Keragaman Gen yang Tahan Logam dan Biotekni pada Bakteri yang Tahan

Logam untuk Bioremediasi

Di lingkungan yang terkontaminasi dengan senyawa beracum ,

mikroorganisme telah menemukan cara tidak hanya untuk menahan senyawa
tersebut tetapi juga untuk memulihkannya manfaatnya (Guo et al. 2010).
Kemampuan bakteri untuk menolak logam beracun berasal dari sistem genetik
yang sangat dimodifikasi, yang dengannya mereka mensintesis protein yang
memungkinkan mereka berkembang di hadapan unsur-unsur tersebut. Bakteri
bertahan hidup dengan mengekspresikan beberapa gen yang tahan logam seperti
kadmium, kromium, tembaga, timah, merkuri, dan nikel. Mereka dapat bertahan
hidup di lingkungan yang sangat beracun dengan bantuan gen-gen yang resisten,
dan lebih lanjut dapat digunakan unruk bioremidiasi. Gen spesifik yang
bertanggung jawab untuk bioremediasi logam beracun yang ditemukan sudah
beragam. Bakteri dapat mengembangkan resistensi terhadap logam beracun
sebagai bagian dari mekanisme pertahanan yang dapat dimanfaatkan untuk
membersihkan lingkungan yang terkontaminasi (Gambar 1).

Merkuri
Merkuri adalah salah satu unsur paling beracun di alam semesta dan
ditemukan dapat mengakibatkan masalah kesehatan yang parah dibandingkan
dengan polutan logam lainnya. Merkuri terkonsentrasi di sedimen, tanah,
atmosfer, dan air. Merkuri dapat masuk ke lingkungan sebagai limbah industri.
Dua operon yang berbeda hadir dalam bakteri untuk resistensi merkuri. Pertama
adalah narrow-spectrum mer operon sedangkan yang lain adalah broadspectrum
mer operon (Silver dan Phung 2013). Operon yang paling sederhana adalah yang
ditemukan pada transposon, Tn5037 (Kalyaeva et al. 2001) dan Tn5070 (Mindlin
et al. 2001), sedangkan yang paling kompleks adalah mer operon Tn5718
(Schneiker et al. 2001).
 Gambar 1. Ilustrasi umum dari mekanisme genetik resistensi terhadap logam
beracun oleh bakteri. Ketahanan terhadap racun logam pada bakteri dikaitkan
dengan sistem eflux, keberadaan gen tahan logam, gen detoksifikasi, biosorpsi,
atau bioakumulasi
Sumber: Dash & Das 2012

