Aktivitas Anthelmintik In Vitro dari Ekstrak Kasar dari Bagian Udara

Cissus quadrangularis L. dan Daun Schinus molle L. melawan Haemonchus

contortus

Disusun Oleh :
Satria Miftah
3311201066
 I. PENDAHULUAN
Infeksi parasit tetap menjadi kendala utama produksi ternak secara global.
Haemonchus contortus, agen penyebab Haemonchosis adalah parasit nematoda
yang memakan darah hewan ruminansia kecil dan menyebabkan anemia,
anoreksia, pertumbuhan berkurang, dan akhirnya kematian hewan inang. H.
contortus adalah parasit yang sangat patogen dari ruminansia kecil dan merupakan
kendala utama untuk produksi domba dan kambing yang menguntungkan di
seluruh dunia. Pengendalian umumnya dicapai dengan penggunaan antelmintik
sintetik yang dikombinasikan dengan pengelolaan penggembalaan. Anthelmintik
sintetik memiliki beberapa kelemahan diantaranya resistensi.
H. contortus telah didokumentasikan resisten terhadap keluarga
antelminthik spektrum luas dan sempit. Survei di seluruh negara untuk resistensi
antelmintik belum dilakukan di Ethiopia. Namun, penelitian menunjukkan bahwa
resistensi terdeteksi di berbagai bagian Ethiopia terhadap albendazole, levamisole,
tetramisole, dan ivermectin. Salah satu cara praktis untuk mengembangkan
antelmintik yang lebih murah dan efektif adalah dengan mempelajari pengobatan
herbal asli. Evaluasi aktivitas tanaman obat yang diklaim memiliki khasiat
antelmintik mendapat perhatian akhir-akhir ini. Ada banyak laporan, terutama dari
Afrika, yang menunjukkan keefektifan produk tanaman terhadap infeksi cacing
pada hewan. Studi melaporkan bahwa Cissus quadrangularis dan Schinus kecil
digunakan untuk melawan berbagai infeksi cacing di Ethiopia C. quadrangularis
diklaim untuk digunakan pada ternak melawan helminthiasis, infestasi kutu dan
kutu, dan infestasi lindi. Demikian pula, S. mole banyak digunakan oleh
penggembala dan agropastoralists dari Ethiopia untuk membasmi parasit usus.
Oleh karena itu, diperlukan untuk mengevaluasi potensi antelmintik dari dua herbal
yang biasa digunakan oleh komunitas penggembala di Ethiopia.

II. METODE
a. Pengumpulan Tumbuhan dan Persiapan Ekstrak
Bagian udara segar C. quadrangularis dan daun S. molle dikumpulkan dari
habitat aslinya di sekitar Jigjiga, Ethiopia timur. Tanaman kemudian
dibersihkan, dikeringkan di tempat teduh, ditumbuk secara mekanis, dan
dihaluskan menjadi bubuk kasar menggunakan lesung dan alu
laboratorium. Ekstrak kasar dibuat dengan teknik maserasi dingin. Bahan
tanaman bubuk kasar secara terpisah direndam dalam pelarut ekstraksi
(metanol) diikuti dengan pengocokan berkala selama tiga hari dan
kemudian disaring. Residu yang tersisa setelah maserasi berturut-turut
diekstraksi dua kali dengan media yang sama secara terpisah dan filtrat
dilewatkan melalui kertas saring steril (Whatman No. 3, Whatman Ltd.,
Inggris). Filtrat dipekatkan dengan rotary evaporator (uap Buchi Rota,
Swiss). Ekstrak kemudian dikeringkan dalam oven udara panas dan
dipindahkan ke botol berlabel dan disimpan dalam lemari es sampai
diperlukan untuk digunakan. Ekstrak kering yang dihasilkan ditimbang
dan memberikan hasil persentase masing-masing 5,3% (b/b) dan 15,2%
(b/b) untuk C. quadrangularis dan S. molle.
b. Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dilakukan untuk menilai komposisi kimia kualitatif
ekstrak metanol mentah C. quadrangularis danS. molle. Tes skrining
standar menggunakan protokol konvensional, prosedur, dan reagen
dilakukan dengan menggunakan prosedur standar untuk mengidentifikasi
konstituen.
c. Koleksi Parasit. H. Contortus dewasa dikoleksi dari abomasum domba
yang diperoleh dari rumah potong hewan kota Jigjiga. Kemudian,
abomasum dicuci dengan air dan parasit disimpan dalam phosphate buffer
saline (PBS) sampai evaluasi in vitro dimulai.
d. Evaluasi Aktivitas Anthelmintik In Vitro
Uji Penghambatan Penetasan Telur (WAJIB).Betina dewasa yang
baru dikumpulkan H. contortus diambil, dihancurkan, dan disaring untuk
mendapatkan telurnya, yang kemudian digiling dalam PBS. Suspensi
disentrifugasi selama 2 menit pada 300 rpm dan sedimen dipertahankan.
Sedimen ini disuspensikan kembali dalam larutan NaCl jenuh untuk
membentuk meniskus cembung di atas tabung reaksi. Setelah meletakkan
kaca penutup di atas tabung reaksi, sampel disentrifugasi lagi. Kaca
penutup dilepas dengan hati-hati dan telur dicuci ke dalam tabung reaksi
lain. Larutan ini kemudian disentrifugasi dan telur dikumpulkan dari
sedimen. Telur dicuci tiga kali dengan air suling dan disesuaikan dengan
konsentrasi 100-200 telur/mL, menggunakan teknik McMaster.
EHIA dilakukan mengikuti teknik Coles et al. Kira-kira, 100 telur
dalam 200 μL air dipipet ke setiap sumur dari piring mikrotiter 48 sumur.
Ke masing-masing sumur uji, 200 μL dari setiap ekstrak tanaman
ditambahkan ke volume akhir 400 μL per sumur. Ekstrak tumbuhan diuji
pada konsentrasi 0,1, 0,25, 0,5, dan 1 mg/mL. Demikian pula, 200 μL
albendazol (obat standar) pada konsentrasi 0,25 mg/mL dan air suling
digunakan masing-masing sebagai kontrol positif dan kontrol tanpa
perlakuan.
Setiap pengujian dilakukan dalam tiga ulangan (Triplo). Pelat diinkubasi
dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37∘C selama 48 jam.
Setelah itu, setetes larutan Lugol ditambahkan untuk menghentikan
penetasan lebih lanjut. Semua telur yang tidak menetas dan larva L1 di
setiap sumur dihitung. Persen penghambatan penetasan telur dihitung
dengan menggunakan rumus di bawah ini.

