SKRIPSI

UJI EFEK IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL BUAH WUALAE

(Etlingera elatior (JACK) R.M. SMITH) TERHADAP AKTIVITAS
FAGOSITOSIS MAKROFAG PADA MENCIT JANTAN GALUR Balb/C

Untuk memenuhi sebagian persyaratan mencapai drajat sarjana (S-1)

Oleh :

CICILIA RESA
F1F1 13 159

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HALU OLEO
KENDARI
2017
 PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini tidak terdapat karya yang

pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan disuatu Perguruan Tinggi, dan

sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah

ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam

naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Kendari, Juli 2017

Penulis

iii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah

melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulisan hasil penelitian yang

berjudul “UJI EFEK IMUNOMODULATOR EKSRAK ETANOL BUAH

WUALAE (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) TERHADAP AKTIVITAS

FAGOSITOSIS MAKROFAG MENCIT JANTAN GALUR BALB/C” dapat

terselesaikan.

Melalui kesempatan ini secara khusus penulis haturkan terima kasih yang tak

terhingga kepada orang tua penulis, ayahanda NUSI YUNUS dan ibunda HERLINA

PATOMBE atas segala doa, restu, semangat, bimbingan, arahan, dan nasihat, serta

ketabahannya dalam membesarkan dan mendidik penulis. Semoga Tuhan Yang Maha

Esa selalu melindungi dan melimpahkan rahmat-Nya kepada ayah dan ibu tercinta.

Terima kasih penulis haturkan kepada ibu Wahyuni, S.Si., M.Si., Apt. selaku

pembimbing pertama dan bapak Muh. Ilyas Yusuf, S.Farm., M.imun., Apt selaku

pembimbing kedua, yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam

mengarahkan dan membimbing penulis mulai dari penulisan proposal hingga proses

penyelesaian hasil penelitian ini.

Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada :

1. Rektor Universitas Halu Oleo, Prof. Dr. Ir. Usman Rianse, M.Si

2. Dekan Fakultas Farmasi UHO, Prof. Dr. Sahidin, S.Pd., M.Si

3. Ibu Suryani, S.Farm., M.Sc., Apt selaku Wakil Dekan I Fakultas Farmasi UHO

iv
4. Bapak Dr. Ruslin, S.Pd., M.Pd selaku Wakil Dekan II Fakultas Farmasi UHO

5. Bapak Sunandar Ihsan, S.Farm., M.Sc., Apt selaku Wakil Dekan III Fakultas

Farmasi UHO

6. Ibu Nur Illiyyin Akib, S.Si., M.Si., Apt selaku Ketua Jurusan Farmasi Fakultas

Farmasi UHO

7. Ibu Henny Kasmawati, S.Farm., M.Si., Apt selaku Kepala Laboratorium

Pendidikan Fakultas Farmasi dan Ibu Rini Hamsidi, S.Farm., M.Farm., Apt

selaku Kepala Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi serta para laboran yang

telah memberikan bantuan kepada penulis selama melaksanakan penelitian.

8. Dr. Muzuni, S.Si., M.Si, Muh. Hajrul Malaka, S.Si., M.Si, Fadhliyah Malik,

S.Farm., M.Farm., Apt selaku dewan penguji, terima kasih atas penilaian, kritik

dan saran yang diberikan untuk sempurnanya skripsi ini

9. Bapak dan Ibu dosen di lingkungan Universitas Halu Oleo, khususnya Jurusan

Farmasi, terima kasih atas ilmu yang telah diberikan kepada penulis. Seluruh staf

di Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo terima kasih atas segala fasilitas dan

pelayanan yang telah diberikan selama penulis menuntut ilmu.

10. Buat kakak-kakak yang telah memberikan saran serta bantuan dalam perkuliahan

dan penulisan skripsi ini, Kak Kusmawardani Usman, S.Farm, kak Edi Mursidi,

S.Farm Kak Hajrul Malaka, S.Si., M.Si, dan Kak Agung Wibawa Mahatva

Yodha, S.Si.

11. Sahabat-sahabat terbaik penulis, Nursita Ainul Ma’arifah, Apriliani, Clara Jane

Sasmita, Amd.Keb, Putri Eka Amaliah, dan Puspita Indah Sari terimakasih untuk

v
 selalu menemani penulis dalam suka maupun duka serta semangat, doa dan

dukungannya.

12. Sahabat-sahabat seperjuangan tercinta dalam menuntut ilmu dan tempat berbagi

suka dan duka MaRps: Listi, Ani, Ayukumala, Sasta, Puyan, Yuriko, Neglan, Iga,

Anty, Nency, Sri, Nindy Dila, Elsa, Sinar, Wati, Asty, Intan, Mike, kak Mintje

Gredis, Imam, Arif, kak Fuad dan kak Igo terima kasih untuk semua bantuan dan

kebersamaan yang tidak akan terlupakan.

13. Yang selalu menemani dalam penelitian Listy, Ani, Yani, Ayukumala, Gredis,

Kak Fuad, Arif, Novi, Firas, terima kasih banyak atas semua bantuannya.

14. Teman-teman sepenelitian Etlingera elatior corps terimakasih untuk semua

bantuan, kerja sama dan dukungan dalam bentuk tenaga bahkan materi.

15. Teman-teman angkatan 2013 seperjuangan kelas A,B,C yang tidak dapat

disebutkan satu persatu yang telah bersama-sama melewati susah dan senang

selama menempuh perkuliahan di Farmasi.

16. Kakak-kakak dan adik-adik mahasiswa yang turut memberi dukungan kepada

penulis.

Mohon maaf atas hal-hal yang tidak berkenaan dari diri penulis, dan khirnya

penulis menyampaikan penghargaan yang setinggi-tingginya kepada semua pihak dan

berharap tulisan ini dapat bermanfaat.

Kendari, Juli 2017

Penulis

vi
 DAFTAR ISI

PERNYATAAN .............................................................................................. iii

KATA PENGANTAR .................................................................................... iv
DAFTAR ISI ................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ........................................................................................... ix
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... x
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... xi
ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN ........................................................ xii
ABSTRAK .................................................................................................... xiii
ABSTRACT .................................................................................................. xiv
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................ 1
A. Latar Belakang .......................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah ...................................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian ...................................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian ..................................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 6
A. Tanaman Wualae ........................................................................................ 6
B. Metode Analisis Senyawa Bahan Alam ..................................................... 8
C. Sistem Imun ............................................................................................. 10
D. Makrofag .................................................................................................. 17
E. Fagositosis Makrofag ............................................................................... 18
F. Imunomodulator ....................................................................................... 21
G. Mencit ...................................................................................................... 22
H. Kerangka Konsep ..................................................................................... 24
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................. 25
A. Waktu Dan Tempat Penelitian ................................................................. 25
B. Jenis Penelitian ......................................................................................... 25
C. Bahan Penelitian ....................................................................................... 25
D. Alat/Instrumen Penelitian ......................................................................... 25

vii
E. Variabel .................................................................................................... 26
F. Definisi Oprasional .................................................................................. 26
G. Prosedur Penelitian ................................................................................... 27
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 36
A. Determinasi Tanaman .............................................................................. 36
B. Penyiapan Sampel .................................................................................... 36
C. Ekstraksi ................................................................................................... 37
D. Skrining Fitokimia ................................................................................... 38
E. Karakterisasi Ekstrak ............................................................................... 43
F. Uji Efek Imunomodulator ........................................................................ 45
BAB V PENUTUP ......................................................................................... 52
A. Saran ......................................................................................................... 52
B. Kesimpulan .............................................................................................. 52
C. DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 53
LAMPIRAN ................................................................................................... 58

