File

UNIVERSITAS INDONESIA
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DIMER ISOEUGENOL

SECARA ORAL TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA
MENCIT (MUS MUSCULUS L.) JANTAN GALUR DDY
SKRIPSI
JILL WANDA HAMILTON

0806453226
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

DEPARTEMEN BIOLOGI
DEPOK
OKTOBER 2012
Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

UNIVERSITAS INDONESIA
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DIMER ISOEUGENOL

SECARA ORAL TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA
MENCIT (MUS MUSCULUS L.) JANTAN GALUR DDY
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains
JILL WANDA HAMILTON

0806453226
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

DEPARTEMEN BIOLOGI
DEPOK
OKTOBER 2012
i Universitas Indonesia

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS
Skripsi ini adalah hasil karya saya sendiri,
dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk
telah saya nyatakan dengan benar.
Nama : Jill Wanda Hamilton
NPM : 0806453226
Tanda Tangan :
Tanggal : 2 Oktober 2012
ii Universitas Indonesia

HALAMAN PENGESAHAN
Skripsi ini diajukan oleh :

NPM : 0806453226
Program Studi : S1 Biologi
Judul Skripsi : Pengaruh Pemberian Ekstrak Dimer Isoeugenol
Secara Oral Terhadap Kualitas Spermatozoa
Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur DDY
Telah berhasil dipertahankan di hadapan Dewan Penguji dan diterima

sebagai bagian persyaratan yang diperlukan ntuk memperoleh gelar Sarjana
Sains pada Program Studi S1 Reguler, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Indonesa
DEWAN PENGUJI
Pembimbing I : Dr. Dadang Kusmana, M.S (.................................)
Pembimbing II : Dra. Setiorini, M.Kes (.................................)
Penguji I : Dr. Abinawanto (.................................)
Penguji II : Nova Anita, M.Biomed (.................................)
Ditetapkan di : Depok
Tanggal : 2 Oktober 2012
iii Universitas Indonesia

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur saya panjatkan kepada Allah SWT yang selalu
memberikan ridho dan rahmatNya sehingga saya dapat menyelesaikan skripsi ini.
Penulisan skripsi dilakukan dalam rangka memebuhi salah satu syarat untuk
mencapai gelar Sarjana Sains di Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia. Saya menyadari segala kesulitan
dan hambatan selama penulisan skripsi tidak mudah dilewati tanpa adanya
bantuan, dukungan, dan bimbingan dari berbagai pihak. Oeh karena itu saya
mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dr. Dadang Kusmana, M.S. selaku pembimbing I serta Penasehat Akademik,
dan Dra. Setiorini, M.Kes. selaku pembimbing II atas bimbingan, saran,
fasilitas, nasihat, dan doa selama penelitian dan penulisan skripsi.
2. Dr. Abinawanto dan Nova Anita, M. Biomed selaku dosen penguji yang telah
memberikan saran dan masukan sehingga penelitian ini menjadi lebih baik.
3. Dr. Ir. Antonius Herry Cahyana yang telah memberikan banyak informasi
selama penelitian dan penulisan skripsi.
4. Dr.Luthfiralda Sjahfirdi, M.Biomed., Riani Widiarti, S.Si, M.Si., dan Dra.
Dian Hendrayanti, M.Sc., SU selaku ketua, sekretaris, dan koodinator
pendidikan Departemen Biologi FMIPA UI dan kepada seluruh staf pengajar
Departemen yang telah memberikan ilmu dan bimbingan selama saya
menimba ilmu di Departemen Biologi FMIPA UI.
5. Seluruh karyawan Departemen Biologi, terutama Ir. Rusmalina, Mbak Asri,
Mas Arif, serta Pak Surya dari Departemen Farmasi FMIPA UI atas segala
bantuan yang telah diberikan.
6. Terimakasih kepada Ibunda, dan kedua abang-ku (Bang Reno dan Bang
Michel) atas semua dukungan, semangat, kasih sayang , dan semua hal yang
tak terhitung serta tak dapat disebutkan.
7. Kepada teman seperjuangan satu tema penelitian: Ka Nova, atas semua waktu,
informasi, dan semangat, serta teman-teman kerja di Laboratorium
Perkembangan Hewan Departemen Biologi FMIPA UI: Dewi, Mitha, Latifah,
Pute, Kak Janu, Kak Bibil.
iv Universitas Indonesia

8. Kepada sahabat, kepada rekan-rekan biologi khususnya BIOSENTRIS,
keluarga besar Aikdo UI, Bionic Biologi serta kepada siapapun yang belum
tersebutkan atas semua semangat, doa, juga bantuan kepada penulis.
Akhir kata, saya berharap Tuhan Yang Maha Esa membalas semua
kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa
manfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan.
Depok, Oktober 2012
Penulis
v Universitas Indonesia

HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI
TUGAS AKHIR UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
Sebagai sivitas akademis Universitas Indonesia, saya yang bertanda tangan di

bawah ini:

NPM : 0806453226
Program Studi : S1
Departemen : Biologi
Fakultas : Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Jenis karya : Skripsi
Demi pengembangan ilmu pengetahuan menyetujui untuk memberikan kepada

Universita Indonesia Hak Bebas Royalti Noneksklusif (Non-exclusive Royalty
Free Right) atas karya ilmiah saya yang berjudul:
Pengaruh Pemberian Ekstrak Dimer Isoeugenol secara Oral terhadap Kualitas

Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur DDY
Beserta perangkat yang ada (jika diperlukan). Dengan Hak Bebas Royalti
Noneksklusif ini Universitas Indonesia berhak menyimpan,
mengalihmedia/formatkan, mengelila dalam bentuk pangkalan data (database),
selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis/pencipta dan sebagai
pemilik Hak Cipta
Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya.
Dibuat di : Depok
Pada tanggal : 2 Oktober 2012
Yang menyatakan
(Jill Wanda Hamilton)
vi Universitas Indonesia

ABSTRAK

Program Studi : Biologi S1
Judul : Pengaruh Pemberian Ekstrak Dimer Isoeugenol secara Oral
terhadap Kualitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan
Galur DDY
Penelitian bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak dimer

isoeugenol secara oral terhadap kualitas spermatozoa mencit jantan galur DDY.
Kelompok kontrol diberi minyak zaitun. Kelompok perlakuan diberi ekstrak
dimer isoeugenol dengan dosis 2,4 mg/kg bb; 4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg bb; dan
19,2 mg/kg bb. Masing-masing kelompok kontrol dan kelompok perlakuan terdiri
atas 5 ekor mencit. Bahan uji diberikan setiap hari selama 36 hari berturut-turut.
Hasil penelitian menunjukkan adanya penurunan motilitas spermatozoa dan
viabilitas spermatozoa pada dosis 4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg bb; da 19,2 mg/kg bb,
juga konsentrasi spermatozoa pada dosis 9,6 mg/kg bb dan 19,2 mg/kg bb.
Kenaikan abnormalitas ditemukan pada dosis 4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg bb; dan
19,2 mg/kg bb. Hasil tersebut menunjukkan bahwa pemberian ekstrak dimer
isoeugenol dapat menurunkan kualitas spermatozoa mencit jantan mulai dosis 4,8
mg/kg bb dan memiliki batas aman penggunaan sampai 2,4 mg/kg bb.
Kata kunci : dimer isoeugenol, kualitas spermatozoa, Mus musculus L.
xii + 55 hlm; 12 gambar; 4 lampiran; 4 tabel

Bibliografi: 54 (1965--2012)
vii Universitas Indonesia

ABSTRACT
Name : Jill Wanda Hamilton

Study Programme : S1 Biology
Title : Effect of Isoeugenol Dimer Extract administrated Orally
on the Quality of Spermatozoa of Male Mice (Mus
musculus L.) DDY strain
The research aims to determined the effect of isoeugenol dimer extract

administrated orally on the quality of spermatozoa of male mice DDY strain. The
control group was given olive oil. The treatment group were given isoeugenol
dimer with doses of 2.4 mg/kg bw; 4.8 mg/kg bw; 9.6 mg/kg bw; and 19.2 mg/kg
bw. Each control group and treatment group consisted of 5 mices. Test material
administrated daily for 14 consecutive days. The results showed that a decreased
in sperm motility and viability of spermatozoa at doses 4.8 mg/kg bw; 9.6 mg/kg
bw; and 19.2 mg/kg bw, as well as the concetration of spermatozoa at doses 9.6
mg/kg bw and 19.2 mg/kg bw. The increased in spermatozoa abnormality were
found at doses 4.8 mg/kg bw; 9.6 mg/kg bw; and 19.2 mg/kg bw. The result
indicated that administration of extract dimer isoeugenol can reduce the quality of
spermatozoa from male mice stated from doses 4.8 mg/kg bw and had usage
threshold up to 2.4 mg/kg bw.
Key words : isoeugenol dimer, quality of spermatozoa, Mus musculus L.
4 appendices; xii + 55 pages; 12 pictures; 4 tables

Bibliography: 54 (1965--2012)
viii Universitas Indonesia

DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL........................................................................................ i
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ............................................. ii
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. iii
KATA PENGANTAR ..................................................................................... iv
LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ........................ vi
ABSTRAK ....................................................................................................... vii
DAFTAR ISI .................................................................................................... ix
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xi
DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xii
1. PENDAHULUAN.................................................................................... 1
2. TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................... 4

2.1 Isoeugenol dan Dimer Isoeugenol ............................................................. 4
2.2 Mencit (Mus musculus L.)......................................................................... 6
2.3 Sistem Reproduksi Jantan ......................................................................... 7
2.3.1 Testis .............................................................................................. 8
2.3.2 Sistem Duktus ................................................................................ 9
2.3.3 Kelenjar Aksesoris ......................................................................... 10
2.3.4 Penis ............................................................................................... 11
2.4 Spermatogenesis ........................................................................................ 11
2.5 Spermatozoa dan Proses Pematangan di Epididimis ................................ 13
2.5.1 Spermatozoa ................................................................................... 13
2.5.2 Proses Pematangan di Epididimis .................................................. 14
2.6 Analisis Semen .......................................................................................... 15
2.6.1 Motilitas Spermatozoa ................................................................... 15
2.6.2 Viabilitas Spermatozoa .................................................................. 16
2.6.3 Konsentrasi Spermatozoa ............................................................... 16
2.6.4 Morfologi Spermatozoa ................................................................. 16
2.7 Biosintesis Hormon Testosteron ............................................................... 17
3. METODOLOGI PENELITIAN ............................................................ 18

3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian .................................................................... 18
3.2 Bahan ........................................................................................................ 18
3.2.1 Sawi Hijau (Brassica juncea L.) .................................................... 18
3.2.2 Isoeugenol ...................................................................................... 18
3.2.3 Hewan Uji ...................................................................................... 18
3.2.4 Makanan dan Minuman Hewan Uji ............................................... 19
3.2.5 Bahan kimia ................................................................................... 19
3.3 Alat ............................................................................................................ 19
3.4 Cara Kerja ................................................................................................. 20
3.4.1 Rancangan Penelitian ..................................................................... 20
ix Universitas Indonesia

3.4.2 Pemeliharaan Hewan Uji................................................................ 20
3.4.3 Pembuatan Dimer Isoeugenol ........................................................ 21
3.4.4 Pembuatan Larutan......................................................................... 22
3.4.5 Perlakuan Terhadap Mencit ........................................................... 22
3.4.6 Pengambilan Data .......................................................................... 23
3.4.7 Pengolahan dan Analisis Data........................................................ 24
4. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 26

4.1 Hasil .......................................................................................................... 26
4.1.1 Persentase Motilitas Spermatozoa.................................................. 26
4.1.2 Persentase Viabilitas Spermatozoa ................................................ 28
4.1.3 Konsentrasi Spermatozoa ............................................................... 30
4.1.4 Persentase Abnormalitas Spermatozoa .......................................... 32
4.2 Pembahasan ............................................................................................... 34
5. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 39

5.1 Kesimpulan ............................................................................................... 39
5.2 Saran.......................................................................................................... 39
DAFTAR REFERENSI ................................................................................. 40
x Universitas Indonesia

DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1(1) Struktur Isoeugenol ................................................................. 5

Gambar 2.1(2) Struktur Dimer Isoeugenol ...................................................... 5
Gambar 2.2 Mencit (Mus musculus L.)........................................................ 7
Gambar 2.3 Sistem Reproduksi Mencit Jantan ............................................ 8
Gambar 2.4 Spermatogenesis ....................................................................... 13
Gambar 2.5.1 Spermatozoa Mencit ................................................................. 14
Gambar 4.1.1 Diagram Batang Rerata Persentase Motilitas Spermatozoa
Mencit ...................................................................................... 27
Gambar 4.1.2 Diagram Batang Rerata Persentase Viabilitas Spermatozoa
Mencit ...................................................................................... 29
Gambar 4.1.3 Diagram Batang Rerata Konsentrasi (Juta per ml Ejakulat)
Spermatozoa Mencit................................................................ 31
Gambar 4.1.4 Diagram Batang Rerata Persentase Abnormalitas
Spermatozoa Mencit................................................................. 33
Gambar 4.2 Hasil Pengamatan Spermatozoa Abnormal .............................. 36
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1.1 Data Rerata Persentase Motilitas Spermatozoa Mencit

Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan ........................... 26
Tabel 4.1.2 Data Rerata Persentase Viabilitas Spermatozoa Mencit
Tabel 4.1.3 Data Rerata Konsentrasi Spermatozoa Mencit Kelompok
Kontrol dan Kelompok Perlakuan (Juta per ml Ejakulat) ......... 30
Tabel 4.1.4 Data Rerata Persentase Abnormalitas Spermatozoa Mencit
xi Universitas Indonesia

