KARBOHIRAT

"Mono dun O!IgosukuvIdu"

Isusun O!eL:
l. TIfIn ArynnI (3486)
2. Honny InrIdn Hufnon (348?)
l. II!SIAIA SAMII!
8ahan baku bahan aLau produk akhlr
alr
-ulhaluskan
-uleksLrak dengan 191 v/v CPCl
3
MeCP
resldu Lemak dan penyusun dalam lemak
8ahan kerlng
LkLrak dengan
80 eLanol
Mono dan Cllgaosakarlda
resldu
erLukaran lon
ulkerlngkan
2. IKST!AKSI
Indn snnf oksfrnksI snngnf mungkIn
mongnndung znf ynng dnnf monggnnggu
ongukurnn mono dnn oIIgosnknrIdn forufnmn
jIkn monggunnknn mofodo sokfrofofomofrI.
Cnnggunn mungkIn dnnf dIsobnbknn oIoh:
l. Sonynwn ynng monyorn cnhnyn dongnn
nnjnng goIombnng ynng snmn
2. Inhnn koIoId ynng monghnmburknn cnhnyn
3. KoIomok guIn nIdohId nfnu kofo ynng dnnf
boronksI dongnn komonon InIn.
Mofodo kromofogrnfI soorfI HI!C dIgunnknn
unfuk nnnIIsIs mono- dnn oIIgosnknrIdn dnn
bInsnnyn hnrus dIIsnhknn dnrI komonon InIn
dnrI mnknnnn soboIum kromnfogrnfI.
Indn ononfunn mono- (gIukosn frukfosn), dI-
(sukrosn, Inkfosn, mnIfosn), frI- (rnfInosn), fofrn-
(sfnchyos), nfnu oIIgo- (mnIfo doksfrIn) snknrIdn
InI, sofIn snmoI dIkorIngknn, komudInn snmoI
bobns Iomnk dIoksfrnksI dongnn ofnnoI oknf
80, dongnn ndnnyn ondnnn knIsIum knrbonnf
dIgunnknn unfuk monofrnIIsIr konsnmnn
(mofodo AOAC).
OIIgosnknrIdn forfInggI dnrI onnmbnhnn mnIfo-
nfnu frukfooIIgosnknrIdn jugn bIsn dIoksfrnksI.
3. KA!IOHI!AT TOTA! :
MITOI ASAM S!!IAT-IIO!
n. IrInsI dnn KnrnkforIsfIk
KnrbohIdrnf dIrusnk oIoh nsnm kunf ndn suhu
fInggI, dongnn kondIsI forsobuf sornngknInn
ronksI komIoks forjndI dImuInI dongnn ronksI
dohIdrnsI sodorhnnn.
IInnjufknn omnnnsnn dongnn nsnm
monghnsIIknn borbngnI furunnn furnn, komudInn
borkondonsnsI dongnn sondIrInyn dongnn roduk
InInnyn monghnsIIknn znf cokInf dnn hIfnm.
KomudInn borkondonsnsI dongnn sonynwn
fonoIIk dnn borbngnI nmInn nromnfIk.
KondonsnsI ynng sorIng dIgunnknn ndnInh
dongnn fonoI,knronn mofodo InI sodorhnhn,
conf,sonsIfIf, nkurnf, sosIfIk unfuk knrbohIdrnf
dnn bnnynk dIgunnknn, rongonnyn murnh,
mudnh forsodIn dnn sfnbII.
HnmIr somun koIomok guIn formnsuk dorIvnf
guIn dnn oIIgo- sorfn oIIsnknrIdn dnnf
dIfonfuknn dongnn mofodo nsnm suIfnf-fonoI.
I. I!OSI!!
MomborsIhknn, Inrufnn oncor knrbohIdrnf dnn
dIIndnhknn dongnn monggunnknn Iof ko
dnInm fnbung kocII.
!nrufnn fonoI dIfnmbnhknn komudInn dIcnmur.
ongnn conf monnmbnhknn nsnm suIfnf oknf
kodnInm fnbung sohInggn monghnsIIknn
oncnmurnn ynng bnIk. KomudInn fnbung
dIkocok.
AbsorbnnsI dIukur ndn 490 nm.
AbsorbnnsI rnfn-rnfn Inrufnn bInnko dnnf
dIhIfung, dnn jumInh guIn dIfonfuknn dongnn
mongncu ndn kurvn sfnndnr.
