –
55oC
DOMBA DAN KAMBING
Domba jantan dapat ditampung Temperatur dan teknik penampungan
be- semen mirip dengan sapi. Domba
berapa kali dalam satu minggu kurang kuat etapi ejakulasinya cepat,
karena mempunyai cadangan di sehingga dibutuhkan koordinasi antara
epididimis. Jumlah ejakulasi pada kolektor dengan domanya.
kambing lebih sedikit dari pada
domba
BABI
Jumlah spermatozoa yang Tekanan adalah yang terpenting saat
dikeluar- penampungan, karena tipe penis
kan banyak, juga karea adanya yang panjang, sehingga saat
keter- sediaan di epididimis. penampungan cara yang digunakan
Tidak direkomendasi untuk adalah kolektor menggenggam
ditampung setiap hari, sebaiknya penisnya, sehingga dalam beberapa
2-5 hari sekali. menit akan keluar
KUDA
Sama dengan babi, jumlah Cuci penis dengan air sabun dan
sperma- cuci
tozoa yang dikeluarkan banyak lagi dengan air bersih untuk
dan direkomendasikan 2-3 hari menghilangkan semua kotoran. VB
selang penampungannya yang digunakan harus lebih besar
dari penis yaitu diperkirakan sebesar
penis saat ereksi
8.2.LIBIDO DAN KUALITAS SEMEN

Penilaian tingkah laku seksual yang selama ini berdasarkan false
mounting, lama ejakulasi, lama libido, daya dorong, daya jepit, daya lompat
dan kualitas ereksi. Hal ini belum ada standard baku metode mana yang
paling akurat untuk menentukan tingginya libido yang berhubungan
dengan kualitas semen.
Hasil penelitian Eniek dkk (2003) yang melakukan pengukuran lama
ejakulasi, jumlah fals mounting dan lama libido pada sapi limosin, Bali
dan
madura seperti yang tertera pada tabel 9.2. Lama ejakulasi adalah sapi
mulai di dekatkan hingga terjadi ejakulasi, Fals mounting adalah jumlah
menaiki yang digagalkan hingga ereksi dan ejakulasi sedangkan libido adalah
mulai didekatkan hingga menaiki.
Tabel 8.2. Rata-rata Lama Ejakulasi, Jumlah False Mounting dan Lama Libido
pada berbagai bangsa sapi potong
Jenis Lama ejakulasi Jumlah False Mounting Libido (detik)
(detik)
Limousin 411,67 ± 131,21 5,07 ± 1,28 28,27 ± 24,53
Bali 541,13 ± 463,85 4,36 ± 1,55 60,87 ± 35,47
Madura 244,33 ± 70,64 4,40 ± 1,59 21,47 ± 33,13
Brahman 343,13 ± 163,09 5,40 ± 1,88 18,60 ± 22,89
Berdasarkan data tersebut di atas bisa diamati bahwa sapi Madura
dan sapi Brahman mempunyai lama ejakulasi yang pendek (cepat) dan
libido yang cepat dibandingkan dengan sapi Limousin dan Bali.
Nilai dari parameter tingkah laku seksual yang tinggi belum tentu
Meng- hasilkan kualitas semen yang bagus pula. Bangsa, umur, lingkar
scrotum, daya adaptasi, situasi lingkungan saat ditampung semennya serta
keahlian petugas yang melaksanakan penampungan juga berpengaruh
terhadap kualitas dan kuantitas semen yang dihasilkan.
Kualitas semen yang diamati terdiri atas: motilitas spermatozoa(%),
volume ejakulasi (cc), konsentrasi spermatozoa per cc semen (juta) dan
total spermatozoa motil per ejakulat (juta).
Tabel 8.3. Kualitas semen pada berbagai bangsa sapi potong
Volume Total spermatozoa
Motilitas ejakula Konsentrasi spermatozoa motil per ejakulat
Bangsa (%) t per cc semen (juta)
(juta)
(cc)
Limosin 66,67 6,04 1.483,80 5.785,30
Bali 67,33 5,71 1.049,47 4.103,00
Madura 71,67 4,92 1.202,27 4.173,93
Brahman 68,33 4,91 1.276,93 4.637,24
Total spermatozoa motil perejakulat merupakan perkalian dari
konsentrasi spermatozoa motil per cc dengan volume ejakulat yang
dihasilkan. Rata- rata total spermatozoa motil per ejakulat tertinggi sebesar
5.785,30 ± 1.410,67 juta terjadi pada sapi Limousin, sedangkan nilai
terendah sebesar 4.173,03
± 1155,04 juta didapatkan pada sapi Madura.
Produksi spermatozoa perejakulat secara berurutan menurun mulai
dari sapi Limousin, Brahman, Bali dan Madura. Secara genetik setiap
bangsa sapi adalah berbeda. Produksi spermatozoa harian pada berbagai
bangsa sapi adalah berbeda. dimana terbesar adalah pada sapi Limousin
diikuti dengan sapi Brahman, kemudian Bali dan Madura. Salah satu
kekurangan sapi pejantan Bali adalah libido yang kurang bagus apabila
dibandingkan dengan sapi pejantan yang lain. Untuk itu perlakuan
penampungan semen perlu dilakukan sedemikian rupa selain stimulasi
seksual dan preparasi seksual yang cukup dalam hal ini pengamatan
parameter kualitas ereksi yang bagus dan suasana lingkungan yang cukup
tenang agar diperoleh hasil semen yang optimal.
Sapi Madura merupakan sapi pejantan terkecil bila dibandingkan
dengan ke tiga bangsa yang lain dengan berat badan rata-rata 350 kg .
Keunggulan pada sapi Madura antara lain adalah dapat tumbuh baik pada
kualitas pakan yang jelek, persentase karkas yang tinggi dengan kualitas
daging yang cukup baik, daya adaptasi yang tinggi terhadap lingkungan
tropis, dapat berlari cepat dan pada pejantan madura umumnya mempunyai
libido yang cukup bagus. Kualitas semen pada sapi Bali lebih baik daripada
sapi Madura dapat disebabkan oleh nutrisi pada saat pejantan tersebut
muda dimana kondisi lingkungan di pulau Madura lebih gersang dan
panas daripada di Bali, sehingga kebutuhan akan protein maupun
energi lebih dapat dipenuhi pada sapi Bali.
Di antara individu pada masing-masing bangsa terdapat perbedaan
kualitas semen yang nyata yaitu pada sapi Limousin, Bali dan Brahman.
Pada sapi Bali dan Brahman perbedaan terjadi karena adanya perbedaan
umur dan lama adaptasi yang menunjukkan bahwa pada masing-masing
sapi bali dan brahman terdapat perbedaan umur dan lama adaptasi sehingga
pada sapi yang mempunyai umur lebih dewasa produksi spermatozoanya
lebih tinggi daripada yang berumur lebih muda terlebih yang masih
pubertas.
Fakta tersebut juga sesuai dengan produksi spermatozoa sapi
madura diantara individu sapi Madura lainnya, karena mempunyai umur
relatif sama dan lama adaptasi yang sama pula. Akan tetapi hal ini berbeda
dengan fakta sapi Limousin yang mempunyai umur relatif sama dan lama
adaptasi yang sama tetapi kualitas spermatozoanya terdapat perbedaan pada
produksi spermatozoanya. Pengaruh individu dan lingkungan cuaca
berpengaruh pula pada kualitas semen. Hal ini menunjukkan bahwa
perbedaan genetik antar individu, pengaruh libido
atau tingkah laku seksual akan mempengaruhi kualitas semen.
8.3.TEKNIK INSEMINASI BUATAN

