TUGAS MAKALAH

Fitokimia
“ Terpenoid ”

Disusun oleh :

Kelompok: 4
1. Bayu Dwi Permana (152210101082)
2. Ulfa Aliyatul Himmah (152210101083)
3. Arini Fitria Zain (152210101084)
4. Oktaviana Yulianingsih (152210101085)
5. Aulia Satria Bimantara (152210101086)
6. Afi Naufal Adani (152210101087)
7. Maghfirah Izzani Maulani (152210101088)
8. Dyah Pusparini B N (152210101089)
9. Ikhar Ridho Dayli (152210101091)
10. Nuri Putri Azhari (152210101092)
11. S. Nadya Riskia (152210101093)

Dosen Pendamping: Bawon Triatmoko, S.Farm., M.Sc., Apt.

BAGIAN BIOLOGI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS JEMBER
2017
 DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ...................................................................................................................... i
DAFTAR ISI .................................................................................................................................ii
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................................... iii
DAFTAR TABEL.......................................................................................................................... iv
BAB I PENDAHULUAN............................................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ........................................................................................................ 3
1.3 Tujuan........................................................................................................................... 3
BAB II PEMBAHASAN ................................................................................................................ 5
2.1 Klasifikasi Umum Terpenoid......................................................................................... 5
2.2 Biosintesis Terpenoid ................................................................................................... 6
2.3 Ekstraksi Terpenoid .................................................................................................... 10
2.3.1 Seleksi dan Pengumpulan Bahan Tanaman ................................................... 10
2.3.2 Pengeringan ................................................................................................... 11
2.3.3 Penggilingan ................................................................................................... 11
2.3.4 Ekstraksi ......................................................................................................... 11
2.3.5 Deteksi Terpenoid .......................................................................................... 12
2.4 Isolasi Terpenoid Dengan Kromatografi Kolom ......................................................... 13
2.4.1 Monoterpenoid .............................................................................................. 13
2.4.2 Seskuiterpenoid ............................................................................................. 14
2.4.3 Diterpenoid .................................................................................................... 14
2.4.4 Tetraterpenoid ............................................................................................... 15
2.5 Kromatografi Lapis Tipis ............................................................................................. 15
2.6 Ananlisis terpenoid dengan metode HPLC ................................................................. 16
BAB III PENUTUP .................................................................................................................... 19
3.1 Kesimpulan ................................................................................................................. 19
Daftar Pustaka ........................................................................................................................ 20

ii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Metabolisme Asam Asetat dalam Pembentukan IPP Melalui Jalur Asam
Mevalonat ................................................................................................................................ 7
Gambar 3. Skema Umum Biosintesis Terpenoid dari Tumbuhan ............................................ 9

iii
 DAFTAR TABEL

Table 1. Klasifikasi Terpenoid Secara Umum ........................................................................... 5

Table 2. Sumber Terpenoid Berdasarkan Pengelompokannya ................................................ 9
Table 3. Deteksi Monoterpenoid Menggunakan Metode TLC ............................................... 16

iv
 1

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sejak abad ke-17 hingga era sekarang ini, telah banyak ditemukan berbagai jenis
senyawa dari berbagai sumber bahan alam seperti tumbuhan, hewan maupun
mikroorganisme, yang memiliki manfaat sebagai sumber obat baru dengan struktur kimia
baru sebagai pengembangan obat lebih lanjut. Senyawa-senyawa Morfin, vinkristin, kodein,
digitoksin, quinine dan galantamin merupakan beberapa contoh khas obat yang berasal dari
sumber alami (Özlem Bahadir, 2012).
Indonesia merupakan negara tropis yang mempunyai keanekaragaman hayati tak
terhingga, dimana terdapat ribuan spesies tumbuhan yang terdiri dari senyawa hidrokarbon
teroksidasi dan hidrokarbon teroksigenasi. Penggunaan tumbuh-tumbuhan sebagai bahan
obat tradisional berkaitan dengan beberapa kandungan kimia yang terkandung di dalamnya.
Senyawa kimia tersebut merupakan hasil metabolisme dari tumbuhan itu sendiri. Senyawa
kimia dari beberapa jenis tanaman telah banyak diteliti dapat memberikan efek fisiologis dan
farmakologis, sehingga senyawa ini disebut dengan senyawa bioaktif. Di antara senyawa
bioaktif tersebut adalah golongan alkaloid, terpenoid, steroid, flavonoid dan saponin
(Kusuma, 1988).
Terpenoid merupakan senyawa kimia yang terdiri dari beberapa unit isopren.
Kebanyakan terpenoid mempunyai struktur siklik dan mempunyai satu gugus fungsi atau
lebih. Terpenoid umumnya larut dalam lemak dan terdapat dalam sitoplasma sel tumbuhan.
Senyawa terpenoid terdiri atas beberapa kelompok yang diketahui memiliki manfaat dalam
menghambat pertumbuhan tumbuhan pesaingnya dan sebagai insektisida terhadap hewan
tinggi. Berbeda dengan senyawa metabolit primer yang pada umumnya memberikan
pengaruh biologis terhadap sel atau organisme tanaman itu sendiri, metabolit sekunder (MS)
justru memberikan pengaruh biologis terhadap sel atau organisme lain. Metabolit sekunder
bukanlah produk buangan yang tak berguna, tetapi perangkat yang penting untuk melawan
herbivora dan mikroba.
Pada tumbuhan, senyawa-senyawa golongan terpenoid merupakan metabolit sekunder.
Terpenoid merupakan suatu golongan hidrokarbon yang banyak dihasilkan oleh tumbuhan
dan terutama terkandung pada getah dan vakuola selnya. Terpen dan terpenoid dihasilkan
pula oleh sejumlah hewan, terutama serangga dan beberapa hewan laut. Di samping
sebagai metabolit sekunder, terpenoid merupakan kerangka penyusun sejumlah senyawa
penting bagi makhluk hidup. Secara umum minyak atsiri adalah senyawa yang
mengandung karbon dan hidrogen yang bersifat aromatik yang disebut terpenoid. Sebagian
besar terpenoid mempunyai kerangka karbon yang dibangun oleh dua atau lebih unit C-5
yang disebut isoprena. Unit isoprenoit (C5) berasal dari isopentenil (3-methyl-3-en-1-yl)
pirofosfat. Berdasarkan jumlah unit isoprena, terpenoid diklasifikasikan sebagai
monoterpen (C10), seskuiterpen (C15), diterpenes (C20), sesterpenes (C25), triterpen (C30),
tetraterpenes (C40) dan polyterpenes (Wang et al., 2005). Banyak terpen yang memiliki
aktivitas biologis dan digunakan untuk pengobatan penyakit pada manusia. Diantara obat-
obatan yang ada, misalnya obat antikanker Taxol® dan Obat antimalaria Artimesinin, yang
paling dikenal luas sebagai obat terpena (Van Middlesworth and Cannell, 1998)Beek, T.A. &
Lelyveld, G. P. (1997) Preparative Isolation and Separation Procedure for Ginkgolides A, B, C,
and J and Bilobalide. Journal of Natural Products. Jakarta: Rineka Cipta.
Bhat, S.V., Nagasampagi, B.A., & Sivakumar, M. (2005) Chemistry of Natural Products. ,
Narosa Publishing House. India.
Bohlmann, J. and I, C. (2008) ‘Terpenoid biomaterials’. Canada: University of British
Columbia, pp. 321–2185.
Bohlmann, J. and Keeling, C. I. (2008) ‘Terpenoid biomaterials’, Plant Journal, 54(4), pp.
656–669. doi: 10.1111/j.1365-313X.2008.03449.x.
Bohlmann, J., Meyer-Gauen, G. and Croteau, R. (1998) ‘Plant terpenoid synthases:
Molecular biology and phylogenetic analysis’, Proceedings of the National Academy of
Sciences, 95(8), pp. 4126–4133. doi: 10.1073/pnas.95.8.4126.
Bos, R.; Hendriks, H.; Bruins, A.P.; Kloosterman, J. & Sipma, G. (1986) Isolation and
Identification of Valerenane Sesquiterpenoids from Valeriana officinalis. Phytochemistry.
Vol. 25.
Cimpan, G. and Gocan, S. (2002) ‘Analysis of Medicinal Plants By Hplc: Recent Approaches’,
Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 25(13–15), pp. 2225–2292. doi:
10.1081/JLC-120014003.
Harborne, J. B. (1998) Phytochemical Methods; A Guide to Modern Techniques of Plant
Analysis, Journal of Chemical Information and Modeling. doi:
10.1017/CBO9781107415324.004.
Ikan, R. (1991) Natural Produtcs A Laboratory Guide. 2nd edn. California, United States of
America: Academic Press.
Jaracz, S.; Malik, S. & Nakanishi, K. (2004) Isolation of Ginkgolides A, B, C, J and Bilobalide
from G. Biloba Extracts. Phytochemistry. Jakarta: EGC.