viii
 DAFTAR TABEL

Nomor Teks Halaman

1 Hasil skrining fitokimia buah wualae. 39

2 Hasil Karakterisasi Ekstrak 44
3 Hasil aktivitas fagositosis makrofag aktif 47
4 Hasil uji Tukey peningkatan aktivitas fagositosis makrofag 50
5 Konversi perhitungan dosis antara jenis subjek uji 67
6 Volume maksimal larutan sediaan uji yang dapat 68
diberikan pada beberapa hewan uji

ix
 DAFTAR GAMBAR

Nomor Teks Halaman

1. Tumbuhan wualae (E.elatior) dan buah wualae 6

2. Tahapan pematangan fagosit mononuklear 17

3. Fagositosis dan eliminasi mikroorganisme 20

4. Mencit 22

5. Kerangka Konsep 24

6. Reaksi Hidrolisis Bismut 40

7. Reaksi Uji Dragendrof 40

8. Mekanisme reaksi pembentukan garam flavilium 41

9. Reaksi antara Tanin dengan FeCl3 42

10. Reaksi Uji Lieberman-Buchard 43

11. Apusan darah tipis perbesaran 1000x 47

12. Grafik peningkatan aktivitas fagositosis sel makrofag 48

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Teks Halaman

1 Skema Alur Penelitian 58

2 Hasil Determinasi Tanaman 62

3 Perhitungan Rendamen 63

4 Karakterisasi Ekstrak 64

5 Pembuatan Pereaksi Skrining Fitokimia 66

6 Tabel Konversi Perhitungan Dosis Antar 67

Jenis Subjek Uji

7 Tabel Volume Maksimal Pemberian Larutan Untuk 68

Hewan Uji

8 Pembuatan Sediaan Pembanding 69

9 Pembuatan Sediaan Uji 71

10 Analisis Data Hasil Pengujian 75

11 Dokumentasi Penelitian 80

xi
 ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN

Lambang/Singkatan Arti Lambang dan Keterangan

E.elatior : Etlingera elatior (Jack)R.M smith
S.aureus : Staphylococcus aures
i.p : Intraperitoneal
PBS Phospahte Buffer Saline
IL : Interleuikin
ANOVA : Analysis of variance
TNF : Tumor Necrosis Factor
FeCl3 : Feri 3 chlorida, jenis pereaksi
G : Gram
g/kgBB : Gram per kilogram berat badan
mg/kgBB : miligram per kilogram berat badan
Na CMC : Natrium carboxymethylcellulose
Sig (α) p : Signifikansi (alfa), tingkat kesalahan
± : Lebih kurang

xii
 UJI EFEK IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL BUAH WUALAE
(Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) TERHADAP AKTIVITAS FAGOSITOSIS
MAKROFAG PADA MENCIT JANTAN BALB/C

Cicilia Resa
F1F113159

ABSTRAK

Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) secara empiris telah digunakan dalam
pengobatan dan sebagai bahan pangan. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui
pengaruh pemberian ekstrak etanol buah wualae terhadap aktivitas fagositosis
makrofag. Sebanyak dua puluh empat ekor mencit galur Balb/c dibagi ke dalam 6
kelompok. Kelompok pertama mendapat pemberian ekstrak 100mg/kgBB, kelompok
kedua mendapat pemberian ekstrak 200mg/kgBB, kelompok ketiga mendapat
pemberian 300mg/kgBB, kelompok keempat mendapat pemberian 400mg/kgBB,
kelompok kontrol positif mendapat eksrak Phyllanthus niruri Linn.(Stimuno®)
0,13mg/gBB, dan kelompok kontrol negatif mendapatkan NaCMC 0,5%. Ekstrak
diberikan sejak hari pertama hingga ketujuh. Pada hari kedelapan masing-masing
mencit diinjeksikan bakteri Staphylococcus aureus (SA) secara intraperitoneal.
Aktivitas sel makrofag dihitung dari apusan cairan peritoneum. Peningkatan dosis
ekstak etanol buah wualae meningkatkan jumlah aktivitas fagositosis makrofag dari
36,50% (Na CMC), 45,75% (100mg/kgBB), 59,70% (200mg/kgBB), 61%
(300mg/kgBB), 71,25% (400mg/kgBB). Hasil menunjukan bahwa ekstrak etanol
buah wualae memiliki potensi sebagai imunomodulator pada dosis 300 mg/kgBB dan
400 mg/kgBB dengan efektivitas yang tidak berbeda jauh dengan stimuno dalam
meningkatkan aktivitas fagositosis sel makrofag hasil uji statistik post hoc TUKEY
(sig. > 0,05).

Kata kunci :Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith., Makrofag, Imunomodulator

xiii
 IMMUNOMODULATOR EFFECTS OF ETHANOL EXTRACT FRUIT
WUALAE (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) AGAINST POWER
MACROPHAGE PHAGOCYTOSIS ON MALE MICE BALB/C

Cicilia Resa
F1F113159

ABSTRACT

Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) empirically been used by people to treat
diseases and as food. The current study investigates the role of the ethanol extract
fruit wualae (E.elatior) on mice macrophages activities. Twenty four balb/c mice
were divided into 6 equal groups. The first group received dose 100
mg ethanol extract of fruit wualae, the second group received dose 200 mg ethanol
extract of fruit wualae, the third group received dose 300 mg ethanol extract of fruit
wualae, and the fourth group group received dose 400 mg ethanol extract of fruit
wualae. The positive control received Phyllanthus niruri Linn. (PN) extract
(Stimuno®) 0,13 mg/30 g BW, while the negative control received CMC Na 0,5%.
These were admonished orally on day 1 until 7. On day 8, Staphylococcus aureus
(SA) were injected intraperitoneally. The macrophages activities were counted on
slide smears of mice peritoneal fluid. The result showed that ethanol extracts of fruit
wualae (E.elatior) has potential as imunomodulator at dose of 300mg/kgBB and 400
mg/kbBB showed the effectiveness of which is not much different from stimuno in
improving phagocytosis activity of macrophages based on the result test of the
statistic post hoc TUKEY (sig. > 0,05).

Keywords : Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith, Macropahage,

Immunomoduloator

xiv
 BABI

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Kesehatan merupakan salah satu unsur utama pembangunan sumber daya

manusia (SDM). Namun akibat aktivitas dan tuntutan pekerjaan yang semakin

meningkat, stres akibat pekerjaan yang tidak dapat dihindari, meningkatnya

konsumsi makanan cepat saji, dan waktu olah raga yang terbatas membuat

masyarakat Indonesia terutama yang hidup di perkotaan sulit untuk menjalani

hidup sehat (Tasia dan Widyaningsih, 2014). Kesehatan masyarakat tidak hanya

terdiri dari pengobatan penyakit yang dilakukan dalam waktu singkat tetapi juga

upaya kesehatan jangka menengah dan jangka panjang. Hal ini membuat

masyarakat sangat membutuhkan obat/suplemen yang dapat meningkatkan daya

tahan tubuh (imunitas) (Chairul dan Praptiwi, 2011).

