ABSTRAK

Pengembangan Metode Analisa Kadar Sampel Piperazine Phospat

menggunakan Spektrofotometer UV-vis

Piperazine, senyawa cincin beranggota enam heterosiklik yang mengandung dua

nitrogen pada posisi 1 dan 4, adalah anggota siklik dari kelompok molekul
etilenadiamin. Piperazin bekerja sebagai agonis GABA pada otot cacing. Cara
kerja piperazin pada otot cacing Ascaris Lumbricoides adalah dengan
mengganggu permeabilitas membran sel terhadap ion-ion yang berperan dalam
mempertahankan potensial istirahat, sehingga menyebabkan hiperpolarisasi dan
supresi impuls spontan disertai paralisis. Piperazin efektif terhadap Ascaris
Lumbricoides dan Eterobiasis Vermicularis (cacing kremi).
Tujuan dari penelitian ini adalah Mendapat metoda spektrofotometri yang valid
untuk pengujian sampel Piperazine Phospat.

Kata kunci: Piperazine, Spektrofotometri ,Piperazine Sitrat ,Piperazine Phospat

,Benzokuinon

1
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT Rabb semesta

alam berkat, rahmat, taufik dan hidayah-Nya, penyusunan skripsi yang berjudul

“Pengembangan Metoda Analisa Sampel Piperazin Phospat Menggunakan

Spektrofotometer UV-Vis” dapat diselesaikan dengan baik. Tak lupa pula shalawat

serta salam senantiasa tercurahlimpahkan kepada uswatun hasanah kita yakni

Habibballah Nabi Muhammad SAW. Keluarganya, sahabatnya serta kita selaku

pengikut ajarannya sampai yaumilakhir.

Penulis menyadari bahwa dalam proses penulisan skripsi ini banyak

mengalami kendala, namun berkat bantuan, bimbingan, kerjasama dari berbagai

pihak terutama berkah dan kemudahan dari Allah SWT sehingga kendala-kendala

yang dihadapi tersebut dapat diatasi. Penyusunan skripsi ini tidak akan

terselesaikan dengan baik tanpa adanya dukungan dari berbagai pihak yang telah

banyak membantu, untuk itu pada kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan

terima kasih dan penghargaan kepada:

1. Bapak Hernandi Sujono. S.Si, M.Si., selaku Dekan Fakultas Sains dan

Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani.

2
2. Bapak Yulison Herry C., S.T., M.T., selaku Wakil Dekan I Fakultas Sains

dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani.

3. Bapak Tacbir Hendro P., S.T., M.T., selaku Wakil Dekan II Fakultas Sains

dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani.

4. Bapak Senadi Budiman Drs., M.Sc., selaku Wakil Dekan III Fakultas

Sains dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani.

5. Ibu.Dr. Lilis Siti Aisyah S.Si., M. Si., selaku Ketua Jurusan Kimia,

Fakultas Fakultas Sains dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani.

6. Ibu selaku dosen wali yang selalu sabar dan memberikan motivasi kepada

penulis.
7. Ibu Dr. Trisna Yuliana,S.Si, M.Si., selaku dosen pembimbing I yang selalu

sabar dalam memberikan arahan dan motivasi kepada penulis.

8. Ibu Nia Nurhayati S.Si.,Apt., selaku dosen pembimbing lapangan di PT

Medion Farmajaya yang selalu sabar dalam memberikan arahan dan motivasi

kepada penulis.
9. Seluruh staf dosen, staf tata usaha, dan staf Laboratorium Jurusan Kimia,

Fakultas Sains dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani

10. Bapak dan Ibu tercinta (Apa Poniman dan mamah Ida) yang

menjadi motivasi dan selalu memberi dukungan baik dukungan berupa

materi, semangat, doa serta kasih sayang yang tiada ternilai, hingga penulis

mampu menyelesaikan perkuliahan dan penulisan skripsi

11.Saudara-saudara tercinta: A Ipan Rivadini dan Nisa Afifah yang selalu

menjadi alasan untuk berjuang serta memberikan do’a dan motivasi kepada

penulis
12. Sahabat–sahabat kelas Lina Anggaraeni dan Sylvia Angelin yang

selalu memberikan bantuan, semangat dan dukungannya kepada penulis.

3
 13. Team Laboratorium Kimia teh Dewi Morlina,Onop, Arin, bunda

Egi, Siwi, Devi, Vina, Elsa yang tak pernah lelah selalu memberikan

candaan, bantuan, semangat dan dukungannya kepada penulis.

14. Semua teman jurusan kimia angkatan 2015 yang merupakan teman

satu perjuangan .

15. Tak lupa kepada sahabat terkasih Singapore 202x : Tety, Ingeu,

Putri , juga sahabat soleha : Teh Ninda, Teh Yanti ,dan anak-anak IRM yang

tak pernah putus mendoakan, memotivasi ,dan membantu perjuangan ini .

16. Seluruh keluarga Mahasiswa Jurusan Kimia yang telah membantu

dan menemani penulis.

17. Dan kepada semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu

yang telah membantu dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini.

Akhirnya, dengan segala kerendahan hati penulis menyadari masih banyak

terdapat kekurangan-kekurangan, sehingga penulis mengharapkan adanya saran

dan kritikyang bersifat membangun demi kesempurnaan skripsi ini.

Cimahi, Januari 2020

Penulis,

4
 DAFTAR ISI

ABSTRAK.........................................................................................................i

ABSTRACT......................................................................................................ii

KATA PENGANTAR......................................................................................iii

DAFTAR ISI....................................................................................................vi

DAFTAR ISTILAH.......................................................................................viii

DAFTAR GAMBAR.......................................................................................ix

DAFTAR GRAFIK...........................................................................................x

DAFTAR TABEL............................................................................................xi

DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................xii

BAB I Pendahuluan..........................................................................................1

1.1. Latar Belakang.........................................................................................1

1.2. Identifikasi Masalah................................................................................3

1.3. Maksud dan Tujuan Penelitian..............................................................3

1.4. Kegunaan Penelitian..............................................................................4

1.5. Metodologi Penelitian............................................................................4

1.6. Lokasi dan Waktu Penelitian.................................................................4

BAB II Tinjauan Pustaka..................................................................................5

2.1 Piperazine................................................................................................5

2.1.1 Jenis-jenis Piperazine.........................................................................6

2.2 Benzokuinon............................................................................................7

2.3 Larutan Penyangga..................................................................................9

2.4 Spektrofotometri....................................................................................10
5
 2.4.1 Prinsip spektrofotometer UV-Vis.....................................................11

2.4.2 Kegunaan Spektrofotometer UV-Vis...............................................12

2.4.3 Bagian-Bagian Spektrofotometer UV-Vis.........................................13

2.5 Gravimetri..............................................................................................15

2.6 Validasi Metoda.....................................................................................17

2.7 Uji T.......................................................................................................20

BAB III Metode Penelitian.............................................................................26

3.1 Diagram Alir Penelitian.........................................................................26

3.1.1 Diagram alir kurva standar...............................................................26

3.1.2 Analisis Kadar Piperazine Phospat..................................................27

3.2 Peralatan dan Bahan Penelitian.............................................................29

3.2.1 Peralatan Penelitian..........................................................................29

3.2.2 Bahan Penelitian..............................................................................31

3.3 Prosedur Kerja dan Pengumpulan Data.................................................31

3.3.1 Prosedur Kerja..................................................................................31

3.3.2 Pengumpulan Data...........................................................................37

BAB IV Hasil Penelitian dan Pembahasan.....................................................38

4.1 Preparasi Pembuatan Pereaksi...............................................................38

4.2 Pembuatan Kurva Standar.....................................................................39

4.3 Analisis menggunakan Spektrofotometer UV-vis.................................42

4.4 Analisis menggunakan Gravimetri........................................................47

BAB V Kesimpulan dan Saran........................................................................51

DAFTAR PUSTAKA......................................................................................52

LAMPIRAN....................................................................................................58
6
7
 DAFTAR ISTILAH

No Istilah (*) Pengertian

1 GABA Gamma Aminonutryc Acid
2 KC Ketoconazole
3 TMH Trimetazidine hydrochloride
4 PD Piribedil
(*) atau lambang dan singkatan

8
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Sturktur Piperazine...............................................................................9

Gambar 2.2 Struktur Piperazine Sitrat...................................................................14

Gambar 2.3 Struktur Piperazine Phospat...............................................................15

Gambar 2.4 Struktur Benzokuinon........................................................................26

Gambar 3. 1 Diagram alir kurva standar.............Error: Reference source not found

Gambar 3. 2 Diagram Alir Penentuan Kadar Piperazine Phospat..........................27