Persen Penghambatan (%) = 100 – ( 1 - 𝑃𝑡𝑒𝑠𝑡 )

𝑃 𝑡𝑖𝑑𝑎𝑘 𝑑𝑖𝑟𝑎𝑤𝑎𝑡

Dimana *P : Jumlah telur yang menetas di EHIA.

Uji Motilitas Dewasa (AMA). AMA dilakukan pada cacing

dewasa H. contortus mengikuti teknik Sharma et al. Pengujian dilakukan
dalam cawan petri kaca berdiameter 5 cm. Sebanyak sekitar 368 parasit
dewasa digunakan dalam penelitian ini. Empat konsentrasi digunakan
untuk setiap ekstrak tumbuhan. Sepuluh cacing dipaparkan rangkap tiga
 untuk masing-masing perlakuan berikut dalam cawan Petri terpisah pada
suhu kamar.
Ada 4 kelompok sebagai berikut: Kelompok I: ekstrak metanol
mentah pada 1,25, 2,5, 5, dan 10 mg/mL C. quadrangularis, Kelompok II:
ekstrak kasar metanol S. molle 1,25, 2,5, 5, dan 10 mg/ml, Kelompok III:
albendazol 0,25 mg/ml (kontrol positif) dan Kelompok IV: PBS (kontrol
negatif).
Penghambatan motilitas cacing digunakan sebagai indikasi
kematian atau kelumpuhan cacing. Motilitas cacing diamati dan jumlah
cacing motil dihitung pada interval waktu yang berbeda hingga 7 jam pasca
perlakuan.
Analisis data. Data disusun, diedit dan dianalisis menggunakan SPSS
Versi 20. Data yang diperoleh dari kedua pengujian bersifat analisis
dengan ANOVA satu arah menggunakan uji perbandingan berganda
Tukey HSD. Hasil dianggap signifikan secara statistik jika p <0,05 pada
interval kepercayaan 95%.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL

a. Skrining Fitokimia. Penapisan fitokimia menunjukkan adanya alkaloid dan
tanin pada kedua ekstrak sedangkan flavonoid dan fenol juga terdapat pada
ekstrak metanol C. quadrangularis.

