ULASAN

diterbitkan: 23 Oktober 2017 doi:

10,3389 / fphar.2017.00754

Pembangunan di Assay Metode untuk di Vitro Antimalari

Obat efficacy Pengujian: A Systematic Review

Shweta Sinha 1, Phulen Sarma 2, Rakesh Sehgal 1 dan Bikash Medhi 2 *

1 Departemen Kedokteran Parasitologi, Pascasarjana Institut Pendidikan dan Penelitian Medis, Chandigarh, India,
2 Departemen Farmakologi, Pascasarjana Institut Pendidikan dan Penelitian Medis, Chandigarh, India

Munculnya dan penyebaran resistensi obat merupakan tantangan utama dalam

misi pemberantasan malaria. Selain berbagai strategi yang ditetapkan oleh
Organisasi Kesehatan Dunia, seperti manajemen vektor, pengurangan sumber,
deteksi dini kasus, pengobatan yang tepat, dan pengembangan diagnostik baru dan
vaksin, namun kebutuhan untuk obat fi cacious baru dan ef terhadap malaria telah
menjadi prioritas penting pada agenda penelitian malaria global. Pada beberapa tahap
screening, jutaan senyawa disaring (1,000-2,000,000 senyawa per kampanye skrining),
sebelum uji coba pra-klinis untuk memilih memimpin optimal. melakukan in vitro
Diedit oleh:
Ajay Sharma, skrining dari antimalaria sangat sulit sebagai metode pengujian yang berbeda
Chapman University, Amerika Serikat
tergantung pada berbagai sumber variabilitas di laboratorium yang berbeda di
Diperiksa oleh:
Tarun Kumar Bhatt, seluruh dunia. Meskipun ini, in vitro skrining merupakan bagian penting dari
Central University of Rajasthan, India
Simone Brogi,
pengembangan obat antimalaria karena memungkinkan untuk sumber daya
University of Siena, Italia berbagai faktor pembaur seperti respon host kekebalan tubuh dan interaksi obat-
* Korespondensi:
obat. Oleh karena itu, dalam artikel ini, kami mencoba untuk menggambarkan
Bikash Medhi
drbikashus@yahoo.com ; kebutuhan belakang dasar in vitro Penelitian dan bagaimana metode baru
drbikashmedhi@gmail.com
dikembangkan dan kemudian diadopsi untuk high-throughput obat antimalaria
Bagian khusus: skrining dan aplikasinya dalam mencapai tingkat berikutnya in vitro skrining
Artikel ini telah disampaikan kepada
Farmakologi Eksperimental dan Obat berdasarkan pendekatan saat ini (seperti sel-sel induk).
Penemuan,

bagian dari Frontiers jurnal

di Farmakologi

diterima: 3 Februari 2017

diterima: 4 Oktober 2017
Kata kunci: malaria, in vitro, Metode uji, HTS, sel induk
Diterbitkan: 23 Oktober 2017

Kutipan:
Sinha S, Sarma P, Sehgal R dan
Medhi B (2017) Pembangunan di Metode
PENGANTAR
Pengujian untuk di Vitro antimalaria Obat
efficacy Pengujian: Malaria dikenal milenium untuk menyebabkan konsekuensi yang fatal. Pada dasarnya,
Sebuah Systematic Review. hal itu disebabkan oleh lima
Depan. Pharmacol. 8: 754. doi:
spesies di ff erent dari Plasmodium yaitu falciparum, vivax, malariae, ovale, dan
10,3389

/ fphar.2017.00754 knowlesi. Menurut WHO ada 214 juta kasus malaria di seluruh dunia pada tahun 2015.
Meskipun insiden dan angka kematian menurun 37 dan 60%, masing-masing, secara
Frontiers di Farmakologi | www.frontiersin.org Oktober 2017 | Volume 8 | Pasal
1 754
global antara
tahun
singkatan: APAD, 3-
acetylpyridine adenin
dinukleotida; CD34 +,
cluster Di ff diferensiasi
34; CD71, cluster Di ff
diferensiasi 71; CD81,
cluster Di ff diferensiasi
81; DAPI, 4, 6-diamidino-2-
phenylindole; DELI, double-
situs enzyme Linked LDH
Imunodeteksi; DHS,
synthase deoxyhypusine;
DMSO, dimetil sulfoksida;
DOHH, hidroksilase
deoxyhypusine; EEFs,
bentuk exoerythrocytic;
FPH1, proliferasi fungsional
hepatosit primer 1; FT-IR,
Fourier transform infrared;
hLDH, laktat dehidrogenase
manusia; HPLC, kinerja
tinggi kromatografi cair;
HRP-II, kaya histidin protein
II; HRP-II ELISA-histidin
kaya protein II enzyme-
linked immunosorbent
assay; HSC, sel-sel induk
hematopoietik; HTS, tinggi
throughput yang skrining;
IC 50, setengah maksimal
konsentrasi hambat; iHLCs,
diinduksi hepatosit seperti
sel-sel; iPSCs, diinduksi sel
induk berpotensi majemuk;
MMV, Obat-obatan untuk
Malaria Venture; NAD,
nicotinamide adenine
dinukleotida; PB-PK,
fisiologis berdasarkan
farmakokinetik; PK-PD,
farmakokinetik /
farmakodinamik; pLDH,
parasit laktat
dehidrogenase; PRISMA,
disukai melaporkan item
untuk tinjauan sistematis
dan meta-analisis; SRB1,
pemulung reseptor kelas B
tipe I; Tris-HCL / SDS, tris
hidroklorida / natrium
dodesil sulfat; WHO,
Organisasi Kesehatan
Dunia.

Frontiers di Farmakologi | www.frontiersin.org 754

2
Sinha et Pembangunan di antimalaria
al. Tes

2000 dan 2015 ( WHO, 2016 ) Karena terus MATERIAL DAN METODE
menerus e ff luar biasa ort dalam program
pemberantasan malaria dan berbagai strategi
lainnya, masih lebih banyak
perhatian diperlukan untuk fenomena resistensi jelas dari penyakit ( Hyde, 2007 ; SinhaPencarian literatur
sistematis elektronik dilakukan untuk fi nd semua studi yang
et al., 2014 ). Dari berbagai strategi untuk relevan di PubMed, EMBASE dan Google Scholar
mengontrol kasus malaria, organisasi pengembangan mulai dari tahun 1968 sampai sampai tanggal.
obat juga berusaha untuk mengembangkan obat Kata kunci pencarian dan frase disertakan, In
yang lebih baik, lebih e FFI cacious dan aman. Setiap vitro model untuk antimalaria e FFI khasiat,
tahun, ribuan dan ribuan gugus disaring untuk metode pengujian antimalaria, obat assay
aktivitas antimalaria mereka, tetapi sangat sensitif antimalaria,
sedikit dari mereka yang mampu memasuki In vitro e model FFI keampuhan untuk Plasmodium
pasar. Mengembangkan obat baru dari ide dan tinggi throughput yang skrining obat
dasar adalah begitu kompleks sehingga
antimalaria. Semua in vitro metode yang banyak
dibutuhkan sekitar 12-15 tahun dan biaya lebih
digunakan untuk pengujian kerentanan senyawa /
dari $ 1 miliar sampai peluncuran obat baru
skrining obat / obat yang dimasukkan dalam
sebagai produk setengah jadi fi di pasar ( Hughes
penelitian ini. Namun, penelitian yang
et al., 2011 ). Baru-baru ini, lebih menekankan
melibatkan
diberikan kepada menemukan obat antimalaria
in vitro metode untuk diagnosis klinis seperti teknik
baru sebagai hasil dari prevalensi yang lebih tinggi diagnostik cepat,
resistensi terhadap
sebagian besar obat antimalaria yang dikenal di negara-negara Asia Tenggara ( Noedl spektroskopi Raman dan
metode HTS untuk parasit lainnya dikeluarkan. data
et al., 2008 ; Dondorp et al., 2009 ; Phyo et al., akan mengurangi beban di
2012 ) Dan untuk mengatasi situasi ini berbagai
akademik maupun non-pro lembaga fi t
menandatangani perjanjian
in vivo tingkat dan akhirnya menurunkan jumlah hewan
dengan industri farmasi besar untuk yang digunakan untuk
mengembangkan beberapa obat antimalaria baru. in vivo penyaringan. Banyak variasi dalam in vitro metode
Selain itu, ada beberapa agen antimalaria baru pengujian antimalaria dari tahun 1968 sampai sampai
yang berada di bawah prosedur uji klinis dan tanggal muncul dari konsep yang sangat dasar yang
banyak dari agen ini adalah mereka yang disebut “macrotechnique” ( Rieckmann et al., 1968 ).
dibangkitkan dari program penemuan obat Selanjutnya, dengan kemajuan dalam pengetahuan tentang
antimalaria sebelumnya ( Gelb, 2007 ). Saat ini, biologi parasit, ilmu material, dan teknologi, ada sejumlah
tantangan utama dalam prosedur penemuan obat in vitro metode pengujian antimalaria yang digunakan
adalah untuk merampingkan seluruh metode untuk antimalaria layar bertindak tidak hanya pada tahap
untuk mengurangi tenaga kerja, energi total erythrocytic tetapi juga pada tahap hati dan tahap

mekanistik dan konsumsi biaya, yang dimulai gametocyte. Sebagian besar

dengan skrining ribu senyawa di in vitro tingkat, yang

Frontiers di Farmakologi | www.frontiersin.org 754
2
Sinha et Pembangunan di antimalaria
al. Tes
in vitro e model FFI keampuhan membantu kami tidak dipublikasikan dan tesis juga dikecualikan.
dengan pengetahuan langsung menuju potensi Untuk menghilangkan bermuka dua judul dan
obat / penyakit baru, kebetulan identifikasi gugus abstrak semua dicari penelitian diperiksa dua kali
baru dalam waktu kurang dengan akuntabilitas dan daftar referensi dari artikel terpilih tambahan

minimum dan memungkinkan untuk menentukan Ulasan untuk studi lebih relevan.

pola resistensi antimalaria ( Fidock et al., 2004 ).

Juga, skrining senyawa in vitro secara keseluruhan
tes parasit yang diinginkan karena membantu
HASIL
dalam e ff efektif penetrasi senyawa di dalam
membran sel parasit pada tingkat terukur, yang Setelah pencarian menyeluruh dari PubMed,
memberikan dasar yang kuat untuk penemuan obat EMBASE dan Google Scholar, total 612 studi yang
relevan dengan ide diasumsikan yang diambil. Di
bymimicking yang in vivo situasi ( Hernandez et al.,
antaranya, hanya 61 artikel yang memiliki konten
2006 ; Hobbs dan Du ff y 2011 ). Namun, karena yang sesuai dan yang
tren mengadopsi pendekatan independen oleh terpenuhi inklusi dan kriteria eksklusi lanjut dipilih untuk
berbagai laboratorium penelitian untuk menulis ulasan ini ( Gambar 1,

mengembangkan tes mereka sendiri, sering Liberati et al., 2009 ).

menghasilkan banyak variasi yang berkaitan

dengan laboratorium-praktek, tes, dan data terkait
variabel. Oleh karena itu, dianjurkan untuk senyawa
baru layar menerapkan beberapa teknologi untuk
meminimalkan atau mengatasi variasi ini ( Lucantoni
et al., 2017 ). Oleh karena itu, dalam artikel ini kita
mencoba untuk menggambarkan
belakang dasar in vitro Penelitian dan bagaimana
DISKUSI
Parasit malaria menampilkan siklus hidup yang
kompleks yang adalah penengah antara dua host,
nyamuk Anopheles betina, yang membawa sporozoit di
kelenjar ludah dan kemudian menyuntikkan ke dalam
kebutuhan manusia saat mengambil makan darah. Tahap berikutnya
dari parasit malaria dimulai dengan di manusia; itu

metode baru dikembangkan dan kemudian diadopsi dibagi menjadi dua tahap yaitu, praeritrosit
(exoerythrocytic) fase dan fase erythrocytic. Dibutuhkan
untuk throughput tinggi skrining obat antimalaria dan
kurang dari satu menit untuk sporozoit untuk
aplikasinya dalam mencapai tingkat berikutnya in
menyerang sel-sel hati melalui sirkulasi darah setelah
vitro skrining berdasarkan pendekatan saat ini
diinokulasi. Di dalam sel-sel hati, sporozoit berubah
(seperti sel-sel induk).
menjadi skizon
multi-bernukleus. Setelah itu, skizon rilis ini ribuan
merozoit (exoerythrocytic schizogony) ke dalam
sirkulasi perifer yang bertanggung jawab untuk
sebagian besar gejala klinis di ff populasi ected.
Memahami siklus hidup parasit, biologi parasit, dan
patofisiologi penyakit merupakan dasar untuk
mengetahui sebelum penemuan obat e ff Ort.
Obat e uji FFI keampuhan di in vitro Tingkat
adalah yang paling langkah awal untuk skrining
perpustakaan senyawa baru ( Gambar 2). Rieckmann et al.
(1968) sederhana maju in vitro tes kerentanan disebut
Frontiers di Farmakologi | www.frontiersin.org Oktober 2017 | Volume 8 | Pasal
3 754
Sinha et Pembangunan di antimalaria
al. Tes
“macrotechnique” dengan tujuan untuk fi nd dan
mengikuti tren evolusi resisten terhadap
klorokuin Plasmodium falciparum di beberapa bagian
dunia. Metode
ini melibatkan menghitung dari skizon dalam
botol uji dengan perbandingan untuk kontrol
bebas narkoba dan hanya karena
kesederhanaan tes kit standar dan prosedur
standar, yang dikenal sebagai “WHO
macrotest standar,” didirikan di bawah
sponsor dari WHO. Namun, karena

