LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI UJI AKTIVITAS ANTI

MIKROBA

Asteria,Godwin Pargaulan Siahaan,Indah Puspita Sari,Wiwik Hendarini

Jurusan Fakultas Farmasi - Sains Teknologi Nasional

Juli 2020

ABSTRAK
Pengendalian pertumbuhan dan kontaminasi dari mikroorganisme sangat di
perlukan untuk mengahambat , membasmi, dan menyingkirkan dari suatu bahan
atau inang . karena mikroorganisme memiliki potensi untuk menyerang makhluk
hidup lain hingga terjadinya infeksi.Mikroorganisme yang ada dapat di kendalikan
menggunakan senyawa anti mikroba seperti penggunaan antiseptic,antibiotic dan
disinfektan

Keywords uji aktivitas mikroba

Tanggal Praktikum juli 2020

PENDAHULUAN yang mempunyai kemampuan

Antimikroba adalah bahan atau zat menghambat pertumbuhan bakteri atau
yang dapat membunuh atau menghambat bahkan membunuh bakteri walaupun
aktivitas mikroorganisme dengan dalam konsentrasi yang rendah.
bermacam-macam cara. Senyawa Antibiotik digunakan untuk
antimikroba terdiri atas beberapa menghentikan aktivitas mikroba pada
kelompok berdasarkan mekanisme daya jaringan tubuh makhluk hidup
kerjanya dan tujuan penggunaannya. sedangkan desinfektan bekerja dengan
Bahan antimikroba dapat berupa menghambat atau menghentikan
desinfektan, antiseptic, sterilizer, pertumbuhan mikroba pada benda tak
sanitizer, dan sebagainya. hidup, seperti meja, alat gelas, dan lain
Mekanisme daya kerja antimikroba sebagainya .
terhadap sel dapat dibedakan atas Metode difusi merupakan salah satu
beberapa kelompok, diantaranya metode yang sering digunakan untuk
merusak dinding sel, mengganggu menguji aktivitas antimikroba, metode
permeabilitas sel, merusak molekul difusi dapat dilakukan dengan 3 cara
protein dan asam nukleat, menghambat yaitu metode silinder, lubang dan
aktivitas enzim, menghambat sintesa cakram kertas.
asam nukleat. Metode silinder yaitu meletakan
Oleh karena itu, antimikroba dibagi beberapa silinder yang terbuat dari gelas
menjadi dua macam yaitu antibiotik dan atau besi tahan karat diatas media agar
desinfektan yang telah diinokulasi dengan bakteri.
Antibiotik adalah senyawa yang Tiap
dihasilkan oleh mikroorganisme tertentu silinder ditempatkan sedemikian rupa
FAKULTAS PARMASI INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI NASIONAL Page 1
hingga berdiri diatas media agar, diisi
dengan larutan yang akan diuji dan
diinkubasi. Setelah diinkubasi,
pertumbuhan bakteri diamati untuk
melihat ada tidaknya daerah hambatan
disekeliling silinder.
Metode lubang atau sumuran adalah
badan atau lempeng yang telah di
inokulasi denga bakteri uji di buat suatu
lubang yang selanjutnya di isi dengan zat
uji.setlah di inkubasi pada suhu dan
waktu yang sesuai dengan mikroba uji,
di lakukan pengamatan dengan melihat
ada tidaknya zona hambatan di sekeliling
lubang .metode cakram yaitu
merupakan cara yang paling sering di
gunakan untuk menentukan kepekaan
kuman terhadap berbagai obat obatan
.cara di gunakan kertas saring kemudian
di letakan pada lempeng agar yang telah
di inokulasi mikroba uji, kemudian di
inkubasi pada waktu tertentu dan suhu
terten
kelebihan dan kekurangan metode
cakram, kelebihannya adalah mudah di
lakukan , tidak memerlukan peralatan
khusus dan relatif murah
kekurangannya ukuran zona bening yang
terbentuk tergantung kondisi, inokulum,
, predifusi,dan preinkubasi serta
kekebalan medium . apabila keempat
faktor tersebut tidak sesuai maka hasil
metode cakram
maka sulit untuk di interpretasikan.
selain itu metode cakram tidak dapat di
aplikasikan pada mikroorganisme yang
pertumbuhannya lambat dan
mikrooraganisme yang obligat .
Bahan Penelitian
Alat dan yang di gunakan
 pipet 1ml
 cawan petri
 kertas cakram/saring steril,
 spreader drigalsky
 pinset,
 dan spirtus
Bahan-bahan yang digunakanan
FAKULTAS PARMASI INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI NASIONAL
 tibiotic-antiseptik dan