Teknik atau metode Inseminasi Buatan ada 2 macam yaitu
Rektovaginal dan transservikal. Pada sapi adalah dengan metode
rektovaginal yaitu tangan dimasukkan kedalam rektum kemudian
memegang bagian servik yang paling mudah diidentiikasi karena
mempunyai anatomi keras, kemudian insemination gun dimasukkan melalui
vulva, ke vagina hingga ke bagian servik. Sedangkan pada Babi, kambing
dan domba adalah dengan metode transervikal. Pada kambing dan domba
dapat menggunakan spikulum untuk melihat posisi servik, kemudian
insemination gun dimasukkan hingga mencapai servik, sedangkan pada
babi menggunakan cattether dan dimasukkan hingga kedalam uterus.
Tabel 8.4. Deteksi berahi dan prosedur Inseminasi Buatan (ax et al, 2008)
Deteksi berahi Prosedur Inseminasi Buatan
SAPI
Deteksi berahi dilakukan tiap pagi Sapi yang akan di IB sebaiknya
dan sore, apabila tetap berdiri saat diletakkan dikandang jepit atau
dinaiki berarti berahi diikat dan diupayakan tidak stress,
semen di
deposisikan di bagian uterus
DOMBA
Berahi sulit dideteksi, sehingga deteksi Domba betina diangkat
menggunakan pejantan yang di vasek- bagian belakang, kemudian di IB
tomi yang dilengkai dengan harness pada posisi vagina/servik, selain
crayon itu juga dapat
dengan metode laparoskopi.
BABI
Babi yang lagi berahi dapat Babi betina berahi ditekan
diamati menggunakan pejantan yang bagian punggung belakangnya,
di vasektomi. Betina yang sedang kemudian tabung yang telah
berahi apabila ditekan pada bagian berisi semen dimasukkan
punggungnya akan tetap diam sampai ke servik, disarankan
berdiri. volume banyak dan konsen-
Induk akan berahi setelah 3-8 hari trasinya tinggi
menyapih anaknya, oleh sebab itu
waktu menyapih anak biasanya
digunakan
untuk sinkronisasi berahi
KUDA
Deteksi berahi menggunakan teaser Daerah vulva dibersihkan sebelum
(jantan yang di vasektomi), ditandai di
dengan mengangkat ekornya saat IB, untuk meminimalisasi
di dekati pajantan, tetap berdisi dan kontaminasi, tangan dimasukkan
beberapa kali kencing dan menggunakan glove yang telah
kontraksi pada bagian vulvanya diberi pelicin dan kateter
dimasukkan hingga ke servik,
semen dideposisikan di bagian
uterus.
8.4.TEKNIK INSEMINASI UATAN PADA KAMBING

Peralatan-Peralatan yang digunakan dalam Inseminasi Buatan
pada Kambing seperti pada gambar 8.4
Container Nitrogen Cair Insemination Gun
Berbagai Macam Spiculum

Gambar 8.4. Berbagai alat yang digunakan untuk IB pada kambing
Tahapan-tahapan Untuk Inseminasi Buatan pada kambing

1. Persiapkan Semua Peralatan Untuk Inseminasi Buatan
2. Ikat dengan kuat kambing yang sedang estrus
3. Ambil straw yang berisi semen beku dari Container Nitrogen Cair.
4. Masukkan straw kedalam air kran selama 10 detik
5. Ambil dan bersihkan dengan menggunakan tissue
6. Masukkan ke dalam Insemination Gun
7. Potong Bagian Ujung penutup
8. Masukkan plastik Sheet ke dalam Insemination Gun
9. Angkat kambing sehingga Inseminator Mudah untuk lakukan
Inseminasi Buatan.
10. Masukkan spikulum ke dalam vulva dan buka bagian vaginanya dan
cari posisi serviknya.
11. Masukkan Insemination gun yang telah dipasang straw, ke dalam
vagina sampai masuk ke dalam servik.
12. Keluarkan semen pada posisi servik
13. Tarik Insemination Gun
Keberhasilan IB pada kambing lebih rendah dari pada pada sapi karena
terdapat beberapa kesulitan yaitu:
1) Tanda-tanda berahi pada kambing sulit diamati karena tidak mengeluarkan
suara gaduh, sehingga deteksi berahi untuk kambing yang paling tepat
adaah dengan menggunakan pengusik pejantan.
2) Teknik IB menggunakan transervikal, sehingga menggunakan
spikulum, pada kambing lokal umumnya menggunakan spikulum
manusia sehingga kesulitan menemukan bagian servik, sehingga
dibutuhkan spikulum yang dapat mencapai servik.
Gambar 8.5 Tahapan IB pada kambing
BAB
IX
FAKTOR-FAKTOR YANG
MEMPENGARUHI DAN
EVALUASI
KEBERHASILAN
INSEMINASI BUATAN
Inseminasi Buatan (IB) pada sapi merupakan yang pertama
kali berkembang dan hingga saat ini banyak di aplikasikan pada
masyarakat dan terbukti dapat meningkatkan produktiitas sapi, Selain
pada sapi IB juga telah dilaksanakan pada beberapa ternak yang lain yaitu
kuda, kambing, babi dan berbagai jenis unggas.
Keberhasilan Inseminasi Buatan di pengaruhi oleh beberapa hal yaitu:
(1) Kualitas semennya (2) Manusianya (Inseminator dan peternaknya)
dalah hal ketepatan waktu IB dan penempatan semen (deposisi semen)
(3) Fisiologi betinanya.
9.1.KUALITAS SEMEN
Parameter kualitas semen yang terpenting adalah konsentrasi dan
motilitas progressifnya atau total spermatozoa yang bergerak kedepan karena
hanya spermatozoa yang progressif saja yang mampu untuk melakukan
fertilisasi.
Petugas dinas peternakan tingkat propinsi hingga di peternak
termasuk inseminator diwajib kan mempunyai keterampilan di dalam uji
kualitas semen, terutama didalam menentukan motilitasnya, hal ini karena
yang didistribusikan adalah semen yang mempu memfertilisasi, sehingga di
setiap tahapan penyera- han semen beku harus dilakukan uji kualitas
semen. Quality control dengan uji kualitas semen perlu dilakukan secara
periodik seiring dengan cek volume nitrogen cair, sebab satu kali saja
volume nitrogen cair sampai di posisi setelah berdirinya straw saja
dapat berakibat kematian spermatozoa.
153
154 Faktor-Faktor Yang Mempengaruhi Dan Evaluasi Keberhasilan Inseminasi Buatan
Faktor-Faktor yang
mempengaruhi
Keberhasilan IB
Kondisi Fisiologi Betinanya

Manusianya (Inseminator dan Peternak
Kualitas semen
Genetik Anatomi
Inseminator : Ketepatan deposisi, Waktu, Teknik penyimpanan dan Lingkungan
Motilitas dan konsentrasinya
Thawing
Peternak : Deteksi Berahi

Waktu memberitau Inseminator Pemeliharaan
Gambar 9.1. Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan IB
Kualitas Spermatozoa harus

Tetap dijaga
Peralatan Proses pembekuan

Harus Selalu
Terendam Nitrogen
Cair
Saat thawing termasuk

waktu yang kritis
Gambar 9,2. Peralatan penyimpanan semen beku dalam Nitrogen Cair