4. TOTA! C!!A II!I!KSI
A. Mofodo SomogyI oIson
l). IrInsI
nInm kondIsI bnsn kofosn borfIndnk sobngnI
guIn oroduksI ynng Iomnh knronn sobngInn
nknn forIsomor dnInm bonfuk nIdosn.
Mofodo guIn oroduksI dnnf dIgunnknn dnInm
kombInnsI dongnn mofodo onzymIk unfuk
ononfunn oIIgo dnn oIIsnknrIdn.
nInm mofodo onzymIk, hIdroIIsIs khusus dIgunnknn
unfuk mongkonvorsI oIIgo nfnu oIIsnknrIdn monjndI
monosnknrIdn onyusunnyn nfnu unIf onguInngnn
oIIgosnknrIdn, ynng dIukur dongnn monggunnknn
mofodo guIn oroduksI.
Indn somogyI noIson mofodo dIdnsnrknn ndn
roduksI Ion Cu (III) ko Ion Cu (I) dongnn guIn
oroduksI.
Ion Cu (I) dIroduksI dongnn Ion komIoks
nrsonomoIyb, dongnn moronksIknn nmonIum
moIIbdnf |(H
4
)
6
Mo
?
O
24
] dnn nnfrIum nrsonnf
(n
2
HAsO
?
) dnInm nsnm suIfur.
!oduksI komIoks nrsonomoIybdnfo monghnsIIknn
wnrnn bIru ynng dIukur socnrn sokfrofofomofrI.
!onksI InI fIdnk sfoIkIomofrIk dnn hnrus dIgunnknn
kurvn sfnndnr dnrI guIn ynng dIfonfuknn nfnu -
gIukosn.
2). I!OSI!!
l. !nrufnn fombngn (II) suIfnf dnn buffor nIknII ynng
dIfnmbnhknn oIoh Iof ko Inrufnn guIn oroduksI
dnn Inrufnn bInnko.
2. !nrufnn ynng dIhnsIIknn dInnnsknn dnInm
onnngns nIr mondIdIh
3. MonyInknn rongonf dongnn oncnmurnn Inrufnn
nsnm nmonIum moIIbdnf dnn onnmbnhnn nnfrIum
nrsonnf.
4. SofoInh oncnmurnn, ongoncornn, dnn
onguInngnn oncnmurnb mongukur nbsorbnnsI
ndn 520 nm.
5. SofoInh monghIfung nbsorbnnsI rongon bInnko, A250
dIubnh kodnInm orsnmnnn gIukosn dongnn kurvn
sfnndnr nnfnrn mIkrogrnm gIukosn vs AbsorbnnsI.
I. MITOI !AI
Mofodo nsnm dInIfrosnIIcyIIc dIgunnknn unfuk
mongukur guIn oroduksI, dongnn moroduksI
3,5-dInIfrosnIIcyIIc monjndI furunnn mononmInn
komornhnn.
Mofodo somogyI noIson, dIdnsnrknn ndn roduksI
Ion Cu(II) dnInm Inrufnn bnsn monjndI Ion Cu(I),
ynng mongondn sobngnI oksIdn mornh bnfn
Cu2O. Ion fnrfrnf nfnu sIfrnf dIfnmbnhknn unfuk
monjngn Inrufnn Ion Cu(II) dnInm kondIsI bnsn.
5. AA!ISIS SIISIIIK MOO A
O!ICOSAKA!IA
n. HI!C
W Mofodo ynng dnnf dIIIIh unfuk nnnIIsIs mono
dnn oIIgosnknrIdn dnn dnnf dIgunnknn unfuk
nnnIIsIs oIIsnknrIdn sofoInh hIdroIIsIs.
W HI!C momborIknn nnnIIsIs ynng bnIk unfuk
kunIIfnfIf dnn kunnfIfnfIf.
W HI!C fIdnk momorIuknn onurunnn
knrbohIdrnf, fIdnk soorfI CC ndn nnnIIsIs guIn,
fofnI mmorIuknn fIIfrnsI dongnn fIIfor mIkron
soboIum dIInjoksIknn.
,8,,2
l KROMATOGRAII PRT\KARAN ANION (A-HPIC)
W KnrbohIdrnf momIIIkI Kn sokIfnr l2-l4, ynng
morunknn nsnm ynng snngnf Iomnh.
