‭CAPAIAN‬‭PEMBELAJARAN‬

‭Setelah‬‭mempelajari‬‭bab‬‭ini‬‭mahasiswa‬‭dapat‬‭:‬

‭1.‬ ‭Menjelaskan‬‭tujuan‬‭pemeriksaan‬‭Ziehl‬‭Neelson‬‭(ZN)‬
‭2.‬ ‭Menjelaskan‬‭prinsip‬‭pengecatan‬‭ZN‬
‭3.‬ ‭Menjelaskan‬‭pengambilan‬‭sampel‬‭untuk‬‭pengecatan‬‭ZN‬
‭4.‬ ‭Menjelaskan‬‭penulisan‬‭identitas‬‭untuk‬‭pengecatan‬‭ZN‬
‭5.‬ ‭Menjelaskan‬‭prosedur‬‭pengecatan‬‭ZN‬
‭6.‬ ‭Menejlaskan‬‭kualitas‬‭sediaan‬‭untuk‬‭pengecatan‬‭ZN‬

‭PENDAHULUAN‬
‭ ewarnaan‬‭(pengecatan)‬‭Ziehl-Neelsen‬‭(ZN),‬‭disebut‬‭juga‬‭dikenali‬‭sebagai‬‭pewarna‬‭bakteri‬‭tahan‬‭asam‬
P
‭atau‬‭sering‬‭disebut‬‭pengecatan‬‭BTA.‬‭Dalam‬‭cat‬‭ini‬‭mengandung‬‭zat‬‭warna‬‭karbol-fuchsin‬‭yang‬
‭merupakan‬‭asam.‬‭Pengecatan‬‭ini‬‭pertama‬‭sekali‬‭dicetuskan‬‭oleh‬‭dua‬‭orang‬‭doktor‬‭Jerman,‬‭Franz‬‭Ziehl‬
‭(1859-1926),‬‭seorang‬‭pakar‬‭bakteria‬‭dan‬‭Friedrich‬‭Neelsen‬‭(1854-1894),‬‭ahli‬‭patologi.‬‭Pengecatan‬‭ZN‬
‭merupakan‬‭pewarna‬‭bakteri‬‭khas‬‭yang‬‭digunakan‬‭untuk‬‭organisme/bakteri‬‭tahan‬‭asam,‬‭terutamanya‬
‭Mycobacteria‬‭.‬

‭ ycobacterium‬‭tuberculosis‬‭adalah‬‭yang‬‭paling‬‭penting‬‭dalam‬‭kumpulan‬‭ini,‬‭yang‬‭merupakan‬‭penyebab‬
M
‭tuberkulosis‬‭(TB).‬‭Mycobacterium‬‭tuberculosis‬‭dindingnya‬‭banyak‬‭mengandung‬‭lipid‬‭sehingga‬‭sulit‬
‭terwarnai‬‭oleh‬‭pengecatan‬‭Gram.‬‭Pemeriksaan‬‭ZN‬‭merupakan‬‭pemeriksaan‬‭sederhana‬‭untuk‬
‭mengidentifikasi‬‭adanya‬‭Mycobacterium‬‭tuberculosis‬‭atau‬‭BTA‬‭di‬‭dalam‬‭sediaan.‬‭Pengecatan‬‭ini‬‭juga‬
‭dapat‬‭digunakan‬‭untuk‬‭mendeteksi‬‭keberadaan‬‭Mycobacterium‬‭lepra‬‭yang‬‭merupakan‬‭penyebab‬
‭penyakit‬‭lepra‬‭dan‬‭juga‬‭mikobakteria‬‭lain.‬

‭TUJUAN‬‭PEMERIKSAAN‬‭ZN‬
‭1.‬ ‭Pemeriksaan‬‭ZN‬‭pada‬‭pasien‬‭yang‬‭diduga‬‭terinfeksi‬‭Mycobacterium‬‭tuberculose‬‭yang‬

‭menyebabkan‬‭tuberkulosis‬‭.‬‭Infeksi‬‭oleh‬‭bakteri‬‭ini‬‭dilakukan‬‭dengan‬‭pemeriksaan‬

s‭ putum‬‭sewaktu-pagi-sewaktu‬‭(S-P-S)‬‭sebelum‬‭kemudian‬‭dilakukan‬‭pemeriksaan‬‭kultur.‬‭Diagnosis‬
‭standar‬‭untuk‬‭menegakkan‬‭tuberkulosis‬‭adalah‬‭dengan‬‭kultur,‬‭biasanya‬‭dari‬‭sputum.‬‭Pemeriksaan‬‭kultur‬
‭membutuhkan‬‭waktu‬‭lama‬‭yaitu‬‭6‬‭bulan‬‭atau‬‭lebih.‬‭Bakteri‬‭ini‬‭dapat‬‭ditumbuhkan‬‭pada‬‭media‬‭kultur‬
‭sebagai‬‭berikut:‬

‭●‬ ‭Egg‬‭base‬‭media‬‭:‬‭Lowenstein‬‭Jensen‬
 ‭●‬ ‭Agar‬‭base‬‭media‬‭:‬‭Middle‬‭brook‬

