PENGUJIAN COLIFORM DAN ESCHERICHIA COLI DISERTAI

PEWARNAAN GRAM NEGATIF DAN POSITIF

M. Azrul Afzal Azhan Nizama, Sipa Nurajijahb. Fajar Ramadhanc, Faris Fathir
Muhammadd, Moch Dafa Fadhilahe, Regina mahardikaf, Salma Salsabilag
Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Pertanian, Universitas
Garut Jl. Raya Samarang No. 52 Telp. 0262 544217
Email : 24036121022@faperta.uniga.ac.id

Dikumpulkan pada tanggal 17 Februari 2023

Abstrak
Prinsip kerja pengujian kualitatif identifikasi bakteri coliform dan
escherichia coli untuk mengetahui pertumbuhan dan perkembangan bakteri
coliform yang ditandai dengan terbentuknya gelembung gas pada tabung durham.
Menumbuhkan dan mengidentifikasi adanya bakteri e-coli pada sampel daging
ayam. Prinsip kerja pewarnaan gram negatif dan positif suatu metode empiris
untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yaitu gram
positif dan gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel bakteri.
bakteri yang digunakan ada pada sampel daging ayam.

Kata kunci : Pewarnaan gram, Media Lactose Broth (LB), media Nutrient Agar
(NA), media Eosin Methylene blue Agar ( EMB )

PENDAHULUAN dalam suatu uji analisis air, E-coli

Bakteri Escherichia coli merupakan indikator pencemaran air
merupakan bakteri gram negatif yang oleh tinja. Bakteri ini sangat mudah
bersifat aerobik dan ada juga yang ditemui pada air tercemar yang
bersifat anaerob fakultatif. Bakteri ditandai dengan keberadaan faeces.
Ecoli mampu bertahan hidup di Dengan keberadaan bakteri tersebut
media sederhana dan dapat dapat menyebabkan penyakit bagi
memfermentasi laktosa yang dapat orang yang mengkonsumsinya, salah
memproduksi asam dan gas satunya yaitu penyakit diare
(Yanuhar, 2019). Bakteri ini (Purnawijayanti, 2001).
termasuk dalam famili Coliform adalah bakteri gram
Enterobacteriaceae yang merupakan negatif berbentuk batang bersifat
golongan bakteri yang banyak anaerob atau fakultatif anaerob, tidak
digunakan sebagai indikator membentuk spora, dan dapat
kebersihan atau hygiene. Selain itu, memfermentasi laktosa untuk
menghasilkan asam dan gas pada 8 dan 15 Februari 2023 jam 08.30-
suhu 35°C-37°C (Knechtges, 2011). 11.00 WIB di Laboratorium Terpadu
Golongan bakteri Coliform adalah Fakultas Pertanian Universitas Garut.
Citrobacter, Enterobacter,
Escherichia coli, dan Klebsiella Alat dan bahan

(Batt, 2014). Bakteri Coliform adalah Alat : Cawan petri steril 6

golongan bakteri intestinal yaitu buah, Lampu Spirtus, Inkubator,

hidup di dalam saluran pencernaan Tabung Reaksi, Rak Tabung reaksi,

manusia (Treyens, 2009). Pipet tetes, Beaker glass, Mikroskop

Penggolongan bakteri Coliform dan binokuler, kaca objektif, Erlenmeyer,

sifat-sifatnya, dibagi menjadi dua autoclave, dan oven.

yaitu Coliform fekal diantaranya Bahan : Media NA ( Nutrient

bakteri Escherichia coli berasal dari Agar ), Media EMB ( Eosin

tinja manusia. Coliform non fekal Methylene blue Agar ), Media LB (

diantaranya Aerobacter dan Lactose Broth ), NaCl, sampel

Klebsiella yang bukan berasal dari daging ayam 1 gr, kristal Violet,

tinja manusia, melainkan berasal dari alkohol 95%, lugol, dan safranin.