Sistem pertahanan tubuh atau disebut juga dengan sistem imun merupakan

sistem yang bertanggung jawab melindungi tubuh dari benda-benda asing yang

masuk sehingga fungsi tubuh tidak terganggu (Aldi, dkk., 2014). Sistem

kekebalan tubuh ini terdiri dari dua sistem, yaitu imun alami (non spesifik) dan

imun spesifik. Sistem imun non spesifik merupakan pertahanan pertama terhadap

mikroorganisme atau benda-benda asing yang masuk dalam tubuh (Arifah dan

Nurkhasanah, 2014). Salah satu upaya yang dilakukan sistem imun non-spesifik

dalam mempertahankan diri terhadap masuknya antigen yaitu dengan cara

menghancurkan antigen melalui proses fagositosis. Proses fagositosis yang efektif

1
pada invasi mikroorganisme dini dapat mencegah timbulnya penyakit (Marusin

dan Chairul, 2012).

Sel-sel yang berperan dalam memfagositosis antigen antara lain sel

makrofag. Makrofag merupakan efektor utama pada respon imun seluler. Sebagai

fagosit profesional, makrofag bertanggung jawab dalam memusnahkan sel yang

terinfeksi patogen intraseluler dimana aktivitas fagositosis makrofag dapat

ditingkatkan dengan zat-zat yang bersifat imunomodulator (Akrom, 2015).

Imunomodulator adalah substansi atau obat yang dapat memodulasi fungsi

dan aktivitas sistem imun. Imunomodulator dibagi menjadi 3 kelompok.

Imunostimulator, berfungsi untuk meningkatkan fungsi dan aktivitas sistem imun,

imunoregulator, yang meregulasi sistem imun, dan imunosupresor yang dapat

menghambat atau menekan aktivitas sistem imun (Wiedosari, 2007).

Imunomodulator terutama digunakan pada penyakit imunodefisiensi, infeksi

kronis, dan kanker.

Senyawa-senyawa yang dapat memodulasi sistem imun dapat diperoleh

dari tanaman. Namun baru sejumlah kecil tanaman yang telah diskrining aktivitas

imunostimulannya. Hasil skrining tersebut membuktikan bahwa beberapa

tanaman obat memiliki aktivitas imunostimulan, namun tidak cukup bukti untuk

kemudian dapat digunakan dalam praktik klinis, sehingga di masa mendatang

penelitian tentang imunostimulator dari tanaman obat sangat bernilai (Hartini,

2013). Penelitian sebelumnya mengenai Uji efektivitas imunomodulator dari tiga

jenis Zingiberaceae secara in-vitro yang dilakukan oleh Chairul dan Praptiwi

2
(2011) menunjukan bahwa Zingiberacea memiliki aktivitas imunomodulator yang

diamati melalui kapasitas fagositosisnya.

E. elatior (wualae) merupakan salah satu family Zingiberacea dan

merupakan tanaman asli Indonesia. Wualae adalah salah satu jenis tanaman

rempah rempah yang sejak lama dikenal dan dimanfaatkan sebagai obat- obatan.

Bunga dari tanaman ini bisa digunakan sebagai bahan kosmetik alami dimana

bunganya dipakai untuk campuran cairan pencuci rambut. Daun serta rimpangnya

dipakai untuk bahan campuran bedak (Sukandar, dkk., 2010). Buah wualae

digunakan oleh masyarakat di daerah Kel. Sambeani, Kec. Abuki Kab. Konawe

sebagai bahan penyedap masakan. Secara empiris di Kabupaten Kolaka Utara

buah wualae juga digunakan sebagai obat dalam pemulihan penyakit demam

tifoid.

E. elatior mengandung senyawa bioaktif seperti polifenol, alkaloid,

flavonoid, steroid, saponin dan minyak atsiri (Handayani, 2014). Senyawa

flavonoid dan saponin, berdasarkan uji secara in vitro telah menunjukkan adanya

respon imun. Efek terhadap respon imun non spesifik berupa peningkatan

fagositosis dan kemotaksis makrofag, kemotaksis neutrofil, sitotoksisitas sel NK

serta aktivitas hemolisis komplemen (Kurnianingtyas, dkk., 2013). Berdasarkan

uji pendahuluan yang dilakukan dengan menggunakan ekstrak etanol buah wualae

pada dosis 100mg/kgBB menunjukan adanya peningkatan aktivitas fagositosis

makrofag pada mencit jantan yang diinduksi dengan bakteri S.aureus.

Berdasarkan latar belakang diatas, maka peneliti tertarik melakukan

penelitian efek imunomodulator ekstrak etanol buah wualae (Etlingera elatior

3
(Jack) R.M. Smith) terhadap aktivitas fagositosis makrofag pada mencit jantan

galur Balb/c.

B. Rumusan Masalah

Masalah yang dikaji dalam penelitian ini berdasarkan latar belakang

diatas antara lain sebagai berikut :

1. Kandungan metabolit sekunder apakah yang terdapat dalam buah wualae

(Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) ?

2. Bagaimanakah efek imunomodulator ekstrak etanol buah wualae (Etlingera

elatior (Jack) R.M. Smith) terhadap aktivitas fagositosis makrofag pada

mencit jantan galur Balb/c?

3. Berapakah dosis ekstrak etanol wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith)

yang efektif sebagai imunomodulator?

C. Tujuan Penelitian

Tujuan yang ingin dicapai dalam penelitian ini adalah :

1. Mengetahui kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam buah wualae

(Etlingera elatior (Jack) R.M Smith).

2. Mengetahui efektivitas imunomodulator ekstrak etanol wualae (Etlingera

elatior (Jack) R.M. Smith) terhadap aktivitas fagositosis makrofag pada

mencit jantan galur balb/c.

3. Mengetahui dosis estrak etanol buah wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M.

Smith) yang efektif sebagai imunomodulator.

4
D. Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi antara

lain sebagai berikut :

1. Bagi peneliti, menambah ilmu pengetahuan dan keahlian dalam penelitian

praklinis pada tumbuhan yang berpotensi untuk pengobatan menggunakan

hewan uji.

2. Bagi ilmu pengetahuan, dapat memberikan informasi yang dapat

dipertanggung jawabkan secara ilmiah mengenai manfaat ekstrak etanol buah

wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) sebagai imunomodulator.

3. Bagi institusi, mewujudkan peranan Universitas Halu Oleo dalam mengkaji

permasalahan yang terjadi di masyarakat.

4. Bagi masyarakat, memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat terhadap

tumbuhan wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) sebagai

imunomodulator.

5
 B A B II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Tanaman Wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith)

1. Deskripsi

Tanaman wualae adalah tanaman herba dengan tinggi mencapai 5 m.

Batang semu bulat, membesar di pangkalnya, tumbuh tegak membentuk rumpun.

Rimpang tebal, berwarna merah jambu. Daun tersusun dalam dua baris, berseling,

bentuk jorong lonjong, pangkal membulat atau menjantung, tepi bergelombang,

ujung meruncing pendek, gundul tetapi dengan bintik-bintik halus dan rapat, serta

hijau mengkilap. Bunga dalam karangan berbentuk gasing, dan bertangkai

panjang. Buah berjejalan membentuk bongkol hampir membulat, berdiameter 10-

20 cm dengan masing-masing butir berukuran 2-2,5 cm, hijau dan menjadi merah

ketika masak. Berbiji banyak, coklat kehitaman, dan diselubungi aril putih bening

atau kemerahan (Hidayat dan Napitupulu, 2015). Tanaman wualae dapat dilihat

pada Gambar 1.

(A) (B)
Gambar 1: (A) Tumbuhan wualae (E. elatior), (B) buah wualae
Sumber: dokumentasi pribadi.