Kualitas semen harus tetap terjaga, oleh sebab itu semen beku harus
selalu terendam di dalam nitrogen cair, sekali saja tidak terendam maka
spermatozoa beku tidak dapat hidup setelah di thawing. Dalam kondisi
tersebut maka volume nitrogen cair perlu di kontrol agar semen beku tetap
terendam. Apabila di suatu daerah tidak dapat secara kontinyu tersedia
nitrogen cair maka sebaiknya tidak menggunakan semen beku untuk
Inseminasi Buatan, tetapi kawin alam dengan menggunakan pejantan
unggul atau menggunakan semen cair.
9.2. SUMBER DAYA MANUSIA

Yang dimaksud manusianya adalah Inseminator dan peternaknya.
In- seminator menentukan keberhasilan Inseminasi buatan terutama di
dalam (1) Teknik Thawing semen beku (2) Deposisi semen (3)
ketepatan waktu IB.
Efek dari thawing sama dengan saat proses pembekuan terhadap
kualitas semen, apabila salah dalam thawingnya maka membran spermatozoa
akan rusak, proses thawing adalah suatu proses keluarnya intra celluler
cryoprotektan (Misal Gliserol) dari dalam sel dan digantikan lagi dengan air.
Thawing dapat dilakukan dengan air es, air kran maupun air hangat. Pada
proses thawing perlu dilakukan peningkatan suhu yang perlahan, bila
menggunakan air es maka proses thawing lebih lama, sedangkan bila
menggunakan air hangat hanya beberapa detik.
Deposisi semen juga berpengaruh terhadap keberhasilan semen, sema-
kin dalam penempatan semen di dalam organ reproduksi, maka peluang
untuk terjadinya kebuntingan semakin tinggi, akan tetapi harus diyakinkan
bahwa ternak tersebut belum bunting.
Ketepatan waktu IB adalah saat menjelang ovulasi, yaitu kalau pada
sapi apabila menunjukkan tanda-tanda berahi pagi hari maka di IB saat
sore, sedangkan bila tanda-tanda berahi sore hari maka pelaksanaan IB
pagi hari berikutnya. Pelaksanaan IB seyogyanya tidak dilakukan pada siang
hari, karena lendir servik mengental pada siang hari, sedangkan pada pagi,
sore maupun malam lendir servik menjadi encer, hal tersebut juga
berdampak pada keberhasilan IB saat siang yang lebih rendah dari pada
saat pagi, sore atau malam Susilawati, 2000)
Selain inseminator yang berperanan di dalam keberhasilan
Inseminasi Buatan, maka peternak harus mempunyai ketrampilan di dalam
mengidentiikasi berahi. Hal ini sangat menentukan ketepatan IB, Sehingga
apabila peternak
semakin sering melakukan pengamatan berahi maka keberhasilan IB semakin
baik. Kondisi atau waktu yang tepat dari proses melakukan IB adalah
seperti pada gambar 9.3.
Gambar 9.3. Waktu yang tepat untuk Inseminasi Buatan pada Sapi
(Hafez, 2008)
Gambar 9.4. Waktu yang tepat untuk Inseminasi Buatan pada Sapi
Deposisi semen menentukan keberhasilan Inseminasi Buatan,
hasil penelitian Susilawati dkk (2010) menunjukkan bahwa pada sapi
Peranakan Ongole, Limosin dan Simental keberhasilan lebih tinggi pada
posisi 4+ atau modiied (metode ini disebut dengan Deep Insemination).
Posisi modiied
adalah pengeluaran semen dengan inseminastion gun pada posisi 4+
kornua kanan, 4+ kornua kiri, dan di posisi 4.
Gambar 9.5. Teknik Inseminasi Buatan (Hafez, 2008)
Gambar 9.6. Posisi Deposisi semen pada sapi

Deposisi semen 4+ lebih baik diletakkan dikornua uteri yang
ovariumnya sedang ovulasi atau terdapat korpus luteum saat diraba, hal itu
menunjukkan pada oviduk terdapat sel telur, sehingga dengan
menempatkan posisi semen di kornua yang sama akan menghasilkan
kebuntingan yang lebih tinggi.
Deposisi semen 4+ ini juga dapat digunakan pada saat IB agak
terlam- bat, misal tampak berahi pagi, seharusnya sore di IB akan tetapi
inseminator
baru sampai menjelang malam (senja), maka dapat di IB pada posisi 4+ atau
modiied.
9.3. FISIOLOGI SAPI BETINA