‭Gambar‬‭1.‬‭Media‬‭Lowenstein‬‭Jensen‬

‭1.‬ P
‭ emeriksaan‬‭ZN‬‭pada‬‭pasien‬‭yang‬‭diduga‬‭terinfeksi‬‭Mycobacterium‬‭leprae.‬‭Bakteri‬‭ini‬
‭menyebabkan‬‭penyakit‬‭kulit‬‭yang‬‭disebut‬‭sebagai‬‭lepra‬‭atau‬‭morbus‬‭Hansen.‬‭Slit‬‭skin‬
‭smear‬‭atau‬‭skin‬‭smear‬‭merupakan‬‭pemeriksaan‬‭kerokan‬‭jaringan‬‭kulit‬‭dengan‬‭cara‬‭insisi‬
‭dan‬‭kerokan‬‭kulit.‬‭Hasil‬‭dari‬‭apusan‬‭kulit‬‭(‭s‬ lit‬‭–‬‭skin‬‭smear‬‭)‬‭digunakan‬‭untuk‬‭diagnosis‬‭dan‬
‭prognosis‬‭dari‬‭lepra.‬‭Diagnosis‬‭lepra‬‭minimal‬‭memenuhi‬‭1‬‭dari‬‭3‬‭tanda‬‭kardinal‬‭yaitu‬‭(WHO,‬
‭2018)‬‭:‬
‭2.‬ ‭Kehilangan‬‭sensasi‬‭pada‬‭lesi‬‭yang‬‭mengalami‬‭hipopigmentasi‬
‭3.‬ ‭Penebalan‬‭saraf‬‭perifer‬‭disertai‬‭dengan‬‭kehilangan‬‭sensasi‬‭dan‬‭kelemahan‬‭otot‬

‭pada‬‭saraf‬‭terkait‬

‭1.‬ ‭Didapatkan‬‭bakteri‬‭tahan‬‭asam‬‭pada‬‭pemeriksaan‬‭skin-slit‬‭smear‬

‭ pusan‬‭kulit‬‭ini‬‭merupakan‬‭prosedur‬‭invasif,‬‭sehingga‬‭diperlukan‬‭tindakan‬‭yang‬‭aseptik.‬‭Spesimen‬
A
‭diambil‬‭dari‬‭lobules‬‭kedua‬‭telinga,‬‭salah‬‭satu‬‭lesi‬

‭hipopigmentasi.‬
‭PRINSIP‬‭PENGECATAN‬‭ZN‬
‭ ycobacterium‬‭sp‬‭memiliki‬‭dinding‬‭sel‬‭yang‬‭tebal‬‭mengandung‬‭wax‬‭dari‬‭lipid‬‭dan‬‭asam‬‭mikolat‬‭yang‬
M
‭menyebabkan‬‭bakteri‬‭ini‬‭sulit‬‭ditembus‬‭oleh‬‭pengecatan‬‭biasa.‬‭Komposisi‬‭cat‬‭ZN‬‭dan‬‭mekanisme‬
‭pengecatan‬‭ZN‬

‭Komposisi‬‭cat‬‭ZN‬

‭1.‬ Z
‭ N‬‭A:‬‭cat‬‭primer,‬‭berisi‬‭Carbol‬‭fuchsin‬‭1%,‬‭cat‬‭merah‬‭gelap‬‭dalam‬‭5%‬‭phenol‬‭yang‬‭larut‬
‭dalam‬‭bahan‬‭lipid‬‭seperti‬‭yang‬‭dimiliki‬‭oleh‬‭dinding‬‭sel‬‭Mycobacterium‬‭sp.‬‭Penetrasi‬‭cat‬‭ini‬
‭akan‬‭dipermudah‬‭dengan‬‭adanya‬‭pemanasan‬‭yang‬‭membantu‬‭carbol‬‭fuchsin‬‭menembus‬
‭dinding‬‭lipid‬‭menuju‬‭sitoplasma.‬
‭2.‬ Z
‭ N‬‭B:‬‭decolorizing‬‭agent,‬‭berisi‬‭asam‬‭alkohol‬‭(3%‬‭HCl‬‭dan‬‭95%‬‭Ethanol).‬‭Sifat‬‭larutan‬‭ini‬
‭mampu‬‭mengeraskan‬‭dinding‬‭sel‬‭yang‬‭tersusun‬‭dari‬‭lipid.‬‭Dekolorisasi‬‭menggunakan‬‭asam‬
‭alkohol‬‭tidak‬‭dapat‬‭melunturkan‬‭cat‬‭primer‬‭(ZN‬‭A),‬‭karena‬‭ZN‬

‭ ‬‭lebih‬‭larut‬‭dibandingkan‬‭ZN‬‭B.‬‭ZN‬‭A‬‭tertahan‬‭di‬‭dalam‬‭sitoplasma,‬‭yang‬‭menyebabkan‬‭bakteri‬‭ini‬‭tetap‬
A
‭berwarna‬‭merah.‬

‭1.‬ Z
‭ N‬‭C:‬‭counterstain,‬‭berisi‬‭Methylene‬‭blue‬‭0,1%‬‭.‬‭Hanya‬‭sel‬‭bakteri‬‭non-BTA‬‭yang‬‭terwarnai‬
‭oleh‬‭methylene‬‭blue‬‭karena‬‭mengalami‬‭dekolorisasi‬‭pada‬‭saat‬‭pencucian‬‭dengan‬‭ZN‬‭B.‬
‭Sedangkan‬‭bakteri‬‭Mycobacterium‬‭sp.‬‭yang‬‭merupakan‬‭BTA‬‭telah‬‭meretensi‬‭cat‬‭ZN‬‭A.‬