6
2. Nama lain

E. elatior merupakan salah satu keluarga Zingiberacea yang asli

Indonesia. Tanaman ini dikenal dengan berbagai nama antara lain “wualae” di

Sulawesi Tenggara, ”kencong” atau ”kincung” di Sumatra Utara, ”kecombrang” di

Jawa, ”honje” di Sunda, ”bongkot” di Bali, ”sambuang” di Sumatra Barat dan

”bunga kantan” di Malaysia. Orang barat menyebut tanaman ini torch ginger atau

torch lily karena bentuk bunganya yang mirip obor serta warnanya yang merah

memukau. Beberapa orang juga menyebutnya dengan nama philippine waxflower

atau porcelein rose mengacu pada keindahan bunganya (Sukandar, dkk., 2010).

3. Klasifikasi

Klasifikasi tumbuhan E. elatior adalah sebagai berikut (Tjitrosoepomo,

2005):

Kingdom : Plantae

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Liliopsida

Ordo : Zingiberales

Famili : Zingiberaceae

Genus : Etlingera

Spesies : Etlingera elatior (Jack) R.M Smith

4. Kandungan kimia

Bunga, batang, rimpang, dan daun E. elatior mengandung senyawa

bioaktif seperti polifenol, alkaloid, flavonoid, steroid, saponin dan minyak atsiri

(Handayani, 2014). Dari rimpang E. elatior, telah diisolasi 2 senyawa baru yaitu

7
7-bis (4-hidroksifenil) -2,4,6-heptatrienone dan 16-hydroxylabda-8 (17), 11,13-

trien-16,15-olide dan 6 senyawa dari golongan diarylheptanoids, labdan

diterpenoid, dan steroid diantaranya adalah demethoxycurcumin, stigmast-4-en-3-

one, stigmast-4-ene-3,6-dione, stigmast-4-en-6β-ol-3-one, 5α,8α-epidioxyergosta-

6,22-dien-3β-ol, and 1,7-bis(4-hydroxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one. (Chan dan

Wong, 2011; Naufalin, dkk., 2005).

5. Aktivitas farmakologi

Beberapa penelitian mengenai aktivitas farmakologi dari tanaman

E. elatior menyebutkan ekstrak metanol daun E. elatior memiliki aktivitas

penghambatan tirosinase (Chan dan Wong, 2011). Fraksi metanol ekstrak batang

E. elatior memiliki efek sebagai larvasida terhadap larva Aedes aegypti instar III

(Adityo, 2012). Senyawa diarylheptanoids yang diisolasi dari rimpang E. elatior

juga menunjukan adanya aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dari α-tokoferol.

Selain itu, ekstrak etanol bunga E. elatior memiliki aktivitas antibakteri dengan

konsentrasi hambat minimun (MIC) 200 ug/ml terhadap Pseudomonas

aeruginosa, 400 mg/ml terhadap Bacillus megaterium, dan 800 mg / ml terhadap

Escherichia coli.

B. Metode Analisis Seyawa Bahan Alam

1. Ekstraksi

Ekstraksi adalah proses penarikan komponen aktif yang terkandung dalam

tanaman menggunakan bahan pelarut yang sesuai dengan kelarutan komponen

aktifnya (Yuliani dan Satuhu, 2012). Ekstraksi mengikuti prinsip like dissolves

like yang berarti bahwa senyawa polar akan mudah larut dalam pelarut polar, atau

8
sebaliknya (Sudjajadi, 1988). Ada beberapa metode yang sering digunakan dalam

ekstraksi diantaranya maserasi, infusa, digesti, dekoksi, perkolasi, dan sebagainya

(Kristiani, 2008).

Maserasi merupakan cara ekstraksi yang paling sederhana. Maserasi

merupakan proses perendaman sampel dengan pelarut organik yang digunakan

pada temperatur ruang. Pelarut akan menembus dinding sel dan masuk kedalam

rongga sel yang mengandung zat aktif sehingga zat aktif akan larut, karena adanya

perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif didalam sel, sehingga larutan yang

terpekat akan terdesak keluar (Christina, 2008). Kesetimbangan akan terjadi

antara senyawa terlarut di dalam sel dengan pelarut disekitar jaringan tanaman.

Efektivitas ekstraksi juga dioptimalkan dengan pengadukan (Sartini, dkk., 2013).

Meskipun maserasi tidak menghasilkan ekstraksi yang komplit, akan tetapi

banyak penelitian memilih menggunakan metode ini karena maserasi merupakan

prosedur sederhana untuk mendapatkan ekstrak, cocok untuk skala kecil maupun

industrial (Sartini, 2013). Selain itu metode ekstraksi maserasi tidak memerlukan

pemanasan sehinga senyawa yang tidak tahan panas tidak terurai.

2. Skrining fitokimia

Tanaman dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional apabila tanaman

tersebut mengandung senyawa kimia yang mempunyai aktivitas biologis (zat

biokatif). Kandungan metabolit sekunder dalam suatu tanaman dapat diketahui

dengan suatu metode pedekatan yang dapat memberikan informasi adanya

senyawa metabolit sekunder. Salah satu metode yang dapat digunakan adalah

metode skrining fitokimia (Setyowati, dkk., 2014).

9
 Skrining fitokimia merupakan cara untuk mengidentifikasi bioaktif yang

belum tampak melalui suatu tes atau pemeriksaan yang dapat dengan cepat

memisahkan antara bahan alam yang memiliki kandungan fitokimia tertentu

dengan bahan alam yang tidak memiliki kandungan fitokimia tertentu. Skrining

fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam suatu penelitian fitokimia yang

bertujuan untuk memberikan gambaran tentang golongan senyawa yang

terkandung dalam tanaman yang sedang diteliti. Metode skrining fitokimia

dilakukan dengan melihat reaksi pengujian warna dengan menggunakan suatu

pereaksi warna. (Minarno, 2015). Menurut Harborne (1984) senyawa metabolit

sekunder yang umum terdapat pada tanaman adalah : alkaloid, flavanoid, steroid,

saponin, terpenoid dan tannin.

C. Sistem Imun

Sistem kekebalan tubuh atau sistem imun adalah semua mekanisme yang

digunakan tubuh untuk mempertahankan keutuhannya terhadap bahaya, yang

ditimbulkan oleh berbagai bahaya di lingkungan (Arifah, 2014). Fungsi sistem

imun bagi tubuh ada tiga. Pertama sebagai pertahanan tubuh yakni menangkal

''benda'' asing. Kedua, untuk keseimbangan fungsi tubuh terutama menjaga

keseimbangan komponen yang tua, dan ketiga, sebagai pengintai (surveillence

immune system), untuk menghancurkan sel-sel yang bermutasi atau ganas.

(Suhirman dan Winarti, 2007).

Sistem imun terbagi menjadi sistem imun spesifik dan sistem imun non

spesifik. Sistem imun spesifik terdiri dari sistem humoral (limfosit B), seluler

(limfosit T), sistem limfoid primer, sistem limfoid sekunder (limpa, kelenjar limfe

10
dan sistem imun mukosa). Sistem imun non spesifik terdiri dari yang bersifat

fisik/mekanik (kulit, selaput lendir, silia, batuk, bersin, terlarut (asam lambung,

lisosim, laktoferin, asam neuraminik, komplemen, interferon, neutrofil, eosinofil,

sel NK, sel K, basofil, mastosit, trombosit) (Mataram, 2014).