Keberhasilan dari IB salah satunya yang terpenting adalah kondisi isio-
logi sapi betinanya.Kondisi isiologi ini dipengaruhi oleh faktor genetik dan
lingkungan.
a. Faktor genetik
Faktor genetik ini bervariasi di antara bangsa dan individunya, hal ini
berhubungan juga dengan ketahanan di daerah tropis. Ternak lokal
mempunyai adaptasi yang lebih baik dibandingkan ternak dari daerah sub
tropis, hal ini akan berdampak pada reproduksinya, karena keberhasilan
reproduksi ditentukan oleh isiologi reproduksinya yaitu dipengaruhi
kondisi hormonal dan neuro hormonalnya. Sebagai contoh adalah
keturunan F2 dari sapi Limousin dan Simental, juga sapi Brahman Cross
ex import sebagaian besar adalah sub fertil (S/C nya tinggi).
b. Faktor Lingkungan
Lingkungan yang mendukung berdampak langsung pada ternaknya dan
secara tidak langsung kepada pakannya, sehingga untuk daerah yang sejuk
dan subur akan lebih mendukung keberhasilan reproduksinya,
dibandingkan di daerah yang panas.
Berdasar pada kedua faktor di atas, maka perlu diatur pemilihan
bangsa di suatu lokasi berdasarkan kondisi alamnya, misalnya ternak lokal
dapat ditempatkan di lokasi yang panas dan tandus, sedangkan sapi
yang berasal dari sub tropis sesuai di daerah yang sejuk dan subur, oleh
sebab itu perlu difahami beberapa jenis ternak yang berasal dari sub
tropis dan tropis yang cocok di lingkungan tersebut.
Pengaruh lingkungan dapat dibedakan menjadi 2 yaitu (1)
lingkungan yang tidak dapat dikendalikan oleh manusia yaitu suhu, iklim,
cuaca, hujan dll
(2) Sedangkan yang dapat dikendalikan oleh manusia adalah manajemen
pemeliharaan yaitu perkandangan, sistem peneliharaan, kualitas dan
kuantitas pakan yang dinerikan, pengendalian penyakit dan sistem
perkawinannya.
Tingkat keberhasilan Inseminasi Buatan atau reproduksi sangat
dipengaruhi oleh lingkungan yang dapat dikendalikan oleh manusia,
sehingga apabila
sistem pemeliharaannya baik, maka kecil kemungkinannya terkena
penyakit dan fertilitasnya tinggi.
Kebutuhan pakan untuk reproduksi sama dengan kebutuhan
hidup pokok (maintenence), sehingga apabila kebutuhan pokoknya
terpenuhi maka ternak akan bereproduksi terutama pada ternak lokal.
Pada ternak sub tropis sering mengalami gangguan reproduksi karena
tidak bisa beradaptasi dengan lingkungan tropis, hal ini disebabkan
hormon-hormon gonadotropin dan steroid tidak dapat dihasilkan secara
optimal, sehingga berdampak pada tidak munculnya berahi atau tidak ovulasi
dan lebih ekstrim lagi adalah kematian embrio dini. Kematian embrio dini
ini banyak terjadi pada sapi Friesian Holstein yang bunting dan
menghasilkan susu, kebutuhan energi dan proteinnya tidak terpenuhi.
c. Anatomi reproduksi dan kondisi hormonnya normal.
Anatomi reproduksi ternak sangat menentukan atas keberhasilan IB,
pada ternak yang anatomi reproduksinya tidak normal pada umumnya
tidak dapat bunting. Cara yang sederhana yang dapat digunakan untuk
menentukan normal tidaknya anatomi reproduksinya dengan memilih
induk yang telah mampu bunting bila digunakan sebagai bibit, karena
induk yang telah mampu bunting berarti anatomi dan hormonnya
dalam keadaan normal.
d. Body condition score (BCS)
Body Condition Score(BCS) dapat digunakan untuk mengukur
kondisi suatu ternak, yaitu termasuk dalam kategori kurus, sedang atau gemuk
(kelebihan berat badan)/Apabila BCS menggunakan Score 1-5, maka
kondisi yang baik untuk bibit adalah 2-4 yaitu dalam kondisi berat badan
yang sedang umumnya isiologinya normal, ternak yang terlalu kurus atau
kegemukan umumnya akan kesulitan dalam bereproduksi,
e. Ekto parasit dan endoparasit
Ektoparasit adalah parasit yang ada di bagian kulit ternak,
misalnya caplak, kudis, kutu dll, sedangkan Endoparasit yang umum pada
ternak adalah cacing. Ternak yang terkena ektoparasit dan atau
endoparasit akan terganggu reproduksinya karena ternak mengalami stress.
Gejala ini paling sering tampak adalah silent heat (tidak muncul tanda-tanda
berahi), tidak ovulasi atau terjadinya kematian embrio, hal ini dapat
dibuktikan bahwa setelah sapi mengalami hal tersebut ditas dan diberi
obat cacing dan dibersihkan kulitnya dari ektoparasit maka tampak
tanda-tanda berahinya.
9.4.EVALUASI KEBERHASILAN INSEMINASI BAUTAN
Jumlah perkawinan perkebuntingan (S/C) merupakan suatu
ukuran untuk mengetahui berapa kali sapi betina dikawinkan sampai
bunting. Nilai normal berkisar antara 1,6 sampai 2,0. Semakin rendah nilai
tersebut menunjukkan tingkat kesuburan sapi semakin tinggi. Besarnya
nilai jumlah perkawinan perkebuntingan dipengaruhi oleh kualitas semen
yang rendah selain kurang trampilnya petugas inseminator di lapang
(Toelihere, 1981a).
Diagnosa kebuntingan pada sapi dapat dilakukan dengan
mengetahui ukuran Non-Return Rate (NRR), palpasi rektal dan Conseption
Rate (CR) (Toeli- here, 1985).
Non Return Rate (NRR) yaitu persentase jumlah ternak yang tidak
kembali estrus antara hari ke 60-90 setelah dikawinkan. Nilai-nilai ini
disebut juga nilai NRR pada 28 sampai 35 hari atau nilai NRR pada 60
sampai 90 hari. Non return rate merupakan kriteria umum yang digunakan
secara luas untuk menentukan kebuntingan. Meskipun demikian terdapat
beberapa kelemahan-kelamahannya yaitu tidak semua ternak dapat diamati
secara cermat sehingga tidak semua ternak yang kembali berahi diketahui.
Ada juga kejadian dimana ternak bunting dapat menunjukkan berahi dan
sapi tidak bunting atau mengalami abortus menunjukkan anestrus
(Lindsay et al.1982).
Palpasi rektal merupakan suatu cara untuk mendiagnosa
kebuntingan. Indikasi ternak bunting dapat diketahui melalui palpasi per
rektal terhadap cornua uteri dimana cornua uteri yang membesar berisi
cairan plasenta (amnion dan allantois), palpasi per rektal cornua uteri
terhadap kantong amnion, Perabaan dan pemantulan kembali fetus di
dalam uterus yang membesar yang berisi selaput fetus dan cairan
plasenta dan melalui perabaan plasenta. Untuk mengurangi resiko yang
mungkin timbul dalam melakukan palpasi rectal baik pemeriksa maupun
ternak maka diperlukan kandang jepit dan sarung tangan yang menutupi
lengan untuk menjaga kebersihan. Palpasi pada 35-40 hari kebuntingan
lebih membutuhkan kemahiran dari pada fase berikutnya. Namun
demikian bila ketepatan hasil bisa diperoleh pada fase ini, maka akan
memberikan nilai ekonomis yang lebih tinggi .
Conception Rate (CR) yaitu persentase sapi betina yang bunting pada
inseminasi pertama yang disebut juga sebagai angka konsepsi. Angka
konsepsi ditentukan berdasarkan hasil diagnosa kebuntingan dalam waktu
40-60 hari
sesudah inseminasi (Toelihere, 1981b ).
Kadar progesteron dapat digunakan sebagai cara untuk mendeteksi
kebuntingan. Sapi yang bunting korpus luteumnya akan tetap persisten selama
bunting sehingga kadar hormon progesterone dalam darah tetap tinggi.
Se- dangkan pada hewan yang tidak bunting kadar progesteron akan turun
akibat regresi korpus luteum pada hari ke 18-24 setelah berahi. Kadar
progresteron lebih dari 11 ng/ml menandakan adanya kebuntingan.
DAFTAR PUSTAKA
Andrews JEA, Smith CA, Sinclair AH. 1997. Sites of estrogen receptor
and aromatase expression in the chicken embryo. Gen Comp
Endocrinol 108:182-190.
Austin CR, Short RV, 1972. Reproduction in mammals. Book 1.

University press.Cambridge: 150.
Ax RL, Dally M, Didion BA, Lenz RW, Love CC, Varner DD, Hafez B
and Bellin ME 2008. Semen Evaluation in Farm Animal
Reproduction ed By Hafez ESE. 7th Lea Febiger : 365 – 375.
Bamba,K, 1988. Evaluation of acrosomal integrity of Boar Spermatozoa by

Bright Field Microscopy Using Eosin – Negrosin Stain .
Theriogenology. June 1988, (29(6):1245-1252.
Bearden JH and Fuquay JW, 1984. Applied animal reproduction 2nd

edition reston publishing company inc. A prentice Halls Company
Virginia:341- 345.
Bearden JH, Fuquay JW and ST Willard.2004 . Applied Animal

Reproduction 6th edition.Pearson.Prentice Hall.Upper Saddle River,New
Jersey 07458
Bedford JM, 1970. Sperm capacitation and fertilization in mammals. Biol.