Frontiers di Farmakologi | www.frontiersin.org Oktober 2017 | Volume 8 | Pasal

4 754
 GAMBAR 1 | Skematik fl ow diagram untuk menunjukkan kriteria seleksi untuk tinjauan sistematis.

kurang reproduktifitas dalam data, uji itu ditinggalkan di akhir 1980-an ( Rieckmandnirancang untuk
menggunakan sebagai alat laboratorium untuk membantu dalam
et al., 1968 ; Basco, 2007 ). Trager dan Jensen (1976) fi dimodifikasi ini tampaknya akan dirintis dalam membangun
diilustrasikan baru in vitro Metode untuk budidaya dasar banyak in vitro tes kerentanan obat untuk skrining
terus menerus P. falciparum, dan dengan ribuan gugus obat.
pengenalan metode ini, substansial modi fi kasi
dalam prinsip berlatih sebelumnya in vitro
Teknik kultur dilakukan ( Tabel 1). Juga, teknik
Skizon PENGHITUNGAN berdasarkan mikroskop
SEDERHANA pengawasan dan deskripsi mengenai epidemiologi
malaria yang resistan terhadap obat sebagai bagian
dari program monitoring global. Sistem uji ini
digunakan untuk mengikuti pola evolusi resistensi
obat parasit dan juga dapat digunakan untuk
menentukan tingkat dasar sensitivitas obat malaria.
Atas dasar dua protokol di atas, Mark
I, Mark II, dan Mark III dikembangkan antara tahun
1981 dan 2000 yang dikenal dengan “WHO standar
in vitro kit MICROTEST”( Basco, 2007 ).

ASSAY BERDASARKAN radioisotop

Selama budaya parasit malaria, trombosit dan eritrosit

yang tidak terinfeksi dalam
Setelah serangkaian spesifikasi-modi di uji varian 48 jam, Rieckmann et al. (1978) mengembanpgikrianng budaya tidak
mensintesis mereka RNA, DNA, protein atau membran
“MICROTEST”. Secara singkat, setelah mereka. Juga, leukosit tidak dapat berkembang
persiapan darah tebal mencoreng dari
biak dan karenanya hancurlah dalam jangka waktu
masing-masing dengan baik, jumlah skizon di setiap
tertentu. Jadi, di antara semua ini, hanya parasit
sumur dihitung terhadap 500 leukosit. Akhirnya, in malaria telah aktif membagi sel. Oleh karena itu,
vitro
penambahan zat radioaktif ke dalam media kultur
Kegiatan ditunjukkan sebagai persentase dari total
dihitung skizon pada setiap memungkinkan parasit untuk menggabungkan
konsentrasi obat, sehubungan dengan total skizon prekursor radioaktif sendiri, yang tampaknya menjadi
dihitung dalam kontrol bebas narkoba. Fingerprick pengukuran assay tidak langsung sensitif untuk
sampel darah kapiler yang su FFI memadai untuk aktivitas metabolisme parasit. Hal lain yang bene fi
melakukan tes ini. Setelah itu, teknik ini kemudian cial adalah keandalan Plasmodium sp. menggunakan
diadopsi untuk merancang sebuah lapangan yang purin eksogen karena mereka tidak dapat mensintesis
relevan MICROTEST, di bawah sponsor dari WHO purin de novo ( Sherman, 1977 ). Di antara radioisotop, [
oleh Wernsdorfer dan Kouznetsov (1980) . 3 H] hipoksantin adalah radioisotop yang paling
Wernsdorfer dan Payne (1988) . Pada dasarnya, disukai untuk antimalaria
macrotest dan MICROTEST adalah dua sebelumnya
WHO assay sistem yang
 GAMBAR 2 | Penggambaran yang berbeda in vitro tes kepekaan obat menargetkan tahap pengembangan yang berbeda dari Plasmodium.

in vitro tes kepekaan obat seperti juga main basa terinfeksi dibandingkan dengan [ 3 H] hipoksantin. Selama
purin yang dibutuhkan oleh P. falciparum. Selama kepekaan obat uji kedua [ 3 H] etanolamin dan [ 3 H]
pengujian ini, dalam kondisi normal, hipoksantin penggabungan meningkat secara linear di mulai
penggabungan [ 3 H] hipoksantin secara langsung parasitemia di antara 0,1 dan 1% dengan tingkat hematokrit
0,1-3%. Kedua prekursor radioisotop ini menunjukkan
berkaitan dengan hitungan P. falciparum- eritrosit yang
aktivitas metabolisme yang berbeda dan temuan
terinfeksi dan parasitemia awal yang dibutuhkan
menunjukkan bahwa, [ 3 H] etanolamin dapat menjadi
untuk pengujian ini adalah antara 0,1 dan
pengganti yang lebih baik untuk [ 3 H] hipoksantin untuk
1,0% 1,5% hematokrit selama 42 jam inkubasi (
Chulay et al., 1983 ; Geary et al., menilai kelayakan parasit. Juga, tanggapan yang sama di
1983 ). prekursor radiolabeled fosfolipid, seperti sumber bawah in vitro kondisi dengan P. falciparum referensi clone
kelompok kepala polar fosfolipid, [ 3 H] etanolamin diperoleh ketika [ 3 H] etanolamin radioisotop assay adalah
dimasukkan oleh Elabbadi et al. (1992) ; [ 3 H] comparedwith berbasis Saya SYBRGreen uoroassay fl (
etanolamin adalah radioisotop lain yang digunakan untuk Smilkstein et al.,
pengujian yang sama. Namun, penggabungan diamati
lebih dengan [ 3 H] etanolamin ke eritrosit yang
pada isolat klinis segar ( Basco, 2007 ). kondisi lapangan ( Noedl et
Juga, pengujian ini seharusnya menjadi al., 2003a ). Semua situasi ini mengharuskan penggunaan
metode referensi di sebagian besar metode non-radioaktif sebagai metode standar dalam
negara-negara maju untuk pengujian waktu dekat.
kepekaan obat; Namun, sama bukan
metode referensi di sebagian besar
negara-negara endemik malaria ( Basco,
2007 ). peraturan ketat mengenai
ENZIM BERBASIS ASSAY
penanganan dan pembuangan bahan
radioaktif sejak akhir 1970-an dan Parasit laktat dehidrogenase adalah enzim terminal
kebutuhan sekitar 0,5% dari parasitemia penting dari jalur glikolisis di Plasmodium
bersama dengan paksaan untuk parasit dan dengan demikian memainkan peran
menggunakan instrumen yang sangat mahal, penting dalam metabolisme karbohidrat anaerob
seperti counter cairan kilau, membatasi
( Makler et al., 1993 ). Plasmodium chie fl y
penerapan tes untuk menerapkan dalam
tergantung pada
2004 ). Yang pertama radioisotop, uji semi-otomatis adalah bahwa dari Desjardins glikolisis anaerobik, dan untuk
ini mereka perlu regenerasi NAD untuk mendapatkan
et al. (1979) . Metode ini terutama diadopsi untuk ux fl terus menerus glukosa melalui jalur ini (
skrining obat dalam Program Pengembangan Obat Sherman, 1998 ). Sebagai struktur enzim pLDH
Angkatan Darat Amerika Serikat antimalaria di
adalah morfologis di ff erent dari LDH tuan rumah,
Walter Reed Army Institute of Research (Washington,
sehingga produksi
DC, Amerika Serikat) dan saat ini dianggap sebagai
dan akumulasi digunakan sebagai indeks untuk
“standar emas” untuk berbagai in vitro tes kepekaan
memeriksa kelayakan parasit ( Sherman, 1961 ; Makler
obat.
et al., 1993 ; Brown et al., 2004 ). Oleh karena itu,
Uji melibatkan penggunaan kontra sintilasi cair
untuk kuantifikasi dari dimasukkan [ 3 H] hipoksantin. alat tes
Metode pengujian ini sekarang banyak digunakan di obat-sensitivitas, yang menampilkan penghambatan
laboratorium yang lengkap dan juga telah diadaptasi pro fi les aktivitas metabolik parasit melalui estimasi
untuk mempelajari epidemiologi enzim pLDH dikembangkan oleh Makler dan Hinrichs
(1993) . Uji ini berakar pada pemantauan
kemampuan enzim LDH dengan cepat
menggunakan koenzim, APAD yang merupakan
analog NAD, dalam reaksi, yang mengubah laktat
menjadi piruvat. Namun, LDH dari eritrosit tuan
melakukan hal
yang sama
TABEL 1 | Berbeda in vitro tes kepekaan obat yang digunakan dalam skrining obat antimalaria.

tahun Keuntungan kekurangan Keandalan / Referensi

In vitro model fi pengantar sensitivitas
keampuhan ef
Macrotechniq 1968 •Sederhana, •Perlu untuk 10 • Rieckmann et
ue • Tidak ml darah vena Sebuah al., 1968
memerlukan hitungan
•Rendah tingkat
peralatan parasit
keberhasilan
yang (<70%) antara
canggih 1000 dan
•Diandalkan 80, 000 parasit
untuk aseksual per μ l
aplikasi lapang
•Kurang dapat
diandalkan
dengan
sensitivitas
yang buruk
Microtechniq 1978 •Sederhana, •Kebutuhan •tingkat Rieckmann et
ue •volume kecil tenaga terlatih keberhasilan al., 1978
darah moderat
•Tidak •Membuang-
memerlukan buang waktu •sensitivitas
peralatan moderat
yang canggih
•Diandalkan
untuk
aplikasi lapang
Semiautoma 1979 • Sebuah •Mahal • Desjardins et
ted teknik pengukuran •Membuang- Keandalan al., 1979 ;

mikrodilusi buang waktu Chulay et al.,

yang cepat dan dan
•Beberapa 1983 .
atau tes
kuantitatif dari langkah- sensitivitas
isotop
aktivitas langkah yang moderat
(radiolabeled pengolahan
antimalaria
hipoksantin •
penggabung penangana
•pembacaan n khusus
an assay)
otomatis dan
•Mengurangi persyarat
kesempatan an sistem
variabilitas hasil pembuangan
limbah
• Persyaratan
 untuk relatif
tinggi (yaitu, ≥
0,1%) mulai
parasitemia
•Tidak pantas
untuk aplikasi
lapang
•Kebutuhan
instrumen
seperti counter
kilau cair dan
mesin panen

•Cepat •Mahal •keandalan moderat dengan

Autometric fl 1990 van Vianen et al., 1990 ;
•otomatis •Kebut
ow analisis •Tepat uhan sensitivitas yang tinggi van
instru Vianen et al., 1993
cytometeric
men
•Kemampuan
untuk
membedakan
antara tahap
parasit lainnya
•Menghasilkan
informasi
lainnya yang
berjarak satu
analisis tunggal
Isotop 1992 •Cepat •Mahal •Keandalan dan sensitivitas yang
•direproduksi •Kebut Elabbadi et al., 1992
assay
• Otomatis uhan moderat
(ethanola
dengan instru
mine
variabilitas men
penggabun
sedikit data •penanganan
gan assay) khusus dan
•Penambahan
hipoksantin kebutuhan
untuk
sistem
pertumbuhan pembuangan
parasit limbah
tambahan

