IMMUNOASS AY UNTUK ANALISIS SIMULTAN
DARI MULTI-ANALYTES
Metode Immunoassay dapat diterapkan untuk
analisis dua atau lebih analit dalam sampel yang
sama, menggunakan pendekatan yang berbeda.
Pengujian dua label dikembangkan untuk
analisis simultan tiroksin dan triiodothyronine
(173).Tiroksin terkonjugasi dengan alkali
fosfatase enzim, dan triiodothyronine
terkonjugasi dengan enzim β-galactosidase.
Heterogen kompetitif tes dilakukan untuk setiap
hormon, di hadapan satu sama lain. Teknik
presipitasi antibodi ganda adalah digunakan
untuk memisahkan kompleks imun, diikuti oleh
mengukur aktivitas enzim konjugat. Alkali
konjugat fosfatase diukur pada 540 nm oleh
pembentukan fenolftalein dari monofosfatnya
garam. Konjugat β-galaktosidase diukur pada
420 nm dengan pembentukan o-nitrophenol
dari o-nitrophenyl- Substrat β-galaktosida.
Prinsip-prinsip dual-label ini pendekatan
digunakan untuk pengembangan sistem yang
serupa untuk analisis simultan fenitoin dan
fenobarbital di hadapan satu sama lain (174).
Sistem FIA heterogen baru dikembangkan dan
otomatis untuk analisis simultan albumin serum
dan mentransfer (175). Sistem ini menggunakan
dualfluorescent molekul sebagai label, dan
dimasukkan tiofilik reaktor fase padat gel untuk
memisahkan ikatan-antibodi dan molekul tidak
terikat. Elusi antibodi tercapai oleh perubahan
kekuatan ionik. Deteksi keduanya terpisah
fluorofor dicapai dengan fluoresensi sinkron
kecepatan tinggi memindai pada dua interval
panjang gelombang yang berbeda, satu untuk
setiap fluorofor. Sebuah dual-label TRFIA yang
sensitif dikembangkan untuk analisis simultan
metamfetamin dan kloropromazin dalam serum
(55). Pengujian didasarkan pada sebuah novel
strategi pelapisan dan FIA berbasis lantanida
yang ditingkatkan teknologi. Strategi pelapisan
melibatkan pelapisan dari sumur pelat
microwell dengan konsentrasi tinggi a
mencampur Antibody Analyte Marker Signal
Concture dari antimethamphetamine dan
antibodi anti-kloropromazin. Metamfetamin
diberi label dengan Uni Eropa (III), dan
kloropromazin diberi label dengan Sm (III).
Dalam pengujian, itu senyawa berlabel
dicampur dengan yang tidak berlabel solusi atau
sampel standar, dan campuran tadi
ditambahkan ke sumur yang dilapisi dengan
antibodi. Metamfetamin dianalisis dengan
mengukur fluoresensi Intensitas Eu (III) pada
615 nm. Kloropromazin dulu dianalisis dengan
mengukur intensitas fluoresensi Sm (III) pada
643 nm. Pengujian menunjukkan kinetika yang
cepat, dan tinggi sensitivitas; batas bawah
deteksi adalah 1 dan 10 ng / ml untuk
metamfetamin dan kloropromazin, masing-
masing. Sistem serupa dikembangkan untuk
simultan analisis tiroksin dan merangsang tiroid
hormon dalam serum (176). Batas deteksi untuk
uji adalah 4,1 nmol untuk tiroksin dan 0,028
mIU / ml untuk hormon perangsang tiroid
dengan volume sampel 20 μl. Sistem FIA
berbasis kapiler dikembangkan untuk
penentuan simultan penisilin-G, ampisilin,
amoksisilin, cloxacillin, cephapirin, dan ceftiofur
(177). Sistem uji terdiri dari kartrid uji yang
mengandung 4 kapiler gelas, baki reagen
dengan 4 sumur kering reagen, dan prosesor,
yang memproses pengujian, berbunyi output
neon, dan akhirnya melaporkan hasilnya. Sistem
pengujian khusus, dan sensitif; batas deteksi
3,2, 2,9, 3,6, 7,4, 16,3, dan 33,7 ng / ml untuk
penisilin-G, ampisilin, amoksisilin, cloxacillin,
cephapirin, dan ceftiofur, masing-masing.