b. Aktivitas Antelmintik. Kedua uji in vitro menunjukkan bahwa ekstrak

kasar dari kedua tanaman memiliki efek penghambatan adulticidal dan
penetasan telur yang menjanjikan. Ekstrak menghasilkan aktivitas
antelmintik yang tergantung dosis pada AMA dan EHIA.
c. Tes Motilitas Dewasa. Penelitian ini menunjukkan bahwa kedua ekstrak
tersebut menghasilkan aktivitas antelmintik yang relatif sebanding dengan
antelmintik konvensional albendazol. Aktivitas meningkat dengan
konsentrasi dan waktu. Setelah 7 jam pemaparan H. contortus dewasa
terhadap berbagai konsentrasi ekstrak tanaman, diamati penurunan
motilitas yang signifikan (p <0,05) dan tergantung dosis pada kedua
tanaman (Tabel 1). Pada konsentrasi tertinggi (10 mg/mL), kedua tanaman
menghasilkan mortalitas H. dewasa berubah menjadi 95% dan 100%
 setelah 7 jam paparan ekstrak, masing-masing (Gambar 1). Albendazole,
di sisi lain membunuh parasit dengan cara yang tergantung waktu dan
semua cacing dewasa mati pada konsentrasi 0,25 mg/mL dalam waktu 4
jam setelah paparan. Profil kemanjuran adulticidal ekstrak, yang diukur
dengan persentase parasit dewasa yang terbunuh pada akhir periode
pengamatan, adalah sebagai berikut: 100 dan 95% pada konsentrasi 10
mg/ml, 97,5 dan 92,6% pada konsentrasi 5 mg. /ml, 95,08 dan 91,4% pada
konsentrasi 2,5 mg/ml, dan 91,4 dan 89,4% pada konsentrasi 1,25 mg/mL
berturut-turut untuk C. quadrangularis dan S. molle.
d. Uji Penghambatan Penetasan Telur. Hasil EHIA pada konsentrasi
bertingkat ekstrak metanol mentah C. quadrangularis dan S. molle
ditunjukkan pada Tabel 2. Hasil menunjukkan bahwa kedua ekstrak
menghasilkan efek penghambatan penetasan telur yang relatif sebanding
dengan albendazole. Ekstrak metanol daun S. molle membutuhkan
konsentrasi maksimum 1 mg/ml untuk menginduksi inhibisi penetasan
telur 96% sedangkan C. quadrangularis menginduksi efek inhibisi
penetasan telur 88% pada konsentrasi yang sama. Profil efikasi inhibisi
telur dari ekstrak, yang diukur dengan persentase telur yang tidak menetas
pada akhir periode pengamatan adalah sebagai berikut: 40,67 dan 39,33%
pada konsentrasi 0,1 mg/ml, 52 dan 57% pada konsentrasi 0,25 mg/mL,
70,33 dan 74,33% pada konsentrasi 0,5 mg/mL, dan 88 dan 96% pada
konsentrasi 1 mg/ml masing-masing untuk C. quadrangularis dan S. Molle.

PEMBAHASAN
Bahan tanaman yang dievaluasi dalam penelitian ini telah diidentifikasi
dari berbagai sumber untuk digunakan sebagai agen antelmintik oleh tabib
tradisional Ethiopia. Uji in vitro menggunakan tahap hidup bebas nematoda
parasit menawarkan cara untuk mengevaluasi aktivitas anthelmintik senyawa
tanaman baru. Teknik in vitro lebih disukai daripada metode in vivo karena
biayanya yang murah, sederhana, dan pergantian yang cepat.
Seluruh tanaman C. quadrangularis didokumentasikan memiliki khasiat
obat dalam survei etnobotani yang dilakukan oleh ahli etnobotani dalam sistem
pengobatan tradisional. Selain itu, Luseba et al. melaporkan bahwa ekstrak
metanol dan ekstrak diklorometana batang C. quadrangularis memiliki
aktivitas antimikroba. Penelitian ini menunjukkan efikasi 100% dari ekstrak
tumbuhan terhadap parasit pada konsentrasi 10 mg/ml yang merupakan nilai
efikasi tertinggi dan sebanding dengan antelmintik standar, albendazol. Efek
penghambatan penetasan telur dari ekstrak tumbuhan ini sebesar 88% pada
konsentrasi 1 mg/ml.
Dalam pengobatan tradisional, S. molle adalah tanaman obat yang
dipelajari secara ekstensif di seluruh dunia dan telah dilaporkan digunakan
untuk melawan berbagai penyakit manusia dan ternak. Daun S. molle juga
dilaporkan digunakan untuk pengobatan infeksi yang disebabkan oleh berbagai
parasit. Hal ini terbukti dari penelitian saat ini, yang menunjukkan 95%
mortalitas parasit dewasa H. contortus pada konsentrasi 10 mg/ml dalam
ekstrak metanol S. molle. Efek penghambatan penetasan telur S. molle adalah
 96% pada konsentrasi 1 mg/ml. Peningkatan konsentrasi ekstrak tumbuhan
menghasilkan peningkatan penghambatan penetasan telur yang menunjukkan
aktivitas yang bergantung pada dosis. Seperti yang disaring dalam uji fitokimia
S. molle, metabolit sekunder, alkaloid dan tanin, bertanggung jawab atas
aktivitas antelmintiknya.
Dalam skrining fitokimia C. quadrangularis, terungkap bahwa tanaman
tersebut memiliki metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, tanin, dan
fenol. Kehadiran phytochemical ini mungkin bertanggung jawab atas aktivitas
anthelmintik yang diamati dari ekstrak tumbuhan dalam penelitian ini.
Selanjutnya, tanin telah terbukti mengganggu fosforilasi oksidatif, sehingga
menghalangi sintesis ATP pada parasit ini. Akhirnya, metode in vitro
menyediakan sarana untuk skrining cepat untuk aktivitas anthelmintik
potensial dari ekstrak tanaman yang berbeda. Karena biotransformasi obat,
interaksi dengan bahan makanan, dan variasi penyerapan, hasil yang diperoleh
dengan metode in vitro tidak dapat diekstrapolasi menjadi aktivitas in vivo.
Oleh karena itu, hasil harus dipastikan dengan evaluasi in vivo.

IV. KESIMPULAN
Studi saat ini membuktikan bahwa ekstrak metanol bagian udara C.
quadrangularis dan daun S. molle memiliki aktivitas antelmintik in vitro yang
menjanjikan terhadap H. contortus stadium dewasa dan oval. Namun, aktivitas
antelmintik C.