2
Kimura, M. & Rodriguez-Amaya, D. B. (2002) A Scheme for Obtaining Standards and HPLC
Quantification of Leafy Vegetable Carotenoids. Food Chemistry.
Van Middlesworth, F. and Cannell, R. J. P. (1998) Dereplication and Partial Identification of
Natural Products. doi: 10.1007/978-1-59259-256-2_10.
Özlem Bahadir, A. (2012) ‘Column Chromatography for Terpenoids and Flavonoid’,
Chromatography and Its Applications, pp. 31–56. doi: 10.5772/55744.
Paul, M. D. (2002) A Biosynthetic Approach. Second Edi, Pharmaceutical Sciences. Second
Edi. School of Pharmaceutical Sciences University of Nottingham, UK British. doi:
10.1016/j.jbiosc.2010.01.005.
Sarker, Satyajit D., Z. and Latif, & I. A. (2006) Natural Product Isolation 2 nd Edition. New
Jersey: Humana Press.
Sarker, SD.; Latif, Z. & G. A. (2006) Natural Products Isolation. 2nd edn. New Jersey, United
States of America.: Humana Press.
Sur, S. V. (1991) Isolation of Oxygen-Containing Monoterpenoids of Essential Oils by
Preparative Adsorbtion Chromatography with Gradient Elution. Jakarta: Balai Pustaka.
Wagner, H. & Bladt, S. (1996) Plant Drug Analysis : A Thin Layer Chromatography Second
Edition. New York: Springer.

Untuk mengetahui lebih jelas tentang senyawa terpenoid, maka pada makalah ini
akan dibahas tentang klasifikasi terpenoid, biosintesis terpenoid, ekstraksi terpenoid, isolasi
terpenoid dan analisis terpenoid melalui analisis kromatografi lapis tipis dan HPLC untuk
memperoleh suatu senyawa terpenoid murni yaang diinginkan.

1.2 Rumusan Masalah

a. Bagaimana cara ekstraksi dan isolasi bahan alam dengan beberapa metode untuk
menghasilkan senyawa terpenoid ?
b. Bagamana cara analisis kromatografi baik dengan KLT ataupun HPLC pada senyawa
terpenoid ?

1.3 Tujuan
a. Mengetahui cara ekstraksi dan isolasi bahan alam dengan beberapa metode untuk
menghasilkan senyawa terpenoid.
b. Mengetahui cara analisis kromatografi baik dengan KLT ataupun HPLC pada senyawa
terpenoid.

3
4
 BAB II
PEMBAHASAN
2.1 Klasifikasi Umum Terpenoid
Terpenoid merupakan derivat dehidrogenasi dan oksigenasi dari senyawa terpen.
Terpen merupakan suatu golongan hidrokarbon yang banyak dihasilkan oleh tumbuhan dan
sebagian kelompok hewan. Rumus molekul terpen adalah (C5H8)n. Terpenoid disebut juga
dengan isoprenoid. Hal ini disebabkan karena kerangka karbonnya sama seperti senyawa
isopren. Secara struktur kimia terpenoid merupakan penggabungan dari unit isoprena, dapat
berupa rantai terbuka atau siklik, dapat mengandung ikatan rangkap, gugus hidroksil,
karbonil atau gugus fungsi lainnya.
Beberapa terpenoid memiliki fungsi fisiologis yang secara umum dapat ditemukan
pada sebagian besar spesies tanaman. Keberagaman suatu tanaman yang memiliki
kandungan terpenoid, secara struktural memiliki peran dalam interaksi taksonomi yang lebih
diskrit sehingga hanya akan terjadi pada organisme lain. Secara historis, terpenoid khusus
akan bersama dengan alkaloid dan fenolat, disebut sebagai metabolit sekunder. Terpenoid
dikenal memiliki fungsi ekologis penting dalam bioaktivitas tanaman. Tanaman terpenoid
banyak digunakan sebagai bahan kimia yang relevan secara industri, termasuk bahan dalam
pembuatan obat-obatan, perasa, wewangian, pestisida dan desinfektan serta sebagai bahan
baku dengan volume besar industri kimia (Bohlmann and I, 2008).
Terpenoid diklasifikasikan menurut kandungannya, mengandung dua (C10), tiga
(C15), empat (C20), enam (C30) atau delapan (C40) unit. Terpenoid dapat digolongkan
berdasarkan dari komponen minyak esensial, monoterpen dan sesquiterpen yang mudah
menguap (C10 dan C15), diterpenes yang kurang stabil (C20) triterpenoid dan sterol (C30) ke
pigmen invotatoid dan karotenoid (C40) berbagai kelas terpenoid ini penting dalam
pertumbuhan, metabolisme, atau ekologi tanaman. Berikut tabel klasifikasi terpenoid:(Paul,
2002)