Kapasitas sistem ini kemudian ditingkatkan
untuk dapat secara bersamaan menganalisis 9
senyawa dalam sampel yang sama (178). Ini
Senyawa tersebut adalah tetrasikin (tetrasiklin,
oksitetrasiklin, chlorotetracycline, dan
doxycycline), sefalosporin (sefapirin, ceftiour
dan cefquinome), dan antibiotik b-laktam
(penisilin-G, ampisilin, dan amoksisilin).
Immunoassay kompetitif berbasis-microsphere
adalah dikembangkan untuk analisis simultan
digoxin dan theophilin (179). Uji ini dilakukan
dengan menggunakan mikrosfer dilapisi dengan
kedua senyawa, dan antibody dilabeli dengan
peroksidase lobak. Dua substrat flurogenik
digunakan untuk membedakan sinyal analitik
dari setiap senyawa. Mikroskop epifluoresensi
dan a kamera yang dihubungkan dengan
komputer digunakan untuk mengukur sinyal
fluoresensi individu. Sinyal yang diukur
kemudian terkait dengan konsentrasi senyawa.
Metode Carbonylmetalloimmunoassay
dikembangkan untuk analisis simultan
carbamazepine, phenobarbital, dan
diphenylhydantoin (180, 181). Uji ini
menggunakan berbagai kompleks transisi
elemen-karbonil sebagai label diikuti oleh
kuantitasi sensitif dari kompleks ini oleh Fourier
mengubah spektroskopi inframerah. Itu
pengukuran memanfaatkan fitur spektral
tertentu dari kompleks karbonil, yang
menunjukkan penyerapan yang sangat kuat
band di wilayah 1800-2200 cm-1. Sinyal itu
ditugaskan secara individual dan intensitas
digunakan untuk kuantisasi.
KEUNTUNGAN DALAM IMUNUNASS AYS UNTUK
FARMASI ANALISIS
Keuntungan di immunoassay berlanjut di semua
area teknologi; persiapan reagen yang unik,
analisis kategori baru senyawa, dan
peningkatan dalam metodologi dan
instrumentasi:
Kemajuan dalam Persiapan Immunoanalytical
Peninjauan ulang Metode Immunoassay,
khususnya monoclonal tes berbasis antibodi,
adalah potensi keuntungan dalam analisis
farmasi karena throughputnya yang tinggi dan
sensitivitas tinggi untuk analisis dalam sampel
biologis. Namun, protokol untuk persiapan
tertentu antibodi monoklonal untuk molekul
obat kecil (Gambar 4) sulit karena rendahnya
insiden hibridoma positif from which selection
of the most specific one is performed.
Selanjutnya, waktu produksi berlebihan
(biasanya 3-9 bulan). Studi terbaru dilakukan
pecahkan masalah ini. Pemodelan molekul
hapten struktur muncul sebagai alat yang
berguna dalam memprediksi imunogenisitas
dari imunogen, dan selanjutnya spesifisitas
antibodi yang dihasilkan. Dengan teknik ini,
itu mungkin untuk berspekulasi jika epitope
antigenic Molekul diproyeksikan dan terpapar
kekebalan tubuh sistem, atau diselimuti ke
dalam struktur molekul, dan sehingga
kehilangan imunogenisitasnya (182).
Pendekatan ini digunakan untuk sintesis
imunogen protein sulphacetamide ditujukan
untuk menghasilkan antibodi spesifik yang luas
untuk obat sulfonamid (183). Teknik imunisasi
baru dikembangkan untuk produksi antibody
monoklonal yang cepat (184). Ini teknik yang
digunakan berulang, banyak situs, dan pendek
rejim imunisasi (8-13 hari). Imunisasi ini adalah
diikuti oleh fusi kelenjar getah bening popiteal
dan bracial sel-sel dari tikus yang diimunisasi
dengan sel-sel myeloma. Itu waktu produksi
antibodi, termasuk imunisasi, fusi, penyaringan
dan kloning membutuhkan waktu ~ 30 hari
untuk diselesaikan. Teknik ini digunakan untuk
generasi monoclonal antibodi spesifik untuk
ranitidin; antibodi yang dihasilkan adalah
digunakan dalam pengembangan metode
immunoassay untuk ranitidine (27). Rezim
imunisasi pendek yang efisien dikembangkan
oleh Darwish et al. (26) Teknik ini hanya
menggunakan satu imunisasi tikus, daripada
tikus Dua minggu kemudian, fusi sel dilakukan
di antaranya kelenjar getah bening iliaka medial
dan sel myeloma tikus. Oleh teknik ini, tingginya
jumlah hibridoma positif diperoleh, yang
menawarkan kesempatan untuk pemilihan lebih
banyak sel hibridoma spesifik. Teknik ini
digunakan untuk menghasilkan antibody
monoklonal yang sangat spesifik untuk
2`-deoxycytidine; penanda untuk prognosis
kanker payudara untuk kemoterapi (185).
