DNA REKOMBINAN

Dra. Arni Amir, MS

 DNA REKOMBINAN
Adalah melibatkan upaya perbanyakan gen tertentu
didalam suatu sel yang bukan sel alaminya.
Pembentukan kombinasi materi genetik yang baru dengan
cara penyisipan molekul DNA kedalam suatu vektor
sehingga memungkinkan untuk terintegrasi dan mengalami
perbanyakan di dalam suatu sel organisme lain yang
berperan sebagai sel inang
Secara garis besar DNA Rekombinan melibatkan :
1. Insersi materi genetika baru ke dalam satu organisme, umumnya
bakteri
2. Metode tergantung pada gen yang akan ditransfer dan tipe
organisme yang menerima informasi genetik

Pada dasarnya upaya untuk mendapatkan suatu produk

yang diinginkan melalui teknologi DNA Rekombinan
melibatkan beberapa tahap :
1.Isolasi DNA genomik (kromosom yang akan diklon)
2. Pemotongan molekul DNA menjadi sejumlah fragmen
3. Isolasi DNA vektor
4. Penyisipan fragmen DNA kedalam vektor untuk menghasilkan molekul
DNA rekombinan
5. Transformasi sel inang menggunakan molekul DNA rekombinan
Isolasi DNA
Adalah perusakan atau pembuangan dinding sel, yang
dapat dilakukan baik dengan cara mekanis seperti sonikasi
tekanan tinggi maupun dengan cara enzimatis
DNA Cloning
Adalah teknik untuk memperbanyak gen yang telah
diidentifikasi :
1. Isolasi dan identifikasi DNA dari DNA genom dengan
cara memotong DNA dengan enzim restriksi dan
diidentifikasi sekuens DNA
2. Menginsersikan DNA yang akan diklon ke vektor
sehingga terbentuk DNA rekombinan yang dapat
bereplikasi
Vektor yang digunakan harus mempunyai sifat-sifat :
-Dapat menerima DNA yang diinsersikan

-Dapat bereplikasi dalam host (bakteri) sehingga dapat

diisolasi DNA rekombinan dalam jumlah besar
-Mempunyai selectable marker sehingga memungkinkan
seleksi klon yang spesifik
 MACAM-MACAM VEKTOR
Plasmid
-Adalah DNA non-kromosom yang diisolasi dari bakteri

-Struktur plasmid adalah ds DNA sirkuler

-Beberapa plasmid telah diseleksi dan diperbanyak untuk

vektor DNA rekombinan

Misalnya : PBR, 322, PUC 8, PUC 12
- bakteriofag
- bakteriofag lamda —> membuat gen library
- bakteriofag M 13 untuk menganalisa sikuens DNA
- Transformasi bakteri
adalah DNA genom yang diinsersikan ke DNA vektor,
kemudian dimasukkan ke bakteri dengan perantaraan
bakteriofag
- Gen library
bila bakteri yang telah mengadopsi DNA rekombinan
dibiakkan, bakteri akan bermultiplikasi dan DNA yang
diinsesikan ikut bereplikasi berlipat ganda
Manfaat DNA cloning
1. Dapat digunakan untuk memproduksi produk gen
2. Untuk memperbanyak segmen DNA tertentu selanjutnya
digunakan sebagai DNA (probe) untuk mengidentifikasi
gen yang saman pada individu

Aplikasi teknik DNA rekombinan

1. Sintesis protein dan hormon
Terima kasih………..