542 Journal of Lipid Research Volume 54

542 Journal of Lipid Research Volume 54, 2013
Abstrak Delta-5 dan delta-6 desaturases (D5D dan D6D) adalah enzim-enzim kunci dalam sintesis endogen dari PUFA
rantai panjang. Dalam contoh ini dari subyek sehat (n = 310), jenis GenoTip dari polimorfisme nukleotida tunggal (SNP)
rs174537, rs174561, dan rs3834458 di FADS1-FADS2 cluster gen yang sangat terkait dengan proporsi LC-PUFA dan
kegiatan desaturase diperkirakan dalam plasma dan eritrosit. Minor kereta alel D5D (FADS1) (5.84 (FADS2) (6.05 10
terkait 8 10
19
dengan penurunan aktivitas P 4,20 P 10
4.5
7) adalah 10
disertai
18)
dan D6D
oleh (0,05 meningkat P 2,49 substrat 10
16 dan). Signifikansi sociation produk menurun dengan aktivitas D5D (P = 2,19 10
proporsi
17 dari) adalah haplotype compara- F-
ble dengan yang SNP tunggal, aktivitas D6D (P = 3,39 10
28 tapi) adalah haplotipe jauh lebih kuat. asosiasi Dalam dengan random domized dikendalikan intervensi diet,
meningkatkan eicosa- asam pentaenoic (EPA, 20: 5n-3) dan asam docosahexaenoic (DHA, 10
9)
22: asupan 6n-3) secara signifikan meningkat dan penurunan aktivitas D6D (P = D5D 9.16 10
(P
6)= setelah 4.0
dosis 0,45, 0,9, dan 1,8 g / hari selama enam bulan. Interaksi rs174537 genotipe dengan pengobatan adalah penentu kegiatan
D5D diperkirakan dalam plasma (P = 0,05).
dalam conclu - sion, situs yang berbeda pada lokus FADS1-FADS2
muncul untuk mempengaruhi D5D dan D6D aktivitas, dan rs174537 genotipe berinteraksi dengan diet EPA + DHA untuk
memodulasi D5D-Al-Hilal, M., A. AlSaleh, Z. Maniou, FJ Lewis. , WL Hall, TAB Sanders, dan SD O'Dell atas nama tim
studi MARINA. variasi genetik pada lokus gen FADS1-FADS2 in fluens delta-5 aktivitas desaturase dan LC-PUFA
proporsi setelah suplemen minyak ikan. J. Lipid . res 2013. 54:. 542-551
kata kunci Tambahan single nucleotide polymorphism jenis haplo- eicosapentaenoic acid docosahexaenoic acid interaksi
gen-hara rantai panjang asam lemak tak jenuh ganda
panjang rantai asam lemak tak jenuh ganda PUFA (LC-PUFA) yang komponen membran sel dan prekursor dari
Karya ini didukung oleh hibah dari Badan Standar Makanan dan Departemen Kesehatan, Inggris (Project N02041). Naskah
diterima 14 September 2012 dan dalam bentuk direvisi 24 Okt 2012. Diterbitkan, JLR Makalah di Press, 15 November, 2012
DOI 10,1194 / jlr.P032276
Variasi genetik pada lokus gen FADS1-FADS2

mempengaruhi aktivitas desaturase delta-5 dan proporsi LC-
PUFA setelah suplemen minyak ikan
Maryam Thomas A. Al-Hilal B. Sanders, Aseel, dan AlSaleh Sandra, Zoitsa D. O'Dell
Maniou 1
pada, nama Fiona J. Lewis dari, MARINA Wendy L. Balai penelitian,
tim
Diabetes dan nutrisi Divisi Ilmu, School of Medicine, King College London, London SE1 9NH, Inggris Raya
Singkatan: AA, asam arakidonat; ALA, asam -linolenic; BMI, indeks massa tubuh; CI, selang kepercayaan; D5D, Delta-5
desaturase; D6D, Delta-6 desaturase; DGLA, asam -linolenic dihomo-; DHA, doco- asam sahexaenoic; DPA, asam
docosapentaenoic; EPA, asam eicosapentaenoic; Rumpon, asam lemak desaturase; GLA, asam -linolenic; GLC, kromatografi gas-
cair; GWA, asosiasi genome-wide; LA, asam linoleat; LD, linkage disequilibrium; MARINA, m odulation dari isiko therosclerosis
r oleh i ncreasing dosis N -3 lemak percobaan CID; NCBI, Pusat Nasional untuk Biotechnology Information; SNP, single nucleotide
polymorphism.
1
Untuk siapa penelitian adalah korespondensi terdaftar di controlled-trials.com harus ditangani.
sebagai ISRCTN66664610.
e-mail: sandra.o'dell@kcl.ac.uk
Tambahan Bahan dapat ditemukan di:
http://www.jlr.org/content/suppl/2012/11/15/jlr.P032276.DC1
html
pasien berorientasi dan epidemiologi penelitian

eikosanoid inflamasi (1). Utama diet LC-PUFA adalah asam linoleat (LA, 18: 2n-6), dengan jumlah yang lebih rendah
dari asam n-3 asam lemak, terutama asam -linolenic (ALA, 18: 3n-3), eicosa- asam pentaenoic (EPA, 20: 5n-3), dan
asam docosahexaenoic (DHA, 22: 6n-3). Komposisi asam lemak dalam menggugat tis- mencerminkan diet lemak (2)
dan efisiensi gation elon- dan desaturasi prekursor diet mereka, dua asam lemak esensial LA dan ALA (Gbr. 1).
Delta-5 dan delta-6 desaturases (D5D dan D6D) adalah enzim kunci dalam desaturasi endogen (3, 4), diekspresikan
pada tingkat tinggi dalam hati, otak, jantung, dan paru-paru (5, 6). D5D dan D6D dikodekan, masing-masing, oleh
FADS1 dan FADS2 gen, yang terletak di wilayah keterkaitan yang kuat keseimbangan dis- (LD) pada kromosom 11.
Beberapa tunggal polimorfisme cleotide nu- (SNP) di cluster FADS1-FADS2 telah terbukti berhubungan dengan
plasma atau konsentrasi erythrocyte phosphoglyceride LC-PUFA dalam studi ge- hubungan nome-lebar (GWA) (7,
8). Asosiasi SNP dan haplotype di wilayah ini telah terbukti dengan asam lemak dalam plasma (4, 9-14), brane eritrosit
mem- (4, 8, 10-12, 15), dan jaringan adiposa (16). Perkiraan gerbang Surro- aktivitas desaturase berdasarkan rasio
produk: substrat (15, 17) menunjukkan tingkat yang lebih rendah associ- diciptakan dengan alel minor dari SNP di
blok LD FADS1-FADS2. Studi GWA juga telah mengidentifikasi beberapa lokus di cluster gen rumpon, di mana alel
minor associ- diciptakan dengan kolesterol total rendah (18), low-density lipopro- kolesterol Tein (LDL-C) (18-20),
high density lipoprotein
versi online dari artikel ini (tersedia di http://www.jlr.org) berisi data tambahan dalam bentuk enam meja.
Hak cipta 2013 oleh American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc.
Artikel ini tersedia online dihttp://www.jlr.org
kolesterol(HDL-C) (20, 21), dan lebih tinggi trigliserida centrations con (21 ), menunjukkan bahwa hubungan activi-
diubah desaturase dapat mempengaruhi tingkat lipoprotein plasma. Penelitian sebelumnya telah menyarankan bahwa
asupan makanan teract PUFA yang berbeda in- dengan variasi FADS1 untuk mempengaruhi lipid darah (13, 22).
Di sini kita pertama kali menyelidiki asosiasi dari tiga FADS1- FADS2 SNP dan haplotipe direkonstruksi dengan
tions proporsional dari LC-PUFA dalam plasma dan eritrosit, perkiraan kegiatan D5D dan D6D, dan konsentrasi lipid
plasma pada awal pada subyek sehat direkrut untuk uji coba terkontrol secara acak. Kami kemudian menyelidiki
pengaruh pada asosiasi netic ge- suplemen EPA dan DHA equiva- dipinjamkan ke 1-4 porsi ikan per minggu selama
enam bulan. Tujuannya adalah untuk mengetahui apakah interaksi antara otypes SNP gen- dan n-3 LC-PUFA dosis
adalah penentu signifikan plasma atau eritrosit LC-PUFA proporsi, esti dikawinkan kegiatan desaturase, atau lipid
plasma.