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Persentase

Motilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur
DDY ............................................................................................ 45
Lampiran 2 Uji Homogenitas Levene terhadap Data Persentase Motilitas
Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur DDY ..... 46
Lampiran 3 Uji Analisis Variansi (Anava) 1-faktor terhadap Data
Persentase Motilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.)
Jantan Galur DDY ...................................................................... 47
Lampiran 4 Uji Perbandingan Berganda LSD terhadap Data Persentase
Motilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur
DDY ............................................................................................ 48
Viabilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur
DDY ............................................................................................ 50
Lampiran 6 Uji Homogenitas Levene terhadap Data Persentase Viabilitas
Persentase Viabilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.)
Jantan Galur DDY ...................................................................... 52
Viabilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur
DDY ............................................................................................ 53
Lampiran 9 Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Konsentrasi
Lampiran 10 Uji Homogenitas Levene terhadap Data Konsentrasi
Konsentrasi Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan
Galur DDY .................................................................................. 57
Lampiran 12 Uji Perbandingan Berganda LSD terhadap Data Konsentrasi
Abnormalitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Jantan
Galur DDY .................................................................................. 60
Lampiran 14 Uji Homogenitas Levene terhadap Data Persentase
Galur DDY .................................................................................. 61
Persentase Abnormalitas Spermatozoa Mencit
(Mus musculus L.) Jantan Galur DDY........................................ 62
Galur DDY .................................................................................. 63
xii Universitas Indonesia

1
BAB 1
PENDAHULUAN
Tanaman obat sudah lama dikenal mengandung komponen fitokimia yang

berperan penting untuk pencegahan dan pengobatan berbagai penyakit (Rukamana
2004: 10). Hal tersebut menyebabkan peningkatan kebutuhan terhadap tanaman
obat, sejalan dengan munculnya kecenderungan untuk kembali ke alam.
Tanaman obat juga diketahui memiliki efek samping lebih rendah dibandingkan
obat sintesis (Muhlisah 2007: 4--6). Salah satu senyawa kimia yang terkandung
dalam tanaman obat dan banyak digunakan adalah isoeugenol.
Isoeugenol merupakan senyawa turunan fenilpropanoida yang terkandung
dalam minyak cengkeh, kayu manis, atau biji pala. Senyawa tersebut biasa
digunakan sebagai bahan dasar produk perawatan kulit, deodoran, sabun, sampo,
perisa makanan, dan pewangi pada parfum (Atsumi dkk.2005: 1025; Salanti dkk.
2010: 913). Selain sebagai bahan dasar produk, senyawa tersebut diketahui
memiliki aktivitas antioksidan yang berguna antara lain sebagai antiinflamasi,
antiseptik lokal, dan analgesik (George dkk. 2001: 112; Atsumi dkk. 2005: 1025).
Selain manfaat-manfaat yang telah disebutkan, isoeugenol dapat memberikan
dampak negatif bagi manusia maupun hewan uji (Fujisawa dkk. 2004: 563).
Dampak negatif yang ditimbulkan oleh isoeugenol antara lain keracunan
akut, alergi pada kulit, dan penurunan berat badan yang ditimbulkan karena
adanya iritasi pada organ pencernaan. Selain itu, senyawa tersebut memiliki
aktivitas prooksidan yang dapat menyebabkan kerusakan jaringan dengan
menghasilkan radikal fenoksil (Murakami dkk. 2005: 326--327; Atsumi dkk.
2005: 1026). Leonardo dkk. pada tahun 2008 menyatakan bahwa senyawa
tersebut dapat menyebabkan terjadinya kematian sel-sel spermatozoa (lihat
MMWD-VMP 2008: 8). Penelitian tersebut dilakukan secara in vitro terhadap
spermatozoa pada enam pria dari pasangan infertil. Berdasarkan kenyataan bahwa
isoeugenol memiliki dampak negatif, maka para peneliti membuat senyawa dimer
isoeugenol dengan tujuan mempertahankan aktivitas antioksidan namun dapat
menekan dampak negatifnya (Murakami dkk. 2005: 326--327).
1 Universitas Indonesia

2
Yuda (2007: 46--49) dengan menggunakan bantuan enzim peroksidase

yang berasal dari sawi hijau (Brassica juncea L.), telah berhasil membuat
senyawa dimer isoeugenol melalui reaksi kopling. Senyawa tersebut kemudian
diukur kadar antioksidan dengan menggunakan metode 2,2 diphenyl-2
picrylhydrazil (DPPH) dan tingkat toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethaly
Toxicity (BSLT). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar antioksidan yang
terdapat pada dimer isoeugenol lebih tinggi dan kadar toksisitas yang lebih rendah
dibandingkan isoeugenol. Hasil penelitian tersebut didukung dengan hasil
penelitian Bortolomeazzi dkk. (2010: 262--264) yang menyatakan bahwa kadar
antioksidan yang terkandung dalam dimer isoeugenol lebih tinggi dibandingkan
isoeugenol.
Berdasarkan penelitian Yuda (2007: 46--49) dapat diketahui bahwa dimer
isoeugenol memiliki kadar antioksidan yang lebih tinggi dan kadar toksisitas yang
lebih rendah dibandingkan isoeugenol. Namun, penelitian mengenai efek
sitotoksik dari dimer isoeugenol perlu dilakukan lebih lanjut. Berdasarkan
kenyataan bahwa isoeugenol dapat menyebabkan kematian sel spermatozoa in
vitro (lihat MMWD-VMP 2008: 8), maka perlu diketahui apakah dimer
isoeugenol dapat memengaruhi kualitas spermatozoa.
Pra penelitian telah dilakukan dengan pemberian dosis yang diacu dari
dosis gosipol yang juga memiliki struktur dimer pada penelitian Danke dkk.
(1965: 2) sebesar 4,5 mg/kg bb; 9,0 mg/kg bb; dan 18,0 mg/kg bb. Dosis tersebut
diuji pada domba dan kemudian dikonversikan ke mencit menjadi 1,2 mg/kg bb;
2,4 mg/kg bb; 4,8 mg/kg bb; dan 9,6 mg/kg dosis yang digunakan pada pra
penelitian adalah 1,2 mg/kg bb; 2,4 mg/kg bb; 4,8 mg/kg bb; dan 9,6 mg/kg.
Hasil pra penelitian menunjukkan adanya kecenderungan penurunan kualitas
spermatozoa pada pemberian dosis 2,4 mg/kg bb; 4,8 mg/kg bb; dan 9,6 mg/kg
bb. Namun, hasil penelitian tersebut belum memuaskan sehingga pada penelitian
dosis yang digunakan menjadi 2,4 mg/kg bb; 4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg; dan 19,6
mg/kg bb. Dosis diberikan selama 36 hari disesuaikan dengan lamanya proses
spermatogenesis mencit dan dikorbankan pada hari ke-37 dengan cara dislokasi
cevicalis vertebrae (Rugh 1968: 21--22).
Universitas Indonesia

3
Penelitian dilakukan bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian

senyawa dimer isoeugenol secara oral terhadap kualitas spermatozoa mencit (Mus
musculus L.) jantan galur DDY. Pengamatan kualitas spermatozoa dilakukan
terhadap parameter motilitas, viabilitas, konsentrasi, dan abnormalitas
spermatozoa. Hipotesis penelitian adalah pemberian senyawa dimer isoeugenol
pada dosis 2,4 mg/kg bb; 4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg bb; dan 19,2 mg/kg bb secara
oral selama 36 hari akan memengaruhi kualitas spermatozoa mencit jantan (Mus
musculus L.) galur DDY.

4
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Isoeugenol dan Dimer Isoeugenol
Isoeugenol atau 2-metoksi-4-(1-propenil) fenol merupakan cairan

berwarna kuning pucat kental dan beraroma clove pink. Isoeugenol terdapat pada
minyak cengkeh,biji pala, dan kayu manis yang merupakan isomer dari eugenol
(Salanti dkk. 2010: 913). Isoeugenol pada tanaman, berasal dari senyawa turunan
fenilpropanoida yang digunakan sebagai pertahanan terhadap serangan hewan dan
mikroorganisme serta sebagai penarik serangga saat penyerbukan bunga. Selain
diperoleh secara alami, isoeugenol juga dapat diperoleh melalui jalur sintesis. Di
industri, sintesis isoeugenol dilakukan melalui reaksi isomerisasi eugenol dengan
menggunakan basa kuat, seperti KOH atau NaOH (George dkk. 2001: 112; Salanti
dkk. 2010: 913).
Isoeugenol memiliki bau yang khas, sehingga banyak digunakan sebagai
pewangi pada parfum, sabun, sampo, pewangi ruangan, deodoran, kosmetik, dan
aroma. Selain sebagai bahan dasar produk, isoeugenol juga digunakan di bidang
kedokteran dan sebagai antioksidan (George dkk. 2001: 112; Atsumi dkk. 2005:
1025). Selain itu, senyawa tersebut memiliki aktivitas prooksidan yang dapat
menyebabkan kerusakan pada jaringan (Murakami dkk. 2005: 326--327; Atsumi
dkk. 2005: 1026).
Struktur (Gambar 2.1(1)), sifat kimia, dan sifat fisika dari isoeugenol
sebagai berikut:
Nama tivial : Isoeugenol
Nama IUPAC : 2-metoksi-4-(1-propenil)fenol
Nama lain : fenol; 2-metoksi-4-(propenil)-(9CI); 4-hidroksi-3-metoksi-1-
propenilnezene; 4-(1-propenil)guaiacol
Rumus molekul: C10H12O2
Bentuk fisik : Cairan kental berwarna kuning pucat
Berat molekul : 164,21 g/mol
Berat jenis : 1,080 g/L pada suhu 25O C

5
Titik leleh : -10 O C

Titik didih : 266 O C
Kelarutan : Larut dalam eter dan etanol, sedikit larut dalam air
(NTP 2010: 17)
Gambar 2.1(1) Struktur Isoeugenol

[Sumber: Salanti dkk. 2010: 915]
Gambar 2.1(2) Struktur Dimer Isoeugenol

[Sumber: Yuda 2007: 56.]
Dimer isoeugenol (Gambar 2.1(2)) merupakan senyawa hasil dimerisasi

senyawa isoeugenol. Senyawa tersebut dibuat melalui reaksi kopling dengan
menggunakan bantuan enzim peroksidase yang didapat dari tanaman sawi hijau
(Brassica juncea L.). Dimer isoeugenol diketahui memiliki kadar antioksidan

6
yang lebih tinggi dan kadar toksistas yang lebih rendah dibandingkan isoeugenol
(Yuda 2007: 46--49).
2.2 Mencit (Mus musculus L.)
Mencit merupakan salah satu dari banyak hewan uji coba yang sering
digunakan. Mencit biasa digunakan sebagai model untuk melakukan sejumlah
analisis penting, seperti penyakit kardiovaskular, penyakit autoimmune, kesalahan
metabolisme, kanker, penyakit ginjal, dan penyakit saraf. Mencit digunakan
sebagai model dari hewan uji coba dikarenakan ukurannya yang kecil, cepat
berkembang biak, masa kehamilan singkat, mudah dipelihara dalam jumlah
banyak, ukuran tubuh relatif kecil dibandingkan jenis hewan percobaan lain, ciri
anatomi dan fisiologi yang mudah dikenali, serta harganya yang relatif murah
(Malole & Pramono 1989: 94--96; Hedrich dkk. 2006: 8). Selain itu dikarenakan,
mencit memiliki variasi genetik yang cukup besar dan struktur organ reproduksi
jantan yang hampir sama dengan manusia. Hormon yang berperan dalam sistem
reproduksi Mencit, juga sama dengan manusia (Smith & Mangkoewidjojo 1988:
10--11).
Mencit tergolong dalam ordo rodentia. Mencit (Gambar 2.4) merupakan
mamalia dengan ekor panjang melebihi tubuh. Ukuran panjang ekor pada betina
lebih panjang dibandingkan pada jantan. Mencit dewasa jantan umumnya
memiliki berat badan 20--40 g, sedangkan mencit dewasa betina 25--40 g (Malole
& Pramono 1989: 94; Hedrich dkk. 2006: 71). Kematangan seksual mencit jantan
terjadi pada usia sekitar 5--7 minggu dan usia sekitar 3 minggu pada mencit
betina. Pubertas mencit jantan ditandai dengan turunnya testis ke dalam skrotum
pada usia sekitar 40 hari, sebagai tanda dimulainya spermatogeneis (Malole &
Pramono 1989: 94--99).
Klasifikasi dari mencit, yaitu:
Kingdom : Animalia
Phylum : Chordata
Sub phylum : Vertebrata
Class : Mammalia

7
Sub class : Theria

Ordo : Rodentia
Sub ordo : Myomorpha
Family : Muridae
Sub family : Murinae
Genus : Mus
Species : Mus musculus L.
(Hedrich dkk. 2006: 71).
1 cm
Gambar 2.2 Mencit (Mus musculus L.)

[Sumber: Dokumentasi pribadi.]
2.3 Sistem Reproduksi Jantan
Sistem reproduksi mencit jantan (Gambar 2.5) terdiri atas testis,

epididimis, sistem duktus, kelenjar aksesoris, dan penis (Rugh 1968: 7--24;
Junquiera & Carneiro 1980: 444)

8
Gambar 2.3 Sistem reproduksi mencit jantan

[Sumber: Rugh 1968: 8.]
2.3.1 Testis
Testis merupakan kelenjar ganda dan berbentuk oval yang terletak pada
bagian posterior rongga tubuh, di dalam skrotum dan dilindungi oleh pembungkus
testis. Skrotum berfungsi untuk memberikan kepada testis suatu lingkungan yang
memiliki suhu lebih dingin (13,3--17,2 C) dibandingkan suhu rongga tubuh
(Nalbandov 1990: 42--45; Leeson dkk. 1991: 511). Testis disebut sebagai
kelenjar ganda karena secara fungsional bersifat endokrin dan eksokrin. Testis
bersifat endokrin karena menghasilkan hormon androgen dan bersifat eksokrin
karena menghasilkan spermatozoa (Junquiera & Carneiro 1980: 444; Nalbandov
1990: 42--45; Moeloek 1994: 12; Lesson dkk. 1996: 511).
Pembungkus testis terdiri atas tiga lapisan, yaitu tunika vaginalis (lapisan
terluar), tunika albuginea (lapisan tengah), dan tunika vaskulosa (lapisan dalam).
Tunika vaginalis merupakan lapisan serosa yang berasal dari peritoneum dan
membungkus permukaan lateral dan anterior testis. Tunika albuginea merupakan
kapsula fibrosa tebal dan mengalami penebalan pada permukaan posterior testis
membentuk mediastinum testis. Tunika vaskulosa tersusun atas jaringan ikat
longgar dan pembuluh darah (Junquiera & Carneiro 1980: 444--445; Leeson dkk.
1991: 511).
Mediastinum testis akan membentuk sekat yang membagi testis menjadi
ruangan-ruangan yang disebut lobulus testis yang terdiri sekitar 250 lobulus.