Laktat 1993 •Cepat • Kurang •Handal dan sangat sensitif

dehidrogen •direproduksi berlaku untuk Makler et al., 1993

ase • Otomatis aplikasi

(pLDH) dengan lapang
assay variabilitas •

sedikit data Kebutuhan

• Tidak parasitemia

perlu awal 1-2%

tenaga
terlatih
• Sangat
Double-situs 2001 •Lebih mudah •Mahal handal dan sangat sensitif
Brasseur et al., 2001 ; untuk
enzim-linked untuk • mendeteksi parasitemia
melakukan Druilhe et al., 2001 rendah
laktat Kebutuhan (0,005%)
•Lebih cepat
dehidrogenas antibodi
untuk
e enzim monoklon
melaksanakan
Imunodeteksi • Tidak al
(DELI) assay •Tidak dapat
ada
diandalkan
petugas untuk
terlatih aplikasi lapang

diperluka

n
•Diandalkan
untuk
aplikasi lapang
• Lebih murah
dari in vitro
tes isotop
Histidin 2002 •Cepat •Memakan •Handal dan sangat sensitif
kaya protein •Sederhana waktu karena Noedl et al., 2002
untuk
II (HRPII) menggunakan
membangun
obat •sangat waktu budaya
kerentanan direproduksi lama (72 h)
assay
(Lanjutan)
TABEL 1 |
terus-
menerus
tahun Keuntungan kekurangan Keandalan / Referensi
In vitro model fi pengantar sensitivitas
keampuhan ef
•Mudah untuk
melakukan
•Berguna untuk
menguji obat
akting
lambat
•Membutuhkan
peralatan
teknis
sedikit
assay 2004 •Lebih mudah •Mahal •Handal danSriwilaijaroen et
CyQUANT •Lebih nyaman sangat al., 2004
untuk sensitif
melakukan
•otomatis
•Berlaku untuk
HTS
•Membutuhkan
langkah yang
lebih sedikit
•Menggunakan
peralatan
sederhana
•Piring dapat
tersimpan beku
untuk
waktu yang lama
sebelum
pengujian
tersebut
Berbasis 2004 • Berguna •Mahal •Keandalan dan sensitivitas yang
Saya malaria • Smilkstein et al., 2004
dalam
SYBR Hijau Kebut tinggi
fl lingkungan uhan
uorescence instru
terbatas
(MSF) assay men
sumber daya
•Berlaku untuk
mempelajari
interaksi
obat dalam studi
kombinasional
 obat
dalam
pengaturan
penelitian
•Juga berlaku
untuk
pengaturan
klinis
•Dirancang untuk
HTS
miniatur 2008 •Kuat •Mahal • Handal Bergmann-
Berbasis •Cepat • Leitner et al.,
pLDH dan
hambatan •Otomatis Kebut 2008
sangat
pertumbuhan uhan
assay (GIA pemantauan
sensitif
assay) peral
atan
Plasmodium
pertumbuhan
HTS.

Non-radioaktif 2007, •Kuat •Mahal • Handal Baniecki et al.,

berbasis DAPI 2010 •Kompatibilitas fl •persyaratan dan 2007 ;
uorescent instrumen
tinggi- sangat Ndiaye et al.,
2010
throughput sensitif
in vitro
pewarna, DAPI untuk memantau Plasmodium

pengujia pertumbuhan HTS

n kadar
logam
parasit 2007 2012 • Sederhana u a at

transgenik • Tidak ada n n

yang perbedaan t g
yang u b
mengekspresi
signifikan
kan gen k e
antara
reporter k
parasit
o e
disinkronisasi
b rj
dan tidak
a a
sinkron
t c
• Dilakukan e
dalam 12 jam y p
•Mahal transfeksi penggabu C et al.,
• ngan u 2007 ;
• l dan sensitif sebagai
Kebutuhan standar i Khan et
metode radioisotop
teknologi al., 2012

Mengalir 2013 • Luangkan sedikit waktu • Mahal • Handal dan sensitifRebelo et al., 2013
cytometric
hemozoin
deteksi uji

uorescenc
2013 • Kuat • e perlu yang mengandung
Berbasis diperlukan dilakukan gen gfp
• rasio
luciferase
untuk pada single-copy, yang sulit
tinggi- yang
analisis, parasit untuk membedakan dari
throughput lebih
daripada hidup dan yang tidak terinfeksi
screening baik
pembaca cincin- GFP- fl uorescence sel.
(HTS) assay signal-
lempeng fl bentuk
to- • moderat dan
uorescence parasit
sensitivitas superior
noise
sederhana tahap
•Dynamic Lucantoni et al., 2013
range luas •Analisis GFP fl
reaksi pada kecepatan yang sangat lambat di
hadapan APAD. Dalam uji ini, pengembangan
High Throughput SCREENING (HTS)
berkurang APAD (APADH) diukur, yang
menafsirkan korelasi langsung antara tingkat Karena berbagai keterbatasan, seperti kebutuhan
parasitemia dan aktivitas pLDH ( Makler dan microscopist, variasi data karena penghitungan manual
Hinrichs, 1993 ; Makler et al., 1993 ; Basco et al., dalam uji skizon pematangan, penggunaan dan pembuangan
1995 ). Karena keterbatasan seperti persyaratan zat radioaktif di hipoksantin assay, biaya tinggi, dengan
kepadatan parasit tinggi 1-2% dan ketidakpekaan beberapa langkah-langkah pengolahan, bersama dengan
untuk lapangan aplikasi, alat tes DELI kompatibilitas kurang untuk tujuan HTS, ada
dikembangkan, yang didasarkan pada monoklonal pengembangan uji di awal 1990-an berdasarkan aliran
antibodi spesifik untuk pLDH dan pengujian ini cytometry analisis. Prinsip dasar di balik aliran cytometry
ditemukan berlaku untuk kedua diagnostik dan obat yaitu bahwa mengambil keuntungan yang eritrosit manusia
- pengujian sensitivitas. Teknik ini sangat kekurangan DNA sehingga noda dan mendeteksi hanya
sensitif karena dapat mendeteksi parasit pada DNA parasit.
tingkat yang sangat rendah parasitemia Secara singkat, teknologi melibatkan, inkubasi parasit untuk
(<0,005%). jangka fi kasi tertentu dengan senyawa uji, diikuti oleh fi
Namun, karena terbatasnya ketersediaan xation dan kemudian pewarnaan di mana sel-sel terparasit
monoklonal antibodi spesifik untuk pLDH, ia telah keseluruhan dapat diwarnai dengan pewarna, hydroethidine atau
membatasi penerapannya ( Nogueira, 2010 ). inti dari parasit dapat diwarnai dengan DAPI, sebuah fl
Yang lain, uji didasarkan pada larut dalam air, uorescent dye. Kemudian, fl ow cytometry dapat digunakan
histidin dan protein kaya alanin, yaitu, HRP II yang untuk menghitung diperlakukan dan kontrol budaya.
sebagian besar lokal di berbagai kompartemen Terlepas dari ini, aliran cytometry juga memungkinkan untuk
selular parasit termasuk sitoplasma ( Howard et al., di ff erentiate antara di ff erent tahap parasit dalam
1986 ). pengujian ini setidaknya 10 kali lebih eritrosit dengan bantuan gating. Semua fitur ini membuat
sensitif dibandingkan dengan tes isotop lainnya alat tes yang relatif sederhana, yang memberikan throughput
withminor persyaratan teknis. Metode ini melibatkan yang tinggi dan menjadi alasan untuk penggantian teknik
pengukuran tingkat HRP II, yang secara langsung yang lebih tua, tapi perhatian yang
berhubungan dengan kepadatan parasit dan paling penting dalam menggunakannya, adalah keterbatasan
pertumbuhannya ( Desakorn et al., 1997 ; Noedl et biaya. van Vianen et al. (1990) , Melaporkan analisis
al., 2002 ). Selain itu, uji HRP II membutuhkan otomatis dari tes narkoba oleh aliran cytometry dan
waktu lebih lama (72 jam) di kultur daripada tes mereka yang sebelumnya digunakan aliran cytometry
lainnya (48 jam), yang memungkinkan assay untuk skrining obat baru dikembangkan. The fl ow metode
menguntungkan untuk menguji obat lambat bertindak cytometric juga menentukan pematangan skizon tetapi
tanpa menggabungkan perubahan pada protokol memungkinkan jumlah yang tepat dari inti per parasit akan
yang ada ( Noedl et al., 2002 ). ditentukan, memberikan account yang lebih akurat dari
perkembangan dalam budaya. Selain itu, parasitemia yang
dihitung dalam setiap sumur, sehingga koreksi dapat dibuat
untuk reinvasion.
Berbagai di ff erent percobaan, yang Metode ini adalah metode pengganti untuk tes
dirancang untuk sensitivitas studi obat, radioaktif lainnya pada akhir 1980-an dan juga
invasi-blocking, optimasi kondisi budaya, berlaku untuk skrining antimalaria. Kemudian
dan komparatif relatif fi kebugaran dari sejumlah pewarna uorescence fl digunakan untuk
populasi parasit, dapat dianalisis tanpa
HTS obat. Baniecki et al. (2007) ,
perubahan dari prosedur budaya. Arus
Mengungkapkan kompatibilitas dan ketahanan untuk
cytometry lebih akurat dalam menghitung
mengamati Plasmodium pertumbuhan HTS menggunakan
parasitemia, misalnya, dan dapat di ff
DAPI, dalam piring microtiter 384-baik. Terlepas
erentiate antara tahap perkembangan,
dari ini,
yang meningkatkan pembacaan tes
dibandingkan dengan teknik beberapa DNA terinterkalasi pewarna lainnya, seperti
konvensional. Hal ini dapat SYBR Hijau I, YOYO-1, dan PicoGreen, telah baru-
mengakibatkan peningkatan jumlah tes baru dijelaskan untuk mengukur in vitro Plasmodium
yang sukses, tetapi juga dapat hambatan
menyebabkan fi penyederhanaan prosedur pertumbuhan ( Bennett et al., 2004 ; Smilkstein et al., 2004 ;
budaya. Perbaikan tambahan otomatisasi Kosaisavee et al., 2006 ; Quashie et al., 2006 ; Weisman
analisis dan pengolahan data. Semua data et al., 2006 ; Baniecki et al., 2007 ). Sebagai eritrosit
yang diproses dengan cara standar,
dewasa
mempertahankan objektivitas, dan data
tidak memiliki RNA dan DNA, pewarna secara
tetap tersedia untuk pemeriksaan ulang.
khusus mengikat DNA parasit pada tahap
Data dari sejumlah besar tes dapat
erythrocytic dari P. falciparum dan secara signifikan
dikombinasikan.
sangat sensitif terhadap didefinisikan puncak
spektrum baik-de, dan juga kurang mutagenik
bila dibandingkan dengan etidium bromida ( Bennett
et al., 2004 ). Sebuah penelitian
yang dilakukan oleh Smilkstein et al. (2004) ,
FLUORESCENCE BERBASIS ASSAY
Menunjukkan bahwa nilai-nilai IC 50 adalah sama dengan
Selanjutnya, kebutuhan untuk sangat e SYBR Green saya sebagai yang diperoleh dengan
FFI efisien throughput yang serta radioisotop, [ 3 H] etanolamin penggabungan.
permintaan untuk tes non-radioaktif
mengakibatkan pengembangan teknik
berbasis uorescence fl baru yang melibatkan
cepat otomatis kuantifikasi pertumbuhan
kemajuan terbaru dalam implikasi teknologi
parasit setelah pewarnaan parasit dengan
transfeksi pada parasit malaria memungkinkan
DNA fl uorescent mengikat pewarna
inisiasi jenis transgenik garis parasit yang
seperti etidium bromida ( Waki et al.,
mengungkapkan di ff erent wartawan ( Crabb, 2002 ),
1986 ). Pengikatan ethidium bromide
Dan ditemukan untuk menjadi lebih sensitif seperti
untuk DNA menyebabkan peningkatan
standar uji penggabungan radioaktif lainnya dengan
intensitas uorescence fl nya yang
hampir nol pendaran latar belakang yang
sebanding dengan jumlah DNA parasit.
tidak memerlukan sumur kosong atau
eritrosit yang tidak terinfeksi sebagai
kontrol negatif ( Sanchez et al., 2007 ).
Cui et al. (2008) , Yang dihasilkan
stabil mengekspresikan P. falciparum
baris dengan fi reporter re fl y luciferase,
yang dioptimalkan untuk format piring
96-baik mikrotiter dan berfungsi sebagai
non-radiolabel-bebas, sistem yang nyaman (
Cui et al., 2007 ; Khan et al., 2012 ). Selain
itu, uji ini disederhanakan sebagai
dapat menggunakan kedua parasit tidak sinkron dan
disinkronkan dengan tidak signifikan di ff perbedaan-
perbedaan, yang menunjukkan kurang konsumsi
waktu dan tenaga. Selain itu, sebagian besar tes
antimalaria memakan waktu sekitar 48-72 jam untuk
menghasilkan hasil, bagaimanapun, assay
luciferase hanya membutuhkan waktu 12 jam
untuk menafsirkan hasil dan karenanya dapat
diandalkan untuk obat cepat bertindak yang
hypusine dibentuk dengan dimurnikan enzim DHS dan
DOHH ( Kaiser et al., 2012 ).
IN VITRO Tes PENARGETAN TAHAPAN LIVER
Gego et al. (2006) dikembangkan pendekatan baru
berdasarkan inframerah fl uorescence deteksi secara
otomatis dan cepat mengkuantifikasikan
Plasmodium skizon hati in vitro. Secara singkat, teknik
melibatkan plating dari