W nInm Inrufnn H ynng snngnf fInggI, bobornn
koIomok hIdroksII knrbohIdrnf dnnf forIonIsnsI
sohInggn momungkInknn guIn forIsnh dnrI koIom
rosIn onuknr nnIon.
W !rufnn oIusI umumnyn ndnInh guIn nIkohoI
(nIdIfoIs), mono-, dI-, dnn oIIgosnknrIdn ynng IobIh
fInggI.
W SorIng dIgunnknn dnInm hubungnnnyn dongnn
dofoksI oIokfrokImIn.
KROMATOGRAII IASA NORMAI
Insn dInm borsIfnf oInr
IomIsnhnn fnsn gornknyn bokorjn dongnn
kooInrnn ynng somnkIn monIngknf.
SIIIkn goI dIfurunknn dongnn snfu nfnu IobIh
dnrI bobornn rongon unfuk borgnbung dongnn
koIomok nmIno.
nInm omIsnhnn knrbohIdrnf oIuon ofokfIf ynng
dIgunnknn ndnInh osofonIfrII-nIr (50-85
nsofonIfrII).
KorugInn sIIIkn goI Iknfnn nmInn: monghnsIIknn
onurunnn kInorjn koIom dnrI wnkfu ko wnkfu
dnn hIInngnyn bobornn knrbohIdrnf ynng
dIukur.
3. KROMATOGRAFI PERTUKARAN KATION
Dioperasikan pada suhu tinggi >>80 C
AnnIIsIs sosIfIk mono- dnn
oIIgosnknrIdn
KromnfogrnfI Iorfuknrnn Ion
Insn dInm :
IoIn nrfIkuInf suIfonnf
(rosIn)
Insn gornk :
40 nIr x jumInh oInruf
orgnnIk(nsofonIfrII/mofnnoI
TorjndI oIusI knrbohIdrnf dnrI rosIn knronn
onurunnn bornf moIokuInyn
OIIgosnknrIdn I>3 ynng orfnmn knII mongoIusI,
dIIkufI oIoh dIsnknrIdn, monosnknrIdn, dnn nIdIfoI
. KROMATOGRAFI FASA TERBALIK
Digunakan untuk memisahkan golongan karbohidrat
mono-, di-, dan trisakarida.
Untuk Fasa diamnya adalah hidrofob, yang dibuat dengan
mereaksikan silika gel dengan reagen yang memiliki rantai
alkil seperti rantai alkil atom C-18 atau kelompok fenil.
Fasa gerak : sebagian besar adalah air
Keuntungan menggunakan kromatografi fasa terbalik :
1. Waktu retensi yang pendek
2. Menghasilkan elusi dengan puncak tunggal. Akan tetapi
dengan adanya anomer dapat menyebabkan puncak
ganda dan melebar. Masalah ini dapat diatasi dengan
menambahkan amina pada fase gerak untuk
mempercepat anomerasi, tetapi memperpendek waktu
retensi.
. Analisis pada monosakarida dengan penambahan
NaCl dapat menaikkan waktu retensi pada fase diam
Keduanya baik fasa diam maupun fasa terbalik memiliki:
1. Lama pemakaian yang panjang
2. Stabilitas yang baik
. Rentang yang luas pada komposisi pelarut
4. Nilai pH mempunyai rentang dari pH2 hingga pH10
5. Kecocokan untuk metode analisi karbohidrat
6. Relatifitas biaya yang rendah
DETEKTOR
1. Deteksi indeks bias
Indeks bias adalah sejumlah besar properti fisik
yang sensitif untuk mengubah aliran, tekanan dan
temperatur.
Indeks bias mempunyai faktor limit signifikan
terbanyak sehingga elusi gradien tidak dapat
digunakan.
2. ofoksI IIokfrokImIn
ofoksI InI monggunnknn dofokfor oIokfrokImIn
frIIo uIsn nfnu dIsobuf dongnn uIsod nmoromofrIc
dofocfor(IA) ynng momunynI knrokforIsfIk :
Iorgnnfung ndn oksIdnsI hIdroksII knrbohIdrnf nfnu
koIomok nIdohId ynng socnrn kosoIuruhnn
monggunnknn AI-HI!C.
