Validasi Metode

Spektrofotometri pada Uji

Kadar Sediaan Injeksi
Hewan Enrofloksasin
Power point

Di susun oleh :
Valmawati nathalia 17330094
Moch fauzi rachman 17330095
Claudia Y R 17330096
Mayang mulia P 17330101
Roby Setiyawan 17330104
 Validasi menurut ISO Validasi Metode
IEC 17025:2008 Pengujian
Validasi metode pengujian
ialah suatu tindakan penilian
terhadap parameter
VALIDASI adalah konfirmasi
tertentu, berdasarkan
melalui pengujian dan
percobaan laobraturium,
penyediaan bukti objektif
untuk membuktikan bahwa
bahwa persyaratan tertentu
parameter tersebut
untuk maksud terpenuhi.
memenuhi persyaratan
untuk penggunaanya.
Pendahuluan
Parameter Validasi : As beautiful
- Presisi (keseksamaan) a s a f l o w e r.
- Akurasi (kecermatan)
- Spesifitas (selektifitas)
Batas deteksi
- Batas kuantitasi
- Rentang linieritas
- Kekuatan (rubustness)
- Ketangguhan (rudgeness)
 Tu j u a n memvalidasi metode

UNTUK MENGETAHUI SEJAUH MANA

PENYIMPANGAN METODE TIDAK DAPAT DIHINDARI
PADA KONDISI NORMAL, DENGAN SELURUH
ELEMEN TERKAIT TELAH TERLAKSANA DENGAN
BAIK DAN BENAR
 E N R O F L O K S A S I N

Enrofloksasin merupakan fluorokuinolon pertama yang diperkenalkan dan

digunakan sebagi obat hewan. Kemoterapeutika ini adalah senyawa quinolon
pertama yang digunakan dalam veternier, yang mempunyai aktivitas
antibakterisidal dan berspektrum antimikrob luas terhadap mikroorganisme Gram
positif dan Gram negatif serta aktif baik pada fase diam maupun pertumbuhan dari
repilikasi bakteri. Enroflokasasin tidak membembentuk ikatan komplek dengan
protein plasma, sehingga memungkinkan metabolit secara bebas melewati
membran plasma.
 Enrofloksasin Monografi
secara kimia Enroflokasin Monografi
Serbuk kristal berbentuk jarum As beautiful
Dikenal sebagai 3-kuinolin Berwarna putih atau kekuningan
a s a f l o w e r.
asam karboksilat, 1- Tidak berbau
Berasa
siklopropil-7-(4-etil-1-
Tersedia dalam garam
piperazinil)-6-fluro-1,4- hidroklorida, laktat dan sodium
dihidro-4-okso. Kelarutan sangat larut dalam
Rumus empiris C₉H₂₂FN₃O₃ asam dan basa media dan larut
Dan berat molekul 359,4 dalam dimetilformamida, sedikit
g/mol. larut dalam kloroform, metanol
dan tidak larut dalam air.
 Bahan dan Alat

• Sampel obat mengandung

enroflokasasin
• Natrium hidroksida (NaOH)
Power point

Bahan • Standar enroflokasin (sigma-

fluka)

• Neraca digital
• Magnetic stirrer
• Vortex mixer

Alat • Labu ukur 50 mL dan 1000 mL

• Pipet volumetrik
• Kuvet
• Spektrofotometer UV-VIS
 U j i P r e s i s i

1. Sampel setara dengan 50-100 mg enrofloksasin dipipet dimasukan ke dalam

labu ukur 50 mL dan diencerkan dengan pelarut NaOH 0.1N. Pengenceran
bertingkat dibuat menggunakan pelarut NaOH 0,1N sehinggga diperoleh
konsentrasi 10 µg/mL.
2. Standar enroflokasisin ditimbang 10 mg, kemudian dibuat pengenceran
bertingkat dengan pelarut NaOH 0,1N sehingga diperoleh kosentrasi akhir 10
µg/mL. absorbansi sampel diukur dengan spektrofotometri UV-Vis pada
panjang gelombang maksium 271 nm.
 Rumus 1 Rumus 2 Rumus 3s a Uji
f l o w e r.