Table 1. Klasifikasi Terpenoid Secara Umum

Jumlah Jumlah
Nama Kelas Jenis dan Tempat Utama
Isoprena Karbon

1 C5 Isoprena Ditemukan di daun Hamamelis japonica

 Monoterpen dalam minyak esensial

2 C10 Monoterpenoid
tanaman (misalnya menthol dari mint)

5

3 C15 Sesquiterpenoid
4 C20
6 C30
 Lakton monoterpen (contohnya
nepetalakton)
 Tropolen, ditemukan pada batang
gimnospermae
 Sesquiterpen terdapat pada minyak
esensial
 Lakton sesquiterpen (umumnya terdapat
di Compositae)
 Absis (misalnya asam absis)
Asam diterpene dalam resin tanaman
Diterpenoid
gibberelin (misalnya asam giberelat)
 Sterol (misalnya sitosterol)
 Triterpen (misalnya, β-amyrin)
Triterpenoid
 Saponin (misalnya yamogenin)
 Glikosida jantung

8 C40 Tetraterpenoid Karotenoid ( contohnya β-karoten)

n Cn Poliisoprena Karet, contohnya pada Hevea brasiliensis

(Sumber: Harborne, 1998)

2.2 Biosintesis Terpenoid

Terpenoid merupakan salah satu senyawa yang memiliki keseragaman struktur dari
produk alaminya, yaitu berupa unit isoprena (C5) yang saling terhubung dalam model kepala
ekor (head-to-heal) oleh Isopentenil difosfat (IPP) dan ester dimetylallyl diphosphate
(DMAP). Unit isoprena dapat diturunkan dari metabolisme asam asetat melalui jalur asam
mevalonat (MVA : Mevalonic acid). Secara umum, biosintesis dari terpenoid terjadi melalui
3 reaksi yaitu:
a. Pembentukan unit isoprena yang berasal dari asam mevalonat
b. Penggabungan kepala dan ekor dari dua unit isoprena untuk membentuk struktur
mono-, seskui-, di-, sester- dan poli-terpenoid
c. Penggabungan ekor dan kepala dari unit C-15 atau C-20 untuk struktur triterpenoid
dan steroid (Paul, 2002)

6
 Berikut gambaran reaksi atau mekanisme dari jalur asam mevalonat :

Gambar 1. Metabolisme Asam Asetat dalam Pembentukan IPP Melalui Jalur Asam
Mevalonat (Sumber: Paul, 2002)

Mekanisme biosintesis terpenoid diawali oleh pengaktifan asam asetat oleh koenzim
A (CoA) melalui reaksi kondensasi Claisen untuk menghasilkan asam asetoasetat. Senyawa
yang dihasilkan ini kemudian akan terjadi reaksi kondensasi kembali berupa reaksi aldol
stereospesifik menjadi rantai karbon cabang ester β-hidroksi-β-metylglutatryl-CoA (HMG-
CoA), sebagaimana ditemukan pada jalur asam mevalonat. Adanya molekul Asetil-KoA yang
diperantai oleh keterikatannya pada gugus tiol dari suatu enzim, kemudian akan membentuk
asam HMGA-CoA dalam bentuk bebasnya. Hal ini dikarenakan pada jalur asam asetat, jumlah
asam asetoasetat yang terikat pada protein lebih banyak daripada asam malonat sehingga
dikhawatirkan adanya penyimpangan dari jalur asam asetat tersebut. Pada jalur ini, Asetil-
KoA cenderung bertindak sebagai nukleofilik yang dapat menyebabkan terjadinya konversi

7
HMC-CoA menjadi (3R)-MVA pada alkohol primer yang bersifat irreversibel. Adanya
hambatan yang dimediasi oleh enzim HMG-CoA reduktase ini kemudian digunakan untuk
mengatur jalur biosintesis mevalonat dan kolesterol streoid. Akan tetapi jika konversi yang
dihasilkan berupa elektofil reaktif maka DMAPP akan melalui proses SNI oleh karbokation
dalam proses penstbailan delokasi muatan yang terjadi (Bohlmann et al., 1998).
Biosintesis terpenoid juga diikuti oleh reaksi fosforilasi, eliminasi asam fosfat dan
dekarboksilasi untuk menghasilkan isopentenil pirofosfat (IPP) dan isomerisasi Dimetil Alil
Pirofosfat (DMAPP) oleh enzim isomerase. IPP merupakan unit isoprena aktif yang bergabung
atau berikatan secara kepala ke ekor (head-to-heal) dengan DMAPP sebagai langkah pertama
dari polimerisasi isoprena dalam menghasilkan terpenoid. Pengabungan ini terjadi karena
adanya serangan elektron dan ikatan rangkap yang dimiliki oleh IPP terhadap atom karbon
dari DMAPP yang kekurangan elektron, serta adanya reaksi penghilangan ion pirofosfat yang
dapat menghasilkan Geranil Pirofosfat (GPP) dalam pembentukan senyawa-senyawa
monoterpenoid.
Penggabungan reaksi diatas kemudian dilanjutkan oleh satu unit IPP dan GPP melalui
mekanisme yang sama untuk menghasilkan Farnesil Pirofosfat (FPP) dalam senyawa-
senyawa seskuiterpen. Sedangkan untuk senyawa diterpenoid dapat diturunkan dari Geranil-
Geranil Pirofosfat (GGPP) yang berasal dari reaksi kondensasi satu unit IPP dan GPP. Untuk
lebih jelasnya dapat tergambar sebagaimana dalam skema di bawah :

8
 Ket:
Dimetylallyl
Diphosphate
(DMAPP);
Geranyl
Diphosphate
(GDP);
Geranylgeranyl
Diphosphate
(GDPP);
Isopentenyl
Diphosphatase
(IDP);
Metylerylthrit
ol Phosphate
(MEP);
Mevalonate
(MEV)

Gambar 2. Skema Umum Biosintesis Terpenoid dari Tumbuhan

(Sumber: Bohlmann et al., 1998)

Pembentukan senyawa terpenoid diatas dapat melibatkan beberapa kompartemen

subselular, meliputi tranportasi intra dan intermediet. Hal ini sebagaimana ditunjukkan oleh
biosintesis terpenoid dari jalur MEV dan MEP pada Gambar 2, yang dapat terjadi di sitosol
(Retikulum Endoplasma) dan plastida. Secara umum, hemi-, mono- dan diterpenoid
terbentuk di plastida melalui prekursor jalur MEP, sedangkan seskuiterpenoid dan
triterpenoid terbentuk di sitosol melalui jalur MEV. Modifikasi ini diperantai oleh adanya
aktivitas Terpenoid Synthase (TPS) dan enzim P450 yang terletak di Retikulum Endoplasma
(Bohlmann and Keeling, 2008). Berdasarkan mekanisme reaksi pada Gambar 2., senyawa
terpenoid dapat diperoleh dari beberapa tanaman dan bahan alam, sebagaimanatercantum
dalam Tabel 2.
Table 2. Sumber Terpenoid Berdasarkan Pengelompokannya

