Disusun Oleh:
Febrina Fatima Safitry
22010316140030
Terdapat berbagai metode untuk menganalisis vitamin A secara kuantitatif dalam sediaan
tablet, kapsul, krim, atau makanan. Berikut ini dilampirkan secara singkat metode analisis
vitamin A menurut beberapa literatur:
Menurut USP, apabila vitamin A berada didalam kapsul, tablet, krim, atau sediaan
apapun yang menghalangi terjadinya proses saponifikasi, maka sampel tersebut akan
direfluks dan diekstraksi terlebih dahulu sebelum disaponifikasi sehingga analisis dapat
dilakukan dengan pengotor seminimal mungkin.
II. Analisis Vitamin A menurut AOAC
Prinsip Vitamin ditentukan dengan bantuan saponifikasi. Bahan yang akan
dianalisis disaponifikasi dengan larutan kalium hidroksida etanol
berair dan vitamin yang dilepaskan kemudian diekstraksi
menggunakan petroleum eter. Setelah konsentrasi ekstrak, residu
dilarutkan dalam metanol dan isi vitamin A ditentukan menggunakan
HPLC-UV / VIS.
Metode ini didasarkan pada metode normal DIN EN 12823-1, DIN EN
12823-2 dan DIN EN 12822. Modifikasi berikut diterapkan:
- Untuk 13-cis retinol, tidak ada kalibrasi yang dilakukan
- Tidak ada faktor koreksi untuk HPLC yang berasal dari penilaian
kemurnian.
- Saponifikasi dilakukan dengan inkubasi 3 jam pada 50 ° C dalam
bak air dan inkubasi pada suhu kamar pada malam hari.
- Ekstraksi dilakukan hanya sekali dan dengan 150 ml bensin eter
- Netralisasi dilakukan hanya sekali dan dengan kira-kira. 400 ml
air
- Alikuot ekstrak yang ditentukan diuapkan pada alat pengering
pada suhu 48 ° C dengan nitrogen
- Determinasi hanya satu kali dilakukan. Penentuan hanya diulangi
jika diduga ada penyimpangan dari nilai yang diharapkan atau
kesalahan selama persiapan sampel.
Preparasi Penyiapan
Sampel Bahan sampel perlu dicacah dan dihomogenisasi dengan digiling jika
itu adalah sereal. Semua sampel lain pada umumnya tidak akan
memerlukan penggilingan kecuali jika tidak homogen atau
mengandung bahan butiran kasar.
Penimbangan
Semua sampel ditimbang ke dalam labu kaca 250 ml. Bobot awal tidak
boleh di bawah 0,5 g atau di atas 10 g untuk sampel padat. Setelah
ekstraksi, sampel harus diencerkan jika kandungan vitaminnya tinggi
(mis. Untuk campuran vitamin).
Berat awal umumnya disesuaikan dengan kandungan vitamin A dan
dipilih sedemikian rupa sehingga kandungan vitamin A dalam berat
awal setidaknya 0,01 mg, tetapi tidak lebih dari 0,05 mg.
Tabel berat berikut ini digunakan untuk panduan dalam pemilihan
berat awal:
Saponifikasi
Sampel awalnya disuspensikan dalam 20 hingga 40 ml air dan
dibiarkan sebentar.
Perhatian: Perhatian harus diberikan untuk memastikan tidak ada
gumpalan endapan yang terbentuk; sampel harus sepenuhnya dibasahi
dengan air. Sambil mengaduk labu, tambahkan 100 ml etanol, sekitar
1 g natrium askorbat atau asam L-askorbat dan 25 ml larutan kalium
hidroksida (60%) ke sampel yang disuspensikan. Labu alas datar
kemudian ditutup dengan sumbat kaca dan dikocok dengan kuat.
Campuran reaksi sekarang dipanaskan hingga titik didih dengan
refluks dalam penangas air yang telah dipanaskan sebelumnya hingga
80 - 90 ° C dan dipertahankan pada titik didih selama 30 menit di
bawah aliran nitrogen yang lambat.
Sebagai alternatif, sampel juga dapat dipanaskan selama 3 jam dalam
penangas air pada 50 ° C dan kemudian dibiarkan berdiri semalam
setelah saponifikasi selesai. Dalam hal ini, sampel disegel dengan
sumbat kaca.