‭ UBERCULOSIS‬‭(KEMENKES‬‭RI,‬
T
‭2012)‬
‭1.‬ ‭Pengambilan‬‭spesimen‬‭pada‬‭tuberkulosis‬

‭Pengambilan‬‭sputum‬‭dilakukan‬‭selama‬‭2‬‭hari‬‭berturut-turut,‬‭yaitu:‬‭Sewaktu-‬

‭Pagi-Sewaktu.‬

‭1.‬ ‭Sewaktu‬‭hari-1‬‭(A)‬

‭ asien‬‭mengumpulkan‬‭sputum‬‭saat‬‭kunjungan‬‭pertama.‬‭Pasien‬‭dibawakan‬‭pot‬‭sputum‬‭untuk‬‭dibawa‬
P
‭pulang.‬

‭1.‬ ‭Pagi‬‭hari-2‬‭(B)‬
‭ putum‬‭pasien‬‭dikumpulkan‬‭pada‬‭pagi‬‭hari‬‭setelah‬‭bangun‬‭tidur‬‭dibawa‬‭kemudian‬‭dibawa‬‭ke‬
S
‭laboratorium.‬

‭1.‬ ‭Sewaktu‬‭hari-2‬‭(C)‬

‭Saat‬‭membawa‬‭sputum‬‭hari‬‭kedua‬‭ke‬‭laboratorium,‬‭pasien‬‭mengumpulkan‬‭dahak‬‭kembali‬‭(sewaktu).‬

‭1.‬ ‭Penulisan‬‭identitas‬‭(Kemenkes,‬‭2017)‬

‭ engisian‬‭formulir‬‭TB‬‭05‬‭adalah‬‭formulir‬‭yang‬‭diberikan‬‭oleh‬‭petugas‬‭di‬‭bagian‬‭pemeriksaan‬‭sebagai‬
P
‭pengantar‬‭pasien‬‭ke‬‭laboratorium‬‭pemeriksaan‬‭dahak.‬‭Terapat‬‭nomor‬‭identitas‬‭dengan‬‭penulisan‬
‭mengikuti‬‭aturan‬‭:‬

‭Gambar‬‭2.‬‭Penulisan‬‭identitas‬‭pemeriksaan‬‭tuberkulosis‬

‭Keterangan:‬

‭●‬ ‭2‬‭digit‬‭=‬‭tahun‬‭berjalan‬‭pengambiland‬‭ahak‬
‭●‬ ‭7-11‬‭digit‬‭=‬‭7‬‭untuk‬‭RS,‬‭11‬‭untuk‬‭Puskesmas‬
‭●‬ 1
‭ ‬‭digit‬‭=‬‭angka‬‭1‬‭untuk‬‭terduga‬‭TB‬‭SO‬‭(sensitif‬‭obat),‬‭angka‬‭2‬‭untuk‬‭terduga‬‭TB‬‭RO‬‭(resisten‬
‭obat)‬
‭●‬ ‭4‬‭digit‬‭=‬‭no‬‭urut‬‭terduga‬‭TB‬‭dan‬‭terduga‬‭RO‬‭sesuai‬‭register‬‭TB.‬‭06‬
‭●‬ ‭“_”‬‭=‬‭kode‬‭huruf‬‭sesuai‬‭waktu‬‭pengambilan‬‭dahak‬

‭ edangkan‬‭penulisan‬‭nomor‬‭identitas‬‭kaca‬‭sediaan‬‭di‬‭bagian‬‭frosted‬‭adalah‬‭sebagai‬‭berikut:‬‭1‬‭digit/4‬
S
‭digit_‬
‭Gambar‬‭3.‬‭Identitas‬‭sediaan‬‭BTA‬

‭1.‬ ‭Alat‬‭dan‬‭bahan‬
‭1.‬ ‭Spesimen‬‭dahak‬
‭2.‬ ‭Kaca‬‭obyek‬
‭3.‬ ‭Lidi‬‭pipih/geprek‬
‭4.‬ ‭Lidi‬‭lancip‬
‭5.‬ ‭Pensil‬‭2B‬
‭6.‬ ‭Plastik‬‭berisi‬‭disinfektan‬
‭7.‬ ‭Bunsen‬‭dan‬‭korek‬
‭8.‬ C
‭ at‬‭ZN‬‭A‬‭(‭C
‬ arbol‬‭fuchsin‬‭1%)‬‭,‬‭ZN‬‭B‬‭(Asam‬
‭alkohol‬‭3%),‬‭dan‬‭ZN‬‭C‬‭(‭M
‬ ethylen‬‭blue‬‭0,1%)‬
‭9.‬ ‭Pinset‬
‭10.‬ ‭Rak‬‭pengecatan‬
‭11.‬ ‭Kertas‬‭tissue‬

‭Gambar‬‭4.‬‭Lidi‬‭pipih/geprek‬‭dan‬‭tempat‬‭pembuangan‬‭dilapisi‬‭plastik‬‭berisi‬‭disinfektan‬