Gambar 3. 3 Diagram Alir Gravimetri...................................................................27

Gambar 4. 1 Diagram alir kurva standar................................................................26

9
 DAFTAR GRAFIK

Grafik 4. 1 Perbandingan waktu reaksi optimum benzokuinon 4 mL dan 2 mL...44

Grafik 4. 2 Kurva standar ......................................................................................45

Grafik 4. 3 Reaksi .................................................................................................46

10
 DAFTAR TABEL

Tabel 4. 1 Ukuran Karbon Aktif Batu Bara...........................................................39

Tabel 4. 2 Hasil Karakterisasi Karbon Aktif..........................................................39

Tabel 4. 3 Hasil Serapan FTIR pada Karbon Aktif Batubara.................................48

Tabel 4. 4 Absorbansi ............................................................................................50

11
 DAFTAR LAMPIRAN

L.A. Data Percobaan........................................................................................................58

L.B. Perhitungan..............................................................................................................63

L.C. Dokumentasi Penelitian............................................................................................67

L.D. Tabel Koreksi ‘D’ untuk Bilangan Iodium...............................................................70

L.E. Prosedur Kerja Instrumen Ftir (Fourier Transform Infrared)..........................72

12
 1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Piperazine merupakan senyawa cincin beranggota enam heterosiklik yang

mengandung dua nitrogen pada posisi 1 dan 4. Piperazine ini adalah anggota

siklik dari kelompok molekul etilendiamin ( Doemling,2005).

Piperazine bekerja sebagai agonis GABA pada otot cacing. Cara kerja

piperazine adalah dengan mengganggu permeabilitas membrane sel terhadap ion-

ion yang berperan dalam memepertahankan potensial istirahat, sehingga

menyebabkan hiperpolarisasi dan supresi impuls spontan disertai paralisis.

Piperazin efektif terhadap Ascaris lumbriciodes dan Eterobiasis vermicularis

(cacing kermi) (Syarif dan Elisabeth, 2011).

Berbagai macam jenis piperazine memiliki metoda uji yang berbeda-beda.

Diantaranya, metode uji untuk sampel piperazine phospat menggunakan analisa

gravimetri (British Pharmacopedia, 2013).

Analisa gravimetri merupakan suatu metoda analisa kuantitatif

konvensioanal, pengukurannya berdasarkan berat. Senyawa yang ditentukan dari

suatu sampel dipisahkan dengan reagen tertentu sehingga senyawa tersebut

terpisah dengan membentuk endapan sedangkan senyawa yang tidak dicari berada
 2

dalam filtrat. Pemisahan dilakukan dengan proses penyaringan dan pencucian

endapan didapatkan semurni mungkin. Untuk dapat menentukan jumlah kadar

senyawa yang dicari dengan tepat, maka sampel harus dilakukan penimbangan

terlebih dahulu dan endapan yang terjadi juga ditimbang.Disamping kelebihan

metoda ini yaitu ketelitian yang cukup baik yaitu ±0,1%, metoda ini juga memiliki

beberapa kekurangan, banyaknya tahapan pekerjaan mengakibatkan kemungkinan

kesalahan pada setiap tahapannya sehingga tidak didapatkan hasil pengujian yang

diharapkan. Misalnya, pada proses pengendapan hasil endapan mengandung

pengotor dari reagen, endapan yang terjadi sulit untuk disaring. Selain itu,

melakukan pengujian gravimetri membutuhkan waktu yang cukup lama

(Rusvirman, 2016).

Banyaknya tahapan kerja pada metode gravimetri memiliki beberapa

kekurangan, diantaranya proses yang banyak sangat memunginkan terjadinya

ketidaktepatan dan kesalahan hasil uji,selain itu waktu yang dibutuhkan cukup

lama yakni sekitar 320 menit (Standar Internal PT. Medion, 2017).

Adapun metoda alternatif menggunakan spektrofotometri. Reaksi warna

dengan p-benzoquinon pertama kali dilaporkan oleh Foucy (1934) dan kemudian

berkembang menjadi metode kuantitatif berdasarkan pemanasan campuran reaksi.

Reaksi ini dengan p-benzoquinon tampaknya umum untuk amina, dan Benson dan

Spillane (1976) telah menjelaskan penggunaannya untuk penentuan berbagai

 3

amina (alifatik, primer dan sekunder, amina alisiklik dan heterosiklik), lagi-lagi

dengan melakukan reaksi pada suhu tinggi. Kondensasi dapat terjadi antara amina

dan p-benzoquinon pada posisi 2 atau posisi 2 dan 5,menyajikan metode langsung

yang lebih sederhana untuk penentuan piperazine melalui reaksi dengan p-

benzoquinone pada suhu kamar tanpa pemisahan basa bebas sebelumnya ( M.

Senthiraja,2006).

Selain itu,penelitian menggunakan metoda spektrofotometer sudah pernah

dilakukan terhadap turunan Piperazine yaitu pada KC, TMH , dan PD )* dengan

pereaksi FeCl3 sebagai pengompleks ( F.M. Abou-Attia ,dkk ,2003)

1.2. Identifikasi Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas maka, masalah-masalah yang dapat

diidentifikasi untuk penelitian ini yaitu :

a. Bagaimana reaksi antara sampel piperazine dengan p-

benzokuinon?
b. Berapa kondisi optimal (waktu reaksi piperazine dan p-

benzokuinon )?
c. Bagaimana hasil validasi metoda analisa sampel piperazine

menggunakan sepketrofotometer UV-vis ?

d. Bagaimana perbandingan metoda gravimetri dengan metoda

spektrofotometer UV-vis
 4

1.3. Maksud dan Tujuan Penelitian

Maksud penelitian ini adalah untuk mengetahui metoda alternatif

pengganti metoda gravimetri

Tujuan dari penelitian ini adalah :

a. Menentukan waktu optimal untuk metoda analisa sampel

piperazine phospat menggunaka spektrofotometer UV-vis

b. Mendapatkan metoda spetrofotometri yang valid untuk

pengujian kadar sampel piperazine phospat

c. Menghasilkam efesiensi waktu dan biaya pengujian

1.4. Kegunaan Penelitian

Penelitian ini dapat digunakan menganalisis kadar sampel piperazine

0phospat.. Hasil penelitian khususnya akan diaplikasikan pada industri farmasi PT

Medion Farmajaya dan umumnya sebagai pengetahuan dan ilmu.

1.5. Metodologi Penelitian

Penelitian ini didasarkan pada metode eksperimen sungguhan (true

experimental) di Laboratorium dengan beberapa tahapan kerja. Tahapan kerja

yang digunakan pada penelitian ini meliputi :

a. Karakterisasi sampel piperazine.

b. Preparasi pereaksi dan sampel
c. Pembuatan kurva standar
d. Analisis spektrofotometri
e. Analisis gravimetri
 5

1.6. Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan oktober sampai dengan

Januari 2020 yang bertempat di Laboratorium PT Medion Farmajaya yang

berlokasi di Jalan Raya Batujajar no.29 Cimareme, Bandung Barat, Jawa Barat.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Piperazine

Piperazine merupakan senyawa cincin beranggota enam heterosiklik yang

mengandung dua nitrogen pada posisi 1 dan 4, adalah anggota siklik dari

kelompok molekul etilenadiamin (Doemling,2005).

Piperazine bekerja sebagai agonis GABA pada otot cacing. Cara kerja

piperazine adalah dengan mengganggu permeabilitas membrane sel terhadap ion-

ion yang berperan dalam memepertahankan potensial istirahat, sehingga

menyebabkan hiperpolarisasi dan supresi impuls spontan disertai paralisis.

Piperazin efektif terhadap Ascaris lumbriciodes dan Eterobiasis vermicularis

(cacing kermi) (Syarif dan Elisabeth, 2011).

Piperazine bebas larut dalam air dan etilen glikol, tetapi tidak larut dalam

dietil eter. Ini adalah basis yang lemah dengan dua pKbs 5,35 dan 9,73 pada 25 °

C; pH larutan piperazine 10% adalah 10,8-11,8. Piperazine siap menyerap air dan

karbon dioksida dari udara. Meskipun banyak turunan piperazin terjadi secara

alami, piperazine itu sendiri dapat disintesis dengan mereaksikan amonia

beralkohol dengan 1,2-dikloroetana, melalui aksi natrium dan etilen glikol pada

etilen diamina hidroklorida, atau dengan mereduksi pirazin dengan natrium dalam

etanol.Suatu bentuk di mana piperazine umumnya tersedia secara industri adalah

1
sebagai heksahidrat, C4H10N2. 6H2O, yang meleleh pada suhu 44 ° C dan mendidih

pada suhu 125-130 ° C (Merck,1983).