9
Setiap lobulus testis terdiri atas 1--4 tubulus seminiferus yang dibungkus oleh
jaringan ikat longgar yang banyak mengandung pembuluh darah, limfe, saraf, dan
sel Leydig. Tubulus seminiferus merupakan saluran berkelok dengan diameter
lebih kurang 150--250 m dan panjang 30--70 cm. Tubulus seminiferus
merupakan tempat berlangsungnya spermatogenesis karena dapat memproduksi
sel-sel germinal yang fungsional pada bagian lamina basalis. Epitel pada tubulus
seminiferus terdiri atas sel Sertoli dan sel spermatogenik. Sel spermatogenik akan
berdiferensiasi menjadi spermatozoa dan sel sertoli berfungsi sebagai pemberi
nutrisi bagi perkembangan spermatozoa dan mensekresikan androgen binding
protein (ABP). Sel sertoli umumnya melekat pada membran basal. Sel sertoli
memiliki tonjolan sitoplasma yang berfungsi melindungi sel spermatogenik dari
pengaruh imunologi yang merugikan (Junquiera & Carneiro 1980: 444--445; Ross
dkk. 1995: 638). Sel Leydig terdapat di antara tubulus seminiferus yang berfungsi
sebagai penghasil hormon androgen (testosteron), yaitu hormon yang berperan
dalam spermatogenesis (Yatim 1988: 32).
2.3.2 Sistem Duktus
Sistem duktus pada Mencit terdiri atas rete testis, duktus eferen,
epididimis, dan duktus deferen. Setiap struktur organ tersebut berjumlah
sepasang. Rete tesis adalah duktus yang menghubungkan antara tubulus
seminiferus dan duktus efferen. Duktus efferen membentuk tiga hingga tujuh
saluran menuju epididimis. Duktus tersebut dan bagian awal epididimis
membentuk kaput epididimis (Rugh 1968: 22).
Epididimis berkembang dari duktus mesonefrik (Moeloek 1994: 12).
Epididimis berfungsi mengangkut spermatozoa dari duktus efferen ke duktus
deferen, tempat pematangan sperma, dan tempat penyimpanan sperma.
Epididimis terdiri dari tiga bagian yaitu kepala (kaput), badan (korpus), dan ekor
(kauda). Bagian kepala dan badan memiliki fungsi sebagai tempat pematangan
sperma, sedangkan bagian ekor memiliki fungsi sebagai tempat penyimpanan
sperma (Rugh 1968: 22; Yatim 1988: 40; Moeloek 1994: 12).

10
Epididimis menyalurkan spermatozoa dan cairan dari testis ke duktus

deferen. Duktus deferen berkembang dari evaginasi duktus mesonefrik (Moeloek
1994: 12). Duktus deferen merupakan saluran yang berfungsi untuk mengangkut
spermatozoa dari kauda epididimis ke uretra. Duktus tersebut memiliki dinding
yang tersusun dari otot polos dan berperan penting dalam mekanisasi
pengangkutan semen sewaktu ejakulasi (Rugh 1968:22; Moeloek 1994: 13).
2.3.3 Kelenjar Aksesoris
Kelenjar aksesori mencit terdiri dari sepasang kelenjar vesika seminalis,

tiga pasang kelenjar prostat, sepasang kelenjar bulbouretra (Cowper), sepasang
kelenjar ampula, dan sepasang kelenjar preputial (Rugh 1968: 22--23). Kelenjar-
kelenjar tersebut berfungsi membuat cairan semen yang dapat memungkinkan
sperma aktif dan hidup dalam waktu tertentu. Kelenjar-kelenjar aksesori pada
berbagai spesies sangat bervariasi dalam ukuran dan bentuk anatominya
(Nalbadov 1990: 52; Moeloek 1994: 13).
Kelenjar vesika seminalis pada mencit berjumlah sepasang yang masing-
masing terletak di atas kelenjar prostat, berbentuk seperti kurva, dan diselimuti
oleh otot polos serta jaringan ikat (Rugh 1968: 22--23; Guyton & Hall 1997:
1265). Vesika seminalis menyekresikan cairan kental berwarna kekuningan, yang
merupakan substrat metabolisme bagi spermatozoa. Cairan tersebut mengandung
fruktosa yang merupakan substrat metabolisme bagi spermatozoa bersama
senyawa lainnya seperti glukosa, asam amino, asam askorbat, dan prostaglandin
(Junquiera & Carneiro 1980: 459; Ross dkk. 1995: 662).
Kelenjar prostat pada mencit terdiri dari sepasang kelenjar prostat yang
terletak tepat di bawah kelenjar vesika seminalis, sepasang kelenjar prostat
ventral, dan sepasang kelenjar prostat dorsal. Sepasang kelenjar prostat ventral
dari uretra, sedangkan sepasang kelenjar prostat dorsal mengelilingi bagian dorsal
uretra (Rugh 1968: 23). Kelenjar prostat mengekskresikan cairan yang
mengandung asam fosfat dan asam sitrat. Sekresi kelenjar prostat pada manusia
yaitu 15--30% dari volume ejakulat total (Nalbandov 1990: 52--53).

11
Kelenjar bulbouretra mencit terletak di bawah kulit bagian atas penis.

Kelenjar tersebut memiliki ukuran lebih besar dibandingkan dengan kelenjar
prostat (Rugh 1968: 23). Kelenjar bulbouretra merupakan kelenjar tubuloalveolar
yang dilapisi epitel kubus selapis penyekresi lendir mukosa (Junquiera & Carneiro
1980: 459). Sekresi kelenjar bulbouretra pada manusia yaitu 10--25% dari
volume ejakulat total (Nalbandov 1990: 53).
2.3.4 Penis
Alat kelamin luar atau organ kopulasi mencit adalah penis yang terdiri atas
korpus kavernosum, korpora kavernosa, dan kepala penis (gland penis). Penis
berfungsi sebagai alat pengeluaran urin dan perletakkan semen ke dalam saluran
reproduksi betina. (Rugh 1968: 23;Moeloek 1994: 13). Korpus kavernosum
diselubungi oleh suatu selaput fibrosa tebal berwarna putih disebut tunika
albuginea. Sepasang korpora kavernosa membentuk badan penis. Korpora
kavernosa juga diselubungi oleh tunika albuginea. Kepala penis adalah bagian
ujung dari penis yang ditutupi oleh preputium (Rugh 1968: 23).
2.4 Spermatogenesis
Spermatogenesis merupakan suatu rangkaian perkembangan sel

spermatogonia di dalam tubulus seminiferus yang berproliferasi dan selanjutnya
berkembang menjadi spermatozoa yang bebas (Moeloek 1994: 13).
Spermatogenesis pada mencit berlangsung selama empat siklus dan satu siklus
membutuhkan waktu lebih kurang 2076 jam atau 8,63 0,25 hari, sehingga
keseluruhan proses spermatogenesis membuthkan waktu kurang lebih 35,5 hari
(Rugh 1968: 21--22). Spermatogenesis dibagi menjadi tiga tahap yaitu
spermasitogenesis, meiosis, dan spermiogenesis (Junquiera & Carneiro 1980:
445).
Spermatogenesis pada mencit pada dasarnya sama seperti pada mamalia
lainnya (Rugh 1968: 21; Gambar 2.6). Spermasitogenesis disebut juga tahap
proliferasi yaitu pembelahan mitosis dari spermatogonia A menjadi

12
spermatogonia B. Pada tahap awal spermatogenesis, spermatogonia A bermitosis

sebanyak dua kali membentuk empat spermatogonia A. Satu spermatogonia A
diantaranya akan menjadi sel benih induk sedangkan tiga spermatogonia A
lainnya akan bermitosis membentuk enam spermatogonia intermediate yang
kemudian bermitosis membentuk dua belas spermatogonia B. Masing-masing
spermatogonia B akan bermitosis membentuk spermatosit primer (Burger dkk.
1976: 5--7; Moeloek 1994: 13--14; Guyton & Hall 1997: 1265--1266).
Spermatosit primer akan mengalami pembelahan meiosis I dan
membentuk spermatosit sekunder. Perkembangan spermatosit primer diawali dari
pembentukkan stadium leptoten, zigoten, pakiten, diploten dan diakhiri dengan
stadium diakinesis. Semakin maju tingkat perkembangan spermatosit primer
maka letaknya akan semakin ke arah lumen tubulus seminiferus (Moeloek 1994:
14). Spermatosit primer mengalami pembelahan meiosis I membentuk
spermatosit sekunder. Spermatosit sekunder akan mengalami meiosis II
membentuk spermatid. Meiosis II dan meiosis I memiliki fase yang sama, tetapi
meiosis II tidak terjadi reduksi jumlah kromosom menjadi haploid (Moeloek
1994: 14; Johnson & Everitt 2000: 55--57).
Spermiogenesis merupakan tahap perubahan bentuk dan komposisi
spermatid dari bulat menjadi bentuk seperti berudu yang memiliki kepala, leher,
dan ekor. Berdasarkan perubahan akrosom dan nukleus, mencit memiliki enam
belas tahap spermiogensis, Seluruh tahapan tersebut terbagi menjadi empat fase
yaitu fase golgi (tahap 1--3), fase tudung (tahap 4--7), fase akrosom (tahap 8--12),
dan fase pematangan (tahap 13--16) (Rugh 1968: 18). Tahap spermiogenesis
yang telah selesai dilanjutkan dengan tahap spermiasi yaitu proses dilepaskannya
spermatozoa ke lumen tubulus seminiferus (Yatim 1988: 50).

13
Gambar 2.4 Spermatogenesis

[Sumber: Campbell dkk. 2004: 161, diterjemahkan sesuai aslinya.]
2.5 Spermatozoa dan Proses Pematangan di Epididimis
2.5.1 Spermatozoa
Spermatozoa tediri atas bagian kepala, leher, dan ekor (Gambar 2.7.1).
Secara keseluruhan panjang spermatozoa mencit adalah 1,226 m dengan bagian
kepala berbentuk kait (Rugh 1968: 21). Bagian kepala spermatozoa terdiri dari
inti (nukleus) dan akrosom. Inti pada bagian kepala spermatozoa berisi materi
genetik (DNA) berupa kromatin padat yang terkondensasi selama tahap
spermiogenesis (lihat Ramadhani 2007: 14 & 15).

14
Gambar 2.5.1 Spermatozoa mencit

[Sumber: Kwitny, dkk. 2010: 670, diterjemahkan sesuai aslinya.]
Akrosom merupakan selubung tebal yang terdapat pada dua pertiga bagian
anterior kepala spermatozoa. Akrosom mengandung enzim-enzim yang penting
untuk fertilisasi. Enzim tersebut adalah enzim hialuronidase, corona penetrating
enzyme (CPE), dan akrosin. Enzim hialuronidase berfungsi untuk menembus
kumulus oophorus (lapisan terluar ovum), CPE berfungsi untuk menembus korona
radiata (lapisan tengah ovum), dan akrosin berfungsi untuk menembus zona
pelusida (lapisan dalam ovum) (Moeloek 1994: 18; Guyton & Hall 1997: 1266).
2.5.2 Proses Pematangan di Epididimis
Epididimis merupakan tempat pematangan spermatozoa yang meliputi

perubahan spermatozoa secara morfologi, fisiologi, biokima, dan metabolisme
(Hafez & Prasad 1976: 31). Perubahan morfologi anatara lain proses hilangnya
cytoplasmic droplet pada spermatozoa. Perubahan fisiologis antara lain
pematangan kemampuan spermatozoa dalam memfertilisasi telur yang ditandai
dengan perubahan bentuk permukaan akrosom, kualitas struktural kromatin inti,
dan kapasitas motilitas progresif. Perubahan biokimia yaitu sel prinsipal
epididimis menyekresikan komponen (lipid dan fosfolipid) yang diperlukan untuk
proses pematangan spermatozoa (Hafez & Prasad 1976: 31, 33, & 35; Guyton &
Hall 1997: 1268).