Perhatian: Pastikan bahwa sambungan sendi kaca dari labu alas datar
benar-benar dibilas dengan air sebelum dipasang ke kondensor
refluks, karena jika tidak maka mungkin akan sangat sulit untuk
melepaskan labu dari kondensor refluks setelah penyerahan. Namun,
jika terlalu banyak air ditambahkan, maka saponifikasi tidak akan
berjalan sempurna. Setelah penyabunan, bilas kondensor dengan
sedikit air dan dinginkan isi labu hingga sekitar 15 ° C.
Perhatian: Jika tetesan minyak masih terlihat di permukaan campuran
saponifikasi setelah saponifikasi, maka tambahkan lebih banyak
larutan kalium hidroksida dan perpanjang durasi saponifikasi.
Ekstraksi
Larutan saponifikasi dipindahkan secara kuantitatif ke corong pisah
melalui pembilasan berganda dengan air. Untuk menghindari
pembentukan emulsi, air yang cukup ditambahkan ke larutan sampel
yang disabunkan untuk memastikan bahwa rasio alkohol / air dalam
hasil larutannya sekitar 1: 1. Setelah ini, 150,0 ml petroleum eter
ditambahkan dan vitamin diekstraksi dengan mengocok pengocok
mekanik sekitar. 10 menit.
Perhatian: Jumlah petrolum eter yang ditambahkan harus diukur
secara akurat.
Fasa berair dibiarkan mengalir dan dibuang setelah pemisahan fasa.
Tambahkan sedikit etanol untuk melarutkan emulsi jika fase berair dan
eter minyak bumi tidak terpisah.
Perhatian: Dua fase harus terpisah sebelum fase berair dibiarkan
mengalir. Solusi ekstraksi sekarang dicuci secara netral dengan air
murni melalui pengocokan berganda dan air pencuci dibiarkan
mengalir setelah fase terpisah.
Larutan ekstraksi disaring melalui filter pemisahan fasa ke dalam labu
volumetrik 50 ml untuk menghilangkan kemungkinan tetesan air
suspensi.
Pemekatan
Untuk vitamin A, 3,0 ml larutan ekstraksi dipipet ke dalam botol gelas
cokelat dan larutannya diuapkan hingga kering di bawah nitrogen pada
suhu 45 ° C dalam sistem penguapan.
Perhatian: Campuran vitamin dan sampel yang lebih terkonsentrasi
(lihat 8.2. Menimbang sampel) harus diencerkan sesuai sebelum
penguapan sampai kering. Setelah penguapan sampai kering, masing-
masing residu diambil dalam 1,0 ml metanol untuk penentuan vitamin
A. Solusi dipindahkan ke botol HPLC dan dapat digunakan untuk
penentuan.
Penentuan
Untuk tujuan ini, 50 μl sampel dan larutan standar (standar kerja A / E
6) disuntikkan ke kolom HPLC dan dielusi menggunakan campuran
metanol / air (98 + 2, v / v). Panjang gelombang diatur menjadi 326
nm. Gradien laju aliran digunakan untuk memastikan zat mengelusi
pada waktu retensi (8,5 menit) dan untuk sebagian besar
menghilangkan puncak matriks yang mengganggu (lihat 6. HPLC).
Komentar: Kondisi pemisahan HPLC harus dipilih sedemikian rupa
sehingga isomer dari all-trans retinol dan 13-cis-retinol digabungkan
dalam satu puncak.
Analisis Isomer dari all-cis retinol dan all-trans retinol dikombinasikan dalam satu
puncak dan jumlahnya adalah kandungan vitamin A.
Komentar: Semua sampel yang mengandung retinol palmitate dianalisis
menggunakan kalin retinol palmitat. Semua sampel lain yang
mengandung retinol atau retinol asetat dianalisis menggunakan kalibrasi
retinol.
Menurut AOAC, apabila vitamin A berada didalam tablet, krim, atau sereal maka
bentuk awalnya harus dihancurkan terlebih dahulu. Penghancurkan berguna untuk
memperkecil ukuran partikel sehingga memaksimalkan jumlah vitamin A pada saat
saponifikasi dan ekstraksi.
Jika pigmen kuning tidak ditemukan dalam ekstrak, suatu alikuot diuapkan sampai kering,
dipindahkan ke kloroform, dan vitamin A ditentukan dengan mengembangkan warna biru. Jika
ada pigmen kuning, 15 hingga 25 ml ekstrak diuapkan di bawah vakum parsial, dilarutkan
dalam heksana, dan dikromatografi dengan cepat pada kolom kecil alumina yang dilemahkan.