Indn IA grndIon dnn nngkn oIusI dnnf dIgunnknn
IoInruf ynng dIgunnknn sodorhnnn dnn murnh ynIfu
nOH.
ofokfor InI cocok unfuk roduksI nfnu non roduksI
knrbohIdrnf
!ImIfnyn ndnInh sokIfnr l,5 ng unfuk monosnknrIdn,
dnn 5 ng unfuk dI-, frI-, dnn fofrnknrbohIdrnf.
. Derivatisasi Pasca Kolom
Tujuan pra- dan pascakolom adalah untuk menaikkan
sensitivitas deteksi dengan penambahan suatu substituen
yang konsentrasinya dapat diukur dengan menggunakan
UV atau detektor flouresensi.
Dengan adanya detektor PAD tidak perlu dilakukan pra-
dan pasca kolom.
4. Derivatisasi Prakolom
Derivat oligosakarida dengan kelompok aromatik sering
dipisahkan dengan resolusi yang lebih tinggi dengan
menggunakan HPLC fasa normal.
. KROMATOGRAFI GAS
GC seperti halnya HPLC dapat memberikan analisis
kuantitatif pada karbohidrat.
Untuk GC : gula harus diubah kedalam derivat yang
mudah menguap. iasanya menggunakan derivat alditol
perasetat (dan asam aldonik pertrimetil eter dari asam
uronik)
Konversi gula kedalam derivat perasetat aldonitril dan
derivat perasetilat ketoksim (ketosa) untuk GC sudah
bisa dilakukan. Tetapi prosedur ini jarang digunakan.
Detektor ionisasi nyala dipilih untuk derivat karbohidrat
perasetilat.
Langkah persiapan yang terlibat pada analisis
karbohidrat menggunakan GC adalah:
1. Reduksi pada kelompok aldehid ke dalam kelompok
alkohol primer
2. Konversi pada reduksi derivat gula eter kedalam
derivat perasetat ester atau derivat pertrimitil silil eter
yang mudah menguap.
Prinsip dasar dan parameter penting pada GC adalah
fase diam, temperatur program dan deteksi.
C!!A IT!A!
1. Reduksi kedalam bentuk alditol
CuIn nofrnI dnrI 80 ofnnoI oksfrnk
dIroduksI dongnn koIobIhnn nnfrIum nfnu
knIIum borohIdrIf
dIInrufknn dnInm Inrufnn
nmonIum hIdroksIdn cnIr.
SofoInh ronksI moncnnI suhu 40 C, nsnm nsofnf gInsInI
dIfnmbnhknn fofos domI fofos hInggn fnk ndn koIobIhnn
hIdrogon ynng forbonfuk
!nrufnn nsnm dIunknn unfuk ongorIngnn.
IoroIoh guIn nofrnI bonfuk nIdIfoI
2. Asetilasi
AsofII nnhIdrnf dIfnmbnhknn dongnn l-mofIIImIdnzoI
(sobngnI sunfu knfnIIs)
SofoInh l0 monIf ndn suhu knmnr , fnmbnhknn nIr dnn
dIkIoromofnnn
!nIsnn dIkIoromofnnn dIcucI
dongnn nIr dnn dIkorIngknn
!osIdu nIdoI ornsofnf
dIInrufknn dnInm sunfu oInruf
orgnnIk oInr unfuk
kromnfogrnfI
. GC pada alditol perasetat
Pada alditol asetat mungkin terjadi kromatografi secara
isotermal
Diidentifikasi dengan waktu retensi relatifnya
Untuk inositol heksaasetat, inositol ditambahkan sebagai
standar internal sebelum asetilasi.
HIDROLISAT ASAM KLORIDA MENGANDUNG
ASAM URONAT
l. !oduksI
Knronn hIdroIIsnf hnnyn mongnndung guIn nofrnI,
hIdroIIsnf orIu dIunknn unfuk ongorIngnn.
!osIdu dIInrufknn dnInm Inrufnn nnfrIum knrbonnf
dnn dIhIInngknn dongnn koIobIhnn nnfrIum
borohIdrnf.
KoIobIhnn borohIdrnf dIdokomosIsI dongnn
onnmbnhnn nsnm nsofnf gInsInI; bornf mungkIn
dIhIInngknn dongnn onnmbnhnn dnn ongunnn
mofnnoI.