1. Sistem Imun Non-Spesifik (Imunitas innate)

Sistem imun non spesifik (imunitas innate) merupakan sistem pertahanan

tubuh paling depan dan sebagai pelindung alami tubuh dari serangan infeksi.

Disebut non-spesifik karena telah ada dan berfungsi sejak lahir, serta merupakan

pertahanan tubuh terdepan dalam menghadapi serangan berbagai mikroorganisme,

dan dapat memberikan respon langsung terhadap antigen (Winarsih, 2010).

Mekanismenya tidak menunjukan spesifisitas terhadap bahan asing dan mampu

melindungi tubuh terhadap banyak patogen potensial (Bratawidjaja dan

Rengganis, 2014).

Sistem imun nonspesifik memiliki 3 fungsi:

1) Respon awal terhadap mikroba untuk mencegah, dan mengontrol infeksi pada

manusia. Keberhasilan atau kegagalan imunitas innate sangat dipengaruhi oleh

tingkat virulensi patogen. Kegagalan terutama disebabkan karena adanya

kemampuan patogen untuk menghindar dari respon imun.

2) Memicu timbulnya imunitas adaptif terhadap patogen dan mempengaruhi

penampilan imunitas adaptif agar lebih optimal mengeliminasi patogen sesuai

tipe patogen.

3) Imunitas innate bukan hanya untuk merespon patogen tetapi juga

mengeliminasi sel-sel mati dan produknya, berperan sebagai cleaning service

11
 sehingga proses penyembuhan jaringan dapat berlangsung (Wahid dan

Miskad, 2016).

Sistem imun non spesifik terdiri dari pertahanan fisik/mekanik, pertahanan

biokimia, pertahanan humoral, dan pertahanan seluler.

a. Pertahanan Fisik/Mekanik

Dalam sistem pertahanan fisik atau mekanik, kulit, selaput lendir, silia

saluran pernapasan, batuk dan bersin, merupakan garis pertahanan terhadap

infeksi. Keratinosit dan lapisan epidermis kulit sehat dan epitel mukosa yang utuh

tidak dapat ditembus kebanyakan mikroba. Kulit yang rusak akibat luka bakar dan

selaput lender saluan pernapasan yang rusak oleh asap rokok akan meningkatkan

resiko infeksi. Tekanan oksigen yang tinggi diparu bagian atas membantu hidup

kuman obligat aerob seperti tuberkulosis.

b. Pertahanan Biokimia

Seluruh mikroorganisme gagal bertahan hidup untuk waktu yang lama

dikulit oleh karena cairan biokimia yang disekresi tubuh yang mengandung

komponen-komponen bakterisidal seperti sekresi cairan lambung yang

megandung asam lambung, spermin dan seng didalam semen, laktoperoksidase

didalam air susu ibu, lizosim dalam air mata, sekresi rongga hidung dan telinga,

dan pembersihan oleh air ludah dan air kemih.

c. Pertahanan Humoral

Imunitas humoral adalah imunitas yang diperoleh dalam cairan tubuh dan

diperantarai oleh antibodi dan komplemen. Adapun imunitas humoral yang

nonspesifik antara lain:

12
1) Komplemen

Komplemen terdiri dari perangkat protein plasma yang merupakan

perantara utama reaksi antigen antibodi. Efek utama dari komplemen adalah

melisiskan sel seperti bakteri dan sel tumor, mrnghasilkan perantara yang ikut

dalam inflamasi dan menarik fagosit, opsonisasi organisme dan kompek imun

untuk membersihkan fagositosis, peningkatan respon imun.

2) Protein Fase akut

Selama fase akut infeksi, terjadi perubahan kadar beberapa protein dalam

serum yang disebut APP (Acute Phase Protein) yang merupakan bahan

antimikrobial dalam serum yang meningkat dengan cepat setelah sistem imun

nonspesifik diaktifkan. Protein yang meningkatkan atau mnurun selama fase akut

disebut juga APRP (Acute Phase Response Protein) yang berperan dalam

pertahanan dini.

APRP diinduksi oleh sinyal yang berasal dari tempat cedera atau infeksi

melalui darah. Hati merupkan tempat sintesis APRP. Sitokin TNF-α, IL-1, IL-6

merupakan sitokin proinflamasi dan berperan dalam induksi APRP. Protein fase

akut terdiri dari C-Reactive Protein, Lektin, dan Protein fase akut lain.

a) C-Reactive Protein (CRP)

CRP merupakan salah satu protein fase akut, termasuk golongan protein

yang kadarnya dalam darah meningkat pada infeksi akut sebagai respon imunitas

nonspesifik. Sebagai opsonin, CRP mengikat berbagai mikroorganisme, protein C

pnomokok yang membentuk kompleks dan mengaktifkan komplemen jalur klasik.

Pegukuran CRP digunakan untuk menilai aktivitas penyakit inflamsi. CRP dapat

13
meningkat 100x atau lebih dan berperan pada imunitas nonspesifik yang dengan

bantuan Ca++ dapat mengikat berbagai molekul antara lain fosforilkolin yang

ditemukan pada permukaan bakteri/jamur. Sintesis CRP yang meningkat

meninggikan viskositas plasma dan laju endap darah. Adanya CRP yang tetap

tinggi menunjukan infeksi yang persisten.

b) Lektin

Lektin/kolektin merupakan molekul larut dalam plasma dapat mengikat

manan/manosa dalam poliskarida, (karenanya disebut MBL (Manan Binding

Lectin)) yang merupakan permukaan banyak bakteri seperti galur pneumokok dan

banyak mikroba, tetapi tidak pada sel vertebrata. Lektin berperan sebagai opsonin

megaktifkan komplemen. SAP (Serum Amyloid Protein) mengikat lipopolisaarida

dindig bakteri dan berfungsi sebagai reseptor untuk fagosit.

c) Protein fase akut lain

Protein fase akut lain adalah al-antitripsin, amiloid serum A, haptoglobin,

C9, Faktor B, dan fibrinogen yang jua berperan pada laju endap darah akibat

infeksi, namun dibentuk jauh lebih lambat dibanding dengan CRP. Secara

keseluruhan, respon fase akut memberikan efek yang menguntungkan melalui

peningkatan resistensi pejamu, mengurangi cedera jaringan dan menigkatkan

resolusi dan perbaikan cedera inlamasi.

3) Mediator asal fosfolipid

Metabolisme fosfolipid dipelukan untuk produksi PG dan LTR. Keduanya

meningkatkan respon inflamasi melalui peningkatan permaebilitas vaskular dan

vasodiatasi.

14
4) Sitokin IL-1, IL-6, TNF-α

Selama terjadi infeksi, produk bakteri seperti LPS mengaktifkan makrofag

dan sel lain untuk memproduksi dan melepas sitokin seperti IL-1 yang merupakan

pirogen endogen, TNF- α dan IL-6. Pirogen adalah bahan yang menginduksi

demam yangr eksogen dipacu baik oleh faktor eksogen (endotoksin asal bakteri

gram negatif) atau endogen seperti IL-1 yang diproduksi oleh makrofag dan

monosit. Ketiga sitokin tersebut disebut sitokin proinflamasi, merangsang hati

untuk mensintesis dan melepas sejumlah protein plasma seperti protein fase akut

antara lain CRP yang dapat meningkatkan seribu kali, MBL dan SAP

(Bratawidjaja dan Renggais, 2014).

d. Pertahanan seluler

Fagosit, sel NK, sel mast dan eosinofil berperan dalam sistem imun

nonspesifik seluler. Sel-sel sistem imun tersebut dapat ditemukan dalam sirkulasi

atau jaringan. Contoh sel yang ditemukan dalam sirkulasi adalah neutrofil,

eosinofil, basofil, monosit, sel T, sel B, sel NK, sel darah merah dan trombosit.