hewan/tanaman yang sudah mati

(Suriaman, 2008). Prosedur kerja

Tujuan mengidentifikasi Sebelum melakukan

bakteri e-coli dan coliform adalah pengujian pastinya dilakukan

untuk mengetahui cemaran bakteri pengecekan kelengkapan alat dan

tersebut pada daging ayam, bahan yang akan dipakai kemudian

sterilisasi alat dan bahan. Sterilisasi
dilakukan pembiakan dengan uji
alat menggunakan oven dengan suhu
penduga dan penguat kemudian
170⁰C dengan waktu 2 jam. Untuk
dilakukan pula pewarnaan gram
media sterilisasi menggunakan
untuk mengetahui bakteri tersebut
autoclave dengan suhu 121⁰C dengan
termasuk gram negatif atau gram
waktu 15-30 menit ( Tergantung api
positif.
kompor jika menggunakan api
METODOLOGI
kompor ).
Praktikum ini dilaksanakan
pada hari Jum’at dan Rabu , tanggal
Diagram alir Uji identifikasi e-coli fisiologis 15 ml ( untuk 3
dan coliform : tabung ).
● Penyiapan media LB, ● Ambil sampel 10 ml x 3
timbang sebanyak 4,5 gr dan untuk tabung seri pertama,
dilarutkan dengan 250 ml Ambil sampel 1 ml x 3 untuk
aquades, kemudian tabung seri kedua, Ambil
disterilkan dalam autoclave. sampel 0,1 ml x 3 untuk
● Penyiapan media EMB, tabung seri ketiga, masing
timbang sebanyak 13,5 gr dan masing tabung dimasukkan
dilarutkan dengan 500 ml tabung durham.
aquades, kemudian ● Diinkubasi selama 48 jam
disterilkan dalam autoclave. dengan suhu 37⁰C.
● Penyiapan media NA, Diagram alir Uji penduga :
timbang sebanyak 8 gr dan ● Siapkan media EMB yang
dilarutkan dengan 250 ml beku dan sampel yang telah
aquades, kemudian selesai diinkubasi.
disterilkan dalam autoclave. ● Ambil sampel pada tabung
● Media NA steril dimasukan reaksi yang menunjukan
ke dalam tabung reaksi yang gelembung pada tabung
dimiringkan dan biarkan durham ( positif e-coli dan
beku. coliform ) masing masing seri
● Tuang media EMB steril pada diambil 1 tabung yang positif
6 cawan petri dan diberi ● 1 tabung 10 ml diambil
label. sampel nya dan dipindahkan
● Buat 3 seri tabung reaksi ke 2 cawan petri, begitu pula
dengan 3 tabung diisi 10 ml dilakukan pada cawan
media LB, 3 tabung kedua berikutnya. inkubasi selama
diisi 5 ml LB, dan 3 tabung 48 jam dengan suhu 37⁰C.
ketiga diisi 5 ml LB. ● Setelah selesai diinkubasi
● Penyiapan sampel daging pilih salah satu cawan yang
ayam dengan ditimbang 1 gr paling banyak gumpalan
dan dilarutkan pada NaCl putihnya.
Diagram alir uji penguat :
● Siapkan media NA miring
yang telah beku dan sampel
pada cawan petri yang telah
disiapkan.
● Ambil 1 ose sampel
gores pada media NA miring.
● Inkubasi selama 24
dengan suhu 37⁰C.
Diagram alir pewarnaan gram :
● Siapkan mikroskop dan gelas
objek yang telah dibersihkan
oleh alkohol 95%.
● Lewatkan glass objek pada
api bunsen.
● Ambil isolat bakteri dengan
jarum ose pindahkan pada
gelas objek.
● Teteskan kristal violet pada
gelas objek diamkan 30-60
detik.
● Cuci dengan aquades selama
5 detik.
● Teteskan larutan
diamkan selama 1-2 menit.
● Cuci dengan air mengalir.
● Teteskan dengan alkohol
