UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI HASIL FERMENTASI BAKTERI

ASAM LAKTAT DARI ISOLAT FESES BALITA TERHADAP

Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Monika Agustin Lilian Colina1*, Saiful Bahri2 dan Yayah Siti Djuhariah3
Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi
Institut Sains dan Teknologi Nasional

Email: monikalilian2@gmail.com

ABSTRAK

Feses balita merupakan salah satu sumber isolat probiotik yang dapat menghasilkan Bakteri asam laktat sebagai senyawa
antibakteri. Tujuan dalam penelitian ini yaitu untuk mengetahui aktivitas antibakteri ke – 12 Isolat Bakteri Asam Laktat
dari penelitian sebelumnya asal feses balita yang mengkonsumsi susu formula .Metode penelitian ini diawali dengan
meremajakan ke 12 Isolat Bakteri asam laktat menggunakan media deMan Rogosa Sharpe Agar yang tersuplementasikan
CaCO3 1%. Dalam penelitian ini dilakukan skrining, kultivasi isolat terpilih hasil skrining, dan uji aktivitas antibakteri
dengan metode difusi Hasil skrining menunjukan adanya daya hambat pada bakteri uji Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus yaitu pada isolat FBSF 7, FBSF 12, FBSF 14. Kemudian ketiga isolat unggul hasil skrining
dilakukan kultivasi untuk memperoleh supernatan yang di duga mempunyai sifat antibakteri, lalu dilakukan uji aktivitas
antibakteri terhadap Escherichia coli berturut-turut di peroleh sebesar 9,69 mm, 10,56 mm, 11,22 mm dan
Staphylococcus aureus berturut-turut sebesar 9,57 mm, 10,08 mm, 10,15 mm.

Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat, Bakteriosin, Feses Balita, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

ABSTRACT
Toddler feces is a source of probiotic isolates that can produce lactic acid bacteria as an antibacterial compound. The
purpose of this study was to determine the 12th antibacterial activity of Lactic Acid Bacteria Isolates from previous studies
from toddler feces consuming formula milk. The method of this research was begun by rejuvenating the 12 Lactic Acid
Bacteria Isolates using deMan Rogosa Sharpe agar media supplemented with CaCO3 1%. . In this study screening,
cultivation of selected isolates from screening results, and antibacterial activity testing using the diffusion method.
Screening results showed inhibition in the bacteria test Escherichia coli and Staphylococcus aureus namely in isolates
FBSF 7, FBSF 12, FBSF 14. Then the three superior isolates results cultivation was conducted to obtain a supernatant
suspected of having antibacterial properties, then an antibacterial activity test was carried out on Escherichia coli in a row
at 9.69 mm, 10.56 mm, 11.22 mm and Staphylococcus aureus respectively at 9, 57 mm, 10.08 mm, 10.15 mm.

Keywords: Lactic Acid Bacteria, Bacteriocin, Toddler Stool, Staphylococcus aureus and Escherichia coli