15
2.6 Analisis Semen
Semen merupakan campuran spermatozoa dan seluruh produk dari sistem

kelenjar aksesori. Semen terdiri atas cairan dan spermatozoa yang berasal dari vas
deferen (sekitar 10% dari keseluruhan semen), cairan dari vesika seminalis
(sekitar 60%), cairan dari kelenjar prostat (Sekitar 30%), dan sejumlah kecil
cairan dari kelenjar mukosa terutama kelenjar bulbouretra (Kimball 1991: 375;
Ross dkk. 1995: 664; Guyton & Hall 1997: 1269). Semen mempunyai dua fungsi
utama, yaitu sebagai medium pelarut dan sebagai pengaktif bagi spermatozoa
yang mula-mula tidak dapat bergerak (Nalbandov 1990: 53 & 262).
Analisis semen merupakan langkah awal dalam mengevaluasi infertilitas
laki-laki (Freund & Peterson 1976: 334). World Health Organization (WHO)
telah menetapkan bahwa analisis semen digunakan sebagai standar pemeriksaan
kualitas semen seorang laki-laki (lihat Ramadhani 2007: 22). Menurut
Purwaningsih (1997:78), analisis semen tidak hanya digunakan untuk mengetahui
kualitas semen seorang laki-laki, tetapi juga digunakan untuk mengetahui kualitas
semen setelah dibekukan (cryopreservation), kualitas semen untuk fertilitas in
vitro, inseminasi buatan, dan kualitas semen setelah vasektomi.
Pemeriksaan kualitas semen dilakukan dengan dua macam pemeriksaan,
yaitu pemeriksaan makroskopis dan pemeriksaan mikroskopis. Pemeriksaan
makroskopis meliputi pengamatan waktu likuifaksi (semen menjadi lebih cair
setelah beberapa saat diejakulasikan), pemeriksaan warna, pengukuran pH,
pengukuran volume, pengamatan viskositas (kekentalan), dan aglutinasi spontan.
Pemeriksaan mikroskopis meliputi penghitungan konsentrasi spermatozoa,
persentase abnormalitas, persentase motilitas, dan viabilitas (WHO 1988: 5--14).
2.6.1 Motilitas Spermatozoa
Motilitas spermatozoa adalah kualitas gerak spermatozoa yang meliputi

tipe pergerakan spermatozoa dan kecepatan gerak spermatozoa. Tipe pergerakan
spermatozoa yang baik adalah yang bergerak lurus ke depan. Spermatozoa yang
bergerak berkelok-kelok atau berputar menandakan adanya kelainan struktur

16
spermatozoa (Hartamto 1985: 165). Penilaian motilitas dilakukan dengan

menghitung spermatozoa yang termasuk kategori motil yaitu jika spermatozoa
bergerak cepat lurus ke depan, bergerak lambat atau tidak lurus dan bergerak di
tempat (WHO 1988: 7 & 32).
2.6.2 Viabilitas Spermatozoa
Viabilitas spermatozoa merupakan proporsi spermatozoa hidup dalam

semen. Uji viabilitas dilakukan dengan pewarnaan supravital yaitu sel mati
memiliki membran sel yang rusak sehingga dapat dimasuki zat warna. Pewarnaan
supravital terdiri dari dua cara yaitu pewarnaan pada sediaan basah dengan
menggunakan larutan Eosin dan pewarnaan pada sediaan kering dengan
menggunakan larutan kombinasi nigrosin Eosin. Banyaknya spermatozoa hidup
tetapi tidak motil dapat menunjukkan adanya kelainan struktur pada flagel (WHO
1988: 10).
2.6.3 Konsentrasi Spermatozoa
Konsentrasi spermatozoa dalam semen harus cukup agar proses fertilisasi

dapat terjadi. Hal tersebut dikarenakan spermatozoa merupakan komponen di
dalam semen yang menentukan terjadinya kehamilan. Jumlah normal
spermatozoa pada mencit yaitu sebesar 50 juta per ml (lihat Ramadhani 2007:
25 & 26).
2.6.4 Morfologi Spermatozoa
Morfologi spermatozoa secara umum terdiri atas kepala yang berisi inti,
leher yang menghubungkan antara bagian kepala dan ekor, serta ekor yang
berperan dalam pergerakan spermatozoa. Penyimpangan morfologi dari
spermatozoa normal dianggap sebagai abnormalitas. Abnormalitas dibedakan
menjadi dua yaitu abnormalitas primer dan sekunder. Abnormalitas primer terjadi
pada proses spermatogenesis antara lain spermatozoa yang memiliki kepala yang

17
kecil atau lebih besar dari ukuran normal, kepala rangkap, ekor rangkap, dan ekor
menggulung. Abnormalitas sekunder terjadi pada proses pematangan di
epididimis. Penampakkan abnormalitas sekunder yakni masih terdapat
cytoplasmic droplet pada spermatozoa (Nalbandov 1990 262--263; Guyton & Hall
1997: 1272). Spermatozoa dianggap fertil bila memiliki spermatozoa abnormal di
bawah 40% (WHO 1988: 33).
2.7 Biosintesis Hormon Testosteron
Hormon testosteron merupakan hormon steroid yang diproduksi oleh sel

Leydig. Proses pertama pembentukan hormon testosteron adalah pembentukan
pregnenolon dari kolesterol. Pemutusan rantai samping kolesterol menyebabkan
perubahan gugus hidroksil menjadi keto sehingga terbentuk pregnenolon.
Pregnenolon tersebut kemudian diubah menjadi progesteron oleh enzim 3- -
hidroksi steroid dehidrogenase (Voet & Voet 2004: 771).
Progesteron selanjutnya mengalami hidroksilasi pada atom C-17,
membentuk 17- -hidroksil progesteron, kemudian kehilangan 2 atom karbon
pada C-17 membentuk androsten yang mempunyai gugus keto pada C-17.
Androsten selanjutnya direduksi menjadi gugus hidroksil membentuk testosteron
(Guyton 1996: 405; Ganong 2003: 375--376). Testosteron yang telah dihasilkan
selanjutnya dikatalisis oleh 5-reduktase menjadi dihidrotestosteron (DHT).
Pengkatalisisan DHT terjadi pada prostat dan beberapa jaringan lain yang
merupakan target testosteron (Ganong 2003: 377).

18
BAB 3
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Reproduksi dan Perkembangan

Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Indonesia, Depok. Penelitian dilakukan selama enam bulan, mulai
Juni 2011--Desember 2011.
3.2 Bahan
3.2.1 Sawi Hijau (Brassica juncea L.)
Sawi hijau (Brassica juncea) yang diperoleh dari pasar tradisional kemiri
muka, Depok. Pengekstrakan Brassica juncea dilakukan di Laboratorium
Reproduksi dan Perkembangan Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia, Depok.
3.2.2 Isoeugenol
Isougenol yang digunakan diperoleh dari Departemen Kimia, Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia, Depok.
3.2.3 Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah 25 ekor mencit (Mus musculus L.)
jantan galur DDY, berumur 8 minggu dengan berat badan 20--40 gram. Menit
diperoleh dari Institut Pertanian Bogor (IPB).

19
3.2.4 Makanan dan Minuman Hewan Uji
Makanan berupa pelet yang diperoleh dari PT Pemuka Tani. Minuman

mencit berupa air matang yang dimasukan ke dalam botol yang tutupnya
berlubang dan diletakkan di atas kandang mencit.
3.2.5 Bahan Kimia
Bahan kimia yang digunakan adalah minyak zaitun, etil asetat, H2O2 30%,
buffer K-fosfat pH 7,0, isoeugenol, NaSO4 anhidrat, larutan asam pikrat 10%,
NaCl, alkohol 70%, larutan eosin-Y, larutan George, dan larutan Giemsa.
3.3 Alat
Peralatan yang digunakan dalam penelitian meliputi alat pencekok (gavage

needle), gelas ukur [Assistent], sentrifuge [Procion scientific Kic, Vari Hi-Speed
Centricone], blender [Panasonic], botol selai, batang pengaduk, termometer, kain
katun, kertas saring [Whatman No. 1], kaca arloji [Pyrex], timbangan digital
[OHAUST GT 4000], beaker glass [IWAKI Pyrex]. Disposable syringe 1 ml
[Terumo], pipet tetes, magnetic stirrer [Cole-Parmer Instrument Company],
sarung tangan, labu ukur [SCHOTT Duran], tube sentrifuge [Corning], gelas
objek [Sail Brand], kaca penutup [Assistant], lemari pendingin [Bauknecht],
mikroskop [Nikon Eclipse E200], alat tulis, corong pisah [SCHOTT Duran],
corong [Sail Brand], bak plastik berukuran 35 x 25 x 15 cm2 yang diberi serutan
gergaji sebagai alas, anyaman kawat berukuran 40 x 30 cm2 dengan jarak
anyaman 0,5 cm, exhaust fan [National], lampu flouresens [Philips], botol minum
yang telah diberi lubang berdiameter 3mm, papan bedah, dissecting set, Improved
Neubauer, pipet mikro [Intech], dan counter.

20
3. 4 Cara Kerja
3.4.1 Rancangan Penelitian
Penelitian yang dilakukan bersifat eksperimental, menggunakan

Rancangan Acak Lengkap (RAL). Perlakuan dilakukan secara acak dengan lima
perlakuan dan lima kali pengulangan. Jumlah ulangan dilakukan berdasarkan
rumusan Frederer, yaitu (t-1)(n-1) 15, dengan t adalah jumlah perlakuan dan n
adalah jumlah ulangan (Hanafiah 1997:6). Setiap kelompok eksperimen
ditempatkan pada kandang berukuran 35 x 25 x 15 cm2.
Pemberian perlakuan dilakukan secara oral selama 36 hari. Kelompok
perlakuan tersebut terdiri dari:
a. Kelompok kontrol (KK), yaitu kelompok mencit yang diberi minyak zaitun
secara oral.
b. Kelompok Perlakuan 1 (KP 1), yaitu kelompok mencit yang diberi perlakuan
secara oral dengan dimer isoeugenol 2,4 mg/BB.
c. Kelompok Perlakuan 2 (KP 2), yaitu kelompok mencit yang dicekok
perlakuan secara oral dengan dimer isoeugenol 4,8 mg/BB.
d. Kelompok Perlakuan 3 (KP 3), yaitu kelompok mencit yang dicekok
e. Kelompok Perlakuan 4 (KP 4), yaitu kelompok mencit yang dicekok
3.4.2 Pemeliharaan Hewan Uji
Mencit diadaptasi dengan lingkungan kandang selama 7--14 hari. Mencit

jantan sebanyak 25 ekor dipelihara dalam kandang plastik yang diberi alas serbuk
kayu untuk menyerap kotoran mencit. Makanan dan minuman diberi secara ad
libitum (tidak terbatas) setiap hari. Setiap kandang berisi 5 ekor mencit yang
mewakili 5 perlakuan (KK, KP1, KP2, KP3, dan KP4) dan diambil secara acak.
Setiap ekor mencit percobaan diberi tanda dengan menggunakan larutan asam

21
pikrat 10% di kepala, punggung, bokong, ekstremitas atas, dan ekstremitas bawah
untuk membedakan mencit satu dengan yang lain.
Kandang mencit dibersihkan tiga kali seminggu dengan cara
merendamnya pada larutan pemutih pakaian, lalu dicuci dengan sabun hingga
bersih. Kandang diletakkan pada rak di Laboratorium Reproduksi dan
Perkembangan Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Indonesia. Ruangan diterangi selama dua belas jam per hari
dengan lampu flurosecens 20 watt. Pertukaran udara dibantu dengan exhaust fan.
Cahaya dan sirkulasi udara diatur sehingga setiap kandang mendapat cahaya dan
udara yang temaram.
3.4.3 Pembuatan Dimer Isoeugenol
Sebanyak 250 gram potongan batang tanaman sawi hijau segar

dihancurkan dengan menggunakan blender dalam 100 ml larutan buffer K-fosfat
pH 7,0 dalam keadaan dingin (0--5 C). Homogenat yang didapat disaring
dengan kain katun, kemudian filtrat yang diperoleh disentrifugasi dengan
kecepatan 2000 rpm selama 20 menit untuk memisahkan molekul enzim kasar
(supernatan) dari serpihan sel (Yuda 2007: 35--38).
Ekstrak enzim kasar 150 ml direaksikan dengan isoeugenol 15 ml
ditambah 5 ml H2O2 30%. Reaksi dilakukan dengan pengadukan selama 30 menit
sehingga terbentuk produk berwarna. Pengekstrakan produk berwarna dilakukan
dengan menggunakan pelarut etil asetat. Fasa etil asetat dipisahkan dari fasa air
menggunakan corong pisah. Air yang masih tersisa dihilangkan dengan
menambahkan Na2SO4 anhidrat, kemudian ekstrak yang diperoleh dipekatkan
dengan cara menguapkan pelarutnya. Senyawa hasil reaksi kemudian ditimbang
dan diperoleh ekstrak dimer dalam bentuk kristal sebanyak 1,51 g (Yuda 2007:
35--38).

22
3.4.4 Pembuatan Larutan
a. Larutan NaCl 0,9%

Natrium klorida (NaCl) padat seberat 0,9 g dimasukkan ke dalam labu
takar 100 ml kemudian ditambahkan akuades sampai volume larutan mencapai
100 ml.
b. Larutan George
Natrium sitrat seberat 3 g dimasukkan ke dalam labu takar dan
ditambahkan akuades sampai volume larutan mencapai 100 ml. Larutan
kemudian dicampurkan dengan 1 ml formalin 40% dan 0,6 g Eosin-Y, lalu
disaring.
c. Larutan Eosin-Y 1%
Eosin-Y seberat 1 g dimasukkan ke dalam labu takar 100 ml kemudian
ditambahkan akuades sampai volume larutan mencapai 100 ml.
d. Larutan 0,15 M dapar fosfat pH 6,8
Dinatrium hidrogen fosfat dihidrat (Na2HPO4.2H2O) sebanyak 26,7 g
dimasukkan ke dalam labu takar dan ditambahkan akuades sampai volume
larutan mencapai 100 ml (larutan I). Hal tersebut juga dilakukan terhadap
20,4 g kalium dihidrogen fosfat (KH2PO4) (larutan II). Larutan I dan II
kemudian dicampur, sehingga pH mencapai 6,8.
e. Larutan Giemsa
Satu bagian larutan Giemsa dicampur dengan sepuluh bagian larutan
0,15 M dapar fosfat pH 6,8 kemudian disaring.
3.4.5 Perlakuan terhadap Mencit
Hewan uji yang digunakan terdiri atas 25 ekor mencit jantan. Mencit
jantan ditimbang terlebih dahulu sebelum diberi perlakuan. Pemberian perlakuan
dilakukan secara oral dengan menggunakan disposable syringe yang jarumnya
telah diganti dengan gavage needle langsung ke lambung melalui kerongkongan.
Ekstrak dimer isoeugenol yang diberikan secara oral dilakukan dengan

