Penyeka dengan desain, bentuk, dan ukuran berbeda yang digunakan untuk
pemulihan bukti tersedia secara komersial (X-SwabTM Diomics Corporation dan
Copan 4N6FLOQSwabTM); semuanya dengan sifat serap yang tinggi. Penggunaan
metode double swabbing direkomendasikan untuk pemulihan barang bukti yang
disentuh (trace); teknik ini meningkatkan kemungkinan memperoleh profil DNA;
namun penggunaan cotton bud tidak dianjurkan untuk melacak bukti [17-20].
Gambar 1 menunjukkan alur kerja pemulihan bukti dari TKP.
Dalam praktek forensik sehari-hari, bintik-bintik laten dari beberapa cairan biologis
seperti air mani, air liur, urin, dan keringat memerlukan penerapan radiasi cahaya dengan
panjang gelombang tertentu untuk deteksi oleh fluoresensi tergantung pada sifat emisi
atau penyerapan cahaya; meskipun serat dan rambut adalah elemen yang dapat diamati
tanpa instrumen, kurangnya kontras di latar belakang membuat visibilitasnya menjadi
sulit; dalam kasus seperti itu, penggunaan kaca pembesar atau lampu membantu
menghasilkan bayangan yang dapat membantu menemukannya.
Setelah diidentifikasi, BE pada area bergantung pada permukaan atau penyangga cairan
diambil dengan swab yang dibasahi dengan air steril, atau sebagian (penyangga) dipotong
untuk melakukan analisis dugaan atau konfirmasi bukti. Dalam kasus jejak bukti, itu
harus disimpan dalam dukungan aslinya (tekstil) dan dianalisis untuk memastikan cukup
bukti yang tersisa untuk persidangan berikutnya [20].
Penerapan uji reaksi kromatik dugaan berguna untuk orientasi dalam identifikasi sifatnya
dan pemilihan uji konfirmasi untuk penentuan asal manusia melalui uji imunologi.
Penting untuk mempertimbangkan jumlah BE untuk proses destruktif untuk beberapa
pengujian dan untuk menerapkan tindakan yang diperlukan untuk pelestariannya atau
penggunaan yang lebih besar untuk penelitian selanjutnya.
Beberapa laboratorium forensik menganalisis air mani melalui mikroskop optik, yang
bertujuan untuk mengidentifikasi sel sperma. Ada kontroversi mengenai prosedur ini
karena sebagian sampel dipisahkan dari pendukung asli, sehingga sulit untuk menerapkan
analisis lain, meskipun penting untuk mempertimbangkannya sebagai bukti minimal
untuk mendapatkan profil genetik. Di sisi lain, laboratorium menggunakan mikroskop
fluoresensi untuk persiapan sitologi untuk menerapkan teknik fluoresen yang
memungkinkan peningkatan sensitivitas dalam mendeteksi spermatozoa, mengkonfirmasi
keberadaan sel-sel ini dalam cairan yang dianalisis [16, 17].Gambar 3 menjelaskan
keuntungan dan kerugian dari tes forensik dugaan dan konfirmasi.
Gambar 3.
Keuntungan dan kerugian dari uji dugaan dan konfirmasi yang digunakan di laboratorium
untuk menemukan dan mengidentifikasi jenis BE. Penggunaan aplikasinya beralih dari
identifikasi cairan umum ke khusus, mengingat sifat destruktifnya berdasarkan kriteria
analis. BE: bukti biologis; Bf: mikroskop medan terang; Ph: mikroskop fase kontras.
Campuran sel biologis merupakan salah satu tantangan utama dalam genetika forensik.
Pada prinsipnya, ketika lebih banyak individu berkontribusi pada campuran dengan
cairan biologis yang berbeda, profil genetik tunggal mereka dapat diperoleh dengan
memisahkan jenis sel yang berbeda [18, 19]. Ada metode ekstraksi DNA standar yang
dikembangkan untuk memisahkan sperma (fraksi pria) dari sel epitel (fraksi wanita)
sebagai lisis preferensial; namun, metode ini tidak mampu memisahkan sperma sumber
tunggal dari banyak donor pria [19].
Ada penggunaan alat modern baru-baru ini untuk mencapai tujuan itu. Laser
microdissection (LMD) adalah teknologi yang telah ada selama lebih dari 40 tahun; ini
menggabungkan kekuatan amplifikasi mikroskop dengan potongan presisi objek yang
diizinkan oleh teknologi laser. Hanya dalam dekade terakhir LMD telah digunakan untuk
tujuan forensik, terutama di SA untuk mengisolasi sel sperma dari usapan vagina [18].