(Struktur piperazine)

Gambar 2.1

Sumber : Wikipedia

2.1.1 Jenis Piperazine

2.1.1.1Piperazine sitrat
Piperazine sitrat yang merupakan bentuk stabil dari senyawa piperazine sehingga

sering digunakan sebagai standar primer untuk pengujian. Rumus molekul

3C4H10N2.2C6H8O7terdiri dari 3 molekul senyawa piperazine dan 2 molekul sitrat

dengan BM = 642,66142 g/mol dimana senyawa piperazine yang terkandung

dalam bentuk anhidrat memiliki BM = 258,4101 g/mol. Berdasarkan data

tersebut, maka dalam setiap 100 mg bentuk anhidrat Piperazine Sitrat terdapat

40,21 mg senyawa piperazine. Penetapan kadar menggunakan titrasi bebas

2
 air,dengan pereaksi asam peklorat 0,1 N (Farmakope Indonesia,1995).

Gambar 2.2
Sumber The International Pharmacopoeia - Sixth Edition, 2016
2.1.1.2 Piperazine Phospat
Piperazine phospat C4H10N2. H3PO4 dengan BM = 202,1 g/mol dimana

senyawa piperazine yang terkandung didalam A203 memiliki BM = 86,1367

g/mol. Berdasarkan data tersebut maka dalam setiap 100 mg A203 mengandung

42,72 mg senyawa piperazine. Pemerian serbuk hablur berwarna putih, tidak

berbau atau hamper tidak berbau. Larut dalam 60 bagian air, tidak larut dalam

etanol 96%. pH antara 6,0-6,5 . Penetapan kadar menggunakan gravimetri,

menggunakan pereaksi 2,4,6 trinitrofenol ( Farmakope Inonesia,1995).

Gambar 2.3
(sumber : www.lookchem.com)

3
 2.1 Benzkuionon

Kuinon adalah senyawa berwarna dan mempunyai kromofor dasar seperti

pada benzokuionon, yang terdiri atas dua gugus karbonil yang berkonjugasi

dengan dua ikatan rangkap karbon-karbon. Warna pigmen kuinon dialam

beragam, mulai dari kuning pucat sampai hamper hitam. Kuinon dibagi menjadi

empat kelompok, diantaranya adalah benzokuinon ,naftakuinon, antrakuinon dan

isoprenoid. Kelompok benzokuinon ,naftakuinon ,antrakuinon biasanya

terhidroksilasi dan bersifat senyawa fenol, mungkin bentuk glikosida atau bentuk

kuinol, kadang-kadang juga bentuk dimer (Harborne,1987).

Gambar 2.4

Sumber : Wikipedia

Sifat fisik dan kimia kuinon

Fisik : serbuk berwarna cokelat kekuningan

Bau : iritasi pedas

Titik didih : 293o C

4
Titik lebur : 115,7 o C

Kelarutan : larut dalam etanol

Benzokuinon memiliki kesamaan cincin benzene dengan kelompok C=O.

contoh benzokuionon adalah embelina,rapanona dan primina. Benzokuinon dapat

diperoleh dengan oksidasi dihidrobenzena dengan natrium klorat, dengan adanya

divanadium pentoksida sebagai katalis, dan asam sulfat sebagai pelarut

(Pubchem,2018)

2.5.1. Larutan Penyangga

Larutan penyangga adalah suatu larutan yang dapat menahan perubahan

pH yang besar ketika ion – ion hidrogen atau hidroksida ditambahkan, atau ketika

larutan tersebut diencerkan (Day dan Underwood, 1998). Umumnya larutan

penyangga mengandung campuran dari suatu asam dan garamnya atau suatu basa

dan garamnya. Maka kesetimbangan disosiasi dari suatu larutan penyangga yang

terdiri dari suatu asam dan garamnya adalah :

HA ↔ H+ + A–
Tetapan kesetimbangan dapat dinyatakan sebagai :
H +¿
¿
Ka = A−¿
¿
¿
¿
Kesetimbangan disosiasi dari suatu larutan penyangga yang terdiri dari suatu basa

dan garamnya adalah :

MOH ↔ H+ + OH–
Tetapan kesetimbangan dapat dinyatakan sebagai :
M +¿
¿
Kb = OH −¿
¿
¿
¿
(Vogel, 1985)

5
 Banyak proses kimia dan biologi yang sangat peka terhadap perubahan pH

dari larutan, dan memang sangat penting untuk menjaga pH sekonstan mungkin.

Oleh sebab itu, larutan penyangga mendapatkan perhatian yang besar dalam ilmu

pengetahuan kimia dan biologi (Day and Underwood, 1998).

2.2 Spektorfotometri UV-vis

Spektrofotometri UV-vis merupakan salah satu teknik analisis

spektroskopi yang memakai sumber elektromagnetik ultraviolet (190-380 nm) dan

sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai instrument spektrofotometer (Mulja

dan Suharman 1995).

Spektrofotometer merupakan alat yang digunakan untuk mengukur energi

secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan, dan diemisikan

sebagai fungsi dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu, dan fotometer

adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang di absorbsi

(Khopkar, 2008: 184).

Beberapa tahun lalu hubungan antara ketidakjenuhan dan absorpsi cahaya

ditemukan oleh kimiawan organik, dan istilah kromofor diperkenalkan untuk

memberikan peranan gugus-gugus demikian seperti C=C, C=O, dan N=N dalam

penggeseran absorpsi cahaya ke yang tampak. Kebanyakan penggunaan

spektrofotometri UV-VIS, pada senyawa organik berdasarkan transisi ℼ-ℼ* dan

karena itu memerlukan adanya gugus kromofor didalam molekulnya. Transisi ini

6
terjadi dalam daerah spektrum (kira-kira 200 hingga nm) dan cocok untuk

penggunaan percobaan (Day Underwood,1986).

Gugus fungsi seperti –OH, -NH2 dan –Cl yang mempunyai elektron-elektron

valensi bukan ikatan disebut auksokhrom yang tidak menyerap radiasi pada panjang

gelombang lebih besar dari 200 nm, tetapi menyerap kuat pada daerah ultraviolet

jauh. Bila suatu auksokhrom terikat pada suatu khromofor, maka pita serapan

khromofor bergeser ke panjang gelombang yang lebih panjang (efek batokhrom)

dengan intensitas yang lebih kuat. Efek hipsokhrom adalah suatu pergeseran pita

serapan ke panjang gelombang lebih pendek, yang sering kali terjadi bila muatan

positif dimasukkan ke dalam molekul dan bila pelarut berubah dari non polar ke

pelarut polar (Dachriyanus, 2004).

2.2.1 Prinsip Spektrofotometer UV-Vis

Bila suatu sinar monokromatis dilewatkan sampel maka sebagian dari

sinar tersebut terserap oleh sampel dan sebagian lagi akan diteruskan.

Perbandingan antara intensitas sinar setelah melalui sampel dan intensitas sinar

mula – mula disebut transmitan (T) dengan persamaan :

I
T=
Io
Dimana :
T = Transmitan
I = Intensitas sinar yang diteruskan
Io = Intensitas sinar awal

Hubungan antara absorban dengan trasmitan adalah

1
A=log
T
Fraksi sinar yang diabsorbsi sangat tergantung pada tiga faktor, yaitu

absorbtivitas, tebal kuvet, dan konsentrasi. Humum Lambert’s menyatakan bahwa

7
fraksi sinar yang diserap tidak tergantung kepada intensitas sumber sinar. Hukum

Beer’s menyatakan bahwa serapan tergantung jumlah molekul yang diserap.

Dari kedua hukum tersebut dapat disajikan kedalam persamaan :
A= ɛ b c
Dimana :
A = fraksi sinar yang diabsorbsi
ɛ = absorbtivitas molar
b = tebal kuvet
c = konsentrasi larutan
(Supratman, 2010)
2.3.2 Kegunaan Spekrofotometer UV-Vis

1. Menentukan jenis kromofor, ikatan rangkap yang terkonyugasi dan auksokrom

dari suatu senyawa organik

2. Menjelaskan informasi dari struktur berdasarkan panjang gelombang

maksimum suatu senyawa

3. Mampu menganalisis senyawa organik secara kuantitatif dengan menggunakan

hukum Lambert-Beer (Dachriyanus, 2004).

2.3.3 Bagian-bagian spektrofotometer

8
 Gambar 2.4

( sumber : wanibesak.files.wordpress.com)

1. Sumber-sumber lampu

Lampu deutrium digunakan untuk daerah UV pada panjang gelombang

dari 190-350 nm, sementara lampu halogen kuarsa atau lampu tungsten digunakan

untuk daerah visibel (pada panjang gelombang antara 350-900 nm).

