TEKNOLOGI DNA

REKOMBINAN
 PENGERTIAN TEKNOLOGI DNA
REKOMBINAN

pembentukan kombinasi
materi genetik yang baru
Dengan cara

penyisipan molekul DNA

ke dalam suatu vektor
 TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN
MEMPUNYAI DUA SEGI MANFAAT.

dengan mengisolasi dan diperolehnya produk

mempelajari masing- gen tertentu dalam
masing gen akan waktu lebih cepat dan
diperoleh pengetahuan jumlah lebih besar
tentang fungsi dan daripada produksi
mekanisme kontrolnya secara konvensional
TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN MELIBATKAN BEBERAPA TAHAPAN
TERTENTU, YAITU

isolasi DNA genomik/kromosom yang akan diklon

pemotongan molekul DNA menjadi sejumlah

fragmen dengan berbagai ukuran
isolasi DNA vektor, penyisipan fragmen DNA ke dalam
vektor untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan

transformasi sel inang menggunakan molekul DNA

rekombinan
reisolasi molekul DNA rekombinan dari sel inang
analisis DNA rekombinan
 ISOLASI DNA

•Isolasi DNA diawali dengan perusakan dan atau

pembuangan dinding sel
•Langkah selanjutnya adalah lisis sel
•Setelah sel mengalami lisis, remukan-remukan sel harus
dibuang
•DNA yang telah dibersihkan dari protein dan remukan
sel masih tercampur dengan RNA sehingga perlu
ditambahkan RNAse untuk membersihkan DNA dari
RNA. Molekul DNA yang telah diisolasi tersebut
kemudian dimurnikan dengan penambahan amonium
asetat dan alkohol atau dengan sentrifugasi kerapatan
menggunakan CaCl.
 ENZIM RESTRIKSI

Tahap kedua dalam kloning gen adalah

pemotongan molekul DNA, baik genomik
maupun plasmid
Tempat pemotongan pada kedua untai DNA
sering kali terpisah sejauh beberapa pasang basa
 LIGASI MOLEKUL – MOLEKUL
DNA

Ada tiga cara, yaitu:

ligasi menggunakan enzim DNA ligase dari bakteri

ligasi menggunakan DNA ligase dari sel-sel E. coli

yang telah diinfeksi dengan bakteriofag T4 atau
lazim disebut sebagai enzim T4 ligase

pemberian enzim deoksinukleotidil transferase

untuk menyintesis untai tunggal homopolimerik 3’
 SELEKSI TRANSFORMAN DAN
SELEKSI REKOMBINAN

Dikarenakan DNA yang dimasukkan ke dalam sel inang

bukan hanya DNA rekombinan
Cara seleksi sel transforman akan diuraikan lebih rinci
pada penjelasan tentang plasmid
Pada dasarnya ada tiga kemungkinan yang dapat terjadi
setelah transformasi dilakukan, yaitu:
 (1) SEL INANG TIDAK DIMASUKI DNA APA
PUN ATAU BERARTI TRANSFORMASI GAGAL

(2) sel inang dimasuki vektor religasi atau berarti

ligasi gagal

(3) sel inang dimasuki vektor rekombinan

dengan/tanpa fragmen sisipan atau gen yang
diinginkan
 Seleksi sel rekombinan yang membawa fragmen
yang diinginkan dilakukan dengan mencari fragmen
tersebut menggunakan fragmen pelacak (probe), yang
pembuatannya dilakukan secara in vitro menggunakan
teknik reaksi polimerisasi berantai atau polymerase
chain reaction (PCR). Pelacakan fragmen yang
diinginkan antara lain dapat dilakukan melalui cara yang
dinamakan hibridisasi koloni.
 MANFAAT TEKNOLOGI DNA
REKOMBINAN

Meliputi empat bidang:

Bidang kesehatan
Bidang Pertanian
Bidang Hukum
Bidang Pengemangan Ilmu Pengetahuan