Irosodur InI borfujunn unfuk mongurnngI nsnm
uronnf unfuk nsnm nIdonnf.
2. Persiapan dan kromatografi pada derivat
trimetilsilil(TMS)
Asam aldonat lebih baik diubah kedalam per-TMS eter
dari pada perasetat ester.
Trimetilsiliasi pada asam aldonat bebas, memberikan
derivat laktona (biasanya 1,4-laktona), sementara
trimetilsiliasi pada garam natrium menghasilkan ester.
eberapa prosedur dan reagen dihasilkan dari
eterifikasi.
Reaksi campuran dimasukkan secara langsung
kedalam kromatogram. Pemrograman temperatur
dibutuhkan.
Komponen diidentifikasi dengan waktu retensinya.
METODE ENZIMIK
Metode enzimik dipilih untuk penentuan zat pati (kanji)
adalah menggunakan suatu kombinasi enzim sebagai
akibat reaksi katalis-enzim dan khusus untuk zat pati,
selama persiapan enzim murni yang digunakan.
Limit deteksi oleh metode enzim yang terlibat atau
reaksi pasangan katalis-enzim pada umumnya rendah.
Disamping itu, metoda enzim biasanya sangat spesifik
untuk suatu karbohidrat spesifik.
Meskipun tidak sering digunakan, tetapi dapat
menentukan komponen single yang diinginkan,
terkecuali pada penentuan zat pati dan penentuan
kuantitatif pada Q-glucan dan inulin.
Metode kromatografi memberikan nilai untuk setiap
adanya gula yang berlebih.
Persiapan SampeI
Terkadang direkomendasikan dengan carrez
treatment yang menghentikan mulsi, mengendapkan
protein, dan mengabsorpsi beberapa warna, sebelum
diaplikasikan pada produk makanan untuk
menentukan karbohidrat dengan metode enzim.
Carres treatment melibatkan penambahan suatu
larutan pada kalium ferrosianida (K
4
), diikuti oleh
penambahan pada suatu larutan natrium hidroksida.
Suspensi disaring, dan filtrat yang dibersihkan
digunakan langsung dalam pengujian kadar logam
katalis enzim.
Penentuan enzimik pada D-gIukosa.
Enzim glukosa yaitu D-glukosa oksidase kuantitatif
untuk D-Glukono-1,5-laktona(glukono delta laktona),
produk lainnya adalah hidrogen peroksida.
Untuk menghitung jumlah D-glukosa yang ada,
peroksida ditambahkan terus menerus dengan suatu
senyawa tak berwarna yang dapat dioksidasi menjadi
suatu senyawa berwarna.
Dalam suatu reaksi katalis-enzim kedua pewarna
Leuco dioksidasi menjadi suatu senyawa berwarna
yang yang diukur dengan spektrofotometer.
Metode menggunakan kombinasi dua enzim dan
sebuah senyawa teroksidasi tak berwarna yang
diketahui sebagai metode GOPOD(Glukosa oksidase-
peroksida).
. SPEKTROSKOPI MASSA
Terdapat banyak perbedaan variasi pada
spektroskopi massa (MS).
Metode terbanyak digunakan pada karbohidrat untuk
analisis struktur; MS digunakan untuk analisis
karbihidrat, tetapi cara ini tidak biasa digunakan.
Tekhnik the matrix-assited laser desorption time-of
flight (MALDI-TOF) bermanfaat untuk analisis suatu
rangkaian homolog oligosakarida.
Sebagai suatu perbandingan analisis dilakukan
diantara HPLC pertukaran ion, elektroforesis kapiler
dan spektrometri massa MALDI-TOF untuk analisis
maltooligosakarida ini memberikan hasil terbaik.
Thin Layer romatografi(kromatografi Lapis Tipis)
Kromatografi lapis tipis digunakan untuk identifikasi
dan penjumlahan gula yang ada dalam sirup dari gula
gurdi(bit) dan pengolahan tebu.
EIektroforesis KapiIer
Elektroforesis zone kapiler juga mempunyai kegunaan
untuk memisahkan dan mengukur karbohidrat, tetapi
karena karbohidrat kekurangan kromofor, dibutuhkan
derivatisasi pre-kolom dan deteksi dengan suatu sinar
UV atau detektor fluoresensi.
SFKlAt 0At TFRlHA KASlH