Reprod. 2 : 28.
Bedford JM and Cooper GW.1978.Membrane fusion events in fertilization

of vertebrate eggs in: Membrane Surface Reviews (Membrane Fusion)
Vol.5 ed.by G Poste and GL Nicolson.North-Holland Amsterdam :
65-125.
Behringer RR, Finegold MJ, Cate RL. 1994. Mullerian inhibiting

substance function during mammalian sexual development. Cell
79:415-425.
Bianchi NO, 1991. Sex determination in mammals. How many genes are
in- volves?. Biology of Reproduction 44 : 393-397.
163
164 Daftar Pustaka
Blakely J dan DH Bade, 1994. Ilmu Peternakan. Edisi Empat. Alih

Bahasa Srigadono B. Gadjah Mada University Press.
Yogyakarta.
Burks DJ, Sailing PM, 1996. Molecular mechanisms of fertilization and

activa- tion on development. Animal Reproduction Science.
28: 79-86.
Cabrita E., Alvarez R., Anel E and MP Haerriez, 1999. The Hipoosmose
Swell- ing Test Performed with Counter : a method to assay fuctional
integrity of sperm membrane in rainbow trout. Anim Reprod Sci
55 : 279 -287
Chang,M.C.(1951): Fertilizing capacity of Spermatozoa deposited in

fallopian tubes, Nature, 168:997-998
Correa JR and PM Zavos.1994.The hypoosmotic Swelling test:its

employment as an assay to evaluate the functional integrity of the
frozen-thawed bovine sperm membrane. Theriogenology.42:351-
360
Corteel JM (1977) Production , storage and Insemination of Goat

Semen. Proceedings of the symposium on Management of
Reproduction in Sheep and Goats. Am. Soc Anim Sci, 1977,
41-57
Cross Nl, Meizels, 1989. Methods for evaluating the acrosomal status of
mammalia sperm Biol. Reprod.41: 635 – 641.
Dasgupta, Mills SCL, Fraser CR, 1993. Ca2+ regulating mechanism that
modu- late bull sperm capacitation and acrosomal exocytosis as
determined by chlortetracycline analysis. Mol. Reprod. Dev. 40
: 233-241.
De Jonge CJ, Flaherty SP, Barness AM, Swann NJ, Mathew, 1997. Failure
of multitube sperm swim-up for pre selection fertility and sterility
Vol. 67 no. 6 : 1109-1114.
Dowson RMC, Elliot DC, Elliot WH, Jones KM, 1986. Data for
biochemical research 3rd edition. Oxford Science. Publication. New
York: 514-515
Einarsson S, 1992. Concluding Remarks. In : Inluence of Thawing Method

on Motility, Plasma Membrane Integrity and Morphology of
165
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati,
M.S.
Frozen - Thawed Stallion Spermatozoa. (Borg K, Colenbrander B,
Fazeli A, Parlev- liet J and Malmgren L). Theriogenology Vol. 48
Th. 1997 : 531 – 536
Elbrecht A, Smith RG. 1992. Aromatase Enzyme activity and sex`determination

in chickens. Science 255:467-470.
Ellegren.H. (2001) Hens, Cocs and Avian Sex determination aques for
genes or Z or W . Embo Report. Vol 2, No 3 : 192-196
Florman HM, Arnoult, C., Kazam I.G, Li.C and O’toole,C.M.B, 1998. A
Per- spective on the control of mammalian fertilization by egg-
activated ion channels in sperm : A tale of two channels. Biol
Reprod. 59: 12-17.
Enniek H, Susilawati T dan Hakim L 2004 Pengaruh Tingkah Laku

Seksual Terhadap Kualitas Semen pad Berbagai Bangsa Sapi
Potong. Thesis. Program Pasca Sarjana universitas Brawijaya
Malang.
Foote RH, 1993. Artiicial Insemination. In : Reproduction In Farm

Animal. (E.S.E. Hafez). 4th Edition. Lea and Febiger.
Philadelphia : 535.
Fraser LR, 1995 Cellular biology of capacitation and the acrosome reaction.
Human Reprod, 10 Suppl 1, : 22-30.
Fraser LR, Ebeydeera LR, Niwa K, 1995. Ca++regulating mechanism that

modu- late bull sperm capacitation and acrosomal exocytosis as
determined by chlortetracycline analysis. Mol-Reprod Dev., 40 :
233 - 241.
Fraser LR, 1998 Sperm capacitation and the acrosome reaction . Human
Re- prod 13.1 : 9-19
Froman DP, Kirby JD and Proudman JA, (2000) Reproduction in Poultry:

Male and Famale. In Reproduction in Farm Animal ed by ESE
Hafez , 7th. Blackwell Publishing : 237 – 258.
Fukui Y, Sonoyama T, Mochizuki H, Ono H, 1990. Effect of heparin

dosage and sperm capacitation time on in vitro fertilization and
cleavage of bovine oocytes maturated in vitro. Theriogenology,
34 : 579-591.
Freshney RI, 1987. Culture of Animal Science a Manual Basic Technique. 2

nd
Edition. Willey-liss. New York.
Garner DL dan Hafez ESE, 2008. Spermatozoa and seminal plasma in

reproduction in farm animals 7th edition. Ed by Hafez ESE, Lea
and Febiger. Phladelphia: 96-110
Geier MR, Young JL and Kesster D, 1990. Too much or too little
science in sex selection techniques? Fertil. Steril, 53: 1111-1112.
Gomes WR, 1977. Artiicial Insemination. In Reproduction in Domestic

Ani- mals. 3 th Edition. Edited by Cole HH and Cupps PT.
Academic Press. New York.
Gordon I, 1994. Laboratory production of cattle embryos CAB International

: 143 –150.
Graves JAP, 1994. Mammalian Sex Determining Genes in the Differences

Be- tween The sexes ed by RV Short and E. Balaban. Cambridge
University Press: 397-418.
Hafez , ESE (2008a) Anatomy of Male Reproduction in Reproduction

Farm Animal ed by ESE Hafez 7th edition Blackwell
Publishing: 3-13
Hafez, ESE (2008b) Preservation and Cryopreservation of Gamet and

Embryos in Reproduction Farm Animal ed by ESE Hafez 7th
edition Blackwell Publishing: 431-442
Hafez ESE and Hafez B (2005) X and Y Chromosome-Bearing

Spermato- zoa. In Reproduction in Farm Animal ed by ESE
Hafez , 7th.Blackwell Publishing : 390 : 394.
Hirai M, Cerbito WA, Wijayagunawardane MPB, Braun J, Leidl W, Ohosaki

K, Matsuzawa T, Miyazawa K and Sato K, 1995. The Effect of
Viscosity of Semen Diluents on Motility of Bull Spermatozoa.
Theriogenology. vol. 47. Th. 1997 : 1463 – 1478
Jeyendran R.S, Van der van ,H.H and M. Perz-Pelaez. 1984. Development
of an assay to acces the fungtional integrity of the Human Sperm
Mem- brane and its Relationship to other semen characteristics. J.
Reprod.Fert, 70:219-228
Kaul G, Singhs S, Gandhi KK, Anand SR, 1997. Calcium requirement and
time course of capacitation of goat spermatozoa assested by
chlortetracycline assay. Andrologia. 29 .5: 243-51.
Koopman P, 1995. Molecular biology of SRY and its Role in sex

determination in mammals. Reprod.Fertil. Dev. 7: 712-722
Kubus SA.2000. Handbook for swine Artiicial Insemination. Marcar, S.A.
press. Madrid, Spain.
Lechniak D, Kedziesski A, and D Stainislawski. 2002. The of HOS test to

evaluate membrane functionality of boar sperm capacitated in vitro.
Reprod domest. Animals 37 (6): 379-30
Lelannou,D, Calleu,D, Boujard.D. and Seqalin.J (1985) Stabilization of

Nuclear Chromatin in Human Spermatozoa during Capacitation in
vitro in human in vitro Fertilization edited by J testart and R.
Fryman. Elseiver, Amstrdam: 149-152.
Lindsay DR, KW Entwistle and A Winantea, 1982. Reproduction in

Domestic Livestock in Indonesia. Australia University.
Queensland
Malmgre L, Martinez HR, 1996. Change in sperm motility and plasma

membran integrity in equine spermatozoa after storage under
different conditions. Presented by 13 th international congress on
animal reproduction poster session : 24-6
Mattioli M, Barboni B, Lucidi P, Seren E, 1996. Identiication of

capacitation in boar spermatozoa by chlortetracycline staining.
Theriogenology, 4: 373-376.
Masuda H, 1992. Artiicial Insemination Manual For Cattle. Association of