Penggunaan LMD di bidang forensik pertama kali dijelaskan pada tahun 2003 sebagai
cara untuk memulihkan sel sperma dari slide smear kasus SA. LMD memungkinkan
pemilihan sel individu berdasarkan analisis morfologi (misalnya, sperma dan sel epitel)
atau pelabelan dengan pewarna fluoresen tertentu. Pencarian mikroskopis untuk sperma
dalam kasus di mana jumlah sel terbatas dapat menjadi lengkap dan berkepanjangan [24].
Namun, teknologi ini mencakup modul fungsi pencarian otomatis seperti yang
diperkenalkan oleh pabrikan [19].
Sampai saat ini dua varian dari teknik ini dicatat: laser capture microdissection (memanen
sel dengan melelehkan membran termoplastik) dan laser cutting microdissection
(memanen sel dengan melontarkan). Prinsip operasi jenis LMD ini adalah identifikasi sel,
menggunakan laser untuk melakukan pemotongan bersih pada lapisan pendukung di
sekitarnya dan tidak memerlukan manipulasi fisik sel yang menghilangkan risiko
kontaminasi asing [19]. Analisis sel dalam campuran dengan kontributor azoospermia
atau oligospermia lebih sulit. Ini karena tanpa adanya sel sperma, sel pria dan wanita
tidak dapat dibedakan; oleh karena itu, penggunaan pewarna fluoresen spesifik
diperlukan [20].
Penggunaan LMD tidak selalu memungkinkan untuk membedakan sperma dalam bidang
terang mikroskopis karena beberapa alasan: mereka dapat kehilangan ekor; beberapa
sperma; atau kasus azoospermia. Namun, sel-sel non-sperma dapat ditemukan dalam air
mani, seperti leukosit dan sel-sel epitel dari saluran ejakulasi dan uretra [18].
Metode hibridisasi fluoresensi in situ (FISH) memungkinkan pembedaan sel jantan dari
sel betina dalam campuran seluler. DNA dihibridisasi dengan probe DNA untuk
kromosom "X" dan "Y" (ditandai dengan fluorofor) dan kemudian diamati dalam
mikroskop fluoresensi, memungkinkan identifikasi individu [18]. LMD yang
dikombinasikan dengan teknologi FISH dapat sangat meningkatkan identifikasi dan
pemisahan sel non- sperma jantan dari sel epitel betina di kemudian hari.
Teknik ini (FISH dengan LMD) telah terbukti mampu menghasilkan profil STR
autosomal dari sampel yang sebelumnya terbukti sulit atau tidak mungkin untuk
dipisahkan; selain itu, ia memiliki aplikasi di berbagai jenis sampel lain di mana rasio sel
wanita terhadap sel pria besar, termasuk kasus yang melibatkan penetrasi tanpa ejakulasi,
penetrasi digital, atau seks oral [18].
Di sisi lain, metode pemisahan lain dikembangkan yang terdiri dari pemisahan sperma
dari sel epitel dengan mengambil perbedaan ukuran dan bentuk; ini memberikan genotipe
campuran dalam hasil. Metode baru lainnya juga telah diusulkan untuk pemisahan sel,
seperti reaksi rantai polimerase volume rendah (LV-PCR) yang digunakan untuk isolasi
dan deteksi sperma tunggal, kapiler aspirasi, perangkat mikofluida, teknik mDip, dan
penyortiran sel yang diaktifkan fluoresensi dengan aliran. sitometri, berdasarkan
imunolabeling hanya berlaku pada lavage vagina segar dan bukan pada apusan vagina
atau bahan yang diarsipkan [20].
5. Analisis DNA
Ada banyak metode ekstraksi yang tersedia, dan mereka bervariasi dalam kemampuannya
untuk mengekstrak DNA dengan cara yang efisien; beberapa faktor yang perlu
dipertimbangkan adalah jenis sampel yang akan dianalisis, waktu yang diperlukan untuk
memproses, intervensi operator, risiko kontaminasi, dan kesulitan atau kemudahan
penggunaan. Ini adalah dasar untuk pembuatan profil DNA forensik yang sukses [17].