Antibodi yang dihasilkan adalah selanjutnya
digunakan untuk pengembangan immunoassay
spesifik metode untuk penanda ini dalam
plasma (186). Penggunaan hanya injeksi tunggal
dalam teknik ini yang tidak hanya menghemat
waktu dan upaya yang diberikan untuk
pemurnian imunogen (biasanya dengan
prosedur kromatografi yang memakan waktu),
tetapi juga jumlah imunogen yang seringkali
sangat berharga atau sulit diperoleh dalam
jumlah cukup untuk beberapa suntikan, atau
sulit dimurnikan. Kemajuan untuk Melibatkan
Kategori Baru dari Ccompound Sebagian besar
metode immunoassay diterapkan dalam farmasi
analisis diarahkan pada senyawa organik,
Namun teknik ini secara teori dapat diterapkan
pada siapa saja analit, bahkan ion logam
anorganik, jika merupakan antibodi yang cocok
dapat dihasilkan. Kemampuan menghasilkan
monoclonal antibodi yang mengenali ion logam
telah dibuktikan (187-189). Imunogen disiapkan
oleh chelating ion logam dengan chelator
bifunctional (mis. p-isothiocyanate-benzyl
EDTA), diikuti oleh kopling kompleks metal
chelator menjadi protein pembawa melalui
isothiocyanate kelompok chelator. Pengujian
skrining adalah dirancang untuk memilih
hibridoma yang mengeluarkan antibodi itu
menunjukkan afinitas yang lebih tinggi ke
kompleks metal-chelator daripada ke chelator
bebas logam. Dengan pendekatan ini, spesifik
antibodi monoklonal dihasilkan untuk uranium
(182), cadmium (187), timah (188), cobalt (189),
dan mercuric (191, 191). Antibodi ini digunakan
dalam pengembangan immunoassays
kompetitif untuk pengukuran akurat ion-ion
logam ini dalam sampel air (190-195) dan juga
dalam serum manusia (196). Protokol dasar
untuk kompetitifimmunoassay untuk ion logam
diilustrasikan pada Gambar 5. Secara singkat,
sampel yang mengandung ion logam
diperlakukan dengan kelebihan chelator bebas
logam untuk membentuk logam chelate
kompleks. Solusi yang dihasilkan, yang
mengandung kelebiha chelator dan kompleks
logam chelate, dicampur dengan antibodi di
piring microwell yang mengandung amobil
konjugat protein kelat-logam. Logam terlarut
kompleks kelat bersaing dengan logam amobil
konjugat protein-kelat untuk situs pengikatan
spesifik antibodi. Setelah mencapai
keseimbangan, reagen tidak terikat dihilangkan
dengan mencuci, dan enzim diberi label
ditambahkan antibodi sekunder. Antibodi
sekunder yang tidak terikat dihidupkan kembali
dengan langkah mencuci kedua. Sinyalnya
dihasilkan oleh penambahan substrat enzim
kromogenik. Sinyal yang diukur kemudian
dihubungkan dengan konsentrasi ion logam
hadir dalam sampel asli. Tes ini sangat sensitif,
sangat cepat, mudah dilakukan, cukup portabel
untuk situs analisis, memerlukan minimum
pretreatment sampel, dan murah. Baru-baru ini,
metode FPFIA dikembangkan untuk timbal (II)
dan cadmium (II) (197). Antibodi meningkat
terhadap konjugasi protein dari ion logam dari
polyaminopolycarboxylate agen kelat. Berlabel
Fluorofor analog kompleks logam chelate
digunakan sebagai pelacak dalam melakukan uji
kompetitif. Metode ini sangat sensitif; batas
deteksi adalah 20, dan 100 ppt untuk timbal (II)
dan kadmium (II), masing-masing. Meskipun
immunoassays untuk ion logam masih ada di
sana masa bayi, hasil yang sangat menjanjikan
telah diperoleh. Baru kemajuan dalam
manipulasi genetik rekombinan antibodi rantai
tunggal memberikan peluang baru untuk
mengoptimalkan sifat mengikat antibodi induk
untuk memberikan reagen rekombinan baru
yang sangat spesifik (198). Itu immunoassays
baru untuk logam berat dianggap sebagai a
pendekatan alternatif yang menjanjikan untuk
teknologi yang ada untuk analisis ion logam
(spektroskopi serapan atom, spektroskopi emisi
plasma induktif digabungkan, dll.), yang mahal
dan analisisnya perlu berlebihan pretreatment
sampel.