Vitamin A (sebagai retinol) dielusi dengan 15% aseton dalam heksana. Sampel
dikromatografi secara bersamaan dalam kolom 7 hingga 8 cm X 7 mm dalam 12 hingga 15
menit, hanya menggunakan 20 hingga 25 ml pelarut untuk elusi. Pigmen monohidroksi
biasanya dielusi bersama dengan vitamin A dan, jika perlu, koreksi kecil dapat dilakukan untuk
reaksi warna biru dengan mereka. Namun, jejak kuning dalam ekstraksi itu dapat diabaikan
kecuali kandungan vitamin A rendah. Polyhydroxy dan pigmen kuning teroksidasi tidak dielusi
dari kolom dengan prosedur ini.
Dalam sebuah studi kolaborasi metode AOAC vitamin A tahun 1972, 20 analis dengan
berbagai tingkat pengalaman, bekerja di berbagai laboratorium, menganalisis sereal sarapan
dan minuman sarapan bubuk. Koefisien variasi dari dua sampel masing-masing adalah 13%
dan 10%. Namun, nilai-nilai itu lebih baik dibandingkan dengan, dan pada kenyataannya lebih
baik daripada hasil studi kolaboratif vitamin A yang tidak dipublikasikan tetapi diketahui
tentang makanan atau makanan.
PERMASALAHAN
Sampling
Jika suatu produk makanan mengandung vitamin A yang didispesikan dalam cairan
seperti susu, atau vitamin A ditambahkan sebagai larutan atau emulsi berbasis air atau minyak,
dan jika didistribusikan secara merata dalam pencampuran akhir atau pengadukan dari total
makanan, maka pengambilan sampel disederhanakan. Dalam hal ini hanya sampel 1- hingga
10-g (tergantung pada kandungan vitamin A) dari bahan yang tercampur dengan baik
diperlukan untuk analisis. Pengambilan sampel produk kering, semi kering, atau
multikomponen tidak begitu sederhana. Prinsip umum pengambilan sampel analitik telah
dibahas secara rinci. Tetapi pengambilan sampel makanan untuk analisis vitamin A harus
sering melampaui petunjuk itu. Vitamin A ditambahkan ke beberapa makanan dengan
menyemprotkannya pada produk akhir segera sebelum pengeringan atau menambahkannya
hanya pada satu komponen, seperti isian kue, tetapi tidak ke komponen lain dari produk total.
Makanan tersebut harus digiling dan / atau dicampur. Jika itu menghasilkan produk seragam
yang terbagi halus, sampel 10 hingga 25-g mungkin memuaskan untuk analisis.
Keseragaman dapat diperiksa dengan membandingkan hasil pada sejumlah pengukuran
ulang dari sampel campuran yang sama. Jika hasilnya tidak menentu, pengukuran dengan
sampel yang lebih besar dapat mengatasi keterbatasan tersebut. Makanan yang lembab atau
lengket, seperti breakfast bar dan kue tar, tidak mudah digiling atau dicampur menjadi bahan
yang seragam dan halus. Untuk produk-produk tersebut, memilih beberapa bagian secara acak,
memotongnya dengan rapi menjadi empat bagian (atau jika cukup besar, pertama-tama menjadi
dua bagian dan kemudian membagi empat masing-masing), dan memilih seperempat acak
untuk membuat sampel 20 hingga 40-g kadang-kadang terbukti menjadi teknik pengambilan
sampel yang paling baik. Pengambilan sampel seperti itu harus diperiksa keseragamannya.
Produk makanan lainnya, termasuk beberapa makanan berlabel, beberapa produk
pangan sumbangan, dan hampir semua pakan campuran mengandung vitamin A sebagai
konsentrat kering dan stabil. Bahkan beberapa susu kering sekarang mengandungnya. Produk-
produk ini sulit untuk diambil sampel dan relatif besar, sampel yang ditumbuk halus - terkadang
30 hingga 40 g atau lebih - diperlukan untuk analisis. Setiap partikel kecil konsentratnya
memiliki kandungan vitamin A yang tinggi sehingga hanya ada sedikit partikel per unit
makanan, dan distribusinya sulit. Terkadang produk tersebut memiliki rata-rata tertimbang
kurang dari satu partikel yang mengandung vitamin A per gram.
Partikel kecil konsentrat vitamin A mungkin tidak secara material dibagi dengan
menggiling sampel makanan karena partikel mungkin lebih kecil dari bukaan layar penggiling.
