Media Farmasi Vol. 13 No.

2 September 2016 : 173-185 173

KANDUNGAN PIPERIN DALAM EKSTRAK BUAH LADA

HITAM DAN BUAH LADA PUTIH (Piper nigrum L.) YANG
DIEKSTRAKSI DENGAN VARIASI KONSENTRASI ETANOL
MENGGUNAKAN METODE KLT-DENSITOMETRI

THE CONTENT OF PIPERINE IN BLACK AND WHITE

PEPPER FRUITS (Piper nigrum L.) EXTRACTED
WITH VARIATION OF ETHANOL CONCENTRATIONS
USING TLC-DENSITOMETRY METHOD

Ni Putu Ermi Hikmawanti, Hariyanti, Cahya Aulia, Vesya Putri Viransa

Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi dan Sains,

Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka, Jakarta
Email: ermy0907@gmail.com

ABSTRAK

Kualitas ekstrak buah lada (Piper nigrum L.) dipengaruhi oleh komponen dan
kadar senyawa didalamnya. Piperin merupakan senyawa alkaloid utama dalam
buah lada. Banyaknya piperin yang larut selama proses ekstraksi dipengaruhi
oleh jenis pelarut yang digunakan. Penelitian ini didesain untuk mengetahui kadar
piperin dalam ekstrak buah lada hitam dan lada putih yang diekstraksi dengan
variasi konsentrasi etanol. Ekstraksi buah lada dilakukan dengan metode ekstraksi
sokhlet menggunakan variasi konsentrasi etanol (60%, 70% dan 96%) dan
kemudian dilanjutkan dengan teknik ekstraksi asam-basa untuk mendapatkan
ekstrak alkaloidnya. Ekstrak alkaloid masing-masing dianalisis pada plat KLT
silika gel 60 F254 sebagai fase diam dan campuran n-heksana:etil asetat (1:1)
sebagai fase gerak. Kadar piperin ditetapkan menggunakan metode KLT-
densitometri pada panjang gelombang 254 nm. Hasil menunjukkan bahwa kadar
piperin tertinggi diperoleh dari ekstrak buah lada hitam menggunakan pelarut
etanol 60% sebagai pelarut pengekstraksi dengan kadar 52,81±4,66 (%b/v)
terhadap ekstrak alkaloidnya. Kadar piperin tertinggi diperoleh dari ekstrak buah
lada putih menggunakan pelarut etanol dengan konsentrasi 96% sebagai pelarut
pengekstraksi dengan kadar 38,72±8,28 (%b/v) terhadap ekstrak alkaloidnya.

Kata Kunci: etanol, piperin, lada, Piper nigrum L., KLT-densitometri

ABSTRACT

Quality of pepper fruit extracts (Piper nigrum L.) is influenced by its components
and concentration of compounds. Piperine is a major alkaloid compound in
pepper fruits.The level of piperine that dissolved during extraction process was
influenced by the type of solvent used.This research was designed to know the
174 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk

level of piperine in black and white pepper fruits extracted with variation of
ethanol concentrations. Extraction of pepper fruits was performed with soxhlet
apparatus using variation of ethanol concentration (60%, 70%, and 96%) and
then continued withacid-base extraction technique to get its alkaloids fraction.
Each of alkaloids fractions was analyzed on silica gel 60 F254 TLC plate as
stationary phase and mixture of n-hexane:etyl acetate (1:1) as mobile phase. The
level of piperine was determined using TLC-densitometry at wavelength 254 nm.
The results showed that highest level of piperine obtained from black pepper fruit
extract using ethanol 60% as extraction solvent with rate of 52.81±4.66(%w/v)
toward its alkaloids fraction. While highest level of piperine obtained from white
pepper fruit extract using ethanol 96% as extraction solvent with rate of
38.72±8.28(%w/v) toward its alkaloids fraction.

Keywords: ethanol, piperine, pepper, Piper nigrum L., TLC-densitometry

PENDAHULUAN
Lada atau yang disebut juga merica (Piper nigrum L.) berasal dari famili
Piperaceae (Vasavirama dan Upender, 2014). Pada umumnya lada hitam (black
pepper) dimanfaatkan sebagai bumbu dapur, sama halnya dengan lada putih
(white pepper). Lada putih diperoleh dari buah lada hitam yang buah-buahnya
dipetik selagi masih hijau atau hampir masak, direndam untuk memudahkan
pengupasan lapisan luar perikarp, lalu dijemur sampai kering (Kartasapoetra,
2004).
Buah lada hitam mengandung alkaloid dan minyak atsiri dengan komponen
felandren, dipenten, kariopilen, entoksilen, dan limonen (Depkes RI, 1980). Lada
hitam juga mengandung antara lain alkaloid piperin (5,3-9,2%), kavisin (sampai
1%) dan metil-pirolin; minyak atsiri (1,2-3,5%); lemak (6,5-7,5%); pati (36-37%)
dan serat kasar (±14%) (Loo, 1987). Buah lada putih mengandung alkaloid seperti
piperin, kavisin, dan metilpirolin, serta minyak atsiri, lemak dan pati. Kandungan
utama dalam lada adalah alkaloid piperin. Piperin memiliki rumus molekul
C17H19NO3 atau (E,E)-1-[5-(1,3-benzodioksol-5-il)-1-okso-2,4-pentadienil]
piperidin, diperoleh dalam bentuk prisma monosiklik dari alkohol dengan titik
lebur 130°C, 1 g piperin larut dalam 15 mL etanol, 36 mL eter dan hampir tidak
larut dalam air (Kar, 2014). Piperin berbentuk kristal berwarna putih kekuningan
dan merupakan alkaloid dari golongan piperidin yang memiliki sifat hampir tidak
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185 175

larut dalam air (40 mg/L pada suhu 18°C), namun mudah larut dalam alkohol (1
g/15 mL) dan eter (1 g/1,7 mL) (Vasavirama dan Upender, 2014).
Piperin memiliki khasiat sebagai antiinflamasi, antimalaria, menurunkan
berat badan, menurunkan demam, menetralkan racun bisa ular, antiepilepsi,
membantu meningkatkan penyerapan vitamin tertentu (Kolhe et al., 2009).
Piperin memiliki aktivitas sebagai analgesik dan antipiretik pada tikus, dan
menunjukkan hasil yang sebanding dengan indometasin sebagai obat standar
(Sabina et al., 2013). Kualitas ekstrak buah lada dipengaruhi oleh kandungan dan
kadar senyawa kimia di dalamnya. Proses ekstraksi buah lada hitam dalam skala
industri digunakan pelarut etanol 60% (Agoes, 2009). Senyawa piperin
merupakan senyawa identitas yang paling banyak terkandung dalam buah lada
serta memiliki beragam khasiat pengobatan, maka perlu dipisahkan secara selektif
melalui penyarian atau ekstraksi.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya, metode ekstraksi
yang paling baik digunakan untuk mengisolasi piperin dari buah cabe jawa adalah
ekstraksi dengan alat sokhlet jika dibandingkan dengan metode maserasi yang
dianalisis menggunakan metode KLT-densitometri. Hasil yang diperoleh
menunjukkan bahwa kadar piperin pada ekstrak cabe jawa yang diekstraksi
dengan alat sokhlet dengan pelarut etanol 95% lebih tinggi yaitu 15,75%
dibandingkan dengan kadar piperin pada ekstrak cabe jawa menggunakan metode
maserasi yaitu sebesar 8,83% (Istiqomah, 2013).
Penelitian ini didesain untuk mengetahui kadar piperin dalam ekstrak buah
lada hitam dan lada putih yang diekstraksi dengan alat sokhlet menggunakan
variasi konsentrasi etanol sehingga diharapkan dapat diperoleh informasi
mengenai konsentrasi etanol yang dapat menghasilkan kadar piperin tertinggi
pada ekstrak buah lada dan bermanfaat untuk pengembangan obat tradisional.

METODE PENELITIAN
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain adalah ayakan
mesh 40, timbangan analitik (PIONEER), perangkat alat soxhlet, rotary
evaporator (EYELA), water bath, indikator pH universal (NESCO), kertas saring,
mikropipet, plat KLT silika gel 60 F254 (MERCK), chamber, UV-Box (CAMAG),
176 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk

perangkat alat Kromatografi Lapis Tipis (KLT)-Densitometri (CAMAG) dan alat-

alat gelas lain.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu simplisia buah
lada putih (Piper nigrum L.) diperoleh dari Balai Penelitian Tanaman Rempah dan
Obat (BALITTRO), Bogor, Jawa Barat pada bulan Maret 2016 dan diidentifikasi
di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Pusat Konservasi Tumbuhan
Kebun Raya, Bogor, Indonesia. Standar piperin diperoleh dari UPT Sumber Daya
Hayati, Padang pada bulan Juni 2016. Pelarut etanol (teknis), akuades, H2SO4
(Merck), eter (Merck), NH4OH (Merck), kloroform (Merck), etanol pro analisis
(Merck), n-heksana (Merck) dan etil asetat (Merck).

JalannyaPenelitian

A. Pembuatan Serbuk Simplisia

Serbuk simplisia buah lada dibuat dari simplisia utuh yang diperoleh dari
BALITTRO dengan cara diblender dan kemudian diayak dengan menggunakan
ayakan mesh no.40.
B. Pembuatan Ekstrak Etanol
Serbuk simplisia sebanyak kurang lebih 50,0 g ditimbang seksama,
kemudian diekstraksi dengan alat sokhlet menggunakan pelarut etanol dengan
berbagai variasi konsentrasi 60%, 70%, dan 96%. Ekstraksi dilakukan sampai
tetesan siklus tidak berwarna lagi. Ekstrak cair yang diperoleh kemudian
dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C.
C. Pembuatan Fraksi Alkaloid
Ekstrak etanol yang diperoleh dilarutkan kembali dengan H2SO4 2%
hingga pH 3-4, kemudian ditambahkan eter hingga lemak menghilang.
Selanjutnya fraksi eter dipisahkan dan fraksi asam dibasakan dengan NH4OH 25%
sampai pH 9-10 dan diekstraksi kembali dengan kloroform sampai tidak berwarna
(Abraham dkk., 2014). Fraksi kloroform selanjutnya disebut sebagai fraksi
alkaloid.
D. Uji Kualitatif Keberadaan Senyawa Alkaloid dengan Metode KLT
Diambil cuplikan standar piperin, fraksi alkaloid buah lada, fraksi eter dan
fraksi asam lalu dilarutkan dengan etanol. Ditotolkan masing-masing cuplikan
 5
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185 177

pada plat KLT silika gel 60 F254 menggunakan pipa kapiler, kemudian dielusi
menggunakan fase gerak campuran n-heksana : etil asetat (1:1). Noda diamati di
bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Keberadaan alkaloid dideteksi
dengan cara menyemprot plat menggunakan pereaksi Dragendorff dan dihitung
masing-masing nilai Rf-nya.
E. Pembuatan Larutan Baku Standar Piperin
Larutan induk (2000 µg/mL) dibuat dengan menimbang seksama 50,0 mg
standar piperin, kemudian dilarutkan dalam etanol p.a sampai tanda batas 25 mL.
Dibuat larutan deret standar piperin dengan 5 tingkat konsentrasi berbeda yaitu
200, 400, 600, 800 dan 1000 µg/mL dengan cara memipet sejumlah larutan dari
larutan induk standar piperin dan dicukupkan dengan etanol p.a dalam labu ukur
(Istiqomah, 2013).
F. Pembuatan Kurva Kalibrasi Standar Piperin
Larutan deret standar piperin kemudian ditotolkan masing-masing 5 µl
pada plat KLT silika gel 60 F254. Plat KLT selanjutnya dielusi dengan fase gerak
campurann-heksana : etil asetat (1:1) dan di-scanning sehingga dihasilkan data
area standar piperin. Berdasarkan area terukur (y) pada berbagai baku kerja
piperin (x), maka dapat dihitung harga koefisien korelasi (r). Bila ada hubungan
linear antara y dengan x maka dihitung persamaan garis regresi y= bx+a (Harmita,
2004).
G. Pembuatan Larutan Uji
Ditimbang seksama kurang lebih 50 mg ekstrak buah lada hitam,
dilarutkan dengan etanol dalam labu ukur 50 mL sehingga diperoleh konsentrasi
1000 µg/mL. Dibuat larutan uji konsentrasi 800 µg/mL, dengan memipet 20 mL
dalam labu terukur 25 mL lalu ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas.
H. Pengukuran Kadar Piperin
Ditotolkan masing-masing 5 µL larutan standar yang telah diencerkan dan
larutan uji pada plat KLT silika gel 60 F254. Plat selanjutnya dielusi dengan fase
gerak n-heksana : etil asetat (1:1), dan diukur dengan densitometer pada panjang
gelombang 254 nm. Data luas area yang didapatkan dari baku standar piperin
kemudian dibuat persamaan kurva baku dengan bantuan Microsoft Excel 2007.
Persamaan kurva baku yaitu y= bx + a dengan y= luas area, x= kadar piperin
178 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk

(µg/mL). Luas area sampel yang didapatkan dari hasil scan pada alat densitometer
kemudian dimasukkan ke dalam persamaan garis kurva baku, maka didapatkan
masing-masing persentase kadar piperin pada ekstrak buah lada hitam
(Murrukmihadi dkk., 2013).

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Ekstraksi
Metode ekstraksi yang dipilih untuk mengekstraksi adalah metode yang
cocok dengan sifat bahan yang digunakan. Metode ekstraksi dengan alat sokhlet
merupakan salah satu metode yang cocok untuk mengekstraksi alkaloid (Harbone,
1996). Penggunaan pelarut yang ideal untuk mengekstraksi adalah pelarut yang
menunjukkan selektivitas maksimal, mempunyai kapasitas terbaik, dan
kompatibel dengan sifat bahan yang diekstraksi (Agoes, 2007). Penggunaan cairan
pelarut pengekstraksi berupa campuran etanol-air mengandung air yang cukup
untuk membantu proses difusi pelarut ke dalam sel. Proses difusi biasanya akan
ditingkatkan apabila sel tanaman mengalami perlakuan dengan air, atau pelarut
yang mengandung air, yang akan menyebabkan terjadinya pengembangan
(swelling) sel sehingga terjadi peningkatan permeabilitas atau pecahnya dinding
sel (Agoes, 2009).

Tabel I. Hasil rendemen ekstrak etanol buah lada terhadap simplisia kering*

Rerata rendemen ekstrak etanol (%) ± SD

Pelarut pengekstraksi
Buah lada hitam Buah lada putih
Etanol 60% 40,82±1,07 20,10±0,44
Etanol 70% 14,85±0,91 22,46±1,64
Etanol 96% 11,98±1,29 36,10±1,29
*pengujian dilakukan dengan 3 kali pengulangan

Berdasarkan hasil ekstraksi dengan pelarut etanol pada Tabel I, perbedaan

rendemen yang diperoleh menunjukkan bahwa dengan adanya perbedaan
konsentrasi etanol yang digunakan untuk ekstraksi dapat mempengaruhi rendemen
yang dihasilkan. Besar kecilnya persentase rendemen ekstrak menunjukkan
keefektifan proses ekstraksi, artinya banyaknya zat aktif yang ikut terekstraksi
juga dapat dilihat dari besarnya nilai rendemen ini. Pada ekstraksi buah lada
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185 179

hitam, pelarut etanol 60% merupakan pelarut yang paling banyak menghasilkan
rendemen ekstrak, sedangkan pada ekstraksi buah lada putih, pelarut etanol 96%
merupakan pelarut yang paling banyak menghasilkan rendemen ekstrak.
Selanjutnya, pembuatan fraksi alkaloid dilakukan untuk menghindari
gangguan selama penetapan kadar piperin dari metabolit sekunder selain alkaloid
yang terdapat pada bahan. Fraksi alkaloid diperoleh melalui proses ekstraksi
dengan teknik ekstraksi asam-basa. Alkaloid mudah larut dalam air jika berupa
garam, dengan penambahan asam. Alkaloid dalam bentuk bebas atau bentuk
basanya mudah larut dalam pelarut organik namun sukar larut dalam air (Sirait
2007). Berdasarkan hasil pada Tabel II, baik pada buah lada hitam maupun buah
lada putih yang diekstraksi dengan pelarut pengesktraksi etanol 96%
menghasilkan rendemen fraksi alkaloid paling besar.