menunjukkan bahwa ekspresi wartawan diubah

sebelum parasit setiap ulangan. Meskipun assay
tidak dibuat untuk tujuan resistancemonitoring
antimalaria, kesederhanaan menunjukkan
kelayakan baik dari assay luminescent ini untuk
antimalaria HTS. Juga, HTS membutuhkan
setidaknya 384-baik piring budaya mikrotiter dan
pengujian ini dapat dilakukan di 384 sumur atau
format bahkan lebih tinggi sebagai Z ''' skor> 0,77
dukungan
untuk pengujian 384-baik ( Cui et al., 2008 ). The CyQUANT assay ditunjukkan oleh SriwilaijaroHenepG2 atau hepatosit
utama di piring plastik selama sekitar 24 jam sebelum
et al. (2004) , Adalah satu lagi fl berbasis uorescence IN VITRO BETA-hematin PEMBENTUKAN ASSAY
assay yang menggunakan CyQUANT GR cyanine
Hemozoin adalah metabolit beracun disintesis oleh parasit
pewarna yang menampilkan kuat fl uorescence, yang malaria selama
dapat dengan mudah dideteksi pada eksitasi 485 nm
dan divisualisasikan pada 530 nm dengan fl ow
cytometer. Uji ini ditemukan optimal untuk in vitro
tes antimalaria dan GR pewarna menunjukkan
sensitivitas optimal dan jangkauan linearitas
terluas dibandingkan dengan pewarna
cyanine lainnya ( Sriwilaijaroen et al., 2004 ).
inokulasi Plasmodium
sporozoit, yang mengikuti sentrifugasi
singkat, mencuci, dan inkubasi sel IN VITRO UJI UNTUK gametosit
selama 48 jam selama 5 hari sebelum
gametosit dari P. falciparum mengalami lima tahap
kuantifikasi. Kuantifikasi dilakukan
dibedakan secara morfologis terpisah dalam
melalui Odyssey sistem pencitraan
eritrosit selama periode antara 8 dan 12 hari (
inframerah dikombinasikan dengan
Baker, 2010 ) Dan
counter koloni, dan pendekatan ini divalidasi
terhadap tiga strain P. berghei ( ANKA strain), kemudian mereka mempertahankan dalam darah perifer

P. yoelii ( 265BY strain), dan P. falciparum ( NF54 selama beberapa minggu ( Bousema et al., 2010 ). Tahap
strain) ( Gego et al., 2006 ). Gametocyte merupakan tahap yang berhubungan
dengan
metabolisme heme yang memaparkan salah satu fitur yang berbeda dari Plasmodium. transmisi “druggable”
dari Plasmodium dan karena ada begitu banyak in vitro
Penghambatan metabolisme heme mengarah ke akuisisi heme beracun yang pada
akhirnya membunuh metode yang telah dipelajari dan dipublikasikan untuk
Plasmodium sebagai akibat dari lisis membran dan menilai aktivitas gametocidal senyawa ( Lucantoni
hambatan dalam fungsi metabolisme lain di dan Avery 2012 ). Sebagian besar tes ini
Plasmodium ( Francis et al., 1997 ; Pandey et al., 1999 ; didasarkan activitymeasurement onmetabolic (
Stojiljkovic et al., 2001 ). Peatey et al., 2011 ), Yang secara langsung
Secara singkat, untuk estimasi beta-hematin sebagai
bagian dari skrining berkorelasi dengan intensitas fl uorescence Zat warna
antimalaria, prosedur melibatkan pembentukan beta- yang dipancarkan dari garis parasit transgenik yang
hematin yang dimulai setelah penambahan faktor mengekspresikan semacam gen pelapor ( Buchholz
katalisator dalam jumlah atau nukleasi yang sesuai. et al., 2011 ), Alamar biru, indikator oxidoreduction
Setelah itu, senyawa uji ditambahkan ke campuran
( Tanaka dan Williamson, 2011 ), Dan deteksi
reaksi diikuti dengan inkubasi selama 12-24 jam dan
bioluminescence-dimediasi ATP ( Lelièvre et al.,
akhirnya menghasilkan beta-hematin yang kuantitatif
2012 ) Dan juga, aktivitas
menilai dengan di ff erent metode. ( Tekwani dan
pLDH dipelajari baru-baru ini ( Roncales et al., 2012 ).
Walker, 2005 ). Kebanyakan protokol melibatkan di ff
Kemudian, Tanaka et al. (2013) dimodifikasi dan divalidasi
diferensiasi dari beta-hematin pelet melalui filtrasi atau
sentrifugasi diikuti dengan pencucian berurutan pelet alamar indikator biru assay cocok untuk HTS dan untuk
dengan air atau larutan menilai
Tris-HCL / SDS dan larutan bikarbonat basa atau kelayakan tersebut, gametosit juga ditambahkan ke
DMSO. Selain itu, berbagai pendekatan konsep ini. Semua metode di atas terutama
eksperimental yang disebutkan tentang estimasi beta- difokuskan pada gametocytogenesis di langkah
hematin in vitro dan menggunakan ini untuk kemudian pembangunan, sebagai tahap dewasa
mengevaluasi screening antimalaria. Kuantifikasi sering dihipotesiskan untuk sensitivitas mereka
dari beta-hematin adalah langkah besar dalam pengujian
untuk sebagian besar obat antimalaria dan, oleh
ini yang bisa dilakukan
karena itu, perhatian terbatas. Sampai saat ini,
tidak ada studi seperti yang menghasilkan
penilaian yang luas pada tingkat sensitivitas pada
gametosit stadium awal sehubungan meskipun ada beberapa studi yang terbatas
dengan sebagian besar antimalaria, beberapa
oleh sejumlah teknik seperti spektrofotometri ( Basilico et al., 1998 ; Pandey et al., obat didirikan ( Smalley, 1977 ;
Chutmongkonkul et al., 1992 ; Fleck et al., 1996 ; Chavalitshewinkoon
1999 ; et al., 2000 ; Adjalley et al., 2011 ; Buchholz et al.,
2011 ). Selain itu, sebelumnya dan beberapa laporan
baru-baru ini menggambarkan di ff perbedaan-
Baelmans et al., 2000 ; Parapini et al.,
2000 ; Tripathi et al., perbedaan yang ada sehubungan dengan
2001, 2004 ; Deharo et al., 2002 ) Radioisotopic ( pengembangan di ff erent pola chemosensitivity
Kurosawa et al., 2000 ), Fl belum menghasilkan berkembang gametosit serta tahap
aseksual untuk beberapa senyawa
antimalaria seperti klorokuin ( Chutmongkonkul et al., 1992 ),
Pirimetamin ( Chutmongkonkul
uorometric ( Sullivan dan Meshnick 1996 ; Rebelo et al., 2013 ), Dan HPLC berbasis ( Beertgaaelr., 1992 ) Atovaquone (
Smalley, 1977 ; Fleck et al., 1996 ; Adjalley et al.,
et al., 1995 ). heme monomer dan hemozoin / beta-
hematin mungkin juga di ff erentiated dengan
spektroskopi FT-IR ( Slater et al., 1991 ).

Sebuah uji skrining cepat untuk obat antimalaria telah dikembangkan dari Plasmodium
untuk menentukan deoxyhypusine dan
2011 ), Dan biru metilen ( Buchholz et al., 2011 ). D'Alessandro et al. (2013) melaporsskkaennario untuk memecahkan
masalah ini dan P. vivax berhasil dibudidayakan
fabrikasi novel, cepat dan assay termurah untuk skrining dalam model ini ( Mazier et al., 1984 ). Penggunaan
senyawa gametocidal dengan mengukur aktivitas hepatosit manusia untuk kultur parasit malaria
pLDH gametosit di piring 96-baik. Validasi assay didirikan oleh Dembele et al. (2014) . Mereka
dilakukan dengan menggunakan obat referensi anti- berhasil dibudidayakan erythrocytic (EE) tahap exo-
gametocyte, dan hasilnya diinterpretasikan dengan dari P. falciparum dan P. cynomolgi in vitro dan juga
membandingkan tindakan pembacaan nyamuk mampu mengembangkan bentuk hypnozoite.
infektivitas menggunakan pakan membran standar protokol ini mungkin sangat berguna untuk
assay (SMFA), yang merupakan uji emas saat pencarian obat yang membunuh hypnozoites dan
transmisi standar memblokir ( van der Kolk et al., juga untuk biologi studi hypnozoite ( Dembele et
2005 ; Batu et al., 2014 ). Baru-baru ini, sebuah al., 2014 ). Tetapi penggunaan hepatosit primer
pendekatan luciferase HTS assay menerapkan telah membawa masalah lain; yaitu, dibutuhkan
dilakukan dalam menilai aktivitas senyawa pada awal ketersediaan berkelanjutan dari sel-sel segar. Prosedur
(tahap untuk kriopreservasi didirikan oleh
I-III) P. falciparum. Para penulis menunjukkan
penerapan pengujian ini dengan antimalaria Maret et al. (2013) , Dan penggunaan protokol ini
referensi dan juga melaporkan beberapa pelanggan diizinkan penggunaan kembali hepatosit primer
baru dari MMV Malaria Box ( Lucantoni et al., 2013 ). cryopreserved dan ini budaya digunakan kembali
Lucantoni et al. (2016) diperpanjang aplikasi mereka menunjukkan bukti Plasmodium invasi ( Maret et
sebelumnya untuk memberikan prompt, langsung, dan
al., 2013 ).
biaya-e ff efektif HTS assay, yang mampu menilai
aktivitas senyawa terhadap gametosit tahap akhir Namun, hepatosit primer berasal dari sebuah
(tahap IV dan V), dengan tambahan manfaat t dari kolam kecil donor. Jadi jumlah kecil dari kolam
pro fi ling aktivitas renang sampel mungkin tidak mewakili
selama proses pembangunan gametocyte
dan keragaman
pematangan. Uji ini juga cocok untuk mengevaluasi
aktivitas senyawa pada masa inkubasi hingga 72 jam,
yang
menggambarkan kualitas yang sangat baik dan reproduktifitas, memiliki rata-rata Z genetik terlihat pada
populasi manusia ( Noulin 2016 ). Hepatosit berasal dari
'- nilai-nilai 0,85 ± 0,01 ( Lucantoni et al., 2016 ). gametocyte. Namun, ada beberapa senyawa referensi terhadap
Saat ini, obat baru yang menghalangi keduanya atau pengembangan gametocyte yang sebagian besar digunakan
salah hepatosit atau pengembangan gametocyte, untuk validasi dari tes baru.
diperlukan untuk memblokir transmisi parasit. Dengan
demikian, metode skrining yang cocok untuk
menjelajahi senyawa gametocidal baru diperlukan
untuk mengamankan transmisi lanjut malaria
terutama di daerah endemik. Namun, kelemahan utama
dalam pengembangan tes ini adalah tidak
tersedianya protokol standar untuk budidaya NEXT-GENERATION UANG MUKA ASSAY
 sel induk, mengatasi banyak keterbatasan ini. Stem
Dalam beberapa tahun terakhir, terobosan di sel yang diturunkan hepatosit mungkin mewakili
bidang penelitian sel induk memberikan lebih beragam genotipe; terbarukan dan
kesempatan tambahan untuk mempelajari personalisasi dapat dilakukan dengan ekspresi
genotipe langka ( Ng et al., 2015 ).
prospectives baru dalam biologi parasit, terutama
yang berkaitan dengan tahapan siklus sel parasit
Diinduksi sel induk berpotensi majemuk (iPSCs) bisa
yang tampaknya menantang sejauh atau bahkan di ff erentiated
tugas yang mustahil dapat mencari melalui ini in vitro untuk menghasilkan iHLCs dengan banyak