desinfektan, PCA (Plate Count
Agar)
 alcohol 70%, aquadest, bakteri
E.coli, Bacillus, dan
Staphylococcus
METODE
Prosedur kerja uji aktivitas antimikroba
dengan metode DIFUSICAKRAM
Media : media cawan NA( uji
disinfektan dan antiseptic ) dan MHA (
uji antibiotic ) bahan antimikroba
Pembuatan control positif uji
antimikroba
Kontrol positif dibuat dari sediaan obat
tablet Ciprofloxacin 500 mg.Satu tablet
Ciprofloxacin digerus,lalu ditimbang dan
disetarakan dengan 500 mg. Kemudian
serbuk Ciprofloxacin dilarutkan dalam
larutan CMC untuk memperoleh larutan
Ciprofloxacin 50μg/50 μl
.hal tersebut dilakukan pula pada
antibiotic lainnya
Uji aktivitas antibakteri dengan sabun
cair
Sebanyak 0,1 ml inokulum dimasukkan
ke dalam cawan petri steril,lalu dituang
media Nutrient agar (NA) sebanyak 15
ml dengan suhu 40-45oC, selanjutnya
dihomogenkan perlahan di atas
permukaan Laminar Air Flow (LAF)
sehingga media dan bakteri tercampur
merata dan dibiarkan memadat.
Pencadang kertas yang telah direndam
dalam larutan uji sabun mandi cair
Dettol, Biore dan Lifebuoy dalam
berbagai konsentrasi selama 15 menit,
diletakkan pada media yang telah
memadat dan diinkubasi dalam
inkubator pada suhu 35±2°C selama 24
jam. Masing-masing cawan petri diukur
diameter zona hambatnya di sekitar
pencadang menggunakan jangka sorong
Page 2
Pembuatan media
Media Agar Miring
Media Agar Miring Nutrient Agar(NA)
sebanyak 0,46 gram dilarutkan dalam 20
ml aquades (23 g/1000ml) menggunakan
erlenmeyer.Setelah itu dihomogenkan
dengan stirer diatas penangas air sampai
mendidih.Sebanyak 5ml dituangkan
masing-masing pada 3 tabung reaksi
steril dan ditutup dengan aluminium foil.
Media tersebut disterilkan dalam
outoklaf pada suhu 121oC selama
15menit, kemudian dibiarkan pada suhu
ruangan selama ± 30 menit sampai
media memadat pada kemiringan 30o.
Media Agar miring digunakan untuk
inokulasi bakteri.
Media Dasar dan Media Pembenihan
Media dasar dibuat dengan cara
ditimbang Nutrient Agar(NA) sebanyak
2,3 gram,lalu dilarutkan dalam 100 ml
aquades (23g/1000ml) menggunakan
erlenmeyer.Sedangkan media
pembenihan dibuatdengan cara
ditimbang 5,75 gram NA,lalu dilarutkan
dalam 250 ml aquades (23g/1000ml)
menggunakan erlenmeyer.Setelah
itu,masing-masing media dihomogenkan
dengan stirer diatas penangas air sampai
mendidih. Media-media yang sudah
homogen ini disterilkan dalam outoklaf
pada suhu 121oC selama 15menit,
kemudian didinginkan sampai suhu± 45-
50oC. Media dasar dan media
pembenihan digunakan dalam
pembuatan media pengujian sebagai
lapisan dasar dan lapisan kedua.
Pembuatan Media Pengujian
Lapisan dasar dibuat dengan
menuangkan masing-masing 10 ml NA
dari media dasar kedalam 9 cawan
petri,lalu dibiarkan sampai
memadat.Setelah memadat,pada
permukaan lapisan dasar diletakkan 7
pencadang baja yang diatur sedemikian
rupa jaraknya agar daerah pengamatan
tidak saling
bertumpuh.Kemudian,suspensi bakteri
dicampurkan kedalam media
pembenihan NA.Setelah itu,dituangkan
25 ml campuran suspensi danmedia
pembenihan tersebut ke dalam tiap
cawan petri yang diletakkan pencadang
sebagai lapisan kedua.Selanjutnya,
pencadang diangkat secara aseptik dari
cawan petri,sehingga akhirnya
terbentuklah sumur-sumur yang akan
digunakan dalam uji antibakteri.
Uji aktivitas enzim
Uji aktivitas enzim penisilin G asilase
yang dilakukan pada bakteri E.coli yang
diisolasi menghasilkan enzim penisilin G
asilase.Hal ini ditunjukkan dengan
terbentuknya zona bening di sekitar
kertas cakram pada medium. Zona
bening terbentuk karena bakteri sensitiv
terhadap 6-APA sehingga pertumbuhan
dan aktivitasnya akan terhambat.
Hasil pengamatan

Inokulasi Bakteri pada Media Agar

Miring
Bakteri uji diambil dengan jarum ose
steril,lalu ditanamkan pada media agar
miring dengan cara menggores.
Selanjutnya diinkubasi dalam inkubator
pada suhu 37oC selama 24
jam.Perlakuan yang sama dilakukan
pada setiap jenis bakteri uji.