Tabel II. Hasil rendemen fraksi alkaloid dari ekstrak etanol buah lada*
Rerata rendemen fraksi alkaloid terhadap
Pelarut pengekstraksi ekstrak etanol (%) ± SD
Buah lada hitam Buah lada putih
60% 18,25±0,78 17,01±0,49
70% 20,46±1,69 18,46±0,48
96% 28,22±1,16 20,31±0,58
*pengujian dilakukan dengan 3 replikasi

B. Uji Kualitatif Keberadaan Senyawa Alkaloid dengan Metode KLT

Proses identifikasi keberadaan senyawa alkaloid yang terkandung dalam
ekstrak dilakukan dengan uji kualitatif menggunakan metode KLT. Pada
pengujian ini, keberadaan senyawa alkaloid tidak hanya diujikan untuk sampel
fraksi alkaloid dari ekstrak etanolnya saja, tetapi juga fraksi eter dan fraksi asam.
Pada Gambar 1, dapat dilihat bahwa sampel ekstrak menunjukkan keberadaan
piperin karena sampel memberikan noda pada nilai Rf yang mirip dengan standar
piperin, yaitu sekitar 0,6 dengan deteksi menggunakan sinar UV 254 nm,
sedangkan pada fraksi eter dan fraksi asam tidak tampak noda. Hal ini berarti
bahwa proses ekstraksi asam-basa yang dilakukan untuk menarik alkaloid,
termasuk piperin, dalam ekstrak etanol sudah maksimal.
180 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk

(a) (b)

Gambar 1. Hasil identifikasi keberadaan senyawa alkaloid pada fraksi alkaloid

dari ekstrak etanol lada hitam (a) dan lada putih (b) pada plat KLT
dengan pengamatan di bawah sinar UV 254 nm
Keterangan:
P= Standar piperin F2= Fraksi eter dari ekstrak etanol 70%
S1= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 60% F3= Fraksi eter dari ekstrak etanol 96%
S2= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 70% F4= Fraksi asam dari ekstrak etanol 60%
S3= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 96% F5= Fraksi asam dari ekstrak etanol 70%
F1= Fraksi eter dari ekstrak etanol 60% F6= Fraksi asam dari ekstrak etanol 96%

Pada Gambar 2, deteksi dilanjutkan dengan menggunakan pereaksi

Dragendorff untuk memastikan bahwa bercak tersebut adalah senyawa alkaloid.
Keberadaan senyawa alkaloid ditegaskan jika hasil penyemprotan terbentuk noda
berwarna jingga pada plat. Hasil menunjukkan, standar piperin dan sampel ekstrak
alkaloid dari ekstrak etanol memberikan bercak berwarna jingga setelah
penotolan, sedangkan pada fraksi eter dan fraksi asam sudah tidak menimbulkan
bercak, yang menandakan proses ekstraksi alkaloid telah dilakukan dengan
maksimal.
Berdasarkan Gambar 1 dan 2, jarak noda yang diperoleh antara standar
piperin dengan sampel tidak jauh berbeda, hal ini menunjukkan bahwa ekstrak
buah lada putih positif mengandung senyawa aktif piperin. Penegasan adanya
senyawa alkaloid dilakukan menggunakan pereaksi semprot Dragendorff, dimana
terdapat bercak jingga di plat pada penotolan standar piperin dan sampel fraksi
alkaloid dari ekstrak etanol sedangkan pada fraksi eter dan fraksi air sudah tidak
menimbulkan bercak, yang menandakan proses ekstraksi alkaloid dengan teknik
ekstraksi asam basa telah dilakukan dengan maksimal.
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185 181

A B

(a) (b)

Gambar 2. Hasil identifikasi keberadaan senyawa alkaloid pada fraksi alkaloid

dari ekstrak etanol lada hitam (a) dan lada putih (b) pada plat KLT
setelah disemprot dengan pereaksi Dragendorff
Keterangan:
P= Standar Piperin F2= Fraksi eter dari ekstrak etanol 70%
S1= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 60% F3= Fraksi eter dari ekstrak etanol 96%
S2= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 70% F4= Fraksi asam dari ekstrak etanol 60%
S3= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 96% F5= Fraksi asam dari ekstrak etanol 70%
F1= Fraksi eter dari ekstrak etanol 60% F6= Fraksi asam dari ekstrak etanol 96%

C. Penetapan Kadar Piperin

Penetapan kadar piperin dapat dilakukan menggunakan metode KLT-
densitometri. Metode tersebut banyak digunakan dalam analisis kualitatif ataupun
kuantitatif di bidang farmasi terutama di bidang analisis obat bahan alam. Analisis
kuantitatif yaitu dengan cara penentuan luas area atau luas bercak kromatogram
yang dapat dilakukan dengan menggunakan baku pembanding dan menggunakan
kurva kalibrasi baku pembanding (Redja dkk., 2009).
182 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk

Pada penelitian ini, digunakan plat KLT silika gel 60 F254 sebagai fase
diam dan fase geraknya menggunakan n-heksana : etil asetat (1:1). Menurut
Rohman (2009) fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf solut
terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan. Fase gerak n-heksana :
etil asetat digunakan karena bersifat semi polar sehingga dapat memisahkan
piperin yang juga bersifat semipolar dari kandungan ekstrak lainnya. Selain itu, n-
heksana:etil asetat (1:1) memiliki nilai Rf yang memenuhi syarat sebagai fase
gerak yang optimal.

Tabel III. Luas area standar piperin

Konsentrasi piperin
Luas Area
(µg/mL)
200 6691,9
400 12448,0
600 17138,8
800 19082,6
1000 22384,7

Gambar 3. Hubungan konsentrasi piperin dengan luas area yang diukur

dengan KLT-densitometri

Hasil pembuatan kurva kalibrasi piperin menunjukkan adanya hubungan

linear antara kadar piperin dengan luas area yaitu semakin tinggi konsentrasi
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185 183

piperin maka semakin besar luas area yang terbaca pada alat densitometer.
Persamaan garis linear yang diperoleh adalah y = 19,0101x + 4143,14 dengan
nilai koefisien korelasi sebesar 0,9823, seperti yang terlihat pada Tabel III dan
Gambar 3.
Menggunakan persamaan tersebut, luas area sampel dari hasil pengukuran
masing-masing sampel dimasukkan ke dalam persamaan garis linear sehingga
diperoleh kadar piperin dalam fraksi alkaloid dari ekstrak etanol buah lada. Hasil
penetapan kadar piperin pada sampel ekstrak buah lada ditunjukkan pada Tabel
IV.

Tabel IV. Hasil kadar piperin dalam fraksialkaloid dari ekstrak etanol buah lada
Ekstrak etanol Rata-rata kadar Ekstrak etanol Rata-rata kadar
Buah lada hitam piperin (%) ± SD Buah lada putih piperin (%) ± SD
60% 52,81 ± 4,66 60% 27,12 ± 4,59
70% 47,06 ± 2,46 70% 30,57 ± 12,81
96% 36,97 ± 11,95 96% 38,72 ± 8,28

Berdasarkan hasil yang diperoleh, pada penentuan kadar piperin dalam

fraksi alkaloid buah lada hitam menggunakan metode KLT-densitometri terlihat
bahwa kadar piperin tertinggi pada fraksi alkaloid dari ekstrak etanol buah lada
hitam yang diekstraksi menggunakan pelarut etanol 60% yaitu sebesar 52,81%.
Semakin besar konsentrasi etanol maka semakin kecil kadar piperin dalam ekstrak
buah lada hitam. Kadar piperin tertinggi diperoleh dari fraksi alkaloid dari ekstrak
etanol buah lada putih yang diekstraksi menggunakan pelarut etanol 96% yaitu
sebesar 38,72%. Semakin besar konsentrasi etanol maka semakin besar kadar
piperin dalam ekstrak buah lada putih. Hal ini membuktikan bahwa perbedaan
konsentrasi pelarut pengekstraksi berpengaruh pada kadar piperin yang ikut tersari
selama proses ekstraksi.
Angka persentase kadar piperin dalam sampel cukup besar karena
penentuan kadar piperin dilakukan pada fraksi alkaloid dari ekstrak etanolnya,
dengan kata lain kadar piperin tersebut menunjukkan jumlah kandungan piperin
dari jumlah alkaloid keseluruhan dalam ekstrak buah lada. Buah lada hitam
mengandung piperin yang lebih banyak dibanding dengan buah lada putih. Hal ini
diduga karena asal simplisia keduanya sehingga mempengaruhi kadar piperin di
184 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk

dalamnya, dimana lada putih diperoleh dari buah lada hitam yang buah-buahnya
dipetik selagi masih hijau atau hampir masak, direndam untuk memudahkan
pengupasan lapisan luar perikarp, lalu dijemur sampai kering (Kartasapoetra,
2004).

KESIMPULAN
Kadar piperin tertinggi diperoleh dari ekstrak buah lada hitam menggunakan
pelarut etanol 60% sebagai pelarut pengekstraksi dengan kadar 52,81±4,66 (%b/v)
terhadap fraksi alkaloidnya. Kadar piperin tertinggi diperoleh dari ekstrak buah
lada putih menggunakan pelarut etanol dengan konsentrasi 96% sebagai pelarut
pengekstraksi dengan kadar 38,72±8,28 (%b/v) terhadap fraksi alkaloidnya.

DAFTAR PUSTAKA
Abraham, A., Fauziyah, B., Fasya, A.G., dan Adi, T.K., 2014, Uji
Antitoksoplasma Ekstrak Kasar Alkaloid Daun Pulai (Alstonia scholaris,
(L.) R. BR) terhadap Mencit (Mus musculus) BALB/C yang Terinfeksi
Toxoplasma Gondii Strain Rh. Alchemy. 3 (1): 67-75.

Agoes, G., 2007, Teknologi Bahan Alam, Penerbit ITB, Bandung, 32-35.

Agoes, G., 2009, Teknologi Bahan Alam, Edisi revisi, Penerbit ITB, Bandung, 37
dan 85.

Depkes RI., 1980, Materia Medika Indonesia. Jilid IV, Jakarta: Badan Pengawas
Obat dan Makanan, 99-108.

Harborne, J.B., 1996, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa

Tumbuhan, Terjemahan: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro.
Penerbit ITB, Bandung.

Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya,

Majalah Ilmu Kefarmasian,1 (3): 117-135.

Istiqomah, 2013, Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi terhadap

Kadar Piperin Buah Cabe Jawa (Piperis retfofracti fructus), Skripsi,
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah,
Jakarta.

Kar, A., 2014, Farmakognosi dan Farmakobioteknologi, Terjemahan: July

Manurung dkk., Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. 2 (2): 503-504.
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185 185

Kartasapoetra, G., 2004, Budidaya Tanaman Berkhasiat Obat, Jakarta: PT Rineka

Cipta, 50-51.
Kolhe, S.R., Borole, P., and Patel, U., 2011, Extraction and Evaluation of Piperine
from Piper nigrum, Internasional Journal of Applied Biology and
Pharmaceutical Technology, 144-149.

Loo, T., 1987, Ikhtisar Ringkas dari Dasar-Dasar Farmakognosi, Bunda Karya,
Jakarta, 181.

Murrukmihadi, M., Wahyuono, S., Marchaban, dan Martono, S., 2013, Penetapan
Kadar Alkaloid dari Ekstrak Etanolik Bunga Kembang Sepatu (Hibiscus
rosa-sinensis L.), Traditional Medicine Journal, 18 (2): 118-120.

Redja, I.W., Aziz, Z., Yantih, N., 2009, Analisis Instrumental, Jakarta: Fakultas
Farmasi Universitas Pancasila, 133-140.

Rohman, A., 2009, Kromatografi Untuk Analisis Obat, Edisi Ke-1, Graha Ilmu,
Yogyakarta. 47, 49, 56.

Sabina, E.P., Nasreen, A., Vedi, M., and Rasool, M., 2013, Analgesic, Antipyretic
and Ulcerogenic Effects of Piperine: An Active Ingredient of Pepper,
Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 5 (10): 203-206.

Sirait, M., 2007, Penuntunan Fitokimia dalam Farmasi, Bandung: ITB, 60-61.

Vasavirama, K.and Upender, M., 2014, Piperine: A Valuable Alkaloid from Piper
Species, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences,
6 (4): 34-38.
Jurnal Ilmiah : Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati
Vol. 2 No. 1 Mei 2014 : hal. 1-5
ISSN : 2338-4344

EFEK EKSTRAK LADA HITAM (Piper nigrum L.) TERHADAP LIBIDO

MENCIT (Mus musculus L.) JANTAN YANG BERBEDA UMUR

EFFECT OF BLACK PEPPER (Piper nigrum L.) EXTRACT

ON MALE MICE (Mus musculus L.) LIBIDO OF DIFFERENT AGE

Tia Wida Ekaputri Hz1, M. Kanedi1, Sutyarso1, Hendri Busman1

1
Jurusan Biologi FMIPA, Universitas Lampung, Bandar Lampung, Indonesia
Email: tia_outstanding@ymail.com

Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung

Jl. Soemantri Brojonegoro No.1, Bandar Lampung, Lampung, Indonesia, 35145

Abstrak
Adanya efek merugikan dari pengobatan modern untuk masalah fungsi seksual, maka masyarakat
lebih memilih pengobatan tradisional dengan menggunakan tanaman yang berkhasiat afrodisiak.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak lada hitam (Piper nigrum L.) terhadap
libido mencit (Mus musculus L.) jantan yang berbeda umur. Tiga puluh dua ekor mencit jantan dibagi
menjadi 2 kelompok umur, yaitu kelompok muda berumur 4 bulan (K1) dan kelompok tua berumur 6
bulan (K2). Masing-masing kelompok muda dan tua terdiri dari 5 individu. Masing-masing kelompok
diberi perlakuan, yaitu kontrol (P0), pakan dengan ekstrak air lada hitam (P1), pakan dengan ekstrak
etanol lada hitam (P2), pakan dengan ekstrak air dan etanol lada hitam (P3) selama 3 bulan. Perilaku
seksual diamati pada akhir waktu pemberian perlakuan. Parameter yang diukur adalah latensi
percumbuan, latensi penunggangan, dan frekuensi penunggangan. Data dianalisis menggunakan
ANARA dua jalur, kemudian dilanjutkan dengan uji BNT dengan α 0,05. Hasil analisis menunjukan
bahwa latensi percumbuan dari perlakuan P2 dan P3 pada kelompok umur tua berbeda nyata
dibandingkan dengan kontrol (p=0,013, p=0,046). Latensi penunggangan dan frekuensi
penunggangan dari perlakuan P2 pada kelompok muda berbeda nyata dibandingkan dengan kontrol
(p=0,026, p=0,010) dan dengan kelompok tua (p=0,024, p=0,022). Simpulan penelitian ini adalah
ekstrak lada hitam dapat meningkatkan libido mencit jantan.

Kata kunci: lada hitam (Piper nigrum L.), afrodisiak, libido, mencit (Mus musculus L.) jantan

Abstract
There is adverse effect of modern treatment for sexual disfunction, so people prefer traditional
treatment by using herb with aphrodisiac effect. The purpose of this research is to analyze the effect
of black pepper (Piper nigrum L.) extract on male mice (Mus musculus L.) libido of different age.
Thirty two male mice were divided into 2 age groups, the younger group aged 4 months (K1) and the
older group aged 6 months (K2). Each group both younger and older was consisted of 5 mice. Each
group was given by four treatment, control (P0), feeding with black pepper aquous extract (P1),
feeding with black pepper ethanolic extract (P2), and feeding with black pepper aquous and ethanolic
extract (P3) for 3 months. Sexual behavior was observed at the end of treatment period. The
parameter measured was introducing latency, mounting latency, and mounting frequency. The data
were analyzed by using two ways ANOVA followed by LSD test with α 0,05. The results show that
introducing latency of treatment P2 and P3 in older group differ significantly compared to control
(p=0,013, p=0,046). Mounting latency and mounting frequency of treatment P2 in younger group differ
significantly compared to control (p=0,026, p=0,010) and to older group (p=0,024, p=0,022).
Therefore it is concluded that black pepper extract enhances libido of male mice.