23
menyesuaikan volume suspensi dengan berat badan dari setiap kelompok

perlakuan dan dilakukan selama 36 hari berturut-turut.
3.4.6 Pengambilan Data
Mencit dikorbankan pada hari ke-37 dengan cara dislokasi

vertebraeservicalis. Bagian bawah kanan dan kiri ujung distal kauda epididimis
sampai akhir duktus deferen diisolasi dan diletakan dalam kaca arloji yang berisi
0,25 ml larutan NaCl 0,9%. Spermatozoa dikeluarkan dengan cara menjepit
bagian ujung epididimis kemudian ditekan searah dan menjepit ujung yang lain
dan menekannya searah. Proses tersebut dilakukan beberapa kali kemudian
diaduk homogen.
a. Motilitas spermatozoa
Penghitungan motilitas spermatozoa dilakukan berdasarkan metode
WHO tahun 1988. Sampel yang telah homogen diambil sebanyak 10 l dan
diteteskan pada kaca objek, kemudian ditutup dengan kaca penutup.
Penghitungan dilakukan dibawah mikroskop dengan perbesaran 400 kali.
Lapangan pandang diperiksa secara sistematis dan jumlah spermatozoa yang
bergerak dicatat. Motilitas spermatozoa dapat diketahui dengan menghitung
jumlah spermatozoa yang bergerak dari 100 spermatozoa (WHO 1988: 6--7).
b. Viabilitas spermatozoa
Larutan spermatozoa diambil sebanyak 10 l dengan menggunakan
pipet mikro dan diteteskan pada kaca objek. Sampel kemudian ditetesi dengan
larutan Eosin-Y sebanyak 10 l dan ditutup dengan kaca penutup. Pengamatan
dilakukan dibawah mikroskop dengan perbesaran 400 kali. Persentase jumlah
spermatozoa hidup dari 100 spermatozoa untuk setiap ulangan. Spermatozoa
hidup tidak harus bergerak tetapi memiliki kepala berwarna hijau sedangkan
yang mati berwarna merah (WHO 1988:10).
c. Konsentrasi spermatozoa
Larutan spermatozoa diambil sebanyak 10 l ditambahkan larutan
George sebanyak 90 l dalam tabung mikro. Larutan spermatozoa tersebut
dikocok kemudian diteteskan ke dalam kamar hitung hemasitometer Improved

24
Neubauer yang telah diberi kaca penutup. Penghitungan dilakukan di bawah

mikroskop dengan perbesaran 400 kali. Spermatozoa yang berada pada 25
kotak kecil yang digunakan untuk penghitungan sel darah merah dijumlahkan,
kemudian dibagi dengan faktor koreksi hemasitometer. Hasil pembagian
tersebut merupakan jumlah spermatozoa total dalam juta/ml ejakulat (WHO
1988: 9--11).
d. Abnormalitas spermatozoa
Larutan spermatozoa sebanyak 10 l diambil dengan menggunakan
pipet mikro dan diteteskan pada kaca objek. Sampel tersebut kemudian
diwarnai dengan larutan Eosin-Y 10 l dan dibuat sediaan oles dengan
menggeserkan kaca objek lain diatasnya dengan sudut 45o. Sediaan oles
spermatozoa kemudian dikeringkan dan difiksasi dengan metanol 96% selama
lima menit serta diwarnai dengan larutan Giemsa selama 30 menit.
Sediaan kemudian dibilas dengan air yang mengalir dan
dikeringanginkan. Penghitungan dilakukan di bawah mikroskop dengan
perbesaran 400 kali. Jumlah spermatozoa abnormal diketahui dengan
menghitung spermatozoa abnormal dari 100 spermatozoa untuk setiap ulangan.
3.4.7 Pengolahan dan Analisis Data
Penelitian yang dilakukan bersifat eksperimental sehingga analisis data

dilakukan dengan menggunakan pendekatan statistik. Data-data yang diperolah
dimasukkan ke dalam tabel dan diolah dengan menggunakan program komputer
Statiztical Package for Social Science (SPSS) 17.0 for Windows dengan
pendekatan uji nulai probabilitas. Hasil uji disimpulkan dengan membandingkan
nilai taraf nyata () dengan nilai probabilitas (P) yang diperoleh melalui
komputasi SPSS (Santoso 2003: 301--303).
Data tersebut kemudian diuji dengan uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji
homogenitas Levene. Analisis data kemudian dilanjutkan dengan uji parametrik
analisis variansi (anava) 1-faktor. Uji anava digunakan untuk mengetahui apakah
terdapat pengaruh pemberian dimer isoeugenol terhadap motilitas, viabilitas,
konsentrasi, dan abnormalitas spermatozoa mencit pada ke-5 perlakuan (Santoso

25
2003: 291 & 292). Pengujian kemudian dapat dilanjutkan dengan uji
perbandingan berganda Least Significance Difference (LSD) untuk mengetahui
ada atau tidaknya perbedaan antara pasangan kelompok perlakuan (Conover 1980:
370--372).

26
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
4.1.1 Persentase Motilitas Spermatozoa
Hasil penghitungan terhadap data rerata persentase motilitas spermatozoa

dapat dilihat pada tabel 4.1.1. Diagram batang rerata persentase motilitas
spermatozoa dapat dilihat pada gambar 4.1.1.
Tabel 4.1.1 Data rerata persentase motilitas spermatozoa mencit kelompok kontrol
dan kelompok perlakuan
Ulangan KK KP1 KP2 KP3 KP4

1 84 73 51 52 38
2 77 85 58 58 40
3 85 69 59 59 32
4 81 70 56 56 35
5 70 71 55 55 39
x 397,00 368,00 279,00 280,00 184,00

X 79,40 73,60 55,80 56,00 36,80
SD 6,10 6,54 3,11 2,73 3,27
Keterangan:
KK = Kelompok kontrol, mencit dicekok minyak zaitun disesuaikan dengan berat badan
KP1 = Kelompok perlakuan 1, mencit dicekok ekstrak dimer isoeugenol dosis 2,4 mg/kg bb
x = Jumlah nilai persentase spermatozoa motil
x = Nilai rerata persentase spermatozoa motil
SD = Standar Deviasi
26
27
90
a
Persentase Motilitas Spermatozoa

80 a
70
60 b b
Mencit (%)
50
40
c
30
20
10
0
KK KP1 KP2 KP3 KP4
Kelompok Perlakuan
Keterangan:
* = Huruf yang sama menunjukkan bahwa persentase abnormalitas spermatozoa tidak
berbeda nyata (P < 0,05), sedangkan huruf yang berbeda menunjukkan bahwa
persentase abnormalitas spermatozoa berbeda nyata (P > 0,05)
Bar menunjukkan standar deviasi
Gambar 4.1.1 Diagram batang rerata persentase motilitas

spermatozoa mencit
Rerata persentase motilitas tertinggi sampai terendah berturut-turut, yaitu

KK (79,40 6,10), KP1 (73,60 6,54), KP2 (55,80 3,11), KP3 (56,00 2,73),
KP4 (36,80 3,27). Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk (=0,05) terhadap data
persentase motilitas spermatozoa menunjukkan data berdistribusi normal
(P>0,05). Hasil uji Levene (=0,05) terhadap data persentase motilitas
spermatozoa menunjukkan data bervariasi homogen (P>0,05). Hasil uji anava 1-
faktor (=0,05) menunjukkan terdapat pengaruh motilitas spermatozoa pada
kelima kelompok perlakuan (P<0,05). Pengujian dilanjutkan dengan uji
perbandingan berganda (LSD; =0,05) untuk mengetahui ada atau tidaknya
perbedaan motilitas antara pasangan perlakuan. Hasil uji LSD tersebut

28
menunjukkan terdapat perbedaan nyata antara KK dengan KP2, KP3, dan KP4;
KP1 dengan KP2, KP3, dan KP4; KP2 dengan KK, KP1, dan KP4; KP3 dengan
KK, KP1, dan KP4; serta KP4 dengan KK, KP1, KP2, dan KP3, serta tidak ada
perbedaan nyata antara KK dengan KP1; KP2 dengan KP3
4.1.2 Persentase Viabilitas Spermatozoa
Hasil penghitungan terhadap data rerata persentase viabilitas spermatozoa

dapat dilihat pada tabel 4.1.2. Diagram batang rerata persentase viabilitas
spermatozoa dapat dilihat pada gambar 4.1.2.
4.1.2 Data rerata persentase viabilitas spermatozoa mencit kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan

1 61 62 43 38 10
2 72 74 41 25 28
3 71 62 39 38 18
4 56 57 28 22 15
5 73 56 40 24 19
x 333,00 311,00 191,00 147,00 90,00

X 66,60 62,20 38,20 29,40 18,00
SD 7,63 7,15 5,89 7,92 6,59
Keterangan:
x = Jumlah nilai persentase spermatozoa hidup
x = Nilai rerata persentase spermatozoa hidup

29
80
a
Persentase Viabilitas Spermatozoa

70 a
60
Mencit (%) 50
b
40 b
30
c
20
10
0
KK KP1 KP2 KP3 KP4
kelompok perlakuan
Keterangan:
Gambar 4.1.2 Diagram batang rerata persentase viabilitas

spermatozoa mencit
Rerata persentase viabilitas tertinggi sampai terendah berturut-turut, yaitu

KK (66,60 7,63), KP1 (62,60 7,15), KP2 (38,20 5,89), KP3 (29,407,92),
KP4 (18,006,59). Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk (=0,05) terhadap data
persentase viabilitas spermatozoa menunjukkan data berdistribusi normal
(P>0,05). Hasil uji Levene (=0,05) terhadap data persentase viabilitas
faktor (=0,05) menunjukkan terdapat pengaruh terhadap viabilitas spermatozoa
pada kelima kelompok perlakuan (P<0,05). Hasil uji LSD tersbut menunjukkan
terdapat perbedaan nyata antara KK dengan KP2, KP3, dan KP4; KP1 dengan
KP2, KP3, dan KP4; KP2 dengan KK, KP1, dan KP4; KP4 dengan KK, KP1,

30
KP2, dan KP3, serta tidak ada perbedaan antara KK dengan KP1; KP2 dengan
KP3.
4.1.3 Konsentrasi Spermatozoa
Hasil penghitungan terhadap data rerata konsentrasi spermatozoa dapat

dilihat pada tabel 4.1.3. Diagram batang rerata konsentrasi spermatozoa dapat
dilihat pada gambar 4.1.3.
Tabel 4.1.3 Data rerata konsentrasi spermatozoa mencit kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan (juta per ml ejakulat)

1 47,60 40,70 36,10 22,30 18,40
2 35,30 41,20 33,20 30,20 20,20
3 35,00 37,20 37,50 31,20 15,60
4 41,70 34,10 41,50 25,10 21,40
5 42,10 40,30 40,20 30,20 20,70
x 201,70 193,50 188,50 139,00 96,30

X 40,34 38,70 37,70 27,80 19,26
SD 5,28 3,00 3,29 3,89 2,32
Keterangan:
x = Jumlah nilai konsentrasi spermatozoa
x = Nilai rerata konsentrasi spematozoa

31
50
Mencit (juta per ml/ejakulat)

a
45
Konsentrasi Spermatozoa
a a
40
35
b
30
25
c
20
15
10
5
0
KK KP1 KP2 KP3 KP4
kelompok perlakuan
Keterangan:
Gambar 4.1.3 Diagram batang rerata konsentrasi (juta per ml ejakulat)

spermatozoa mencit
Rerata konsentrasi tertinggi sampai terendah berturut-turut, yaitu KK

(40,683,63), KP1 (39,801,53), KP2 (39,842,35), KP3 (27,762,98), KP4
(19,702,00). Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk (=0,05) terhadap data
konsentrasi spermatozoa menunjukkan data berdistribusi normal (P>0,05). Hasil
uji Levene (=0,05) terhadap data konsentrasi spermatozoa menunjukkan data
bervariasi homogen (P>0,05). Hasil uji anava 1-faktor (=0,05) menunjukkan
terdapat pengaruh terhadap konsentrasi spermatozoa pada kelima kelompok
perlakuan (P<0,05). Hasil uji LSD tersebut menunjukkan terdapat perbedaan
nyata antara KK dengan KP3; KP1 dengan KP3; KP2 dengan KP3 dan KP4; KP3
dengan KK, KP1, KP2, dan KP4; KP4 dengan KK, KP1, KP2, dan KP3, serta
tidak ada perbedaan antara KK dengan KP1 dan KP2.

32
4.1.4 Persentase Abnormalitas Spermatozoa
Hasil penghitungan terhadap data rerata persentase abnormalitas

spermatozoa dapat dilihat pada tabel 4.1.4. Diagram batang rerata persentase
abnormalitas spermatozoa dapat dilihat pada gambar 4.1.4.
Tabel 4.1.4 Data rerata persentase abnormalitas spermatozoa mencit kelompok

kontrol dan kelompok perlakuan

1 7 9 17 18 16
2 9 13 20 23 18
3 12 11 21 25 28
4 15 19 20 19 20
5 10 12 19 20 27
x 53,00 64,00 97,00 105,00 109,00

X 10,60 12,80 19,40 21,00 21,80
SD 3,04 3.76 1,51 2,92 5,40
Keterangan:
x = Jumlah nilai persentase spermatozoa abnormal
x = Nilai rerata persentase spermatozoa abnormal

33
30
Persentase Abnormalitas Spermatozoa

b
25 b
b
20
Mencti (%)
15 a a
10
0
KK KP1 KP2 KP3 KP4
kelompok perlakuan
Keterangan:
Gambar 4.1.4. Diagram batang rerata persentase abnormalitas

spermatozoa mencit
Rerata persentase abnormalitas terendah sampai tertinggi berturut-turut,

yaitu KK (10,603,04), KP1 (12,803,76), KP2 (19,401,51), KP3 (21,002,91),
KP4 (21,805,40). Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk (=0,05) terhadap data
persentase abnormalitas spermatozoa menunjukkan data berdistribusi normal
(P>0,05). Hasil uji Levene (=0,05) terhadap data persentase abnormalitas
faktor (=0,05) menunjukkan terdapat pengaruh terhadap abnormalitas
spermatozoa pada kelima kelompok perlakuan (P<0,05). Hasil uji LSD tersbut
menunjukkan terdapata perbedaan nyata antara KK dengan KP2, KP3, dan KP4;
KP1 dengan KP2, KP3, dan KP4; KP2 dengan KK, KP1, dan KP4; KP4 dengan