‭1.‬ ‭Prosedur‬‭pengecatan‬‭ZN‬
‭1.‬ ‭Cara‬‭pembuatan‬‭preparat‬‭dari‬‭sputum‬‭(dahak)‬
‭1.‬ M
‭ embersihkan‬‭kaca‬‭obyek‬‭dari‬
‭kotoran‬‭dan‬‭lemak‬
‭2.‬ M
‭ enuliskan‬‭identitas‬‭pada‬
‭bagian‬‭frosted‬‭dengan‬
‭menggunakan‬‭pensil‬‭2B‬
 ‭3.‬ M
‭ embuat‬‭apusan‬‭dengan‬‭cara‬
‭mengambil‬‭sputum‬‭(dahak)‬
‭yang‬‭purulent‬

‭menggunakan‬‭lidi‬‭pipih‬‭dan‬‭membuat‬‭ukuran‬‭2×3‬‭cm‬‭(oval)‬

‭1.‬ M
‭ eratakan‬‭apusan‬‭dahak‬
‭dengan‬‭menggunakan‬‭lidi‬‭kecil‬
‭dengan‬‭gerakan‬‭spiral‬‭(‭c‬ oil‬
‭type)‬‭dan‬‭merata‬
‭2.‬ L
‭ idi‬‭yang‬‭telah‬‭digunakan‬
‭dibuang‬‭ke‬‭dalam‬‭tempat‬
‭dilapisi‬‭plastik‬‭yang‬

‭berisi‬‭disinfektan‬

‭1.‬ ‭Pengeringan‬
‭1.‬ ‭Dibiarkan‬‭di‬‭suhu‬‭kamar‬
‭2.‬ J‭ ika‬‭sediaan‬‭sudah‬‭kering,‬
‭tidak‬‭diperbolehkan‬‭membuat‬
‭gerakan‬‭spiral‬‭kembali‬‭karena‬
‭berisiko‬‭aerosol‬
‭2.‬ ‭Fiksasi‬
‭1.‬ S
‭ etelah‬‭dibuat‬‭apusan‬
‭spesimen‬‭dan‬‭fiksasi‬
‭2.‬ J‭ epit‬‭dengan‬‭menggunakan‬
‭pinset‬
‭3.‬ L
‭ ewatkan‬‭sediaan‬‭di‬‭atas‬‭api‬
‭bunsen‬‭biru‬‭sebanyak‬‭2-3‬‭kali‬
‭selama‬‭1-2‬‭detik.‬‭Jika‬
‭dipanaskan‬‭terlalu‬‭lama‬‭dapat‬
‭menyebabkan‬‭sediaan‬‭rusak.‬
‭3.‬ ‭Pewarnaan‬
‭1.‬ G
‭ enangi‬‭sediaan‬‭dengan‬‭cat‬
‭ZN‬‭A,‬‭panaskan‬‭di‬‭atas‬‭rak‬
‭pengecatan‬‭dengan‬
‭menggunakan‬‭api‬‭bunsen.‬
‭Pemanasan‬‭sampai‬‭muncul‬
‭uap‬‭dan‬‭tidak‬‭diperbolehkan‬
 s‭ ampai‬‭mendidih‬‭karena‬‭akan‬
‭menimbulkan‬‭endapan‬‭kristal‬
‭2.‬ ‭Dinginkan‬‭sekitar‬‭10‬‭menit‬
‭3.‬ B
‭ uang‬‭sisa‬‭Carbol‬‭fuchsin,‬
‭bilas‬‭dengan‬‭air‬‭mengalir.‬
‭Usahakan‬‭tidak‬‭tepat‬‭di‬‭atas‬
‭spesimen‬
‭4.‬ G
‭ enangi‬‭dengan‬‭ZN‬‭B‬‭(asam‬
‭alkohol)‬‭selama‬‭10-20‬‭detik‬
‭sampai‬‭warna‬‭merah‬‭hilang‬
‭(pucat)‬
‭5.‬ ‭Bilas‬‭dengan‬‭air‬‭mengalir‬
‭6.‬ G
‭ enangi‬‭dengan‬‭cat‬‭ZN‬‭C,‬
‭biarkan‬‭selama‬‭1‬‭menit‬
‭7.‬ B
‭ uang‬‭sisa‬‭cat‬‭ZN‬‭C,‬‭bilas‬
‭dengan‬‭air‬‭mengalir.‬
‭8.‬ K
‭ eringkan‬‭sediaan‬‭pada‬‭rak‬
‭pengering‬
‭4.‬ ‭Pembacaan‬
‭1.‬ L
‭ ihat‬‭di‬‭bawah‬‭mikroskop‬‭dari‬
‭dengan‬‭menggunakan‬‭lensa‬
‭obyektif‬‭perbesaran‬‭10x‬‭untuk‬
‭menentukan‬‭fokus‬‭dan‬‭lapang‬
‭pandang,‬‭kemudian‬

‭perbesaran‬‭lendsa‬‭obyektif‬‭100x‬‭dengan‬‭menambahkan‬‭minyak‬‭imersi.‬

‭1.‬ P
‭ embacaan‬‭dilakukan‬‭di‬
‭sepanjang‬‭garis‬‭horizontal‬
‭terpanjang‬‭dari‬‭ujung‬‭kiri‬‭ke‬
‭kanan‬‭atau‬‭sebaliknya.‬‭minimal‬
‭100‬‭lapang‬‭pandang.‬
‭2.‬ B
‭ TA‬‭akan‬‭tampak‬‭sebagai‬
‭bakteri‬‭berbentuk‬‭batang‬
‭berwarna‬‭merah‬‭baik‬‭soliter‬
‭maupun‬‭berkelompok.‬
‭Gambar‬‭5.‬‭Pembacaan‬‭BTA‬