Presisi
Kadar yang didapat dari
sampel dihitung dan
Nilai CV diperoleh dengan Nilai CV hitung ini, kemudian
pengujian sampel di atas menghitung standar deviasi (SD) dibandingkan dengan
dilang sebanyak 7 kali dan relatif standar deviasi (RSD): CV Horwitz:
Rumus presentase kadar :
 Uji akurasi Uji linieritas

10 mg standar enrofloksasin
ditimbang dan dibuat
pengenceran beritingkat pada 5
konsentrasi dengan NaOH 0,1N
sehingga konsentrasi 1,25: 2,5:
Perhitungan untuk kerja 5,0: 10dan 20 µg/ml. absorbansi
akurasi digunakan metode tiap konsentrasi diukur dengan
analisis dalam menetapkan spektofotometer UV/Vis pada
kadar analit bahan akitif panjang gelombang 271 nm dan
nilai koefisien korelasi (r)
yang diketahui kemurnianya.
dihitung. Nilai r didapat dari
Nilai perolehan kembali analisis regresi linier dengan
dihitung dengan rumus 4 : rumus 5:
y= bx + ɑ
a= intersep
b= slope
X= absprbansi
 Hasil dan Pembahasan

UJI PRESISI
Pengujian presisi dilakukan dengan cara keterulangan yang dilaksanakan oleh penguji yang sama. Hasil
pengujian kadar enfloksasin menggunakan spektofotometri UV-Vis. Nilai CV pengujian ini adalah 0,934%
sedangkan CV Horwitz yang terhitung adalah 11,34%. CV hasil pengujian dengan metode ini lebih kecil dari
pada CV Horwitz. Menurut harmita suatu metode pengujian dikatakan seksama jika metode memeberikan
simpangan baku relatif (RSD) atau CV 2% atau kurang, sedangkan menurut kantasubrata persyaratan
repitabilitas adalah baik jika nilai CV hitung lebih kecil atau sama dengan CV Horwitz, sehingga dapat
dikatakan bahwa metode uji enrofloksasin menggunakan spektrofotometer ini mempunyai presisi yang
baik.
 Uji Akurasi

Nilai akurasi dihitung melalui penetapan kadar standar untuk

menemukan perolehan kembali terhadap nilai kadar standar
sebenarnya .
Akurasi perhitungan kadar enrofloksasin adalah 0,449%. Semakin
kecil nilai akurasi, maka semakin mendekati kebenaran suatu zat
atau semakin akurat. Sedangkan, menurut harmita selisih kadar
pada berbagai penetuan harus 5% atau kurang pada setiap
konsentrasi analit dengan prosedur yang dilakukan. Oleh sebab itu,
metode ini memilki akurasi yang baik.
 Uji Linearitas

Linearitas merupakan kemampuan metode mendatangkan hasil uji

yang secara langsung sebanding dengan konsentrasi analit dalam
suatu rentang kerja yang diberikan.
Nilai r yang didapatkan adalah 0,9996, sedangkan syarat suatu
metode uji mempunyai linearitas yang baik jika nilai r lebih besar
0,98. hasil ini membuktikan bahwa metode uji enrofloksasin dengan
metode spektrofotometer mempunyai linearitas yang baik.
 Batas Deteksi Batas Kuantitas

Berdasarkan perhitungan,
diperoleh batas deteksi pada batas kuantitas merupakan
kosentrasi 0,757 µg/ mL parameter pada analisis
untuk pengujian renik atau kuantitas terkecil
enrofloksasin dengan analit dalam sampel yang
metode spektofotometri. Ini masih dapat memenuhi
berarti bahwa kriteria cermat dan seksama.
enrofloksasain pada Nilai batas kuantitas pada
kosentrasi tersebut maih pengujian ini sebesar 2,522
dapat terbaca µg/ml. konsentrasi tersebut
absorbansinya, namun tidak merupakan konsentrasu
dapat digunakan dalam terkecil yang tidak
perhitungan, karena dapat menimbulkan bias
mebuat bias perhitungan perhitungan.
 K e s i m p u l a n

Validasi metode uji kadar obat hewan enrofloksasin menggunakan spektofometer telah divalidasi dengan
presisi, akurasi dan lineritas yang baik. Nilai batas deteksinya yaitu 0,757 µg/ml dan batas kuantitasnya
yaitu 2,522 µg/ mL. berdarkan hasil validasi ini, maka metode uji kadar enrofloksasin bentuk sedian injeksi
dengan spektofotometri dapat digunakan sebagai metode uji yan baik, karena mampu memberikan
jaminan mutu hasil uji yang valid.
THANK YOU
Power point