Keywords: black pepper (Piper nigrum L.), aphrodisiac, libido, males mice (Mus musculus L.)

PENDAHULUAN kehidupan seseorang, sehingga banyak inovasi

yang dilakukan untuk mengatasinya. Pengo-
Gangguan libido banyak dialami oleh pria ber-
batan tradisional dengan menggunakan tanam-
usia lanjut yang diakibatkan oleh penurunan
an yang berkhasiat afrodisiak banyak dipilih
fungsi fisiologis organ tubuh dibandingkan de-
masyarakat karena memiliki efek samping yang
ngan pria berusia produktif. Gangguan gairah
tidak berbahaya dibandingkan dengan peng-
seksual ini merupakan masalah penting dalam
obatan modern (Syamsul, 2011).
 Efek Ekstrak Lada Hitam (Piper nigrum l.) Terhadap Libido / 2
Majeed dan Prakash (2000) menyatakan bah-
wa salah satu jenis tanaman rempah yang telah
lama digunakan sebagai ramuan obat tradisi-
onal dalam sistem pengobatan India kuno Ayur-
veda adalah lada hitam (Piper nigrum L.). Lada
hitam mengandung zat pedas, yaitu piperin
yang berfungsi sebagai afrodisiak (Darling,
2002). Lada hitam juga mengandung amida fe-
nolat, asam fenolat, dan flavonoid yang ber-
fungsi sebagai antioksidan (Meghwal dan
Goswami, 2012).
Piperin telah dilaporkan dapat meningkatkan
kadar gonadotropin dalam serum dengan cara
menghambat feedback negatif ke hipofisis pada
tikus jantan (D’Cruz dan Mathur, 2005). Go-
nadotropin yang dihasilkan hipofisis, terutama
LH akan merangsang testis, dalam hal ini sel
Leydig, untuk menghasilkan testosteron
(Molina, 2004). Telah diketahui bahwa ada ko-
relasi antara libido dengan testosteron, maka
sangat diharapkan bahwa kadar testosteron
yang tinggi dapat memperbaiki dorongan seks
yang rendah (Nalbandov, 1990).
BAHAN DAN METODE
Persiapan Hewan Uji
Mencit jantan dan betina diperoleh dari Balai
Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV)
Regional III Bandar Lampung. Sebelum pene-
litian dimulai, terlebih dahulu dipersiapkan tem-
pat pemeliharaan hewan uji, yaitu kandang be-
rupa bak plastik segi empat ukuran 30-37 cm,
tutup kandang dari kawat screen yang ber-
fungsi juga sebagai tempat pemberian pakan,
serbuk kayu sebagai alas kandang, dan tempat
minum mencit dari botol plastik yang disumbat
pipa alumunium.
Pembuatan Ekstrak Lada Hitam (Piper
nigrum L.)
Ekstrak air lada hitam dibuat dengan cara
mencampurkan 50 g serbuk lada hitam dan 500
ml aquades yang telah mendidih dan telah
diangkat dari pemanas. Kemudian dilanjutkan
dengan proses pengadukan, penyaringan, dan
penguapan sampai diperoleh ekstrak air lada
hitam dalam bentuk pasta.
Ekstrak etanol lada hitam dibuat dengan cara
mencampurkan 50 g serbuk lada hitam dan
sepertiga dari 500 ml etanol 95%. Kemudian
dilanjutkan dengan proses maserasi dengan
menggunakan shaker sebanyak 3 kali. Maserat
diambil untuk proses penyaringan dan peng-
uapan sampai diperoleh ekstrak etanol lada
hitam dalam bentuk pasta.
Estrak air dan etanol lada hitam dibuat dengan
cara mencampurkan ekstrak air dan ekstrak
etanol de-ngan perbandingan berat yang sama.
Rancangan Percobaan
Mencit jantan dibagi menjadi 2 kelompok umur,
yaitu kelompok muda berumur 4 bulan (K1) dan
kelompok tua berumur 6 bulan (K2). Perlakuan
terdiri dari pakan murni sebagai kontrol (P0),
pakan yang diberi ekstrak air (P1), pakan yang
diberi ekstrak etanol (P2), dan pakan yang
diberi ekstrak air dan ekstrak etanol (P3).
Cara Pemberian Ekstrak Lada Hitam
Ekstrak lada hitam diberikan kepada mencit
jantan melalui pakan. Pembuatan pakan dila-
kukan dengan cara menambahkan ekstrak lada
hitam sebanyak 0,3 g pada setiap 1 kg pakan
mencit. Ekstrak dicampur secara merata de-
ngan pakan kemudian dicetak u-lang untuk
memperoleh pelet dalam bentuk batangan.
Pemberian ekstrak lada hitam dilakukan selama
3 bulan.
Cara Pengujian Libido
Pengujian libido dilakukan dengan cara uji
kawin pada akhir waktu pemberian perlakuan.
Mencit jantan yang telah diberi perlakuan ber-
sama mencit betina yang sedang estrus dima-
sukkan ke dalam bak uji dan keduanya dipi-
sahkan oleh sekat triplek. Setelah 5 menit, se-
kat pemisah dilepas dan direkam aktivitas sek-
sual yang terjadi dengan menggunakan kamera
digital dan stopwatch selama 10 menit.
Data dan Analisis Data
Data parameter libido diperoleh dengan cara
melihat hasil rekaman aktivitas seksual yang
meliputi:
Latensi percumbuan, yaitu waktu sejak mencit
jantan dan mencit betina dipertemu-kan (sekat
dibuka) hingga terjadi percum-buan pertama.
Latensi penunggangan, yaitu waktu sejak
mencit jantan dan mencit betina dipertemu-kan
(sekat dibuka) hingga terjadi penung-gangan
pertama.
Frekuensi penunggangan, yaitu banyaknya
penunggangan yang dilakukan mencit jan-tan
selama waktu 10 menit.
Data dianalisis dengan menggunakan two ways
Analysis of Variance (ANOVA) untuk me-
ngetahui ada tidaknya perbedaan antar per-
lakuan dan umur. Apabila terdapat perbedaan
yang nyata maka dilan-jutkan dengan uji beda
nyata terkecil (BNT) pada taraf 5 %.
 3 / Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati
HASIL DAN PEMBAHASAN
Latensi Percumbuan
Tabel 1. Rata-rata latensi percumbuan mencit
jantan (detik) antara kelompok umur
muda dan tua
Hasil analisis statistik menunjukan bahwa rata-
rata latensi percumbuan mencit jantan P0 ke-
lompok muda dengan kelompok tua tidak ber-
beda nyata. Rata-rata latensi percumbuan men-
cit jantan P1, P2, P3 kelompok muda dengan
kelompok tua tidak berbeda nyata. Dengan de-
mikian, kemampuan mencit jantan kelompok
tua dalam melakukan percumbuan menyamai
mencit jantan kelompok muda. Hal tersebut ke-
mungkinan dapat terjadi karena kedua kelom-
pok umur mencit jantan hanya berbeda dua bu-
lan, sehingga belum bisa menunjukan perbe-
daan tanda-tanda penuaan yang signifikan.
Tabel 2. Rata-rata latensi percumbuan mencit
jantan (detik) antara perlakuan kontrol
dengan per-lakuan ekstrak lada hitam
Rata-rata latensi percumbuan mencit jantan
kelompok muda yang diberi ekstrak lada hitam
tidak berbeda nyata dibandingkan dengan kon-
trol, namun terdapat perbedaan nyata pengaruh
P1 dan P2 mencit jantan kelompok tua dengan
kontrol. Hal ini menunjukkan ada pengaruh per-
lakuan terhadap mencit janan tua, yaitu de-
ngan cara meningkatkan daya penciuman men-
cit jantan tua, sehingga mempersingkat latensi
percumbuan.
Zat aktif lada hitam yang berfungsi sebagai an-
tioksidan dapat meningkatkan kebugaran, se-
hingga daya penciuman mencit jantan terhadap
feromon yang dikeluarkan oleh mencit betina
dapat dideteksi dengan baik oleh Vomeronasal
Organ. Sinyal feromon ini kemudian diteruskan
menuju amigdala dan MPOA (Medial Preoptic
Area). Zat aktif piperin lada hitam dapat me-
Tia Wida Ekaputri
ningkatkan kadar hormon gonadotropin dalam
serum dengan cara menghambat feedback ne-
gatif ke hipofisis pada tikus jantan (D’Cruz dan
Mathur, 2005). Gonadotropin yang dihasilkan
hipofisis, terutama LH akan merangsang testis,
dalam hal ini sel Leydig, untuk menghasilkan
testosteron (Molina, 2004). Testosterone sendiri
merupakan hormon penting yang bekerja pada
amigdala dan MPOA. Testosteron berperan
mengatur perilaku seksual terutama meningkat-
kan pemrosesan input sensori terhadap stimu-
lus feromon, sehingga sangat berperan dalam
aktivitas percumbuan (Hull et al., 2004).
Pada mencit jantan kelompok muda, tidak ada
pengaruh ekstrak lada hitam terhadap latensi
percumbuan dibandingkan dengan kontrol. Do-
sis ekstrak lada hitam dapat menjadi faktor
yang mempengaruhi hal tersebut, sehingga pa-
da kelompok muda, maupun tua diperlukan
pemberian dosis ekstrak lada hitam yang ber-
beda-beda agar dapat diketahui dosis ekstrak
lada hitam yang tepat untuk mempersingkat la-
tensi percumbuan bagi masing-masing kelom-
pok umur mencit jantan.
Latensi Penunggangan
Tabel 3. Rata-rata latensi penunggangan men-
cit jantan (detik) antara kelompok u-
mur muda dan tua
Hasil analisis statistik menunjukan bahwa rata-
rata latensi penunggangan mencit jantan P0,
P1, P3 kelompok muda dengan kelompok tua
tidak berbeda nyata, namun terdapat perbe-
daan nyata pada P2 kelompok muda dengan
kelompok tua.
Tabel 4. Rata-rata latensi penunggangan men-
cit jantan (detik) antara perlakuan
kontrol dengan perlakuan ekstrak lada
hitam
Rata-rata latensi penunggangan mencit jantan
kelompok P2 berbeda nyata dibandingkan de-
 Efek Ekstrak Lada Hitam (Piper nigrum l.) Terhadap Libido / 4

ngan kontrol. Hal ini menunjukan bahwa ada frekuensi penunggangan mencit jantan ke-
pengaruh perlakuan dan umur terhadap latensi lompok muda dibandingkan kelompok tua serta
penunggangan. Ekstrak etanol mampu secara mempersingkat frekuensi penunggangan men-
nyata mempersingkat latensi penunggangan cit jantan kelompok muda dibandingkan kontrol.
mencit jantan kelompok muda dibandingkan ke-
lompok tua serta mempersingkat latensi pe- Tabel 6. Rata-rata frekuensi penunggangan
nunggangan mencit jantan kelompok muda di- mencit jantan antara perlakuan
bandingkan kontrol. kontrol dengan perlakuan ekstrak lada
hitam
Ekstrak etanol buah lada hitam lebih banyak
mengandung piperin karena etanol adalah la-
rutan yang baik melarutkan piperin dibanding-
kan air (Kohle et al., 2011). Melalui penelitian
terdahulu diketahui bahwa piperin dapat mem-
pengaruhi sistem hormon reproduksi dengan
cara meningkatkan kadar hormon gonadotropin
dalam serum dengan cara menghambat feed-
back negatif ke hipofisis pada tikus jantan
(D’Cruz dan Mathur, 2005). Gonadotropin yang
dihasilkan hipofisis, terutama LH akan merang-
Telah di jelaskan sebelumnya bahwa ekstrak e-
sang testis, dalam hal ini sel Leydig, untuk
tanol buah lada hitam lebih banyak mengan-
menghasilkan testosteron (Molina, 2004).
dung piperin (Kohle et al., 2011). Piperin tidak
Testosteron akan meningkatkan NOS (Nitric
hanya memberi efek mempersingkat latensi
Oxide Synthase) dalam MPOA, sehingga terjadi
penunggangan, tetapi juga meningkatkan fre-
peningkatan kadar NO yang akan mengakibat-
kuensi penunggangan pada mencit jantan mu-
kan peningkatan pelepasan dopamin di bebera-
da. Hal tersebut dikarenakan piperin dapat me-
pa area integratif, sehingga timbul libido yang
ningkatkan sekresi testosteron sehingga terjadi
mendukung output motorik berupa penung-
peningkatan intensitas dorongan seksual men-
gangan (Hull et al., 2004). Namun pada dosis
cit jantan. Selain mengatur intensitas dorongan
piperin yang tinggi, piperin dapat menyebab-
seksual jantan, testosterone memiliki berbagai
kan penurunan aktivitas enzim antioksidan dan
pengaruh lain yang hanya berhubungan secara
level asam sialat pada epididimis, sehingga ter-
tidak langsung dengan aktivitas reproduksi.
jadi peningkatan kadar oksigen reaktif yang da-
Dengan adanya korelasi antara libido dengan
pat merusak lingkungan epididimis dan fungsi
testosteron, maka sangat diharapkan bahwa
sperma (D’Cruz dan Mathur, 2005).
kadar testosteron yang tinggi dapat memper-
baiki dorongan seks yang rendah ataupun
Frekuensi Penunggangan
impotensi pada jantan (Nalbandov, 1990).
Tabel 5. Rata-rata frekuensi penunggangan
mencit jantan antara kelompok umur
muda dan tua
SIMPULAN
Dari hasil penelitian dan pembahasan dapat
disimpulkan bahwa:
1. Ekstrak lada hitam mampu meningkatkan
libido dengan cara mempersingkat latensi
percumbuan pada mencit jantan tua dan
mampu mempersingkat latensi penung-
gangan serta meningkatkan frekuensi pe-
Hasil uji satatistik menunjukan bahwa rata-rata nunggangan pada mencit jantan muda.
frekuensi penunggangan mencit jantan P0, P1, 2. Perbedaan umur pada mencit jantan yang
P3 kelompok muda dengan kelompok tua tidak diberi ekstrak lada menunjukan ada perbe-
berbeda nyata. Rata-rata frekuensi penung- daan latensi dan frekuensi penunggangan.
gangan mencit jantan P2 kelompok muda de- 3. Pemberian ekstrak etanol lada hitam lebih
ngan kelompok tua berbeda nyata. baik dalam meningkatkan libido mencit jan-
tan.
Rata-rata frekuensi penunggangan mencit jan-
tan kelompok P2 berbeda nyata dibandingkan
dengan kontrol. Hal ini menunjukan bahwa ada DAFTAR PUSTAKA
pengaruh perlakuan dan umur terhadap fre- D’cruz S.C. dan P.P. Mathur. 2005. Effect of
kuensi penunggangan. Ekstrak etanol buah la- Piperine on the Epididymis of Adult Male
da hitam mampu secara nyata meningkatkan
 5 / Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati
Rats. Asian Journal of Andrology. 7(4):
363-8.
Darling, L. M. 2002. Spices As Aphrodisiacs.
unitproj.library.ucla.edu/biomed/spice/inde
x.cfm?spicefilename=aphrodisiacs.txt&ite
msuppress=yes&displayswitch=0. (30 Ma-
ret 2013).
Hull, E.M., J.W. Muschamp, dan S. Sato. 2004.
Dopamine and Serotonin: Influences on
Male Sexual Behavior. Physiology & Be-
havior. 83: 291–307.
Kolhe, S.R., P. Borole, dan U. Patel. 2011. Ex-
traction and Evaluation of Piperine from
Piper nigrum Linn. International Journal of
Applied Biology and Pharmaceutical Tech-
nology. 2 (2): 144-9.
Tia Wida Ekaputri
Majeed, M dan L. Prakash. 2000. The Medi-
cinal Uses of Pepper. International Pepper
News. 25 (1): 23-31.
Meghwal, M. dan T. K. Goswami. 2012. Nu-
tritional Constituent of Black Pepper as
Medicinal Molecules: A Review. Open
Access Scientific Reports. 1: 1-7.
Molina, E. P. 2004. Endocrine Physiology.
McGraw-Hill Professional. New York.
Nalbandov, A.V. 1990. Fisiologi Reproduksi
pada Mamalia dan Unggas. Universitas
Indonesia Press. Jakarta.
Syamsul, E. S. 2011. Tumbuhan Obat Ber-
khasiat Afrodisiaka Penambah Vitalitas
Pria. Jogja Mediautama. Yogyakarta.
Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian dan Pengabdian Masyarakat dengan tema
"Kesehatan Modern dan Tradisional"