PENDAHULUAN Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

Di Indonesia, diare merupakan penyebab
kematian nomor dua pada balita. dan nomor lima bagi
semua umur. Insidensi Diare dan Period Prevalence
diare pada balita, Kejadian diare pada anak laki-laki
hampir sama dengan anak perempuan. Penyakit ini
ditularkan melalui makanan dan minuman yang
tercemar. Di negara yang sedang berkembang, insiden
yang tinggi dari penyakit diare merupakan kombinasi
dari sumber air yang tercemar, kekurangan protein dan
kalori yang menyebabkan turunnya daya tahan tubuh.
merupakan salah satu infeksi penyebab diare, dengan
gejala klinis menandakan seseorang mengalami diare
diantaranya terjadi peningkatan frekuensi defekasi,
feses encer, kadang terdapat lendir dan juga darah pada
feses (Jawetz et al, 2001). Bakteri Staphylococcus
aureus dan Escherichia coli merupakan flora yang
patogen dalam saluran pencernaan, namun di dalam
saluran pencernaan juga terdapat beberapa bakteri baik
juga yang dapat hidup pada saluran cerna salah satunya
yakni Bakteri asam laktat. Bakteri asam laktat dapat
menghasilkan sifat antibakteri yang dapat dipakai
sebagai antimikroba dan pengawet. Bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli merupakan
flora yang patogen dalam saluran pencernaan, namun di
dalam saluran pencernaan juga terdapat beberapa
bakteri baik juga yang dapat hidup pada saluran cerna
salah satunya yakni Bakteri asam laktat. Bakteri asam
laktat dapat menghasilkan sifat antibakteri yang dapat
dipakai sebagai antimikroba dan pengawet. Feses
balita merupakan salah satu sumber isolat probiotik
yang dapat menghasilkan Bakteri asam laktat sebagai
senyawa antibakteri. Oleh karena itu dilakukan skrining
beberapa isolat Bakteri asam laktat untuk mendapatkan
hasil isolat unggul yang kemudian akan dilakukan
dikultivasi, dan uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri
patogen Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
METODOLOGI PENELITIAN
Bahan Dan Alat
Bahan yang digunakan : 12 isolat Bakteri asam laktat
asal feses balita, yang diperoleh dari penelitian
sebelumnya isolat FBSF 1, FBSF 2, FBSF 3, FBSF 4,
FBSF 7, FBSF9, FBSF 10, FBSF 12, FBSF 13, FBSF
14, FBSF 15, FBSF 16. Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli. Aquadest, tisu, sarung tangan,
masker, kapas, alkohol 70%, blank disk, disk antibiotik
ciprofloksasin, Mueller-Hinton Agar (MHA), deMan
Rogose Sharpe Broth (MRSB), deMan Rogose Sharpe
Agar (MRSA), Nutrient Agar (NA), larutan NaCl 0,9%,
CaCO3 1%,kristal violet, etanol, iodine, safranin,
alkohol 96%, minyak imersi.
Alat yang digunakan : Bunsen, kasa, cawan petri, labu
erlenmeyer, tabung reaksi, rak tabung, gelas ukur,
jarum ose, kapas steril, spidol, batang pengaduk, beaker
glass, pipet ukur, kaca objek, pinset, kertas cakram dan
mikroskop, vortex, hot plate, mikro pipet, jangka
sorong, timbangan analitik, kulkas, sentrifugator, oven,
autoklaf, inkubator, Laminar Air Flow.
Metode
Sterilisasi Alat
Alat yang digunakan seperti peralatan seperti ose,
spatula logam disterilisasi terlebih dahulu dengan cara
membakar ujung peralatan tersebut di atas api bunsen
sampai berpijar. Semua alat yang tahan pemanasan
seperti cawan petri, tabung reaksi disterilisasi
menggunakan oven dengan suhu 160ºC selama 2 jam
sedangkan alat atau bahan yang tidak tahan pemanasan