kemajuan baru di in vitro tahap-tahap peralihan (pluripotent, definitif

endoderm, spesifik ed hati, hepatosit dewasa, matang
tingkat ( Gambar 3).
hepatosit) menggunakan spesifik protokol kultur sel
seperti yang disebutkan oleh Si-Tayeb et al. (2010) .
Hati TAHAP MALARIA: PERAN SEL sel-sel induk ini dapat dikumpulkan dari kolam besar
induced pluripotent donor dan ini
dapat memberikan kita sebuah bank iPSCs dengan
Untuk pemodelan tahap hati malaria, baris sel
keragaman genetik yang besar ( Ng et al., 2015 ). Ng et
hepatosit yaitu, HepG2, HCO4, adalah orang-orang
al. (2015) juga diuji apakah iHLCs IPSC yang
yang umum digunakan, dan spesies malaria yang
diturunkan dapat digunakan sebagai model untuk
paling umum digunakan adalah Plasmodium
sporozoit P. yoelii, P. berghei, P. falciparum, dan P. tahap hati malaria atau tidak. Dalam percobaan
vivax
mereka, iHLCs, menunjukkan morfologi hepatosit khas
( Maret et al., 2013 ). Tapi metabolisme dalam baris
dengan bentuk poligonal dan menyatakan penanda
sel abadi adalah sedikit di ff erent dari in vivo yang
hepatosit prototipe seperti albumin manusia, α 1-anti-
dan dengan demikian mereka tidak mungkin
meniru in vivo kondisi benar ( Noulin 2016 ). Sekali tripsin,
lagi hepatosit primer adalah host alami malaria ( dan α- fetoprotein. iHLCs positif untuk kedua CD81
Maret et al., 2013 ). budaya hepatosit tikus primer dan SRB1, yang merupakan faktor entri host untuk
datang ke malaria hati-tahap, dan mereka tepat
diterjemahkan ke
permukaan sel. Dalam percobaan mereka, mereka
menemukan bahwa tahap hati Plasmodium
dapat e ff ectively dimodelkan menggunakan
IPSC berasal iHLCs. Tapi itu ditemukan bahwa
iHLCs terinfeksi Plasmodium sensitif terhadap
atovakuon, tetapi tidak untuk primakuin.
Atovakuon menentang aktif Plasmodium dalam
bentuk orangtua, tapi primakuin membutuhkan
bioaktivasi oleh aksi enzim hati. Pada langkah
berikutnya percobaan mereka, mereka
menggunakan molekul kecil (FPH1)
untuk enzim metabolisme obat manusia dewasa
upregulate. Dalam FPH1 diobati, Plasmodium
iHLCs terinfeksi, primakuin adalah e ff
efektif terhadap kedua P. yoelii dan P.
falciparum EEFs, ( Ng et al., 2015 ). Oleh
karena itu, model ini dapat menjadi
bagian penting dari penemuan obat
antimalaria dengan secara khusus
menargetkan pada tahap hati.

erythrocytic FASE

Giarratana et al. (2011) menunjukkan teknik baru

eritrosit pembangkit in vitro dari CD34 + HSCS.
Ini
 GAMBAR 3 | Peran sel induk di pembangkit in vitro model fi keampuhan ef untuk malaria. iHLC, diinduksi manusia hepatosit-seperti sel-sel; hESC, sel-sel induk embrionik manusia; MSP1, merozoit permukaan protein 1; FPH1, proliferasi fungsional hepatosit primer 1;

eritrosit adalah serupa dalam hal deformabilitas, dengan sel positif CD71 tinggi (pematangan retikulosit
konten enzim, kapasitas hemoglobin mereka dikaitkan dengan
untuk fi x / release oksigen, dan ekspresi penghapusan selektif protein membran, misalnya, reseptor
antigen golongan darah ke eritrosit endogen transferin, CD71) ( Martín-Jaular et al., 2013 ). Ini
yang normal. Dalam sebuah penelitian fase 1 menunjukkan kemungkinan retikulosit HSC yang diturunkan

yang
sama, itu berhasil diterjemahkan ke dalam manusia dengan paruh yang sama ( Giarradtaalnaam proses penemuan
obat terhadap P. vivax. Panichakul et al. (2007)
et al., 2011 ). Fernandez-Becerra et al. (2013) menunjukkan bahwa mereka
eritrosit yang diperoleh baik dari darah perifer atau glycophorin A bersama dengan Du ff antigen golongan
sumsum tulang CD34 + HSCS manusia (hHSCs) darah y, yang dianggap sebagai penanda permukaan
sebagian besar permisif untuk Plasmodium untuk invasi Plasmodium. Setelah itu tes invasi yang
infeksi. Dalam percobaan mereka, pada hari 14 dilakukan menggunakan 3D7 P. falciparum
eritrosit berkembang menunjukkan ekspresi
 sebuah maju in vitro Metode di mana HSCS kabel
parasit saring dan P. vivax isolat dan itu
manusia berada di ff erentiated artifisial di hadapan
menunjukkan bahwa eritrosit dan retikulosit baik
erythropoietin untuk menghasilkan prekursor eritrosit
di ff erentiated dari CD34 + hHSCs andwere
rentan. retikulosit positif y Du ff muncul setelah 10
sepakat untuk invasi kedua Plasmodium
hari dan jumlah maksimum ditemukan di 14-16 hari
jenis ( Fernandez-Becerra et al., 2013 ).
budaya. P. vivax adalah co-dibudidayakan pada hari
Plasmodium falciparum dapat menyerang eritrosit
10 dan seterusnya dan pertumbuhan parasit
dari semua tahap, tapi P. vivax sebaiknya terdeteksi pada tumbuh eritrosit. budaya ini
Menginvasi retikulosit ( Golenda et al., 1997 ). dipertahankan selama> 2 minggu untuk 85 hari
Tapi retikulosit hanya 0,5-1% dari total eritrosit dengan menyediakan eritrosit. count puncak
dalam aliran darah dan lagi umur mereka retikulosit (0,5%) diamati pada hari ke-14 dan
sebelum pematangan hanya 24 jam. metode parasitemia sangat kurang antara
sebelumnya digunakan untuk
0,0001 dan 0,0013% ( Panichakul et al., 2007 ).
retikulosit konsentrat yang sentrifugasi ( Golenda
Noulin et al. (2012) mengembangkan metode di
et al., 1997 ; Borlon et al., 2012 ), Dan
mana retikulosit pertama muncul di hari 12 dari di
penggunaan lisis bu ff er ( Grimberg et al., 2012 ).
ff diferensiasi dan jumlah puncak retikulosit diamati
Penelitian terbaru jelas menunjukkan preferensi P.
pada hari ke-14 (5% pada hari 13 dan 18% pada hari
vivax menuju retikulosit
ke-14). Jumlah retikulosit kemudian menurun tiba-
tiba 10% pada hari 16 yang hampir menghilang
pada hari 19 ( Noulin et al., 2012 ). Masalah lain
adalah retikulosit segar yang akan digunakan
bersama dengan segar vivax

isolat. Noulin et al. (2012) mengembangkan teknik fi

dimodifikasi dari kriopreservasi HSC berasal
retikulosit yang nantinya dapat digunakan untuk
tes invasif yang merupakan langkah penting
menuju berkelanjutan P. vivax budaya ( Noulin et
al., 2012 ).
KESIMPULAN teknis individu ( Noedl et al., 2003b ; Bacon et al., 2007 ;
Akala et al., 2011 ). Terlepas dari kondisi di atas, sifat obat,
Pada tahap screening senyawa, ribuan senyawa
seperti kelarutannya, pH di ff selisih, dan mekanisme display
disaring (1,000-2,000,000 senyawa per skrining
tindakan, metode-dependent positif atau negatif e ff ects
kampanye) menggunakan HTS baru-baru ini teknik.
analisis data bersama dengan hasil interpretasi ( Wein et al.,
Sekarang, setelah identifikasi hits, yang memiliki
2010 ). Juga, itu menantang untuk meramalkan hasil in vitro
rata-rata sekitar
pengujian untuk in vivo yaitu, utuh biologi sistem ( Rothman,
2002 ; De Clercq 2005 ). Oleh karena itu, observasi lebih
1,0%, mereka seharusnya peringkat yang
berhati-hati diperlukan sehubungan dengan pemilihan
berdasarkan beberapa kriteria (seperti cara sintesis,
memimpin yang tepat dan optimasi dan in vitro Toksisitas pro fi
potensi, toksisitas; kontradiksi dan keterbatasan lainnya
le. Sekali lagi, dalam obat yang memerlukan aktivasi metabolik,
dan kebaruan untuk digunakan) untuk fi nding
in vitro teknik evaluasi mungkin sedikit di FFI kultus, meskipun
keluar lead yang paling optimal. Sebagian besar
budaya hepatosit primer dan teknik yang lebih baru lainnya
senyawa divalidasi dan diuji di throughput rendah
seperti penerapan sel punca
skrining metode yang meliputi radikal
penyembuhan dan transmisi tes.
Namun, kedua ini sangat mahal bersama dengan
waktu-konsumsi dan dengan demikian, mereka
sebagian besar diterapkan pada ukuran selektif
senyawa. Setelah pemilihan lead, optimasi untuk
karakteristik optimal seperti maksimum e FFI
efisiensi bersama dengan bioavailabilitas yang lebih
baik dan toksisitas kurang dipertimbangkan.
Akhirnya, modi fi ed lead menjalani evaluasi lebih
lanjut, dan kemudian orang-orang dengan risiko-
bene ratio fi t menguntungkan maksimum
diteruskan ke langkah berikutnya dari
pembangunan; itu adalah,

Dari beberapa in vitro / ex vivo tes kerentanan, alat

tes antimalaria yang paling menuntut meliputi, HRP-II
ELISA, penggabungan radioisotopic, dan saat metode
SYBR Green saya dan semua dikenakan banyak data
keragaman.
Alasan untuk variabilitas ini dan membingungkan
interpretasi adalah di ff perbedaan-perbedaan dalam
protokol dari metode pengujian, di ff erent kondisi
laboratorium, penggunaan strain parasit yang
berbeda untuk fenotipe kerentanan, dan lainnya di
ff perbedaan-perbedaan yang timbul karena kinerja
memberikan wawasan tentang throughput assay, di atas konsentrasi-e ff ect
bagaimana untuk memecahkan masalah berbagai; memungkinkan untuk beberapa

ini ( Li dan Kedderis 1997 ; Gómez-Lechon et serendipity, serta hipotesis-bebas, analisis senyawa

al., 2003 ). model matematika dan teknik yang menyediakan kemungkinan data-driven yang
kuat untuk penilaian berikutnya di fenotip yang
yang lebih baru seperti “manusia pada
sangat kompleks atau in vivo sistem. Beberapa
chip” dapat membantu untuk lebih baik in
keuntungan yang o ff ered oleh in vitro e model FFI
vitro-in vivo korelasi ( Sung et al., 2010 ;
keampuhan adalah sebagai berikut:
Quignot dan Bois, 2013 ). Terlepas dari ini, model
PB-PK merupakan komponen
penting untuk ekstrapolasi ini ( Yoon et al.,
2012 ). Namun, in vitro jaringan dan sensitivitas • Sederhana
organ mungkin benar-benar di ff erent • Bahkan sel-sel manusia dapat digunakan
dengan yang apa yang diamati pada sel untuk evaluasi, sehingga kami dapat
kultur
mengumpulkan data manusia
• kenyamanan: sejumlah besar senyawa dapat
in vitro dan dengan demikian in vitro
dievaluasi pada saat yang sama
seluler PK-PD pro fi le mungkin di ff • Otomatisasi: seperti dalam kasus HTS
erent dari in vivo seluler PK-PD pro fi le. • Tepat dan e FFI efisien
Oleh karena itu, model PB-PK merupakan • Cepat
• Sinergisme atau antagonisme dengan kombinasi obat
komponen penting untuk ekstrapolasi
dapat dipelajari
ini ( Yoon et al., 2012 ).
• penilaian yang lebih baik dari aktivitas intrinsik dari
Terlepas dari ini defisiensi / kekurangan, in obat.
vitro
teknik merupakan landasan dari proses
KONTRIBUSI PENULIS
penemuan obat baru. Mereka memberikan
kami pengetahuan langsung dalam BM, RS, PS, dan SS merancang tata letak ulasan.
kaitannya dengan pengaturan obat / SS dan PS mengumpulkan data. BM dan RS
penyakit baru yang potensial; beberapa menganalisis data tersebut. SS, PS, RS, dan BM
senyawa dengan di ff erent mode tindakan disiapkan artikel.
dapat diuji dan, tergantung pada