Juga, harus disadari bahwa konsentrat vitamin A kering 20.000 hingga 50.000 unit / g, yang
orang mungkin pikir dapat didistribusikan secara memuaskan dalam makanan, disiapkan
dengan mengencerkan konsentrat kering 250.000 hingga 675.000 atau lebih unit per gram
dengan nonvitamin A pembawa, tanpa pembagian partikel konsentrat asli. Dengan
menggunakan sampel analitik besar, dimungkinkan untuk mendapatkan keseragaman yang
lebih besar dalam kandungan vitamin A dari bagian yang direplikasi yang diambil untuk
analisis.
Sampel analitik kecil populer di kalangan analis, tetapi perangkap sampel kecil harus
dihindari, terutama dalam penentuan vitamin A pada makanan kering, semi kering, atau
lengket, dan yang mengandung vitamin A stabil. Namun, ada tempat yang tepat untuk
mengurangi jumlah material yang akan dianalisis. Alikuot kecil dari larutan terhidrolisis dapat
mengandung cukup vitamin A sehingga dapat dihilangkan untuk ekstraksi dan prosedur
selanjutnya lainnya. Pengurangan itu sebisa mungkin harus dilakukan.
Ekstraksi
Metode telah dipublikasikan untuk mengekstraksi tablet dan konsentrat yang
mengandung vitamin A yang distabilisasi gelatin langsung tanpa digesti alkali dengan
menambahkan air hangat untuk melarutkan vitamin A.
Prosedur tersebut kurang cocok diterapkan untuk makanan; dengan pakan dan makanan
biasanya menghasilkan massa bergetah yang besar, tidak terkendali, dan sulit ditangani.
Namun, terkadang pelunakan konsentrat atau campuran makanan dengan sedikit air hangat
sebelum menambahkan alkali untuk hidrolisis tampaknya membantu.
Dimethyl sulfoxide (DMSO) telah digunakan untuk melarutkan vitamin A dalam obat-
obatan dan beberapa konsentrat, tetapi tidak ada laporan yang dipublikasikan tentang uji coba
menggunakan DMSO dengan makanan yang mengandung vitamin A. Mengingat jumlah
DMSO yang relatif besar ditambahkan untuk tablet farmasi, tampaknya tidak mungkin untuk
menggantikan hidrolisis alkali dalam menentukan vitamin A dalam sampel makanan yang lebih
besar.
Ketika menggunakan metode AOAC untuk produk-produk seperti susu kering atau
minuman sarapan bubuk yang memiliki kandungan gula tinggi, campuran terhidrolisis kadang-
kadang terpisah menjadi dua fase setelah diencerkan ke volume yang diukur. Pipet seragam
dari campuran ekstraksi sulit alikuot karena partisi vitamin A sebagian besar ke fase atas. Solusi
sederhana adalah memasukkan tilt-a-pet atau dispenser serupa di leher labu mendidih, campur
dengan menggoyangkan, dan miringkan alikuot untuk analisis ke dalam ruang pengukuran
sebelum pemisahan campuran menjadi dua fase. Dalam campuran yang dihasilkan dari
makanan hidrolisis dengan kadar gula tinggi, beberapa bahan bergetah pirolisa menempel pada
gelas. Jika sampel telah dihidrolisis dengan benar dan dicampur setelah diencerkan ke volume
dengan pengocokan kuat, bahan lengket tampaknya tidak mempertahankan retinol yang cukup
untuk mempengaruhi hasil yang lumayan.
Makanan dengan kandungan lemak tinggi sulit diekstraksi setelah hidrolisis. Emulsi
sabun terbentuk dan, harus tidak pecah untuk mempertahankan beberapa vitamin A. Untuk
mengekstraksi vitamin A dari larutan tersebut memerlukan pengocokan yang kuat, tetapi juga
mendorong pembentukan emulsi sehingga menyebabkan beberapa kehilangan vitamin A.
Penambahan sejumlah kecil garam, seperti NaCl, atau etanol membantu memecah emulsi;
terlalu banyak etanol tidak mudah dicuci dari pelarut ekstraksi dan dapat mengganggu ekstraksi
selanjutnya. Keuntungan ekstraksi dalam tabung centrifuge adalah bahwa tabung dapat
disentrifugasi untuk memecahkan emulsi, dalam waktu yang singkat. Dalam beberapa metode,
antioksidan, seperti hidrokuinon, natrium askorbat, dan lainnya, ditambahkan untuk
melindungi vitamin A dari oksidasi.