‭1.‬ ‭Kualitas‬‭sediaan‬

‭ ualitas‬‭sediaan‬‭apusan‬‭sputum‬‭BTA‬‭yang‬‭baik‬‭harus‬‭memenuhi‬‭6‬‭kualitas‬‭sebelum‬‭dilakukan‬
K
‭pembacaan‬‭menggunakan‬‭tabel‬‭IUTLD.‬‭Kualitas‬‭tersebut‬

‭meliputi:‬

‭1.‬ ‭Kualitas‬‭sputum‬

‭ putum‬‭untuk‬‭pengecatan‬‭Ziehl‬‭Neelsen‬‭dikatakan‬‭baik‬‭jika‬‭pada‬‭pemeriksaan‬‭mikroskopis‬‭dengan‬
S
‭perbesaran‬‭10×10‬‭ditemukan‬‭leukosit‬‭PMN‬‭≥‬

‭25‬‭per‬‭lapang‬‭pandang.‬‭Sputum‬‭yang‬‭baik‬‭untuk‬‭diperiksa‬‭sebaiknya‬‭yang‬

‭purulent.‬‭Berikut‬‭sputum‬‭yang‬‭dilihat‬‭di‬‭bagian‬‭bawah‬‭dari‬‭pot‬‭sediaan.‬

‭Gambar‬‭6.‬‭Sputum‬‭pemeriksaan‬‭BTA‬

‭1.‬ ‭Ukuran‬‭sediaan‬
‭ ediaan‬‭dibuat‬‭di‬‭atas‬‭glass‬‭obyek‬‭dengan‬‭ukuran‬‭3×2‬‭cm.‬‭Sediaan‬‭ini‬‭dibuat‬‭dengan‬‭cara‬‭mengusap‬
S
‭dahak‬‭secara‬‭spiral‬‭hingga‬‭membentuk‬‭oval‬‭sesuai‬

‭ kuran.‬‭Dapat‬‭juga‬‭dilakukan‬‭dengan‬‭cara‬‭membuat‬‭oval‬‭menggunakan‬‭spidol‬‭di‬‭sebalik‬‭glass‬‭obyek‬
u
‭terlebih‬‭dahulu.‬

‭1.‬ ‭Ketebalan‬‭sediaan‬

‭ etelah‬‭dilakukan‬‭usapan‬‭dahak‬‭pada‬‭glass‬‭obyek‬‭selanjutnya‬‭dilakukan‬‭penilaian‬‭ketebalan.‬‭Cara‬‭ini‬
S
‭dilakukan‬‭dengan‬‭cara‬‭meletakkan‬‭kertas‬‭bertulis‬‭di‬‭belakang‬‭glass‬‭obyek‬‭dengan‬‭jarak‬‭±‬‭4‬‭cm.‬
‭Penilaian‬‭ketebalan‬‭sediaan‬‭dikatakan‬‭baik‬‭jika‬‭kertas‬‭tulis‬‭masih‬‭nampak‬‭namun‬‭tidak‬‭bisa‬‭terbaca‬
‭jelas.‬

‭ ediaan‬‭dikatakan‬‭ketebalannya‬‭kurang‬‭baik‬‭jika‬‭terlalu‬‭tebal‬‭atau‬‭terlalu‬‭tipis.‬‭Terlalu‬‭tebaljika‬‭kertas‬‭di‬
S
‭belakang‬‭glass‬‭obyek‬‭tidak‬‭dapat‬‭dibaca.‬‭Dikatakan‬‭terlalu‬‭tipis‬‭jika‬‭kertas‬‭di‬‭belakang‬‭glass‬‭obyek‬‭masih‬
‭dapat‬‭terbaca‬‭dengan‬‭jelas.‬‭Ketebalan‬‭dapat‬‭juga‬‭dinilai‬‭setelah‬‭dilakukan‬‭pewarnaan.‬‭Baik‬‭jika‬‭leukosit‬
‭tampak‬‭tidak‬‭saling‬‭tumang‬‭tindih.‬

‭Gambar‬‭7.‬‭Ketebalan‬‭sediaan‬‭BTA‬

‭1.‬ ‭Kerataan‬

‭Penilain‬‭secara‬‭makroskopis‬‭dikatakan‬‭baik‬‭jika‬‭sediaan‬‭tampak‬‭rata,‬‭tidak‬‭ada‬

r‭ uang‬‭kosong.‬‭Jika‬‭dinilai‬‭secara‬‭mikrokopis‬‭maka‬‭setiap‬‭lapang‬‭pandang‬‭akan‬‭tampak‬‭apusan‬‭dahak‬
‭tersebar‬‭merata.‬

‭1.‬ ‭Pewarnaan‬

‭ ediaan‬‭yang‬‭baik‬‭dari‬‭hasil‬‭pengecatan‬‭ZN‬‭akan‬‭ditunjukkan‬‭dengan‬‭adanya‬‭kontras‬‭antara‬‭BTA‬
S
‭dengan‬‭warna‬‭latar.‬‭Jika‬‭warna‬‭latar‬‭yang‬‭mengandung‬‭Methylene‬‭blue‬‭pemberiannya‬‭terlalu‬‭lama,‬‭maka‬
‭sediaan‬‭akan‬‭tampak‬‭bewarna‬‭dominan‬‭biru.‬
‭Gambar‬‭8.‬‭Hasil‬‭pewarnaan‬‭yang‬‭baik‬‭dan‬‭yang‬‭tidak‬‭baik‬