SUBYEK DAN
METODEMARINA
StudiMARINA (m odulation dari isiko therosclerosis r oleh i ncreasing dosis N -3 lemak CID a) percobaan adalah diet studi
antar campur single-pusat acak desain paralel double-blind untuk menguji efek dari tiga dosis harian DHA dan EPA pada fungsi
endotel dan didirikan faktor risiko penyakit kardiovaskular (23).
Bahan tambahan dapat ditemukan di:
html
Studi ini disetujui oleh Komite Etika St Thomas Hospital NHS Re- pencarian ( NREC 08 / H0802 / 3). Ditulis, persetujuan di-
dibentuk diberikan oleh peserta, yang adalah orang-orang yang tidak merokok dan wanita sehat antara 45 dan 70 tahun, direkrut
melalui iklan media dan diputar sebagai de- jelaskan sebelumnya (23). Tiga ratus enam puluh tujuh peserta secara acak pengobatan
dengan urutan yang dihasilkan komputer, menggunakan proses minimisasi untuk menyeimbangkan usia, jenis kelamin, dan etnis
antara kelompok perlakuan. Selama run-in riod pe- awal empat minggu, peserta mengambil minyak zaitun (BP spesifikasi) kapsul
plasebo sementara membatasi asupan ikan berminyak, setelah pengukuran awal dari variabel hasil dibuat. The di- fase intervensi
etary terlibat suplementasi dengan encapsu- lated EPA dan DHA pada tiga dosis (0,45, 0,9, dan 1,8 g / hari), dibandingkan dengan
plasebo. Penyelidikan ini didasarkan pada pengukuran yang dilakukan pada awal dan setelah 6 bulan. Kepatuhan ditentukan dengan
menilai DHA dan EPA konten di phosphoglycerides erythrocyte pada awal, 6 bulan, dan 12 bulan. Para peserta diberikan dengan
kapsul secara berkala; setiap kapsul yang tidak terpakai dikembalikan dan jumlah mereka ulang dijalin dgn tali. Campuran minyak
yang disediakan oleh tali Croda Chemicals Uni Eropa- Ltd (Hull, Inggris) dan dikemas dalam gelatin oleh Powerhealth
(Pocklington, UK) seperti yang dijelaskan sebelumnya (23). Analisis pengendalian kualitas dilakukan oleh Croda Chemicals Eropa
Ltd
pengambilan sampel darah dan analisis
eritrosit lipid diekstraksi dari sel dicuci dalam waktu tiga hari pengumpulan darah seperti yang dijelaskan di tempat lain (24).
Mantan lipid tracted disimpan pada 20 C sampai dianalisis. Sampel darah untuk analisis ditarik setelah minimal 8 jamsemalam
cepat
rumpongen, minyak ikan, dan aktivitas desaturase 543
Gambar. 1. Persiapan untuk sintesis LC-PUFA dari n-6 dan n-3 asam lemak esensial. Sintesis n-6 PUFA LC- dari LA dan n-3 dari
hasil ALA di lel paral- dengan bergantian tindakan elongases dan desaturases. Dianalisis LC-PUFA akan ditampilkan dalam huruf
tebal.
html
disajikan diawali dengan rendah lemak makan malam (<10 g lemak, 3 MJ), dan serum
dalam teks dan tabel dinyatakan sebagai
sarana atau geometris disimpan pada 45 C sampai dianalisis. Plasma total asam lemak yang
berarti SD atau berarti perubahan terhadap nilai dasar
SE. ditentukan dengan kromatografi kapiler gas-cair (GLC) sebagai
etnis, jenis kelamin, usia, dan indeks massa tubuh (BMI)
yang ditambahkan ke dalam dijelaskan sebelumnya (23), menggantikan toluene untuk benzena dan
model sebagai kovariat untuk menyesuaikan
kemungkinan efek pembaur. menggunakan asam pentadecanoic sebagai standar internal (25).Ukur
Interaksiantara mode SNP genotipe dan dosis EPA +
DHA KASIH konsentrasi lipid plasma sebagaimana telah dijelaskan sebelumnya
dieksplorasi dengan menambahkan istilah interaksi
dengan beberapa linear (26), dan koefisien interassay variasi adalah sebagai sebelumnya
model regresi. Hubungan antara proporsi LC-PUFA
dilaporkan (23). Kami perkiraan pengganti berdasarkan aktivitas desaturase
dalam plasma dan eritrosit phosphoglycerides dievaluasi
dengan pada produk: rasio substrat dari n-6 langkah LC-PUFA yang tersedia.
Koefisien korelasi (r) dengan signifikansi ditetapkan
pada P <Kami menggunakan AA: DGLA (20: 4n-6: 20: 3n-6) untuk memperkirakan aktivitas D5D
0,01 (uji dua sisi). Multivariat ANOVA digunakan
untuk memungkinkan (FADS1) dan GLA: LA (18: 3n-6: 18: 2n-6) untuk D6D (FADS2).
pengujian beberapa asosiasi genotipe dengan proporsi sembilan asam lemak dan univariat ANOVA untuk menguji genotipe
associa- PemilihanSNP
tionsdengan langkah-langkah pengganti kegiatan
desaturase tanpa ad- SNP yang dipilih telah diletakkan di dalam gen FADS1 dan FADS2 atau
justment untuk beberapa perbandingan. Signifikansi
diambil sebagai P <potensial 5 'atau 3' daerah peraturan dan LD kuat untuk memungkinkan
0,05 (seperti ditegaskan dalam ANOVA multivariat).
analisis haplotype (r
2>
0,8). Tinggi minor alel frekuensi (> 10%) yang diperlukan untuk penyelidikan interaksi diet-gen.
rs174537 (G / T) terletak 14 kb hulu dari gen FADS1 adalah sebagai- sociated dengan sinyal GWA terkuat dan menyumbang
hingga 19% dari variasi dalam asam arakhidonat plasma (AA, 20: 4n-6)
HASIL
(8) . rs174561 (T / C) terletak di intron 1 dari FADS1 dan rs3834458 (T / del) terletak di wilayah promotor FADS2.
Karakteristik subjek
data yang tersedia untuk analisis untuk 310 dari
367 partici- ekstraksi DNA dan SNP genotipe
Buffy coats dihapus dari sampel darah yang disimpan dalam EDTA pada 20 C. Genomik DNA diekstraksi dari 200 l
menggunakan darah lustra IL-genom persiapan Mini berputar kit (GE Healthcare,Amer-
celanaacak terhadap pengobatan. Jumlah celana partici- dialokasikan dan angka putus sekolah tidak berbeda
signifikan ficantly antara kelompok perlakuan (23) . Perempuan, sebagian besar pasca menopause, kalah jumlah
laki-laki sekitar 1,6: 1, sham, UK) sesuai dengan instruksi pabrik. Genotip
dan sekitar 20% dari sampel adalah kulit putih, dengan
serupa dilakukan pada 310 peserta untuk siapa DNA adalahavail-
proporsipeserta Asia dan hitam. Rata-rata mampu
dengan KBiosciences (Hoddesdon, UK), menggunakan Kaspar sistematis tem. Akurasi genotipe, sebagaimana dinilai oleh
masuknya duplikat di
BMI berada di atas kisaran yang diinginkan (20-25 kg / m
array, adalah 98%, dan kontrol negatif (kosong air) dimasukkan pada setiap lempeng. Rerata tingkat keberhasilan genotipe adalah
97,7 % (95,8-99,7%).
haplotype analisis
analisishaplotype dilakukan dengan menggunakan terface Java grafis di- dari paket perangkat lunak THESIAS (27) (tersedia
online di http://ecgene.net/genecanvas). Program ini didasarkan pada Model kemungkinan maksimum terkait dengan algoritma
SEM (28) dan digunakan untuk statistik merekonstruksi haplotype di perorangan- perorangan yang tidak terkait dan melakukan
analisis asosiasi berbasis haplotipe dari notypes yang fenomenal. efek haplotype kovariat-disesuaikan serta tindakan antar antara
haplotype dan kovariat dapat diselidikistatistik.
analisis
Semua distribusi genotipe yang diuji untuk penyimpangan dari Hardy-Weinberg equilibrium menggunakan
2),
dan rata-rata lingkar pinggang lebih besar dari cut-off,
menunjukkan risiko sindrom metabolik (94 cm pada pria dan 80 cm pada wanita) (23). Tabel 1 menunjukkan
karakteristik mata pelajaran, untuk siapa sampel DNA yang tersedia, setelah seminggu empat run-in pada plasebo.