REFERENSI Bacon, DJ, Jambou, R., Fandeur, T., Le Bras, J., Wongsrichanalai, C., Fukuda,
MM, et al. (2007). Dunia resistensi antimalaria jaringan (WARN) II: in vitro antimalaria kerentanan terhadap
obat. Malar. J. 6: 120. doi: 10,1186 / 1475-2875-6-120
Adjalley, SH, Johnston, GL, Li, T., Eastman, RT, Ekland, EH, Eappen,
AG, et al. (2011). Kuantitatif, penilaian Plasmodium falciparum perkembangan seksual
mengungkapkan aktivitas transmisi-blocking ampuh oleh biru metilen.
Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 108, E1214-E1223. doi: 10.1073 / pnas.1112037108

Akala, HM, Eyase, FL, Cheruiyot, AC, Omondi, AA, Ogutu, BR, Waters,
NC, et al. (2011). kepekaan obat antimalaria pro fi le dari Kenya
barat
Plasmodium falciparum fi isolat lapangan ditentukan oleh SYBR Hijau I in vitro assay dan
analisis molekuler. Saya. J. Trop. Med. Hyg. 85, 34-41. doi: 10,4269 / ajtmh.2011.10-
0674
Baelmans, R., Deharo, E., Muñoz, V., Sauvain, M., dan Ginsburg, H. (2000).
kondisi eksperimental untuk menguji aktivitas penghambatan
klorokuin pada pembentukan beta-hematin. Exp. Parasitol. 96, 243-
248. doi: 10,1006 / expr.
2000.4558
Baker, DA (2010). Malaria gametocytogenesis. Mol. Biochem. Parasitol. 172, 57-
65. doi: 10,1016 / j.molbiopara.2010.03.019 Baniecki, ML, Wirth, DF, dan Clardy,
J. (2007). -Throughput tinggi Plasmodium

falciparum assay pertumbuhan untuk penemuan obat malaria.

Antimicrob. Agen Chemother. 51, 716-723. doi: 10,1128 / AAC.01144-
06
Basco, LK (2007). Bidang Penerapan di Tes vitro untuk Sensitivitas
Manusia Malaria Parasit ke antimalaria Obat. Jenewa: Organisasi Kesehatan Dunia.