Sel-sel tersebut dapat mengenal produk mikroba esensial yang diperlukan untuk

hidupnya. Contoh sel-sel dalam jaringan adalah eosinofil, sel mast dan makrofag.

2. Sistem Imun Spesifik (adaptif)

Apabila sistem imunitas innate tidak mampu menghentikan serangan

mikroorganisme, maka sistem kekebalan spesifik (adaptif) akan diaktifkan.

Dikatakan sebagai kekebalan spesifik karena cara bekerja sistem kekebalan kita

secara khusus ditujukan untuk menangkal mikroorganisme tertentu. Contoh, bila

15
virus hepatitis B menyerang tubuh kita, maka sistem kekebalan kita akan

memproduksi antibodi khusus yang diarahkan pada virus tersebut. (Cahyono,

2010).

Sistem imun adaptif terdiri atas sistem humoral dan sistem seluler. Pada

imunitas humoral, sel B melepaskan antibodi untuk menyingkirkan mikroba

ekstraseluler. Pada imunitas seluler sel T mengaktifkan makrofag sebagai efektor

untuk menghancurkan mikroba atau mengaktifkan sel CTC/Tc sebagai efektor

menghancurkan sel terifeksi.

a. Sistem imun spesifik humoral

Pemeran utama dalam sistem imun spesifik humoral dalah limfosit B atau

sel B. Humor berarti cairan tubuh. Sel B berasal dari sel asal multipoten di

sumsum tulang belakang. Sel B dirangsang oleh benda asing akan berpoliferasi,

berdiferensiasi dan berkembang menjadi sel plasma yang memprosukdi antibodi.

Antibodi yang lepas dapat ditemukan dalam serum. Fungsi utama antibodi ialah

pertahanan terhadap infeksi ektraselular, virus dan bakteri menetralkan toksinnya.

b. Sistem imun spesifik seluler.

Limfosit T atau sel T berperan pada sistem imun spesifik seluler. Sel

tersebut juga berasal dari sel yang sama dengan sel B tetapi poliferasi dan

diferensiasinya terjadi dalam sel timus. 90-95% sel T dalam timus tersebut mati

dan hanya 5-10% menjadi matang yang selanjutnya meninggalkan timus untuk

masuk kedalam sirkulasi.

Faktor timus disebut timosin dan dapat ditemukan dalam peredaran darah

sebagai hormon asli dan dapat mempengaruhi diferensiasi sel T diperifer. Berbeda

16
dengan sel B, sel T terdiri dari beberapa subset sel yang memiliki funsi yang

berlainan yaitu sel CD4+ (Th1, Th2), CD8+atau CTL atau Tc dan Ts atau sel Tr

atau Th3. Fungsi utama sistem imun spesifik seluler adalah pertahanan terhadap

bakteri yang hidup intraseluler, virus, jamur, parasit, dan keganasan. Sel CD4+

mengaktifkan sel Th1 yang selanjutnya mengaktifkan makrofag untuk

menghancurkan mikroba. Sel CD8+ memusnahkan sel infeksi (Bratawidjaja dan

Rengganis, 2014).

D. Makrofag

Makrofag adalah sel berukuran besar yang berdiameter 15-50 um. Sel

makrofag diproduksi di sumsum tulang dari sel induk myeloid melalui stadium

promonosit. Sel yang matang kemudian masuk ke dalam aliran darah sebagai

monosit dan apabila sel ini meninggalkan sirkulasi dan sampai di jaringan sel

mengalami berbagai perubahan tambahan kemudian menetap di jaringan sebagai

makrofag. Sitoplasma makrofag terdiri dari bermacam-macam granula yang

berisis berbagai enzim untuk mencerna partikel dan mikroogranisme yang

difagositosis (Djojodibroto, 2009; Yulinery dan Hidayat, 2012) Gambar 2.

Gambar 2 : Tahapan pematangan fagosit mononuklear

Sumber: Bratawijaya dan Rengganis, 2014

17
 Transisi dari monosit menjadi makrofag diikuti dengan meningkatnya

sejumlah besar fagosit, digestif dan sintetik dalam sel, terutama sitoplasmanya

membesar, fagosomnya muncul membran yang menjadi lebih berliku-liku,

lisosom menjadi lebih banyak, aparat Golgi membesar dan retikulum endoplasma

kasar berkembang (Asti, 2015).

Makrofag berada dalam jaringan sehingga segera dapat merespon jika ada

patogen yang masuk ke jaringan. Makrofag diaktifkan oleh berbagai rangsangan,

dapat menangkap, memakan, dan mencerna antigen eksogen, seluruh

mikroorganisme. Makrofag 5-10 kali lebih besar dibanding monosit dan

menandung lebih banyak organel terutama lisosom. Komplrmrn, interferon dan

sitokin yaang berada pada makrofag semuanya memberi kontribusi dalam

pertahanan nonspesifik dan spesifik (Bratawijaya dan Rengganis, 2014).

E. Fagositosis makrofag

1. Fagositosis

Fagositosis berarti memakan sel, atau proses memakan dan mencerna sel

lain, bakteri, jaringan nekrosis, atau benda asing oleh sel-sel khusus yang disebut

fagosit. Fagosit adalah sel-sel darah putih yang terdapat di dalam aliran darah

(Sumawinata, 2010; Febriansyah, 2009).

Fagosit itu terdiri atas dua kelompok, yaitu:

1) Granulosit (lekosit polimorfonuklear) : 70% jumlah sel darah putih. Kelompok

ini terdiri atas tiga macam fagosit, yaitu:

a. Netrofil (menghasilkan senyawa yang dapat melepaskan oksigen reaktit) :

68% jumlah sel darah putih.

18
b. Eosinofil: 1% jumlah sel darah putih.

c. Basofil: 1% jumlah sel darah putih.

2) Agranulosit (sel-sel mononuklear) : 30% jumlah lekosit. Kelompok ini terdiri

atas 2 macam, yaitu:

a.Limfosit: 25% jumlah lekosit.

b. Monosit / makrofag : 5% jumlah lekosit (Febriansyah, 2009).

Meskipun berbagai sel dalam tubuh dapat melakukan fagositosis, tetapi sel

utama yang berperan dalam pertahanan non-spesifik adalah sel mononuklier

(monosit dan makrofag) (Hasdiana, 2012).

2. Proses fagositosis oleh sel makrofag

Makrofag dapat mengenali adanya patogen karena adanya reseptor pada

permukaannya yang dapat membedakan antara patogen dan sel host. Makrofag

memiliki kemampuan mengenal PAMPs, dan DAMPs karena memiliki sejumlah

PRPs, sehingga sangat penting dalam imunitas innate.

a. PAMPs adalah penanda pada mikroba yang membahayakan (patogen) untuk

manusia sehingga disebut Pathogen-Associated Moleculer (PAMPs). PAMPs

ini berbeda-beda tergantung jenis patogen (virus, bakteri gram negatif, bakteri

gram positif dan jamur). Penanda ini hanya ada pada mikroba patogen dan

tidak ada pada sel manusia, sehingga menjadi pembeda yang membuat

imunitas innate hanya berespon pada mikroba patogen dan tidak terhadap sel

sendiri.

b. DAMPs atau Damage-Associated Molecular Patterns adalah molekul

endogenous yang diproduksi atau dilepas oleh sel yang rusak atau mati.