Jika makanan tersebut mengandung minyak tak jenuh yang relatif segar atau
antioksidan alami, antioksidan mungkin tidak banyak bermanfaat. Dalam banyak kasus belum
terbukti bahwa menambahkan antioksidan meningkatkan hasil, tetapi di sisi lain tampaknya
tidak memiliki efek samping. Ketika sampel dihidrolisis dengan pengadukan yang terus-
menerus dan kuat, antioksidan kadang-kadang tampaknya menawarkan perlindungan terhadap
vitamin A. Jika makanan tengik sebelum analisis, vitamin A mungkin sudah hilang dan
antioksidan tidak akan efektif.
Penggunaan gas nitrogen pada tekanan atmosfer selama proses refluks untuk hidrolisis
tidak terlalu berarti karena area di atas campuran refluks ditutupi oleh air, alkohol, dan uap
amonia, yang memindahkan sebagian besar oksigen. Ketika pelarut diuapkan di bawah vakum
parsial, nitrogen juga sedikit nilainya karena labu cepat diisi dengan uap pelarut lembam.
Sejumlah kecil minyak segar harus ditambahkan ke sampel rendah lemak sehingga selama
tahap terakhir penguapan pelarut, vitamin A larut dalam film lipid dan akibatnya kurang
terkena oksidasi. Semua tahap analisis harus dilakukan dengan cepat sehingga vitamin A
terkena sesedikit mungkin udara, cahaya terang, dan panas, terutama ketika tidak dalam
larutan.
Makanan bertepung tinggi, seperti gandum yang diperkaya vitamin A, beras, dan
tepung jagung, bisa memerlukan perawatan khusus. Pati mungkin mengembang dan menyerap
beberapa vitamin A. Predigesti dengan enzim mungkin diperlukan sebelum pencernaan basa.
Dalam beberapa metode vitamin A disarankan agar lipid diekstraksi terlebih dahulu dari
sampel, pelarut ekstraksi diuapkan, dan saponifikasi dilakukan pada residu. Metode ini
membutuhkan langkah-langkah tambahan, memiliki resiko gagal lebih besar, dan
membutuhkan waktu dan pelarut tambahan. Ketika kandungan vitamin A makanan rendah,
sejumlah besar harus diekstraksi, yang memakan waktu dan pelarut. Selain itu, jika makanan
diproses dengan vitamin A yang distabilkan gelatin atau pektin, ekstraksi dengan pelarut lemak
sebelum hidrolisis alkali tidak akan memulihkan sebagian besar vitamin A.
Hidrolisis vitamin A esterifikasi yang ditemukan di sebagian besar makanan
mengubahnya menjadi retinol, biasanya tanpa kerusakan materi. Namun, dalam telur, sebagian
besar vitamin A berada dalam bentuk alkohol dengan vitamin A yang diesterifikasi dan
retinaldehyde berkontribusi lebih sedikit terhadap nilai total vitamin A.
Untuk mendapatkan kandungan vitamin A total telur, teknik ekstraksi langsung tanpa
hidrolisis harus digunakan. Kuning telur diemulsi dalam larutan garam atau digerus dengan
natrium sulfat sebelum ekstraksi.
Metode analisis umum untuk menganalisis vitamin A dalam telur atau makanan yang
mengandung telur belum dikembangkan. Jika telur dan vitamin A yang distabilkan
berkontribusi penting terhadap kandungan vitamin A dari makanan olahan, pengembangan
metode analitik akan semakin sulit.
Isomerisasi Vitamin A
Metode kolorimetri Carr-Price tidak membedakan antara retinol aH-trans, isomer c / s,
retinaldehyde, anhydroretinol, atau rerro-retinol. Mereka semua bereaksi untuk membentuk
warna biru dengan absorbansi yang serupa, tetapi retinaldehyde, anhydroretinol, dan produk
warna retro-xetinol memiliki panjang gelombang agak lebih panjang.
Isomer, anhidroretinol, dan bentuk terkait memiliki biopotensi yang lebih rendah
daripada retinol trans-m. Jika mereka merupakan bagian yang cukup besar dari vitamin A.
Kandungan makanan, nilai analitik yang ditentukan secara kolorimetri akan melebih-lebihkan
biopotensi vitamin A yang sebenarnya. Nilai pengujian oleh USP atau metode spektrofotometri
serupa juga terlalu tinggi ketika ada vitamin A yang terisomerisasi, kecuali dalam kasus isomer
13-c / s-isomer.