ISOLASI SENYAWA PIPERIN DARI MERICA HITAM ( Pipernigrum, L) SEBAGAI

BAHAN STANDAR PRAKTIKUM DI LABORATORIUM
BIOLOGI FARMASI FMIPA UII

Riyanto
Farmasi FMIPA Universitas Islam Indonesia
riyanto_biofarlab@uii.ac.id

ABSTRAK

Laboratorium merupakan salah satu sarana yang harus dimiliki perguruan tinggi
untuk memenuhi proses pembelajaran. Peralatan dan bahan laboratorium, selama ini
menggunakan produk dari luar negeri, salah satu contoh adalah standar piperin yang
digunakan sebagai bahan pembanding pada kegiatan praktikum Kimia Bahan Alam di
Laboratorium Biologi Farmasi FMIPA UII. Untuk mendapatkan standar piperin dari
supplier rmembutuhkan proses administrasi dan waktu yang lama atau indent, serta dengan
harga yang sangat mahal, sehingga kegiatan praktikum masih ada ketergantungan dengan
bahan tersebut.
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan solusi bahwa penggunaaan hasil isolate
piperin dari merica hitam (Pipernigrum,L) bisa digunakan sebagai bahan standar praktikum
Kimia BahanAlam di laboratorium Biologi Farmasi FMIPA UII.
Metode yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu dengan cara ekstraksi merica
hitam (Pipernigrum, L), kemudian dilanjutkan dengan proses isolasi untuk mendapatkan
isolat piperin.
Data yang diperoleh dari penelitian ini berupa profil KLT dan hasil pengukuran
isolate dan standar piperin yang dibaca menggunakan TLC Scanner dan FTIR. Berdasarkan
hasil pengujian dan pengukuran pada penelitian ini, didapatkan nilai Rf yang sama yaitu
Rf standar 0,77 sedangkan Rf isolate 0,77. Untuk profil kromatogram dan panjang
gelombang maksimal hasilnya juga sama yaitu 338 nm. Berdasarkan hasil penelitian dapat
disimpulkan bahwa untuk mendapatkan isolat senyawa piperin dari mericahitam ( Piper
nigrum, L) dapat dilakukan proses ekstraksi yang dilanjutkan dengan isolasi dengan cara
rekristalisasi.

Kata kunci : isolat, piperin, merica hitam (Piper nigrum, L) , isolasi.

ABSTRACT

Laboratory is one of the facilities that universities must have to fulfill the learning
process. Equipment and material laboratories, so far using products from abroad, one
example is the piperine standard which is used as a comparison material in Natural
Material Chemistry practicum activities at the Pharmaceutical Biology Laboratory of
FMIPA UII. To get piperine standards from suppliers requires an administrative process
and a long time or indent, and at a very expensive price, so that practicum activities are
still dependent on these materials.
This research is expected to provide a solution that the use of piperine isolation
results from black pepper (Pipernigrum, L) can be used as a standard material for Natural
Material Chemistry practicum in the Pharmaceutical Biology Laboratory of FMIPA UII.
The method used in this study, namely by extracting black pepper (Pipernigrum, L),
then manipulating it with the isolation process to obtain piperine isolate.
The data obtained from this study were in the form of TLC profiles and isolation
measurement results and piperine standards which were read using the TLC Scanner and
FTIR. Based on the results of measurements and measurements in this study, the Rf value
is the same, namely the standard Rf 0.77 while the Rf isolate is 0.77. For the chromatogram
profile and the maximum wavelength the results are the same, namely 338 nm. Based on
the research results, it can be ignored that to obtain piperine compound isolates from black

234
 ISBN: 978-623-6572-15-3
Yogyakarta, 18 November 2020

pepper (Piper nigrum, L) an extraction process can be carried out which can be carried
out by isolation by recrystallizing.

Key words: isolate, piperine, black pepper (Piper nigrum, L), isolat.

PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Masalah
Laboratorium merupakan salah satu standar sarana dan prasarana yang harus dimiliki
perguruan tinggi untuk memenuhi proses pembelajaran. Pada perguruan tinggi dan institusi
pendidikan lain, laboratorium ini disebut Laboratorium pendidikan.(1)
Laboratorium Pendidikan adalah unit penunjang akademik pada lembaga pendidikan,
berupa ruangan tertutup atau terbuka, bersifat permanen atau bergerak, dikelola secara
sistematis untuk kegiatan pengjuian, kalibrasi, dan/atau produksi dalam skala terbatas, dengan
menggunakan peralatan dan bahan berdasarkan metode keilmuan tertentu, dalam ragka
pelaksanaan pendidika, penelitian, dan/atau pengabdian kepada masyarakat.(2)Peralatan dan
bahan, selama ini menggunakan dari produk luar,salah satu contoh adalah standar piperin yang
digunakan sebagai bahan pembanding pada kegiatan praktikum Kimia Bahan Alam di
Laboratorium Biologi Farmasi. Piperin yang digunakan adalah standar piperin merek Sigma-
Aldrich Cat:38790 produk USA. Untuk mendapatkan standar piperin dari supplier
membutuhkan proses administrasi dan waktu yang lama atau indent, dan dengan harga yang
sangat mahal, sehingga kegiatan praktikum masih ada ketergantungan dengan bahan tersebut.
Keanekaragaman hayati Indonesia sangat besar artinya jika dimanfaatkan secara
maksimal, khususnya dalam usaha pengembangan potensi sumber daya alam. Sumber daya
alam hayati seperti tanaman yang berupa ekstrak umumnya digunakan dalam dunia kedokteran
dan industri. Salah satu tanaman yang banyak dimanfaatkan dalam dunia kedokteran dan
industri yaitu tanaman merica hitam ( Piper nigrum, L).
Senyawa aktif piperin bisa didapatkan dari merica hitam ( Piper nigrum, L) yang mudah
didapatkan. Tanaman merica hitam berupa tanaman yang memanjat, dengan akar pelekat,
batang 5-15 m. Daun berseling atau tersebar, bertangkai, dengan daun penumpu yang mudah
gugur dan meninggalkan berkas yang berupa suatu lingkaran. Helaian daun bulat telur,
memanjang dengan ujung meruncing, 5-15 cmx 8-20 cm, pada sisi buah pada kelenjar-kelenjar
yang tenggelam. Bulir terpisahpisah, bergantungan terdapat pada ujung atau berhadapan
dengan daun. Daun pelindung memanjang, 4-5 mm panjang. Buah berupa buah buni, bangun
bulat.(3)

235
Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian dan Pengabdian Masyarakat dengan tema
"Kesehatan Modern dan Tradisional"

Senyawa aktif pipern ini bisa didapatkan dengan proses ekstraksi dengan menggunakan
pelarut yang sesuai, kemudian dilanjutkan dengan isolasi untuk mendapatkan senyawa murni
atau isolat. Laboratorium Biologi Farmasi merupakan laboratorium di prodi Farmasi FMIPA
UII yang dapat melakukan proses kegiatan ekstraksi dan isolasi bahan alam. Hal ini karena
laboratorium ini sudah didukung dengan peralatan dan kemampuan laboran yang berkompeten.
Selain itu beberapa penelitian tentang ekstraksi dan isolasi bahan alam juga pernah dilakukan,
diantaranya isolasi senyawa andrographolid dari tanaman sambiloto, senyawa eurycomanon
dari tanaman pasak bumi dan senyawa pinostrobin dari tanaman rimpang temukunci.
Berdasarkan hal tersebut perlu dilakukan penelitian mengenai penggunaan hasil isolat piperin
dari merica hitam ( Piper nigrum, L). sebagai bahan alternatif praktikum di laboratorium Biologi
Farmasi FMIPA UII.
1.2 Rumusan Masalah
Penelitian ini diharapkan dapat menjawab pertanyaan yang dirumuskan sebagai berikut:
Penggunaan hasil isolat piperin dari merica hitam ( Piper nigrum, L)sebagai bahan alternatif
praktikum di laboratorium Biologi Farmasi FMIPA UII.
1.3 Tujuan Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan tujuan:
1.Isolasi senyawa piperin dari merica hitam ( Piper nigrum, L)
2.Membandingkan kualitas hasil isolat piperin dari merica hitam ( Piper nigrum, L)dengan
standar piperin dengan cara Kromatografi Lapis Tipis yang dibaca dengan TLC
Scanner.
3.Penggunaan hasil isolat piperinsebagai bahan alternatif praktikum Kimia Bahan Alam di
laboratorium Biologi Farmasi FMIPA UII.
1.4 Manfaat Penelitian
1.Penelitian ini diharapkan dapat memberikan solusi alternatif penggunaaan hasil isolat
piperin sebagai bahan alternatif praktikum Kimia Bahan Alam di laboratorium Biologi
Farmasi FMIPA UII.
2.Menghemat Biaya laboratorium,khususnya untuk pembelian bahan kimia standar
piperin
3.Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi bahwa penggunaaan hasil isolat
piperin dari merica hitam ( Piper nigrum, L) bisa digunakan sebagai bahan alternatif
praktikum Kimia Bahan Alam di laboratorium Biologi Farmasi FMIPA UII.
4. Penelitian ini diharapkan mampu meningkatkan pemberdayaan alat laboratorium
Biologi Farmasi FMIPA UII dan kompetensi laborannya.

236
 ISBN: 978-623-6572-15-3
Yogyakarta, 18 November 2020

1.5 Luararan Penelitian

Luaran penelitian ini adalah Poster A1 dan Prosiding Seminar Nasional.
1.6 Keterkaitan dengan ayat Alquran
Penelitian berkaitan dengan Al-Qur’an surat Ali Imran ayat 190-191,. Allah
Subhanahu wa Ta’ala berfirman, yang artinya:

‫س َم َاوات ّخ َْلق فِي ّّ ِإن‬ َّ ‫ّو ْاْل َ ْرض ّال‬

َ ‫اختِ ََلف‬ َ ‫ّوال َّن َهار ّال َّليْل‬
ْ ‫ّو‬ َ ‫َّليَات‬ َ ‫ّاْل َ ْلبَاب ِْلُو ِلي‬
ْ ‫ّا َّلذِين‬
‫ّو َع َلى َوقُعُودًا قِ َيا ًما ّّللاَّه ّ َيذْ ُك ُرون‬ َ ‫س َم َاوات ّ َخ ْلق فِي‬
َ ‫ّو َيتَفَ َّك ُرون ّ ُجنُو ِب ِهم‬ َ ‫َل َٰ َهذَا ّ َخلَ ْقت َما َر َّبنَا‬
َّ ‫ّو ْاْل َ ْرض ّال‬ ‫اط ً ه‬
ِ ‫َب‬
ُ ّ ‫ّالنَّار ّ َعذَاب فَ ِقنَا‬
‫س ْب َحانَك‬
Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih bergantinya malam dan
siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang yang berakal, (yaitu) orang-orang yang
mengingat Allah sambil berdiri atau duduk atau dalam keadan berbaring dan mereka
memikirkan tentang penciptaan langit dan bumi (seraya berkata): “Ya Rabb kami, tiadalah
Engkau menciptakan ini dengan sia-sia, Maha Suci Engkau, maka peliharalah kami dari
siksa neraka”. [Ali ‘Imran/3:190-191].
Allah Azza wa Jalla satu-satunya illah yang berhak untuk disembah. Dia-lah satu-
satunya illah yang berhak ditakuti, ditaati, dan hanya Dia yang kita jadikan sebagai petunjuk,
sebagai bukti keagungan dan kekuasaan-Nya. Dia tidak menciptakan semua itu dengan sia-
sia, tetapi mengandung tujuan. Yaitu untuk kemashlahatan makhluk-makhluk-Nya, sebagai
sarana beribadah kepada Allah Subhanahu wa Ta’ala , sekaligus membuktikan tentang
keesaan-Nya.

METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi, FMIPA UII.
3.2 Bahan dan Alat Penelitian
Bahan utama dalam penelitian ini menggunakan merica hitam yang diambil dari pasar
Beringharjo Yogyakarta. Bahan lain yang digunakan dalam penelitian ini adalah Serbuk
buah piper nigrum, Etanol 95%, KOH-Etanolik 10%, Silika gel GF 254, Benzen, Etil
asetat, Anisaldehida-asam sulfat, Serbuk silika gel 60.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini: Perangkat penyari soxhlet (volume
ekstraktor 100ml), Kompor dengan penangas air atau heating mantel, batang pengaduk,
cawan porselen, corong, TLC Scanner Densitometer, chamber KLT, gelas beker 100 ml,

237
Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian dan Pengabdian Masyarakat dengan tema
"Kesehatan Modern dan Tradisional"

rotary evaporator, timbangan, pipa kapiler, chamber, labu ukur 10 ml, labu ukur 100 ml,
labu ukur 1000 ml, mikrosyring.
3.3 Jalannya Penelitian
3.3.1 Preparasi sampel
Merica hitam dicuci bersih, kemudian dikeringkan di dalam cabinet drying dengan suhu
400C. Setelah kering dilakukan penyerbukan dengan alat penyerbuk milner. Serbuk ini
digunakan untuk bahan penelitian.
3.3.2 Ekstraksi serbuk merica hitam
Timbang 20 g serbuk buah merica hitam, masukkan ke dalam kantung yang terbuat
dari kertas saring dan kemudian letakkan di dalam alat penyari soxhlet. Tambahkan
terlebih dahulu batu didih di dalam labu alas bulat sebelum dirangkaikan dengan alat
soxhlet. Kemudian etanol 96% ditambahkan ke dalam alat soxhlet minimal cukup untuk
dua kali sirkulasi. Lakukan penyarian selama 1-2 jam dengan kecepatan 6-8 sirkulasi per
jam. Setelah penyarian selesai, dinginkan dan pisahkan sari dari bagian yang tidak larut
dengan penyaringan melalui kertas saring. Sisihkan sari jernih yang didapat sebanyak 3
ml dalam flakon dan tutup. Sisanya diuapkan menggunakan rotary evaporator sampai
didapatkan ekstrak kental .
3.3.3 Isolasi Piperin dengan metode rekristlisasi
Tambahkan 10 ml KOH-Etanolik 10 % pada ekstrak kental tersebut sambil diaduk-aduk
sehingga timbul endapan. Setelah mengendap, pisahkan sari dari bagian yang tak larut
melalui glasswool. Sari jernih yang didapat didiamkan di dalam almari pendingin
selama satu malam sampai diperoleh kristal.
3.3.4. Identifikasi isolat piperin menggunakan TLC-Densitometer
a. Totolkan sampel isolat yang diperoleh pada plat KLT silika gel 60 GF254 (ukuran plat
3x10cm)
b. Totolkan pula standar piperin di samping totolan sampel
c. Lakukan eluasi menggunakan fase gerak benzene : etil asetat ( 2 : 1 ) dalam bejana KLT
yang sudah dijenuhkan
d. Setelah tereluasi, keringkan dan baca pada TLC scanner densitometer
e. Lakukan analisis kromatogram isolat dan standar piperin yang diperoleh dan
bandingkan karakterisasi keduanya

238
 ISBN: 978-623-6572-15-3
Yogyakarta, 18 November 2020

3.4 Rencana Analisis Data

Data yang diperoleh dari penelitian ini berupa gambar Profil Kromatografi Lapis Tipis
di bawah UV 254 dan hasil KLT yang dibaca dengan TLC Scaner 3 yang berupa Rf dan
luas area pada sampel dan standar.
Analisa data yang digunakan:
1. Membanding hasil KLT antara sampel dengan standar
Tabel 3.1. Nilai Rf dan warna noda hasil KLT

Warna Noda di bawah

No Noda Nilai Rf
UV254 nm
1. Standar
2. Sampel
2. Mengukur sampel dengan standar menggunakan TLC Scanner 3 data yang diperoleh
berupa Rf dan luas area.
3. Data hasil pengukuran senyawa piperin dalam penelitian ini disajikan seperti table.