Metode preferensi memiliki tugas untuk tidak hanya memastikan bahwa DNA diekstraksi
secara efisien dari setiap sampel, tetapi juga harus menghilangkan kemungkinan
penghambat yang dapat mengganggu proses lain seperti amplifikasi [19].
Keuntungan dari metode ekstraksi organik adalah dapat memperoleh materi genetik dari
sampel yang sulit (DNA yang terdegradasi dan/atau sedikit) dan dapat dengan sukses
menghilangkan keberadaan inhibitor untuk PCR. Meskipun metode ini tetap menjadi
salah satu yang paling dapat diandalkan dan efisien, metode ini juga sangat memakan
waktu, menggunakan bahan kimia berbahaya, dan, karena upaya langsung yang lebih
besar dan melibatkan banyak transfer tabung, meningkatkan risiko kontaminasi dan
penanganan sampel yang salah [16].
Analisis genetik dari bukti yang dikumpulkan dalam kejahatan seksual biasanya
mencakup profil genetik dari dua atau lebih kontributor; dalam campuran semacam ini,
kontribusi genetik individu umumnya tidak seimbang. Dalam beberapa keadaan,
campuran biologis menyajikan tingkat minimal satu kontributor, biasanya pelaku dalam
kasus SA. Tingkat genetik donor ini kemungkinan tidak akan terdeteksi karena batas
sensitivitas atau saturasi reaksi oleh komponen yang memiliki kuantitas lebih. Dalam
kebanyakan kasus, kontributor kecil dalam campuran DNA tidak dapat dideteksi ketika
rasio melebihi 1:20 [20].
Pemulihan bukti dalam kasus SA merupakan tantangan besar bagi analis forensik DNA,
karena memerlukan pemisahan DNA dari sel epitel (korban) dan sperma (pelaku).
Ekstraksi diferensial pertama kali dijelaskan pada tahun 1986 oleh Gill dkk [33], sebagai
modifikasi dari ekstraksi fenol-kloroform organik, dan disebut lisis diferensial karena sel-
sel non-sperma dilisiskan secara selektif dengan deterjen dan protease, sedangkan sperma
sel tidak dilisiskan karena protein ikatan silang yang sangat disulfida di kepala sperma
yang menolak pengobatan protease [16].
Di laboratorium forensik DNA, metode lisis diferensial telah lama menjadi standar untuk
memisahkan spermatozoa dari sel epitel. Meskipun teknik ini secara teoritis dapat
memberikan dua fraksi, seperti yang ditunjukkan sebelumnya (satu terdiri dari DNA
pelaku dan yang lainnya berisi DNA korban), pemisahan tidak selalu lengkap,
menghasilkan genotipe campuran [20].
Ada metode lain untuk memisahkan sperma dan sel epitel dari sampel kekerasan seksual.
Metode Sistem DifferexTM melibatkan pencernaan sel epitel K-selektif proteinase,
diikuti oleh sentrifugasi diferensial dan pemisahan fase. Penggunaan metode ini di
laboratorium DNA menunjukkan bahwa metode ini menawarkan efisiensi yang setara
dengan metode dua langkah untuk mengekstraksi DNA sperma dari noda campuran [16].
Penggunaan pertama tes DNA dalam pengaturan forensik datang pada tahun 1986; dua
gadis diserang secara seksual dan kemudian dibunuh secara brutal pada tahun 1983 dan
1986, di Leicestershire, Inggris. Kasus ini menunjukkan seorang terdakwa yang tidak
bersalah dan 1 tahun kemudian orang yang bersalah yang bertanggung jawab ditemukan
dan diproses .
Dalam 30 tahun terakhir, analisis molekuler DNA telah menjadi alat penting dalam
penyelidikan forensik. Saat ini, profil DNA didasarkan pada analisis reaksi berantai
polimerase (PCR). Metode ini mencakup STR autosomal, kromosom Y dan X. PCR
adalah proses mereplikasi wilayah tertentu pada genom, berulang-ulang untuk
menghasilkan banyak salinan wilayah [20].
Sebelum PCR, DNA harus dikuantifikasi. Ini penting untuk memastikan amplifikasi yang
benar; tujuan utamanya adalah untuk menentukan jumlah cetakan DNA, yang dihasilkan
dari isolasi. Ada banyak metode dengan akurasi yang berbeda, tetapi mengetahui
konsentrasi DNA yang ada dalam sampel memungkinkan ilmuwan forensik untuk
menetapkan jumlah ideal DNA yang diperlukan untuk amplifikasi agar memungkinkan
untuk mendapatkan profil genetik yang termasuk dalam parameter kualitas yang
ditetapkan. oleh laboratorium.