Tidak ada ences signifikan berbeda- dalam langkah-langkah tersebut antara empat kelompok perlakuan pada awal (P>
0,05).
SNP alel dan frekuensi genotipe
Tiga SNP di FADS1 yang - FADS2 lokus, rs174537, rs174561, dan rs3834458 genotyped. Minor alel dan frekuensi
genotipe dalam semua mata pelajaran yang com- pleted penelitian (n = 310) ditunjukkan pada distribusi Genotipe
tambahan Tabel I. tidak menyimpang dari harapan Hardy- Weinberg, dan frekuensi alel minor adalah
2
uji dengan 1 df (P> 0,05). Interlocus linkage disequilibrium berdasarkan nomor diamati
dari diplotypes didirikan menggunakan software CubeX (29) (tersedia
dalam perjanjian dekat dengan orang-orang yang terdaftar untuk Eropa pada database NCBI SNP
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ proyek / SNP /, diakses Agustus 2010).
online di http://www.oege.org/software/cubex/) dan diwakili di lebih matriks korelasi sebagai Lewontin ini D 'dan kuadrat korelasi
r
2
langkah antara setiap pasangan SNP lokus . Analisis statistik dilakukan dengan menggunakanversi SPSS
asosiasi SNP genotipedengan plasma dan eritrosit variabel padadasar
langkah-langkah eritrositsebelumnya dikonfirmasi
silvikultur 17,0 untuk Windows (SPSS Inc, Chicago, IL).distribusi normal
Mentdari tingkat yang sama dari n-3 LC-PUFA dalam
semua pengobatan variabel hasil dievaluasi dengan plot QQ. Di mana diperlukan,
kelompok selama run-dalam pada plasebo dan
kepatuhan lebih variabel yang log-transformasi untuk mendapatkan perkiraan yang lebih baik
periode intervensi (23). Proporsi asam lemak dalam
distribusi normal sebelum analisis. Karena ukuran sampel yang terbatas, terutama setelah stratifikasi untuk asupan makanan,
asosiasi genotipe SNP analisis didasarkan pada model dikan inheri- dominan. Kehadiran perbedaan yang signifikan dalam tiga
frekuensi SNP genotipe antara empat kelompok perlakuan dipastikan oleh
2
tes dengan 6 df (P> 0,05). Regresi linier digunakan untuk menilai independen SNP dan haplotype asosiasi
plasma dan eritrosit phosphoglycerides sangat berkorelasi (P <0,01), kecuali untuk asam adrenic (22: 4n-6) (pelengkap
Tabel II), yang dengan cepat diambil dari plasma oleh eritrosit .
Tabel 2 menunjukkan komposisi total LC-PUFA dan kegiatan D5D dan D6D diperkirakan dalam plasma
dikelompokkan berdasarkan rs174537, dengan fenotipe dan interaksi dengan pengobatan diet. Semuadata,
rs174561 dan genotipe rs3834458 setelah empat minggu run-in
TABEL 1. Karakteristik sampel
Placebo 0,45 g / hari 0,9 g / hari 1,8 g / hari
Karakteristik n = 73 n = 82 n = 81 n = 82
Pria n (%) 31 (35) 31 (38) 30 (37) 31 (38) Perempuan n (%) 42 (48) 51 (62) 51 (63) 51 (62) Umur BMI (y) (kg / m
2
) 55,37 6,96 55,00 6,79 55,16 6,56 55,02 6,65 26,24 3,72 25,12 3,86 26,13 4 25,22 asam lemak 3,49 Plasma%
dari total
asam linoleat (18: 2n-6) 26,99 4,02 27,54 3,62 27,69 4,14 27,83 3.91 asam -Linolenic (18: 3n-6) 0,47 0,16 0,43 0,18
0,45 0,16 0,46 0,18 asam Dihomo- -linolenic (20: 3n-6) 1,62 0,37 1,58 0,32 1,59 0,29 1,63 0,36 Arachidonic acid (
20: 4n-6) 6.91 1.61 6.74 1.43 7.12 1.69 6.84 1.36 asam Adrenic (22: 4n-6) 0,60 0,15 0,57 0,13 0,61 0,14 0,60
0,14 asam -Linolenic (18: 3n-3) 0,67 0,25 0,61 0,17 0,66 0,20 0,64 0,20 asam eicosapentaenoic (20: 5n-3) 1,22 0,74
1,10 0,60 1,12 0,57 1,10 0,56 Docosa Asam pentaenoic (22: 5n-3) 0,66 0,12 0,64 0,12 0,64 0,13 0,65 0,13 asam
Docosahexaenoic (22: 6n-3) 2,40 0,79 2,42 0,78 2,36 0,67 2,45 0,68 Plasma aktivitas desaturase
D5D (20: 4n -6: 20: 3n-6) 4,47 1,33 4,44 1,32 4,64 1,46 4,39 1,28 D6D (18: 3n-6: 18: 2n-6) 0,17 0,01 0,16 0,01 0,16
0,01 0,16 0,01 asam lemak eritrosit % Total
asam linoleat (18: 2n-6) 10,84 1,56 11,12 1,45 11,00 1,42 11,00 1,57
asam -Linolenic (18: 3n-6) - - - - Dihomo- asam -linolenic (20: 3n-6) 1,90 0,37 1,90 0,38 1,83 0,38 1,89 0,40
Arachidonic acid (20: 4n-6) 16,76 1,96 16,37 2,12 16,92 2,12 16,44 2,03 asam Adrenic (22: 4n-6) 2,78 1,01 2,91 1,03
2,99 2,18 2,79 0,66 asam -Linolenic (18: 3n-3) 0,19 0,12 0,20 0,20 0,18 0,10 0,18 0,13 asam eicosapentaenoic (20:
5n-3) 1,30 0,47 1,26 0,46 1,36 0,55 1,31 0,50 asam Docosapentaenoic (22 : 5n-3) 3,23 0,40 3,20 0,53 3,23 0,55
3,22 0,56 asam Docosahexaenoic (22: 6n-3) 6.52 1.57 6.47 1,34 6,32 1,50 6,48 1,51 eritrosit aktivitas desaturase
D5D (20: 4n-6: 20: 3n-6) 9.14 1,91 8,91 1,87 9,41 2,08 9,01 1,88 D6D ( 18: 3n-6: 18: 2n-6) - - - -
Pengukuran yang dilakukan pada awal setelah empat minggu run-in pada diet normal dengan suplemen plasebo ditampilkan
untuk setiap kelompok perlakuan EPA + DHA acak. Nilai adalah n (%) untuk pria / wanita atau rata-rata SD untuk semua variabel
lain dan tidak berbeda secara signifikan dengan alokasi pengobatan (P> 0,05).