‭1.‬ ‭Kebersihan‬

‭Sediaan‬‭dikatakan‬‭bersih‬‭jika‬‭tidak‬‭emngandung‬‭cat‬‭warna‬‭siswa‬‭atau‬‭tidak‬

‭ engandung‬‭endapan‬‭kristal‬‭dari‬‭cat.‬‭Sediaan‬‭yang‬‭bersih‬‭akan‬‭memudahkan‬‭pembacaan‬‭secara‬
m
‭mikroskopis.‬

‭1.‬ ‭Interpretasi‬‭pengecatan‬‭ZN‬

‭ embacaan‬‭hasil‬‭pemeriksaan‬‭ZN‬‭menggunakan‬‭skala‬‭International‬‭Union‬‭Against‬‭Tuberculosis‬‭Lung‬
P
‭Diseases‬‭(IUTLD)‬‭sebagai‬‭berikut:‬

‭Tabel‬‭1.‬‭Skala‬‭International‬‭Union‬‭Against‬‭Tuberculosis‬‭Lung‬‭Diseases‬‭(IUTLD)‬
‭ EPRA‬‭(MORBUS‬‭HANSEN)‬‭(WHO,‬
L
‭2018)‬
‭1.‬ P
‭ engambilan‬‭spesimen‬‭pada‬‭lepra‬‭dapat‬‭diambil‬‭dilakukan‬
‭pada:‬
‭1.‬ ‭Kedua‬‭cuping‬‭telinga‬
‭2.‬ ‭Lesi‬‭aktif‬‭hipopigmentasi‬
‭2.‬ ‭Alat‬‭dan‬‭bahan‬
‭1.‬ ‭Bunsen‬‭dan‬‭korek‬
‭2.‬ ‭Scalpel‬
‭3.‬ ‭Pensil‬‭2B‬
‭4.‬ ‭Surgical‬‭blade‬‭steril‬‭No.‬‭15‬
‭5.‬ ‭Kaca‬‭obyek‬
‭6.‬ ‭Kapas‬‭bulat‬‭steril‬
‭7.‬ ‭Kapas‬‭lidi‬‭steril‬
‭8.‬ ‭Kapas‬‭alkohol‬
‭3.‬ ‭Persiapan‬‭slide‬
‭1.‬ M
‭ embersihkan‬‭kaca‬‭obyek‬‭dari‬‭kotoran‬‭dan‬
‭lemak.‬
‭2.‬ M
‭ enuliskan‬‭identitas‬‭pada‬‭bagian‬‭frosted‬
‭dengan‬‭menggunakan‬‭pensil‬‭2B.‬
‭3.‬ K
‭ aca‬‭obyek‬‭dipanaskan‬‭di‬‭atas‬‭api‬‭bunsen‬
‭secara‬‭perlahan‬‭untuk‬

‭membersihkan‬‭dari‬‭kotoran‬‭dan‬‭lemak,‬‭hindari‬‭menggunakan‬‭kertas‬‭tisu.‬

‭1.‬ P
‭ asang‬‭surgical‬‭blade‬‭No.‬‭15‬‭pada‬‭skalpel,‬
‭dan‬‭hindari‬‭menyentuh‬‭mata‬‭pisau.‬
‭2.‬ ‭Cara‬‭pengambilan‬‭sampel‬‭(P2PL,‬‭2012)‬
‭1.‬ A
‭ rea‬‭yang‬‭akan‬‭diperiksa‬‭dibersihkan‬‭dengan‬
‭menggunakan‬‭kapas‬‭alkohol‬

‭dan‬‭biarkan‬‭mengering.‬

‭1.‬ P
‭ egang‬‭area‬‭dengan‬‭cara‬‭mencubit‬
‭menggunakan‬‭jari‬‭jempol‬‭dan‬‭telunjuk‬‭tangan‬
 k‭ iri.‬‭Hal‬‭ini‬‭dilakukan‬‭untuk‬‭menjauhkan‬‭darah‬
‭dari‬‭tempat‬‭yang‬‭akan‬‭diperiksa‬‭serta‬
‭meminimalkan‬‭perdarahan.‬
‭2.‬ D
‭ engan‬‭menggunakan‬‭ujung‬‭mata‬‭pisau,‬
‭lakukan‬‭insisi‬‭dengan‬‭ukuran‬‭5‬‭mm‬‭dan‬
‭kedalaman‬‭2-3‬‭mm.‬‭Kulit‬‭tetap‬‭dicubit‬‭agar‬
‭tidak‬‭terjadi‬‭perdarahan.‬
‭3.‬ K
‭ erok‬‭bagian‬‭dasar‬‭dari‬‭celah‬‭untuk‬
‭mendapatkan‬‭bahan‬‭apusan.‬
‭4.‬ L
‭ etakkan‬‭sampel‬‭pada‬‭kaca‬‭obyek‬‭dan‬‭buat‬
‭apusan‬‭yang‬‭tipis‬‭dan‬‭ketebalan‬