2. Monokromator

Digunakan untuk memperoleh sumber sinar yang monokromatis. Alatnya

dapat berupa prisma ataupun grating. Untuk mengarahkan sinar monokromatis

yang diinginkan dari hasil penguraian.

a. Celah (Slit)

Celah monokromator adalah bagian yang pertama dan terakhir dari suatu

sistem optik monokromator pada spektrofotometer. Celah monokromator berperan

penting dalam hal terbentuknya radiasi monokromator dan resolusi panjang

gelombang.

9
 b. Filter Optik

Cahaya tampak yang merupakan radiasi elektromagnetik dengan panjang

gelombang 380-780 nm merupakan cahaya putih yang merupakan campuran

cahaya dengan berbagai macam panjang gelombang. Filter optik berfungsi untuk

menyerap warna komplomenter sehingga cahaya tampak yang diteruskan

merupakan cahaya yang berwarna sesuai dengan warna filter optik yang dipakai.

c. Prisma dan kisi (grating)

Prisma dan kisi merupakan bagian monokromator yang terpenting. Prisma

dan kisi pada prinsipnya mendispersi radiasi elektromagnetik sebesar mungkin

supaya didapatkan revolusi yang baik dari radiasi polikromatis.

3. Kuvet

Pada pengukuran didaerah tampak, kuvet kaca atau kuvet kaca corex dapat

digunakan, tetapi untuk pengukuran pada daerah UV kita harus menggunakan sel

kuarsa karena gelas tidak tembus cahaya pada daerah ini. Umumnya tebal kuvet

adalah 10 mm, tetapi yang lebih kecil ataupun yang lebih besar dapat digunakan.

Sel yang biasa digunakan berbentuk persegi, tetapi bentuk silinder dapat juga

digunakan. Kuvet yang bertutup digunakan untuk pelarut organik. Sel yang baik

adalah kuarsa atau gelas hasil leburan yang homogen.

4. Detektor

10
 Detektor merupakan salah satu bagian dari spektrofotometer yang penting

oleh sebab itu detektr akan menemukan kualitas dari spektrofotometer adalah

mengubah signal elektronik. Peranan detektor penerima adalah memberikan

respon terhadap cahaya pada berbagai panjang gelombang.

5. Suatu amplifier (penguat) dan rangkaian yang berkaitan yang membuat isyarat

listrik dapat untuk diamati.

6. Sistem pembacaan yang memperlihatkan besarnya isyarat listrik

(Khopkar, 1990; Rohman, 2007; Day and Underwood, 1981)

2.4 Gravimetri

Analisis gravimetri adalah proses isolasi dan pengukuran berat suatu unsur

atau senyawa tertentu. Bagian terbesar dari penentuan secara analisis gravimetri

meliputi transformasi unsur atau radikal ke senyawa murni stabil yang dapat

segera diubah menjadi bentuk yang dapat ditimbang dengan teliti. Berat unsur

dihitung berdasarkan rumus senyawa dan berat atom unsur-unsur yang

menyusunnya. Pemisahan unsur-unsur atau senyawa yang dikandung dilakukan

dengan beberapa cara, seperti : metode pengendapan, metode penguapan, dan

metode elektroanalisis (Khopkar, 1990).

Suatu metode gravimetri untuk analisis umumnya berdasarkan reaksi :
aA + rR AaRr (2.10)
Keterangan a merupakan molekul analit A, direaksikan dengan r molekul

analit R, sehingga diperoleh produk AaRr berupa zat yang mengendap. Endapan

ini dapat ditimbang setelah pengeringan atau dipanaskan menjadi senyawa lain

kemudian ditimbang.
11
 Pengendapan mulai terjadi apabila tetapan hasil kali kelarutan suatu

senyawa dilampaui, diawali dengan pembentukan sejumlah partikel kecil yang

disebut inti. Inti-inti ini ukurannya akan meningkat sampai cukup besar untuk

mengendap. Bertambahnya ukuran partikel endapan dipengaruhi oleh dua proses,

yaitu pembentukan inti (nukleasi), dan proses pertumbuhan inti. Setelah endapan

terbentuk, endapan harus dibiarkan bersentuhan dengan larutan induk selama

beberapa saat sebelum penyaringan. Proses ini berfungsi untuk meningkatkan

ukuran partikel kristalin ( Day dan Underwood, 2002).

Analisa gravimetri merupakan sutau metoda analisa kuantitatif

konvensioanal, pengukurannya berdasarkan berat. Senyawa yang ditentukan dari

suatu sampel dipisahkan dengan reagen tertentu sehingga senyawa tersebut

terpisah dengan membentuk endapan sedangkan senyawa yang tidak dicari berada

dalam filtrat. Pemisahan dilakukan dengan proses penyaringan dan pencucian

endapan didapatkan semurni mungkin. Untuk dapat menentukan jumlah kadar

senyawa yang dicari dengan tepat, maka sampel harus dilakukan penimbangan

terlebih dahulu dan endapan yang terjadi juga ditimbang. Disamping kelebihan

metoda ini yaitu ketelitian yang cukup baik yaitu ±0,1%, metoda ini juga memiliki

beberapa kekurangan, banyaknya tahapan pekerjaan mengakibatkan kemungkinan

kesalahan pada setiap tahapannya sehingga tidak didapatkan hasil pengujian yang

diharapkan. Misalnya, pada proses pengendapan hasil endapan mengandung

pengotor dari reagen, endapan yang terjadi sulit untuk disaring. Selain itu,

melakukan pengujian gravimetri membutuhkan waktu yang cukup lama.

(Rusvirman,2016)

12
 2.5 Validasi Metoda
Validasi metode menurut united states pharmacopeia (USP) dilakukan

untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik, reprodusibel, dan tahan

pada kisaran analit yang akan dianalisis (Rohman, 2007: 463)

Suatu metode analisis harus divalidasi untuk melakukan verifikasi bahwa

parameter-parameter kinerja cukup mampu untukmengatasi problem analisis,

karenanya suatu metode harus divalidasi ketika:

a. Metode baru dikembangkan untuk mengatasi problem analisis tertentu
b. Metode yang sudah baku direvisi untuk menyesuaikan perkembangan atau

karena munculnya suatu problem yang mengarahkan bahwa metode baku tersebut

harus direvisi
c. Penjaminan mutu yang mengindikasikan bahwa metode baku telah berubah

seiring dengan berjalannya waktu

d. Metode baku digunakan dilaboratorium yang berbeda atau dikerjakan dengan

alat yang berbeda

e. Untuk mendemonstrasikan kesetaraan antar 2 metode, seperti antara metode

baru dan metode baku.

2.5.1. Linieritas
Linieritas merupakan kemammpuan suatu metode untuk memperoleh

hasil-hasil uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada

kisaran yang diberikan. Linieritas suatu metode merupakan ukuran seberapa baik

kurva kalibrasi yang menghubungkan antara respon (Y) dengan konsentrasi (X).

Linieritas dapat diukur dengan melakukan pengukuran tunggal pada konsentrasi

yang berbeda-beda. Data yang diperoleh selanjutnya diproses dengan metode

kuadrat terkecil, untuk selanjutnya dapat ditentukan nilai kemiringan (Slope),

intersep, dan koefisien korelasinya. (Rohman, 2007: 469)

2.5.2 Ketepatan (Akurasi)

13
 Akurasi merupakan ketelitian metode analisis atau kedekatan antara nilai

terukur dengan niai yang diterima baik nilai konvensi, nilai sebenarnya atau nilai

rujukan. Akurasi diukur sebagai banyaknya analit yang diperoleh kembali pada

suatu pengukuran dengan melakukan spiking pada suatu sampel. Untuk pengujian

senyawa obat, akurasi diperoleh dengan membandingkan hasil pengukuran

dengan bahan rujukan standar (Standar reference material, SRM) (Harmita, 2004:

247)

2.5.3. Presisi

Presisi merupakan ukuran keterulangan metode analisis dan biasanya

diekspresikan sebagai simpangan baku relatif dari sejumlah sampel yang berbeda

signifikan secara statistik. Sesuai dengan ICH, presisi harus dilakukan pada 3

tingkatan yang berbeda yaitu: keterulangan (Repeatibilty), presisi antara

(Intermediate Precision) dan ketertiruan (Reproducibility)

a. Keterulangan yaitu ketepatan (precision) pada kondisi percobaan yang sama

(berulang) baik orangnya, peralatannya, tempatnya, maupun waktunya.

b. Presisi antara yaitu ketepatan (precision) pada kondisi percobaan yang berbeda,

baik orangnya, peralatannya, tempatnya maupun waktunya.

c. Ketertiruan merujuk pada hasil-hasil dari labortorium yang lain.

d. Dokumentasi presisi seharusnya mencakup: simpangan baku, simpangan baku

relatif (RSD), atau koefisien variasi (CV), dan kisaran kepercayaan.