3.5 Analisis Risiko

Penelitian ini akan bisa berhasil dan berjalan dengan baik,karena di laboratorium
Biologi Farmasi sudah didukung dengan alat-alat ekstraksi yang sudah baik dan memenuhi
standar yaitu rotary evaporator,vacuum liquid chromatoghrapy dan TLC Scaner 3,sehingga
nantinya proses ekstraksi dan isolasi senyawa aktif dari bahan alam bisa dilakukan dan
hasilnya bisa di analisis secara kualitatif dan kuantitatif. Selain itu juga didukung dengan
bahan kimia atau pelarut yang tersedia di laboratorium Biologi Farmasi yang lengkap, serta
kompetensi laboran yang telah sesuai bidangnya.
Sedangkan faktor resiko penelitian ini tidak berhasil yaitu pengaruh suhu waktu
maserasi, harus selalu terukur dan bisa dikendalikan agar bahan aktif dalam ekstrak tidak
rusak atau hilang. Selain itu juga dalam penggunaan bahan kimia harus terukur dengan
teliti dan tepat agar dapt memberikan hasil yang baik.

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Penelitian
4.1.1. Uji Kromatrografi Lapis Tipis senyawa piperin dalam ekstrak etanol merica hitam.
Adannya senyawa piperin dalam ekstrak etanol merica hitam dapat dilihat dari hasil
KLT pada gambar 4.1. berikut.

239
Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian dan Pengabdian Masyarakat dengan tema
"Kesehatan Modern dan Tradisional"

Gambar 4.1. Profil kromatografi dilihat pada sinar nampak UV 254

Keterangan :
S : Standar
I : Isolat
Fase diam : Silica gel F254
Fase gerak :

Benzene : Etil asetat ( 2: 1 v/v)

S I
Senyawa piperin di identifikasi dengan cara yang sederhana yaitu dengan menggunakan
Kromatografi Lapis Tipis. Data hasil KLT yang diperoleh berupa harga Rf dan warna bercak
dapat dilihat pada tabel 4.1.berikut.
Tabel 4.1. Nilai Rf dan warna noda hasil KLT

No Noda Nilai Rf Warna Noda di bawah UV254 nm

1. Standar 0,77 ungu
2. Isolat 0,77 ungu

4.1.2. Hasil uji isolat piperin yang dibaca dengan alat TLC Densitometer.
Hasil isolat piperin setelah dilakukan uji KLT yang dibaca dengan TLC Scaner
Gambar 4.2. Profil kromatogram dibaca dengan TLC Scanner dengan 3 dimensi

240
 ISBN: 978-623-6572-15-3
Yogyakarta, 18 November 2020

Gambar 4.3. Profil kromatogram dibaca dengan TLC Scanner dengan 2 dimensi

Gambar 4.4. Hasil Spektra piperin yang dibaca dengan TLC Scanner 3, menghasilkan panjang
maksimal 338 nm.

241
Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian dan Pengabdian Masyarakat dengan tema
"Kesehatan Modern dan Tradisional"

4.1.3. Hasil uji isolat piperin yang dibaca dengan alat FTIR
Hasil uji isolat dan standar piperin yang dibaca dengan alat FTIR.

Gambar 4.5. Hasil pembacaan spektra FTIR

4.2. Pembahasan
4.2.1. Uji KLT senyawa Piperin
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa piperin dari ekstrak etanol merica
hitam dan membandingkan kualitas hasil isolat piperin dari merica hitam ( Piper nigrum, L)
dengan standar piperin dengan cara Kromatografi Lapis Tipis yang dibaca dengan TLC Scaner.
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini meggunakan merica hitam ( Piper nigrum,
L) yang diambil dari Pasar Beringharjo Yogyakarta. Bahan lain yang digunakan dalam
penelitian ini adalah Etanol 95%, KOH-Etanolik 10%, Silika gel GF 254, Benzen, Etil
asetat, Anisaldehida-asam sulfat, Serbuk silika gel 60, kertas saring dan standar piperin. Alat
yang digunakan dalam penelitian ini: perangkat penyari soxhlet ( volume ekstraktor 100 ml ),
heating mantel, batang pengaduk, cawan porselen, corong, chamber KLT, pipa kapiler.
Untuk mendapatkan ekstrak merica hitam mula-mula sampel diambil dan dicuci.
Setelah itu dikeringkan dengan diangin-anginkan dengan udara terbuka dan dimasukkan ke
dalam almari pengering selama 3 hari. Sampel yang telah dikeringkan diblender. Sampel yang
diperoleh ditimbang sebanyak 20 gram kemudian sokletasi dengan pelarut eatanol 96%. Hasil
yang didapat kemudian dipisahkan pelarutnya dengan menggunakan vacum rotary evaporator
dengan suhu 60 0 C. Filtrat ekstrak yang diperoleh kental berwarna cokelat.

242
 ISBN: 978-623-6572-15-3
Yogyakarta, 18 November 2020

Selanjutnya ekstrak yang telah diperoleh diidentifikasi adanya senyawa piperin, dengan
cara yang sederhana yaitu menggunakan Kromatografi Lapis Tipis yang disinari di bawah
lampu UV 254 nm. Berdasarkan data yang diperoleh bahwa Rf standar sebesar 0,77 sedangkan
Rf sampel sebesar 0,77 sedangkan warna bercak atau noda pada sampel dengan standar sama
yaitu warnanya ungu. Hal ini menujukkan bahwa ekstrak merica hitam mengandung senyawa
piperin karena Rf sampel dengan Rf standar sama. Selain itu warna noda pada sampel dengan
standar sama yaitu warnanya ungu di bawah lampu UV 254 nm.

4.2.1. Isolasi piperin dengan rekristalisasi.

Isolasi senyawa piperin dilakukan dengan metode rekristalisasi. Caranya untuk
mengisolasi piperin biasanya menggunakan metode rekristalisasi dengan prinsip yaitu proses
pemurniaan suatu zat berdasarkan perbedaan kelarutan zat yang dimurnikan. Prinsip kerja
untuk mendapatkan piperin dari ekstrak yaitu menyari merica hitam dengan etanol 95% yang
kemudian dipisahkan dengan senyawa rennin dengan penambahan KOH-etanolik 10% (b/v).
Penambahan KOH-etanolik bertujuan untuk memperoleh senyawa piperin dari ekstrak tersebut,
dimana di dalam ekstrak tersebut terdapat komponen lain yang menyebabkan piperin bereaksi
menjadi asam piperat dan karena dalam ekstrak tersebut masih ada zat pengotor. Jadi tujuan
penambahan KOH-etanolik ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa piperin dalam bentuk
garamnya,lalu filtratnya disaring, filtrat tersebut didiamkan dalam lemari pendingin untuk
mendapatkan kristal piperin. Kristal yang diperoleh kemudian dicuci dengan etanol 95% dingin
agar mendapat kristal yang lebih murni dan bebas pengotornya.

4.1.3. Identifikasi isolat piperin dengan TLC Scanner dan FTIR

Uji Kualitatif isolat piperin dilakukan dengan metode Kromatografi lapis Tipis (KLT).
KLT yang digunakan terbuat dari silika gel dengan ukuran 3 x 10 cm GF254 (Merck). Plat KLT
silica gel GF254 dilakukan pre washing dengan methanol pro analisis lalu dioven pada suhu
0
100 C selama 2 menit untuk menghilangkan air yang terdapat pada plat KLT. Selanjutnya
membuat larutan pembanding dan sampel dengan cara sebagai berikut:
1. Membuat Larutan Pembanding
Menimbang serbuk piperin 5 mg dilarutkan dalam 1 ml etanol pa menggunakan
mikropipet, untuk larutan stock.. Lalu ditotokan sebanyak 5 uL menggunakan mikrosyring ke
dalam plate KLT,terus di elusi dengan fase gerak n hexan : etil asetat ( 4 : 1 ) untuk di elusi
sampai tanda batas. Hasil KLT dimasukkan dalam TLC Scanner dibaca menggunakan panjang
gelombang maksimal piperin yaitu 338 nm.
243
Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian dan Pengabdian Masyarakat dengan tema
"Kesehatan Modern dan Tradisional"

2. Membuat larutan sampel

Sampel sebanyak 50 mg dilarutkan dalam 1 ml etanol absolut, kemudian ditotolkan pada
plate KLT, selanjutnya dielusi dengan menggunakan fase gerak n-hexan : etil asetat dengan
perbandingan (4 : 1 v/v).
Hasil KLT yang telah dielusi diukur dengan menggunakan TLC scanner3 yang
menghasilkan Rf dan luas area pada sampel dan standar.
Berdasarkan penelitian ini nilai Rf isolat dengan standar piperin mempunyai nilai yang
sama, maka senyawa tersebut memiliki karakteristik yang sama. Sedangkan berdasarkan data
spektrum FTIR didapatkan bahwa gugus fungsi yang dimiliki isolate piperin sama dengan
gugus fungsi yang dimiliki standar piperin. Jadi berdasarkan uji dengan TLC Scanner dan FTIR
bahwa isolat piperin mempunyai sifat yang sama dengan standar piperin.

KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa untuk mendapatkan isolat
senyawa piperin dari merica hitam ( Piper nigrum, L) dapat dilakukan proses ekstraksi yang
dilanjutkan dengan isolasi dengan metode rekristalisasi.

UCAPAN TERIMAKASIH
Assalamu’alaikum wr.wb.
Alhamdulillahi robbil ‘alamin, Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah SWT yang
telah melimpahkan rahmat,karunia dan hidayah-Nya,sehingga peneliti dapat menyelasaikan
penelitian ini yang berjudul : ISOLASI SENYAWA PIPERIN DARI MERICA HITAM (
Pipernigrum, L) SEBAGAI BAHAN STANDAR PRAKTIKUM DI LABORATORIUM
BIOLOGI FARMASI FMIPA UII
Peneliti mengucapkan terimakasih kepada :
1. Direktorat Penelitian & Pengabdian Masyarakat Universitas Islam Indonesia (DPPM
UII) yang telah mendanai penelitian ini.
2. Laboratorium Biologi Farmasi yang telah menyediakan sarana untuk penelitian ini.
3. Istri dan anak-anakku yang telah memberikan dukungan sehingga dapat menyelesaikan
penelitian ini.
4. Teman-teman laboran farmasi FMIPA UII atas masukan dan sarannya.

244
 ISBN: 978-623-6572-15-3
Yogyakarta, 18 November 2020

Dalam penyusunan penelitian ini,peneliti menyadari masih banyak kekurangan-

kekurangan baik secara teknis maupun non teknis. Untuk itu peneliti mengharapkan kritik dan
saran yang bersifat membangun demi kesempurnaan penelitian ini.
Semoga budi baik dan amal yang telah diberikan dengan tulus ikhlas mendapat balasan
dari Allah SWT.
Wassalamu’alaikum wr.wb.

DAFTAR PUSTAKA
Permendikbud no.49/2014 tentang Standar Nasional Pendidikan Tinggi
Permenpan dan Reformasi Birokrasi No 3,tahun 2010 tentang Jabatan Fungsional Pranata
Laboratorium dan angka kreditnya.
Tjitrosoepomo, 2005, Morfologi Tumbuhan, Yogyakarta: UGM Press.
Anonim, 2008, Farmakope Herbal Indonesia Edisi I, Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta.
Anwar, Chairil & Hasmi, 2005, Pengantar Praktikum Kimia Organik, Jakarta, Departemen
Pendidikan dan Kebudayaan.
Heinrich, M.J.&Gibbons,S., 2003, Fundamentals of Pharmacognosy and
Phitotherapy,Churchill Livingstone, USA.
Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia, Penerbit ITB,Bandung

245
 Isolasi Senyawa Aktif Lignan dari Buah Lada Hitam (Piper nigrum L.) dan
Daun Sirih (Piper betle L.)

*Elfahmi, Komar Ruslan Wirasutisna, Heipy Ketrin Desyane

Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung, Jalan Ganesha 10 Bandung 40132

Abstrak
Buah lada hitam (Piper nigrum L.) dan daun sirih (Piper betle L.) telah banyak digunakan secara tradisional untuk mengobati
beberapa jenis penyakit. Beberapa senyawa metabolit sekunder yang terkandung pada kedua tanaman tersebut diduga
bertanggungjawab terhadap efek farmakologi, salah satu golongan metabolit sekunder tersebut adalah lignan. Penelitian ini
bertujuan untuk mengisolasi senyawa lignan dari buah lada dan daun sirih. Serbuk simplisia dari daun sirih dan buah lada
hitam diekstraksi dengan ekstraksi sinambung menggunakan pelarut metanol. Ekstrak difraksinasi dengan ekstraksi cair-cair
menggunakan pelarut air-diklorometan (1:1) dan kromatografi cair vakum. Pemurnian dilakukan dengan menggunakan metode
kromatografi lapis tipis preparatif. Isolat dikarakterisasi dengan menggunakan kromatografi gas-spektroskopi massa (KG-SM).
Dari buah lada hitam telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi dua senyawa lignan berupa hinokinin dan satu senyawa lignan
lain yang memiliki ciri fragmen 135 dan 286 pada KG-SM. Sedangkan daun sirih memberikan data kromatografi untuk
golongan lignan tetapi belum dapat dikonfirmasi dengan data KG-SM.
Kata kunci : buah lada hitam, daun sirih, lignan, tanaman obat Indonesia

Abstract
Black pepper fruits and betel leaves are widely used traditionally to cure several illnesses. Secondary metabolites of both
plants are believed to be responsible for their pharmacological effect; one of the secondary metabolites groups is lignan. The
goal of this research is to isolate lignans from betel leaves and black pepper fruits. Crude drugs of betel leaves and pepper
fruits were extracted with Soxhlet apparatus, using methanol. The extract was fractionated by liquid-liquid extraction using
dichloromethane-water (1:1) and vacuum liquid chromatography. Purification was conducted by preparative thin layer
chromatography. Isolated compounds were characterized by gas chromatography-mass spectra (GC-MS). Two lignans were
isolated from black pepper fruits and identified with GCMS. First known as hinokinin, and another has MS fragment 135 and
268, which are specific for lignan compounds. Betel leaves showed chromatography data to lignan groups but cannot confirm
yet by GC-MS.
Keywords: black pepper fruits, betel leaves, lignan, Indonesian Medicinal Plant

Pendahuluan diantaranya telah dikembangkan sebagai bahan obat,

Tanaman Piper nigrum L. atau lebih dikenal sebagai
lada dikenal masyarakat sebagai bumbu dapur atau
penambah rasa dan aroma makanan. Selain itu, lada
juga dikenal masyarakat sebagai obat perut kembung,
tekanan darah tinggi, sesak nafas dan peluruh keringat
(Ditjen POM Depkes RI 2007).
Tanaman Piper betle L. atau yang sering dikenal
dengan nama sirih telah dikenal masyarakat sejak
lama. Sirih biasanya digunakan untuk obat hidung
berdarah, batuk, sakit mata, bisul dan sariawan (Ditjen
POM Depkes RI 2007).
Beberapa penelitian tentang kedua tanaman tersebut
telah dilakukan. Penelitian tersebut diantaranya
tentang efek farmakologi untuk membuktikan
pemakaian tradisional dan tentang kandungan kimia
dari senyawa kedua tanaman tersebut.
salah satu contohnya adalah podofilotoksin dan
turunannya yang memiliki aktivitas antikanker dan
antitumor (Koulman 2003).
Informasi tentang kandungan lignan dalam tanaman
Piper nigrum L. dan Piper betle L. masih sangat
terbatas. Berdasarkan hal tersebut, maka penelitian ini
dimaksudkan untuk mengetahui lebih dalam
mengenai kandungan lignan dalam tanaman sirih,
Piper nigrum L. dan lada Piper betle L.
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa
lignan dari buah lada hitam dan daun sirih sehingga
diperoleh senyawa baru yang memiliki efek
farmakologi tertentu. Hasil isolasi ini diharapkan
dapat dijadikan acuan dalam pengembangannya
sebagai obat herbal yang berkualitas.