Suatu pengujian yang didasarkan pada penentuan warna biru dengan SbCl3 sebelum
dan sesudah inkubasi 16 jam dengan pereaksi anhidrida maleat telah dikembangkan untuk
memperkirakan biopotensi campuran vitamin A yang terionisasi. Isomer all-trans dan 9-ds-
retinol bereaksi dengan amhidrida maleat untuk membentuk kompleks Diels-Alder; kompleks
molekul yang terbentuk tidak bereaksi dengan SbCl3 untuk memberikan warna biru. Isomer
utama lainnya yang mungkin ada, retinol 13-cis dan 9-13-dicis, tidak bereaksi dengan anhidrida
maleat. Persamaan regresi kubik atau tabel sederhana digunakan untuk menghitung biopotensi
vitamin A relatif dari nilai maleat. Sebuah persamaan yang menghubungkan biopotensi dengan
uji USP dan nilai-nilai maleat juga telah publikasikan.
Metode asli untuk penentuan biopotensi memerlukan 1250 unit vitamin A dan waktu
inkubasi 16 jam, yang tidak dapat beradaptasi dengan kandungan vitamin A rendah dari
sebagian besar makanan dan rutinitas banyak laboratorium. Modifikasi prosedur anhidrida
maleat, yang didasarkan pada penggunaan lebih sedikit vitamin A dan hanya periode inkubasi
1 atau 2 jam, menghasilkan nilai yang sama dengan metode asli. Namun, hasil yang tidak
menentu diperoleh dengan menggunakan metode yang dimodifikasi dalam studi kolaboratif.11
3 Metode kimia rutin untuk memperkirakan biopotensi vitamin A pada tingkat rendah yang
ditemukan di sebagian besar makanan belum dipublikasikan.
Hubungan metode kolorimetri, fluorometrik, atau anhidroretinetin lainnya dengan
biopotensi vitamin A isomer tampaknya belum dilaporkan. Metode telah dipublikasikan untuk
memperkirakan jumlah beberapa isomer atau jenis lain dari vitamin A. Retinol, dehydroretinol,
dan aldehida mereka telah diukur secara kolorimetri dan kontennya dihitung dengan persamaan
simultan.
Beberapa isomer vitamin A telah dipisahkan pada kolom dikalsium fosfat dan dengan
kromatografi lapis tipis. Teknik HPLC yang lebih baru telah digunakan untuk memisahkan 13-
cis, 9-cis dan all-trans vitamin A asetat, dan aH-trans dan 13-cis retinol. HPLC lebih berhasil
daripada kromatografi gas. Pada saat ini, tidak ada metode yang cocok untuk penentuan rutin
isomer vitamin A dalam makanan.
Untungnya, isomerisasi bukan masalah besar bagi para analis makanan. Bentuk utama
vitamin A dalam produk yang dipasok ke industri makanan pada dasarnya adalah isomer semua
trans. Sebagian besar sampel vitamin A stabil yang diperiksa, bahkan ketika disimpan selama
beberapa tahun, sebagian besar dalam bentuk aU-trans. Namun, jika vitamin A disimpan dalam
larutan dan tidak terlindungi dengan baik, beberapa isomerisasi dapat terjadi. Vitamin A yang
ditemukan dalam hati hewan pada dasarnya juga dalam bentuk all-trans.
Karena kesulitan dalam analisis, tidak ada metode yang telah dipublikasikan untuk
menentukan secara biopotensi vitamin A dalam makanan yang kandungan vitamin A-nya
rendah. Isomerisasi vitamin A dalam minyak ikan, atau biopotensi dan penentuan vitamin A2,
menjadi perhatian para analis makanan saat ini karena bahan-bahan tersebut tampaknya tidak
digunakan dalam pembuatan makanan.
DAFTAR PUSTAKA
Donald B. Parrish & Jack C. Bauernfeind (1977): Determination of vitamin a in foods ‐ a
review, C R C Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 9:4, 375-394
United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 41-NF 36). Rockville, MD: United
States Pharmacopeial Convention; 2016.
http://ftp.uspbpep.com/v29240/usp29nf24s0_c571.html. Accessed September 07, 2019.
Official methods of analysis of AOAC International, 2000. Volume I, Determination of vitamin
A (retinol), vitamin E ((±)- α-tocopherol) and ß-carotene in foodstuffs by HPLC-UV, drugs /
edited by Melanie Mongili., From the website
http://members.aoac.org/aoac_prod_imis/AOAC_Docs. Accessed September 07, 2019.