Pengujian presisi pada saat awal validasi metode seringkali hanya

menggunakan 2 parameter yaitu: keterulangan dan presisi antara. Reprodusibilitas

14
biasanya dilakukan ketika akan melakukan uji banding antar laboratorium

(Rohman, 2007: 465)

2.5.4. Batas Deteksi (Limit Of Detection, LOD)

Batas deteksi didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam

sampel yang masih dapat dideteksi, meskipun tidak selalu dapat dikuantifikasi.

LOD merupakan batas uji yang secara spesifik menyatakan apakah analit di atas

atau dibawah nilai tertentu. Definifi batas deteksi yang paling umum digunakan

dalam kimia`analisis adalah bahwa batas deteksi merupakan kadar analit yang

memberikan respon sebesar respon blanko (yb) ditambah dengan 3 simpangan

baku blanko (3Sb) (Rohman, 2007: 467).

Limit Of Detection seringkali diekspresikan sebagai suatu konsentrasi pada

rasionya 2 atau 3 dibanding 1. ICH mengenalkan suatu konvensi metode signal to

noise ratio ini, meskipun demikian ICH juga menggunakan 2 metode pilihan lain

untuk menentukan LOD yakni: Metode non instrumental visual dan dengan

metode perhitungan. Metode non instrumental visual digunakan pada teknik

kromatografi lapis tipis dan pada metode titrimetri. LOD juga dapat dihitung

berdasarkan pada standar deviasi (SD) respondan kemiringan (Slope,S) kurva

baku pada level yang mendekati LOD sesuai dengna rumus, LOD = 3,3 (SD/S).

Standar deviasi respon dapatt ditentukan berdasarkn pada standar deviasi blanko,

pada standar deviasi residual dari garis regresi atau standar deviasi intersep y pada

garis regresi (Harmita, 2004: 269).

2.5.5. Batas kuantifikasi (Limit of quantification, LOQ)

15
 Batas kuantifikasi didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam

sampel yang dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada

kondisi operasional metode yang digunakan. Sebagaimana LOD, LOQ juga

diekspresikan sebagai konsentrasi (dengan akurasi dan presisi juga dilaporkan).

2.6 Uji T Data Hasil Analisis Metoda Spektrofotometri UV-

Vis dan Gravimetri

Uji T digunakan untuk membandingkan dua rata-rata. Adapun langkah-

langkahnya adalah :
2.6.3.1 Membuat Hipotesis
Uji T terdiri dari dua hipotesis, yaitu hipotesis nol (H 0) yang menyatakan

tidak ada perbedaan nyata diantara rata-rata kadar yang dihasilkan oleh kedua

metode yang dihasilkan oleh kedua metode dan hipotesis tandingan (H 1) yang

menyatakan terdapat perbedaan yang nyata antara rata-rata kedua metode.

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Diagram Alir Penelitian

3.1.1 Pembuatan Kurva Standar

-ukur kadar air anhidrat piperazine sitrat dengan karl fisher

-timbang setara 100 mg bentuk anhidrat standar (mengandung

40,21 mg piperazine)

- masukkan dalam labu ukur 100 mL, add aquadest sampai tanda
batas dan homogenkan (Larutan A)

- pipet 5 mL larutan A masukkan ke dalam labu ukur 25 ml

16
 + aquadest sampai tanda batas dan homogenkan (Larutan B)

- dipipet berturut-turut 1, 2, 3, 4, 5 mL larutan B dan masukkan

masing-masing ke dalam labu ukur 20 mL

+ 4 mL larutan buffer pH 5,4 ke dalam masing masing labu

+ 4 mL larutan benzkuionon

+ tambahkan aquadest sampai tanda batas dan dihomogenkan

(Kelima larutan ini berturut-turut konsentrasi = 4,021 ; 8,042 ;
12,063 ; 16,084 ; 20,105 µg/ml)

- didiamkan larutan selama 40 menit, kemudian baca absorbansi

pada panjang gelombang 516 nm

- Buat kurva linieritasnya

Gambar 3. 1 Diagram Alir Penentuan Kurva Standar

3.1.2 Analisa Sampel Piperazine Phospat

- Ukur kadar air sampel Piperazin Phospat

-Timbang 100 mg sampel Piperazin Phospat bentuk anhidrat

(setara 46,78 mg piperazine)

- Masukkan dalam labu ukur 100 ml, add aquadest

sampai tanda batas dan homogenkan (Larutan A)

- Pipet 4 ml larutan A masukkan ke dalam labu ukur 25 mL

- Add aquadest sampai tanda batas dan homogenkan (Larutan B)

- Pipet 2 mL larutan B dan masukkan ke dalam labu ukur 20 mL

17
 + 4 mL larutan buffer pH 5,4 ke dalam masing-masing labu

+ 4 mL larutan fenol 5% ke dalam masing-masing labu

+ aquadest sampai tanda batas dan homogenkan

- Diamkan larutan selama 30 menit, kemudian baca absorbansi

pada panjang gelombang 516 nm terhadap standar piperazin

sitrat( Lakukan pengujian sebanyak 6 kali pengulangan )

Gambar 3. 1 Diagram Alir Penentuan Kadar sampel Piperazine Phospat

3.2 Peralatan dan Bahan Penelitian

3.2.1 Peralatan Penelitian

1. Spektrofotometer UV-vis shimadzu

2. Neraca analitik
3. Labu ukur 100 mL , 25 mL, 20 mL
4. Pipet volume 1,2,3,4,5 mL
5. Oven
6. Desikator
7. Gelas kimia 250 mL
8. Spatula
9. Penjepit krus
10. Corong gelas
11. Kertas saring

3.2.2 Bahan Penelitian

2.6.3.2 Piperazine sitrat

2.6.3.3 Piperazine Phospat
2.6.3.4 P-benzokuinon
2.6.3.5 Etanol 95%
2.6.3.6 Kalium Hidrogen Phtalate
2.6.3.7 NaOH
2.6.3.8 Aquadest
2.6.3.9 Asam pikrat (2,4,6 trinitrofenol)
2.6.3.10 H2SO4 0,5 M

18
 2.6.3.11 Aquades

3.3 Prosedur Kerja dan Pengumpulan Data

3.3.1 Prosedur Kerja

1. Pembuatan Larutan Benzokuinon 1%

1) Ditimbang 1 gram p-benzokuinon
2) Dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL
3) Ditambahkan etanol 95% sampai tanda batas

2. Pembuatan Buffer 5,4

a. Pembuatan Larutan kalium Hidrogen Phtalate 0,1 M
1) Ditimbang 2,0422 gram kalium hydrogen phthalate
2) Dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL
3) Ditambahkan akuades sampai tanda batas
4) Dihomogenkan
b. Pembuatan Larutan NaOH 0,1 M
1) Ditimbang 0 ,4 gram NaOH
2) Dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL
3) Ditambahkan akuades sampai tanda batas
4) Dihomogenkan
c. Pembuatan Larutan Buffer 5,4
1) Dipindahkan 100 mL larutan kalium hidrogen

phtalate ke dalam gelas kimia 250 mL

2) Dimasukkan 68 Ml larutan NaOH
3) Diukur pH

3. Pembuatan Kurva Standar

1) Diukur kadar air standar piperazine sitrat
2) Ditimbang setara 100 mg bentuk anhidrat standar

(mengandung 40,21 mg piperazine)

3) Dimasukkan dalam labu ukur 100 mL, add aquadest sampai

tanda batas dan homogenkan (Larutan A)

4) Dipipet 5 mL larutan A masukkan ke dalam labu ukur 25

mL
5) Ditambahkan akuadest sampai tanda batas dan

homogenkan(Larutan B)

19
 6) Dipipet berturut-turut 1, 2, 3, 4, 5 mL larutan B dan

dimasukkan masing-masing ke dalam labu ukur 20 mL

7) Ditambahkan 4 mL larutan buffer pH 5,4 ke dalam masing-

masing labu
8) Ditambahkan 4 mL larutan p-benzoquinon prepare ke

dalam masing-masing labu

9) Ditambahkan akuadest sampai tanda batas dan homogenkan

(Kelima larutan ini berturut-turut konsentrasi = 4,021 ; 8,042 ;

12,063 ; 16,084 ; 20,105 µg/ml)

10) Didiamkan larutan selama 40 menit, kemudian baca

absorbansi pada panjang gelombang 516 nm(Gunakan blangko : 4

mL larutan buffer pH 5,4 + 4 mL larutan p-benzoquinon 1%

dalam labu ukur 20 ml, add aquadest dan homogenkan)