No Jenis Senyawa Jumlah Atom Karbon Sumber

1 Monoterpenoid 10 Minyak Atsiri
2 Seskuiterpenoid 15 Minyak Atsiri
Resin Pinus, Kacang
3 Diterpenoid 20
Polong
4 Triterpenoid 30 Damar

9
 5 Tertraterpenoid 40 Zat Warna Karoten
6 Politerpenoid >40 Karet Alam
(Sumber: Harborne, 1998 ; (Bohlmann and Keeling, 2008)

Minyak essensial terpenoid terdiri atas minyak uap distilasi yang beraroma khas dari
beberapa tanaman, biasanya digunakan sebagai dasar dalam pembuatan parfum dan perasa
dalam beberapa industri makanan. Adapun tumbuhan yang memiliki kandungan minyak
terpenoid tersebut adalah famili dari Compositae, Matricaria, Labiatae, Mrytaceae,
Eucalyptus, Pinnaceae, Pinus, Rosaceae, Citrus Oil, Umbelliferae, Minyak Adas, Jinten,
Cruciferae dan Liliaceae. Selain itu, terpenoid juga dikaitkan memiliki senyawa aromatik
seperti fenilpropanoid yang secara umum terbagi menjadi dua kelas yaitu monoterpenoid
dan seskuiterpen berdasarkan rentang titik didihnya (monoterpenoid 140-180° ;
seskuiterpen >200°). Monoterpenoid dapat dibagi lagi menjadi tiga kelompok tergantung
pada senyawa asiklik (misalnya geraniol), monosiklik (misalnya limonen) atau bisiklik
(misalnya α- and β-pinen) dengan kelompok hidrokarbon tak jenuh (misalnya limonen) atau
gugus fungsi berupa alkohol (misalnya mentol), aldehid atau keton (misalnya metana dan
karbon) (Harborne, 1998).

2.3 Ekstraksi Terpenoid

Metabolit sekunder dari tanaman mempunyai bioaktivitas tertentu yang bermanfaat
bagi peradaban manusia. Dalam memperoleh metabolit sekunder tersebut diperlukan proses
ekstraksi untuk menarik senyawa metabolit sekunder yang diharapkan. Ekstraksi yang
berhasil diawali dengan pemilihan dan persiapan tanaman sampel secara hati-hati dan
meninjau literatur yang tepat secara menyeluruh untuk mengetahui aturan mana yang sesuai
dengan golongan senyawa yang ingin diekstraksi. Dalam proses ekstraksi, penting untuk
meminimalisir ekstrak dari senyawa pengganggu dan menghindari kontaminasi, serta
mencegah dekomposisi metabolit penting (Sarker et al., 2006). Terpenoid merupakan salah
metabolit sekunder tanaman yang merupakan senyawa paling banyak dalam minyak atsiri.

2.3.1 Seleksi dan Pengumpulan Bahan Tanaman

Dalam penyeleksian dan pengumpulan bahan tanaman yang akan diekstraksi, perlu
diperhatikan berbagai hal seperti : jenis senyawa apa yang diharapkan, terdapat pada jenis
tanaman seperti apa dan kelimpahan tanaman yang akan diekstraksi. Suatu metabolit
sekunder sering terdapat pada bagian tertentu dari tanaman, sehingga akan lebih baik
apabila mengetahui bagian mana dari tanaman yang mengandung senyawa yang diharapkan

10
dengan tingkat paling tinggi, maka bisa mengumpulkan bagian tanaman tersebut untuk
memungkinkan mendapatkan senyawa dengan jumlah yang lebih banyak (Sarker et al.,
2006).
Seperti contoh, senyawa triterpenoid lebih banyak terkandung dalam akar dari
Tanaman Ononis spinosa atau disebut Ononidis radix, dan juga bagian rimpang dari
Cimicifuga racemosa mengandung triterpenoid yang lebih banyak dibanding bagian tanaman
yang lain (Wagner, H. & Bladt, 1996). Selain itu, dalam pengkajian jenis tanaman apa yang
sekiranya mengandung senyawa yang diinginkan, kemungkinan tanaman dengan genus yang
sama juga bisa mengandung senyawa tersebut. Selain itu, perlu juga diperhatikan. Apakah
tanaman yang akan diekstraksi merupakan tanaman langka atau tidak, sebab jika iya maka
hal ini perlu dihindari. Oleh karenanya, pengkajian literatur dengan teliti sangat diperlukan
(Sarker et al., 2006).

2.3.2 Pengeringan
Secara umum, bahan tanaman harus dikeringkan pada suhu 30oC untuk menghindari
adanya dekomposisi senyawa yang termolabil. Dan juga harus terlindungi dari sinar matahari,
karena dapat menyebabkan tranformasi genetik pada tanaman akibat paparan sinar
ultraviolet. Diperlukan pula sirkulasi udara untuk mencegah penumpukan panas dan
kelembaban pada bahan tanaman (Sarker et al., 2006).

2.3.3 Penggilingan
Penggilingan bahan tanaman dapat meningkatkan efisiensi dari ekstraksi tanaman
karena meningkatkan luas permukaan, sehingga membutuhkan pelarut yang lebih sedikit
dan dapat menghasilkan ekstrak yang lebih kental (Sarker et al., 2006).

2.3.4 Ekstraksi
Banyak metode ekstraksi yang dapat diterapkan seperti maserasi,soxhletasi,
perkolasi, continous stirring dan ultrasonifikasi. Namun, untuk mengekstraksi terpenoid
dapat digunakan metode maserasi dan soxhletasi. Seperti triterpen yang terdapat dalam
Cimicifugae rhizoma yang diekstraksi dengan cara maserasi, serta triterpen dari Ononidis
radix yang diekstraksi dengan cara soxhletasi, begitu pula ekstraksi senyawa glikosida terpen
dari tanaman Enrichment dengan maserasi dan ekstraksi glikosida terpen dari Steviae folium
dan Liquiritiae radix secara soxhletasi (Wagner, H. & Bladt, 1996).