Livestock Technology Japan.
Mc Clure RD, Nunes L, Tom R, 1989. Semen manipulation:

Improved sperm recovery and function with a two layer percoll
gradient. Fertil. Steril. 51 : 5
Mohri H. 1997. New horizons in sperm cell research. Japan Scientiic Societies
Press. Tokyo: 474.
Miller,D.J., Macek,M.B., and Shur,B. 1992 Complementarity between sperm

surface β-1,4-galactosyltransferase and egg-coat ZP3 mediates sperm-
egg binding. Anim Sci, 37-73
Miyazaki S, Hashimoto N,Yoshimoto Y,Kishimoto T, Igusta Y and

Hiramoto Y .1986. Temporal and partial dynamics of the periodic
increase in intercellular free calcium at fertilization of golden
hamsters eggs. Dev.
Biol,118 :259-267.
Maraud R, Vergnaud O, Rashedi M. 1990. New insight on the

mechanism of testis differentiation from the morphogenesis of
experimentally induced testes in genetically female chicken
embryos. Am J Anat 188:429-437.
Mori K, Daitoh T, Kmada M, Maeda N, Maegawa M, Hirano K,

Irahara M, Aono T, 1993. Blocking of human fertilization by
carbohydrates. Human Reproduction.8: 1728-1732.
Nakabayashi O, Kikuchi H, Kikuchi T, Mizuno S. 1998. Differential

expression of genes for aromatase and estrogen receptor during
gonadal development in chicken embryos. J Molec Endocrinol
20:193-202.
Nagae T, Yanagimachi R, Srivastava PN and Yanagimachi H 1986.

Acrosome Reaction in Human Spermatozoa.Fertil.Steril 45 :701-707.
Test in equine spermatozoa. Theriogenology. 51: 721-727
Neild D, Chaves G, Flores M, Mora N, Beconi M and A Aguero,

1999.Hypoos- motic test in equine spermatozoa. Theriogenology,
51:721-727
Nishikima A, Yamada M, Minami N, Utsumi K, 1997. Evaluation of

acrosomal status of bovine spermatozoa using concanavalin A
lectin. Theriogenol- ogy .48: 1007-1016.
Nishikimi H, Kansaku N, Saito N, Usami M, Ohno Y, Shimada K. 2000.

Sex differentiation and mRNA expression of P450c17, P450arom,
and AMH in gonads of the chicken. Molec Reprod Dev 55:20-
30.
Partodihardjo S, 1982. Ilmu Reproduksi Hewan. Mutiara. Jakarta.
Perez LJ, Varcarcel MA, de las Heras, Mozes D, Baldassarre H, 1997. The
Stor- age of Pure Ram Semen at Room Temperature Result in
Capacitation of A Subpopulation of Spermatozoa.
Theriogenology, 47: 549-542.
Pineda. R (2005a) Male Reproductive System in Mc. Donald Veterinary En-

docrynology and Reproduction 5th ed by R Pineda. Black well
publishing
: 239 – 282
Pineda .R (2005b) The Biology of Sex. in Mc. Donald Veterinary
Endocrynology and Reproduction 5th ed by R. Pineda . Black well
publishing: 201- 239
Piko L and Tyler A.1964.Fine Structural studies of sperms penetration in
the rat. Proceeding of the 5th International Congress on Animal
Reproduct- ion.Trento, Italy Vol.2:372-374
Piko L.1967. Immunological Phenomena in the Reproductive Process.

Int.J.Fertil.12:377-383.
Rachmawati, 2010. Metode Pencucian dan Pengenceran Semen untuk

Memper- tahankan Kualitas dan Integritas membrane Spermatozoa Babi.
Disertasi, Program Doktor Pertanian Universitas Brawijaya.
Reymon CS, Kettlewell JR, Hirsch JR, Bardwell B VJ and Zarkower D ;

1999. Expression of DMRT in the genital ridge of mouse and
chicken embryos suggest a role in vertebrate sexual
development. Ev. Biol. 215, 208- 220.
Scheib D. 1983. Effects and role of estrogens in avian gonadal

differentiation.
Differentiation 23:S87-S92.
Shan Z, Nanda I, Wang Y, Scunid M, Vortkamp A and Haaf T

(2000) Sex speciic expression of an evolutionary conserved male
regulatory gene, DMRT1. in Birds, Cytogenet, 89, 252 – 257.
Svivaji S, Scheit KH and PH Bhargava.1999 Proteins on plasma semen,

John Willey and Sons. New York.
Susilawati T, Sumitro SB, Harjopranjoto S, Mantara Y, Nuryadi, 1999.

Pola kapasitasi spermatozoa X dan Y sapi hasil pemisahan
menggunakan il- trasi sephadex dan sentrifugasi gradien densitas
percoll. Jurnal penelitian ilmu-ilmu hayati 11 : 29-40.
Susilawati .T 2000 Analisa Membran Spermatozoa Sapi Pada Proses

Seleksi Jenis Kelamin. Disertasi Program Pasca Sarjana Universitas
Airlangga Surabaya.
Susilawati T, Hardjopranjoto S, Sumitro SB, Hinting A, 2000. Perubahan

Fungsi Membran Spermatozoa Sapi Hasil Sentrifugasi Gradien Densitas
Percoll Pada Proses Seleksi Jenis Kelamin. J. Ternak Tropika.
Vol.1
Toelihere MR,1993. Inseminasi Buatan Pada Ternak. Penerbit Angkasa.

Bandung.
Toyoda.Y., Yokoyama,M., and Hoshi.T (1971) : Studies on the fertilization
of mouse eggs in vitro, Jpn. J. Anim. Reprod., 16:147-157.
Yanagimachi R and Chang MC.1963.Fertilization of hamster egg in vitro.

Nature, 200 :282-282
Yanagimachi R,1977. Specivicity of sperm-egg interaction

in:Immunobiology of gametes, ed. by. M Edididn and MG Johnson.
Cambridge University. press.London:255-295.
Yanagimachi R, 1981 Mechanisms of fertilization in mammals In:

Fertilization and embryonic development in vitro ed.by.L.Mastroinni
and JD Biggers. Plenum press New York:81-182
Yanagimachi R, 1988. Mammalia Fertilization. In The physiology of

Reproduc- tion Vol.1. ed.by. Knobil E, Neill JD. The Physiology of
Reproduction. Raven Press, Ltd., New York.Capter 5 : 135 -
185.
Youssef HM, Doncel GF, Bassiouni BA, Acosta AA, 1997. Effect of
sperm viability, plasmalemma integrity and capacitation on pattern of
expression of mannosa-binding sites on human sperm. Arch
Androl. 38:1 : 67-74
Vaillant S, Dorizzi M, Pieau C, Richard Mercier N. 2001. Sex Reversal

aromatase in chicken. J Exp Zool 290:727-740.
Valcarcel A, Heras de las MA, Perez L, Moses DF, Baldassaree H, 1997.