11) Dibuat kurva linieritas
4. Analisa Kadar Piperazine Phospat Menggunakan

Spektrofotometer UV-vis
1) Diukur kadar air standar piperazine Phospat
2) Ditimbang 100 mg sampel Piperazin Phospat bentuk

anhidrat (setara 46,78 mg piperazine)

3) Dimasukkan dalam labu ukur 100 ml
4) Ditambahkan akuades sampai tanda batas,homogenkan

(Larutan A)
5) Dipipet 4 ml larutan A masukkan ke dalam labu ukur 25

mL
6) Ditambahkan aquadest sampai tanda

batas,homogenkan(Larutan B)
7) Dipipet 2 mL larutan B dan masukkan ke dalam labu ukur

20 mL
8) Ditambahkan 4 mL larutan buffer pH 5,4 ke dalam

masing- masing labu

20
 9) Ditambahkan 4 mL larutan p-benzoquinon 1% ke dalam

masing-masing labu
10) Ditambahkan Akuadest sampai tanda batas dan

homogenkan
11) Didiamkan larutan selama 40 menit, kemudian baca

absorbansi pada panjang gelombang 516 nm terhadap standar

piperazin sitrat (Lakukan pengujian sebanyak 6 kali pengulangan

BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Preparasi Pembuatan Pereaksi

Pereaksi yang digunakan adalah p-benzokuinon , benzokuinon merupakan

senyawa berwarna dan mempunyai kromofor dasar, yang terdiri atas dua gugus

karbonil yang berkonjugasi dengan dua ikatan rangkap karbon-karbon.

Benzokuinon merupakan serbuk berwarna cokelat kehitaman , yang dilarutan

dengan ethanol 95% , membentuk larutan berwarna cokelat kehitaman. Larutan

ini merupakan larutan p-benzokuionon 1%. Dimana 1 gram serbuk p-benzokuinon

dilarutkan dalam 100 mL ethanol. Buffer yang digunakan untuk mereaksikan

piperazine adalah buffer 5,4 yang dibuat dengan menggabungkan larutan Kalium

Hidrogen Phtalate 100mL kedalam larutan NaOH 68 mL, yang di ukur pH nya

21
menggunakan pH metter . Buffer ini berfungsi mempertahankan pH agar tidak

banyak berubah selama reaksi berlangsung.

4.2 Penentuan benzokuinon dan waktu reaksi

Syarat suatu senyawa dpat diukur serapannya dengan alat

spektrofotometri UV- Vis adalah senyawa tersebut memiliki gugus kromofor dan

ausokrom sehingga dapat diukur serapannya pada daerah ultraviolet dan visible,

yakni 200-800nm. Hampir semua gugus kromofor memiliki ikatan rangkap seperti

C=C , C=O ,NO2 ,cincin benzene dan lain-lain.

Oleh karena itu pada penetepan kadar Piperazine Phospat menggunakan

spektrofotometri ini dilakukan derivatisasi. Derivatisasi bertujuan untuk

mengubah sampel, menjadi berwarna dan dapat terbaca serapannya oleh alat

spektrofotometri UV-Vis. Penambahan benzokuionon berikatan dengan gugus

aukshokrom atau gugus jenuh dengan elektron tidak terikat, dimana apabila gugus

ini menempel pada gugus kromofor ,dapat merubah baik panjang gelombang

maupun intensitas dari serapan, hal ini terjadi pada gugus NH 2 yang terdapat pada

sampel piperazine. Panjang gelombang yang digunakan pada penelitian ini adalah

516 sesuai dengan penelitian yang dilakukan M. Shentiraja ,2006.

Pada penelitian yang dilakukan M. Senthiraja,2006 banyaknya

benzokuinon yang dibutuhkan untuk mereaksikan benzokuinon dan piperazine

adalah sebanyak 2 mL ,dengan waktu tunggu 30 menit, dan tetap stabil selama 2

jam. Setelah dilakukan percobaan ulang, didapat hasil rata-rata absorban yang

diserap terlalu kecil ,yakni 0,193 . Hal ini tidak sesuai dengan kaidah yakni syarat

22
hubungan antara absorbansi terhadap konsentrasi ankan linear apabila nilai

absorbansi larutan antara 0,2-0,8 atau sering disebut sebagai daerah berlaku

hokum Lambert-beer. Selanjutnya, dilakukan pernelitian guna mendapatkan

kondisi optimum banyaknya benzokuinon dan waktu yang dibutuhkan untuk

meraksikan piperazine. Didapat hasil dari perbandingan absorban antara

menggunakan 2 mL benzokuinon dan 4 mL benzokuinon. Absorban yang didapat

dengan benzokuinon memenuhi syarat dengan absorban rata-rata 0,472.

Selanjutnya, waktu optimum yang dibutuhkan untuk mereaksikan benzokuinon

didapat dengan mengukur kestabilan penyerapan absorbansi selama 70 menit,

yang diukur setiap 10 menit sebanyak 6 titik sebagaimana dalam tabel 4.2 . Pada

menit ke 40 dan 50 mulai didapat kondisi stabil, dimana absorban mulai

mengalami penurunan sebagaimana dalam grafik 4.5 dan 4.6. Maka dilakukan uji

T untuk membandingkan waktu yang tepat , didapatkan hasil tidak berbeda nyata

dimana Thitung < Ttabel . yakni 0,28< 0,81.

4.3 Pembuatan kurva standar

Pembuatan Kurva Standar digunakan untuk menentukan konsentrasi suatu

zat dalam suatu sampel yang diketahui dengan membandingkan yang tidak

diketahui kedalam sampel standar yang telah diketahui. Dari kurva standar ini

didapat linearitas, linieritas suatu metode merupakan ukuran seberapa baik kurva

kalibrasi yang menghubungkan antara respon (Y) dengan konsentrasi (X).

Linieritas dapat diukur dengan melakukan pengukuran tunggal pada konsentrasi

yang berbeda-beda. Data yang diperoleh selanjutnya diproses dengan metode

kuadrat terkecil, untuk selanjutnya dapat ditentukan nilai kemiringan (Slope),

23
intersep, dan koefisien korelasinya. Konsentrasi yang dibuat berturut-turut adalah

4,021 ; 8,042 ; 12,063 ; 16,084 ; 20,105 µg/mL . Dari grafik linearitas yang

didapat (terdapat pada lampiran grafik 4.7 ), konsentrasi akan berbanding lurus

dengan absorbansi yang didapat. Semakin tinggi konsentrasi, absorban yang

didapat akan semakin tinggi pula. Dari penelitian yang telah dilakukan , didapat

y=0,885x+0,0261 dengan R² = 0,9997, hasil ini memenuhi syarat dimana

R2≥0,990. Sedangkan konsentrasi pembanding yang didgunakan untuk

membandingkan dengan sampel adalah pada konsentrasi 8,042 karena memenuhi

hukum Beer yakni pada absorban 0,2-0,8.

4.4 Penetapan Kadar Piperazine dalam Piperazine Phospat

Hasil pembacaan sampel piperazine phospat , didapat dengan mereaksikan

2 mL larutan sampel yang telah diencerkan kedalam 100 mL kemudian, dipipet 4

mL kedalam labu ukur 25 mL ,kemudian direaksikan dengan 4 mL benzokuinon

selama 40menit, dilakukan replikasi sebanyak enam kali. Sehingga absorban yang

terbaca 0,720 ; 0,709 ; 0,708 ; 0,736 ; 0,706 ; 0710 dengan masing masing

konsentrasi 7,8407 ; 7,7164 ; 7,7051 ; 8,0215 ; 7,6825 ; 7,7227 µg/mL.

konsentrasi yang didapat, sesuai dengan perhitungan pada lampiran 4.

Kadar rata-rata yang didapat adalah 114,10% , dimana hasil tidak sesuai
dengan syarat dari British Pharmacopeia yakni 98,5-101 %.

4.5 Hasil Validasi Metode

4.5.1 Presisi

24
 Presisi merupakan kedekatan antara hasil pengujian individu dalam

serangkaian pengukuran terhadap suatu contoh homogen yang dilakukan

pengambilan contoh secara berganda menurut prosedur yang telah ditetapkan.

Dari data yang didapat pada penelitian ini ,didapat rata-rata kadar piperazine

114,10 %. Hasil pengujian presisi menunjukkan nilai RSD (Relative Standar

Deviation atau simpangan baku relative) adalah 1,02 %. Nilai RSD ini memenuhi

persyaratan pada analit dengan konsentrasi 100%, yaitu < 2%. Hal ini

menunjukkan bahwa metode spektrofotometri memeliki keterulangan yang masih

dapat diterima dengan baik.