11
 Soxhletasi adalah metode yang mudah digunakan untuk mengekstraksi bahan
tanaman yang bervolume material kecil sampai sedang. Karena ekstraksi berlangsung dalam
sistem tertutup, dimana pelarutnya terus menerus didaur ulang, maka dapat meminimalkan
jumlah pelarut yang dibutuhkan untuk soxhletasi. Maserasi adalah metode yang paling
umum digunakan untuk mengekstraksi bahan tanaman yang jumlahnya kecil dan mudah
dilakukan di laboratorium. Bahan tanaman yang diletakkan dalam labu erlenmeyer beserta
pelarut terpilih kemudian ditutup dengan aluminium foil untuk mencegah penguapan.
Kemudian dibiarkan semalam (dimaserasi), yang selanjutnya disaring, lalu perlu dibiarkan
hingga pelarutnya menguap untuk mendapatkan ekstrak (Sarker et al., 2006).
Glikosida terpen dapat diekstraksi dengan soxhletasi, salah satunya dengan 1 gram
serbuk tanaman diekstraksi dengan 15 ml metanol dan direflux selama 15 menit. Lalu
disaring, filtrat yang diperoleh kemudian dievaporasi untuk mendapatkan ekstrak kental. Hal
inio telah dilakukan pada simplisia Steviae folium. Selain itu, triterpen yang diekstraksi
dengan metode maserasi misalnya pada simplisia Ononidis radix, dimana 1 gram serbuk
tanaman dalam 10 ml metanol dan dibiarkan, kemudian disaring dan dievaporasi (Wagner,
H. & Bladt, 1996).

2.3.5 Deteksi Terpenoid

Terpenoid dapat dideteksi dengan beberapa uji. Namun adanya lakton yang tidak
jenuh dapat menyebabkan positif palsu. Adapun pendeteksian untuk mengetahui ada
tidaknya terpenoid dapat menggunakan :
a. Reagen Kedde
Larutan I : 2% asam 3,5-dinitrobenzoat dilarutkan dalam MeOH.
Larutan II: KOH 5,7%.
Menambahkan satu tetes dari masing-masing larutan pada 0.2-0.4mL larutan sampel,
dan warna kebiruan sampai ungu akan muncul dalam 5 menit, apabila mengandung
sesquiterpen. Apabila larutan mengandung aseton, maka akan memberi warna kebiruan
(positif palsu).
b. Pereaksi Baljet
Larutan I : 1 g asam sitrat dilarutkan dalam 100 mL etanol.
Larutan II : 10 g NaOH dalam air 100 mL.
Mencampurkan larutan I dan II dengan perbandingan 1:1 dan ditambahkan dua sampai
tiga tetes pada 2-3 mg sampel, reaksi positif ditandai dengan warna oranye sampai
merah tua (Sarker et al., 2006).

12
 2.4 Isolasi Terpenoid Dengan Kromatografi Kolom
Kromatografi Gas-Cair (GLC) dikenal sebagai metode terbaik untuk analisis terpenoid
terutama monoterpenoid dan seskuiterpenoid. Isolasi monoterpenoid dan seskuiterpenoid
juga bisa dilakukan dengan preparasi GLC. Kromatografi lapis tipis (KLT) dapat digunakan
sebagai metode yang cepat untuk mendeteksi terpenoid dan sterol dengan H2SO4 pekat dan
pemanasan karena semua terpenoid dan steroid (kecuali karotenoid) adalah senyawa tak
berwarna. TLC juga memungkinkan untuk isolasi berbagai kelas terpenoid pada silika gel dan
gelatin berlapis silika perak nitrat (Harborne, 1998) ; (Bhat, S.V., Nagasampagi, B.A., &
Sivakumar, 2005).
Untuk isolasi berbagai terpenoid terutama sesqui-, di-, tri- dan tetraterpenoid serta
sterol , kromatografi kolom adalah metode yang paling mudah digunakan. Sebagai fase diam
adalah silika gel, alumina, selulosa, sephadex, poliamina yang digunakan untuk pemisahan
berbagai jenis metabolit sekunde. Namun silica gel ini adalah adsorben yang paling banyak
digunakan terutama untuk senyawa polar, nonpolar dan medium termasuk terpenoid dan
sterol (Bhat, S.V., Nagasampagi, B.A., & Sivakumar, 2005); Sarker, SD.; Latif, 2006).
Terpenoid umumnya senyawa alisiklik dan isomerisme. Karena cincin sikloheksana
yang dipilin, Konformasi geometrik yang berbeda tergantung pada substitusi di sekitar ring.
Oleh karena itu, stereokimia umumnya ditemukan pada terpenoid. Fitur struktural ini dapat
menyebabkan pembentukan artefak selama prosedur isolasi (Harborne, 1998).

2.4.1 Monoterpenoid
Isolasi untuk mono dan seskuiterpenoid bertujuan untuk mendapatkan minyak
esensial dengan penyulingan uap. Namun ekstraksi dengan pelarut non-polar seperti
petroleum eter, eter dan heksana lebih disukai karena pembentukan artefak pada suhu yang
meningkat (Harborne, 1998). Kromatografi adsorpsi pada silika gel adalah metode yang
paling sederhana dan paling efektif untuk pemisahan terpenoid dan GLC dan biasa digunakan
untuk identifikasi maupun isolasi monoterpenoid. Kromatografi kolom juga merupakan
metode yang valid untuk fraksinasi monoterpenoid. Elusi isokratik dengan pelarut seperti
pentana, petroleum eter, heksana atau elusi gradien dengan campuran pelarut dapat
meningkatkan polaritas sehingga menyebabkan isolasi berturut-turut (Sur, 1991). Selain itu,
teknik kromatografi kolom yang lebih cepat lebih disukai karena kromatografi kolom
konvensional untuk prosedur pemisahannya memakan waktu dan sering memberikan
pemulihan yang buruk (Ikan, 1991).

13
 2.4.2 Seskuiterpenoid
Valeriana officinalis L. (Valerianaceae) yang dikenal sebagai valerian, digunakan
dalam pengobatan yang melibatkan rangsangan saraf, seperti keadaan histeris dan
hypochondriasis serta insomnia. Komponen utama akar valerian adalah iridoid dan minyak
atsiri. Minyak volatil mengandung banyak senyawa termasuk monoterpenoid,
seskuiterpenoid (Heinrich et al., 2004). Valerian seskuiterpeneoid diisolasi dari ekstrak
CH2Cl2 akar Valeriana. Ekstrak dikonsentrasikan dan dikombinasikan dengan NaOH 2%.
Kemudian lapisan berair diasamkan dan diekstraksi dengan petroleum eter-Et2O (2: 1) untuk
mendapatkan ekstrak A. Ekstrak CH2Cl2 yang tersisa dicuci dengan H2O yang terkonsentrasi
di bawah vakum. Kemudian residu dilarutkan dalam petroleum eter dan dipekatkan setelah
filtrasi untuk menghasilkan ekstrak B. Prosedur isolasi ekstrak B dilakukan pada kolom silika
gel menggunakan campuran petroleum eter Et2O dalam meningkatkan polaritas.
Fraksi 26-34 mengandung Z-valerenyl asetat dan E / Zvalerenyl isovalerat yang
diisolasi dengan cara preparatif TLC (heksana-Et2O, 4: 1) diikuti oleh preparatif GC. Ekstrak A
dilarutkan dalam pentana dan disimpan pada suhu -20oC setelah penguapan. Pemisahan
ekstrak A dilakukan dengan menggunakan kromatografi kolom pada silika gel dan dielusi
dengan campuran petroleum eter-Et2O dari 10 sampai 100%. Asam valerenic dan asam
hidroksivalerenic diperoleh dari fraksi Et2O 20% Et2O dan 100% masing-masing dengan
preparatif TLC (heksana-Et2O, 1: 4). Asam asetat juga diperoleh dari ekstrak pentana yang
tersisa dengan preparasi TLC menggunakan heksana-Et2O (3: 2) (Bos, R.; Hendriks, H.; Bruins,
A.P.; Kloosterman, J. & Sipma, 1986).

