Limfosit merupakan jenis leukosit agranulosit yang memiliki berbagai peran fungsional yang

berhubungan dengan reaksi imun terhadap serangan mikroorganisme, makromolekul asing

maupun sel-sel kangker. Pada praktikum kali ini hewan uji yang digunakan adalah mencit
dengan galur balb/c jantan yang berumur 2 bulan, hal ini dikarenakan mencit galur baksi lebih
responsive tidak mudah stres dan perawatannya mudah, digunakan mencit jantan karena mencit
jantan tidak mengalami masa kehamilan sehingga tidak dipengaruhi oleh hormon.

Mencit dikorbankan dengan menggunakan kloroform sesuai dengan kode etik pembunuhan
hewan uji atau yang dikenal dengan euthanasia. Kloroform bekerja dengan cara menekan system
saraf pusat dan merusak organ hati, sehingga penggunaan kloroform pada hewan uji akan
mengakibatkan kematian tanpa mengalami rasa sakit terlebih dahulu.

Mencit yang sudah dikorbankan disemprot menggunakan alcohol 70% yang berfungsi sebagai
desinfektan atau membunuh bakteri, hal ini dilakukan agar hasil tidak terkontaminasi. Setelah itu
dilakukan pembedahan untuk mengambil bagian limfa mencit. Limfa yang telag diambil
dimasukkan kedalam cawan petri yang sudah berisi medium RPMI. Fungsi dari medium RPMI
yaitu untuk menjaga sel tetap hidup dengan cara memberikan nutrisi kepada sel dan juga
berfungsi untuk melarutkan sel-sel limfosit yang terdapat didalam limfa. Kemudian medium
RPMI disuntikkan sebanyak 10ml kedalam limfa hingga berwarna putih pucat dan limfa dicabik-
cabik menggunakan pinset untuk membantu proses pelarutan limfosit yang ada didalam limfa.

Suspensi sel yang didapat dilakukan sentrifuge dengan tujuan untuk memisahkan endapan atau
pellet dengan supernatan. Sentrifuge dilakukan pada suhu 4°C karena medium RPMI stabil pada
suhu tersebut. Pellet yang didapatkan dilakukan resuspensi yang bertujuan untuk memperbarui
nutrisi sel kemudian dilakukan sentrifuge ulang. Pellet yang didapatkan diambil dan
disuspensikan kedalam larutan TBA (Tris Buffered Ammonium). Dimana TBA berfungsi untuk
memecah sel eritrosit sehingga sel yang didapatkan murni sel limfosit