19
 Kematian atau kerusakan sel dapat terjadi infeksi atau sebab lain sperti recun

kimia, trauma, terbakar, atau iskemia/hipoksia (steril injury).

c. PRPs (Pattern Recognition Receptors) adalah salah satu perangkat pada

imunitas innate untuk mengenal PAMPs atau DAMPs. PRPs berada pada

berbagai sel yang berperan dalam imunitas innate seperti fagosit (makrofag,

neutrofil, dan sel dendritik) dan sel epitel yang membatasi tubuh dengan

lingkungan luar. PRPs ini bisa berada pada (dieksresikan) pada membran

plasma, membran endosomal, dan dalam sitoplasma (sitosolik) yang berarti

imunitas innate bisa meresponi kehadiran mikroba luar diluar atau didalam

makrofag, neutrofil, dan sel dendritik (sebelum dan sesudah difagositosis).

Proses Fagositosis dan eliminasi mikroorganisme dapat dilihat pada Gambar

3.

Gambar 3 : Fagositosis dan eliminasi mikroorganisme

Sumber: Wahid dan Miskad, 2016

Makrofag menangkap mikroba melalui PRPs yang mengikat PAMPs pada

patogen. Jika PRPs sudah berikatan dengan PAMPs akan muncul sinyal dari PRPs

untuk aktivasi makrofag. Makrofag aktif akan memfagositosis mikroba sehingga

dengan lisosom membentuk fagolisosom. Selanjutnya, mikroba dihancurkan

20
dalam fagolisosom dengan menggunakan enzim lisozim, Reactive Oxygen

Species (ROS), dan Nitric Oxide (NO) (Wahid dan Miskad, 2016).

F. Imunomodulator

Imunomodulator merupakan zat ataupun obat yang dapat mengembalikan

ketidakseimbangan sistem kekebalan yang terganggu dengan cara merangsang

dan memperbaiki fungsi sistem kekebalan (Bratawidjaja, 2002). Imunomodulator

dibagi menjadi 3 kelompok berdasarkan mekanisme kerjanya:

1. Imunostimulator, berfungsi untuk meningkatkan fungsi dan aktivitas sistem

imun

2. Imunoregulator, artinya dapat meregulasi sistem imun

3. Imunosupresor yang dapat menghambat atau menekan aktivitas sistem imun

(Wiedosari, 2014).

Bedasarkan sumbernya, imunomodulator dapat dibagi kepada dua yaitu :

1. Imunomodulator sintesis dan imunomodulator biologi. Imunomodulator

sintesis adalah seperti Isoprinosin, Levamisol, Vaksin BCG dan banyak lagi

(Devagaran dan Diantini, 2012).

2. Imunostimulan biologi adalah sitokin, antibodi monoklonal, jamur dan

tanaman obat (herbal) (Suhirman dan Winarti, 2007).

Imunomodulator digunakan terutama pada penyakit imunodefisiendi

infeksi kronis dan kanker. Adanya senyawa-senyawa kimia yang dapat

meningkatkan aktivitas sistem imun sangat membantu untuk mengatasi penurunan

sistem imun dan senyawa-senyawa tersebut dapat diperoleh dari tanaman (Chairul

dan Praptiwi, 2011).

21
G. Mencit (Mus musculus)

Mencit merupakan hewan umum yang digunakan sebagai hewan

percobaan, yaitu sekitar 40-80%. Mencit memiliki banyak keunggulan sebagai

hewan percobaan yaitu siklus jumlah anak per kelahiran banyak, dan terdapat

kemiripan sistem fisiologis tubuh dengan manusia (Moriwaki, 1994). Mencit

(Mus musculus) dapat dilihat pada Gambar 4.

Gambar 4: Mencit
Sumber: Dokumentasi pribadi
Klasifikasi mencit adalah (Arrington, 1972) :

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mamalia

Ordo : Rotentia

Famili : Muridae

Genus : Mus

Spesies : Mus musculus L.

1. Morfologi

Mencit albino merupakan mencit yang berwarna putih. Memiliki kumis

panjang dan memiliki kuku yang tajam serta ukuran tubuhnya sangat kecil

22
dibanding tikus (Malole, 1989). Mus muculus jantan dan betina muda sukar untuk

dibedakan. Mus musculus betina dapat dikenali karena jarak yang berdekatan

antara lubang anus dan lubang genitalnya. Testis pada Mus musculus jantan pada

saat matang seksual terlihat sangat jelas, berukuran relatif besar dan biasanya

tidak tertutup oleh rambut (Muliani, 2011).

2. Karakteristik

Adapun karakteristik mencit meliputi (Kusumawanti, 2004) :

Berat badan

Jantan (gram) : 20-40

Betina (gram) : 18-35

Lama hidup (tahun) : 1-3

Temperatur tubuh (ºC) : 36,5

Kebutuhan air : ad libitum

Kebutuhan makanan (g/hari) : 4-5

Puberitas (hari) : 28-49

Lama kebuntingan (hari) : 17-21

Mata membuka (hari) : 12-13

Tekanan darah

Systolik (mmHg) : 133-160

Distolik (mmHg) : 102-110

Frekuensi respirasi (/menit) : 163

Glukosa : 62,8-176 mg/dL

23
 H. Kerangka Konsep

Secara empiris digunakan sebagai bahan

campuran masakan dan pengobatan pasca
demam tifoid.
Buah wualae

Ekstrak etanol Buah

wualae

Polifenol, alkaloid, flavonoid, steroid,

saponin dan minyak atsiri.
Senyawa metabolit
sekunder

Peningkatan aktivitas
fagositosis makrofag

Keterangan :

Variabel bebas

Variabel terikat

Gambar 5: Kerangka Konsep

24
 B A B III
METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan mulai bulan Oktober 2016 hingga Mei 2017

bertempat di Laboratorium Farmasi Fakultas Farmasi Universtas Halu Oleo, dan

Pusat Penelitian Biologi, LIPI Cibinong.

B. Jenis Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental jenis eksperimen

sungguhan (True experimental). Rancangan penelitian eksperimen yang

digunakan adalah : The Randomized Posttest Only Control Group Design.

C. Bahan Peneltian

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah buah wualae

(Etlingera elatior (Jack) R.M Smith), mencit jantan, Staphylococus aureus, kapas,

tissue, aluminium foil, etanol 96%, alkohol 70%, methanol, aquadest, Na-CMC

0,5%, NaCl fisiologis, phosphate buffered saline (PBS), eter, pewarna giemsa,

minyak emersi, nutrient agar (NA), ekstra meniran komersional (Stimuno®).

D. Alat/Instrumen Penelitian

Alat-alat yang digunakan adalah Rotary evaporator (Buchi ®), autoklaf,

blender (Philips), erlenmeyer (Pyrex), timbangan analitik (Precisa ®), gelas ukur

(Pyrex®), gelas kimia, oven (Gallenkamp Civilab-Australia), inkubator, botol vial,

neraca analitik (Stuart), Laminar Air Flow (LAF) bunsen, pipet tetes, pipet ukur, ,

tabung reaksi, batang pengaduk, kertas saring, botol gelap, toples, cawan porselin,

25
kaca objek, kaca preparat, mikroskop elektrik, spektrofotometer 20 D, kuvet,

stirrer, pinset dan pisau bedah, elelktromantel, ose bulat, spoit, kandang mencit.