Operon mer spektrum sempit terdiri dari gen merR, merT, merC, merF,
merP, dan merD (Dash dan Das 2012). Operon ini diinduksi oleh merkuri
anorganik (Hg2 +) dan memberikan resistensi terhadap garam merkuri anorganik
saja. merR bertindak sebagai regulator transkripsi positif dari operon dan
ditranskripsikan secara terpisah. Di hadapan merkuri ekstraseluler, atau tidak
adanya merkuri intraseluler, ia mengikat ke daerah promotor / operator operon
untuk mengatur secara positif dan negatif ekspresi gen fungsional. Protein terluar
dari operon adalah MerP, yang terletak di ruang periplasmik. Ini adalah protein
asam 72-amino dengan lipatan β-α-β-β-α-β. Dua heliks α ditemukan untuk
melapisi lembar β antiparalel empat untai (Eriksson dan Sahlman 1993). Situs
yang mengikat merkuri berisi urutan konsensus GMTCAAC. MerP mencari ion
merkuri anorganik dan mengangkutnya ke protein MerT (Hamlett et al. 1992).
MerT, yang dikodekan oleh transposon Tn501, adalah protein asam 116-amino,
yang menerima merkuri anorganik dari MerP pada membran plasma dan
mengangkutnya ke dalam sel dengan mengikat residu sistein pada heliks
transmembrannya. Penghapusan atau mutasi residu ini mengakibatkan hilangnya
resistensi merkuri.
 Mekanisme pasti MerC tidak jelas. Namun, MerC telah terbukti berperan
dalam transportasi dan akumulasi merkuri. Ekspresi MERC dalam Arabidopsis
thaliana dan Nicotiana tabacum telah menyebabkan kemampuan menggandakan
mereka untuk mengakumulasi merkuri. Sebaliknya, MerF adalah protein 8,7-kDa
dengan dua heliks transmembran yang juga berfungsi sebagai transporter merkuri
spektrum luas. Reduktase ion merkuri berfungsi untuk mengurangi Hg2+ di dalam
sel untuk membentuk Hg0 yang mudah menguap sehingga mudah dilepaskan dari
sel. Protein MerA adalah flavoprotein, yang membutuhkan NADPH sebagai
donor elektron untuk melakukan reaksi. MerD membentuk protein regulator
sekunder, yang mengikat, meskipun lemah, ke daerah promotor / operator yang
sama dengan MerR dan secara negatif mengatur operon. merH telah diidentifikasi
sebagai transporter ion. Di hulu gen merA, telah ditemukan untuk mengangkut ion
Hg2+ oleh residu sistein dan diekspresikan bersama dengan merA itu sendiri.
merH secara fungsi berfungsi sebagai protein metal-trafficking untuk merR, yang
pada gilirannya menginduksi operasi mer untuk volatilisasi Hg2+ yang dimediasi
oleh merA). merI juga telah diidentifikasi segera di hilir gen merA. Namun,
fungsi pastinya belum diuraikan, dan keragaman pengaturan dan urutan mer
operon dapat dieksplorasi lebih lanjut untuk aplikasi bioremediasi.
Spektrum mer merupakan spektrum luas mengandung gen yang mirip dengan
operon spektrum sempit. Selain gen yang sudah ada, gen tambahan seperti merE,
merG, dan merB hadir. Operon spektrum luas memberikan perlindungan terhadap
merkuri organik. Senyawa ini lebih beracun karena mereka dapat dengan mudah
memasuki sel tanpa molekul pengangkut. Merkuri organik (R-Hg) memasuki sel
dengan difusi pasif atau diangkut ke dalam oleh MerE atau MerG. MerE awalnya
terletak di transposon Tn21 dan dapat memediasi transportasi metil-merkuri
(CH3Hg +) dan merkuri anorganik. Resistensi fenilmerkuri diberikan oleh protein
MerG (∼20 kDa), yang merupakan produk dari gen 654-bp. Terletak antara merA
dan merB pada operon, ia melindungi sel dari fenilmerkuri dengan mencegahnya
memasuki sel. Molekul enzimatik lainnya dari mer operon adalah merB, yang
mengkode enzim lyase organmerkurial. Protein MerB mengkatalisis protonolisis
dari ikatan karbon-merkuri yang menghasilkan pembentukan merkuri ionik dan
mengurangi hidrokarbon. Merkuri ionik kemudian direduksi menjadi bentuk
unsur Hg0 oleh reduktase ion merkuri. Hg0, karena tekanan uapnya yang tinggi,
diuapkan keluar dari sel bakteri.
Bioremediasi merkuri oleh mikroba dimediasi oleh berbagai transformasi
enzimatik seperti reduksi Hg2+ menjadi Hg0, pemecahan senyawa organomerkuri,
metilasi Hg2+ dan oksidasi Hg0 menjadi Hg2+. Dalam sebuah studi oleh Dash dan
Das (2015), sebuah bakteri transgenik Bacillus cereus BW03 (pPW-05) dibangun
dengan mentransformasi sebuah operon plasmida dari bakteri yang ada di laut
yaitu Bacillus thuringiensis PW-05 yang diisolasi dari Teluk Benggala (Dash et
al. 2014 ) ke dalam bakteri laut yang resisten merkuri lainnya yaitu B.cereus BW-
03 dengan kemampuan biosorpsi merkuri. Ini dapat menghapus > 99% suplemen
merkuri secara in vitro dengan penguapan simultan (> 53%) dan biosorpsi
(∼40%). Banyak isolat bakteri yang menggabungkan gen yang tahan merkuri
diisolasi yang dapat menguap dan mereduksi Hg2+ menjadi Hg0 (De et al. 2008).