diet normal dengan suplemen plasebo. Ada asosiasi nifikan sig- antara genotipe SNP dan tions proporsional asam
lemak plasma didasarkan pada model yang dominan setelah penyesuaian untuk etnis, gender, usia, dan BMI. Dalam
n-6 seri, alel minor dari semua SNP dikaitkan
TABLE 2. Proporsi asam lemak dan kegiatan desaturase dalam plasma dikelompokkan berdasarkan FADS1-FADS2 SNP
genotipe pada awal
rs174561 rs174537 rs3834458
GG GT + TT
P
TT TC + CC
P
TT Tdel + deldel
Fenotipe n = 151 n = 125
n = 160 n = 140 n = 160 n = 144 P Fatty acid% Total
18: 2n-6 27,17 3,86 27,61 4,09 0,17 27,00 3,83 27,85 4,10 0,016 27,24 3,88 27,58 4,04 0,26 18: 3n-6 0,52 0,17
0,42 0,15 1,90 10
8
20: 3n-6 1,53 0,28 1,70 0,36 3,85 10
8 0,51 0,16 0,41 0,16 4,56 10
8 0,51 0,16 0,41 0,15 4.96 10
5
20: 4n-6 7,62 1,53 6,27 1,21 7,56 10
6 1,53 0,27 1,70 0,36 5,29 10
6 1,54 0,27 1,70 0,37 1,52 10
1
6 22: 4n-6 0,60 0,15 0,56 0,14 0,007 0,60 0,15 0,56 0,14 0,05 0,61 0,15 0,56 0,14 0,002 18: 3n-3 0,63 0,19 0,66
0,20 0,13 0,62 0,19 0,67 0,21 0,018 0,61 0,17 0,67 0,21 0,008 20: 5n-3 1,21 0,65 1,02 0,51 0,003 1,21 0,67 1,01
0,48 0,004 1,18 0,64 1,03 0,53 0,023 22: 5n-3 0,68 0,12 0,61 0,11 4,47 x10
16 7.55 1.48 6.18 1.19 2,49 10
16 7.64 1.50 6.24 1.27 3,83 10
22: 6n-3 2,52 0,72 2,26 0,67 7 0,67 0,12 0,001 2,55 0,73 0,61 0,11 2,24 0,68 2,69 10 2.18 10
7 4 0,67 0,12 5
2,51 0,71 0,61 0,11 3,14 10
2,27 0,70
0,003 desaturase aktivitas
D5D
b
5,114 1.340 3.830 1,041 1,38 10
1
8 D6D
19 c
0,020 0,008 0,016 0,008 3,26 10
18 5,075 1,350 3,769 0,961 5,84 10
5,121 1,353 3,816 1,026 4,15 10
7
data menunjukkan rata-rata ( SD) untuk setiap LC -PUFA sebagai% dari total asam lemak dan berarti perkiraan pengganti
dari D5D dan aktivitas D6D berdasarkan rasio produk n-6: substrat sebuah
Signifikansi dari genotipe ( SD).
asosiasi dengan proporsi asam lemak sehubungan dengan SNP genotipe berdasarkan model yang
dominan diuji dengan multivariat ANOVA, menghasilkan nilai P dikoreksi untuk beberapa perbandingan. Signifikansi dari asosiasi
genotipe dengan kegiatan desaturase diuji dengan univariat ANOVA, menghasilkan nilai P tidak dikoreksi untuk beberapa
perbandingan. Semua nilai P disesuaikan dengan BMI, usia, jenis kelamin, dan etnis.
b
Kegiatan diperkirakan oleh 20: 4n-6: 20: 3n-6 rasio. c
Kegiatan diperkirakan oleh 18: 3n-6: 18: 2n-6 rasio.
7 0,020 0,008 0,016 0,008 6,05 10
8 0,020 0,008 0,016 0,008 4,20 10
http://www.jlr.org/content/suppl/2012/11/15/jlr.P032276 .DC1
.html
dengan proporsi yang lebih tinggi dari FADS1 substrat dihomo asam -linolenic (DGLA, 20: 3n-6) dan proporsi yang
lebih rendah dari produk FADS2 asam -linolenic (GLA, 18: 3n-6), produk AA FADS1 (20: 4n -6), dan asam adrenic
turunannya. Dalam n-3 keluarga, alel minor yangterkait secara signifikan
rumpongen, minyak ikan, dan aktivitas desaturase545
Volume546 Journal of Lipid Research 54, 2013
dengan proporsi yang lebih tinggi dari FADS1 substrat asam -linolenic (ALA, 18: 3n-3) dan proporsi yang lebih
rendah dari FADS2 asam eicosapentaenoic produk (EPA, 20: 5n-3) dan turunannya docosapentaenoic asam (DPA,
22: 5n-3) dan lakukan-asam cosahexaenoic (DHA, 22: 6n-3). Peningkatan substrat dan penurunan proporsi produk
hilir disimpulkan pengurangan kegiatan desaturase. Sejalan dengan ini servations ob-, pembawa alel minor dari ketiga
SNP menunjukkan asosiasi yang sangat signifikan dengan rendah esti- dikawinkan kegiatan D5D dan D6D
dibandingkan dengan homozigot umum.
Dalam eritrosit, DGLA adalah satu-satunya menunjukkan asosiasi LC-PUFA dengan genotipe dengan signifikansi
sebanding dengan yang di plasma (2,97 10
19
P 6,03 10
15).
Kegiatan D5D diperkirakan dalam eritrosit jauh lebih tinggi
daripada di plasma, refleksi dari proporsi yang lebih tinggi dari AA (16,5% vs 6,9%), tetapi semua alel minor terkait
dengan sig- aktivitas nificantly lebih rendah (1,60 10
21
P 2,68 10
16
). Kegiatan D6D tidak diperkirakan dalam eritrosit, seperti
GLA tidak terdeteksi. Data eritrosit disajikan dalam suplementasi Tabel mentary III.
Dalam pandangan asosiasi diamati dengan proporsi plasma LC-PUFA, kami meneliti hubungan dengan tions
concentra- kolesterol total plasma, LDL-C, HDL-C, ide triglycer-, dan kolesterol total: rasio HDL-C, tapi tidak ada
yang signifikan ( P> 0,05).
Rekonstruksi haplotipe
Salah satu dari serangkaian SNP di LD terkait dengan jenis fenotip berpotensi fungsional dan bisa menjadi asal dari
asosiasi dilihat dengan orang lain. Atau, semua SNP bisa di LD dengan situs fungsional yang tidak dikenal.
Kemungkinan ketiga ada, dimana varian yang tidak diketahui pada haplotipe yang sama di LD dengan situs fungsional
bisa ble responsi- untuk asosiasi dilihat dengan SNP dianalisis. Jadi, jika lotypes terjadi apa menunjukkan asosiasi
kuat dari SNP secara independen, sebuah varian yang tidak diketahui (s) bisa bertanggung jawab untuk asosiasi
disajikan ob-.
Gambar. 2. Berpasangan linkage disequilibrium D dan r
2
plot dari tiga SNP umum pada peserta penelitian MARINA (n = 282). Posisi
di bp untuk rs174537, rs174561, dan rs3834458 pada kromosom 11 yang akan ditampilkan. Berasal dari NCBI HapMap data Rilis
28 Tahap II + III Agustus 2010.
html
rekonstruksi statistik haplotipe di dividuals di- terkait, untuk siapa fase tidak diketahui, adalah mungkin ketika SNP
berada di LD kuat. Karena hanya rs174537 telah GenoTip diketik di NCBI HapMap trio (http:. //hapmap.ncbi.nlm
nih.gov/), kita tidak bisa menggunakan program NCBI Haploview untuk membangun LD berpasangan antara SNP
kami. Sebaliknya, kita menggunakan program secara online CubeX (lihat Metode) berdasarkan diplotypes tersedia
untuk 282 mata pelajaran MARINA. LD kuat dikonfirmasi; berpasangan kuadrat korelasi r
2
berkisar 0,83-0,99, dan Lewontin ini D' 0,98-1,00 (Gbr. 2).
Rekonstruksi haplotipe dari tiga SNP didasarkan pada peserta untuk siapa semua genotipe yang avail- mampu
menghindari kesalahan yang dihasilkan dari data yang hilang. Dalam hal ini, komposisi asam lemak dalam plasma
dan eritrosit phosphoglycerides yang tersedia untuk masing-masing 250 dan 244 dan diperkirakan kegiatan desaturase
untuk 254 jects sub. Tujuh dari delapan haplotipe mungkin yang repre- sented, dengan frekuensi mulai dari 0,2%
menjadi 69,3% (pelengkap Tabel IV). Yang paling umum (haplotipe 1) dilakukan alel utama GTT sama sekali lokus
(fre- quency 69,3%). Berikutnya yang paling sering (haplotype 2) dilakukan alel minor TC-del sama sekali lokus
(frekuensi 25,8%).
Asosiasi haplotype dengan plasma dan eritrosit variabel pada awal
Pentingnya asosiasi haplotype dengan plasma dan eritrosit fenotipe dan proporsi varians dijelaskan oleh tiga
haplotipe yang paling sering, Account ing untuk 98,4% dari total ditunjukkan pada tambahan Tabel V. Plasma LC-
PUFA terkait dengan genotipe SNP independen (Tabel 2) juga dikaitkan dengan lotype terjadi apa, dengan tingkat
yang sama signifikansi. Variabilitas dalam proporsi asam lemak menjelaskan berkisar antara 26,06% untuk AA
menjadi 2,88% untuk ALA. Arti penting dari berorganisasi antara haplotype dan diperkirakan D5D desatu- aktivitas
rase (P = 2,19 10
17)
adalah sama dengan yang untuk
18 SNP tunggal (5,84
10)(Tabel 2). Namun, pentingnya hubungan haplotype dengan
perkiraan aktivitas D6D desaturase (P = 3,39 10
28)
adalah jauh lebih besar daripada mereka dengan SNP tunggal
(6,05 10
8
P 4.20 10
7).
