Fraksinasi, Isolasi, Pemurnian Dan Identifikasi

9/19/2021
FITOKIMIA
Retno Wahyuningrum
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
3. FRAKSINASI, ISOLASI DAN IDENTIFIKASI

farmasi.ump.ac.id
1
9/19/2021
FRAKSINASI EKSTRAK
• Ekstraksi Cair-Cair
• Kromatografi Kolom
• Kromatografi Cair Vakum
• Kromatografi kilat (flash)

farmasi.ump.ac.id
2
9/19/2021
LIQUID LIQUID EXTRACTION
EKSTRAKSI CAIR-CAIR (ECC)

• Antara 2 pelarut tidak bercampur
• Air-pelarut organik
• Metanol/etanol-pelarut organik
Rafinat : cairan yang diekstraksi

Ekstraktan : cairan yang mengekstraksi

farmasi.ump.ac.id
Skema Ekstraksi Cair-cair

farmasi.ump.ac.id
3
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
4
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
5
9/19/2021
KROMATOGRAFI KOLOM
6
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
7
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id
8
9/19/2021

9
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
10
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
11
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
12
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
13
9/19/2021
Hasil Pemisahan Ekstrak dengan Flash Chromatography

farmasi.ump.ac.id
27

farmasi.ump.ac.id
28
14
9/19/2021
Pemantauan hasil flash

chromatography dengan KLT
Fraksi nomor 37-47 mengandung

senyawa target (A1)
Pemurnian dengan KLT Preparatif
Diperoleh isolat A1 sebanyak 1,1

mg dari 250 mg ekstrak
(rendemen 0,44 %)

29
ISOLASI

farmasi.ump.ac.id
15
9/19/2021
Isolasi
• KLT preparatif
• HPLC preparatif
• Kromatografi Kolom Gravitasi

farmasi.ump.ac.id
Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
 Metode ini biasanya digunakan untuk isolasi maupun pemurnian

 Fase diam lebih tebal yaitu 0,5 - 1mm (tebal fase diam KLT biasa 0,25mm)
 Totolan dalam bentuk garis
 Deteksi jangan menggunakan senyawa yg destruktif
 Setelah dielusi, bercak dikerok → dilarutkan dlm pelarut → sentrifuge → zat
aktif dipisahkan

farmasi.ump.ac.id
16
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
17
9/19/2021
Pemurnian Senyawa Aktif

farmasi.ump.ac.id
Pemurnian = purification
• Murni?
• “Pure” does not necessary imply that it is absolutely free of other
chemicals (Cannel, 1998)

farmasi.ump.ac.id
18
9/19/2021
Metode Pemurnian
Kristalisasi
1. A saturated solution containing one or more compounds of interes
becomes supersaturated
2. Nucleation occurs and crystal growth ensues

farmasi.ump.ac.id

farmasi.ump.ac.id
19
9/19/2021

farmasi.ump.ac.id
Uji Kemurnian
1. KLT
a. KLT 2 dimensi
b. KLT dengan 3 eluen yang berbeda menghasilkan bercak tunggal
2. HPLC
3. GC

farmasi.ump.ac.id
20
9/19/2021
Kromatografi Lapis Tipis
• Merupakan metode pilihan untuk pemisahan semua kandungan yg larut

dlm lipid (lipid, steroid, karotenoid, kuinon sederhana)
• Kelebihan khas : keserbagunaan, kecepatan, kepekaan
• Fase diam : silika gel, selulosa, aluminium oksida, kiselgur
• Pelat : kaca, plastik, aluminium
• Deteksi : pereaksi semprot

farmasi.ump.ac.id
21
9/19/2021
Illustration of Chromatography
Stationary Phase
Separation
Mobile Phase
Mixture Components
Affinity to Stationary Affinity to Mobile
Components
Phase Phase
Blue ---------------- Insoluble in Mobile Phase
Black  
Red  
Yellow          
Komponen penting pada analisis dengan KLT
– Peralatan (chamber)
– Fase Diam
– Fase gerak
– Aplikasi sampel
– Pengembangan
– Deteksi bercak
22
9/19/2021
• Fase diam
– Umumnya digunakan silika
– Dapat ditambahkan pengikat dan indikator fluoresensi
– Mekanisme dominan: adsorbsi kadang partisi
• Fase gerak/eluen/pelarut
Berdasarkan polaritas
Biasanya campuran
Studi pustaka dan coba-coba
• Prinsip: like dissolves like
• Senyawa polar lebih tertahan oleh fase diam
• Senyawa polar lebih mudah larut dalm fase gerak yang polar
23
9/19/2021
Silika Gel
• Silika gel merupakan silikon oksida

• Setiap atom Si dikelilingi oleh atom O
• Pada permukaan silika gel terjadi ikatan hidrogen antara atom O dari silika dengan
atom H dari air (di udara) membentuk silanol (Si-OH)
• Gugus silanol merupakan titik aktif permukaan silika gel untuk berinteraksi dengan
sampel dan fase gerak
• Makin banyak air → makin tidak aktif karena permukaan adsorben sudah diduduki
oleh air
• Untuk mengurangi air di permukaan → pelat silika gel dipanaskan dengan oven
(diaktifkan)

farmasi.ump.ac.id
Macam-macam Silika Gel (Si-OH)
• Silika gel G : mengandung pengikat gypsum (CaSO4, 5-15%)