Analisis genetik dari bukti yang dikumpulkan dalam kejahatan seksual biasanya
mencakup profil genetik dari dua atau lebih kontributor; dalam campuran semacam ini,
kontribusi genetik individu umumnya tidak seimbang. Ini selanjutnya akan mengganggu
proses identifikasi melalui serangkaian efek stokastik, seperti amplifikasi preferensial,
yang diketahui mungkin mempengaruhi PCR [20].
Kesimpulan
Penyerangan seksual adalah kejahatan kompleks yang melibatkan perhatian medis dan
psikologis bagi korban dan menghasilkan biaya keuangan yang tinggi per pengembangan
penyelidikan forensik. Selama investigasi, identifikasi, pengumpulan dan pengemasan
cairan biologis di TKP dan analisis bukti di laboratorium sangat penting karena kesalahan
selama tahap ini akan mempengaruhi sisa penyelidikan [16]. Penggunaan protokol
intervensi di TKP mengurangi kemungkinan hilangnya data yang dapat memperjelas
kejahatan, bahkan protokol harus dilengkapi dengan wawancara saksi dan/atau korban
untuk mengambil keputusan dalam memperluas wilayah pencarian barang bukti. .
Standarisasi dan kontrol kualitas prosedur menjamin bahwa semua personel mengelola
TKP dengan cara yang sama.
Untuk penyelidikan kejahatan seksual yang benar dan berhasil, perlu untuk memulihkan
bukti di tiga bidang utama: TKP, korban, dan pelaku. Pemulihan bukti harus diselesaikan
pada jam-jam pertama setelah kejahatan; ini sangat penting untuk keberhasilan
investigasi, meskipun tidak selalu terjadi untuk beberapa unit investigasi [18].
Metode ekstraksi DNA semakin efektif dalam pemulihan jejak bukti tetapi masih tidak
efektif dalam analisis campuran (pemisahan kontributor), yang merupakan skenario
umum dalam kekerasan seksual. Teknik yang digunakan untuk mengisolasi sel sperma
dari sel epitel adalah ekstraksi diferensial, tetapi karena tidak selalu memungkinkan untuk
memisahkan kedua sel, maka perlu diterapkan teknik lain [20].
Daftar Pustaka
[11] Magalhães T, Dinis-Oliveira RJ, Silva B, Corte-Real F, Nuno-Vieira D. Biological
evidence management for DNA analysis in cases of sexual assault. The Scientific World
Journal. 2015;2015:1-11. DOI: 10.1155/2015/365674
[12] Kelompok Kerja Teknis Investigasi TKP Amerika Serikat. Investigasi TKP:
Panduan untuk Penegakan Hukum [Internet]. 2000. Tersedia dari: https://www.
ncjrs.gov/pdffiles1/nij/ 178280.pdf [Diakses: 10 Juli 2018]
[13] Lee W, Khoo B. Sumber cahaya forensik untuk mendeteksi bukti biologis
dalam investigasi TKP: Tinjauan. Jurnal Ilmu Forensik Malaysia. 2010;1:17-28
[14] Horswell J. Praktek investigasi TKP. Dalam: Seri Investigasi dan Ilmu
Forensik Internasional. edisi pertama New York: CRC Press; 2004. 421 hal. ISBN:
0-748-40609-3
[15] Li R. Forensic Biology. 2nd ed. Boca Raton: CRC Press. 533 p. ISBN: 13: 978-1-
4398-8972-5
[16] Buttler JM. Advanced Topics in Forensic DNA Typing: Methodology. 1st ed. San
Diego: Academy Press; 2012. 652 p. ISBN: 978-0-12-374513-2
[17] Marshall PL, Stoljarova M, Larue BL, King JL, Budowle B. Evaluation of a novel
material, Diomics X-SwabTM, for collection of DNA. Forensic Science International:
Genetics. 2014;12: 192-198. DOI: 10.1016/j.fsigen. 2014.05.014
[20] Sabine Hess S, Haas C. Recoveryof trace dna on clothing: A comparison of mini-
tape lifting and three other forensic evidence collection techniques. Journal of Forensic
Science. 2017;62: 187-191. DOI: 10.1111/1556-4029.13246