Basco, LK, Marquet, F., Makler, MM, dan Le Bras, J. (1995). Plasmodium
falciparum dan Plasmodium vivax: aktivitas dehidrogenase laktat dan yang
 aplikasi untuk pengujian kerentanan terhadap obat. Exp. Parasitol. 80, 260-271. doi: 10. 1006 /
expr.1995.1032
Basilico, N., Pagani, E., Monti, D., Olliaro, P., dan Taramelli, D. (1998).
Sebuah metode berbasis microtitre untuk mengukur polimerisasi hem aktivitas penghambatan
(HPIA) obat antimalaria. J. Antimicrob. Chemother. 42, 55-60. doi: 10,1093 / jac / 42.1.55
Bennett, TN, Paguio, M., Gligorijevic, B., Seudieu, C., Kosar, AD, Davidson, E.,
et al. (2004). Novel, cepat, dan murah berbasis sel kuantifikasi dari antimalaria obat e FFI
keampuhan. Antimicrob. Agen Chemother. 48, 1807-1810. doi: 10,1128 /
AAC.48.5.1807-1810.2004
Berger, BJ, bendrat, K., dan Cerami, A. (1995). cair kinerja tinggi
analisis kromatografi polimerisasi heme biologi dan kimia.
Anal. Biochem. 231, 151-156. doi: 10,1006 / abio.1995.1514
Bergmann-Leitner, ES, Mease, RM, Duncan, EH, Khan, F., Waitumbi, J.,
dan Angov, E. (2008). Evaluasi imunoglobulin puri fi kasi metode dan dampaknya
terhadap kualitas dan hasil antigen-antibodi spesifik. Mal. J. 7: 129. doi: 10,1186 / 1475-
2875-7-129
Borlon, C., Russell, B., Sriprawat, K., Suwanarusk, R., Erhart, A., Renia, L., et al.
(2012). cryopreserved Plasmodium vivax dan retikulosit darah tali pusat dapat digunakan untuk
invasi dan budaya jangka pendek. Int. J. Parasitol. 42, 155-160. doi: 10,1016 /
j.ijpara.2011.10.011
Bousema, T., Okell, L., Shekalaghe, S., Gri FFI n, JT, Omar, S., Sawa, P., et al.
(2010). Meninjau kembali waktu sirkulasi Plasmodium falciparum gametosit: metode deteksi
molekuler untuk memperkirakan durasi kereta gametocyte dan e ff ect obat gametocytocidal.
Malar. J. 9: 136. doi: 10,1186 / 1475- 2875-9-136
Brasseur, P., Agnamey, P., Moreno, A., andDruilhe, P. (2001). Evaluasi in
vitro sensitivitas obat antimalaria untuk Plasmodium falciparum menggunakan alat tes
kolorimetri (DELI-MICROTEST). Med. Trop. (Mars) 61, 545-547.
Brown, WM, Yowell, CA, Hoard, A., Vander Jagt, TA, Hunsaker, LA,
Deck, LM, et al. (2004). analisis struktur komparatif dan sifat kinetik dehydrogenases laktat dari Fleck, SL, Pudney, M., dan Sinden, RE (1996). E ff ect atovaquone
empat spesies parasit malaria manusia.
Biokimia 43, 6219-6229. doi: 10.1021 / bi049892w
Buchholz, K., Burke, TA, Williamson, KC, Wiegand, RC, Wirth, DF, dan
Marti, M. (2011). Sebuah tinggi-throughput layar menargetkan tahap penularan malaria membuka jalan baru
untuk pengembangan obat. J. Menginfeksi. Dis. 203, 1445-1453. doi: 10,1093 / infdis / jir037
Chavalitshewinkoon-Petmitr, P., Pongvilairat, G., Auparakkitanon, S., dan
Wilairat, P. (2000). Kegiatan Gametocytocidal dari pyronaridine dan DNA topoisomerase
II inhibitor terhadap multidrug-resistant Plasmodium
falciparum in vitro. Parasitol. Int. 48, 275-280. doi: 10,1016 / S1383-5769 (99) 00.028-8
Chulay, JD, Haynes, JD, dan Diggs, CL (1983). Plasmodium falciparum:
penilaian pertumbuhan in vitro berdasarkan [3H] hipoksantin penggabungan. Exp. Parasitol. 55, 138-146.
doi: 10,1016 / 0014-4894 (83) 90.007-3
Chutmongkonkul, M., Maier, WA, dan Seitz, HM (1992). Sebuah model baru untuk
pengujian gametocytocidal e ff ects dari beberapa obat antimalaria pada Plasmodium falciparum
in vitro. Ann. Trop. Med. Parasitol. 86, 207-215. doi: 10,1080 /
00034983.1992.11812656
Crabb, BS (2002). Teknologi transfeksi dan studi resistensi obat di
parasit malaria Plasmodium falciparum. Obat Resist. Updat. 5, 126-130. doi: 10,1016 / S1368-7646
(02) 00.085-7
Cui, L., Miao, J., dan Cui, L. (2007). Sitotoksik e ff ect kurkumin pada
parasit malaria Plasmodium falciparum: penghambatan asetilasi histon dan generasi spesies
oksigen reaktif. Antimicrob. Agen Chemother. 51, 488-
494. doi: 10,1128 / AAC.01238-06
Cui, L., Miao, J., Wang, J., Li, T., dan Cui, L. (2008). Plasmodium falciparum:
pengembangan garis transgenik untuk skrining antimalaria menggunakan fi re fl y luciferase sebagai
wartawan. Exp. Parasitol. 120, 80-87. doi: 10,1016 / j.exppara.
2008.05.003
D'Alessandro, S., Silvestrini, F., Dechering, K., Corbett, Y., Parapini, S.,
Timmerman, M., et al. (2013). SEBUAH Plasmodium falciparum skrining assay untuk obat
anti-gametocyte berdasarkan parasit laktat dehidrogenase deteksi. J. Antimicrob. Chemother.
68, 2048-2058. doi: 10,1093 / jac / dkt165
De Clercq, E. (2005). menyoroti baru-baru ini dalam pengembangan obat antivirus baru.
Curr. Opin. Microbiol. 8, 552-560. doi: 10,1016 / j.mib.2005.08.010
Deharo, E., García, RN, Oporto, P., Gimenez, A., Sauvain, M., Jullian, V.,
et al. (2002). Sebuah non-radiolabelled ferriprotoporphyrin IX Biomineralisasi
Uji penghambatan untuk throughput tinggi skrining senyawa antimalaria.
Exp. Parasitol. 100, 252-256. doi: 10,1016 / S0014-4894 (02) 00.027-9
Dembele, L., Franetich, JF, Lorthiois, A., Gego, A., Zeeman, AM, Kocken, CH,
et al. (2014). Kegigihan dan aktivasi hypnozoites malaria dalam budaya hepatosit primer jangka
panjang. Nat. Med. 20, 307-312. doi: 10.1038 / nm.3461
Desakorn, V., Silamut, K., Angus, B., Sahassananda, D., Chotivanich, K.,
Suntharasamai, P., et al. (1997). Semi-quantitativemeasurement dari Plasmodium falciparum antigen
PfHRP2 dalam darah dan plasma. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.
91, 479-483. doi: 10,1016 / S0035-9203 (97) 90.292-3
Desjardins, RE, Can lapangan, CJ, Haynes, JD, dan Chulay, JD (1979).
penilaian kuantitatif aktivitas antimalaria in vitro dengan teknik mikrodilusi semiautomated.
Antimicrob. Agen Chemother. 16, 710-718. doi: 10. 1128 / AAC.16.6.710
Dondorp, AM, Nosten, F., Yi, P., Das, D., Phyo, AP, Tarning, J., et al. (2009).
resistensi artemisinin di Plasmodium falciparum malaria. N. Engl. J. Med. 361, 455-467. doi:
10,1056 / NEJMoa0808859
Druilhe, P., Moreno, A., Blanc, C., Brasseur, PH, dan Jacquier, P. (2001). SEBUAH
kolorimetri in vitro kepekaan obat uji untuk Plasmodium falciparum didasarkan pada dua situs yang
sangat sensitif laktat dehidrogenase antigen-capture enzyme linked immunosorbent assay. Saya. J.
Trop. Med. Hyg. 64, 233-241.
Elabbadi, N., Ancelin, ML, dan Vial, HJ (1992). Penggunaan etanolamin radioaktif
penggabungan ke fosfolipid untuk menilai in vitro antimalaria kegiatan dengan teknik mikrodilusi
yang semiautomated. Antimicrob. Agen Chemother. 36, 50-55. doi: 10,1128 / AAC.36.1.50
Fernandez-Becerra, C., Lelievre, J., Ferrer, M., Anton, N., Thomson, R., dan
Peligero, C. (2013). Sel darah merah yang berasal dari darah perifer dan tulang marrowCD34?
stemcells haematopoietic manusia permisif untuk Plasmodium
parasit infeksi. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 108, 801-803. doi: 10,1590 / 0074- 0276108062013019
Fidock, DA, Rosenthal, PJ, Croft, SL, Brun, R., dan Nwaka, S. (2004).
penemuan obat antimalaria: e FFI cacymodels untuk skrining senyawa. Nat. Rev. Obat
Discov. 3, 509-520. doi: 10.1038 / nrd1416
(566C80) pada pematangan dan kelangsungan hidup Plasmodium falciparum
gametosit in vitro. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 90, 309-312. doi: 10,1016 / S0035-9203
(96) 90.266-7
Francis, SE, Sullivan, DJ Jr., dan Goldberg, DE (1997). Hemoglobin
metabolisme dalam parasit malaria Plasmodium falciparum. Annu. Rev. Microbiol. 51, 97-123.
doi: 10,1146 / annurev.micro.51.1.97
Geary, TG, Divo, AA, dan Jensen, JB (1983). Sebuah sistem uji in vitro
untuk pengidentifikasian obat antimalaria yang potensial. J. Parasitol. 69, 577-583. doi: 10,2307 / 3.281.373
Gego, A., Silvie, O., Franetich, JF, Farhati, K., Hannoun, L., Luty, AJ,
et al. (2006). pendekatan baru untuk tinggi-throughput screening dari aktivitas obat pada Plasmodium
tahap hati. Antimicrob. Agen Chemother. 50, 1586-1590. doi: 10,1128 / AAC.50.4.1586-
1589.2006
Gelb, MH (2007). penemuan obat untuk malaria: sangat menantang dan tepat
waktu berusaha keras. Curr. Opin. Chem. Biol. 11, 440-445. doi: 10,1016 /
j.cbpa.2007.05.038 Giarratana, MC, Rouard, H., Dumont, A., Kiger, L.,
Safeukui, I., Le Pennec, PY,
et al. (2011). Bukti prinsip untuk transfusi in vitro yang dihasilkan sel-sel darah merah. Darah 118,
5071-5079. doi: 10,1182 / darah 2011-06-362038
Golenda, CF, Li, J., dan Rosenberg, R. (1997). Terus menerus in vitro propagasi
dari parasit malaria Plasmodium vivax. Proc. Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 94, 6786-6791. doi:
10.1073 / pnas.94.13.6786
Gómez-Lechon, MJ, Donato, MT, Castell, JV, dan Jover, R. (2003). Manusia
hepatosit sebagai alat untuk mempelajari toksisitas dan metabolisme obat. Curr. Obat Metab. 4, 292-312.
doi: 10,2174 / 1389200033489424
Grimberg, BT, Scheetz, EA, Erickson, JJ, Bales, JM, David, M., Daum-
Woods, K., et al. (2012). Peningkatan jumlah retikulosit dari sampel darah tali pusat menggunakan lisis
hipotonik. Exp. Parasitol. 132, 304-307. doi: 10,1016 / j.exppara.2012.
07,006
Hernandez, L., Kodali, S., Cully, D., Singh, S., dan Wang, J. (2006). Sebuah
target- spesifik seluruh assay sel untuk penemuan obat antibakteri.
Protoc. Exch. doi: 10.1038 / nprot.2006.130
Hobbs, C., dan Du ff y, P. (2011). Obat untuk malaria: sesuatu yang lama, sesuatu yang baru,
sesuatu yang dipinjam. F1000 Biol. Reputasi. 03:24. doi: 10,3410 / B3-24 Howard, RJ, Uni, S., Aikawa,
M., Aley, SB, Leech, JH, Lew, AM, et al. (1986).
Sekresi protein kaya histidin malaria (PfHRPII) dari Plasmodium
 falciparum- eritrosit yang terinfeksi. J. Sel Biol. 103, 1269-1277. doi: 10,1083 / JCB.
103.4.1269
Hughes, JP, Rees, S., Kalindjian, SB, dan Philpott, KL (2011). Prinsip dari
penemuan obat awal. Br. J. Pharmacol. 162, 1239-1249. doi: 10,1111 / j.1476-
5381.2010.01127.x
Hyde, JE (2007). Resistan terhadap obat malaria - wawasan. FEBS J. 274, 4688-4698. doi:
10,1111 / j.1742-4658.2007.05999.x
Kaiser, A., Khomutov, A., Simonian, A., dan Agostinelli, EA (2012). Sebuah cepat
dan uji kuat untuk penentuan hypusine amino acid sebagai biomarker mungkin untuk
tinggi-throughput screening dari antimalaria dan untuk diagnosis dan terapi di ff erent penyakit.
Asam amino 42, 1651-1659. doi: 10,1007 / s0072601108595
Khan, T., van Brummelen, AC, Parkinson, CJ, dan Hoppe, HC (2012).
ATP dan tes luciferase untuk menentukan tingkat kerja obat di in vitro
budaya Plasmodium falciparum. Malar. J. 11, 369. doi: 10,1186 / 1475-2875- 11-369
Kosaisavee, V., Suwanarusk, R., Nosten, F., Kyle, DE, Barrends, M., Jones, J.,
et al. (2006). Plasmodium vivax: isotop, PicoGreen, dan tes mikroskopis untuk mengukur
sensitivitas klorokuin pada isolat segar dan cryopreserved. Exp. Parasitol. 114, 34-39. doi:
10,1016
/ j.exppara.2006.02.006
Kurosawa, Y., Dorn, A., Kitsuji-Shirane, M., Shimada, H., Satoh, T., Matile, H.,
et al. (2000). polimerisasi hematin assay sebagai high-throughput layar untuk
identifikasi dari pharmacophores antimalaria baru. Antimicrob. Agen Chemother.
44, 2638-2644. doi: 10,1128 / AAC.44.10.2638-2644. 2000
Lelièvre, J., Almela, MJ, Lozano, S., Miguel, C., Franco, V., Leroy, D., et al. (2012).
Kegiatan obat antimalaria klinis yang relevan di Plasmodium falciparum
matang gametosit dalam ATP bioluminescence "transmisi blocking" assay.
PLoS ONE 7: e35019. doi: 10.1371 / journal.pone.0035019
Li, AP, dan Kedderis, GL (1997). budaya hepatosit primer sebagai model eksperimental
untuk evaluasi interaksi antara xenobiotik dan enzim metabolisme obat-. Chem. Biol.
Berinteraksi. 107, 1-3. doi: 10,1016 / S0009- 2797 (97) 00.069-0
Liberati, A., Altman, DG, Tetzla ff, J., Mulrow, C., Gøtzsche, PC, Ioannidis,
JP, et al. (2009). Pernyataan PRISMA untuk melaporkan ulasan sistematis dan meta-analisis dari
penelitian yang mengevaluasi intervensi kesehatan: penjelasan dan elaborasi. BMJ 339: B2700. doi:
10,1136 / bmj.b2700
Lucantoni, L., dan Avery, VM (2012). Whole-sel in vitro skrining untuk
senyawa gametocytocidal. Masa depan Med. Chem. 4, 2337-2360. doi: 10,4155 / fmc.12.188
Lucantoni, L., Du ff y, S., Adjalley, SH, Fidock, DA, dan Avery, VM (2013).
Identifikasi dari MMVmalaria kotak inhibitor Plasmodium falciparum gametosit tahap
awal-menggunakan berbasis luciferase tinggi-throughput assay. Antimicrob. Agen Chemother. 57,
6050-6062. doi: 10,1128 / AAC.00870-13
Lucantoni, L., Fidock, DA, dan Avery, VM (2016). Luciferase berbasis,
tinggi-throughput assay untuk skrining dan pro fi ling senyawa transmisi-blocking terhadap Plasmodium DL (2011). Sebuah high-throughput assay untuk pengidentifikasian obat terhadap tahap akhir Plasmodium
falciparum gametosit. Antimicrob. Agen Chemother. 60, 2097-2107. doi:
10,1128 / AAC.01949-15
Lucantoni, L., Loganathan, S., dan Avery, VM (2017). Kebutuhan untuk membandingkan:
menilai tingkat kesepakatan dari tiga tes tinggi-throughput terhadap
Plasmodium falciparum dewasa gametosit. Sci. Reputasi. 7: 45.992. doi: 10.1038 /
srep45992
Makler, MT, dan Hinrichs, DJ (1993). Pengukuran laktat yang
aktivitas dehidrogenase dari Plasmodium falciparum sebagai penilaian parasitemia. Saya.
J. Trop. Med. Hyg. 48, 205-210. doi: 10,4269 / ajtmh.1993.