34
KK, dan KP1; KP4 dengan KK dan KP1, serta tidak ada perbedaan nyata antara
KK dengan KP1; KP2 dengan KP3 dan KP4.
4.2 Pembahasan
Pemeriksaan terhadap kualitas spermatozoa biasanya ditentukan oleh

kemampuan spermatozoa untuk bergerak (motilitas spermatozoa), banyaknya
jumlah spermatozoa yang hidup (viabilitas spermatozoa), konsentrasi
spermatozoa, dan abnormalitas spermatozoa. Hasil uji statistik menunjukkan
bahwa pemberian senyawa dimer isoeugenol secara oral terhadap kualitas
spermatozoa mencit menyebabkan terjadinya penurunan motilitas spermatozoa,
viabilitas spermatozoa, konsentrasi spermatozoa, dan peningkatan abnormalitas
spermatozoa. Hal tersebut diduga disebabkan dimer isoeugenol masih memiliki
sifat sitotoksik.
Dimer isoeugenol merupakan senyawa yang dihaslikan dari reaksi kopling
senyawa isoeugenol. Isoeugenol merupakan turunan senyawa fenol yang pada
konsentrasi tinggi dapat menyebabkan kerusakan oksidatif pada protein, DNA,
dan lipid. Kerusakan oksidatif tersebut dikarenakan adanya aktifitas prooksidan
berupa radikal fenoksil yang dapat meningkatkan peroksidasi lipid (Fujisawa dkk.
2004: 566; Atsumi dkk. 2005: 1026). Peroksidasi lipid dimulai dengan serangan
prooksidan pada asam lemak membran sel sehingga dapat menarik atom hidrogen
dari gugus metilen (-CH2) pada rantai samping. Semakin banyak jumlah ikatan
rangkap pada asam lemak, semakin mudah pula asam lemak tersebut melepaskan
atom hidrogennya. Hal tersebut yang menyebabkan polyunsaturated fatty acid
(PUFA) atau asam lemak tak jenuh rentan terhadap peroksidasi lipid (Gutteridge
1995: 1821: Sanocka & Kurpisz 2004: 4).
Polyunsaturated fatty acid (PUFA) merupakan komponen utama penyusun
membran sel termasuk membran sel pada sistem reproduksi jantan (Sanocka &
Kurpisz 2004: 4). Menurut Halliwell & Chirico (1993: 717S), semakin tinggi
kadar PUFA maka akan semakin rentan sel tersebut mengalami peroksidasi sel.
Berdasarkan hal tersebut dapat diduga bahwa dimer isoeugenol dapat merusak
struktur ikatan PUFA sebagai penyusun utama membran sel, sehingga dapat

35
menyebabkan adanya kerusakan membran sel pada epitel epididimis dan sel
spermatozoa.
Berdasarkan pada uji statistik, diketahui adanya penurunan persentase
motilitas spermatozoa yang diberi ekstrak dimer isoeugenol secara oral pada dosis
4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg bb; dan 19,2 mg/kg bb. Penurunan motilitas
spermatozoa dapat disebabkan adanya gangguan pada epididimis sebagai tempat
pematangan sel. Hal tersebut diduga karena adanya gangguan fungsi pada sel
Leydig yang mengakibatkan penurunan produksi testosteron sehingga adanya
penurunan produksi metabolit testosteron yaitu DHT (dihydrotestosteron).
Dihydrotestosteron merupakan hormon yang diperlukan dalam pematangan
spermatozoa pada epididimis. Penurunan jumlah DHT akan menyebabkan
penurunan fungsi epididimis dikarenakan kemampuan fungsi epididimis sangat
dipengaruhi oleh keberadaan DHT (Hafez & Prasad 1976: 35; Guyton & Hall
1997: 1268). Gangguan fungsi pada epidimis dikarenakan jumlah DHT menurun
akan menyebabkan gangguan pada pematangan spermatozoa yang meliputi
perubahan spermatozoa secara morfologi, fisiologi, biokimia, dan metabolisme
(Hafez & Prasad 1976: 31). Selain itu, penurunan moilitas spermatozoa juga
dapat disebabkan oleh perusakan membran sel pada sel spermatozoa oleh dimer
isoeugenol.
Perusakan membran sel oleh dimer isoeugenol dapat mengakibatkan
gangguan pada pergerakan spermatozoa yang disebabkan penurunan fungsi
mitokondria dan gangguan pada mikrotubul. Penurunan fungsi mitokondria
tersebut diduga disebabkan oleh peroksidasi lipid yang mampu merusak membran
sel mitokondria sehingga dapat mengganggu kerja mitokondria pada sel
spermatozoa. Mitokondria berfungsi sebagai tempat penghasil energi untuk
pergerakan spermatozoa, melalui siklus krebs (Gaffney dkk. 2011: 56). Gangguan
pada mitokondria akan menyebabkan penurunan jumlah energi yang dihasilkan
sehingga pergerakan spermatozoa akan tergganggu. Selain itu, penurunan
motilitas spermatozoa juga dapat disebabkan gangguan pada mikrotubul oleh
dimer isoeugenol. Dimer isoeugenol diduga dapat masuk kedalam spermatozoa
dengan merusak membran sel dan memengaruhi mikrotubul sehingga
menyebabkan penurunan kemampuan kontraktil mikrotubul.

36
A B
14 m 14 m
C D
14 m 14 m
Keterangan:
A : Spermatozoa normal
B : Spermatozoa yang ekornya menggulung pada bagian akhir
C : Spermatozoa yang ekornya menggulung pada bagian tengah
D : Spermatozoa yang masih terdapat cytoplasmic droplet
Gambar 4.2 Hasil pengamatan spermatozoa abnormal

[Sumber: Dokumentasi pribadi.]
Pada hasil penelitian ditemukan kelainan pada spermatozoa berupa

spermatozoa dengan ekor menggulung dan masih terdapatnya cytoplasmic droplet
(Gambar 4.2). Menurut
Menurut Garner & Hafez (1987: 204), banyak faktor yang dapat
menyebabkan keabnormalan spermatozoa yang terjadi selama proses
perkembangan spermatozoa. Keabnormalan tersebut dapat disebabkan oleh
adanya gangguan pada ATPase, tingginya suhu tubuh, dan terganggun ya fungsi
epididimis. Bila tahap perkembangan terjadi tidak sempurna atau terjadi

37
gangguan fungsi pada epididimis, dapat menyebabkan abnormalitas pada

spermatozoa (Leeson dkk. 1996: 531).
Abnormalitas spermatozoa dapat dibedakan menjadi dua jenis, yaitu
abnormalitas primer dan abnormalitas sekunder. Abnormalitas primer
dikarenakan adanya kesalahan pada spermatogenesis di dalam tubulus seminiferus
yang dapat disebabkan karena penyakit, defisiensi nurisi makanan, bahan kimia,
dan pengaruh lingkungan yang buruk (Nugraheni dkk. 2003: 18). Leher
menggulung, dan masih terdapatnya cytoplasmic droplet pada sel spermatozoa
digolongkan dalam abnormalitas sekunder. Terjadinya abnormalitas sekunder
dikarenakan proses pematangan di epididimis yang belum sempurna
(Purwaningsih 1996: 58).
Penelitian Leonardo dkk. (2008) menyatakan bahwa eugenol dan
isoeugenol dapat menyebabkan kematian sel-sel spermatozoa secara in vitro (lihat
MMWCP-VMP 2008: 8). Apabila dimer isoeugenol dapat memasuki sawar darah
testis dan kemudian masuk ke dalam tubulus seminiferus, maka senyawa tersebut
akan mampu memengaruhi epitel pada tubulus seminiferus sehingga dapat
memengaruhi sel spermatogenik. Epitel pada tubulus seminiferus terdiri atas sel
sertoli dan sel spermatogenik.
Tubulus seminiferus pada testis merupakan tempat dihasilkannya
spermatozoa sehingga gangguan pada tubulus seminiferus dapat mengganggu
fungsi tubulus seminiferus untuk melakukan spermatogenesis dan memproduksi
spermatozoa (Moeloek 1994: 12; Lesson dkk. 1996: 511). Gangguan tersebut
diduga dikarenakan adanya senyawa dimer isoeugenol yang mampu menembus
sawar darah testis dan berpeluang untuk masuk ke dalam tubulus seminiferus
sehingga mengganggu fungsi tubulus seminiferus. Hal tersebut dapat
memengaruhi jumlah spermatozoa hidup serta gangguan pelepasan sperma ke
dalam saluran pengeluaran.
Viabilitas adalah kemampuan ketahanan hidup spermatozoa di luar tubuh,
lingkungan yang tidak cocok akan mengakibatkan spermatozoa tidak bergerak
(WHO 1988: 32). Menurut Moeloek (1985: 230) sekret dari kelenjar-kelenjar
aksesoris yang terdiri dari kelenjar bulbouretra, prostat, dan vesika seminalis
berupa cairan semen, memungkinkan spermatozoa mampu hidup untuk jangka

38
waktu tertentu. Berdasarkan hasil uji statistik, diketahui adanya penurunan

persentase viabilitas spermatozoa pada dosis 4,8 mg/kg bb; 9,6 mg/kg bb; dan
19,2 mg/kg bb. Apabila dimer isoeugenol dapat memasuki sawar darah testis dan
kemudian masuk ke dalam tubulus seminiferus, maka senyawa tersebut dapat
memengaruhi sel-sel spermatogenik.
Berdasarkan pada penelitian Wildawati (2012: 41) diketahui bahwa
pemberian ekstrak dimer isoeugenol dapat memengaruhi jumlah sel
spermatogenik, sehingga jumlah sel spermatogenik yang ada pada tubulus
seminiferus mengalami penurunan. Penurunan jumlah sel spermatogenik akan
menyebabkan penurunan jumlah sel spermatozoa. Diketahui bahwa pemberian
ekstrak dimer isoeugenol secara oral menyebabkan penurunan konsentrasi
spermatozoa pada dosis 9,6 mg/kg bb dan 19,2 mg/kg bb yang didasarkan pada
uji statistik. Rendahnya konsentrasi spermatozoa juga dapat disebabkan adanya
penurunan produksi testosteron dan DHT yang disebabkan adanya gangguan
fungsi pada sel leydig (Moeloek 1994: 15; Guyton & Hall 1997: 1268).
Penurunan produksi tersebut akan menyebabkan gangguan pada fungsi epididimis
dalam proses pematangan spermatozoa (Hafez & Prasad 1976: 35).
Ekstrak dimer isoeugenol dibuat dengan metode etil asetat menggunakan
pelarut air dan etil ester. Penelitian tersebut membuktikan bahwa mencit yang
diberikan ekstrak dimer isoeugenol selama 36 hari berturut-turut ternyata
memberikan pengaruh nyata terhadap kualitas spermatozoa pada dosis 4,8 mg/kg
bb; 9,6 mg/kg bb; dan 19,2 mg/kg bb serta konsentrasi spermatozoa pada dosis 9,6
mg/kg bb dan 19,2 mg/kg bb. Berdasarkan hasil penelitian diketahui bahwa
pemberian ekstrak dimer isoeugenol dapat menurunkan kualitas spermatozoa
mencit jantan mulai dari dosis 4,8 mg/kg bb dan memiliki batas aman penggunaan
hingga 2,4 mg/kg bb.

39
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 KESIMPULAN
1. Pemberian ekstrak dimer isoeugenol secara oral pada dosis 4,8 mg/kg bb; 9,6
mg/kg bb; dan 19,2 mg/kg bb menyebabkan penurunan persentase motilitas
dan viabilitas spermatozoa mencit.
2. Pemberian ekstrak dimer isoeugenol secara oral pada dosis 9,6 mg/kg bb dan
19,2 mg/kg bb menyebabkan penurunan konsentrasi spermatozoa mencit.
3. Pemberian ekstrak dimer isoeugenol secara oral pada dosis 4,8 mg/kg bb; 9,6
mg/kg bb; dan 19,2 mg/kg bb menyebabkan kenaikan persentase abnormalitas
spermatozoa mencit.
5.2 SARAN
1. Perlu dilakukan pemeriksaan hormon testosteron pada mencit jantan, sehingga

hasil yang didapatkan lebih akurat.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan mengawinkan mencit jantan dan
mencit betina untuk mengetahui kemampuan reproduksinya.

40
DAFTAR REFERENSI
Arief, A. 1990. Hortikultura. Penebar Swadaya, Jakarta: iv + 86 hlm.

Atsumi, T., S. Fujisawa, & K. Tonosaki. 2005. A comparative study of the
antioxidant/prooxidant activities od eugenol and isoeugenol with various
concentrations and oxidation conditions. Toxicology in Vitro 19: 1025--
1033.
Bortolomeazzi, R., G. Verardo, A. Liessi, & A. Callea. 2010. Formation of
dehydrodiisoeugenol and dehydrodieugenol from the reaction of isoeugenol
and eugenol with DPPH Radical and Their Role in the radical scavenging
activity. Journal Food Chemistry 118: 256--265.
Burger, H.G., D.M. de Kretser, & B. Hudson. 1976. Spermatogenesis and its
endocrine control. Dalam: Hafez, E.S.E. (eds.). 1976. Human semen and
fertility regulation in men. The C.V. Mosby Company, Saint Louis: 3--16.
Campbell, N.A., J.B. Reece, & L.G. Mitchell. 2004. Biologi. Terj. dari Biology,
oleh W. Manalu. Penerbit Erlangga, Jakarta: xxi + 501 hlm.
Conover, W.J. 1980. Practical non Parametric statistic, Ed. Ke-2. John Wiley &
Sons Incorporation, New York: xiv+493 hlm.
Coudhary, R., V.K. Chawala, N.D. Soni, J. Kumar, & R.K. Vyas. 2010. Oxidative
stress and role of antioxidants in male infertility. Pakistan Journal of
Physiology 6(2): 54--59.
Danke, R. J., R. J. Panciera, & A. D. Tillman. 1965. Gossypol Toxicity studies
with sheep. Journla of Animal Science 24: 1999--1201.
Freund, M. & R.N. Peterson. 1976. Semen evaluation and fertility. Dalam: Hafez,
E.S.E. (eds.). 1976. Human semen and fertility regulation in men. The
C.V. Mosby Company, Saint Louis: 344--354.
Fujisawa, S., T. Atsumi, M. Ishihara, & Y. Kadoma. 2004. Cytotoxicity, ROS-
generations activity anf radical-scavenging activity of curcumin ad related
compounds. Anticancer Research 24: 563--570.
Gaffney, E.A., H. Gadelha, D.J. Smith, J.R. Blake, & J.C. Krikman-Brown. 2011.
Mamalian sperm motility: Observation and theory. Annual Review of
Fluid Mechanics 43: 501-528.