Salah satu metabolit sekunder yang terbukti memiliki

aktivitas farmakologi adalah lignan. Beberapa

*Penulis korespondensi. E-mail: elfahmi@fa.itb.ac.id

14 - Acta Pharmaceutica Indonesia, Vol. XXXVII, No. 1, 2012


Percobaan
Bahan
Daun sirih, buah lada hitam, aqua destilata, n-heksan,
diklorometan, metanol, etanol (95%), toluen, eter,
kloroform, asam asetat, natrium hidroksida, asam
sulfat, serbuk magnesium, amil alkohol, gelatin 1%,
alumunium (III) klorida, asam klorida, bismut (III)
nitrat, asam nitrat, kalium iodida, besi (III) klorida,
formaldehid, asam asetat anhidrida, asam sulfat,
pereaksi vanilin sulfat, etil asetat, silika gel GF254,
silika gel H60, Kloral hidrat 70%, air – gliserin, kertas
saring biasa, kertas saring bebas abu.
Alat
Penggiling simplisia, mikroskop, kaca obyek, oven,
kaca penutup, pisau tipis, gabus penjepit, krus
porselen, krustang, kompor listrik, batu didih, neraca
analisis, seperangkat alat penentuan kadar air, botol
timbang dangkal bertutup, eksikator, labu bersumbat,
cawan datar dasar rata, mortar, stemper, tabung
reaksi, rak tabung, pipet tetes, gelas piala, penangas
air, corong pisah, corong, batang pengaduk,
seperangkat alat soxhlet, pelat Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) pralapis, bejana kromatografi, alat
penyemprot pereaksi, lampu UV (DESAGA),
seperangkat alat kromatografi cair vakum, penguap
vakum putar, labu erlenmayer, kaca arloji, gelas ukur,
labu ukur, pelat tetes, spatula, dan kromatografi gas–
spektroskopi massa (varian 3900–Saturn 2000).
Penyiapan Bahan Tanaman
Bahan yang digunakan adalah buah lada hitam (Piper
nigrum L.) yang diperoleh dari Lampung dan daun
sirih (Piper betle L.) yang diperoleh dari Subang.
Determinasi tanaman dilakukan di Herbarium
Bandungense Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati
Institut Teknologi Bandung. Buah lada hitam dan
daun sirih dipisahkan dari pengotornya, kemudian
digiling sehingga didapatkan serbuk simplisia.
Prosedur
Penapisan fitokimia
Penapisan fitokimia meliputi pemeriksaan golongan
senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, kuinon, tanin,
dan steroid/triterpenoid.
Ekstraksi dan pemantauan ekstrak
Serbuk simplisia buah lada hitam (Piper nigrum L.)
dan daun sirih (Piper betle L.) diekstraksi dengan cara
panas yaitu ekstraksi sinambung menggunakan alat
soxhlet dengan pelarut metanol. Ekstrak yang
diperoleh dipekatkan dengan alat penguap putar
vakum pada suhu 35-40oC. Pemantauan ekstrak pekat
metanol menggunakan metode Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) menggunakan plat silika gel GF254 pra
salut dan pengembang n-heksana–etil asetat (2:1).
Acta Pharmaceutica Indonesia, Vol. XXXVII, No. 1, 2012 - 15
Elfahmi et al.
Kromatogram diamati di bawah sinar UV pada λ 254
nm dan 366 nm, serta digunakan penampak bercak
asam sulfat 10% dalam metanol.
Fraksinasi dan pemantauan fraksi
Ekstrak pekat metanol ditambahkan campuran air-
diklorometana (1:1) dan dilakukan fraksinasi secara
ekstraksi cair-cair (ECC).
Fraksi diklorometan diambil dan dipantau. Fraksi
dipantau dengan cara Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
menggunakan plat silika gel GF254 pralapis dan
pengembang n-heksana-etil asetat (1:1) untuk fraksi
lada dan heksana-etil asetat (7:4) untuk fraksi sirih.
Kromatogram diamati di bawah sinar UV pada λ254
nm dan 366 nm, serta digunakan penampak bercak
asam sulfat 10% dalam metanol.
Fraksinasi kedua dilakukan terhadap fraksi pekat ECC
menggunakan metode kromatograficair vakum (KCV)
menggunakan fase diam silika gel 60 H dan eluen
berupa komposisi pelarut n-heksan-diklorometana-
metanol.
Subfraksi yang diperoleh dipantau kembali secara
KLT dengan plat silika gel GF254 pralapis dan
pengembang toluena-aseton (50:1) dan toluena-aseton
(25:7) untuk subfraksi lada. Serta pengembang
toluena-aseton (7:3) untuk subfaksi sirih. Kromato-
gram diamati di bawah sinar UV pada λ 254 nm dan
366 nm, serta digunakan penampak bercak vanilin
sulfat.
Pemurnian
Subfraksi yang diperkirakan mengandung lignan
dimurnikan dengan KLT preparative menggunakan
adsorben silika gel GF254 dengan penyangga kaca
dan pengembang toluena-aseton (50:1) untuk
subfraksi lada dan toluena-aseton (7:3) untuk
subfraksi sirih. Pita hasil KLT preparatif yang
diinginkan dikerok, dilarutkan dalam metanol
kemudian disaring.
Karakterisasi isolat
Isolat dikarakterisasi secara KG-SM untuk mengeta-
hui spektrum massa khas yang terdapat di dalam isolat
tersebut.
Hasil dan Pembahasan
Penapisan fitokimia dilakukan untuk menentukan
golongan kimia dari simplisia yang akan digunakan.
Hasil penapisan fitokimia menunjukkan bahwa daun
sirih mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, kui-
non, dan steroid-triterpenoid. Sedangkan pada buah
lada menunjukkan adanya golongan senyawa alkaloid,
flavonoid.
Elfahmi et al.

Ekstrak metanol dan ekstrak diklorometana dari kedua
simplisia dipantau secara KLT. Hasil pemantauan
ekstrak ini tidak digunakan penampak bercak spesifik
lignin, namun dilakukan penyemprotan dengan asam
sulfat 10% dalam methanol yang bertujuan untuk
mengetahui berapa senyawa yang terdapat dalam
ekstrak. Bercak yang diduga senyawa lignan adalah
bercak yang memberikan warna gelap pada UV λ 254
nm dan UV λ 366 nm serta memberikan warna ungu
setelah disemprot dengan penampak bercak H2SO4
dan vanilin sulfat.
Ekstrak diklorometana dilanjutkan dengan kromato-
grafi cair vakum (KCV). Dari hasil pemantauan
fraksinasi kedua terlihat bercak berwarna ungu pada
fraksi ke-11 sampai fraksi ke-13 pada daun sirih, serta
pada fraksi ke-8, 10, 13 pada buah lada. Kemudian
fraksi-fraksi ini dimurnikan menggunakan KLT
prepatatif dengan fasa diam silika gel GF254
menggunakan penyangga kaca dan pengembang
toluena-aseton (50:1) untuk subfraksi lada, serta
pengembang toluena-aseton (7:3) untuk subfraksi
sirih. Pada pita yang diinginkan dikerok dan
dilarutkan ke dalam metanol kemudian disaring.
Diperoleh beberapa isolat yang siap untuk
dikarakterisasi.
Karakterisasi isolat dilakukan menggunakan
kromatografi gas-spekroskopi massa (KG-SM) varian
3900 Saturn 2000 dengan kolomkapiler VF-5ms 30m
x 0,25mm ID. Dipilihnya metode KG-SM untuk
karakterisasi senyawa lignan karena senyawa lignan
memiliki spektrum massa, m/z, yang khas yaitu
fragmen massa, m/z, 135, 151, 165, 181. Dari hasil
karakterisasi, diperoleh subfraksi no. 10 buah lada
diduga mengandung dua senyawa lignan yaitu
hinokinin yang memiliki spektrum massa khas dengan
fragmen (m/z) 135 dan 354, serta senyawa lignan
dengan fragmen khas 135 dan 286. Kromatogram
dapat dilihat pada Gambar 1.

(b)Gambar 1. Kromatogram hasil KG-SM: (a) salah satu senyawa lignandengan fragmen massa khas 135 dan
286, (b) senyawa hinokinindengan fragmen massa khas (m/z) 135 dan 354.

16 - Acta Pharmaceutica Indonesia, Vol. XXXVII, No. 1, 2012

 Elfahmi et al.

Kesimpulan
Isolat buah lada hitam yang diperoleh merupakan
senyawa hinokinin yang memilikifragmen khas 135
dan 354, serta senyawa lignan dengan fragmen khas
135 dan 286. Sedangkan daun sirih memberikan data
kromatografi untuk golongan lignan tetapi belum
dapat dikonfirmasi dengan KG-SM.

Daftar Pustaka
Ditjen POM Depkes RI, 2000, Inventaris Tanaman
Obat Indonesia, Depkes RI, Jakarta,183–184, 273-274.

Koulman A, 2003, Podophyllotoxin, A Study of

Biosynthesis, Evolution, Function and Use of
Podophyllotoxin and Related Lignans,
Rijksuniversiteit, Groningen, 16-18.

Acta Pharmaceutica Indonesia, Vol. XXXVII, No. 1, 2012 - 17

 Majalah Kedokteran UKI 2016 Vol XXXII No.3
Juli - September
Artikel Asli

Uji Toksisitas dan Fitokimia Jamu Pelancar Menstruasi Berbahan Dasar Jahe
(Zingiberis  rhizome)

Fri Rahmawati,1* Ignatia Hulukiti2

Departemen Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Indonesia

1

2
Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Indonesia

Abstrak
Jamu merupakan salah satu obat tradisional asli Indonesia yang telah digunakan secara turun-temurun. Salah satu
contoh jamu yang banyak digunakan dan beredar di masyarakat adalah jamu pelancar mentruasi. Tujuan penelitian
ini adalah untuk mengetahui nilai toksisitas jamu pelancar mentruasi yang berbahan dasar rimpang jahe dengan
menggunan metode brine shrimp lethality test (BSLT) dan melakukan analisis fitokimia dengan metode Harbone.
Uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina Leach dilakukan dengan tiga konsentrasi, yaitu 2.000 ppm,
4.000 ppm dan 6.000 ppm. Hasil penelitian menunjukkan semua konsentrasi jamu pelancar mentruasi memiliki
daya bunuh terhadap larva udang. Nilai Lethal Concentration 50% (LC50) jamu pelancar mentruasi berbahan dasar
rimpang jahe terhadap larva udang Artemia salina Leach. sebesar 3.131 ppm. Jamu pelancar mentruasi tersebut
mengandung senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, fenol, saponin, steroid dan triterpenoid

Kata Kunci: jamu, analisis fitokimia, LC50

Toxicity and Phytochemical Test of Jamu for Normalizing Menstruation Rich of Ginger
(Zingiberis  rhizome)

Abstract
“Jamu” is Indonesia’s traditional medicine which has been used for generations. One of the widely used and
sold jamu in Indonesia is indicated for normalizing menstruation. The aim of this study was to know the lethal
concentration 50% value (LC50) and to screen phytochemical compounds of jamu for normalizing menstruation
which rich of of ginger (Zingiberis   rhizome). The toxicity test was done using the brine shrimp lethality test
(BSLT) and phytochemical compounds were screened using the Harbone methods. The toxicity test for larvae
Artemia salina Leach was done at three concentration levels: 2,000 ppm; 4,000 ppm; and 6,000 ppm. The results
of the BSLT showed that all concentration levels exhibited the activity of Artemia salina Leach, with a LC50 value
of 3,131 ppm. Phytochemical screening revealed the presence of alkaloids, flavonoids phenol, saponins, steroids
and triterpenoid in jamu for normalizing menstruation.