Di antara LC-PUFA di phosphoglycerides eritrosit, DGLA menunjukkan sejauh asosiasi terkuat dengan
jenis haplo-, akuntansi untuk proporsi yang jauh lebih besar dari varian yang dibandingkan plasma (34,6%
dibandingkan dengan 10,9%). Signifikansi hubungan antara haplotype dan aktivitas D5D desaturase diperkirakan
dalam eritrosit (P = 2,01 10
19)
adalah sama dengan yang untuk SNP tunggal (1,60 10
21
P 2,68 10
16).
Tidak ada asosiasi haplotype dengan trations konsentrasi- lipid plasma yang signifikan (P> 0,05).
Karena jumlah yang relatif kecil dari subyek dengan lengkap genotipe dan fenotipe data (n = 244-256), hanya dua
haplotipe dengan frekuensi yang diharapkan lebih besar dari 5% dimodelkan untuk menentukan haplotipe fects-upaya.
Tabel 3 menunjukkan efek pada fenotipe dari satu salinan haplotype 2 dibandingkan dengan referensi haplotype 1.
Efek yang paling signifikan dari haplotype 2 kereta terlihat pada peningkatan proporsi plasma DGLA dan de- berkerut
GLA, AA, DPA, dan DHA. Pengangkutan haplotype 2 secara signifikan menurun perkiraan plasma kegiatan D5D
dan D6D dibandingkan dengan haplotype 1. Dalam eritrosit, hanya peningkatan DGLA dan penurunan aktivitas D5D
sehubungan dengan haplotipe 1 adalah signifikansi sebanding.
TABEL 3. Selisih proporsi plasma dan lemak eritrosit asam dan aktivitas desaturase per salinan kecil alel haplotype
dibandingkan dengan mengacu pada awal
Plasma Eritrosit
haplotype 1 Referensi
suatu
haplotype 1 Referensi
haplotype2
1-1-1 2-2-2 1-1 -1 2-2-2
haplotype Frekuensi% 68,4 27,2 68,4 27,2
Intercept
haplotype 2 a
b
Perbedaan (95% CI)
c
P
d
Intercept
b
Perbedaan (95% CI)
c
P
d
asamFatty
18: 2n-6 20,700 0,627 (- 0,080-1,333) 0,08 7,544 0,304 (0,033-0,575) 0,03 18: 3n-6 0,108 0,090 (-0,122 - -0,057) <1,0 10
6 - - - 20: 3n-6 0,489 0,136 (0,076-0,196) 8,0 10
6
20: 4n-6 3.250 1,138 (-1,425 - -0,851) <1,0 10
6 0,973 6 7,495 0,317 (0,264-0,370) <1,0 10
0,651 (1,059-0,244) 0,002 22:
4n-6 0,415 0,036 (-0,064 - -0,009) 0,01 1,442 0,173 (0,618-0,272) 0,45 18: 3n-3 0,347 0,045 (0,008-0,083) 0,02 0,161 0,011
(0,026-0,048) 0,57 20: 5n-3 22: 5n-3 0,144 0,287 0,178 (-0,307 - -0,050) 0,055 (-0,078 - -0,032) 0,007 2,0 10
6 0,325 1,493 0,100 (0. 197-0,003) 0,04 0,128 (0,240-0,016) 0,03 22: 6n-3 1,129 0,259 (-0,395 - -0,123) 1,9 10
4 2,960 0,336 (0,638-0,034) 0,03 desaturase
aktivitas
D5D D6D
e
f
2,925 0,000 1,003 (-1,242 - -0,765) 0,003 (-0,005 - -0,002) <1.0 5 10
10
6 6 4,052-1,469 (1,758-1,180) <1,0 10
6--
efek haplotype berdasarkan subyek dengan tidak ada data genotipe yang hilang: asam lemak plasma n = 250, asam lemak
eritrosit n = 244; D5D dan D6D desaturase sebuah
alel aktivitas haplotype n = 254.
di rs174537 rangka - rs3834458 rs174561-. 1 = alel utama; 2 = minor alel. b
mencegat adalah proporsi asam lemak (% dari total) atau kegiatan desaturase (diperkirakan oleh rasio asam lemak) terkait
dengan satu salinan haplotype 1 (alel utama 1 pada setiap lokus).
c
Berarti perbedaan (95% CI) berkaitan dengan kenaikan atau penurunan proporsi asam lemak atau kegiatan desaturase
dikaitkan dengan kereta dari satu salinan haplotype 2 (minor alel 2 pada setiap lokus) dibandingkan dengan satu salinan dari
referensi haplotype 1.
d
nilai P disesuaikan dengan BMI, usia, jenis kelamin, dan etnis. e
Aktivitas diperkirakan oleh 20: 4n-6: 20: 3n-6 rasio. f
Kegiatan diperkirakan oleh 18: 3n-6: 18: 2n-6 rasio. Tidak ada data yang tersedia untuk eritrosit.
Bahan tambahan dapat ditemukan di:
.html
19
P 4,5 10
Perubahan proporsi LC-PUFA dan kegiatan desaturase di plasma dan eritrosit setelah pengobatan EPA +
DHA
pada bagian kedua dari penelitian kami, kami menyelidiki efek pada plasma dan eritrosit fenotip dari pemikiran
suplementasi diet dengan EPA dan DHA (1,51: 1) selama enam bulan. Kami pertama kali dinilai perubahan dalam
proporsi dari LC-PUFA, esti- dikawinkan kegiatan desaturase, dan lipid plasma. Kami kemudian ditentukan apakah
asosiasi genetik terlihat pada awal yang dipengaruhi oleh pengobatan.
Seperti terlihat pada Tabel 4, ada perubahan yang signifikan setelah perawatan dalam proporsi semua fatty acid
plasma LC-Pu- kecuali asam adrenic, yang dengan cepat diambil dari plasma oleh eritrosit. Proporsi semua lainnya n-
6 LC-PUFA secara signifikan menurun, dan semua n-3 PUFA LC- meningkat secara signifikan. Ada peningkatan
yang signifikan dalam D5D dan penurunan signifikan dalam aktivitas D6D setelah suplementasi. Tidak ada perubahan
signifikan dalam konsentrasi lipid plasma setelah pengobatan.
Ada perubahan signifikan dalam proporsi semua LC-PUFA kecuali ALA di IDE eritrosit phosphoglycer- setelah
pengobatan. Proporsi semua lainnya n-3 LC-PUFA meningkat secara signifikan, dan n-6 LC-PUFA secara signifikan
menurun. Perubahan dalam estimasi aktivitas D5D dalam eritrosit hampir tidak signifikan pada P <0,05. Data eritrosit
ditunjukkan pada tambahan Tabel VI.