41
Ganong, W.F. 2003. Buku ajar fisiologi kedokteran. 5th ed. Terj. dari: Review
of medical physiology, oleh Widjajakusumah, H.M.D. Penerbit Buku
Kedokteran EGC, Jakarta: xi+870 hlm.
Garner, D. L. & E. S. E. Hafez. 1987. Spermatozoa dan seminal plasma. Dalam:
Hafez, E. S. E. (ed.). 1987. Reproduction in farm mamals. Lea &
Febiger, Philadelphia: 189--209.
George, J.D., C.J. Price, M.C. Marr, C.B. Myers, & G.D. Jahnke. 2001.
Evaluation of the development toxicity of isoeugenol in Sprague-Dawley
(CD) rats. Toxicological Science 60: 112--120.
Gutteridge, J.M.C. 1995. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of
tissue damage. Clinical Chemistry 41(12): 1819--1828.
Guyton, A. C. 1996. Buku teks kedokteran. Ed ke-5 Bagian 2. Terj. dari Textbook
of medical physiology, oleh Darma A. & P. Lukmanto. Penerbit Buku
Kedokteran EGC, Jakarta: xiii + 587 hlm.
Guyton, A.C. & J.E. Hall. 1997. Buku ajar fisiologi kedokteran. 9th ed. Terj. dari:
Textbook of medical physiology, oleh Irawati, D., L.M.A.K.A. Tenagdi &
A. Susanto. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta: L + 1428 hlm.
Hafez, E.S.E. & Prasad. 1976. Functional aspects of the epididymis. Dalam:
Hafez, E.S.E. (ed.). 1976. Human semen and fertility regulation in men.
The C.V. Mosby Company, Saint Louis: 31--43.
Halliwell, B. & S. Chirico. 1993. Lipid peroxidation: its mechanism,
measurement, and significance. The American Journal of Clinical
Nutrition 57: 715S--725S.
Hartamto, H. 1985. Analisis semen. Dalam: Moeloek, N. & A. Tjokronegoro
(eds.). 1985. Proses produksi, kesuburan, dan seks dalam perkawinan.
Balai Penerbit FKUI, Jakarta: 161--167.
Haryanto, E., T. Suhartini, E. Rahayu, & H. H. Sunarjono. 2007. Sawi dan
selada. Penebar Swadaya, Depok: vii + 113 hlm.
Hedrich, J. H., J. Baker, R. Lindsey, & S. H. Weisbroth. 2006. The laboratory
rat. Elsevier Inc., Oxford: xiii + 912 hlm.
Johnson, M.H. & B.J. Everitt. 2000. Essential reproduction. 5th ed. Blackwell
Science, Oxford: xvi + 285 hlm.

42
Junquiera, L.C. & J. Carneiro. 1980. Basic histology. 3rd ed. Lange Medical
Publication, Canada: xiii + 504 hlm.
Kimball, J.W. 1991. Biologi, Ed ke-5. Jilid 2. Terj. Dari Biology. 5th ed., oleh
Tjitrosomo, S.S, & N. Sugiri. Penerbit Erlangga, Jakarta: xii + 755 hlm.
Kwitny, S., A.V. Klaus, & G.R. Hunnicutt. 2010. The annulus of the mouse sperm
tail is required to establish a membrane diffusion barrier that is engaged
during the late steps of spermiogenesis. Biology of Reproduction 82: 669--
678.
Leeson, C.R., T.S. Leeson, & A.A. Paparo. 1996. Buku ajar histologi. Ed. ke-5.
Terj. dari Textbook of Histology. 5th ed., oleh Tambajong, J. &
Wonodirekso (eds.). Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta: ix + 622
hlm.
Lindsay, D.R., K.W. Entwistle & A. Winantea. 1982. Reproducion in domestic
livestock in Indonesia. Queenland Press., Melbourne: xii + 76 hlm.
Malole, M.B. & C.S.V. Pramono. 1989. Penggunaan hewan-hewan percobaan di
laboratorium. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Pusat Antar
Universitas Bioteknologi IPB, Bogor: vii + 276 hlm.
Moein, M. R., V. O. Dehghani, N. Tabibnejad, & S. Vahidi. 2007. Reactive
Oxygen Species (ROS) level in seminal plasma of infertile men and
healthy donors. Irian Journal of Reproductive Medicini 5: 51--55.
Moeloek, N. 1994. Sistem reproduksi jantan/pria. Dalam: Syahrum, M.H.,
Kamaludin, & A. Tjokrenegoro (ed.). 1994. Reproduksi dan embriologi:
Dari satu sel menjadi organisme. Balai Penerbit FKUI, Jakarta: 9--16.
Muhlisah, F. 2007. Tanaman Obat Keluarga. Penebar Swadaya, Jakarta: 85 hlm.
Murakami, Y., M. Shoji, A. Hirata, S. Tanaka, I. Yokoe, & S. Fujisawa. 2005.
Dehydrodiisoeugenol, an isoeugenol dimer, inhibits lipopolysaccharide-
stimulated nuclear factor kappa B activation and cyclooxygenase-2
expression in macrophages. Archives of Biochemistry and Biophysics 434:
326--332
MMWD-VMP (=Marine Municipal Water District-Vegetation Management
Plan). 2008. Chemical weed control techniques. Marine Municipal Water
District. Corte Madera, CA.

43
Nalbandov, A.V. 1990. Fisiologi reproduksi pada mamalia dan unggas. Ed. ke-3.
Terj. dari Reproductive physiology of mammals and birds, oleh Keman, S.
Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta: xx + 378 hlm.
NTP (=National Toxicology Program). 2010. Toxicology and carcinogenesis
studies of isoeugenol in F344/N rats and B6C3F1 mice. NIH publication,
United States: 180 hlm.
Nugraheni, T., O.P. Astirin, & T. Widiyanti. 2003. Pengaruh vitamin C terhadap
perbaikan spermatogenesis dan kualitas spermatozoa mencit (Mus
musculus L.) setelah pemberian ekstrak tembakau (Nicotiana tabacum L.).
Biofarmasi 1(1): 13--19.
Pedersen, H. & D.W. Fawcett. 1976. Functional anatomy of the human
spermatozoon. Dalam: Hafez, E.S.E. (eds.). 1976. Human semen and
fertility regulation in men. The C.V. Mosby Company, Saint Louis: 65--
75.
Purwaningsih, E. 1996. Morfologi spermatozoa: Adakah kaitannya dengan
keberhasilan kehamilan? Jurnal Kedokteran YARSI 4(1): 54--63.
Ramadhani, D. 2007. Pengaruh pemberian ekstrak Pimpinella pruatjan Molkenb.
(Purwoceng) fraksi kloroform secara oral terhadap kualitas spermatozoa
Mus musculus L. (mencit) jantan galur DDY. Skripsi S1 Universitas
Indonesia, Depok: xi + 93 hlm.
Ross, M.H., L.J. Romrell, & G.I. Kaye. 1995. Histology: A text and atlas. 3rd ed.
Williams & Wilkins Publisher, Baltimore: xiii + 823 hlm.
Rugh, R. 1968. The Mouse: Its reproduction and developmental. Burgess
Publishing Company, Minneapolis: iv + 430 hlm.
Rukamana, R. 2004. Temu-temuan Apotik Hidup di Pekarangan. Penerbit
Kanisius, Yogyakarta: 61 hlm.
Salanti, A, M. Orlandi, E. Tolppa, & L. Zoia. 2010. Oxidatioan of isoeugenol by
Salen complexes with Bulky. International Journal of Molecular Sciences
11: 912--926.
Sanocka, D. & Kurpisz, M. 2004. Reactive Oxygen Species and Sperm Cells.
Reproductive Biology and Endrocrinology 2: 1--7.

44
Santoso, S. 2003. Mengatasi berbagai masalah statistik dengan SPSS 11.5. PT

Alex Media, Jakarta: xi + 591 hlm.
Sikka, S.C. 1995. Oxidative stress and role of antioxidants in normal and
abnormal sperm function. Frontiers in Bioscience 1: 77--86.
Smith, J.B. & S. Mangkoewidjojo. 1988. Pemeliharaan, pembiakkan, dan
penggunaan hewan percobaan di daerah tropis. Penerbit Universitas
Indonesia, Jakarta: xvi + 161 hlm.
Voet, J.G. & D. Voet. 2004. Biochemistry. 3th ed. John Wiley, New York:
xiv+2189 hlm.
WHO (=World Health Organization). 1988. Penuntun laboratorium WHO untuk
pemeriksaan semen manusia dan interaksi semen-getah servik. Terj. dari
WHO laboratory manual for the examination of human semen and
semencervical mucus interaction, oleh Tadjudin, M.K. Balai Penerbit FK
UI, Jakarta: xiv + 81 hlm.
Wijayakusuma, H. 2008. Ramuan Lengkap Herbal Taklukkan Penyakit. Pustaka
Bunda, Jakarta: viii+324 hlm.
Wildawati, N. 2012. Pengaruh Pemberian Ekstrak Dimer Isoeugenol secara Oral
terhadap Spermatogenesis Mencit (Mus musculus L.) Jantan Galur DDY.
Skripsi S1 Universitas Indonesia, Depok: xii + 65 hlm.
Yatim, W. 1988. Efek anti-fertilitas gossipol dan gula berkhlor terhadap tikus
jantan (Rattus novergicus) dan implikasi prospeknya sebagai kontraseptif
pria. Disertasi S3 Universitas Padjajaran, Bandung: xxiii + 432 hlm.
Yuda, A. 2007. Bioaktivitas Senyawa Dimer dari Isoeugenol dengan Enzin
Peroksidase dari Tanaman Sawi Hijau (Brassica juncea). Skripsi S1
Universitas Indonesia, Depok: xii + 82 hlm.

45
Lampiran 1
Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Persentase Motilitas Spermatozoa
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data motilitas spermatozoa mencit jantan
sebagai prasyarat untuk uji analisis variansi (anava)
Hipotesis:
Ho : Data motilitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal
Ha : Data motilitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi tidak
normal
Tarif nyata:
Nilai yang digunakan pada = 0,05
Kriteria pengujian:
Jika P < 0,05; maka Ho ditolak
Jika P > 0,05; maka Ho diterima
Hasil perhitungan:
Shapiro-Wilk
NAMA Statistik Df Probabilitas (P)
DATA Mot. .948 25 .230
Nilai P = 0,230 ; jika P > 0,05; maka Ho diterima

Kesimpulan:
Data motilitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal

46
Lampiran 2
Uji Homogenitas Levene terhadap Data Persentase Motilitas Spermatozoa Mencit
(Mus musculus L.) Jantan Galur DDY
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data motilitas spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data motilitas spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen
Ha : Data motilitas spermatozoa mencit jantan tidak bervariansi
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Uji Levene df1 df2 Probabilitas (P)
1.249 4 20 .322
Nilai P = 0,322; jika P > 0,05; maka Ho diterima

Kesimpulan:
Data motilitas spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen

47
Lampiran 3
Uji Analisis Variansi (anava) 1-faktor terhadap Data Persentase Motilitas
Tujuan:
Untuk mengerahui ada atau tidak adanya pengaruh pemberian ekstrak
dimer isoeugenol secara oral terhadap motilitas spermatozoa mencit jantan pada
ke-5 perlakuan
Hipotesis:
Ho : Tidak adanya pengaruh pemberian ekstrak dimer isoeugenol
secara oral terhadap motilitas spermatozoa mencit jantan pada
ke-5 perlakuan
Ha : Adanya pengaruh pemberian esktrak dimer isoeugenol secara oral
terhadap motilitas spermatozoa mencit jantan pada ke-5 perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Jumlah df Kuadrat F Probabilitas (P)
Kuadrat Tengah
Antar kelompok 5663.400 4 1415.860 65.549 .000
Dalam kelompok 432.000 20 21.600
Total 6095.440 24
Nilai P = 0,000; jika P < 0,05; maka Ho diterima

Kesimpulan:
Ada pengaruh pemberian ekstrak dimer isoeugenol secara oral terhadap
motilitas spermatozoa mencit jantan pada ke-5 perlakuan.

48
Lampiran 4
Uji Perbandingan Berganda LSD terhadap Data Persentase Motilitas Spermatozoa
Tujuan:
Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan motilitas spermatozoa
mencit jantan antara pasangan perlakuan
Hipotesis:
Ho : Tidak adanya perbedaan motilitas spermatozoa mencit jantan
antara pasangan perlakuan
Ha : Adanya perbedaan motilitas spermatozoa mencit jantan antara
pasangan perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:

49
(lanjutan)
Hasil perhitungan:
(I) (J) Selisih Mean SE P Interval Kepercayaan 95%

VAR1 VAR2 (I-J) Batas Bawah Batas Atas
LSD 0 1 5.80000 2.93939 .062 -.3315 11.9315
2 23.60000* 2.93939 .000 17.4685 29.7315
3 23.40000* 2.93939 .000 17.2675 29.5315
4 42.60000* 2.93939 .000 36.4685 48.7315
1 0 -5.80000 2.93939 .062 -11.9315 .3315
2 17.80000* 2.93939 .000 11.6685 23.9315
3 17.60000* 2.93939 .000 11.4685 23.7315
4 36.80000* 2.93939 .000 30.6685 42.9315
2 0 -23.60000* 2.93939 .000 -29.7315 -17.4685
1 -17.80000* 2.93939 .000 -23.9315 -11.6685
3 -.20000 2.93939 .946 -6.3315 5.9315
4 19.00000* 2.93939 .000 12.8685 25.1315
3 0 -23.40000* 2.93939 .000 -29.5315 -17.2685
1 -17.60000* 2.93939 .000 -23.7315 -11.4685
2 .20000 2.93939 .946 -5.9315 6.3315
4 19.20000* 2.93939 .000 13.0685 25.3315
4 0 -42.60000* 2.93939 .000 -48.7315 -36.4685
1 -36.80000* 2.93939 .000 -42.9315 -30.6685
2 -19.00000* 2.93939 .000 -25.1315 -12.8685
3 -19.20000* 2.93939 .000 -25.3315 -13.0685
Keterangan:
* : Berbeda Nyata
SE : Standar Eror
P : Probabilitas
Kesimpulan:
Terdapat perbedaan nyata antara KK dengan KP2, KP3, dan KP4; KP1
dengan KP2, KP3, dan KP4; KP2 dengan KK, KP1, dan KP4; KP3 dengan KK,
KP1, dan KP4; serta KP4 dengan KK, KP1, KP2, dan KP3, serta tidak ada
perbedaan nyata antara KK dengan KP1; KP2 dengan KP3.