95% dan diamkan sebentar
hingga bereaksi.
● Bilas dengan air
● Teteskan Safranin diamkan 1
menit.
● Bilas dengan air secara
perlahan selama 5 detik,
keringkan.
● Lakukan pengamatan
dibawah mikroskop binokuler
dan perbesaran 40 hingga 100x.
jam HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengujian setelah dilakukan
pengamatan di bawah mikroskop
perbesaran 40 sampai 100x dapat
dilihat pada gambar :
Hasil pengamatan sampel tabung
reaksi 10 ml bakteri gram Positif (
berwarna ungu ).
dokumen pribadi.2023
Lugol Pada sampel tabung 1 ml dan
0,1 ml tidak terdapat hasil. Pada
mikroskop tidak terlihat dengan jelas
bakteri gram negatif atau positif.
Namun besar kemungkinan hasilnya
sama dengan tabung 10 ml karena
sampel yang digunakan sama.
Hal ini kemungkinan besar
dikarenakan kesalahan praktikan
dalam membilas sampel yang
seharusnya menggunakan air maka warna pada bakteri tidak
mengalir praktikan menggantinya luntur.
dengan aquades. 3) Pemberian alkohol 95%
Pembahasan Pemberian alkohol pada
1) Kristal Violet pewarnaan gram berfungsi untuk
Dinding sel bakteri Gram membilas atau melunturkan
positif mengandung ikatan lapisan kelebihan zat warna pada sel bakteri
peptidoglikan yang tebal sehingga (mikroorganisme)/ melunturkan zat
kuat mengikat pewarna primer warna utama yaitu zat violet kristal.
berupa Kristal Violet, setelah diikuti 4) Safranin
penambahan larutan mordan berupa Pada bakteri Gram negatif,
lugol's Iodine. penambahan safranin menyebabkan
Kristal violet merupakan sel bakteri berwarna merah, karena
salah satu pewarna yang digunakan persenyawaan kompleks kristal
dalam industri tekstil. Kristal violet violet-iodium larut dan dinding sel
juga diklasifikasikan sebagai kemudian mengikat zat warna kedua.
molekul yang sulit dimetabolisme Fungsi zat warna safranin hanyalah
oleh mikroorganisme sehingga dapat sebagai pembeda (kontras) terhadap
bertahan dalam berbagai lingkungan zat warna kristal violet.
(Ferreira dkk., 2015). KESIMPULAN
Pemberian larutan Kristal Pada praktikum yang
violet untuk memberikan warna ungu dilakukan dapat disimpulkan bahwa
pada mikroba sebagai pewarna pada daging ayam bakteri e-coli dan
primer. coliform yang terdeteksi merupakan
2) Larutan Lugol bakteri gram positif berwarna Ungu.
Kemudian pada saat
digenangi lagi dengan larutan lugol DAFTAR PUSTAKA
maka zat warna akan lebih melekat Firmansyah, Iman.2015. Laporan
karena larutan lugol memiliki fungsi Praktikum
untuk melekatkan warna pada
dinding sel bakteri sehingga pada PEWARNAAN GRAM.
saat pencucian menggunakan alkohol https://www.academia.edu/11
703944/Pewarnaan_Gram.
 Diakses pada 16 februari
2023.

Dwi, Ira.dkk.2016.JURNAL UJI

KUALITATIF BAKTERI
ESCHERICHIA COLI PADA
PEMANDIAN UMUM DI
BOTON

BALONG MAGELANG. Vol.

II no 1.
Hal 37-40. Magelang.

Dinkesdk.2019.Artikel mengenal
bakteri coliform pada
air bersih.
https://dinkes.gunungkidulka
b.go.id/mengenal-bakteri-coli
form-dan-air-bersih/. Diakses
pada 16 feberuari 2023