Keywords: jamu, phytochemical analysis, LC50,

*FR: Penulis Koresponden: E-mail: fri_rahmawati@yahoo.co.id

126
Pendahuluan
Penggunaan obat tradisional di
Indonesia sudah berlangsung lama, jauh
sebelum obat modern ditemukan dan
dipasarkan. Penggunaan obat tradisional
sudah menjadi budaya bangsa dan
dimanfaatkan oleh masyarakat secara
turun-temurun. Salah satu obat tradisional
Indonesia yang telah digunakan oleh
masyarakat untuk menjaga kesehatan dan
mengobati berbagai penyakit adalah jamu.
Jamu merupakan ramuan bahan tumbuhan,
bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian
(galenik) atau campuran bahan tersebut yang
digunakan masyarakat untuk pengobatan.1
Sekarang jamu telah berkembang luas dan
semakin populer di masyarakat. Industri
jamu masuk ke dalam 10 produk prospektif
yang perlu dikembangkan karena memiliki
pangsa pasar yang menjanjikan. Permintaan
jamu mengalami peningkatan; pertumbuhan
pangsa pasarnya lebih baik dari pada
pertumbuhan industri farmasi. Masyarakat
semakin menyadari pentingnya penggunaan
bahan alami untuk kesehatan. Selain itu
harganya lebih murah, mudah diperoleh dan
diyakini memiliki efek samping yang kecil. Di
sisi lain, pelaku industri jamu masih menemui
banyak kendala, salah satunya yang terkait
dengan peraturan dan prosedur pengujian
laboratorium.2 Menurut keputusan Badan
Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM)3,
jamu harus memenuhi kriteria: aman sesuai
dengan persyaratan yang ditetapkan, klaim
khasiat dibuktikan berdasarkan data empiris
dan memenuhi persyaratan mutu. Selain itu,
pada beberapa tahun terakhir banyak beredar
jamu mengandung bahan kimia, sehingga
untuk efektivitas dan keamanan penggunaan
jamu dibutuhkan uji keamanan (praklinik)
sebelum digunakan dan dipasarkan ke
masyarakat.
Jamu yang banyak digunakan oleh kaum
wanita adalah jamu pelancar menstruasi
untuk mengatasi masalah keterlambatan
127
dan rasa nyeri saat mentruasi. Cara kerja
jamu tersebut adalah dengan meluruhkan
lapisan endometrium uterus. Sering kali
penggunaaan jamu pelancar mentruasi
disalahgunakan oleh masyarakat untuk aborsi
tanpa indikasi medis sehingga keamanannya
tidak terjamin. Penelitian ini bertujuan untuk
mendapatkan data ilmiah keamanan salah
satu jamu pelancar menstruasi yang berbahan
dasar rimpang jahe dengan metode brine
shrimp lethality test (BSLT) dan melakukan
analisis fitokimia dengan metode Harbone.
Bahan dan Cara
Penelitian ini bersifat eksperimental
laboratorium dengan metode kuantitatif
dan kualitatif. Penelitian ini dilakukan
di Laboratorium Biokimia FMIPA-IPB
selama bulan Oktober 2016. Uji toksisitas
dilakukan dengan metode BSLT, merupakan
tahap awal menguji efek toksik akut suatu
bahan alami. Metode BSLT dilakukan
dalam waktu singkat yaitu rentang waktu
selama 24 jam setelah pemberian dosis
uji. Uji toksisitas dengan metode BSLT
memiliki spektrum aktivitas farmakologi
yang luas, prosedurnya sederhana, cepat
dan tidak membutuhkan biaya yang besar,
serta hasilnya dapat dipercaya. Hewan uji
yang digunakan adalah larva udang Artemia
salina Leach, yaitu udang primitif sederhana
namun efektif dalam ilmu biologi dan
toksikologi. Sampel yang digunakan adalah
jamu pelancar mentruasi yang mengandung
jahe (Zingiberis  rhizomeyang) sebagai bahan
utama pada jamu tersebut. Selain jahe jamu
pelancar mentruasi yang digunakan juga
mengandung lengkuas (Languatis rhizome),
meniran (Phyllanthus niruri L), pakis
(Achilleae folium), lada hitam (Piperis nigri
Fructus) dan kunyit (Curcuma   domesticae  
Rhizoma). Konsentrasi jamu uji dibuat
dalam tiga konsentrasi berdasarkan konversi
aturan pakai yang dianjurkan pada sampel
jamu mentruasi, yaitu 2 000 ppm, 4 000 ppm
dan 6.000 ppm. Pengaruh konsentrasi jamu
pelancar mentruasi berbahan dasar rimpang
jahe terhadap kematian larva udang Artemia
salina Leach dianalisis menggunakan
metode analisis probit untuk menentukan
nilai lethal dose concentration 50% (LC50).
Dilakukan analisis regresi hubungan antara
log konsentrasi dan nilai probit kematian
larva udang dengan persamaan linear Y =
mX + b yang menunjukkan hubungan Y
(nilai probit dari % kematian larva udang)
dengan X (log konsentrasi jamu pelancar
mentruasi). Nilai LC50 diperoleh dari
antilog X. Selain melakukan uji toksisitas,
juga dilakukan analisis fitokimia terhadap
jamu pelancar mentruasi yang digunakan
dengan menggunakan metode Harbone.4
Analisis fitokimia yang dilakukan meliputi
uji flavonoid, alkaloid, fenol, saponin,
steroid dan triterpenoid.
Hasil
Hasil penentuan nilai LC50 pada
berbagai konsetrasi jamu pelancar mentruasi
berbahan dasar rimpang jahe terhadap
persen (%) kematian larva udang Artemia
salina Leach disajikan pada Grafik 1.
Hasil analisis yang dilakukan
menunjukkan terdapat hubungan yang kuat
Grafik 1. Hasil uji toksisitas jamu pelancar mentruasi berbahan dasar rimpang jahe terhadap
nilai probit kematian larva udang
128
antara log konsentrasi dengan nilai probit
dari kematian larva udang. Hal tersebut
dapat dilihat dari nilai koefisien determinasi
(R2) dari persamaan regresi sebesar 0,996
(mendekati 1,0). Diperoleh persamaan Y =
3,5522X + (-7,4173) dan nilai LC50 sebesar
3.131 ppm, artinya pada konsentrasi tersebut,
50% larva udang Artemia salina Leach mati.
Hasil analisis fitokimia pada jamu
pelancar menstruasi berbahan dasar rimpang
jahe menunjukkan bahwa jamu tersebut
positif mengandung senyawa alkaloid,
flavonoid, fenol, saponin, steroid dan
triterpenoid.
Diskusi
Berdasarkan nilai LC50 yang diperoleh
maka jamu pelancar menstruasi berbahan
dasar rimpang jahe tidak toksik pada larva
udang, karena memiliki nilai LC50 lebih
besar dari 1000 ppm. Menurut Meyer et
al.5 bahwa tingkat toksisitas suatu ekstrak
adalah sebagai berikut: LC50 ≤ 30 mg/L =
sangat toksik; LC50 ≤ 1.000 mg/L = toksik;
LC50 > 1.000 mg/L = tidak toksik (1 ppm =
1 mg/L).
Hasil analisis fitokimia terhadap jamu
pelancar mentruasi diketahui bahwa jamu
tersebut mengandung senyawa metabolit
sekunder berupa alkaloid, flavonoid, fenol,
saponin, steroid dan triterpenoid. Senyawa
metabolit sekunder yang terdapat di dalam
jamu pelancar mentruasi yang digunakan
berasal dari bahan-bahan alami yang
terdapat di dalam jamu tersebut yaitu jahe,
lengkuas, meniran, pakis, lada hitam dan
kunyit. Berdasarkan penelitian Kemenkes6
bahwa jahe, lengkuas, dan kunyit telah
terbukti memiliki khasiat untuk mengatasi
keterlambatan haid karena darah tidak
lancar dan nyeri saat haid. Ketiga tumbuhan
berakar rimpang tersebut sering digunakan
dalam pengobatan yang berhubungan
dengan sistem pencernaan (mual, muntah,
diare), berhubungan dengan kewanitaan
(nyeri haid, haid tidak lancar dan setelah
melahirkan), dan obat demam. Jahe adalah
bahan dasar utama yang terdapat dalam jamu
pelancar mentruasi yang diuji. Senyawa aktif
utama dari jahe segar adalah gingerol yang
merupakan senyawa turunan fenolik yang
memberikan rasa pedas pada jahe. Gingerol
bersifat tidak stabil karena panas, maka jika
jahe dikeringkan gingerol akan mengalami
dehidrasi menjadi shogaol. Gingerol pada
jahe telah terbukti mempunyai aktivitas
anti inflamasi dan analgesik.7 Meniran
merupakan jenis tumbuhan liar yang mudah
ditemukan dan memiliki banyak khasiat.
Senyawa aktif meniran adalah filantin
dan hipofilantin yang berperan sebagai
immunostimulan dan hepatoprotektor.
Senyawa turunan alkaloid yang terdapat di
dalam meniran berperan sebagai antipiretik,
anti radang, antidiare dan diuretik. Di
India, meniran secara luas digunakan untuk
gangguan mentruasi, diare, kencing nanah
dan terbukti mengatasi hepatitis B.8 Buah
lada dikenal sebagai bumbu masak, namun
juga bisa digunakan untuk mengobati
berbagai macam penyakit seperti disentri,
kolera, kaki bengkak, nyeri haid, reumatik
(nyeri otot) dan sakit kepala.9 Senyawa aktif
dalam buah lada adalah piperin, merupakan
turunan senyawa alkaloid. Dilaporkan bahwa
piperin yang terdapat di dalam lada hitam
129
memiliki aktivitas antipiretik, analgesik,
anti inflamasi dan immunostimulan.10
Kesimpulan
Uji toksisitas akut jamu pelancar
mentruasi berbahan dasar rimpang jahe
sampai dengan dosis 6.000 ppm tidak bersifat
toksik dengan nilai LC50 sebesar 3.131 ppm.
Analisis fitokimia jamu pelancar mentruasi
mengandung senyawa metabolit sekunder
berupa senyawa alkaloid, flavonoid, fenol,
saponin, steroid dan triterpenoid. Untuk
penelitian lebih lanjut perlu dilakukan uji
praklinis akut dengan menggunakan hewan
uji yang memiliki fisiologi lebih dekat
dengan manusia dan uji klinis pada manusia.
Daftar Pustaka
1. Undang-Undang Republik Indonesia Nomor 36
tahun 2009 tentang kesehatan.
2. Murdopo. Obat herbal tradisional. Warta Ekspor.
Ditjen PEN/MJL/005/9/2014 September.
3. BPOM RI. Memilih obat tradisional dan suplemen
makanan yang baik. BPOM RI 2010. Diunduh
dari: http://perpustakaan.pom.go.id/ 25 juni 2015
4. Harbone JB. Metode fitokimia: Penentuan Cara
Modern Menganalisa Tumbuhan. Terjemahan
Padmawinata K dan Soediro I. Bandung: ITB
Press; 1996.
5. Meyer BN, Ferrigni NR, P utnam JE, Jacobsen
LB, Nichols DE, Mc Laughlin JL. Brine shrimp:
A convenient general bioassay for active plant
constituents. J Planta Medica 1982; 45(5): 31-45.
6. Keputusan Menteri Kesehatan RI No 121/
Menkes/SK/11/2008 tentang Standar Pelayanan
Medik Herbal. Jakarta.
7. Kim EC, Min JK, Kim TY, Lee SJ, Yang HO,
Han S, et al. 6-Gingerol, a pungent ingredient of
ginger, inhibits angiogenesis in vitro and in vivo.
Biochem. Biophys Res Commun. 2005; 335:
300-8.
8. Kardinan A Kusuma FR. Meniran penambah
daya tahan tubuh. Depok: Agromedia Pustaka.
2004.
9. Soedibyo MB. Alam Sumber Kesehatan dan
kegunaannya. Jakarta: Balai Pustaka. 1998.
10. Nisar A, Hina F, Bilal H. A, Shahid F, Muhammad
A, Mubarak A K, et al. Biological role of Piper
nigrum L. (Black pepper): A review. Asian Pacific
J Trop Biomed. 2012; S1945-S53.
See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/273701148

Synthesising a novel derivatives of piperine from black pepper (Piper nigrum

L.)

Article  in  Journal of Food Measurement and Characterization · March 2015

DOI: 10.1007/s11694-015-9239-2

CITATIONS READS

8 3,811

1 author:

Dara Aziz
University of Raparin
9 PUBLICATIONS   25 CITATIONS   

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Chemical composition, antibacterial and antioxidant activities of alkaloids from aerial parts of raspberry View project

All content following this page was uploaded by Dara Aziz on 18 September 2019.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

Food Measure
DOI 10.1007/s11694-015-9239-2
ORIGINAL PAPER
Synthesising a novel derivatives of piperine from black pepper
(Piper nigrum L.)
Dara Muhammed Aziz1 • Jawameer Rasool Hama1 • Sarwar M. Alam2
Received: 17 November 2014 / Accepted: 9 March 2015
Ó Springer Science+Business Media New York 2015
Abstract Black pepper (Piper nigrum L.) has gained a
global consideration because of its volume in the spice
industry. This plant has shown great potential for having
medical applications and novel biologically active com-
pounds. In black pepper, natural lipophilic amide piperine
was isolated. Piperine was isolated from the fruit using
glacial acetic acid as solvent. After isolation and charac-
terization of piperine were done, then it is used to prepare
new and novel derivatives of piperine through the ex-
perimental procedure. The derivatives of piperine were
synthesized by condensation of piperic acid with different
substituted aromatic amines, to make a new derivative of
piperine, such as ((2E, 4E)-5-(1,3-benzodioxol-5-yl)-N-
(1,3-benzothiazol-2-yl)penta-2,4-dienamide) and a novel
derivative ((2E, 4E)-5-(1,3-benzodioxol-5-yl)-N-(1,3-ben-
zothiazol-2-yl)penta-2,4-dienehydrazide). The structure of
piperine and the derivatives were elucidated through a
combination of spectrometric techniques, including ultra-
violet spectrophotometer, Mass spectrometry Fourier
transform infrared spectroscopy, proton nuclear magnetic
resonance.
Keywords Black pepper (Piper nigrum L.)  Piperine 
Structure elucidation  Derivatives of piperine
& Dara Muhammed Aziz
darachem@raparinuni.org
1
Chemistry Department, Faculty of Science, University of
Raparin, Rania, Kurdistan Region, Iraq
2
Department of Chemistry, Faculty of Science, Jamia
Hamdard (Hamdard University), New Delhi 110 062, India
Introduction
Spices are natural food additives which contribute im-
mensely to the taste of our foods. From ancient times they
have been used to enliven our foods [1]. Spices possess
medicinal as well as nutritional based properties. Black
pepper (Piper nigrum L.) is a medicinal plant in the family
Piperaceae that is cultivated for its fruit, which is usually
dried. This plant is native to south India and widespread in
tropical region [2, 3]. It is famous as the spices pungent
quality, it is the world’s most important commercial spice.
The fruit is dark green at first passing orange-yellow to dull
red when ripe [3].
Black pepper used in various fields such as food pro-
cessing [4, 5], and pharmaceutical industry [3, 6], also the
uses are increasing steadily due to its recognition as an
important source of natural compounds. Black pepper is
one of the plants with medicinal components along with
appreciable levels of several other functional components
having health promoting properties [7, 8], particularly as
anti-microbial [9], anti-inflammatory [3, 10], anti-muta-
genic [11], a free-radical scavenger [1, 7, 12], immuno-
modulator [13], anti-tumor [6, 14], anti-depressant [15],
anti-apoptotic [16], anti-metastatic [17], anti-thyroid [18],
immunostimulator [19], anti-diarrheal and anti-spasmodic
[20]. Also, it has bioavailability enhancement nature [8],
carminative property, cholesterol lowering capacity [20,
21], anti-pyretic and anti-periodic. Black-pepper was re-
ported to treat fever, cold, colic disorder and gastric con-
ditions [22, 23].
Black pepper constituents include fiber, essential oils,
alkaloids, eugenol, the enzyme lipase, and minerals. Piperine
is a major alkaloids present in black pepper [2, 5, 23]. It is
the naturally occurring alkaloid that gives the spice and
biting taste [24]. Generally the piperine content of black
123

peppercorns lies within the range of 3–8 g/100 g [2]. It is
responsible for many pharmacological activities of the
black pepper [24, 25]. Piperine is medicinally used as anti-
inflammatory [26], anti-malarial, cure for stomach ache,
weight loss [20, 27], anti-leukemia and fever reducer [28].
Pharmacological studies on piperine have revealed that
this compound elicited diverse pharmacological activities
[29].
At least five other alkaloids, structurally related to
piperine found in Black pepper, which are in smaller
amounts [2, 30]. Whereas the content of the minor alka-
loids piperyline and piperettine have been estimated as
0.2–0.3 and 0.2–1.6 g/100 g, respectively [2]. Studies have
demonstrated that piperine and its derivatives present
sedative-hypnotic [26], tranquilizing, and muscle-relaxing
actions and can intensify the depressive action of other
depressants [15, 31].
Isolation of natural products is an important aspect of
organic chemistry, as many new drugs derived from them.
Thus it is more important than ever to be able to isolate
piperine from its natural habitat, which is black pepper [5,
32]. Various methods were used for isolating the pure al-
kaloid piperine and other content form black pepper, such
as solvent extraction [6], soxhlet apparatus extraction, ul-
trasound techniques [33] and supercritical fluid extraction
[34, 35]. Then different chemical techniques were per-
formed to characterize the contents of black pepper, in-
cluding thin layer chromatography (TLC), UV, FT-IR [2],
higher performance liquid chromatography (HPLC) [32,
36] and (NMR) [5].
The present study is focused on isolation and charac-
terization of piperine from the fruits of black pepper. For
piperine isolation, glacial acetic acid was used because the
yield of piperine was increased compare to use other sol-
vents. Then, some modifications were performed to prepare
several derivatives of piperine. The structures of piperine
and the derivatives of piperine were elucidated by UV, MS,
FT-IR and 1H NMR.
Materials and methods
Plant material
Dried black pepper fruits were purchased from local mar-
ket in Kerala, India. The plant was identified by the Botany
Department of Jamia Hamdard (Hamdard University) and
Biology Department of Raparin University in Iraq.
The fruit was cleaned to be free from stones and other
undesirable matters and sun dried. Then the sun dried
fruits were ground in an electrically operated grinder to
fine particle size, using a Thomas-Willey milling
machine.
123
D. M. Aziz et al.
HPLC grade solvents such as acetic acid, methanol,
ethanol, diethyl ether, ethyl acetate, hexane, toluene,
Dimethylformamide (DMF) and d-chloroform were ob-
tained from Merck (Germany). Pure standard substances
piperine, piperic acid, were purchased from Sigma-Aldrich
(Taufkirchen, Germany). The other reagents were used
without further purification.
Extraction of piperine
Dried fruit of black pepper (500 g) was extracted with
glacial acetic acid (1000 ml) at room temperature for
1 day, because glacial acetic acid extracted higher per-
centage of piperine compare to other solvents such as
methanol, ethanol, chloroform and ethyl acetate. This ex-
tract was filtered to remove any particle from the solution.
Finally, the solvents were removed by rotary evaporator
(Buchi R-114 Rotavapor, Switzerland) with water bath,
temperature set to 40 °C. Under high vacuum all residual
solvent was removed.
Instrumentation
Melting point was determined on a PERFIT melting point
apparatus. The UV spectra were scanned in methanol sol-
vent on a lambdaBio 20 spectrometer. MS was used to find
the molar mass of the extracts, using a Perkin Elmer Clarus
600 MS. The FT-IR spectra were recorded on KBr (Po-
tassium Bromide) pellets using a JASCO FT/IR-5000 in-
strument. The FT-IR spectra of the pellet were recorded
from 4000 to 400 cm-1. The 1H NMR data were recorded
on an advance DRY 400, Bruker Spectrospin, using CDCl3
as solvent. The 1H NMR was performed at an operating
frequency of 400 MHz. All processing and analysis was
performed on software of MestReNova LITE v 5.2.5. Silica
gel (Qualigens) was used for analytical TLC, spots were
visualized by exposure to iodine vapors, UV radiation, and
by spraying reagents.
Isolation of piperine
The extracted was diluted with equal amount of deionized
water. The diluted extract fractionated with 1000 ml
chloroform in a separator funnel (twice). The chloroform
extracts were combined and washed with 10 % sodium
bicarbonate and water. The extraction was dried on anhy-
drous sodium sulfate then the solvents were removed by
rotary evaporator with water bath, temperature set to
40 °C. Finally the outcome residue was dissolved in
minimum amount of chloroform followed by directly
adding diethyl ether then, soon after that the piperine
started to precipitate in a yellow greenish colour. Purified
piperine was recrystallized in diethyl ether.
Synthesising a novel derivatives of piperine from Piper nigrum L.
Modification of piperine scheme 1
Two gram of piperine refluxed with methanolic KOH
(20 %, 50 ml) for 3 days. After the completion of the hy-
drolysis process the methanol was distillated. The result of
the reaction was suspended in hot water and acidified with
HCl to pH \1. Yellow precipitate was obtained by filtra-
tion, washed with cold water and recrystallized in methanol
to yield crystal of piperic acid, compound (2) in scheme 1.
Compound (3)
100 milligrams (mg) of piperic acid was dissolved in 5 ml
DMF. Then 80 mg of 2-aminobenzothiazole (1,3-Ben-
zothiazol-2-amine), 30 mg of Hydroxybenzotriazole
Fig. 1 UV spectrum of piperine extract, k-max of 345 nm
Fig. 2 FT-IR spectrum of piperine
(HOBt) and 130 mg of N-(3-Dimethylaminopropyl)-N0 -
ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC.HCl) were added,
stirred for 2 days. And then the solution diluted with 30 ml
of H2O. After that 40 ml of glacial acetic acid was added.
The organic layer was separated and washed with saturated
sodium bicarbonate then washed with water. Followed by
sodium sulfate addition to dry the precipitate, and then the
solution filtrated. In the filtrated solution, brown crystals
started to form. Recrystallization was performed in
methanol.
Compound (4)
100 mg of piperic acid was dissolved in 5 ml DMF. Then
80 mg of 2-hydrazinyl-1,3-benzothiazol, 30 mg of HOBt
and 130 g of EDC.HCl were added, the solution stirred for
2 days. And then the solution diluted with 30 ml of H2O.
After that 40 ml of glacial acetic acid was added. The or-
ganic layer was separated and washed with saturated
sodium bicarbonate then washed with water. Followed by
sodium sulfate addition to dry the precipitate, and then
filtrated. In the filtrated solution, brown crystals started to
form. Recrystallization was performed in methanol.47
Results and discussion
Piperine was successfully extracted and isolated from
ground powdered black pepper. Glacial acetic acid was
used as solvent, the ratio was 15 g black pepper extracted
with 500 g of solvent. The yield was 3.0 %, which is
relatively high. The product was small yellow crystals with
123