4.5.2 Akurasi (ketepatan)

Pada parameter validasi selanjutnya yaitu akurasi yang dinyatakan sebagai

persen perolehan kembali atau (% recovery) analit yang ditambahkan. Harmita

2004, menjelaskan bahwa ketepatan pada dasarnya adalah ukuran yang

menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang

sebenarnya. Pada penelitian ini , didapat rata-rata % recovery yaitu 114,10%.

Dimana hal ini tidak memenuhi, syarat standar yakni 98,5 – 101 %. Hasil

penelitian ini, menyatakan ketidakakuratan dalam pengujian, dimana hal ini biasa

terjadi karena %kadar air dari garam pperazine yang tidak stabil, atau pengaruh

25
dari alat uji karl Fisher yang tidak akurat, sifat garam yang mudah menyerap air

juga turut mempengaruhi hasil perolehan kadar piperazin dalam piperazine

phospat ini.

4.5.5 LOD dan LOQ

Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah dalam contoh yang dapat

dideteksi, akan tetapi tidak perlu ditentukan secara kuantitatif hingga didapatkan

nilai yang persis. Sedangkan batas kuantitas adalah konsentrasi terendah dalam

contoh yang dapat diukur secara kuantitatif dengan akurasi dan presisi yang dapat

diterima. Penentuan batas deteksi dan batas kuantitas untuk metode

spektrofotometri UV berdasarkan simpangan respon dan kemiringan (slope) kurva

kalibrasi.

Dari penelitian ini didapat hasil batas deteksi konsemtrasi terendah yang

didapat adalah 0,0290 µg/mL. Dan batas deteksi kuantifikasi terendah yang

didapat adalah 0,0967 µg/mL.

26
 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

1.1 Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa :
1. Reaksi optimal antara sampel dan pereaksi adalah ketika

ditambahkan peraksi 4 ml dengan waktu tunggu 40 menit.

2. Linearitas yang didapat adalah y = 0,0885x + 0,0261 dengan

koefisien korelasi R2= 0.9997 dimana memenuhi syarat yakni 0.990

3. Akurasi yang didapat adalah 114,10 % , dimana tidak memenuhi

syarat dari BP
4. Presisi yang didapat adalah 1,66% dimana sesuai dengan syarat

yakni <2%
5. LOD yang didapat adalah 0.2628 µ g/mL dan LOQ 0,875 µ

g/mL
1.2 Saran
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disarankan agar

dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengoptimasi jenis sampel golongan

piperazine lainnya seperti dalam garam piperazine adiphate, atau dalam produk

yang menggandung piperazine.

27
 Diperlukan adanya pemeriksaan ulang terhadap kadar air dalam standar

maupun dalam sampel. Ketidakstabilan kadar air akan mempengaruhi penimbangan

standar maupun sampel.

LAMPIRAN A
DAFTAR TABEL

Waktu 10 20 30 40 50 60 70
abs1 0,135 0,154 0,192 0,217 0,241 0,260 0,273
abs2 0,140 0,161 0,193 0,217 0,242 0,261 0,274
abs3 0,140 0,162 0,193 0,218 0,244 0,261 0,274
abs4 0,142 0,162 0,193 0,218 0,242 0,262 0,274
abs5 0,143 0,162 0,194 0,219 0,243 0,262 0,274
abs6 0,143 0,163 0,194 0,219 0,243 0,262 0,275
abs rata
rata 0,141 0,161 0,193 0,218 0,242 0,261 0,274
Tabel 4. 1. absorbansi sampel dengan benzokuinon 2 mL

Waktu 10 20 30 40 50 60 70
abs1 0,432 0,454 0,471 0,489 0,497 0,512 0,510
abs2 0,434 0,456 0,471 0,489 0,497 0,506 0,508
abs3 0,435 0,456 0,471 0,499 0,497 0,503 0,507
abs4 0,436 0,457 0,472 0,490 0,497 0,502 0,506
abs5 0,436 0,457 0,472 0,490 0,497 0,502 0,506
abs6 0,437 0,458 0,473 0,490 0,497 0,503 0,506
abs rata
rata 0,435 0,457 0,472 0,491 0,497 0,505 0,507
Tabel 4.2. absorbansi sampel dengan benzokuinon 4 mL

Waktu 10 20 30 40 50 60 70
abs rata
0,141 0,161 0,193 0,218 0,242 0,261 0,274
rata 2 mL
abs rata
0,435 0,457 0,472 0,491 0,497 0,505 0,507
rata 4 Ml
Tabel 3. Perbandingan absorbansi rata-rata sampel 2 mL dan 4mL

No item pH
1 Piperazine Sitrat 5,55
Piperazine
2 Phospat 6,08
3 Benzokuinon 2,71

28
 4 Buffer 5,45
Tabel 4. pH larutan

LAMPIRAN B

DAFTAR GRAFIK

Grafik 4.1. Perbandingan absorbansi sampel dengan benzokuion 2mL dan 4 mL

29
Grafik 2. Absorbansi sampel pada waktu 10 menit untuk menentukan waktu optimum

Grafik 3. Absorbansi sampel pada waktu 20 menit untuk menentukan waktu optimum

30
Grafik 4. Absorbansi sampel pada waktu 30 menit untuk menentukan waktu optimum

Grafik 5. Absorbansi sampel pada waktu 40 menit untuk menentukan waktu optimum

31
Grafik 6. Absorbansi sampel pada waktu 50 menit untuk menentukan waktu optimum

Grafik 7. Absorbansi sampel pada waktu 60 menit untuk menentukan waktu optimum

32
Grafik 8. Absorbansi sampel pada waktu 70 menit untuk menentukan waktu optimum

Grafik 4.9 kurva standar

33
 LAMPIRAN C

DOKUMENTASI PENELITIAN

1. Lampiran gambar

Gambar L.1 benzokuinon Gambar L.2 Ethanol

34
 Gambar L.3 Piperazine Phospat Gambar L.4 Piperazine sitrat

Gambar L.5 penyaringan Gambar L.6 pemanasan

gravimetri gravimetri

Gambar L.7 larutan trinitrofenol Gambar L.8sampel piperazine

(asam pikrat) phospat

Gambar L10 timbangan analitik

Gambar L.9 water bath

35
36
 1

LAMPIRAN D

PERHITUNGAN
Lampiran 1. Perhitungan Konsentrasi Piperazine Sitrat dan Piperazine

Phospat
Rumus Molekul Piperazine Sitrat(standar) = 3C4H10N2.2C6H8O7
Berat Molekul = 642,66142 g/mol
Rumus Molekul Piperazine = 3C 4H10N2
Berat molekul = 258,4101 g/mol
Berat Piperazine = 40,21 mg (1)
Rumus Molekul Piperazine Phospat = C4H10N2. H3PO4
Berat Molekul = 202,1 g/mol
Rumus Molekul Piperazine = C 4H10N2
Berat molekul = = 86,1367 g/mol
Berat Piperazine = 42,62 mg (2)

Perhitungan berat Piperazine

BM Piperazine
(1) = (2) =
BM piperazine sitrat

BM Piperazine
BM piperazine p h ospat
258,4101 g/mol
= =
642,6612 g/mol

86,137 g /mol
202.100 g/mol
= 40,21 mg = 42,62 mg
(keterangan : dalam 100 mg lgaram piperazine sitrat (keterangan : dalam

100 mg lgaram piperazine sitratmengandung 40,21 mg piperazine)

mengandung 42,62 mg piperazine)

Konsentrasi piperazine sitrat(standar)

mg piperazine
Cx =
L
 2

40,21 mg
=
0,1 L
= 402,1 ppm
Diambil 5 mL ,untuk diencerkan kedalam labu 25 mL
4 , 021 ppm
= 80,42 ppm
5
Dibuat kurva standar, dengan masing-masing konsentrasi

mL Diencer Pengenc Konsent

kan kedalam eran sebanyak rasi

(µg/mL)