Ases- ment of the acrosomal status of membrane-intact ram
spermatozoa after freezing and thawing by simultenous
lectin/Hoechst 33258 staining: 556-559
INDEKS
A betina xvii, 1, 9, 10, 11, 24, 35, 37,
acrosomal caps 67 38, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 65,
acrosome cap 26 90, 122, 125, 127, 138, 144,
adenil 16, 32 149, 160
Adenosine Monophosphate 15 Biokimiawi 8
adenylate cyclase 44, 63 Body Condition Score 159
adrenal cortex 33
aerob 17, 131 C
Akrosom v, xvi, 4, 5, 6, 27, 48, 51, caput 15
52,
cauda 28,43,46
53, 54, 56, 58, 61
caudal epididimis 15
Aksonema 6
central axonemal 4
albumin 41, 43, 49, 57, 62
chlortetracycline 39, 164, 165, 166,
ampulla 1, 40, 62, 67
167
Andrew 11
Chlortetracycline 39, 112
androgen 11, 14, 32, 33
citokimia 51
anhydrose 40
cold shock 96, 126, 129, 134, 135,
anion 18
136, 139
anterior 3, 5, 106
colorimeter 98
anterior nucleus 3
corpus epididimis 15
apical 6
cover glass 94, 95, 98, 106, 113
apical ridge 6
critical role 10
Apical ridge akrosom 103
CTC xvi, xvii, 59, 107, 108, 112, 113
asam askorbik 14
D
B
DABCO 112, 113
basal plate 6
debris 92
berahi 43, 149, 150, 151, 155, 156,
157, Dehidrogenase 17
159, 160, 161
171
172 Indek
s
Deposisi xviii, 155, 156, 157 F
diiksasi 113 Farm animal reproduct-ion v
DNA 5, 7, 8, 9, 22, 77, 78, 88, 90,
122
Droplet Distal 6
Droplet Proximal 6
duktus deferens 12
dynein 8
E
ektoparasit 159
Ellegren 10, 165
enzim 1, 5, 7, 8, 11, 14, 16, 17, 32,
40,
48, 51, 52, 54, 58, 60, 61, 67,
72,
73, 74, 82, 89, 122, 132
enzimatis 1, 53, 73, 74
enzim hidrolitik 5, 82
eosin negrosin 96, 105, 107, 108
epididimis xv, 12, 13, 14, 15, 21, 24,
34,
37, 41, 42, 43, 46, 48, 61, 65,
70,
88, 91, 94, 117, 122, 146
epithel 24, 25, 29, 30, 32, 35
Epithel seminiferi 22
equatorial 6, 56, 71, 76, 85
equilibrasi 137, 139
ergotionine 14
erlenmeyer 132
ESE Hafez v, 165, 166
esterase 5
Estradiol 11, 32
exocytosis 2, 77, 79, 82, 164, 165
M.S.
Fertilisasi v, 2, 65, 80 gonadocrinin xv, 33
ibronektin 43 gonadotropin 14, immunocitoki
30, 31, 33, 35, mia 51
ibrous sheeth 28 36,
ilamen 6 inhibitor
159
Filtrasi 92 methyl
gradien ion 46
isiologi v, 16, 33, 65, 95, 158 xanthines 16
Grifiths 10
lagela 3, 94 Inorganik 8
luiditas 49, 50 Inseminasi v, xviii, 2, 17,
H 37, 38, 83,
follikular 45 haemositometer. 128, 140, 143, 149, 150,
formalin 98 98 151,
fosfat 16, 17, 18, 126 helix 153, 155, 156,
fosfoglyceromutase 17 mitokondria 49 157, 158, 169
fosfopiruvat 17 Hematoxyllin- Inseminasi Buatan v, xviii,
eosin 103 2, 17, 37,
Fruktosa 12, 14, 17, 117, 130
Hialuronidase 8, 83, 140, 143, 149, 150, 151,
Fruktose 18
53, 68 153,
Hinsch 65 155, 156, 157,
G
hiperaktivasi 1, 158, 169
Garner dan Hafez 9, 14, 15, 19, 61, 62, 63 inseminator 140,
22,
hipertropi 31 141, 153, 155, 157,
24, 30, 130
hipoplasia 35 160
Germinal epithel 35
homolog 57, 70,
germ layer 24 81
Giemsa 103 hormon gonadal
glikolisis 16, 17, 18 10
glikolitik 45 hyaluronidase 5,
51, 67, 68, 73,
glikoprotein 43, 49, 51, 53, 57, 68,
74
69,
Hyaluronidase
70, 72, 73, 82
51, 52, 67, 73
Gliserol 127, 130, 131, 133, 136,
Hydrochloride
155
Monohydrate
glukagon 14 113
glukose 17 Hypoosmotic
Glurakal dehide 103 swelling 114
Glycerylphosphorylcholine 14
glyseryphosphorylcholine 14 I
gonadal cortex 11 ikatan divalent
8
174 Indek
s
integritas i kalium 17, 18
membran n 6 kation 18
xviii, 103 1
kelenjar assesories 12
inti xvi, 3, 5, 6, v
7, 8, 26, 27, i kelenjar bulbouretralis
v J 12
28, 48, 51,
o jantan xv, xvii, kelenjar vesikula 14
75, 88, 1, 3, 9, 10,
89, 90 1 11, 14, 21,24, Kumulus Oophorus 43
intrase , 30, 31, 32,
lluler 35, 42, 90, L
46, 58, 4 92, 103, LDH-X 8
59, 60, 1
61, 80, 106, 122, 127, libido 24, 35, 146, 147,
,
82 144, 146, 150 148
in vitro 4 jelly 57, 58 ligand 74
1, 16, 3 Jeyendran 114, 115, lipida 49, 50, 59, 62
19, , 166
38, juvenil 30
40, 6 M
41, 2 magnesium 17
42, , K
43, maintenence 159 abnormal 103
1
46, 62, meiosis 5, 65, 76, motil 12, 74, 85, 91, 93,
1
67, 75, 77, 78 96, 106, 115,
9
83, 89, membran dalam 6 118, 119, 123, 128,
106, i
o membran luar 6 138, 147
119,
n metabolisme zigot Motilitas 19, 62, 91, 92,
1 93, 95, 118,
2 65
C 121, 139, 147
2 methileen blue 114
a
, midle piece 4
+
+ mid piece 103 N
1
6 mikroskop epi Na Sitrat 133
5
5 luoresen xvii, 39 Neild 115, 168
8
, mikrotubulus 4, 6, Nomenklatur 102
,
8 Nucleotid 16
1
5 mitochondria 4, nucleus 3, 88, 89, 90
6
9 32, 122
7
, mitokondria 6, 8,
,
18, 28, 32, 40, 49, O
6 oksidasi 16, 17, 18, 48
1 137
0
7 oksidatif telur 78
, Morfologi
0
M.S.
oosit xvi, P f 91
xvii, 1, 2, 5, r pre
19, 37, 38, paracrine xvi, 31,
41, 33 a ksi
53, 65, pellusida xvii, 1, 8, c ste
67, 68, 38, 53, 57, 60, 62, t nsi
84, 86, 67, 82, 84, i 85
87 85, 88
o pr
Oosit 67 penetrasi 1, 2, 8,
46, 67, 68, 69, 71, n e
outer ibril 4
72, sp
ovum 8, 84,
73, 74, 78, 9 er
106, 127
106 1 m
peptida 14, 70 ati
phospoliphid p c
membran 60
o fra
Photomicrograph s cti
s xvi, 44
t on
Pipet eritrocyt 98
91
plasmalogen 19
s pri
polipeptida 43
p nc
polypeptida 57
e ip
polyspermi 82, 83,
84 r al
posterior 6 m pi
p a ec
o t e
s i 4
t c principal segments 6
proacrosin 5, 60
f f prolaktin 14, 30, 32
r r protoplasmic droplet 104
a a
c c Q
t t Quality control 153
i i
o o R
n n Rahmawati 116
Rektovaginal 149
176 Indek
s
rektum 14, reproduksi xv, 1, 2, 127, 165 33, 65
149 10, 21, 32, 35, 37, seminiferi xv, 21, Serum 131, 132
relaksin 14 22, 23, 24, 29,
30, sexual dimorphic 11
38, Scanning
40, 32 silent heat 159
Elektron
44, Sentrifugasi 132, silinder sheat 28
65, Microskop
169 skrotum 36
92, 109 Scheib
sertoli xv, xvi, smith 11
102, 10, 169
116, 22, 24, 28, 30, sorbitol 14
segmen 31, 32,
122, spermatid xv, 22, 24,
equator 72,
127, 76 25, 26, 27, 28,
155, 34
sekresi
158,
ampula 12 spermatogonia 24, 30,
159
sel gamet 34
reseptor
21, 22, 30, Spermatogonia 22, 24
1, 11, 30,
135 spermatosit primer 22,
32, 33, 38,
58, 59, sel sertoli xv, 24
xvi, 22, 24, spermatosit sekunder
60, 61, 69,
28, 30, 31,
70, 71, 72, 22, 24, 25 spermatozoa
74 32, 33,
v, x, xv, xvi, xvii, xviii, 1,
65
respirasi 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,
16, 45, sel telur xvi, xvii, 1,
10, 11, 12, 15,
125 37, 38, 39, 41, 42,
16, 17, 18, 19, 21,
Reymon 43, 44, 48, 52, 53,
22, 24, 26, 28,
10, 169 57, 58, 65,
29, 30, 31, 34, 35,
Round 67, 69, 70, 71, 73,
37, 38, 39,40,
spermatid 75, 76, 77,
26 41, 42, 43, 44, 45,
78, 79, 80, 81,
46, 48, 49, 50,
ruminansi 82,83, 84, 86, 88,
a 14 51, 52, 53, 54, 55,
89, 90,
56, 57, 58, 59,
157
60, 61, 62, 63, 65,
S seminal xv, 11, 12,
66, 67, 68, 69,
13, 14, 17, 38, 43,
saluran 70, 71, 72, 73, 74,
reproduksi 61, 65, 74, 95,
75, 76, 77, 78,
1, 21, 37, 117, 122, 127,
40, 44, 79, 80, 81, 82, 83,
165
84, 85, 86, 87,
65, seminal plasma
92, 88, 89, 90, 91, 92,
xv, 11, 12, 13, 14,
122, 38, 43, 61, 65, 74, 93, 94, 95, 96,
127 97, 98, 99, 100,
95, 117, 122,
101, 102, 103,
M.S.
104, 168, 169,
105, 170
106, Spermatozoa
108, Histone 8
109,
110,
111,
112,
113,
114,
115,
116,
117,
118,
119,
120,
121,
122,
123,
125,
126,
127,
128,
129,
130,
131,
132,
133,
134,
135,
136,
137,
138,
139,
140,
143,
144,
146,
147,
148,
153,
155,
166,
167,
sperm rich fraction 91
Susilawati 4, 9, 39, 53, 59, 97, 107,
109, 110, 111, 115, 119, 129,
143, 155, 156, 165, 169
T
testosterin 36
Thaller and Cardullo
65 theriogenology 91
transfosforylase 17
Transmisi Elektron Microskop 109
transservikal 149
tubuliseminiferi 3
Tubulus 3
U
Uji mikroskopis 93
Uji Motilitas Massa 93
uretra 12, 21
V
vesicular 12, 15
Viabilitas xvii, 93, 96, 97
vittelin xvii, 48, 77, 83, 85
W
WHO 118
Z
zona pellusida xvii, 1, 8, 53, 57, 60, 62,
67, 82, 84, 85, 88