disterilisasi menggunakan Autoklaf pada suhu 121ºC
selama 15 menit.
Pembuatan Media MRSA
Pembuatan media MRSA dengan cara, ditimbang 68 g
serbuk MRSA lalu tersuplaimentasikan dengan CaCO3
1% sebanyak 10 g kemudian dilarutkan dalam 1 liter
aquadest dan dipanaskan hingga mendidih,setelah itu di
sterilisasi 121°C selama 15 menit.
Peremajaan Bakteri asam laktat
Peremajaan Bakteri asam laktat dilakukan dengan cara
mengambil satu ose dari isolat sebelumnya kemudian
ditumbuhkan pada media deMan Rogose Sharpe Agar
(MRSA) Kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama
24 jam.
Pembuatan Media
Media MHA ditimbang sebanyak 3,8g dilarutkan
dalam 100 mL aquadest, kemudian ditutup dengan
alumunium foil, dan dipanaskan dan diaduk sampai
larutan jernih tidak ada endapan sehingga terlihat
homogen. Lalu disterilisasi menggunakan autoklaf pada
suhu 121°C selama 15 menit.
Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
diremajakan terlebih dahulu, dilakukan dengan cara
mengambil biakan bakteri- bakteri tersebut sebanyak 1
ose kemudian di inokulasikan pada permukaan agar
miring dalam tabung reaksi dan diinkubasi pada suhu
37°C selama 24 jam
Identifikasi Bakteri Uji
Pewarnaan Gram dilakukan dengan cara buat preparat
ulas yang difiksasi kemudian tetesi dengan Kristal,
Kristal violet digunakan sebagai pewarna utama pada
preparat sampai semua ulasan terwarnai, kemudian
diamkan selama kurang lebih sekitar 1 menit. Setelah
itu dicuci dengan air mengalir kemudian tetesi dengan
iodin, setelah itu diamkan kurang lebih selama 1 menit
kemudian dicuci lagi dengan air mengalir dan dikering
anginkan, preparat dilunturkan dengan etanol,lalu
dicuci dengan air air mengalir dan dikeringkan. Setelah
itu ditetesi dengan safranin diamkan selama 30 detik,
dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan. Minyak
emersi diberikan diatas kaca preparat bakteri. Kaca
preparat diamati menggunakan mikroskopis dengan
pembesaran 1000 kali.
Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri uji diambil dari biakan murni kurang lebih 2
Ose dan ditanam pada media MHA kemudian
diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam. Suspensi
bakteri kemudian diencerkan pada 5 mL dengan NaCl
0,9%, kemudian bakteri dihomogenkan dengan
menggunakan vortex sampai didapatkan kekeruhan
yang sama dengan larutan McFarland 3 (Bonang dan
Koeswardono 1982). Kemudian suspensi bakteri
8
diencerkan 10 CFU/mL, diulang kembali dengan
dilakukan pengenceran dengan cara ambil suspensi
bakteri uji 1 mL lalu dimasukan ke dalam larutan NaCl
0,9% yang berisi 9 mL dan dilakukan hingga
7
pengenceran 10 lalu di vortex sampai homogen,
setelah itu suspensi bakteri diencerkan kembali
6
sehingga di dapat 10 .
Skrining Awal BAL Penghasil Antibakteri
Skrining awal BAL penghasil bakteri dilakukan sebagai
berikut: setelah agar MHA padat selanjutnya dilakukan
inokulasi dengan isolat yang diuji yang sudah di
lakukan pengenceran terlebih dahulu. Kemudian
inokulasi dilakukan dengan ose jarum yang titik-titikan
pada agar dengan demikian maka satu petri data
digunakan untuk menguji 12 isolat BAL,kemudian
dilakukan inkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C.
Isolat yang mempunyai atau memilki kemampuan untuk
menghambat bakteri indikator akan memberi zona
jernih di sekitar koloni.