KEMAJUAN DALAM METODOLOGI DAN INSTR
UMENTAION
Kloning enzim Donor Immunoassay Kloning
enzim donor immunoassay (CEDIA) metodologi
pendekatan novel yang menggunakan teknologi
DNA menghasilkan enzim homogeny
immunoassays untuk obat-obatan. Prinsip dari
metode ini diilustrasikan pada gambar 6. Enzim
unit donor menggabungkan dengan enzim unit
Penerima untuk membentuk enzim tetrameric
lengkap dan sepenuhnya aktif molekul, bereaksi
dengan substrat berwarna untuk menghasilkan
Produk berwarna. Enzim donor-obat konjugat
disiapkan oleh menghubungkan molekul obat
enzim fragmen donor. Reaksi kompetitif
mengikat mengakibatkan pembentukan enzim
aktif dan akibatnya berwarna produk, yang
berbanding lurus dengan konsentrasi obat
sekarang. Tes ini cepat dan memiliki tinggi
throughput. Berhasil kloning enzim donor
immunoassay metode dikembangkan untuk
analisis amfetamin, Barbiturat, opiat
metamfetamin (199, 200), phencycline (201),
phenytoin (202), dan benzodiazepin (203- 205).
the CEDIA metode divalidasi, dalam hal
sensitivitas dan presisi, mengacu pada
kromatografi gas- spektrometri massa, dan
keabsahannya terbukti untuk aplikasi di
pemeriksaan rutin obat (206-208).
Aliran-injeksi Immunoassay Aliran-injeksi
immunoassay (FIIA) metode yang baru saja
diperkenalkan untuk meningkatkan efisiensi
immunochemical reaksi, serta untuk
meningkatkan kinerja analisis. Sebagian besar
sistem FIIA yang dikembangkan Berdasarkan
prinsip perpindahan (gambar 7). Dalam hal ini
kasus, kolom dikemas dengan bergerak fase
padat antibody dimasukkan ke dalam sistem.
Kolom jenuh dengan larutan yang mengandung
berlabel analyte. Injeksi sampel (berisi analyte
unlabelled gratis) ke kolom hasil dalam
perpindahan dari analyte berlabel (karena
afinitas antibodi untuk berlabel analyte
biasanya secara signifikan lebih rendah
daripada afinitas untuk unlabeled gratis
analyte). Analyte berlabel pengungsi eluted dan
terdeteksi di outlet kolom. Sinyal yang
dihasilkan berbanding konsentrasi analyte
dalam contoh (gambar 7A). Sistem yang sama
dibangun menggunakan kolom dikemas dengan
bergerak analyte, dan presaturated dengan
antibodi berlabel. Injeksi contoh ke dalam
sistem ini mengakibatkan perpindahan dari
analyte- label kompleks antibodi, yang
merupakan terdeteksi outlet kolom (gambar
7B). FIIA sistem yang berdasarkan perpindahan
dikembangkan Analisis dari gentamisin (209),
fenobarbital (210), dan digoxigenin (211). Batas-
batas pendeteksian flowinjection ini system
berada dalam kisaran 10-100 nm. The prototipe
dari alat berbasis aliran-injeksi telah dibangun
oleh Amerika Serikat pengujian obat untuk layar
urin untuk kehadiran jumlah jejak obat
penyalahgunaan (212). Untuk analisis oleh
perpindahan berbasis FIIA, pasti kondisi kolom,
laju aliran dan buffer solusi harus dioptimalkan
untuk setiap analyte tertentu, dan harus
bertemu di alat analisis. Untuk mengatasi
diasadvantage ini, sistem alternatif
dikembangkan untuk teofilin (213). proses
pengujian umum yang terlibat dalam sistem ini
ditunjukkan dalam gambar 8. Sistem ini terdiri
dari sebuah kolom yang berisi bergerak protein-
A, yang memiliki property menangkap sebagian
antibodi dengan afinitas tinggi. Pendahuluan
langkah dalam analisis adalah kejenuhan kolom
dengan anti-teofilin antibodi. Analisis dilakukan
oleh injeksi campuran gratis teofilin dan teofilin
maskapai dengan alkali fosfatase enzim.