Fig. 3 1H NMR spectrum of piperine, in d-chloroform (CDCl3) (400 MHz)
Fig. 4 UV spectrum of compound (3), k-max of 374 nm
a melting point of 132 °C, which is in agreement with the
theoretical range of 130-133 °C. The melting point indi-
cated that extracted piperine is pure [2]. TLC analysis also
indicates high purity, and the product lane contained use
one dot TLC Rf = 0.81395 (1:1 ethyl acetate:hexane)
which can be presumed to be piperine. The MS spectrum of
piperine clearly showed a molecular ion peak at m/z 284.5
corresponding to molecular formula, C17H19NO3 which is
very nearly similar to the mass spectral data of piperine
(Mol. wt. 285). Thus it may be concluded that the extract is
piperine and its structure was shown in Scheme 1 Com-
pound (1).
123
D. M. Aziz et al.
The solution of piperine extract was prepared (100 mg/
m1) for analysis and UV scanning. In the spectrum, a
single peak at (k-max of 345 nm) was observed, which
corresponds to a pure piperine in extract (Fig. 1).
For confirming the functional groups and bond envi-
ronments of piperine FT-IR operated for piperine extract.
FT-IR spectrum (Fig. 2) (neat, cm-1) indicates the pres-
ence of an amide (1580 cm-1), also indicates the presence
of aromatic and aliphatic C–H bonds (2937.3,
2854.0 cm-1), 2935.6 (C–H), 2843.9 (NCH2), 1580 (C=O),
1489 (aromatic C=C). All signals were annotated accord-
ingly, and matched the predicted spectrum for piperine. It
is indicated that the desired product has been isolated.
To ensure the elucidation the structure of piperine from
piperine extract, 1H NMR scanning was run for the extract,
as shown in Fig. 3. In the spectrum of 1H NMR (500 MHz,
CHCl3, d corrected for shifted CHCl3 peak) d 7.40 (dd, 1H,
J = 9.24, 9.01 Hz), 6.97 (s, 1H), 6.74 (d, 1H, J = 7.7 Hz),
6.76 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 6.43 (d, 1H,
J = 14.7 Hz), 3.58 (b, 4H), 1.24 (b, 6H).
Two derivatives of piperine; compound (3) and com-
pound (4), were prepared from piperic acid through the
experimental procedures. Melting point for the derivatives
was measured, to indicate their purity. The purity of the
derivatives was confirmed by TLC running and UV scan-
ning for the derivatives extraction. The chemical structures
of the derivatives were elucidated by MS, FT-IR and 1H
NMR.
Synthesising a novel derivatives of piperine from Piper nigrum L.

Compound (3) (Scheme 1) was identified to be ((2E, In the UV spectrum (Fig. 6), a single peak was observed at
4E)-5-(1,3-benzodioxol-5-yl)-N-(1,3-benzothiazol-2-yl) (k-max of 359 nm), which is prove the compound (4) is
penta-2,4-dienamide), as several chemical analysis were pure. Also UV spectra confirm the tow derivatives are
used to ensure the chemical structure. Compound (3) has different as they have different k-max. In the MS spectrum,
a sharp melting point at 245 °C. In the TLC, a spot with the molecular ion peak at m/z 365.4 corresponding to
Rf = 0.75 was separated with a mixed solvent system of molecular formula, C19H15O3N3S. Compound (4) is pre-
ethyl acetate:hexane:toluene (1:1:1). The solution of dicted as a novel derivative, because its structure is dif-
compound (3) was also prepared (100 mg/ml) in methanol for ferent from piperine and compound (3), as the chemical
UV scanning. In the UV spectrum, a single peak was observed analysis showed. Also as far as authors concerned no match
at (k-max of 374 nm), which is prove the compound (3) is of this derivative has been found and prepared elsewhere.
pure (Fig. 4). The MS spectrum of compound (3) clearly In the FT-IR spectrum (Fig. 7) of compound (4), the
showed a molecular ion peak at m/z 350.4 corresponding to peaks are corresponded for functional groups and bond
molecular formula, C19H14O3N2S. The MS spectrum shows environments as: (neat, cm-1) is (3201)(NH),
that compound (3) is different derivative of piperine.
In the 1H NMR spectrum, (500 MHz, d corrected for
shifted CDCl3 peak) the peaks are corresponded to:
(s 2H = 6.08 Hz) (1,3-dioxole), (1H = 7.07 Hz, 1H =
7.08 Hz, 1H = 7.09 Hz)(benzene), (2H = 7.35 Hz, 1H =
7.77 Hz, 1H = 8.01 Hz) (benzothiazole), (1H = 6.45 Hz,
1H = 6.92 Hz, 1H = 7.45 Hz, 1H = 7.55 Hz) (ethylene), as
shown in Fig. 5.
Compound (4) is a derivative of piperine and it is de-
termined as ((2E, 4E)-5-(1,3-benzodioxol-5-yl)-N-(1,3-
benzothiazol-2-yl)penta-2,4-dienehydrazide). Several che-
mical analysis were performed to ensure the chemical
structure of compound (4). Compound (4) has a sharp
melting point at 240 °C. In the TLC, a spot with Rf = 0.88
was separated with a mixed solvent system of ethyl ac-
etate:hexane:toluene (1:1:1). A solution of compound (4)
was prepared in methanol (100 mg/m1) for UV scanning. Fig. 6 UV spectrum of compound (4), k-max of 359 nm

Fig. 5 1H NMR spectrum of

compound 3, in d-chloroform
(CDCl3) (400 MHz)

123
 D. M. Aziz et al.

Fig. 7 FT-IR spectrum of

compound 4

Fig. 8 1H NMR spectrum of

compound (4), in d-chloroform
(CDCl3) (400 MHz)

(1592)(C=O), (14420)(C=C), (1520)(C=C Ar), (1550)(C–
N), (3100)(CH), (2915)(C=C–H).
In the 1H NMR spectrum of compound (4) (Fig. 8),
(500 MHz, d corrected for shifted CDCl3 peak) the peaks
were analysed as: (1H = 4.0 Hz)(amide), (1H = 7.45 Hz)
(ArCNH), (2H = 5.92 Hz)(1,3 dioxole), (1H = 6.91 Hz)
(1H = 7.1 Hz)(1H = 7.39 Hz)(benzene), (1H = 6.85 Hz)
(1H = 6.91 Hz)(1H = 7.35 Hz)(1H = 7.42 Hz)(ethylene),
(2H = 7.58 Hz)(1H = 7.88 Hz)(1H = 7.77 Hz)(benzo-
thiazole).
In short, piperine isolated from the fruit of black pepper.
Two new derivatives were prepared from piperic acid as

123
Synthesising a novel derivatives of piperine from Piper nigrum L.
Scheme 1 Reagents and
conditions: (a) 20 % methanolic
KOH 3 days reflux (b) HCl
pH \ 1 (c) DMF, EDC.HCl,
HOBt, 2 h stirring (d),
Molecular Formula: C7H6N2S
(e), Molecular Formula:
C7H7N3S
starting material, one of the derivatives (compound 3) is a
new compound, but the other derivative (compound 4) is a
novel compound.
Conclusion
The use of natural medicines has undeniably increased. The
suspicion raised by conventional health care professionals is
due to the lack of legislation and control. The genus Piper has
one of the largest membership in the plant kingdom and one
of the most widely distributed globally, covering all the
continents, but most commonly found in Asia (India) and
Tropical Africa. A number of the species have been scien-
tifically investigated for their chemical constituents and
bioactivity. The results of the investigations have shown that
their predominant constituents are the piper amides, which
have gradually become a very important class of alkaloids.
The new method for isolation of piperine was used to be
extracted with glacial acetic acid and recrystallization with
solvent ether. The solvent proved to be effective in isolating
piperine with higher yield and purity. Then the piperine ex-
traction used to prepare piperic acid. The piperic acid with
different substituted aromatic amines were used to prepare a
new derivatives of piperine which is ((2E, 4E)-5-(1,3-benzo-
dioxol-5-yl)-N-(1,3-benzothiazol-2-yl)penta-2,4-dienamide)
and novel derivative of piperine which is ((2E, 4E)-5-(1,3-
benzodioxol-5-yl)-N-(1,3-benzothiazol-2-yl)penta-2,4-diene-
hydrazide). Isolated piperine and the derivatives were identi-
fied by various methods such as melting point, TLC, UV, MS,
FT-IR and 1H NMR. The proposed method for extraction and
characterization lead to rapid, accurate and sensitive method
requiring less amount of solvent. Large number of samples can
be suitably employed for routine quality control analysis.
Finally, their biogenesis, isolation procedures, and
laboratory syntheses fall within the general patterns for
other natural products and general organic compounds. It is
apparent that piperine has the potential health and medical
uses, further studies are needed to explore such combina-
tion effects and further investigations should focus on the
development of piperine analogues.
Acknowledgments The authors would like to thank technical staff
of Chemistry Department at Raparin University and Jamia Hamdard
(Hamdard University) to let do the practical work in their chemical
laboratories. This work was financed with grants from HCDP pro-
gramme in Ministry of Higher Education and Scientific Research of
Kurdistan – Iraq.
Conflict of interest The authors declare that they have no conflict
of interest. This article does not contain any studies with human or
animal subjects.
References
1. R.K. Saxena, P. Venkaiah, L. Anitha, R.M. Venu, Int. J. Food Sci.
Nutr. 58, 250–260 (2007)
2. S. Hartwig, B. Malgorzata, Q. Rolf, S. Wolfgang, L. Gerd, J.
Agric. Food Chem. 53, 3358–3363 (2005)
3. A.C. Nisar, F. Hina, H.A. Bilal, F. Shahid, A. Mohammad, A.K.
Mubarak, Asian Pac. J. Trop. Biomed. 2, S1945–S1953 (2012)
4. T. Jagella, W. Grosch, Eur. Food Res. Technol. 2091, 22–26
(1999)
5. M. Meghwal, T.K. Goswami, Open Access Scientific Reports 1,
129 (2012). doi:10.4172/scientificreports.129
6. U. Parimi, D. Kolli, V.R.V. Durvasula, Med. Chem. Res. 22,
5466–5471 (2013)
7. I. Gulcin, Int. J. Food Sci. Nutr. 56, 491–499 (2005)
123

8. Y. Liu, V.R. Yadev, B.B. Aggarwal, M.G. Nair, Nat. Prod.
Commun. 5, 1253–1257 (2010)
9. H.J. Dorman, S. Deans, J. Appl. Microbiol. 88, 308–316 (2000)
10. M. Vachana, J.P. Samuel, K. Geema, P.S. Evan, KhR Mahaboob,
Inflammation 35, 1348–1356 (2012)
11. R. El-Hamas, M. Idaomar, A. Alonso-Moraga, S.A. Munoz, Food
Chem. Toxicol. 41, 41–47 (2003)
12. G.A. Agbor, J.A. Vinson, J.E. Oben, J.Y. Ngogang, Nutr. Res. 12,
659–663 (2006)
13. E.S. Sunila, G. Kuttan, J. Ethnopharmacol. 90, 339–346 (2004)
14. O. Dong-yun, Z. Long-hui, P. Hao, X. Li-hui, W. Yao, L. Kun-
peng, H. Xian-hui, Food Chem. Toxicol. 60, 424–430 (2013)
15. R.S. Vijayakumar, D. Surya, N. Nalini, Redox Rep. 9, 105–110
(2004)
16. N. Pathak, S. Khandlewal, Eur. J. Pharmacol. 576, 160–170
(2007)
17. C.R. Pradeep, G. Kuttan, Clin. Exp. Metastasis 19, 703–708
(2002)
18. S. Panda, A. Kar, Hormon. Metab. Res. 35(9), 523–526 (2003)
19. N. Pathak, S. Khandelwalm, Environ. Toxicol. Pharmacol. 28,
52–60 (2009)
20. K. Srinivasan, Food Res. Int. 38, 77–86 (2005)
21. D. Acharaporn, I. Kornkanok, P. Sakonwun, L. Nanteetip, J. Nat.
Med. 67, 303–310 (2013)
22. M.H. Mehmood, A.H. Gilani, J. Med. Food 13, 1086–1096
(2010)
23. R.A. Clery, C.J. Hammond, A.C. Wright, J. Essent. Oil Res. 18,
1–3 (2006)
123
View publication stats
D. M. Aziz et al.
24. V. Badmaev, M. Majeed, P.N. Edward, Nutr. Res. 19, 381–388
(1999)
25. B. Vladimir, M. Muhammed, P. Lakshmi, J. Nutr. Biochem.
11(2), 109–113 (2000)
26. R.K. Bhardwaj, H. Glaesser, L. Becquemont, U. Klotz, S.K.
Gupta, M.F. Fromm, J. Pharmacol. Exp. Ther. 302, 645–650
(2002)
27. R.S. Vijayakumar, N. Nalini, J. Food Biochem. 30, 405–421
(2006)
28. T. Velpandian, R. Jasuja, R.K. Bhardwaj, J. Jaiswal, S.K. Gupta,
Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 26, 241–247 (2001)
29. T. Anette, B. Carin, W. Tina, E. Stéphane, S. Ankie, F. Markus,
B. Paul, Food Chem. Toxicol. 66, 350–357 (2014)
30. P.V. Srinivas, J.M. Rao, Phytochemistry 52, 957–958 (1999)
31. R. Capasso, A.A. Izzo, F. Borrelli, A. Russo, L. Sautebin, A.
Pinto, F. Capasso, N. Mascolo, Life Sci. 71, 2311–2317 (2002)
32. K.V. Padalkar, V.G. Gaikar, Sep. Sci. Technol. 43(12–11),
3097–3118 (2008)
33. S.R. Sachin, K.R. Virendra, Ind. Crops Prod. 58, 259–264 (2014)
34. C. Perakis, V. Louli, K. Magoulas, J. Food Eng. 71(4), 386–393
(2005)
35. A.C. Kumoro, S. Harcharan, H. Masitah, Chin. J. Chem. Eng.
17(6), 1014–1020 (2009)
36. A.B. Wood, L.B. Maureen, D.J. James, Flavour Fragr. J. 3, 55–64
(1988)