2.4.3 Diterpenoid
Metode ekstraksi telah dikembangkan untuk mengekstraksi triterpen lakton secara
efisien seperti menggunakan pelarut organik, air, air bertekanan atau cairan superkritis.
Ekstrak senyawa terpen dapat dipisahkan dengan rekristalisasi fraksional, kromatografi
kolom berulang, fase HPLC terbalik, kromatografi dengan Sephadex LH-20 atau lebih efisien
dengan kromatografi pada silika gel yang diimpregnasi NaOAc.
Dalam metode berikut ini dijelaskan oleh Jaracz et al., (2004), untuk isolasi bilobalida
dan ginkgolida menggunakan kromatografi kolom. Ekstrak trilaktat triterpen yang diperkaya
dikromatografi pada kolom gel silika. Kolom dielusi dengan campuran pelarut EtOAc-
heksana. Sistem pelarut awal adalah EtOAc-heksana (3.5: 6.5). Isi EtOAc dalam eluen
meningkat secara bertahap dalam enam langkah ke EtOAc-heksana (6.5: 3.5). Fraksi yang
dikumpulkan di EtOAc-heksana (4.5: 5.5) mengandung bilobalida. Bilobalida murni diperoleh

14
dalam bentuk bubuk putih setelah dicuci dengan Et2O. Fraksi yang dikumpulkan pada EtOAc
/ heksana (5: 5) dan (5.5: 4.5) mengandung campuran ginkololida A / B dan ginkgolida C / J.
Campuran ginkgolida dipisahkan dengan menggunakan metode kromatografi untuk
menghasilkan senyawa murni (Jaracz et al., 2004).
Metode preparatif sederhana untuk isolasi dan pemurnian ginkgolida dan bilobalida
(ginkgo terpene trilactones) juga dikembangkan oleh Beek & Lelyveld (1997). Ekstrak daun
ginkgo biloba digunakan untuk ekstraksi. Setelah tahap partisi dengan EtOAc, ekstrak
intermediet yang diperkaya dipisahkan menjadi masing-masing terpen dengan kromatografi
cair tekanan medium pada silika yang diimpregnasi dengan 6,5% NaOAc dengan gradien dari
petroleum eter-EtOAc menjadi EtOAc-MeOH. Setelah rekristalisasi dari H2O-MeOH, semua
ginkgolida dapat diisolasi dengan kemurnian tinggi. Setelah ekstraksi selektif dengan H2O,
daun juga bisa digunakan sebagai bahan awal (Beek, T.A. & Lelyveld, 1997).

2.4.4 Tetraterpenoid
Prosedur isolasi karotenoid dijelaskan oleh Kimura, M. & Rodriguez-Amaya, (2002),
dengan menggunakan kromatografi kolom. Karotenoid banyak tersebar di sayuran berdaun,
oleh karena itu mereka menyediakan sumber isolasi yang baik. Enkoron aseton dingin dibuat
dari selada, dipartisi menjadi petroleum eter, dan kemudian terkonsentrasi di bawah vakum
untuk mendapatkan ekstrak kasar. Ekstrak kasar dipisahkan pada kromatografi kolom MgO-
Hyflosupercel (1: 1 diaktifkan untuk 2 jam pada 110 ˚C) menggunakan eter-petroleum eter
(8%) dan aseton-petroleum eter (10-15%, 15-18%, 25 -40, 60-70%) sebagai fase gerak untuk
menghasilkan -karoten, laktusaksanthin, violaxanthin, lutein, neokanthin, klorofil. Semua
fraksi yang dielusi dengan petroleum eter yang mengandung aseton dicuci empat atau tiga
kali dengan air dalam corong separator untuk mengeluarkan aseton dan kemudian
dikeringkan dengan Na2SO4. Metode ini memungkinkan pemisahan karotenoid secara
efisien dan cepat (Kimura, M. & Rodriguez-Amaya, 2002).

2.5 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis (TLC) adalah teknik yang tidak mahal dan merupakan metode
umum yang digunakan untuk memberikan informasi tentang kompleksitas dari minyak
esensial. KLT akan memberikan keuntungan jika dikombinasi dengan GLC untuk analisis
terpena, karena kedua teknik tersebut bersifat saling melengkapi. Silika gel adalah penyerap
yang paling banyak digunakan, dengan pelarut seperti benzena, kloroform, benzena-
kloroform (1 : 1) dan benzena-etil asetat (19 : 1). Untuk analisis terpena yang mengandung

15
oksigen (misal: carvone), lapisan silika gel tidak boleh diaktivasi sebelum digunakan, karena
uap air akan membantu pemisahan. Alkohol terpenat paling baik dipisahkan pada pelat yang
diimpregnasi parafin dalam metanol 70% (pelat silika gel diaktivasi dengan cara direndam
dalam 5% parafin selama 1 menit dan kemudian dibiarkan mengering sebelum digunakan;
pelarut kromatografi yaitu 70% metanol, juga harus jenuh dengan minyak parafin tersebut).
Modifikasi lain untuk memisahkan terpen menurut jumlah ikatan rangkapnya, melibatkan
KLT pada pelat silika gel yang disebarkan sebagai bubur dengan agregat berair 2,5% dan
bukan dengan air. Sistem pelarut yang digunakan dengan pelat perlakuan AgN03 adalah
metilen diklorida : kloroform : etil asetat : n-propanol (45 : 45 : 4,5 : 4,5). Metode
pendeteksian umum meliputi penyemprotan dengan 0,2% KmnO4, 5% antimon klorida dalam
kloroform dan dengan vanillin-H2SO4 (conc. H2SO4). Sementara agen selektif lebih banyak
digunakan untuk mendeteksi terpen dengan ikatan rangkap (bromin vapor) dan yang
memiliki gugus keton (2,4-dinitrofenilhidrazin) (Harborne, 1998).

Table 3. Deteksi Monoterpenoid Menggunakan Metode TLC

(Sumber: Harborne, 1998).