• Silika gel S : mengandung pengikat starch (pati)
• Silika gel GF254 : mengandung pengikat gypsum dan indikator fosforesensi timah
kadnium sulfida atau mangan timah silikat aktif, yang berfosforesensi pada λ 254 nm
• Silika gel H/ silika gel N : tanpa mengandung pengikat
• Silika gel F254 : tanpa pengikat, tapi mengandung indikator fosforesensi
• Silika gel PF254 : untuk pemisahan preparatif dan mengandung indikator
fosforesensi

farmasi.ump.ac.id
24
9/19/2021
Kekuatan elusi pelarut pada silika dan polaritas pelarut
Aplikasi sampel
• Totolan bercak sekecil mungkin
• Biasanya 1- 2 mm, totolan besar: bercak menyebar dan bertumpuk
• Digunakan pelarut sampel yang bisa melarutkan sampel dengan baik, tetapi mudah
menguap dan daya elusinya kecil
• Secara manual/otomatis
• Dapat digunakan pipa kapiler,
mikropipet, mikrosiring
25
9/19/2021
Macam-macam pengembangan KLT
1. Pengembangan tunggal
2. Pengembangan 2 dimensi
 Fase gerak ke 1 dan ke 2 tak sama
 Arah pengembangan ke 2 tegak lurus (90°) pengembangan ke 1
3. Pengembangan berganda
 KLT dengan fase gerak ke 1 hasil Rfnya 0,1-0,2
 Fase gerak ke 1 dan ke 2 sama
 Setelah pengembangan ke 1, pelat KLT dikeringkan, lanjut pengembangan ke 2, dst

farmasi.ump.ac.id
Rf = jarak yang ditempuh oleh komponen

jarak yang ditempuh oleh pelarut
26
9/19/2021
• Rf : retention factor
• hRf : hecto retention factor = Rf x 100
• RRf : relative retention factor
RRf = Rf x / Rf pembanding

farmasi.ump.ac.id
Deteksi Bercak
• Berwarna atau tidak
• Dengan lampu UV 254/366 nm
• Jika menggunakan pelat KLT F: bercak yang tidak berfluoresensi terlihat
sebagai pemadaman (gelap) pada latar belakang hijau/biru
• Dengan penampak bercak
– Disemprot/dicelup/diuapi
– Destruktif/tidak
– Umum/selektif
27
9/19/2021
Pereaksi Semprot untuk KLT
No Nama golongan senyawa Pereaksi penampak bercak

1 Flavonoid Sitroborat, AlCl3,
2 Alkaloid Dragendorf, Kobalt (II) tiosianat, Kalium iodoplatinat
3 Terpenoid Vanilin asam sulfat, Vanilin asam fosfat
4 Minyak atsiri Anisaldehid asam sulfat

farmasi.ump.ac.id
28
9/19/2021
KLT 2 dimensi

farmasi.ump.ac.id
29
9/19/2021
METODE IDENTIFIKASI
Penentuan golongan senyawa :
1. Uji warna
2. Penentuan kelarutan
3. Bilangan Rf
4. Ciri spektrum Uv
Identifikasi lengkap
1. Titik leleh (seny padat)
2. Titik didih (cairan)
3. Putaran optik
4. Rf atau Rt
5. Ciri spektrum (UV, MS, IR, RMI) → dibandingkan data base

farmasi.ump.ac.id
Identifikasi golongan senyawa dengan metode Cannel

Gol Senyawa Pereaksi Cara Kerja Hasil positif
ALKALOID Dragendorf 1,0 mL sampel + 2-3 tetes Endapan jingga

pereaksi
STEROID Liebermann-Burchard 1,0 mL sampel + 1,0 mL Larutan berwarna biru,

pereaksi hijau, merah, jingga
FLAVONOID Shinoda 1,0 mL sampel alkoholik + Jingga-merah

sdkt serbuk Mg + bbrp
tetes HCl pekat
SAPONIN 2,0 mL larutan sampel Terbentuk busa yg stabil

dikociok bbrp menit selama 15’
POLIFENOL 1,0 mL lart sampel + bbrp Endapan cokelat

tetes lart feri klorida 5%
GLIKOSIDA Baljet 2-3 mg sampel + 2 mL Jingga-merah

pereaksi Baljet
30
9/19/2021
TERIMA KASIH

31

Fraksinasi, Isolasi, Pemurnian Dan Identifikasi

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Fraksinasi, Isolasi, Pemurnian Dan Identifikasi

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

9/19/2021

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

3. FRAKSINASI, ISOLASI DAN IDENTIFIKASI

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

LIQUID LIQUID EXTRACTION

EKSTRAKSI CAIR-CAIR (ECC)

Rafinat : cairan yang diekstraksi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Skema Ekstraksi Cair-cair

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Hasil Pemisahan Ekstrak dengan Flash Chromatography

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Pemantauan hasil flash

Fraksi nomor 37-47 mengandung

Pemurnian dengan KLT Preparatif

Diperoleh isolat A1 sebanyak 1,1

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

 Metode ini biasanya digunakan untuk isolasi maupun pemurnian

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Pemurnian Senyawa Aktif

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Kromatografi Lapis Tipis

• Merupakan metode pilihan untuk pemisahan semua kandungan yg larut

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Blue ---------------- Insoluble in Mobile Phase

Komponen penting pada analisis dengan KLT

• Silika gel merupakan silikon oksida

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Macam-macam Silika Gel (Si-OH)

• Silika gel G : mengandung pengikat gypsum (CaSO4, 5-15%)

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Kekuatan elusi pelarut pada silika dan polaritas pelarut

Macam-macam pengembangan KLT

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

Rf = jarak yang ditempuh oleh komponen