Rumpon gen, minyak ikan, dan aktivitas desaturase 547
http://www.jlr.org/content/suppl/2012/11/15/jlr.P032276. DC1
.html
TABLE 4. Change in proportion of fatty acids and desaturase activities in plasma stratified by treatment group after 6 months
randomized treatment
Placebo 0.45 g/day 0.9 g/day 1.8 g/day
n = 73 n = 82 n = 81 n = 82 P
a
Fatty acid % total
18:2n-6 18:3n-6 0.23 0.41 0.31 0.32 0.85 0.36 0.00 0.02 0.03 0.01 0.06 0.02 1.30 0.27 0.14 0.02 0.016
8.77 10
9 20:3n- 6 20:4n-6 0.02 0.03 0.12 0.02 0.19 0.03 0.12 0.12 0.32 0.09 0.53 0.10 0.47 0.03 0.87 0.12 3.26 10 1.86
10
26
5 22:4n-6 0.00 0.01 0.00 0.01 0.01 0.01 0.03 0.01 0.215 18:3n-3 0.05 0.03 0.03 0.02 0.02 0.02 0.04 0.02 0.008
20:5n-3 22:5n-3 0.23 0.07 0.73 0.08 1.24 0.08 0.03 0.01 0.10 0.01 0.14 0.02 2.75 0.13 0.28 0.02 3.86 10 1.47
10
65
37 22:6n-3 0.14 0.05
0.45 0.06 1.00 0.07 1.60 0.08 4.16 10
52 Desaturase
activity
D5D D6D
b
c
0.10 0.10 0.160 0.160 0.275 0.275 0.000 0.000 0.001 0.001 0.002 0.002 1.019 1.019 0.004 0.004 4.00 10 7.56
10
9
6
Data show mean change ( SE) for each LC-PUFA as a % of total fatty acids and change in mean surrogate estimates of D5D
and D6D activities based on ratio of n-6 product:substrate ( SE) with respect to baseline values. Changes after six months on
placebo or EPA+DHA supplements are shown for each randomized treatment group.
a
Significance of difference in change in proportions of fatty acids with respect to baseline between treatment groups was tested
by multivariate ANOVA, yielding P values corrected for multiple comparisons. Significance of difference in change in desaturase
activities was tested by univariate ANOVA, yielding P values uncorrected for multiple comparisons. All P values adjusted for BMI,
age, gender, and ethnicity.
b
Activity estimated by 20:4n-6:20:3n-6 ratio. c
Activity estimated by 18:3n-6:18:2n-6 ratio.
DISCUSSION SNP
associations with plasma and erythrocyte variables after dietary intervention
There were no significant differences in SNP genotype frequencies between the four treatment groups: rs174537
2
= 6.79, 6 df, P = 0.34; rs174561
2
= 9.62, 6 df, P = 0.14; rs3834458
2
= 9.00, 6 df, P = 0.17. We found no significant differences in LC-PUFA proportions be-
tween common homozygotes and carriers of the minor allele of any of the three SNPs in any treatment group ( P >
0.05). There were also no effects on plasma lipids dependent on genotype and dose. However, there were significant
effects of treatment on estimations of desaturase activity when stratified by genotype. Carriers of the rs174537 minor
T-allele had significantly lower D5D activity than GG subjects in the placebo group, but with increasing dosage,
activity increased significantly in
In this sample of healthy subjects, we have shown that genotypes of three SNPs in the FADS1-FADS2 gene cluster
were strongly associated with proportions of LC-PUFAs and desaturase activities estimated in plasma and erythro-
cytes. Minor allele carriage associated with decreased activity of D5D (FADS1) and D6D (FADS2) was reflected
in increased proportions of substrates and decreased products in n-6 and n-3 LC-PUFA synthetic pathways. SNP
and haplotype associations with LC-PUFA proportions and D5D desaturase activity of similar significance
suggested that the analyzed SNPs were in LD with a potential functional site. However, D6D activity was much
more strongly associated with haplotype than with single SNPs, suggesting that an unknown variant on the same
haplotype might T-carriers ( P = 3.2 10
10
in plasma, P = 4.3 10
4
in
be influential. We have shown that increasing
dosage of erythrocytes) but not in GG homozygotes ( P = 0.11
EPA and DHA in a randomized controlled trial
reduced in plasma, P = 0.76 in erythrocytes) as shown in Fig. 3 .
n-6 and increased n-3 LC-PUFA proportions and
that D5D Interaction between rs174537 genotype and intake as a
desaturase activity increased. SNP genotypes did
not inter- determinant of D5D activity was significant at the P <
act with treatment in determination of LC-PUFA
propor- 0.05 level ( P = 0.05 for plasma and P = 0.02 for erythro-
tions, but interaction was a significant determinant
of D5D cyte estimates) after adjustment for age, BMI, ethnicity,
activity. gender, and D5D activity at baseline but
before correc-
The composition of fatty acids in the tissues
reflects the tion for multiple comparisons. After correction, interac-
dietary fat composition, but individual differences
reflect tion remained significant for the plasma estimate ( P =
genetic control of metabolic efficiency. The D5D
and D6D 0.05) but not for the erythrocyte measure ( P = 0.20).
genes FADS1 and FADS2 are important regulators
of LC- Interaction between treatment and rs174561 genotype
PUFA synthesis, evidenced by the extremely high
geneti- was not significant ( P > 0.05). Interaction with rs3834458
cally explained variance of AA ( 8 ). As in other
investigations genotype was significant for the determination in plasma
( 15, 17 ), we used separate surrogate estimates of
D5D and before correction for multiple testing ( P = 0.05) but not
D6D activities based on ratios of LC-PUFA
product:substrate after correction ( P = 0.15). There was no significant in-
in the n-6 pathway to assess the influence of
FADS genetic teraction between any of the SNP genotypes and treat-
variants. We confirmed highly significant
association of ment in determining D6D activity.
FADS SNP minor alleles with a reduction in desaturase
Fig. 3. Association between rs174537 and D5D activity stratified by intake of EPA+DHA. D5D activity was estimated by ratio of
(AA:DGLA) (20:4n-6:20:3n-6) in (A) plasma ( n = 284) and (B) erythrocytes ( n = 286). Carriers of the minor T-allele had lower
D5D activity estimated from ratio in plasma ( P = 0.05) and erythrocytes ( P = 6.96 10
7
) compared with GG in the placebo group ( n = 65 plasma, n = 66 erythrocytes). After treatment, D5D
activity showed a significant increase with dosage in T-allele carriers ( P = 3.2 10
10
in plasma and P = 4.3 10
4
in erythrocytes), but not in GG homozygotes ( P = 0.11 and P = 0.76, respectively).
Interaction between genotype and dosage as a determinant of D5D activity determined by univariate ANOVA, yielding P values
uncorrected for multiple comparisons, was significant at P < 0.05 ( P = 0.05 plasma; P = 0.02 erythrocytes). Interaction determined
by multivariate ANOVA, yielding P values corrected for multiple comparisons, remained significant for the plasma estimate ( P
= 0.05) but not for the erythrocyte measure ( P = 0.20).
activities estimated in plasma and erythrocytes. This may indicate a decline in gene transcription and/or enzyme
conversion rates in carriers and would result in the increased substrate and decreased product proportions generally
observed. At baseline, we found several highly significant SNP minor allele associations with increased proportions
of substrates and decreased proportions of products in plasma and a strong association with increased DGLA in
erythrocytes. Previous studies have shown association of several SNPs in this region with LC-PUFAs in plasma ( 4,
914 ) and erythrocyte membranes ( 4, 8, 1012, 15 ), although most did not find associations with proportions of
Supplemental Material can be found at:
.html
DHA, for which sources are thought to be mainly nutritional ( 9 ). The higher D5D activity in erythrocytes than in
plasma may have reflected a preferential incorporation of AA into erythrocyte membrane phosphoglycerides. Re- cent
GWA studies have also identified several genetic loci in the FADS gene cluster that are associated with blood lipid
levels ( 1821 ). However, we were unable to replicate previously reported associations with plasma lipids, par-
ticularly LDL-cholesterol ( 13, 22, 30 ). This most likely re- lates to the fact that lipids are distal phenotypes that are
influenced by many genes and environmental factors in addition to desaturase activity, and our study sample lacked
the power to detect significant FADS genotype associations at baseline. As expression is highest in the liver ( 5, 6 ),
a contribution of FADS1 and FADS2 genetic variation to plasma cholesterol metabolism seems likely.
The FADS1 and FADS2 genes have inverse orientation as a cluster on chromosome 11, with exon 1 of both genes
separated by an 11 kb region ( 3 ). The proximity of the promoters suggests that their transcription may be coordi-
nately controlled by common regulatory sequences ( 31 ). Common genetic variants at the FADS1 - FADS2 locus are
in a strong LD block spanning FADS1 and the intergenic region ( 4, 8, 9 ) so that any functional polymorphisms
within the block could influence expression of both desaturases. However, our haplotype analysis suggests that control
of D5D and D6D activity may have different genetic origins. SNP rs3834458 sited 5 to FADS2 is a good candidate,
but an effect on promoter activity has not been established ( 32 ). Proportions of fatty acids and D5D activity in plasma
and erythrocytes associated with single SNPs at baseline were also associated with the minor allele haplotype with
similar levels of significance. The analyzed SNPs seem therefore to be LD markers of a site influencing D5D activ-
ity. However, the significance of haplotype association with D6D activity was substantially greater than that of single
SNPs, suggesting that unknown functional SNPs or possi- bly more than one causal variant on the haplotype influ-
ences D6D. Further support comes from a recent GWA study of gene expression, in which rs174546 in LD with our
analyzed SNP rs174537 ( r
2
= 0.99) was associated with FADS1 ( P = 1.6 10
6
) but not FADS2 ( P = 0.07) expression in lymphoblastoid cells ( 33 ).