‭yang‬‭sama‬‭dengan‬‭diameter‬‭berukuran‬‭5-8‬‭mm.‬

‭1.‬ T
‭ ekan‬‭area‬‭tempat‬‭pengambilan‬‭sampel‬
‭dengan‬‭menggunakan‬‭bola‬‭kapas‬

‭steril‬‭dan‬‭hapus‬‭dengan‬‭kapas‬‭alkohol.‬

‭1.‬ H
‭ apus‬‭kotoran‬‭pada‬‭scalpel‬‭dengan‬
‭menggunakan‬‭kapas‬‭alcohol.‬‭Panaskan‬

‭scalpel‬‭di‬‭atas‬‭api‬‭Bunsen‬‭selama‬‭3-4‬‭menit.‬‭Biarkan‬‭dingin,‬‭dan‬‭hindari‬‭menyentuh‬‭sesuatu.‬

‭1.‬ U
‭ langi‬‭langkah‬‭pengambilan‬‭sampel‬‭di‬‭area‬
‭yang‬‭lain.‬
‭Gambar‬‭9.‬‭Pengambilan‬‭sampel‬‭pada‬‭lobules‬‭telinga‬‭(Ali,‬‭et‬‭al,‬‭2014)‬

‭1.‬ ‭Fiksasi‬
‭1.‬ ‭Dibiarkan‬‭di‬‭suhu‬‭kamar.‬
‭2.‬ L
‭ ewatkan‬‭sediaan‬‭di‬‭atas‬‭api‬‭bunsen‬‭biru‬
‭sebanyak‬‭2-3‬‭kali‬‭selama‬‭1-2‬‭detik.‬

‭Jika‬‭dipanaskan‬‭terlalu‬‭lama‬‭dapat‬‭menyebabkan‬‭sediaan‬‭rusak.‬‭Jika‬‭terlalu‬

‭cepat‬‭dipanaskan‬‭dapat‬‭menyebabkan‬‭spesimen‬‭tidak‬‭menempel‬‭dengan‬‭baik‬‭dan‬‭mudah‬‭tercuci.‬

‭1.‬ ‭Pewarnaan‬
‭1.‬ ‭Letakkan‬‭kaca‬‭obyek‬‭di‬‭atas‬‭rak‬‭pengecatan.‬
‭2.‬ G
‭ enangi‬‭sediaan‬‭dengan‬‭cat‬‭ZN‬‭A‬‭(‬‭carbol‬
‭fuchsin‬‭0,3%‬‭),‬‭panaskan‬‭di‬‭atas‬‭rak‬
‭pengecatan‬‭dengan‬‭menggunakan‬‭api‬‭bunsen.‬
‭Pemanasan‬‭sampai‬‭muncul‬‭uap‬‭dan‬‭tidak‬
‭diperbolehkan‬‭sampai‬‭mendidih‬‭karena‬‭akan‬
‭menimbulkan‬‭endapan‬‭Kristal.‬
‭3.‬ D
‭ inginkan‬‭sekitar‬‭5‬‭menit,‬‭namun‬‭jangan‬
‭sampai‬‭mengering.‬
‭4.‬ B
‭ uang‬‭sisa‬‭Carbol‬‭fuchsin‬‭,‬‭bilas‬‭dengan‬‭air‬
‭mengalir.‬‭Usahakan‬‭tidak‬‭tepat‬‭di‬‭atas‬
‭spesimen.‬
 ‭5.‬ G
‭ enangi‬‭dengan‬‭ZN‬‭B‬‭(asam‬‭alcohol‬‭3%)‬
‭selama‬‭5-10‬‭detik‬‭sampai‬‭warna‬

‭merah‬‭hilang‬‭(pucat)‬

‭1.‬ ‭Bilas‬‭dengan‬‭air‬‭mengalir.‬
‭2.‬ G
‭ enangi‬‭dengan‬‭cat‬‭ZN‬‭C‬‭(‭m ‬ ethylene‬‭blue)‬
‭sebagai‬‭counter‬‭staining‬‭,‬‭biarkan‬‭selama‬‭1‬
‭menit.‬
‭3.‬ B
‭ uang‬‭sisa‬‭cat‬‭ZN‬‭C,‬‭bilas‬‭dengan‬‭air‬
‭mengalir.‬
‭4.‬ K
‭ eringkan‬‭di‬‭atas‬‭kertas‬‭tissue,‬‭posisi‬‭berdiri‬
‭miring.‬
‭2.‬ ‭Pembacaan‬‭(WHO,‬‭2018)‬

‭ embaca‬‭apusan‬‭slit‬‭skin‬‭smear‬‭sekitar‬‭100‬‭lapang‬‭pandang.‬‭Bakteri‬‭tahan‬‭asam‬‭(BTA)‬‭Mycobacterium‬
M
‭leprae‬‭akan‬‭tampak‬‭sebagai‬‭bakteri‬‭berbentuk‬‭batang‬‭berwarna‬‭merah‬‭dengan‬‭latar‬‭belakang‬‭berwarna‬
‭biru.‬‭Bentuknya‬‭dapat‬‭lurus‬

‭ tau‬‭melengkung‬‭dengan‬‭warna‬‭merah‬‭merata/homogen/solid‬‭atau‬‭tidak‬‭rata/‬‭fragmented‬‭dan‬‭granular.‬
a
‭Identifikasi‬‭BTA‬‭kemudian‬‭digunakan‬‭untuk‬‭menentukan:‬