Berlabel dan gratis teofilin bersaing untuk
berinteraksi dengan antibodi terikat protein-A.
Jumlah berlabel teofilin terikat untuk antibodi
berbanding terbalik dengan konsentrasi teofilin
gratis. Jumlah ini ditentukan dengan
menyuntikkan substrat
paminophenylphosphate dan amperometric
deteksi diproduksi p-aminophenol.
Setelah prosedur pengujian, kolom diregenerasi
dengan menghapus kompleks oleh asam elution
melalui kolom. Bergerak protein-A kemudian
jenuh lagi dengan Antibodi yang baru, dan
pengujian diulang. Sistem ini
sangat memakan waktu karena empat langkah
yang terlibat untuk masing-masing
pengukuran, yaitu inkubasi reagen, pemisahan
pada kolom, injeksi substrat, dan akhirnya
regenerasi kolom protein-A. Aplikasi dari
pendekatan ini protein-A kolom regenerasi
diterapkan dalam analisis berbagai senyawa
(214). Sistem peningkatan aliran telah
dikembangkan oleh Darwish
(215) untuk analisis aminoglycosides (misalnya
tobramycin) dalam manusia serum. Schematic
diagramuntuk assay inisistem ditunjukkan pada
gambar 9. Sistem ini didasarkan pada offline
kompetitif reaksi antara tobramycin dan
tobramycin dicap dengan β-galactosidase enzim
untuk antitobramycin
antibodi. Setelah keseimbangan dicapai,
sampel ini diperkenalkan ke dalam sistem
aliran. Antibodi kompleks tobramycin gratis dan
berlabel tobramycin terperangkap dalam kolom
protein G sementara terikat tobramycin
berlabel eluted dan dipantau oleh deteksi
colorimetric down-streaming setelah reaksi
dengan chlorophenolic merah-β-D
galactopyranoside sebagai substrat. Sinyal ini
berbanding lurus dengan konsentrasi dari
tobramycin dalam contoh asli. Kolom protein-G
digunakan dalam sistem ini menunjukkan baik
stabilitas dan kapasitas, sehingga
memungkinkan analisis besar jumlah sampel
sebelum kebutuhan untuk regenerasi dari
kolom (216). Selain itu, Deteksi terus-menerus
eluting fraksi gratis tobramycin berlabel,
daripada fraksi terikat, diperbolehkan
throughput sampel yang lebih tinggi.
Elektroforesis kapiler Immunoassay
Elektroforesis kapiler immunoassay (CEIA) telah
Baru saja diperkenalkan sebagai teknik analisis
yang sensitif, terutama bila dikombinasikan
dengan deteksi sensitive metode. Teknik ini
adalah penggunaan gabungan prinsip-prinsip
pemisahan Elektroforesis kapiler dan
immunoassay heterogen. Dalam teknik ini,
antibodi melekat berikatan kovalen dengan
interior diubah permukaan microcapillary, yang
digunakan sebagai sebuah fase padat
immunoreactor. Deteksi didasarkan pada
proses reaksi dari immunoassay. Analyte dan
analyte berlabel (tracers) dicampur dan
campuran kemudian disuntikkan ke sistem.
Tracers terdeteksi dengan detektor kolom.
Puncak tergantung konsentrasi yang diproduksi
berfungsi sebagai dasar untuk kuantisasi.