As enzymes of the synthetic pathways show a higher af- finity for n - 3 than n-6 PUFA, the effect of treatment with
EPA+DHA was to increase competition from derivatives of the n-3 LC-PUFA supplements and decrease proportions
of the n-6 series. The significant increase in D5D activity after treatment reflected a greater reduction in the product
AA than in the substrate DGLA. Modulations of the activities of D5D and D6D by intakes of EPA+DHA have been
detected in previous controlled intervention studies ( 34, 35 ). Interaction between intake of n-3 PUFA or fatty fish
and FADS genotypes has been established in larger studies by some ( 30 ) but not by others ( 7, 13, 36 ). Interac- tion
between genotype and treatment as a determinant of LC-PUFA proportions was not significant in plasma or
erythrocytes in our study, most likely owing to insufficient power. For example, to demonstrate a significant difference
FADS genes, fish oil, and desaturase activity 549
in proportion of plasma AA with respect to rs174537 genotype across treatments based on a dominant model, a total
sample size of 941 would be required for = 0.05 and a power of 0.95. To demonstrate a significant difference based
on an additive model, a total sample size of 1,240 would be required. However, we did find that interaction was a
significant determinant of D5D activity estimated in plasma, which increased significantly with dose in variant allele
carriers with virtually no change in the common homozygotes. The effect in erythrocytes appeared even more
pronounced, but it was not significant after correction for multiple comparisons. D6D activity decreased significantly
with treatment, but not after stratification by genotype. LC-PUFAs have previously been shown to downregulate D6D
and increase D5D activity in controlled dietary studies ( 37 ).
The greatest strength of our study was the strict control of the intakes of EPA and DHA, shown to be correlated
with plasma proportions. Long-term compliance was established by measures in erythrocytes. Although we accounted
for multiple testing by using multivariate ANOVA, the best insurance that our results are not due to chance lies in rep-
lication in an independent sample. However, most associations between LC-PUFA proportions and FADS variants
at baseline were highly significant after correction for multiple comparisons and agree with findings in larger studies.
The main limitation was the relatively small sample of subjects for genetic analysis ( n = 310), which reduced the
power to detect some significant genotype associations with phenotypes and interactions with diet. Location of the
three SNPs within a strong LD block on the one hand makes identification of the cause of the observed associations
dif- ficult, but on the other hand, high correlation between genotypes enabled haplotype reconstruction and analysis.
Like other investigators, we used LC-PUFA ratios as surrogate desaturase activities, because direct measures are not
possible in population studies.
In summary, we have confirmed that FADS polymorphisms are an important regulator of LC-PUFA synthesis
through high genetically explained variance of several fatty acids. Haplotypes carrying three SNP minor alleles were
associated with lower D5D and D6D activity, suggesting that any could be in linkage disequilibrium with a functional
SNP. However, this study has raised the pos- sibility that another variant on the same haplotype might have more
influence on D6D activity than the studied SNPs. In this relatively small sample, we have demon- strated significant
interaction between dietary n-3 LC- PUFA intake and rs174537 genotype as a determinant of D5D activity, with
potential effects on the composition of LC-PUFA depots and implications for health. Develop- ment of individualized
strategies to reduce the risk of diseases linked to fatty acid disturbances will require evidence from well-powered
replicated studies with accurate dietary data.
.html
The authors are grateful to CRODA Europe Ltd (Hull, East Yorkshire, UK) for formulating and supplying the oils for the
intervention. The provider had no role in the design and
implementation of the study or analysis and interpretation of the data. MA was supported by a PhD studentship from the
Government of Kuwait. AA was supported by a PhD studentship from the Saudi Arabian Ministry of Higher Education.
REFERENCES
1 . Calder , PC 2005 . Polyunsaturated fatty acids and inflammation.
Biochem. Soc. Trans. 33 : 423 427 . 2. Nikkari , T. , P. Luukkainen , P. Pietinen , and P. Puska . 1995 . Fatty acid
composition of serum lipid fractions in relation to gender and quality of dietary fat. Ann. Med. 27 : 491 498 . 3. Lattka , E. , T.
Illig , B. Koletzko , and J. Heinrich . 2010. Genetic variants of the FADS1 FADS2 gene cluster as related to essential fatty acid
metabolism. Curr. Opin. Lipidol. 21 : 64 69 . 4. Martinelli , N. , D. Girelli , G. Malerba , P. Guarini , T. Illig , E. Trabetti , M.
Sandri , S. Friso , F. Pizzolo , L. Schaeffer , et al . 2008 . FADS genotypes and desaturase activity estimated by the ratio of
arachidonic acid to linoleic acid are associated with inflammation and coronary artery disease. Saya. J. Clin. Nutr. 88 : 941 949
. 5 . Cho , HP , MT Nakamura , and SD Clarke . 1999 . Cloning, expression, and nutritional regulation of the mammalian delta-
6 desaturase. J. Biol. Chem. 274 : 471 477 . 6 . Cho , HP , M. Nakamura , and SD Clarke . 1999 . Cloning, expression, and
fatty acid regulation of the human delta-5 desaturase. J. Biol. Chem. 274 : 37335 37339 . 7 . Lemaitre , RN , T. Tanaka , W.
Tang , A. Manichaikul , M. Foy , EK Kabagambe , JA Nettleton , IB King , LC Weng , S. Bhattacharya , et al. 2011 . Genetic
loci associated with plasma phospholipid n-3 fatty acids: a meta-analysis of genome-wide association studies from the CHARGE
Consortium. PLoS Genet. 7 : e1002193 . 8 . Tanaka , T. , J. Shen , GR Abecasis , A. Kisialiou , JM Ordovas , JM Guralnik , A.
Singleton , S. Bandinelli , A. Cherubini , D. Arnett , et al . 2009 . Genome-wide association study of plasma polyunsaturated fatty
acids in the InCHIANTI Study. PLoS Genet. 5 : e1000338 . 9 . Schaeffer , L. , H. Gohlke , M. Mller , IM Heid , LJ Palmer , I.
Kompauer , H. Demmelmair , T. Illig , B. Koletzko , and J. Heinrich . 2006 . Common genetic variants of the FADS1 FADS2
gene cluster and their reconstructed haplotypes are associated with the fatty acid composition in phospholipids. Bersenandung.
Mol. Genet. 15 : 1745 1756 . 10 . Rzehak , P. , J. Heinrich , N. Klopp , L. Schaeffer , S. Hoff , G. Wolfram , T. Illig , and J.
Linseisen . 2009 . Evidence for an association between genetic variants of the fatty acid desaturase 1 fatty acid desaturase 2
(FADS1 FADS2) gene cluster and the fatty acid composition of erythrocyte membranes. Br. J. Nutr. 101 : 20 26 . 11 . Malerba
, G. , L. Schaeffer , L. Xumerle , N. Klopp , E. Trabetti , M. Biscuola , U. Cavallari , R. Galavotti , N. Martinelli , P. Guarini , et
al . 2008 . SNPs of the FADS gene cluster are associated with polyunsaturated fatty acids in a cohort of patients with
cardiovascular disease. Lipids . 43 : 289 299 . 12 . Xie , L. , and SM Innis . 2008 . Genetic variants of the FADS1 FADS2
gene cluster are associated with altered (n-6) and (n-3) essential fatty acids in plasma and erythrocyte phospholipids in women
during pregnancy and in breast milk during lactation. J. Nutr. 138 : 2222 2228 . 13 . Lu , Y. , EJ Feskens , ME Doll , S.
Imholz , WM Verschuren , M. Mller , and JM Boer . 2010. Dietary n-3 and n-6 polyunsaturated fatty acid intake interacts with
FADS1 genetic variation to affect total and HDL-cholesterol concentrations in the Doetinchem Cohort Study. Saya. J. Clin.