FAKULTAS PARMASI INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI NASIONAL Page 3

2. TABLE DIAMETER ZONA
HAMBAT ANTI SEPTIK ( MM )
3. TABEL DIAMETER ZONA
HAMBAT ANTIBIOTIKA
Pembahasan
Ciprofloxacin memiliki efek antibakteri
yang besar(spectrum luas).Hasil
penelitian menunjukkan bahwa diameter
zona hambat yang dibentuk oleh
Ciprofloxacin lebih besar pada bakteri
Gram negatif Escherichia coli
dibandingkan bakteri Gram positif
Staphylococcus aureus Mekanisme
kerjanya dengan menghambat
topoisomerase II (= DNA girase) dan
topoisomerase VI pada bakteri.
Pada uji bakteri e coli Perbedaan
kepekaan bakteri sangat terlihat pada
bakteri penisilin dalam uji ini penisilin
mampu memberikan zona hambat yang
besar dibanding dengan antibiotic
FAKULTAS PARMASI INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI NASIONAL
lainnya yaitu dengan ukuran 20,6
mm,20,4mm,20mm,20,2mm
Menurut Davis and Stout (1971), kriteria
kekuatan daya antibakteri sebagai
berikut :diameter zona hambat 5 mm
atau kurang dikategorikan lemah, zona
hambat 5-10 mm dikategorikan sedang,
zona hambat 10-20 mm dikategorikan
kuat dan zona hambat 20 mm atau lebih
dikategorikan sangat kuat.Berdasarkan
kriteria tersebut, maka daya termasuk
kuat. Jenis penisilin berspektrum-luas ini
mampu menghambat pertumbuhan
bakteri dengan mengganggu reaksi
transpeptidase dalam sintesis dinding sel
bakteri sama seperti antibiotik beta-
laktam lainnya yang bekerja
melemahkan dinding sel bakteri ketika
membelah.
Sedangkan pada bakteri staphylococcus
kepekaan terhadap bakteri ditunjukan
kepada ciprofloxacin dengan diameter
zona hambat paling besar 16,8 mm
diikuti dengan 16,6 mm,16,2 mm, 16,4
mm.
Secara umum kepekaan bakteri Gram
positif lebih tinggi dari bakteri Gram
negatif. Perbedaan kepekaan bakteri
Gram positif dan bakteri Gram negatif
karena adanya perbedaan struktur dari
dinding selnya dimana bakteri Gram
negatif memiliki struktur dinding sel
relatif lebih komplek, sedangkan bakteri
Gram positif mempunyai struktur
dinding sel yang lebih sederhana
sehingga senyawa uji yang bersifat aktif
sebagai antibakteri lebih mudah masuk
kedalam sel. Kemampuan suatu bahan
anti mikroba dalam meniadakan
kemampuan hidup mikroorganisme
tergantung pada konsentrasi bahan
mikroba itu.
Sementara itu pada uji aktivitas sabun
cair Sabun mandi cair Dettol
memberikan aktivitas antibakteri
terhadap bakteri Staphylococcus aureus
dan Escherichia coli yang ditandai
dengan adanya zona hambat. Dari data
diatas, dapat dilihat bahwa sabun mandi
cair Dettol memberikan batas daerah
Page 4
hambat yang efektif pada
Staphylococcus aureus (Gram Positif)
dengan diameter 16,8mm dan yang
terendah 16,4mm ,Escherichia coli
(Gram Negatif) dengan diameter
16,8mm dan yang terendah 15,9mm.
uji aktivitas antibakteri sabun mandi cair
Lifebuoy dilakukan dengan metode
difusi agar (uji Kirby Bauer) dengan cara
menghitung diameter zona hambat
terhadap bakteri Staphylococcus aureus
dan Escherichia coli Diameter zona
hambat dari sabun mandi Lifebuoy
terhadap bakteri Staphylococcus aureus
dan Escherichia coli secara berturut-turut
12,8mm dan paling rendah 12,0mm.
Aktivitas antibakteri yang dihasilkan
hampir sama antara bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli,tetapi pada bakteri e coli
menunjukkan zona hambat yang lebih
besar dibandingkan dengan
staphylococcus .
Pada sabun mandi cair Dettol zat aktif
yang terkandung didalamnya adalah