‭1.‬ ‭Indeks‬‭bakteri‬‭(IB)‬

‭ enunjukkan‬‭penilaian‬‭semikuantitatif‬‭kepadatan‬‭BTA.‬‭Tujuan‬‭pemeriksaan‬‭IB‬‭adalah‬‭untuk‬‭menentukan‬
M
‭tipe‬‭lepra‬‭dan‬‭terapi‬‭yang‬‭sesuai.‬‭Penilaian‬‭dengan‬‭menggunakan‬‭skala‬‭logaritma‬‭Ridley.‬

‭Tabel‬‭2.‬‭Indeks‬‭Bakteri‬‭Mycobacterium‬‭leprae‬

‭*‬‭Clumps‬‭:‬‭beberapa‬‭bentuk‬‭granuler‬‭seperti‬‭titik-titik‬‭tersusun‬‭garis‬‭lurus‬
‭atau‬‭berkelompok‬‭membentuk‬‭pulau-pulai‬‭tersendiri‬

‭1.‬ ‭Indeks‬‭morfologi‬‭(IM)‬

‭Menunjukkan‬‭persentase‬‭basil‬‭lepra,‬‭bentuk‬‭utuh‬‭(solid)‬‭terhadap‬‭seluruh‬

‭ TA.‬‭Untuk‬‭mendapatkannya‬‭dicari‬‭lapang‬‭pandang‬‭yang‬‭paling‬‭baik‬‭yang‬‭tidak‬‭terdapat‬‭globus/‬‭clumps‬‭.‬
B
‭Jika‬‭tidak‬‭ada,‬‭maka‬‭ambil‬‭lapang‬‭pandang‬‭paling‬‭sedikit‬‭mengandung‬‭globus/‬‭clamps.‬‭Jika‬‭ditemukan‬
‭globus/‬‭clamps‬‭maka‬‭tidak‬‭dihitung.‬

‭IM‬‭=‬‭Jumlah‬‭BTA‬‭yang‬‭utuh‬‭x‬‭100%‬‭Jumlah‬‭seluruh‬‭BTA‬

I‭ndeks‬‭morfologi‬‭berfungsi‬‭untuk‬‭mengetahui‬‭penularan‬‭bakteri,‬‭menilai‬‭respon‬‭terhadap‬‭terapi,‬‭dan‬
‭menilai‬‭adanya‬‭resistensi‬‭terhadap‬‭obat.‬

‭Hasil‬‭pengamatan‬
‭SOAL‬‭DISKUSI‬
‭1.‬ ‭Apakah‬‭tujuan‬‭pemeriksaan‬‭Ziehl‬‭Neelsen‬‭(ZN)?‬
‭1.‬ ‭Apakah‬‭yang‬‭dimaksud‬‭dengan‬‭bakteri‬‭tahan‬‭asam?‬
‭2.‬ ‭Bagaimana‬‭prinsip‬‭pengecatan‬‭ZN?‬
‭3.‬ ‭Bagaimana‬‭cara‬‭pengambilan‬‭sampel‬‭[pada‬‭pasien‬‭yang‬‭dicurigai‬‭terinfeksi‬‭oleh‬

‭Mycobacterium‬‭leprae?‬
 ‭1.‬ B
‭ agaimana‬‭interpretasi‬‭pembacaan‬‭mikroskopis‬‭dari‬‭BTA‬‭baik‬‭pada‬‭kasus‬‭tuberekulosis‬
‭maupun‬‭lepra?‬

‭REFERENSI‬
‭Ali,‬‭S.,‬‭Giri,‬‭V.‬‭C.,‬‭Rajenderen,‬‭S.‬‭M.,‬‭&‬‭Vanaja,‬‭S.‬‭G.‬‭(2014).‬‭Module‬‭for‬‭Skin‬‭Smear‬

‭ echnique‬‭for‬‭GHC‬‭Lab‬‭Technician‬‭Module‬‭for‬‭Skin‬‭Smear‬‭Technique‬‭for‬‭GHC‬‭Lab‬‭Technician‬‭Module‬‭for‬
T
‭Skin‬‭Smear‬‭Technique‬‭for‬‭GHC‬‭Lab‬‭Technician‬‭.‬‭Tamil‬‭Nadu.‬

‭Kemenkes,‬‭R.‬‭(2017).‬‭MODUL‬‭PELATIHAN‬‭LABORATORIUM‬‭TUBERKULOSIS‬‭BAGI‬

‭PETUGAS‬‭DI‬‭FASYANKES‬‭.‬

‭ emenkes‬‭RI.‬‭(2012).‬‭Standar‬‭Prosedur‬‭Operasional‬‭Pemeriksaan‬‭Mikroskopis‬‭TB‬‭.‬‭Katalog‬‭dalam‬
K
‭Terbitan‬‭Kemenkes‬‭RI‬‭.‬‭Panduan‬‭Bagi‬‭Petugas‬‭Laboratorium‬‭Kemenkes.‬

‭ 2PL,‬‭D.‬‭(2012).‬‭Pedoman‬‭Nasional‬‭Program‬‭Penanggulangan‬‭Penyakit‬‭Kusta.‬‭WHO.‬‭(2018).‬‭Guidelines‬
P
‭for‬‭the‬‭Diagnosis,‬‭Treatment‬‭and‬‭Prevention‬‭of‬‭Leprosy‬‭.‬