Nutr. 92 : 258 265 . 14 . Merino , DM , H. Johnston , S. Clarke , K. Roke , D. Nielsen , A. Badawi , A. El-Sohemy , DW Ma ,
and DM Mutch . 2011 . Polymorphisms in FADS1 and FADS2 alter desaturase activity in young Caucasian and Asian adults.
Mol. Genet. Metab. 103 : 171 178 . 15 . Zietemann , V. , J. Krger , C. Enzenbach , E. Janzen , A. Fritsche , C. Weikert , H.
Boeing , and MB Schulze . 2010. Genetic variation of the FADS1 FADS2 gene cluster and n-6 PUFA composition in eryth-
rocyte membranes in the European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition-Potsdam study. Br. J. Nutr. 104 : 1748
1759 . 16 . Baylin , A. , E. Ruiz-Narvaez , P. Kraft , and H. Campos . 2007 . alpha- Linolenic acid, Delta6-desaturase gene
polymorphism, and the risk of nonfatal myocardial infarction. Saya. J. Clin. Nutr. 85 : 554 560 .
17 . Bokor , S. , J. Dumont , A. Spinneker , M. Gonzalez-Gross , E. Nova , K. Widhalm , G. Moschonis , P. Stehle , P. Amouyel ,
S. De Henauw , et al , and HELENA Study Group . 2010. Single nucleotide polymorphisms in the FADS gene cluster are
associated with delta-5 and delta-6 desaturase activities estimated by serum fatty acid ratios. J. Lipid Res. 51 : 2325 2333 . 18 .
Aulchenko , YS , S. Ripatti , I. Lindqvist , D. Boomsma , IM Heid , PP Pramstaller , BW Penninx , AC Janssens , JF Wilson , T.
Spector , et al., and ENGAGE Consortium. 2009 . Loci influencing lipid levels and coronary heart disease risk in 16 European
population cohorts. Nat. Genet. 41 : 47 55 . 19 . Sabatti , C. , SK Service , AL Hartikainen , A. Pouta , S. Ripatti , J. Brodsky ,
CG Jones , NA Zaitlen , T. Varilo , M. Kaakinen , et al . 2009 . Genome-wide association analysis of metabolic traits in a birth
cohort from a founder population. Nat. Genet. 41 : 35 46 . 20 . Chasman , DI , G. Par , S. Mora , JC Hopewell , G. Peloso , R.
Clarke , LA Cupples , A. Hamsten , S. Kathiresan , A. Mlarstig , et al . 2009 . Forty-three loci associated with plasma
lipoprotein size, concentration, and cholesterol content in genome-wide analysis. PLoS Genet. 5 : e1000730 . 21 . Kathiresan , S.
, CJ Willer , GM Peloso , S. Demissie , K. Musunuru , EE Schadt , L. Kaplan , D. Bennett , Y. Li , T. Tanaka , et al . 2009 .
Common variants at 30 loci contribute to polygenic dyslipidemia. Nat. Genet. 41 : 56 65 . 22 . Nakayama , K. , T. Bayasgalan ,
F. Tazoe , Y. Yanagisawa , T. Gotoh , K. Yamanaka , A. Ogawa , L. Munkhtulga , U. Chimedregze , Y. Kagawa , et al. 2010. A
single nucleotide polymorphism in the FADS1/ FADS2 gene is associated with plasma lipid profiles in two genetically similar
Asian ethnic groups with distinctive differences in life- style. Bersenandung. Genet. 127 : 685 690 . 23 . Sanders , TA , WL
Hall , Z. Maniou , F. Lewis , PT Seed , and PJ Chowienczyk . 2011 . Effect of low doses of long-chain n-3 PUFAs on endothelial
function and arterial stiffness: a randomized controlled trial. Saya. J. Clin. Nutr. 94 : 973 980 . 24 . Sanders , TA , F. Lewis ,
S. Slaughter , BA Griffin , M. Griffin , I. Davies , DJ Millward , JA Cooper , and GJ Miller . 2006 . Effect of varying the ratio of
n-6 to n-3 fatty acids by increasing the dietary intake of alpha-linolenic acid, eicosapentaenoic and docosahexaenoic acid, or
both on fibrinogen and clotting factors VII and XII in per- sons aged 45-70 y: the OPTILIP study. Saya. J. Clin. Nutr. 84 : 513
522 . 25 . Lepage , G. , and CC Roy . 1988 . Specific methylation of plasma nonesterified fatty acids in a one-step reaction. J.
Lipid Res. 29 : 227 235 . 26 . Jebb , SA , JA Lovegrove , BA Griffin , GS Frost , CS Moore , MD Chatfield , LJ Bluck , CM
Williams , and TA Sanders , and
.html
RISCK Study Group . 2010. Effect of changing the amount and type of fat and carbohydrate on insulin sensitivity and
cardiovascular risk: the RISCK (Reading, Imperial, Surrey, Cambridge, and Kings) trial. Saya. J. Clin. Nutr. 92 : 748 758 . 27 .
Tregouet , DA , and V. Garelle . 2007 . A new JAVA interface implementation of THESIAS: testing haplotype effect in
association studies. Bioinformatics . 23 : 1038 1039 . 28 . Tregouet , DA , S. Escolano , L. Tiret , A. Mallet , and JL Golmard .
2004 . A new maximum likelihood algorithm for haplotype-based association analysis: the SEM algorithm. Ann. Bersenandung.
Genet. 68 : 165 177 . 29 . Gaunt , TR , S. Rodrguez , and IN Day . 2007 . Cubic exact solu- tions for the estimation of pairwise
haplotype frequencies: implications for linkage disequilibrium analyses and a web tool 'CubeX'. BMC Bioinformatics . 8 : 428 .
30 . Hellstrand , S. , E. Sonestedt , U. Ericson , B. Gullberg , E. Wirfalt , B. Hedblad , and M. Orho-Melander . 2012 . Intake
levels of dietary long-chain polyunsaturated fatty acids modify the association between genetic variation in FADS and LDL
cholesterol. J. Lipid Res. 53 : 1183 1189 . 31 . Nakamura , MT , and TY Nara . 2004 . Structure, function, and dietary
regulation of delta6, delta5, and delta9 desaturases. Annu. Rev. Nutr. 24 : 345 376 . 32. Lattka , E. , S. Eggers , G. Moeller , K.
Heim , M. Weber , D. Mehta , H. Prokisch , T. Illig , and J. Adamski . 2010. A common FADS2 promoter polymorphism
increases promoter activity and facilitates binding of transcription factor ELK1. J. Lipid Res. 51 : 182 191 . 33 . Dixon , AL , L.
Liang , MF Moffatt , W. Chen , S. Heath , KC Wong , J. Taylor , E. Burnett , I. Gut , M. Farrall , et al . 2007 . A genome-wide
association study of global gene expression. Nat. Genet. 39 : 1202 1207 . 34 . Zhou , L. , and A. Nilsson . 2001 . Sources of
eicosanoid precursor
fatty acid pools in tissues. J. Lipid Res. 42 : 1521 1542 . 35 . Vessby , B. , IB Gustafsson , S. Tengblad , M. Boberg , and A.
Andersson . 2002 . Desaturation and elongation of fatty acids and insulin action. Ann. NY Acad. Sci. 967 : 183 195 . 36 .
Molt-Puigmart , C. , J. Plat , RP Mensink , A. Mller , E. Jansen , MP Zeegers , and C. Thijs . 2010. FADS1 FADS2 gene
variants modify the association between fish intake and the docosahexaenoic acid proportions in human milk. Saya. J. Clin. Nutr.
91 : 1368 1376 . 37 . Vessby , B. , M. Uusitupa , K. Hermansen , G. Riccardi , AA Rivellese , LC Tapsell , C. Nlsn , L.
Berglund , A. Louheranta , BM Rasmussen , et al. 2001 . Substituting dietary for monounsatu- rated fat impairs insulin sensitivity
in healthy men and women: the KANWU study. Diabetologia . 44 : 312 319 .
FADS genes, fish oil, and desaturase activity 551

542 Journal of Lipid Research Volume 54

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

542 Journal of Lipid Research Volume 54

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

542 Journal of Lipid Research Volume 54, 2013

Variasi genetik pada lokus gen FADS1-FADS2

pasien berorientasi dan epidemiologi penelitian

Anda mungkin juga menyukai