Chloroxylenol yaitu suatu zat yang dapat
menyebabkan kerusakan pada dinding
sel bakteri dan menyebabkan inaktivasi
dari kerja enzim pada bakteri serta
bersifat membunuh bakteri(bakterida)
Lifebuoy zat yang bersifat antibakteri
yaitu Triclosan dapat memasuki dinding
sel bakteri dan mengganggu sintesis
RNA dan protein bakteri namun lebih
sering bersifat bakteriostatik karna
konsentrasi yang digunakan rendah.
Hasil penelitian juga menunjukkan
bahwa rata-rata zona hambat yang
terbentuk pada E.coli(gram negatif)lebih
kecil dibandingkan dengan S. aureus.
Hal ini menunjukkan bawa E. coli lebih
tahan terhadap suspensi sabun antiseptik
dibandingkan S.aureus. Hal ini
disebabkan bakteri gram negatif
mempunyai ketahanan yang lebih baik
terhadap senyawa antimikroba
dibandingkan bakteri gram positif.
Perbedaan zona hambat yang terjadi
antara ke dua bakteri tersebut di duga
terjadi karena kandungan dinding sel
FAKULTAS PARMASI INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI NASIONAL
yang berbeda, dinding sel bakteri gram
positif terdiri atas peptidoglikan sangat
tebal yang memberikan kekakuan untuk
mempertahankan keutuhan sel.
Dalam menghambat aktivitas
antimikroba alcohol 50-70% berperan
sebagai pendenaturasi dan pengkoagulasi
protein.denaturasi dan koagulasi protein
akan merusak enzim sehingga mikroba
tidak dapat memenuhi kebutuhan
hidupnya dan akhirnya aktivitasnya
terhenti.senyawa fenol kerap digunakan
dalam pembersih porselen karena
memiliki aktivitas dalam menghambat
pertumbuhan mikroba.
Dalam uji aktivitas antimikroba dengan
desinfektan dapat disimpulkan bahwa
fenol memiliki aktivitas yang lebih besar
dibandingkan dengan porstek dan wipol ,
Selain itu Faktor-faktor yang
mempengaruhi aktivitas desinfektan
yang digunakan untuk membunuh jasad
renik adalah ukuran dan komposisi
populasi jasad renik, konsentrasi zat
antimikroba, lama paparan, temperatur,
dan lingkungan sekitar.
KESIMPULAN
Berdasarkan pengamatan dan
pembahasan dalam penelitian dapat
disimpulkan bahwa sabun mandi cair
Dettol, antis dan Lifebuoy memberikan
aktivitas antibakteri terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli.
Pada uji aktivitas mikroba dengan
desinfektan fenol memiliki daya hambat
yang lebih besar dibanding wipol dan
porstek.
Faktor-faktor yang mempengaruhi
aktivitas desinfektan,antiseptic dan
antibiotic adalah konsentrasi zat
mikroba,dan keadaan sekitar.
DAFTAR PUSTAKA
Pelczar, Michael W ., 1994, Dasar Dasar
mikrobiologi 1, UI-press, Jakarta.
Volk, 1998, Mikrobiologi Dasar,
Page 5
 Erlangga, Jakarta
Dwyana 2011, Mikrobiologi Dasar,
Universitas Hasanudin, Makassar.
Buku penuntun Mikrobiologi Fakultas
farmasi ISTN Jakarta
Nasution,Nadya Vicky,2018,Universitas
Sumatera Utara
Deby A.Mpila,Fatimawati,Weny
L.Wiyono,jurnal of Uji Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Etanol Daun
Mayana terhadap Staphylococcus
aureus EColi dan Pseudomonas
aeruginosa secara in-vitro
Muharni,Fitrya,Milanti Oktaruliza,jurnal
of Antibakterial dan Antioksidant
Activity Testing of Pyranon
Derivated Compound From
Endophytic Fungi Penicillium sp
of Kunyit Putih,Universitas
Sriwijaya,2014
Eko Prayoga,Jurnal of Perbandingan
Efek Ekstrak Daun Sirih Hijau
dengan Metode Difusi dan
Sumuran terhadap Pertumbuhan
Bakteri Staphylococcus
aureus,2013,Universitas Islam
Negeri Syarif Hidayatullah

FAKULTAS PARMASI INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI NASIONAL Page 6