Fermentasi Isolat Bakteri Asam Laktat

Dilakukan pembuatan suspensi Bakteri asam laktat
(BAL) unuk pengujian aktivitas antibaktei dengan cara
mengambil 3 ose bakteri asam laktat yang sudah
diremajakan lalu ditumbuhkan di dalam media MRSB
5,0 mL setelah itu diinkubasi 37°C selama 24 jam.
Kemudian hasil pada kultur cair tersebut dilakukan
sentrifugasi dengan menggunakan alat sentrifugator
pada kecepatan 4000 rpm selama 10 menit (Yulinary,
et al 20l2) lalu akan didapat hasil dari sentrifugasi
tersebut berupa supernatan yang akan digunakan dalam
uji aktivitas antibakteri.
Penentuan Diameter Daya Hambat (DDH)
Pengujian diameter daya hambat (DDH) antibakteri
dari Isolat Bakteri asam laktat yang dilakukan dengan
menggunakan difusi cakram (Disc Diffusion). Media
Mueller-Hinton Agar dituangkan ke dalam masing-
masing cawan petri steril sebanyak kurang lebih 15 ml
hingga merata dan biarkan sampai memadat, setelah itu
pipet suspensi bakteri Staphylococcus aureus dan
6
Escherichia coli pada pengenceran 10 CFU,
sebanyak 0,1 mL lalu inokulum bakteri uji dalam
media agar dan di ratakan dengan batang L, hingga
suspensi bakteri menjadi kering, hingga benar-benar
merata. Kemudian gunakan mikropipet untuk memipet
supernatan kultur isolat bakteri ke dalam kertas cakram
steril sebanyak 20 µL setelah itu letakan cakram yang
kedalam MHA yang berisi bakteri uji .Setelah 24 jam
dikeluarkan dari inkubator, kemudian dilakukan
pengamatan dengan melihat ada atau tidaknya daerah
hambat dengan menggunakan jangka sorong .kontrol
positif yang dilakukan uji DDH yaitu antibiotik
siprofloksasin dan kontrol negatif MRSB.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Peremajaan Bakteri Asam Laktat
Peremajaan pada ke-12 isolat Bakteri asam laktat
(BAL), terdapat hasil pertumbuhan isolat yang baik,
peremajaan isolat ini tumbuh pada media miring deMan
Rogosa Sharpe (MRS) Agar yang tersuplaikan CaCO3
1% dengan tujuan penanda pertumbuhan Bakteri asam
laktat dengan ditandai terbentuk nya Ca-laktat. Dimana
Ca-laktat dapat ditandai dengan adanya zona bening
pada tepi Bakteri asam laktat yang menandakan bahwa
Bakteri asam laktat ini telah tertanam pada media.
Gambar 1. Isolat Bakteri asam laktat FBSF
1, FBSF 2, FBSF 3, FBSF 4, FBSF 7, FBSF 9,
FBSF 10, FBSF 12, FBSF 13, FBSF 14, FBSF
15, FBSF 16 . Sumber : (Dokumen Pribadi,
2020)
Pewarnaan Gram Bakteri Uji
Pewarnaan Gram dilakukan dengan tujuan untuk
membedakan bakteri yang terlihat apakah Gram positif
atau Gram negatif . Bakteri Gram positif memiliki
dinding sel yang lebih sederhana dengan jumlah
peptidoglikan yang relatif lebih banyak, sedangkan
dinding sel bakteri Gram negatif memiliki struktur
peptidoglikan yang lebih komplek, dan membran luar
pada dinding sel bakteri Gram negatif mengandung
lipopolisakarida yaitu berisi karbohidrat yang diikat
lipid (Pratiwi,2008).
Gambar 2. Hasil karakteristik mikroskop pewarnaan bakteri
uji.
(sumber: Dokumen pribadi)
Skrining Bakteri Asam Laktat
Skrining dilakukan dengan cara dilakukan dengan cara
meremajakan ke – 12 isolat Bakteri asam laktat , yang
kemudian ke – 12 isolat Bakteri asam laktat
diinokulasikan ke media yang sudah di inokulasi
6
bakteri uji dengan pengenceran 10 , kemudian di
inkubasi 24 jam dengan suhu 37°C . Setelah diinkubasi
selama 1 hari kemudian dilihat hasil ada atau tidaknya
zona hambat dan setelah dilihat ternyata ada 3 isolat
yakni isolat FBSF 7, FBSF 12, FBSF 14 yang
menghasilkan zona bening pada sekeliling Bakteri
asam laktat , yang menandakan bahwa adanya aktivitas
antibakteri.

Fermentasi Bakteri Asam Laktat
Isolat FBSF 7, FBSF 12, dan FBSF 14 dilakukanlah
fermentasi, dimana fermentasi Bakteri asam laktat yang
di inkubasi selama 24 jam. Tujuan fermentasi
manjadikan suatu makanan lebih tahan lama
mengawetkan makanan dengan menghasilkan beberapa
asam laktat, asam asetat, alkohol dalam jumlah yang
cukup banyak dan memperkaya nutrisi. Produk
fermentasi Bakteri asam laktat salah satunya adalah
asam organik. Asam organik ini dihasilkan selama
proses fermentasi terkait spesies organisme, gabungan
kultur dan kondisi pertumbuhan . Asam organik mampu
menurunkan pH dan berfungsi untuk tidak memutus
beberapa ikatan molekul sehingga memiliki kemampuan
aktivitas mikroba.
Gambar 3.Hasil Kultivasi Isolat BAL asal feses balita dengan
susu formula
(sumber: Dokumen pribadi)
Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antimikroba pada isolat Bakteri
asam laktat dilakukan dengan cara metode difusi
cakram, metode difusi cakram ini mempunya
kelebihan tidak memerlukan peralatan khusus dan
mudah dilakukan (Liberty et al. 2012) . Bakteri asam
laktat pada isolat feses balita pada uji aktivitas
antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus
FBSF 7 sebesar 9,57 mm, FBSF 12 sebesar 10,08 mm,
kemudian FBSF 14 yakni 10,15 mm dan bakteri
Escherichia coli isolat FBSF 7 sebesar 9,69 mm,
FBSF 12 sebesar 10,56 mm, lalu hasil uji aktivitas
antibakteri pada FBSF 14 mempunyai daya hambat
11,22 mm
Gambar 4.Hasil Pengujian Diameter Daya Hambat
(sumber: Dokumen pribadi)
KESIMPULAN
Isolat Bakteri asam laktat FBSF 7, FBSF 12, FBSF 14
mempunyai daya hambat terhadap bakteri
Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.Besar
diameter daya hambat yang dimiliki dari supernatan
hasil fermentasi Bakteri asam laktat pada isolat feses
balita pada uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri
Staphylococcus aureus FBSF 7 sebesar 9,57 mm, FBSF
12 sebesar 10,08 mm, kemudian FBSF 14 yakni 10,15
mm dan bakteri Escherichia coli isolat FBSF 7 sebesar
9,69 mm, FBSF 12 sebesar 10,56 mm, lalu hasil uji
aktivitas antibakteri pada FBSF 14 mempunyai daya
hambat 11,22 mm.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Saiful
Bahri, M.Si dan Ibu Yayah Siti Djuhariah, M. Si., Apt
sebagai dosen pembimbing yang telah memberikan
bimbingan serta saran pada penulis selama waktu
penyusunan dan penulisan artikel ini. Penulis juga
mengucapkan terima kasih kepada teman-teman dan
pihak yang membantu dalam proses penulisan.
DAFTAR PUSTAKA
Alakomi et al. 2000. Lactic acid inhibition of the
growth of spoilage bacteria and cold
tolerant pathogens on pork. Int. J. Food
Microbiol. 25:141–151
Bobbarala,V. 2012. Antimicrobial
Agents.Croatia: Intech, 33-62
Darmadi. 2008. Infeksi Nosokomial :
Problematika Dan Pengendaliannya.
Jakarta: Penerbit Salemba Medika, 48
(4),487-491
Depkes RI. 2016. Profil Kesehatan Indonesia.
Jakarta: Kementrian Kesehatan Republik
Indonesia, 4 (4), 100-104.
Djide. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi Farmasi.
Makasar: Lephas, Halaman 81.
Dwijoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar
Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
Drider D, Fimland G, Hechard Y, McMullen
ML. 2006. The Continuing Story of Class
IIa Bacteriocins. Microbiology and
Molecular Biology 70: 564-582.
Fitria,I. dan Tri A, 2014 : Skrining Bakteri
Asam Laktat asal Susu Kambing
Peranakan Etawa sebagai Penghasil
Bakteriosin., Jurnal Biotropika Vol. 2 no.3
Hendarto, A. 2013."Nilai nutrisi air susu ibu.
Jakarta: IDAI. 10-11
Indriati. 2006. Potensi Antibakterial Bakteri
Asam Laktat dari Peda, Roti, Jambal dan
Bekasam. Jurnal Perikanan (2):112-157
Jawetz, M. 2012. Mikrobiologi Kedokteran
jakarta: EGC, 25(2):19.
Setyowati, M. 2015 pemetaan status gizi balita
dalam mengdukung keberhasilan
milenium, Jakarta 4(2): 27-48
Melisa. 2019.Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri
Asam Laktat Dari Feses Balita yang
Tidak Mengkonsumsi Susu Formula.
[Skripsi]. Jakarta :ISTN. Hlm;17
Milyani. 2010. Tumbuh Kembang Pada Usia
Balita.Jakarta (1) : 11-13
Noordiana N, Fatimah ABM. 2013.
Antibacterial by Lactic Acid Bacteria
Isolated from Threadfin Salmon .
International Food Research 20: 117-124
Oksfriani. 2018.Uji sensitivitas Antibakteri
terhadap Escherichia coli penyebab
Infeksi saluran kemih. Jurnal Biotropika
Vol.2.No.1
Rachmawati, I., Suranto, Setyaningsih R. 2005.
Uji antibakteri bakteri asam laktat asal
asinan sawi terhadap bakteri patogen.
Bioteknologi 2(2): 43-48.
Radji, M. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi
Panduan Mahasiswa Farmasi dan
Kedokteran. Jakarta: Gramedia, 57-89.
Sari, A. Deslianri L., Apridamayanti, P. 2016
: Skrining Aktivitas Antibakteri
Bakteriosin dari Minuman Ce Hun Tiau,
Pharm Sci Res ISSN 2407-2354.
Sarah, S. 2019. Uji Aktivitas Antibakteri
Bakteri Asam Laktat Dari Isolat Feses
Balita Terhadap Escherichia coli Dan
Staphylococcus aureus. [Skripsi]. Jakarta :
ISTN. Halaman 12-40
Setiabudy. 2007. Farmakologi dan Terapi Edisi
V. Jakarta: Gaya Baru, 77-102.
Siti, F. 2011. Faktor-Faktor Yang
Berhubungan Dengan Terjadinya
Infeksi Nosokomial Luka Operasi Di
Ruang Bedah Rsup Fatmawati, 25(2):19.
Suriawiria . 2005. Mikrobiologi Dasar. Jakarta
:Papas Sinanti, 25(2):19.
Suharyono. 2003. Diare Akut, Klinik dan
Laboratorik. Rineka Cipta. Jakarta.
Halaman 14
Surono, I . 2004. Probiotik-susu fermentasi dan
kesehatan. Jakarta. Tri Cipta Karya
Tandirogang, N, dkk. 2017. Aktivitas
Antimikroba Ekstrak Daun Karamunting
(Melastoma malabathricum L.) Terhadap
Bakteri Penyebab Diare. Jurnal Sains dan
Kesehatan. Vol 1 (7): 407-6082
Usmiati R. 2012. Pengembangan Dadih
Sebagai Pangan Fungsional Probiotik
Asli Sumatera Barat. JLP 32: 20-29.
Papuangan N, Nurhasanah. 2014. Potensi
Senyawa Antibakteri Isolat Bakteri Asam
Laktat yang Diisolasi dari Bakasang
Ternate. Seminar Nasional Riset Inovatif 5:
67-51.
Pelczar, M dan Chan, E. C. S. 2008. Dasar-
Dasar Mikrobiologi Jilid I. Jakarta: UI
Press. Vol 1:29-30
Pratiwi. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta:
Erlangga. 2: 7-10.
Idrus I R., 2019. Isolasi Dan Karakterisasi
Bakteri Asam Laktat Dari Feses Balita
yang Mengkonsumsi Susu Formula,
[Skripsi]. Jakarta : ISTN. Halaman 27
Volk, W. A. Dan Wheeler, margaret F. 1994.
Mikrobiologi Dasar Jilid 2 Edisi Kelima.
Jakarta: Erlangga. 2: 27-60
World Health Organization, 2004.Susu Formula
Jakarta, Vol 2:19-24
Widjayanti, N. 1999. Obat-Obatan.Yogyakarta:
Penerbit Kanisius.Hlm 6-10.
Zalan., Chan, E.C., Tri, A. 2005. Bakteri Asam
Laktat Dalam Tubuh Sebagai Probiotik.
Seminar Nasional Riset Inovatif 1: 1-5.