50
Lampiran 5
Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Persentase Viabilitas Spermatozoa
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data viabilitas spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data viabilitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal
Ha : Data viabilitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi tidak
normal
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Shapiro-Wilk
NAMA Statistik df Probabilitas (P)
DATA Mot. .935 25 .115

Kesimpulan:
Data viabilitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal

51
Lampiran 6
Uji Homogenitas Levene terhadap Data Persentase Viabilitas Spermatozoa Mencit
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data viabilitas spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data viabilitas spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen
Ha : Data viabilitas spermatozoa mencit jantan tidak bervariansi
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
.618 4 20 .655

Kesimpulan:
Data viabilitas spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen

52
Lampiran 7
Uji Analisis Variansi (anava) 1-faktor terhadap Data Persentase Viabilitas
Tujuan:
dimer isoeugenol secara oral terhadap viabilitas spermatozoa mencit jantan pada
ke-5 perlakuan
Hipotesis:
secara oral terhadap viabilitas spermatozoa mencit jantan pada
ke-5 perlakuan
terhadap viabilitas spermatozoa mencit jantan pada ke-5
perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Jumlah df Kuadrat F Probabilitas (P)
Kuadrat Tengah
Antar kelompok 8792.640 4 2198.160 43.875 .000
Dalam kelompok 1002.000 20 50.100
Total 9794.640 24

Kesimpulan:
viabilitas spermatozoa mencit jantan pada ke-5 perlakuan.

53
Lampiran 8
Uji Perbandingan Berganda LSD terhadap Data Persentase Viabilitas
Tujuan:
Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan viabilitas spermatozoa
Hipotesis:
Ho : Tidak adanya perbedaan viabilitas spermatozoa mencit jantan
Ha : Adanya perbedaan viabilitas spermatozoa mencit jantan antara
pasangan perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:

54
(lanjutan)
Hasil perhitungan:

LSD 0 1 4.40000 4.47661 .337 -4.9380 13.7380
2 28.40000* 4.47661 .000 19.0620 37.7380
3 37.20000* 4.47661 .000 27.8620 46.5380
4 48.60000* 4.47661 .000 39.2620 57.9380
1 0 -4.40000 4.47661 .337 -13.7380 4.9380
2 24.20000* 4.47661 .000 14.6620 33.3380
3 13.00000* 4.47661 .000 23.4620 42.1380
4 24.40000* 4.47661 .000 34.8620 53.5380
2 0 -28.40000* 4.47661 .000 -37.7380 -19.0620
1 -24.00000* 4.47661 .000 -33.3380 -14.6620
3 8.80000 4.47661 .063 -.5380 18.1380
4 20.20000* 4.47661 .000 10.8620 29.5380
3 0 -37.20000* 4.47661 .000 -46.5380 -27.8620
1 -32.80000* 4.47661 .000 -42.1380 -23.4620
2 -8.80000 4.47661 .063 -18.1380 .5380
4 11.40000* 4.47661 .019 2.0620 20.7380
4 0 -48.60000* 4.47661 .000 -57.9380 -39.2620
1 -44.20000* 4.47661 .000 -52.5280 -34.8620
2 -20.20000* 4.47661 .000 -29.5380 -10.8620
3 -11.40000* 4.47661 .019 -20.7380 -2.0620
Keterangan:
* : Berbeda Nyata
SE : Standar Eror
P : Probabilitas
Kesimpulan:
KP1, KP2, dan KP3, serta tidak ada perbedaan antara KK dengan KP1; KP2
dengan KP3.

55
Lampiran 9
Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Konsentrasi Spermatozoa Mencit
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data konsentrasi spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data konsentrasi spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal
Ha : Data konsentrasi spermatozoa mencit jantan berdistribusi tidak
normal
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Shapiro-Wilk
DATA Mot. .932 25 .097

Kesimpulan:
Data konsentrasi spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal

56
Lampiran 10
Uji Homogenitas Levene terhadap Data Konsentrasi Spermatozoa Mencit
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data konsentrasi spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data konsentrasi spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen
Ha : Data konsentrasi spermatozoa mencit jantan tidak bervariansi
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
1.453 4 20 .254

Kesimpulan:
Data konsentrasi spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen

57
Lampiran 11
Uji Analisis Variansi (anava) 1-faktor terhadap Data Konsentrasi Spermatozoa
Tujuan:
Untuk mengerahuia ada atau tidak adanya pengaruh pemberian ekstrak
dimer isoeugenol secara oral terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan pada
ke-5 perlakuan
Hipotesis:
secara oral terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan pada
ke-5 perlakuan
terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan pada ke-5
perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Jumlah Df Kuadrat F Probabilitas (P)
Kuadrat Tengah
Antar kelompok 1619.976 4 404.994 29.602 .000
Total 1893.600 24

Kesimpulan:
konsentrasi spermatozoa mencit jantan pada ke-5 perlakuan.

58
Lampiran 12
Uji Perbandingan Berganda LSD terhadap Data Konsentrasi Spermatozoa Mencit
Tujuan:
Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan konsentrasi spermatozoa
Hipotesis:
Ho : Tidak adanya perbedaan konsentrasi spermatozoa mencit jantan
Ha : Adanya perbedaan konsentrasi spermatozoa mencit jantan antara
pasangan perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:

59
(lanjutan)
Hasil perhitungan:

LSD 0 1 1.64000 2.33933 .491 -3.2398 6.5198
2 2.64000 2.33933 .272 -2.2398 7.5198
3 12.5000* 2.33933 .000 7.6602 17.4198
4 21.08000* 2.33933 .000 16.2002 25.9598
1 0 -1.64000 2.33933 .491 -6.5198 3.2398
2 1.00000 2.33933 .674 -3.8798 5.8798
3 10.90000* 2.33933 .000 6.0202 15.7798
4 19.44000* 2.33933 .000 14.5602 24.3198
2 0 -2.64000 2.33933 .272 -7.5198 2.2398
1 -1.00000 2.33933 .674 -5.8798 3.8798
3 9.90000* 2.33933 .000 5.0202 14.7798
4 18.44000* 2.33933 .000 13.5602 23.3198
3 0 -12.54000* 2.33933 .000 -17.4198 -7.6602
1 -10.90000* 2.33933 .000 -15.7798 -6.0202
2 -9.90000* 2.33933 .000 -14.77798 -5.0202
4 8.54000* 2.33933 .002 3.6602 13.4198
4 0 -21.08000* 2.33933 .000 -25.9598 -16.2002
1 -19.44000* 2.33933 .000 -24.3198 -14.5602
2 -18.44000* 2.33933 .000 -23.3198 -13.5602
3 -8.54000* 2.33933 .002 -13.4198 -3.6602
Keterangan:
* : Berbeda Nyata
SE : Standar Eror
P : Probabilitas
Kesimpulan:
Terdapat perbedaan nyata antara KK dengan KP3; KP1 dengan KP3; KP2
dengan KP3 dan KP4; KP3 dengan KK, KP1, KP2, dan KP4; KP4 dengan KK,
KP1, KP2, dan KP3, serta tidak ada perbedaan antara KK dengan KP1 dan KP2.

60
Lampiran 13
Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Persentase Abnormalitas
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data abnormalitas spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data abnormalitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi
normal
Ha : Data abnormalitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi tidak
normal
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Shapiro-Wilk
DATA Mot. .964 25 .503

Kesimpulan:
Data abnormalitas spermatozoa mencit jantan berdistribusi normal

61
Lampiran 14
Uji Homogenitas Levene terhadap Data Persentase Abnormalitas Spermatozoa
Tujuan:
Untuk mengetahui distribusi data abnormalitas spermatozoa mencit jantan
Hipotesis:
Ho : Data abnormalitas spermatozoa mencit jantan bervariansi
homogen
Ha : Data abnormalitas spermatozoa mencit jantan tidak bervariansi
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
2.782 4 20 .055

Kesimpulan:
Data abnormalitas spermatozoa mencit jantan bervariansi homogen

62
Lampiran 15
Uji Analisis Variansi (anava) 1-faktor terhadap Data Abnormalitas Spermatozoa
Tujuan:
dimer isoeugenol secara oral terhadap abnormalitas spermatozoa mencit jantan
pada ke-5 perlakuan
Hipotesis:
secara oral terhadap abnormalitas spermatozoa mencit jantan
pada ke-5 perlakuan
terhadap abnormalitas spermatozoa mencit jantan pada ke-5
perlakuan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:
Hasil perhitungan:
Jumlah Df Kuadrat F Probabilitas (P)
Kuadrat Tengah
Antar kelompok 516.640 4 129.160 10.170 .000
Total 770.640 24

Kesimpulan:
abnormalitas spermatozoa mencit jantan pada ke-5 perlakuan.

63
Lampiran 16
Uji Perbandingan Berganda LSD terhadap Data Persentase Abnormalitas
Tujuan:
Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan abnormalitas spermatozoa
Hipotesis:
Ho : Tidak adanya perbedaan abnormalitas spermatozoa mencit jantan
Ha : Adanya perbedaan abnormalitas spermatozoa mencit jantan
Tarif nyata:
Kriteria pengujian:

64
(lanjutan)
Hasil perhitungan:

LSD 0 1 -2.20000 2.25389 .341 -6.9015 2.5015
2 -8.8000* 2.25389 .001 -13.5015 -4.0985
3 -10.40000* 2.25389 .000 -15.1015 -5.6985
4 -11.20000* 2.25389 .000 -15.9015 -6.4985
1 0 2.20000 2.25389 .341 -2.5015 6.9015
2 -6.60000* 2.25389 .008 -11.3015 -1.8985
3 -8.20000* 2.25389 .002 -12.9015 -3.4985
4 -9.00000* 2.25389 .001 -13.7015 -4.2985
2 0 8.80000* 2.25389 .001 4.0985 13.5015
1 6.60000* 2.25389 .008 1.8985 11.3015
3 -1.60000 2.25389 .486 -6.3015 3.1015
4 -2.40000 2.25389 .300 -7.1015 2.3015
3 0 10.40000* 2.25389 .000 5.6985 15.1015
1 8.20000* 2.25389 .002 3.4985 12.9015
2 1.60000 2.25389 .486 -3.1015 6.3015
4 -.80000 2.25389 .726 -5.5015 3.9015
4 0 11.20000* 2.25389 .000 6.4985 15.9015
1 9.00000* 2.25389 .001 4.2985 13.7015
2 2.40000 2.25389 .300 -2.3015 7.1015
3 .80000 2.25389 .726 -3.9015 5.5015
Keterangan:
* : Berbeda Nyata
SE : Standar Eror
P : Probabilitas
Kesimpulan:
dan KP1; KP4 dengan KK dan KP1, serta tidak ada perbedaan nyata antara KK
dengan KP1; KP2 dengan KP3 dan KP4.

File

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

File

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UNIVERSITAS INDONESIA

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DIMER ISOEUGENOL

JILL WANDA HAMILTON

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DIMER ISOEUGENOL

JILL WANDA HAMILTON

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Skripsi ini adalah hasil karya saya sendiri,

dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk

telah saya nyatakan dengan benar.

Nama : Jill Wanda Hamilton

Tanggal : 2 Oktober 2012

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Skripsi ini diajukan oleh :

Telah berhasil dipertahankan di hadapan Dewan Penguji dan diterima

Pembimbing I : Dr. Dadang Kusmana, M.S (.................................)

Pembimbing II : Dra. Setiorini, M.Kes (.................................)

Penguji I : Dr. Abinawanto (.................................)

Penguji II : Nova Anita, M.Biomed (.................................)

Tanggal : 2 Oktober 2012

iii Universitas Indonesia

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Depok, Oktober 2012

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Sebagai sivitas akademis Universitas Indonesia, saya yang bertanda tangan di

Nama : Jill Wanda Hamilton

Demi pengembangan ilmu pengetahuan menyetujui untuk memberikan kepada

Pengaruh Pemberian Ekstrak Dimer Isoeugenol secara Oral terhadap Kualitas

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya.

(Jill Wanda Hamilton)

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Nama : Jill Wanda Hamilton

Penelitian bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak dimer

Kata kunci : dimer isoeugenol, kualitas spermatozoa, Mus musculus L.

xii + 55 hlm; 12 gambar; 4 lampiran; 4 tabel

vii Universitas Indonesia

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Name : Jill Wanda Hamilton

The research aims to determined the effect of isoeugenol dimer extract

Key words : isoeugenol dimer, quality of spermatozoa, Mus musculus L.

4 appendices; xii + 55 pages; 12 pictures; 4 tables

viii Universitas Indonesia

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

2. TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................... 4

3. METODOLOGI PENELITIAN ............................................................ 18

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

4. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 26

5. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 39

DAFTAR REFERENSI ................................................................................. 40

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Gambar 2.1(1) Struktur Isoeugenol ................................................................. 5

Tabel 4.1.1 Data Rerata Persentase Motilitas Spermatozoa Mencit

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Lampiran 1 Uji Normalitas Shapiro-Wilk terhadap Data Persentase

xii Universitas Indonesia

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Tanaman obat sudah lama dikenal mengandung komponen fitokimia yang

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Yuda (2007: 46--49) dengan menggunakan bantuan enzim peroksidase

Pengaruh pemberian..., Jill Wanda Hamilton, FMIPA UI, 2012

Penelitian dilakukan bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian