EKSTRAKSI, ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SECARA KUALITATIF SEYAWA

PIPERIN DARI LADA PUTIH (Piper nigrum L.)

Reanaldy Ibrahim Masudi Putra1, Sinta Dewi2, Sri Nur Safala3, Suci Hida Lestari4, Tris Naena Fatmawati5
email: reanaldy.ibrahim.mp@gmail.com
S1 Farmasi STIKes Bhakti Mandala Husada
Jl. Cut Nyak Dien N0. 16 Kalisapu, Slawi
Telp. (0283)6197571 Fax. (0283)6198450

Abstrak
Kualitas ekstrak buah lada (Piper nigrum L.) dipengaruhi oleh komponen dan kadar senyawa didalamnya.
Piperin merupakan senyawa alkaloid utama dalam buah lada. Banyaknya piperin yang larut selama proses
ekstraksi dipengaruhi oleh jenis pelarut yang digunakan. Penelitian ini didesain untuk mengetahui adanya
senyawa piperin dalam ekstrak buah lada putih yang diekstraksi dengan alat sokhlet sehingga diharapkan
dapat diperoleh kadar piperin yang tinggi pada ekstrak buah lada putih. Ekstraksi buah lada putih dilakukan
dengan metode ekstraksi sokhlet menggunakan etanol 96% dan kemudian dilanjutkan dengan kristalisai
untuk mendapatkan kristalnya. Kristal yang diperoleh dianalisis pada plat KLT silika gel GF 254 sebagai fase
diam dan campuran Fase gerak yang digunakan adalah toluen dan etil asetat (21:9) lalu dilanjutkan dengan
analisa menggunakan spektrofotometer UV-Vis untuk mengidentifikasi senyawa piperin. Hasil menunjukkan
bahwa diduga terdapat senyawa piperin yang terdeteksi pada panjang gelombang 341,5nm.
Kata kunci : Ekstraksi, Isolasi, Piperin, Lada Putih.

1. Pendahuluan Piperin memiliki khasiat sebagai

Lada atau yang disebut juga merica (Piper
nigrum L.) berasal dari famili Piperaceae
(Vasavirama dan Upender, 2014). Pada
umumnya lada hitam (black pepper)
dimanfaatkan sebagai bumbu dapur, sama
halnya dengan lada putih (white pepper).
Lada putih diperoleh dari buah lada hitam
yang buah-buahnya dipetik selagi masih
hijau atau hampir masak, direndam untuk
memudahkan pengupasan lapisan luar
perikarp, lalu dijemur sampai kering
(Kartasapoetra, 2004).
Buah lada putih mengandung alkaloid
seperti piperin, kavisin, dan metilpirolin,
serta minyak atsiri, lemak dan pati.
Kandungan utama dalam lada adalah alkaloid
piperin. Piperin memiliki rumus molekul
C17H19NO3 atau (E,E)-1-[5-(1,3-
benzodioksol-5-il)-1-okso-2,4-pentadienil]
piperidin, diperoleh dalam bentuk prisma
monosiklik dari alkohol dengan titik lebur
130°C, 1 g piperin larut dalam 15 mL etanol,
36 mL eter dan hampir tidak larut dalam air
(Kar, 2014). Piperin berbentuk kristal
berwarna putih kekuningan dan merupakan
alkaloid dari golongan
piperidin yang memiliki
sifat hampir tidak larut dalam air (40 mg/L
pada suhu 18°C), namun mudah larut
dalam alkohol (1 g/15 mL) dan eter (1 g/1,7
mL) (Vasavirama dan Upender, 2014).
antiinflamasi, antimalaria, menurunkan berat
badan, menurunkan demam, menetralkan
racun bisa ular, antiepilepsi, membantu
meningkatkan penyerapan vitamin tertentu
(Kolhe et al., 2011). Piperin memiliki
aktivitas sebagai analgesik dan antipiretik
pada tikus, dan menunjukkan hasil yang
sebanding dengan indometasin sebagai obat
standar (Sabina et al., 2013). Kualitas ekstrak
buah lada dipengaruhi oleh kandungan dan
kadar senyawa kimia di dalamnya. Proses
ekstraksi buah lada hitam dalam skala
industri digunakan pelarut etanol 60%
(Agoes, 2009). Senyawa piperin merupakan
senyawa identitas yang paling banyak
terkandung dalam buah lada serta memiliki
beragam khasiat pengobatan, maka perlu
dipisahkan secara selektif melalui penyarian
atau ekstraksi.
Penelitian ini didesain untuk mengetahui
adanya senyawa piperin dalam ekstrak buah
lada putih yang diekstraksi dengan alat
sokhlet sehingga diharapkan dapat diperoleh
kadar piperin yang tinggi pada ekstrak buah
lada putih.
2. Metode Penelitian
Hasil dari ekstraksi didinginkan kemudian
dilanjutkan dengan proses penguapan di atas
1
penangas air sampai didapatkan ekstrak
kental kira-kira 15 mL. selanjutnya
penambahan KOH etanolik 10% untuk
memisahkan senyawa resin dengan
meminimalkan pembentukan garam
sehingga didapat alkaloid yang murni.
Endapan dipisahkan dengan cara
penyaringan corong kaca dengan kapas
untuk meminimalkan kandungan resin yang
ikut tersaring. Sari yang didapatkan
berwarna coklat kehitaman dan sari
disimpan kurang lebih selama satu minggu
sampai diperoleh kristal murni didalam
lemari pendingin. Kemudian kristal yang
terbentuk dipisahkan, dicuci etanol 96%
dingin dan dikeringkan dalam almari
pengering pada suhu 40◦C selama 30-45
menit. Dan mendapatkan rendemen 0,66%
b/ b. Penelitian ini menggunakan desain
eksperimen murni (true experimental
design) yang dilakukan di laboratorium.
Buah lada hitam diekstraksi secara soxhlet
menggunakan pelarut etanol 96% teknis
untuk mendapatkan ekstrak buah lada hitam
salah satunya adalah piperin yang kemudian
dilakukan analisis kuantitatif dengan LC -
MS.
Uji kualitatif senyawa piperin pada lada
putih menggunakan Kromato- grafi Lapis
Tipis (KLT)
Identifikasi piperin menggunakan kristal
sampel dan kristal standar piperin yang telah
dilarutkan dalam etanol 96%. Fase diam :
Silika gel GF254 dan Fase gerak: toluen : etil
asetat (21:9). Diamati hasil bercak yang
tampak pada sinar tampak UV 254 dan 366
lalu amati warna yang terjadi. Hitung Rf
bercak.
Uji kualitatif senyawa piperin pada lada
putih menggunakan spektrofotometri UV-
Vis
Pembuatan larutan induk sampel
(1000ppm), Sebanyak 5 mg kristal sampel
dilarutkan dalam 5 mL etanol 96%.
Kemudian dibuat larutan 10 ppm, 0,25 mL
larutan induk sampel dilarutkan dalam 25 mL
etanol 96 %. Selanjutnya dimasukkan ke
dalam kuvet dan dianalisis menggunakan
spektrofotometer UV-Vis.
3. Hasil dan Pembahasan
Ekstraksi, isolasi dan kristalisasi
senyawa piperin
Proses ekstraksi sampel dilakukan
dengan metode soxhletasi. Ekstraksi
merupakan pemisahan satu atau lebih
bahan dari suatu padatan atau cairan.
Proses ekstraksi diawali dengan
terjadinya penggumpalan ekstrak dalam
pelarut sehingga pada bidang antar muka
bahan dan pelarut terjadi pengendapan
massa bahan. Prinsip ekstraksi dengan
pelarut berdasarkan pada pelarut
komponen terhadap komponen lain
dalam campuran. Komponen yang larut
dapat berupa cair maupun padat (Suyitno,
1989). Ekstraksi dengan alat Soxhlet
merupakan cara ekstraksi yang efisien,
karena pelarut yang digunakan dapat
diperoleh kembali. Dalam penentuan
kadar minyak atau lemak, bahan yang
diuji harus cukup kering, karena jika
masih basah selain memperlambat proses
ekstraksi, air dapat turun ke dalam labu
akan mempengarhi dalam perhitungan
(Ketaren, 1986).
Uji kualitatif senyawa piperin
menggunakan KLT
Analisis dengan KLT digunakan untuk
mengidentifikasi kandungan piperin dalam
kristal yang diperoleh. Fase gerak yang
digunakan adalah toluen dan etil asetat (21:9)
dan fase diam yang digunakan adalah plat
silika gel GF 254 yang bersifat polar. Plat KLT
dibuat dengan panjang 10 cm dengan jarak
elusidasi 8 cm. Deteksi bercak dilakukan
dengan sinar UV 254 dan 366, lempeng akan
berfluoresensi dan bercak sampel akan
tampak berwarna gelap.
1

A B
(Gambar 1). Uji identifikasi KLT senyawa
piperin lada putih. Keterangan
(A) penampak bercak dari
sampel (Rf= 0,4687) dan (B)
pembanding menggunakan
tandar piperin (Rf=0,4562).
Kristal piperin yang didapatkan diidentifikasi
menggunakan metode Kromatografi Lapis
Tipis (KLT). Kromatografi Lapis Tipis
adalah suatu metode pemisahan fisikomia
dimana fase diam terdiri dari butir-butir pada
penyangga pelat gelas logam atau lapisan
yang stabil, metode kromatografi yang paling
sederhana yang banyak digunakan (Stahl,
1985). Pada proses KLT digunakan dua fase
yaitu fase gerak dan fase diam. Fase diam
yang digunakan yaitu silica gel F 254.
Sedangkan fase gerak yaitu medium angkut
dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut.
Fase gerak bergerak di dalam fase diam yaitu
suatu lapisan berpori, karena ada gaya kapiler
(Stahl, 1985). Fase gerak yang digunakan
Toluene-Etil Asetat (7:3).
Uji kualitatif senyawa piperin
menggunakan Spektrofotometer UV-
Vis
Uji spektrofotometri dilakukan untuk
mengidentifikasi spektra panjang gelombang
maksimum kristal yang diperoleh. Spektra
panjang gelombang maksimum yang
diperoleh akan dibandingkan dengan spektra
panjang gelombang maksimum piperin pada
penelitian Vishnath G et al ( 2011) yaitu
342,5 nm.
Gambar 2. Hasil Literatur Uji
Spektrofotometri (kiri)
Peak (kanan) Nilai
absorbansi.
Gambar 3. Hasil sampel lada putih Uji
Spektrofotometri (kiri) Peak
(kanan) Nilai absorbansi
Soxhletasi adalah suatu metode
pemisahan suatu komponen yang terdapat
dalam sampel padat dengan cara penyarian
berulang-ulang dengan pelarut yang sama,
sehingga semua komponen yang diinginkan
dalam sampel terisolasi dengan sempurna.
Nama lain yang digunakan sebagai pengganti
soxhletasi adalah pengekstrakan berulang-
ulang (continuous extraction) dari sampel
pelarut (Rahman, 2012). Proses soxhletasi
pada percobaan ini menggunakan pelarut
etanol 96%. Piperin dan etanol 96% memiliki
kepolaran yang sama yaitu bersifat polar,
sehingga etanol mampu melarutkan piperin
dari lada hitam (Piper nigrum L.) sesuai
dengan prinsip like dissolve like. Piperin
akan larut dalam etanol 96% diluar sel, maka
larutan terpekat akan berdifusi keluar sel dan
proses ini berulang terus sampai
keseimbangan antara konsentrasi cairan zat
aktif didalam dan diluar sel. Pada dasarnya
sirkulasi yang baik dilakukan selama 1-2 jam
dengan kecepatan 6-8 siklus per jam untuk
mendapatkan zat aktif yang lebih banyak dan
murni. Pada percobaan yang dilakukan
didapatkan 14 sirkulasi dilakukan selama 2
jam dengan rata-rat waktu 11,43 menit, yang
dimana termasuk kedalam rentang kecepatan
6-8 siklus per jam.
Langkah awal yang dilakukan yaitu
penjenuhan eluen dengan cara mencelupkan
ujung kertas saring dalam chamber dan
3
ditutup dengan kaca arloji. Tujuan Berdasarkan pada penelitian yang telah kami
penjenuhan yaitu untuk meyakinkan kondisi lakukan maka dapat disimpulkan bahwa
dalam chamber terjenuhkan oleh uap senyawa yang terdeteksi pada panjang
pelarut. Kemudian lempeng KLT dalam gelombang 341,5nm tersebut diduga adalah
oven selama 5-10 menit pada suhu 105◦C. senyawa piperin.
Tujuan lempeng KLT dipanaskan untuk
menghilangkan tapak-tapak air yang terserap
pada lempeng KLT tersebut yang dapat 5. Daftar Pustaka
mengganggu proses migrasi dari sampel dan Agoes, G., 2009, Teknologi Bahan Alam,
baku pembanding dengan eluen serta fase Edisi revisi, Penerbit ITB, Bandung, 37
diam. Lalu dilakukan penotolan dengan dan 85.
ekstrak piperin yang didapatkan dan baku
pembanding piperin pada lempeng KLT. Kar, A., 2014, Farmakognosi dan
Hasil penotolan dilihat dibawah sinar UV Farmakobioteknologi, Terjemahan: July
254 nm. Fraksi yang ditotolkan dimasukkan Manurung dkk., Penerbit Buku
ke dalam chamber yang berisi eluen. Eluen Kedokteran EGC, Jakarta. 2 (2): 503-
digunakan sebagai pelarut untuk mendeteksi 504.
noda karena ketika senyawa organic diserap Kartasapoetra, G., 2004, Budidaya
oleh eluen pada lempeng KLT, proses Tanaman Berkhasiat Obat, Jakarta: PT
penyerapan berhenti dimana semakin kuat Rineka Cipta, 50-51.
senyawa diserap, semakin kurang jarak yang
ditempuh ke atas lempeng. Kolhe, S.R., Borole, P., and Patel, U.,
2011, Extraction and Evaluation of
Setelah terlihat kenaikan bercak Piperine from Piper nigrum,
lempeng KLT dikeringkan lalu diamati Internasional Journal of Applied
dibawah sinar UV 254 nm dan ditandai noda Biology and Pharmaceutical
yang timbul pada lempeng KLT sesuai Technology, 144-149.
bentuk diamati agar mempermudah
perhitungan Rf. Noda yang timbul berwarna Sabina, E.P., Nasreen, A., Vedi, M., and
putih abu, setelah ditandai noda yang Rasool, M., 2013, Analgesic,
nampak dilakukan penyemprotan penampak Antipyretic and Ulcerogenic Effects of
bercak Vanilin-Asam Sulfat pekat Piperine: An Active Ingredient of
dilanjutkan dengan pengeringan pada Pepper, Journal of Pharmaceutical
lempeng KLT dan tidak ada noda yang Sciences and Research, 5 (10): 203-
terbentuk dengan baku pembanding yang 206.
menandakan ekstraksi senyawa piperin
berjalan sesuai prosedur. Dari hasil Vasavirama, K.and Upender, M., 2014,
perhitungan menghasilkan nilai Rfpiperin Piperine: A Valuable Alkaloid from
0,48 dan Rfbaku piperin 0,48. Nilai Rf Piper Species, International Journal of
sangat karakteristik untuk senyawa tertentu Pharmacy and Pharmaceutical
pada eluen tertentu. Hal tersebut dapat Sciences, 6 (4): 34-38.
digunakan untuk mengidentifikasi adanya Vishvnath, G., & Jain, U. K., 2011,
perbedaan senyawa dalam sampel. Senyawa Quantitative analysis of piperine in
yang mempunyai Rf lebih besar berarti ayurvedic formulation by UV
mempunyai kepolaran yang rendah, begitu Spectrophotometry, Int J Pharm Sci
juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan Res (IJPSR), 2, 58-61
fase diam bersifat polar. Senyawa yang lebih
polar akan tertahan kuat pada fase diam,
sehingga menghasilkan nilai Rf yang
rendah. Nilai Rf yang baik antara 0,2-0,8
(Rohman, 2009). Serbuk isolasi piperin lada
hitam (Piper nigrum L.) tersebut berbentuk
kristal jarum kecil-kecil berwarna coklat
kekuningan apabila diamati secara
mikroskopik perbesaran 100x.
4. Kesimpulan
4
5