2.6 Ananlisis terpenoid dengan metode HPLC

Terpenoid tidak hanya mengandung senyawa triterpen dan struktur steroid
(saponin, sterol, glikosida kardiotonik), tetapi juga mengandung senyawa dengan struktur
isoprena, seperti minyak atsiri, terpen dan karotenoid. Minyak atsiri adalah hidrokarbon
alifatik atau aromatik, aldehida, alkohol, asam, ester, dll., dan didistribusikan secara luas di

16
alam. Secara struktural, minyak atsiri adalah monoterpen, seskuiterpen, dan azulen. Minyak
volatil dapat diperoleh dengan distilasi dengan air, atau dengan pelarut non-polar (Cimpan
and Gocan, 2002).
Terpenoid dapat ditemukan pada spesies yang berbeda seperti: Gentianaceae,
Asteraceae, Labiatae, Fabaceae, Rutaceae, Asclepiadaceae, Papaveraceae,
Menispermiaceae, Solanaceae, dan lain-lain. Kelompok senyawa ini tidak memiliki komposisi
yang seragam termasuk monoterpen, seskuiterpen, diterpenes, dan triterpen. Terpenoid
hampir tidak larut dalam air, tapi larut dalam pelarut organik, dan dapat diekstraksi
menggunakan pelarut etanol, air, atau kloroform. Aktivitas biologis dari terpenoid meliputi
gastritis kronis, anoreksia, antibiotik, dll (Cimpan and Gocan, 2002).
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) atau biasa juga disebut dengan
Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan teknik pemisahan yang diterima secara
luas untuk analisis senyawa kimia tanaman dan bahan obat. HPLC dapat digunakan sebagai
metode pemisahan dari senyawa yang mudah menguap, sedangkan GC atau GC/MS
digunakan untuk pemisahan lanjutan dari analisis. Analisis yang sering digunakan dengan
menggunakan HPLC adalah fase terbalik, yang biasanya menggunakan C-18 dalam
memisahkan senyawa yang memiliki sifat hidrofobik contohnya pada kelompok gugus polar
(Jack Cazes , 2005).
Sonifikasi dan kromatrografi cair merupakan teknik tercepat untuk mengekstrasi dan
fraksinasi dari bahan alam. Kombinasi metode ekstraksi dengan sonifikasi menggunakan
campuran pelarut yang tidak melarutkan, preparasi yang cepat dengan menggunakan ekstrak
dengan kromatografi vakum cair (silika gel 60H) dan pemisahan dengan HPLC preparatif,
HPLC fase terbalik atau kromatografi cair konvensional dengan polyvinylpyrrolidone. HPLC
juga dapat diganakan sebagai metode analisis untuk pemisahan, identifikasi dan kuantifikasi
dari terpenoid (Jack Cazes , 2005).
Penggunaan deteksi dioda-array terbatas karena banyak terpenoid yang tidak
memiliki gugus kromofor untuk daerah UV. Evaporative light scattering detection (ELSD) atau
detektor UV tekanan rendah dapat mengatasi sampai batas tertentu. Namun detektor indeks
bias memiliki sensitivitas yang lebih rendah dibandingkan dengan detektor spektrofotometri.
Pelarut organik yang digunakan untuk komposisi fase gerak dapat menyerap radiasi UV
rendah, hal ini menjadi masalah dalam analisis terpenoid menggunakan HPLC karena suhu
dapat mempengaruhi proses pemisahan. Dalam literatur, pengujian dapat dilakukan pada
suhu 15°C dengan pentana sebagai fase gerak pada LiChrosorb Si60. Sedangkan fase diam

17
yang biasa digunakan adalah C-8 atau C-18 atau dengan menggunakan kolom Spherisorb CN
atau Nucleosil. Fasa gerak untuk kromatografi fase terbalik adalah air, sedangkan untuk
kromatografi fase normal umumnya mengandung pentana atau heksana. Eluasi bisa bersifat
isokratik atau dengan gradien dengan deteksi UV di kisaran 116-254 nm (Jack Cazes , 2005).
Analisis terpenoid juga dapat menggunakan kombinasi sistem HPLC kapiler komersial
dengan spektrofotometri dioda-array detektor dan mikroskop aliran resonansi dari magnetik
inti buatan (NMR). Sistem ini dikombinasikan dengan aliran cahaya dari absorban UV-Vis
melalui array fotodioda. Kolom ini adalah Symmetry 300 C18 (15060.32 mm, 5 mm) dengan
tekanan yang dipantau oleh HPLC instrumen. Fase gerak adalah campuran asetonitril-D2O
(70: 30) (Cimpan and Gocan, 2002). Dalam penelitian yang dilakukan oleh (Wim J. Baas and
Gerard J. Niemann, 1978), turunan senyawa dari terpenoid (triterpene keton dan sterol)
dapat dengan baik dianalisis menggunakan metode HPLC dengan menghasilkan daya pisah
atau puncak yang lebih bagus dibandingkan dengan metode GLC (Gas-Liquid
Chromatography).

18
 BAB III
PENUTUP
3.1 Kesimpulan
 Terpenoid merupakan metabolit sekunder yang paling banyak diteliti secara
kimia dengan lebih dari 30.000 senyawa yang termasuk golongan steroid.
 Terpenoid diklasifikasikan menurut kandungannya, mengandung dua (C10), tiga
(C15), empat (C20), enam (C30) atau delapan (C40) unit.
 Secara umum, biosintesis dari terpenoid terjadi melalui 3 reaksi yaitu:
1. Pembentukan unit isoprena yang berasal dari asam mevalonat
2. Penggabungan kepala dan ekor dari dua unit isoprena untuk membentuk
struktur mono-, seskui-, di-, sester- dan poli-terpenoid
3. Penggabungan ekor dan kepala dari unit C-15 atau C-20 untuk struktur
triterpenoid dan steroid
 Ekstraksi untuk terpenoid dilakukan dengan metode soxhletasi. Dan deteksi ada
tidaknya terpenoid dapat dilakukan menggunakan reagen kedde dan penetrasi
baljet.
 Isolasi
1. Terpenoid : dapat diisolasi dengan baik dengan kromatografi kolom.
2. Monoterpenoid : dapat diisolasi dengan penyulingan uap.
3. Seskuiterpenoid : dapat diisolasi dengan kromatografi kolom pada silica gel.
4. Diterpenoid : dapat diisolasi dengan kromatografi kolom.
5. Tetraterpenoid : dapat diisolasi dengan kromatografi kolom.
 Turunan senyawa dari terpenoid (triterpene keton dan sterol) dapat dengan baik
dianalisis menggunakan metode HPLC dengan menghasilkan daya pisah atau
puncak yang lebih bagus dibandingkan dengan metode GLC.