1 20mL 20 4,0210

2 10 8,0420

3 6,6 12,063

4 5 16,084

5 4 20,105

4 , 021 mg 4 , 021 X 103

= = 4,021 µg/mL
1000 mL 1000 mL

Lampiran 2. Perbandingan waktu optimum reaksi t40 vs t50

 3

No 40 50 x1^2 x2^2 x1.x2

1 0,4894 0,4974 0,2395 0,2474 0,2434
2 0,4894 0,4973 0,2395 0,2473 0,2434
3 0,4989 0,4971 0,2489 0,2471 0,2480
4 0,4901 0,4967 0,2402 0,2467 0,2434
5 0,4901 0,4973 0,2402 0,2473 0,2437
6 0,4902 0,4973 0,2403 0,2473 0,2438
total 2,9481 2,9831 1,4486 1,4832 1,4658
kuadrat 8,6913 8,8991
N 6,0000

x 1−x 2
T hitung

S
=

= √
s
1
√ +
n1 n 2
1

(n1 – 1) S12 +(n2 – 1) S22 / n1+n2-2

S = √ ( 5 x 0 , 0037 ) +( 5 x 0 , 0003) / 2
= 0,075
α =0 , 05
Db = n1+n2-2= 10

0 , 4894−0 , 4974
T hitung =
0 , 075
0 , 008
√ 1 1
+
6 6
= = 0,05
0 ,1 35
T table 1,81
Thitung< Ttabel
Pengujian tidak berbeda nyata
Lampiran 3. Perhitungan Kurva Kalibrasi
Tabel L.4.1 Perhitungan persamaan regresi linear

konsentrasi rata-rata
Data (x) absorban(y) XY X2 Y2

1,52395 16,1684 0,14364

1 4,021 0,379 9 4 1
5,87870 64,6737 0,53436
2 8,042 0,731 2 6 1
13,3537 1,22544
3 12,063 1,107 4 145,516 9
258,695 2,11993
4 16,084 1,456 23,4183 1 6
36,1085 3,22561
5 20,105 1,796 8 404,211 6
JUMLA 60,315 5,469 80,2832 889,264 7,24900
 4

H 9 3 3

y = 0,0885x + 0,0261

R² = 0,9997
Y=bx+a

Keterangan :
b : Kemiringan garis (slope)
a : Absorbansi pada konsentrasi 0 (Intercept)
r : Koefisien korelasi
Y : absorbansi
X : Konsentrasi (µg/L)
N : Jumlah data

(5)(80,28329)−( 60,315)(5,469)
b= =0,0885
( 5 ) ( 889,2643 )−( 60,315 ) (60,315)
(5,469)(0,885 x 60,315)−( 5,469 x 889,2643)( 60,315 x 80,28329)
a= =0,0261
(5 )( 889,2643 )−(889,2643)( 889,2643)

5
¿
80,28329
(¿)−(60,315)(5,469)
¿
5
¿
889,2643
(¿)−( 60,315 )2
¿
5 = 0,9997
¿
7,249003
5,469
¿
¿
¿2
¿
¿
¿
r =¿
 5

y = 0,0885x + 0,0261

R² = 0,9997

Slope = 0,0885

Lampiran 3. Perhitungan Uji Presisi

% Kadar
no Absorban(y) Konsentrasi sampel (ug/ml) (x) (b/b)
1 0,72 7,8407 114,95%
2 0,709 7,7164 113,13%
3 0,708 7,7051 112,96%
4 0,736 8,0215 117,60%
5 0,706 7,6825 112,63%
6 0,71 7,7277 113,30%
jumlah 4,289 46,6938 684,58%
rata-rata 0,715 7,7823 114,10%
Akurasi 185,41%
Presisi (% RSD) 1,02%
SD 0,0190
n 6
b 0,0885
SA 0,0078
LOD 0,2628

=
√ 0,003408
6−1

=0,0190

0,0190
= x 100%
7,7823
= 1,02 %
Kemudian dari hasil analisis diperoleh hasil Absorbansi (y) yang kemudian

dimasukan dalam persamaan garis regresi y = 0,0885x + 0,0261sehingga

diperoleh konsentrasi (X) dengan perhitungan dibawah ini :

 6

( y )−0,0261
Konsentrasi hasil pengukuran (Cx) =
0,0885
0,072−0,0261
= =7,8407 µg/mL
0,0885
25 20
V labu sampelx ( )( )
Konsentrasi sampel = Cx x 4 2
W sampel
100 mL
/10
= 7,8407 µg/mL 6.25 µg/mg
x =114,95
42,62mg

Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ

% Kadar
no Absorban(y) Konsentrasi sampel (ug/ml) (x) (b/b)
1 0,72 7,8407 114,95%
2 0,709 7,7164 113,13%
3 0,708 7,7051 112,96%
4 0,736 8,0215 117,60%
5 0,706 7,6825 112,63%
6 0,71 7,7277 113,30%
jumlah 4,289 46,6938 684,58%
rata-rata 0,715 7,7823 114,10%
Akurasi 185,41%
Presisi (% RSD) 1,02%
SD 0,0190
n 6
b 0,0885
SA 0,0078
LOD 0,2628
LOQ 0,8759

y
S (Simpangan baku residual dari garis regresi)
x
= √ ∑ ( Y −Yi ) 2 :( N −2)
= √ ∑ ( 0,715−0,720 )( 0,715−0,720 )−(6−2)
= 0,0078
LOD = 3.SD/b
 7

= (3)(0,078)/0,0885 = 0,2628µg/mL
LOQ = 10.SD/b
= (10) )(0,078)/0,3559 =0,8759 µg/mL

Perhitungan Estimasi Ketidakpastian Pengukuran

µ volume sampel

kal T
Kal
T

Kal
1/rec M0

µ presisi

Gambar L.7.1 Identifikasi penyumbang ketidakpastian

dengan cara fish bone

Formula perhitungan kadar pada pengujian sampel piperazine phospat sebagai

berikut :

V labu sa m pel
Kadar piperazine = Cx(kurva kalibrasi) x x Faktor pengenceran
massa sampel

Penyumbang ketidakpastian berasal dari kurva kalibrasi, massa sampel, volume

sampel, homogenitas, recovery, dan presisi. Ketidakpastian gabungan memadukan

semua komponen tersebut. Perhitungan dilakukan sebagai berikut :

1. Ketidakpastian kurva kalibrasi

 8

Nilai ketidakpastian kurva kalibrasi adalah standar deviasi dari fungsi yang

telah dihitung pada lampiran 4. Perhitungan kurva kalibrasi.

Sx=0,07986

µkurva = 0,07986

2. Ketidakpastian volume sampel

Labu ukur 20 mL = 20 mL ± 0,005Ml

3. Ketidakpastian massa

µmassa terdapat dalalm sertifikat kalibrasi neraca

µmassa = 0,0000095

4. Ketidakpastian presisi

S
µpresisi =
√n
S = Standar deviasi; n = jumlah pengulangan

Standar deviasi telah dihitung pada lampiran

5. Perhitungan uji presisi, maka :

S
µpresisi =
√n
1, 02
µpresisi = = 0,416
√6
 9

DAFTAR PUSTAKA

Amir, Syarif dan Elysabeth. 2007 Antelmintik dalam Farmakologi dan Terapi FK
UI. Balai Penerbit FKUI. Jakarta (541-550)
 10

British Pharmacopoeia Commision. 2013 . British Pharmacopoeia. The

Pharmaceutical Press.London

Cohen, B.C. and Butler, R. 2011.BZP-party pills: A review of research on

benzylpiperazine as a recreational drug International Journal of Drug
Policy.(105-111)

Dachriyanus .2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.

LPTIK Universitas Andalas.Padang.

Departemen Kesehatan Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia, Edisi IV.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia.Jakarta

Fessenden R.J. and J.S Fessenden. 1986 .Kimia Organik Dasar Edisi Ketiga.
Erlangga.Jakarta

F.M. Abou-Attia,dkk. 2003. Quantitative determination of some pharmaceutical

piperazine derivates through complekxation with iron(III) chloride. Cairo
University. Egypt

Harmita.2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya.

Majalah Ilmu Kefarmasian . UI

M.Shenthilraja. 2006. Colorimetric Method for the Determination of Piperazine

in pharmaceutical Formulations. Departement of pharmareutical
chemistry,K.M.C.H . College of Pharmacy. Kalapati

Khopkar, S. M. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Universitas Indonesia.

Jakarta.

Mulja dan suharman. 1990. Aplikasi Analisis spektrofotometri UV-Vis.

Moephiso Grafika. Surabaya H. 1, 13-19,26,27

Prabawati, Susy Yunita dan Wijayanto A. 2016. Sintesis Senyawa 1,4-Bis[(1-

Hidroksi-4-T-Butil- Fenil)Metil]Piperazine Sebagai Zat Antioksidan.
Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga .Yogyakarta.

Rizk, M., Walash and Ibrahim, F. 1984. Spectroscopy Lett., , (17, 423).
 11

Rizk, M.S., Walash, M. I and Ibrahim, F.A., Analyst. , 1981, 106, 1163.

Rohman, A. 2007 . Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar . Yogyakarta

Underwood,A.L and R.A Day,Jr. 1990. Analisa Kimia Kuantitatif. Erlangga.

Jakarta

The Merck index, 10th Ed. (1983), p. 1076, Rahway:Merck & Co

1