Pengurangan merkuri dan pemecahan senyawa organomercury dilakukan

oleh protein dari operon mer. Selain itu, potensi elektrokimia Hg2 + / Hg0 pada
pH 7 adalah +430 mV, dan ini menunjukkan bahwa sel-sel hidup mengurangi
Hg2+ menjadi bentuk unsur, yaitu nontoxictobacteria (bakteri nontoksik). Titik
leleh / titik didih air raksa rendah (−39/357 ° C); oleh karena itu, merkuri logam
meninggalkan sel dengan difusi pasif dan diuapkan ke udara atau mengendap
karena kelarutannya yang rendah dalam air menghilangkan racun Hg2+ (Wagner-
Dobler 2003). Produksi methymercury di lingkungan dikendalikan oleh
transformasi mikroba dan abiotik. Transformasi langsung meliputi metilasi Hg2+
dan degradasi MeHg. Pengurangan Hg2+ menjadi Hg0 dan oksidasi sikliknya
mempengaruhi pembentukan MeHg secara tidak langsung dengan mengendalikan
kadar Hg2+ substrat untuk metilasi (Barkay dan Wagner-Dobler 2005). Selain itu,
pembersihan besar-besaran air limbah yang mengandung merkuri oleh mikroba
tahan merkuri merupakan teknologi yang ramah lingkungan dan hemat biaya yang
dipraktikkan saat ini. Ini dibuktikan dengan pembangunan pabrik percontohan
untuk menghilangkan merkuri yang mengolah 100 m3 dari 50% air limbah yang
mengandung merkuri per hari (Wagner-Dobler 2003).
 Selain transformasi enzimatik, merkuri juga dapat bioremediasi dengan
menggunakan metallothioneins dan polifosfat dengan cara mengasingkan ion
merkuri dalam bentuk yang tidak aktif secara biologis. gen ppk mengkodekan
polifosfat kinase yang terlibat dalam biosintesis polifosfat. Polimer ortofosfat
bermuatan negatif ini mampu mengikat ion merkuri (Kornberg 1995). gen ppk
yang diekspresikan dalam banyak bakteri transgenik terbukti tahan dan
terakumulasi hingga 16μM merkuri dari larutan (Pan-Hou et al. 2002).
Pendekatan lain adalah pembentukan merkuri sulfida (HgS) dengan reaksi
langsung Hg2+ dengan H2S yang diproduksi secara anaerob oleh Clostridium
cochlearium (Pan-Hou dan Imura 1981). Pekerjaan serupa melaporkan bahwa
Klebsiella aerogenes NCTC418 menghasilkan HgS ketika tumbuh dalam kultur
aerobik kontinu dengan merkuri klorida. Merkuri juga secara biologis dihapus
oleh biofilm pereduksi merkuri yang memiliki reduktase merkuri alami dan
rekayasa (Brunke et al. 1993). Penggunaan bakteri untuk mengurangi sulfat juga
digunakan sebagai sumber H2S untuk endapan logam sebagai sulfida. Produk
dengan kelarutan tinggi dari HgS menjadikan penghilangan merkuri oleh H2S
(Hakansson et al. 2008).

DAFTAR RUJUKAN
Guo H, Luoa S, Chen L, Xiao X, Xi Q,WeiW, Zeng G, Liu C,Wan Y, Chen J, He
Y (2010) Bioremediation of heavy metals by growing hyperaccumulaor
endophytic bacterium Bacillus sp. L14. Bioresour Technol 101:8599–
8606.
Silver S, Phung LT (2013) Bacterial mercury resistance proteins. Encyclopedia of
Metalloproteins 209-217
Schneiker S, Keller M, Dröge M, Lanka E, Pühler A, Selbitschka W (2001) The
genetic organization and evolution of the broad host range mercury
resistance plasmid pSB102 isolated from a microbial population residing
in the rhizosphere of alfalfa. Nuc Acids Res 29: 5169–5181
DashHR, Das S (2012) Bioremediation of mercury and the importance of bacterial
mer genes. Int Biodet Biodeg 75:207–213
Eriksson PO, Sahlman L (1993) 1H NMR studies of the mercuric ion binding
protein MerP: sequential assignment, secondary structure and global fold
of oxidized MerP. J Biomol NMR 3:613–626
Hamlett NV, Landale EC, Davis BH, Summers AO (1992) Roles of the Tn21
merT, merP, and merC gene products in mercury resistance and mercury
binding. J Bacteriol 174(20):6377–6385
Wagner-Dobler I (2003) Pilot plant for bioremediation of mercurycontaining
industrial wastewater. Appl Microbiol Biotechnol. 62(2–3):124–133
Barkay T,Wagner-Dobler I (2005)Microbial transformations ofmercury:
potentials, challenges, and achievements in controlling mercury toxicity in
the environment. Adv Appl Microbiol 57(1):1–52