Prinsip-prinsip yang digunakan dalam
pengembangan sistem assay untuk penentuan
fenobarbital dalam serum (217). Alkali fosfatase
label fenobarbital digunakan sebagai pelacak,
dan p-aminophenyl fosfat digunakan sebagai
substrat. Deteksi dibawa keluar
amperometrically untuk diproduksi p-
aminophenol. Elektroforesis kapiler dengan
assay kompetitif desain adalah mampu
mencapai batas deteksi di picomole tingkat
(217, 218) kurang dari 5 ml sample volume.
CEIA berdasarkan homogen fluoresensi
polarisasi dikembangkan. Reagen
imunoanalytical (analyte, analyte berlabel
fluorescein dan antibodi) dicampur secara off-
line, dan campuran kemudian disuntikkan ke
Elektroforesis kapiler. Analyte fluorescein-label
dan kompleks analyte berlabel antibodi yang
terpisah di bawah potensi diterapkan, dan
terdeteksi oleh laserinduced-kolom
fluoresensi detektor. Sistem ini diterapkan
Analisis berbagai obat dalam cairan biologis,
misalnya Methotrexate (16), shabu-shabu (219,
220), teofilina, parasetamol, salisilat
ethosuximide, quinidine (221), hirudin (222),
kodein, dihydrocodeine, dan mereka
glucuronides (223). Metode CEIA yang sensitif
dengan deteksi elektrokimia dikembangkan
untuk analisis tiroksin pada manusia serum (44).
Metode adalah penggunaan gabungan kapiler
Elektroforesis pemisahan dan homogen enzim
prinsip-prinsip Immunoassay. Pengujian
dilakukan di kompetitif konfigurasi antara
tiroksin sampel dan lobak berlabel peroksidase
tiroksin untuk anti tiroksin antibodi. Label enzim
pemberian tiroksin secara gratis dan antibodi-
terikat berlabel tiroksin kompleks yang
dipisahkan oleh Elektroforesis kapiler di
pemisahan kapiler. Kemudian, mereka
dikatalisis oksidasi tetramethylbenzidine
substrat dengan hidrogen peroksida reaksi
kapiler terhubung ke sistem setelah pemisahan
kapiler. Produk reaksi substrat adalah
amperometrically ditentukan dengan
menggunakan elektroda di outlet reaksi kapiler.
Assay adalah sangat sensitif; The batas deteksi
adalah 23.2 attomole. Sistem serupa adalah
dikembangkan untuk kortisol, dengan batas
deteksi 7.8 attomole (224). prinsip yang sama
digunakan dalam merancang assay sensitif
untuk penanda tumor (225). CEIA dengan
deteksi fluoresensi dipekerjakan untuk analisis
simultan kemih metadon, opiat, benzoil-
ecgonine (kokain metabolit), dan amphetamine
(226). setelah inkubasi sampel dengan
imunoreactants, aliquot kecil campuran
diterapkan ke dicampurkan silika kapiler dan
fluorescein terikat obat-obatan berlabel
dimonitor oleh Elektroforesis kapiler dengan
laser-kolom diinduksi fluoresensi detektor.
Sistem multi-analyte ini juga diterapkan untuk
analisis digoxin dan gentamisin (227).
Immunosensors
Immunosensors mewakili kemajuan teknologi
paling
di bidang pembangunan immuoassay (228-233).
Sensor ini adalah perangkat analisis yang terdiri
dari immunochemical
pengakuan elemen langsung dihubungkan
kepada
sinyal transduser, yang bersama-sama
berhubungan konsentrasi
dari analyte untuk respon yang terukur.
Berbagai macam sinyal
transduser dapat digunakan, misalnya optik,
elektrokimia,
dan transduser piezoelektrik. Prinsip-prinsip
yang mendasari
immunosensors teknologi, dan aplikasi analitis
adalah subyek dari banyak ulasan (234-237).
Immunosensors
secara luas diterapkan dalam analisis banyak
senyawa kepentingan farmasi (238-245); contoh
diberikan dalam tabel 9. Sensor ini biasanya
mempekerjakan
Kedua format assay reusable/regenerable atau
sekali pakai.
Sensor menggunakan sekali pakai format
potensi multianalyte
analisis, format fleksibilitas, sistem biaya assay
waktu, kepekaan, dan reproduktifitas.
Sebaliknya
sekali pakai format, Multi-Gunakan
immunosensors (yang
dapat diisi ulang atau diregenerasi)
menawarkan keuntungan tertentu,
terutama untuk digunakan sebagai detektor
untuk kromatografi dan
sistem injeksi aliran. Sebagai contoh, terus-
menerus mengalir dan
elektrokimia immunosensors dikembangkan
untuk analisis
Sefaleksin (246), paclitaxel (247), progesteron
(248), dan
hormon tiroid (249).
Meskipun banyak immunosensors
dikembangkan untuk
Analisis berbagai obat-obatan dan hormon.
Namun,
itu tidak mungkin untuk melakukan analisis di
kompleks
cairan hayati (misalnya serum), dalam satu
langkah prosedur, karena
gangguan yang dihasilkan dari non-spesifik
mengikat
ke permukaan sensor. Untuk mengendalikan
gangguan ini,
optik chip interferometer telah dikembangkan
(250). Ini
konfigurasi interferometer dipekerjakan
penginderaan referensi
daerah yang dapat difungsikan secara terpisah
dari
mengukur penginderaan wilayah, dan
tambahan penurunan sinyal
Drift di serum dicapai dengan mengendalikan
permukaan
kimia chip optik. Prosedur ini fungsional
digunakan dalam pengembangan assay satu
langkah untuk
gonadotropin chorionic manusia dalam manusia
serum dengan deteksi
batas ng/ml 0.1 untuk assay 35 menit
KESIMPULAN
Metode Immunoassay adalah metode
bioanalytical
di mana kuantisasi analyte tergantung pada
reaksi yang
dengan antibodi spesifik. Tanggapan sinyal yang
dihasilkan
dari label yang melekat dengan analyte atau
antibodi. The
Properti sangat spesifik pengakuan dari analytes
oleh antibodi
mengarah ke selektivitas tinggi tes ini. The
ekstrim afinitas hasil interaksi analyte-antibodi
dalam
meningkatnya kepekaan immunoassay metode.
Instrumentasi
teknologi menyebabkan otomatisasi
immunoassays
dan akibatnya peningkatan throughput mereka.
Immunoassay
metode mampu kuantifikasi berbagai
senyawa seperti obat-obatan rendah berat
molekul, makromolekul
biomolekul, metabolit dan biomarker
yang menunjukkan diagnosa penyakit atau dan immunosensors. Teknologi ini
prognosis. Oleh karena itu, mengakibatkan
metode ini ditemukan berbagai penerapan di perbaikan analisis kinerja dengan meningkatkan
banyak penting kepekaan, penurunan waktu analisis,
bidang farmasi analisis seperti diagnosis penyederhanaan
penyakit, terapi obat pemantauan, klinis prosedur uji, otomatisasi dari metode, dan
pharmacokinetic dan bioequivalence studi miniaturisasi peralatan analitis.
dalam penemuan obat dan
industri farmasi.
Meskipun banyak keuntungan dari
immunoassays,
mereka memiliki beberapa keterbatasan.
Immunoassays tergantung terutama
pada reaksi antara analyte dan antibodi
biologis, mereka
mungkin memiliki lebih melekat ketidaktepatan
daripada metode lainnya
bekerja di farmasi analisis (misalnya
kromatografi).
Kekhasan immunoassays tergantung terutama
pada
Antibodi yang diarahkan ke analyte, namun
beberapa immunoassays
tidak sangat selektif, dan mereka mungkin
menanggapi
sekelompok senyawa (misalnya
aminoglycosides, pestisida,
... dll) daripada senyawa individu. Selain itu,
kurangnya
kekhususan dapat diamati karena non-spesifik
mengikat
antibodi untuk matriks component(s). Dalam
keadaan ini,
perawatan harus diambil untuk memastikan
tidak adanya
Campur-zat dalam sampel analyte dan/atau
matriks.
Baru-baru ini, sebuah tanda perbaikan dicapai
dalam
bidang immunoassay pembangunan untuk
tujuan
farmasi analisis. Perbaikan ini terlibat
persiapan reagen immunoanalytical unik,
analisis baru kategori senyawa, metodologi,
dan instrumentasi. Contoh-contoh yang paling
penting dalam hal ini
bidang adalah pengembangan aliran kontinu
immunoassays