Buku Spermatologi Bu Trinil

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Buku Spermatologi Bu Trinil

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

SPERM A

Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.

Dilarang keras memfotokopi atau memperbanyak sebagian atau

7.4 Karakteristik bioisika dari beberapa krioprotektan .........................138

2.13 Interaksi paracrine antara sel leydig dan sel sertoli.............................33

6.9 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya...........107

Spermatozoa setelah melakukan penetrasi oosit, menyebabkan aktivasi

1.1. MORFOLOGI SPERMATOZOA

Gambar 1.1. Perbandingan berbagai spermatozoa ternak dan

Gambar 1.2. Spermatozoa sapi diamati dengan mikroskop Differensial

1. Plasma membran 7. Rest of the distal centriole A. Kepala

Gambar 1.3. Struktur internal spermatozoa sapi.

Gambar 1.4. Potongan sagital pada kepala spermatozoa yang terdapat

1.1.3. Ekor spermatozoa

Gambar 1.6. Mitokondria pada bagian leher spermatozoa Diamati

1.2. KOMPOSISI KIMIA SPERMATOZOA

adalah spermatozoa Y. Berdasarkan cara penentuan tersebut diperoleh

4. Spermatozoa X dan Y pada Unggas

1.3. SEMINAL PLASMA

1.3.1. Penghasil seminal plasma (kelenjar assesories)

Gambar 1.7. Kelenjar-kelenjar penghasil seminal plasma

Gambar 1.9. Jaringan epididimis tempat pematangan Spermatozoa

1.3.2. Unsur Biokimia dari seminal plasma

Kualitas semen saat ejakulasi pada sebagian besar ternak adalah

1.4. METABOLISME SPERMATOZOA

1.5. RESPIRASI SPERMATOZOA

Manipulasi Semen dan Mikrofertilisasi Spermatozoa dimasukkan

Spermatozoa yang dihasilkan oleh tubuli seminiferi dikeluarkan ke

Gambar 2.2. Saluran transportasi spermatozoa dan bagian sel di dalam

Gambar 2.4. Histologi Testes

Gambar 2.5. Pembelahan spermatogenesis

Gambar 2.7. Tahapan Miosis II

pada gambar 2,8 dan 2,9

Tahapan perubahan bentuk spermatid dibagi menjadi 4 fase yaitu

Gambar 2.10. Proses spermatogenesis pada setiap siklus

2.3. Peran Hormon pada proses spermatogenesis

Gambar 2.11. Hubungan kontrol fungsi hormon dalam testis

Luteinizing hormon (LH) menstimulasi (+) sel leydig untuk

2.4. Fungsi Steroidogenic

2.5.Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenesis

Spesies Waktu migrasi (Hari)

2.6. Peran skrotum dalam termoregulasi

Gambar 3.1. Gambaran spermatozoa yang belum kapasitasi, Kapasitasi

Gambaran tersebut juga terjadi pada Kambing, Domba, Kerbau dan

3.1. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VIVO

3.2. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VITRO

3.3. FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI KAPASITASI

2. Perubahan pada metabolisme

3. Perubahan dalam ion-ion intraselluler

Gambar 3.5. Mekanisme molekuler yang terjadi pada membran

5. Perubahan pada Inti

6. Perubahan pada selaput Plasma

Gambar 4.1. Terjadinya reaksi akrosom pada saat spermatozoa

Tabel 4.1. Enzim-enzim yang terdapat pada Akrosom

Diketahui sebelum tahun Yang ditemukan setelah

Gambar 4.2. Spermatozoa yang telah mengalami Reaksi Akrosom

4.3. MORFOLOGI DAN KINETIKA REAKSI AKROSOM.

Gambar 4.3. Diagram yang menunjukkan tahapan reaksi akrosom.

Membran akrosom yang terluar relatif stabil dan selaput plasma

2. Sifat Alamiah Exocytotic pada Reaksi Akrosom

3. Waktu Reaksi Akrosom

4. Faktor penyebab alami reaksi akrosom

4. Mekanisme Reaksi Akrosom