19
 Daftar Pustaka

Baas, W., & Niemann, G. 1978. High performance liquid chromatography of terpenoids of
High Resolution Chromatography, 8312(1977), 18–20. Retrieved from
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jhrc.1240010105/full.
Beek, T.A. & Lelyveld, G. P. (1997). Preparative Isolation and Separation Procedure for
Ginkgolides A, B, C, and J and Bilobalide. Journal of Natural Products. Jakarta: Rineka
Cipta.
Bhat, S.V., Nagasampagi, B.A., & Sivakumar, M. (2005). Chemistry of Natural Products. ,.
Narosa Publishing House. India.
Bos, R.; Hendriks, H.; Bruins, A.P.; Kloosterman, J. & Sipma, G. (1986). Isolation and
Identification of Valerenane Sesquiterpenoids from Valeriana officinalis. Phytochemistry
(Vol. 25).
Bohlmann, J. & Keeling, C.I., 2008. Terpenoid biomaterials. Plant Journal, 54(4), pp.656–669.
Bohlmann, J., Meyer-Gauen, G. & Croteau, R., 1998. Plant terpenoid synthases: Molecular
biology and phylogenetic analysis. Proceedings of the National Academy of Sciences,
95(8), pp.4126–4133.
Cimpan, G., & Gocan, S. (2002). Analysis of Medicinal Plants By Hplc: Recent Approaches.
Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 25(13–15), 2225–2292.
https://doi.org/10.1081/JLC-120014003.
Beek, T.A. & Lelyveld, G. P. (1997) Preparative Isolation and Separation Procedure for
Ginkgolides A, B, C, and J and Bilobalide. Journal of Natural Products. Jakarta: Rineka Cipta.
Bhat, S.V., Nagasampagi, B.A., & Sivakumar, M. (2005) Chemistry of Natural Products. ,
Narosa Publishing House. India.
Bohlmann, J. and I, C. (2008) ‘Terpenoid biomaterials’. Canada: University of British
Columbia, pp. 321–2185.
Bohlmann, J. and Keeling, C. I. (2008) ‘Terpenoid biomaterials’, Plant Journal, 54(4), pp.
656–669. doi: 10.1111/j.1365-313X.2008.03449.x.
Bohlmann, J., Meyer-Gauen, G. and Croteau, R. (1998) ‘Plant terpenoid synthases:
Molecular biology and phylogenetic analysis’, Proceedings of the National Academy of
Sciences, 95(8), pp. 4126–4133. doi: 10.1073/pnas.95.8.4126.
Bos, R.; Hendriks, H.; Bruins, A.P.; Kloosterman, J. & Sipma, G. (1986) Isolation and
Identification of Valerenane Sesquiterpenoids from Valeriana officinalis. Phytochemistry.
Vol. 25.

20
Cimpan, G. and Gocan, S. (2002) ‘Analysis of Medicinal Plants By Hplc: Recent Approaches’,
Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 25(13–15), pp. 2225–2292. doi:
10.1081/JLC-120014003.
Harborne, J. B. (1998) Phytochemical Methods; A Guide to Modern Techniques of Plant
Analysis, Journal of Chemical Information and Modeling. doi:
10.1017/CBO9781107415324.004.
Ikan, R. (1991) Natural Produtcs A Laboratory Guide. 2nd edn. California, United States of
America: Academic Press.
Jaracz, S.; Malik, S. & Nakanishi, K. (2004) Isolation of Ginkgolides A, B, C, J and Bilobalide
from G. Biloba Extracts. Phytochemistry. Jakarta: EGC.
Kimura, M. & Rodriguez-Amaya, D. B. (2002) A Scheme for Obtaining Standards and HPLC
Quantification of Leafy Vegetable Carotenoids. Food Chemistry.
Van Middlesworth, F. and Cannell, R. J. P. (1998) Dereplication and Partial Identification of
Natural Products. doi: 10.1007/978-1-59259-256-2_10.
Özlem Bahadir, A. (2012) ‘Column Chromatography for Terpenoids and Flavonoid’,
Chromatography and Its Applications, pp. 31–56. doi: 10.5772/55744.
Paul, M. D. (2002) A Biosynthetic Approach. Second Edi, Pharmaceutical Sciences. Second
Edi. School of Pharmaceutical Sciences University of Nottingham, UK British. doi:
10.1016/j.jbiosc.2010.01.005.
Sarker, Satyajit D., Z. and Latif, & I. A. (2006) Natural Product Isolation 2 nd Edition. New
Jersey: Humana Press.
Sarker, SD.; Latif, Z. & G. A. (2006) Natural Products Isolation. 2nd edn. New Jersey, United
States of America.: Humana Press.
Sur, S. V. (1991) Isolation of Oxygen-Containing Monoterpenoids of Essential Oils by
Preparative Adsorbtion Chromatography with Gradient Elution. Jakarta: Balai Pustaka.
Wagner, H. & Bladt, S. (1996) Plant Drug Analysis : A Thin Layer Chromatography Second
Edition. New York: Springer.
Ikan, R. 1991. Natural Produtcs A Laboratory Guide (2nd ed.). California, United States of
America: Academic Press.
Jaracz, S.; Malik, S. & Nakanishi, K. 2004. Isolation of Ginkgolides A, B, C, J and Bilobalide from
G. Biloba Extracts. Phytochemistry. Jakarta: EGC.

Kimura, M. & Rodriguez-Amaya, D. B. 2002. A Scheme for Obtaining Standards and HPLC
Quantification of Leafy Vegetable Carotenoids. Food Chemistry.

21
Özlem Bahadir, A. 2012. Column Chromatography for Terpenoids and Flavonoid.
Chromatography and Its Applications, 31–56. https://doi.org/10.5772/55744
Paul, M.D., 2002. A Biosynthetic Approach. Second Edition., School of Pharmaceutical
Sciences University of Nottingham, UK British.
Sarker, Satyajit D., Z. & Latif, & I.A., 2006. Natural Product Isolation 2 nd Edition, New Jersey:
Humana Press.
Sur, S. V. 1991. Isolation of Oxygen-Containing Monoterpenoids of Essential Oils by
Preparative Adsorbtion Chromatography with Gradient Elution. Jakarta: Balai Pustaka.
Van Middlesworth, F., & Cannell, R. J. P. 1998. Dereplication and Partial Identification of
Natural Products. https://doi.org/10.1007/978-1-59259-256-2_10
Wagner, H. & Bladt, S., 1996. Plant Drug Analysis : A Thin Layer Chromatography Second
Edition, New York: Springer.

Cazes, Jack . 2005 . Encyclopedia of Chromatography Vol.II. 1682. 2nd Ed. Boca Raton: CRC
Press Taylor & Francis Group

Kusuma, T.S. 1988. Kimia Dan Lingkungan. Padang : Pusat Penelitian UNAND.

22