48,205
Makler, MT, Ries, JM, Williams, JA, Bancroft, JE, Piper, RC, Gibbins, BL,
et al. (1993). laktat parasit dehidrogenase sebagai assay untuk sensitivitas obat. Saya.
J. Trop. Med. Hyg. 48, 739-741. doi: 10,4269 / ajtmh.1993.48.739
Maret, S., Ng, S., Velmurugan, S., Galstian, A., Shan, J., Logan, DJ, et
al. (2013). Sebuah platform hati mikro manusia yang mendukung tahap
hepatik Plasmodium falciparum dan vivax. Cell Host Mikroba 14, 104-115. doi:
10,1016 / j.chom.2013.06.005
Martín-Jaular, L., Elizalde-Torrent, A., Thomson-Luque, R., Ferrer, M.,
Segovia, JC, Herreros-Aviles, E., et al. (2013). parasit malaria retikulosit rawan terutama
menyerang sel-sel yang belum matang CD71hi: implikasi untuk pengembangan kultur in
vitro untuk Plasmodium vivax. Malar. J. 12: 434. doi: 10,1186 / 1475-2875-12-434
Mazier, D., Landau, I., Druilhe, P., Miltgen, F., guguen-Guillouzo, C., Baccam, D.,
et al. (1984). Budidaya bentuk hati Plasmodium vivax di hepatosit manusia. Alam 307, 367-
369. doi: 10.1038 / 307367a0
Ndiaye, D., Patel, V., Demas, A., LeRoux, M., Ndir, O., Mboup, S., et al.
(2010). Sebuah non-radioaktif DAPI berbasis tinggi-throughput in vitro assay untuk menilai
Plasmodium falciparum tanggap terhadap sensitivitas antimalaria-peningkatan
P. falciparum untuk klorokuin di Senegal. Saya. J. Trop. Med. Hyg. 82, 228-230. doi:
10,4269 / ajtmh.2010.09-0470
Ng, S., Schwartz, RE, Maret, S., Galstian, A., Gural, N., Shan, J., et al. (2015).
Manusia IPSC yang diturunkan hepatosit-seperti dukungan sel Plasmodium infeksi hati-tahap in vitro. Stem
Sel Rep. 4, 348-359. doi: 10,1016 / j.stemcr.2015.01.002
Noedl, H., Faiz, MA, Yunus, EB, Rahman, MR, Hossain, MA, Samad, R.,
et al. (2003a). Resistan terhadap obat malaria di Bangladesh: penilaian in vitro. Saya.
J. Trop. Med. Hyg. 68, 140-142.
Noedl, H., Se, Y., Schaecher, K., Smith, BL, Socheat, D., dan Fukuda, MM (2008).
Bukti malaria artemisinin-tahan di Kamboja barat. N. Engl. J. Med.
359, 2619-2620. doi: 10,1056 / NEJMc0805011
Noedl, H., Wernsdorfer, WH, Miller, RS, dan Wongsrichanalai, C. (2002).
Histidin protein kaya II, pendekatan baru untuk pengujian kerentanan terhadap obat antimalaria.
Antimicrob. Agen Chemother. 46, 1658-1664. doi: 10,1128 / AAC.46.6. 1658-1664.2002
Noedl, H., Wongsrichanalai, C., dan Wernsdorfer, WH (2003b). malaria obat-
pengujian sensitivitas: tes baru, perspektif baru. Tren Parasitol. 19, 175-181.
Nogueira, F. (2010). Metode untuk penilaian aktivitas antimalaria di di ff erent
fase Plasmodium lingkaran kehidupan. Rev. Pan Amaz. Saude 1, 109-124. doi: 10,5123 /
S2176-62232010000300015 Noulin, F. (2016). pemodelan Malaria: in vitro sel induk vs in vivo model. Dunia J.
Stem Cells 8, 88-100. doi: 10,4252 / wjsc.v8.i3.88
Noulin, F., Borlon, C., van den Eede, P., Boel, L., Verfaillie, CM, D'Alessandro, U.,
et al. (2012). retikulosit cryopreserved berasal dari sel induk hematopoietik dapat diserang
oleh cryopreserved Plasmodium vivax isolat. PLoS ONE
7: e40798. doi: 10.1371 / journal.pone.0040798 Pandey, AV, Tekwani, BL, Singh, RL, dan
Chauhan, VS (1999). artemisinin,
sebuah endoperoxide antimalaria, mengganggu sistem fi kasi hemoglobin katabolisme dan heme
detoxi di parasit malaria. J. Biol. Chem. 274, 19.383-19.388. doi: 10,1074 / jbc.274.27.19383
Panichakul, T., Sattabongkot, J., Chotivanich, K., Sirichaisinthop, J., Cui, L., dan
Udomsangpetch, R. (2007). Produksi sel erythropoietic in vitro untuk budaya terus menerus Plasmodium
vivax. Int. J. Parasitol. 37, 1551-1557. doi: 10,1016 / j.ijpara.2007.05.009
Parapini, S., Basilico, N., Pasini, E., Egan, TJ, Olliaro, P., Taramelli, D., et al.
(2000). Standarisasi parameter fisikokimia untuk menilai in vitro aktivitas
penghambatan beta-hematin obat antimalaria. Exp. Parasitol. 96, 249-256. doi: 10,1006 /
expr.2000.4583
Peatey, CL, Spicer, TP, Hodder, PS, Trenholme, KR, dan Gardiner,
falciparum gametosit. Mol. Biochem. Parasitol. 180, 127-131. doi: 10,1016 /
j.molbiopara.2011.09.002 Phyo, AP, Nkhoma, S., Stepniewska, K., Ashley, EA, Nair, S., McGready, R.,
et al. (2012). Munculnya malaria artemisinin-tahan di perbatasan barat Thailand: studi
longitudinal. Lanset 379, 1960-1966. doi: 10,1016 / S0140- 6736 (12) 60.484-X
Quashie, NB, de Koning, HP, dan Ranford-Cartwright, LC (2006).
Mikro ditingkatkan dan sangat sensitif fl metode uorimetric untuk menilai kerentanan
Plasmodium falciparum untuk obat antimalaria in vitro. Malar.
J. 5:95. doi: 10,1186 / 1475-2875-5-95
Quignot, N., dan Bois, TA (2013). Sebuah model komputasi untuk memprediksi ovarium tikus
steroid sekresi dari dalam percobaan in vitro dengan endokrin. PLoS ONE 8: e53891.
doi: 10.1371 / journal.pone.0053891 Rebelo, M., Sousa, C., Shapiro, HM, Mota, MM, Grobusch,
MP, dan
Hänscheid, T. (2013). Sebuah novel aliran cytometric hemozoin deteksi assay untuk real-time
pengujian sensitivitas Plasmodium falciparum. PLoS ONE 8: e61606. doi: 10.1371 /
journal.pone.0061606
Rieckmann, KH, Campbell, GH, Sax, LJ, dan Mrema, JE (1978). Obat
sensitivitas Plasmodium falciparum. Sebuah in-vitro microtechnique. Lanset 1, 22-30. doi: 10,1016
/ S0140-6736 (78) 90.365-3 Rieckmann, KH, McNamara, JV, Frischer, H., Stockert, TA, Carson, PE,
dan Powell, RD (1968). E ff ects dari klorokuin, kina, dan cycloguanil pada
 pematangan bentuk erythrocytic aseksual dari dua strain Plasmodium falciparum in vitro.
Saya. J. Trop. Med. Hyg. 17, 661-671. doi: 10,4269 / ajtmh.
1968.17.661
Roncales, M., Vidal-Mas, J., Leroy, D., dan Herreros, E. (2012). perbandingan dan
optimalisasi di ff erent metode untuk produksi in vitro Plasmodium falciparum
gametosit. J. Parasitol. Res. 2012: 927.148. doi: 10,1155 / 2012 / 927.148
Rothman, SS (2002). Pelajaran dari Sel Hidup: Budaya Ilmu
dan Batas Reduksionisme. New York, NY: McGraw-
Hill.
Sanchez, BA, Varotti, FP, Rodrigues, FG, dan Carvalho, LH (2007).
Validasi dari Plasmodium falciparum parasit berubah dengan protein fl uorescent hijau
untuk skrining obat antimalaria. J. Microbiol. metode 69, 518-522. doi: 10,1016 /
j.mimet.2007.03.001
Sherman, IW (1961). Heterogenitas dehidrogenase laktat dalam malaria burung
( Plasmodium lophurae). J. Exp. Med. 114, 1049-1062. doi: 10,1084 / jem.114.6. 1049
Sherman, IW (1977). Transportasi dari asam amino dan prekursor asam nukleat di
parasit malaria. Banteng. Dunia Kesehatan Organ. 55, 211-225.
Sherman, IW (1998). “Metabolisme karbohidrat dalam tahap aseksual,” di Malaria:
Parasit Biologi, Patogenesis, dan Perlindungan, ed. IW Sherman (Washington, DC: ASM Press),
135-144.
Sinha, S., Medhi, B., dan Sehgal, R. (2014). Tantangan malaria yang resistan terhadap obat.
Parasit 21, 61. doi: 10,1051 / parasit / 2.014.059
Si-Tayeb, K., Noto, FK, Nagaoka, M., Li, J., Battle, MA, Duris, C., et al.
(2010). Sangat e FFI efisien generasi manusia hepatosit-seperti sel dari sel induk pluripotent. Hepatologimalaria. Saya. J. Trop. Med. Hyg. 43, 602-607. doi: 10,4269 /
ajtmh.1990.43.602 51, 297-305. doi: 10,1002 / hep. 23.354
Slater, AF, Swiggard, WJ, Orton, BR, Flitter, WD, Goldberg, DE,
Cerami, A., et al. (1991). Ikatan besi-karboksilat menghubungkan unit heme pigmen malaria. Proc. Natl.
Acad. Sci. Amerika Serikat 88, 325-329. doi: 10.1073 / PNAS.
88.2.325
Smalley, ME (1977). Plasmodium falciparum gametosit: e ff ect dari
klorokuin pada perkembangan mereka. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 71, 526-529. doi:
10,1016 / 0035-9203 (77) 90.149-3
Smilkstein, M., Sriwilaijaroen, N., Kelly, JX, Wilairat, P., dan Riscoe, M. (2004).
Sederhana dan murah teknik berbasis uorescence fl untuk skrining obat tinggi-
throughput antimalaria. Antimicrob. Agen Chemother. 48, 1803-1806. doi: 10,1128 /
AAC.48.5.1803-1806.2004
Sriwilaijaroen, N., Kelly, JX, Riscoe, M., dan Wilairat, P. (2004). Cyquant
proliferasi sel assay sebagai metode berbasis uorescence fl untuk in vitro skrining aktivitas
antimalaria. Asia Tenggara J. Trop. Med. Kesehatan masyarakat 35, 840-844.
Stojiljkovic, I., Evavold, BD, dan Kumar, V. (2001). sifat antimikroba dari
porfirin. Ahli Opin. Investig. Narkoba 10, 309-320. doi: 10,1517 / 13.543.784.
10.2.309
Batu, WJ, Churcher, TS, Graumans, W., van Gemert, GJ, Vos, MW,
Lanke, KH, et al. (2014). Sebuah penilaian scalable Plasmodium falciparum
transmisi di uji membran-makan standar, menggunakan parasit transgenik hijau fl
uorescent protein-luciferase. J. Menginfeksi. Dis. 210, 1456-1463. doi: 10,1093 /
infdis / jiu271
Sullivan, AD, dan Meshnick, SR (1996). Haemozoin: identifikasi dan
kuantifikasi. Tren Parasitol. 12, 161-163. doi: 10,1016 / 0169-4758 (96) 40.001-1
Sung, JH, Esch, MB, dan Shuler, ML (2010). Integrasi di silico
dan in vitro platform untuk pemodelan farmakokinetik-farmakodinamik.
Ahli Opin. Obat Metab. Toxicol. 6, 1063-1081. doi: 10,1517 / 17.425.255,2010. 496.251
Tanaka, TQ, Dehdashti, SJ, Nguyen, DT, McKew, JC, Zheng, W., dan
Williamson, KC (2013). Sebuah tinggi kuantitatif throughput yang assay untuk mengidentifikasi senyawa
gametocytocidal. Mol. Biochem. Parasitol. 188, 20-25. doi: 10,1016 /
j.molbiopara.2013.02.005
Tanaka, TQ, andWilliamson, KC (2011). Amalaria gametocytocidal assay menggunakan
Indikator oxidoreduction, alamarBlue. Mol. Biochem. Parasitol. 177, 160-163. doi: 10,1016 /
j.molbiopara.2011.02.005
Tekwani, BL, andWalker, LA (2005). Menargetkan hemozoin jalur sintesis
untuk penemuan obat antimalaria baru: teknologi untuk in vitro beta-hematin assay formasi.
Sisir. Chem. High Throughput Layar. 8, 63-79. doi: 10,2174 / 1386207053328101
Trager, W., dan Jensen, JB (1976). parasit malaria manusia di kontinyu
budaya. Ilmu 193, 673-675. doi: 10,1126 / science.781840
Tripathi, AK, Gupta, A., Garg, SK, dan Tekwani, BL (2001). In vitro beta
pembentukan hematin tes dengan plasma tikus yang terinfeksi Plasmodium yoelii dan persiapan
parasit lainnya: penghambatan perbandingan dengan quinoline dan endoperoxide antimalaria. Hidup
Sci. 69, 2725-2733. doi: 10,1016 / S0024- 3205 (01) 01.349-2
Tripathi, AK, Khan, SI, Walker, LA, dan Tekwani, BL (2004).
spektrofotometri penentuan de novo hemozoin / beta
pembentukan hematin dalam uji in vitro. Anal. Biochem. 325, 85-91. doi:
10,1016 / j.ab.2003.10.016
van der Kolk, M., De Vlas, SJ, Saul, A., van de Vegte-Bolmer, M., Eling, WM,
dan Sauerwein, RW (2005). Evaluasi standar uji makan membran (SMFA) untuk
penentuan malaria transmisi-mengurangi aktivitas menggunakan data empiris. Parasitologi
130, 13-22. doi: 10,1017 / S0031182004006067
van Vianen, PH, Thaithong, S., Reinders, PP, van Engen, A., van der
Keur, M., dan Tanke, HJ (1990). Otomatis aliran analisis cytometric dari kerentanan obat parasit
van Vianen, PH, van Engen, A., Thaithong, S., van der Keur, M., Tanke, HJ, van
der Kaay, HJ, et al. (1993). Mengalir skrining cytometric sampel darah untuk parasit malaria. cytometry
14, 276-280. doi: 10,1002 / cyto.990140307
Waki, S., Tamura, J., Jingu, M., Adachi, M., dan Suzuki, M. (1986). teknik Anew
untuk tes kerentanan obat untuk Plasmodium falciparum oleh etidium bromida fl uoroassay. Trans.
R. Soc. Trop. Med. Hyg. 80, 47-49. doi: 10,1016 / 0035- 9203 (86) 90192-6
Wein, S., Maynadier, M., Van Ba, CT, Cerdan, R., Peyrottes, S., Fraisse, L., et al.
(2010). Keandalan tes sensitivitas antimalaria tergantung pada mekanisme obat tindakan. J.
Clin. Microbiol. 48, 1651-1660. doi: 10,1128 / JCM.02250-09
Weisman, JL, Liou, AP, Shelat, AA, Cohen, FE, Guy, RK, dan DeRisi,
JL (2006). Mencari terapi antimalaria baru antara obat yang dikenal.
Chem. Biol. Obat Des. 67, 409-416. doi: 10,1111 / j.1747-0285.2006.00391.x
Wernsdorfer, WH, dan Kouznetsov, RL (1980). Resistan terhadap obat malaria-
kejadian, kontrol, dan pengawasan. Banteng. Dunia Kesehatan Organ. 58, 341-352.
Wernsdorfer, WH, dan Payne, D. (1988). “Tes sensitivitas obat malaria
parasit,”di Malaria: Prinsip dan Praktek Malariology, eds W.
H. Wernsdorfer dan IA McGregor (Edinburgh: Churchill Livingstone), 1765-1800. WHO (2016). Malaria
Report Dunia 2016. Tersedia di: http://www.who.int/
malaria / publikasi / dunia-malaria-laporan-2016 / laporan / en / Yoon, M., Campbell, JL,
Andersen, ME, dan Clewell, HJ (2012). Kuantitatif
in vitro untuk in vivo ekstrapolasi dari hasil toksisitas uji berbasis sel. Crit. Rev. Toxicol. 42, 633-
652. doi: 10,3109 / 10408444.2012.692115
Konflik Menarik Pernyataan: Para penulis menyatakan bahwa penelitian ini dilakukan dalam tidak
adanya hubungan keuangan komersial atau fi yang dapat ditafsirkan sebagai potensi konflik
kepentingan.
Copyright © 2017 Sinha, Sarma, Sehgal dan Medhi. Ini adalah sebuah artikel akses terbuka
didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Creative Commons Attribution (CC BY). Penggunaan,
distribusi atau reproduksi di forum lain diperbolehkan, asalkan penulis asli (s) atau pemberi lisensi
dikreditkan dan bahwa publikasi asli dalam jurnal ini dikutip, sesuai dengan praktek akademik
diterima. Tidak ada penggunaan, distribusi atau reproduksi diperbolehkan yang tidak mematuhi
persyaratan ini.