E. Variabel

Variabel dalam penelitian ini terdiri atas 3 variabel yaitu variabel bebas,

variabel terikat, dan variabel terkendali.

1. Variabel bebas

Variabel bebas adalah pemberian ekstrak etanol buah wualae (Etlingera

elatior (Jack) R.M Smith).

2. Variabel terikat

Variabel terikat pada penelitian ini adalah aktivitas fagositosis makrofag

mencit jantan.

3. Variabel terkendali

Variabel terkendali pada peneltian ini antara lain makanan, minuman,

suhu, kandang, jenis kelamin.

F. Definisi Operasional

Untuk mengindari adanya kekeliruan maka dijelaskan definisi operasional

variabel sebagai berikut:

1. Ekstrak etanol buah wualae adalah maserat yang diperoleh dari tanaman

wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) yang diekstraksi dengan metode

maserasi menggunakan pelarut etanol 96% yang kemudian diuapkan dengan

menggunakan rotary vacum evaporator dan water bath.

26
2. Skrining fitokimia merupakan metode yang digunakan untuk menganalisis

kandungan metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol buah

wualae dengan pereaksi warna.

3. Mencit jantan adalah hewan uji yang digunakan dalam penelitian dan ditandai

dengan adanya testis dan penis pada bagian anatomi yang mudah diamati saat

badan hewan uji dibalik.

4. Efek imunomodulator ditandai dengan peningkatan aktivitas fagositosis

makrofag yang dibandingkan dengan kelompok kontrol.

5. Aktivitas fagositosis adalah jumlah sel fagosit dan sel makrofag yang secara

aktif melakukan proses fagositosis dalam 100 sel dengan banyaknya sel

makrofag yang dinyatakan dalam bentuk persen (%).

G. Prosedur Penelitian

1. Determinasi tanaman

Sampel yang digunakan dilakukan determinasi untuk memastikan bahwa

tanaman merupakan sampel yang dimaksud, bukan tanaman lain. Determinasi

tanaman dilakukan di Pusat Penelitian Biologi LIPI, Cibinong.

2. Penyiapan sampel

Sampel buah wualae sebanyak 19,04 kg diperoleh dari Kelurahan

Sambeani, Kecamatan Abuki, Kabupaten Konawe. Sampel buah wualae (E.

Elatior) dikumpulkan, dilakukan sortasi basah, dipisahkan dari tangkai buah,

dicuci dengan air mengalir, kemudian dipotong menjadi ukuran yang lebih kecil,

dikeringkan dibawah sinar matahari ditutupi menggunakan kain hitam atau

27
dengan oven pada suhu 50oC. Setelah kering dilakukan sortasi kering dan

selanjutnya dihaluskan menjadi serbuk simplisia.

3. Ekstraksi

Metode ekstraksi yang digunakan yaitu metode maserasi. Serbuk buah

wualae (E. elatior) sebanyak 1,8 kg dimasukan kedalam wadah tertutup dan

direndam dengan menggunakan pelarut etanol 96% selama 3 x 24 jam.

Perbandingan 1:2 (jumlah pelarut yang digunakan dua kali dari jumlah serbuk

halus tanaman) (Harborne, 2006). Setiap 1 x 24 jam dilakukan penyaringan dan

penggantian pelarut baru sehingga diperoleh filtrat I, II, dan III. Filtrat

dikumpulkan dan dipekatkan dengan penguapan berputar menggunakan rotary

vacum evaporator pada suhu 50oC hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak

ditimbang untuk mengetahui bobotnya.

4. Uji kandungan senyawa

a. Senyawa flavonoid

Sebanyak 2 ml sampel ditambahkan HCl pekat, kemudian ditambahkan

0.2 g bubuk Mg, hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah tua

(magenta) dalam waktu 3 menit (Sastrawan, 2013).

b. Senyawa saponin

Sebanyak 2 ml sampel ditambahkan air suling dididihkan selama 2-3

menit, dan selanjutnya didinginkan, kemudian dikocok kuat-kuat. Hasil positif

ditunjukan dengan terbentuk buih putih yang stabil (Sastrawan, 2013).

28
c. Senyawa tannin

Sebanyak 1 ml larutan ekstrak dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan 2-3 tetes larutan FeCl3 1%. Hasil positif ditunjukan dengan

terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau (Sastrawan, 2013).

d. Senyawa alkaloid

Uji alkaloid dilakukan dengan terlebih dahulu melarutkan 1 gram ekstrak

buah ke dalam pelarutnya yaitu etanol. Selanjutnya sebanyak 2 ml larutan tersebut

diuapkan pada cawan porselen menggunakan hotplate. Residu dilarutkan dengan 5

ml HCl 2N. Ditambahkan pereaksi Dragendorff sebanyak 3 tetes Terbentuknya

endapan jingga pada tabung ketiga menunjukkan adanya alkaloid (Minarno,

2015).

e. Senyawa terpenoid

Ekstrak dilarutkan dalam 0,5 mL kloroform, kemudian ditambahkan 0,5

mL asetat anhidrida dan menetesi campuran dengan 2 mL H2SO4 pekat melalui

dinding tabung, terbentuk warna coklat kemerahan menunjukkan positif terpenoid

(Setyowati, dkk., 2014).

5. Karakteristik ekstrak

Karakterisasi ekstrak meliputi penetapan sari larut air, sari larut etanol,

penetapan kadar air, dan kadar abu.

a. Penetapan sari larut air

Lebih kurang ditimbang 5 g ekstrak dimasukkan ke dalam botol bertutup

dan dimaserasi selama 24 jam dengan 100 mL air. Kemudian dikocok dengan

menggunakan shaker selama 6 jam kemudian disaring. Hasil saringan diambil 20

29
mL filtrat dan masukkan ke dalam cawan yang susah ditara. Cawan dipanaskan

pada suhu 110oC sampai berat konstan (Isnawati, dkk., 2013).

b. Penetapan sari larut etanol.

Lebih kurang ditimbang 5 gram ekstrak dinasukkan ke dalam botol

bertutup dan dimaserasi selama 24 jam dengan 100 mL etanol 95 %. Kemudian

dikocok dengan menggunakan shaker selama 6 jam kemudian disaring. Hasil

saringan diambil 20 mL filtrat dan masukkan ke dalam cawan yang susah ditara.

Cawan dipanaskan pada suhu 110oC sampai berat konstan (Isnawati, dkk., 2013).

c. Penetapan kadar air

Kadar air ditentukan dengan menimbang 3 g sampel. Sampel dimasukan

ke dalam oven pada suhu 105oC selama 3-5 jam, kemudian dikeluarkan dari oven

dan didinginkan dalam desikator selama 30 menit, setelah itu sampel ditimbang.

Perlakuan ini dilakukan beberapa kali hingga berat sampel konstan (Sastrawan,

dkk., 2013).

d. Penetapan Kadar Abu

Sebanyak 1 g ekstrak ditimbang dengan seksama ke dalam krus dan

ditimbang dahulu (A0), dipijarkan perlahan-lahan. Kemudian suhu dinaikkan

secara bertahap hingga 600 ± 25ºC sampai bebas karbon, selanjutnya didinginkan

dalam desikator serta ditimbang berat abu (A1). Kadar abu dihitung dalam persen

terhadap berat sampel awal (Depkes, 2000).

30
6. Penyiapan bakteri uji .

a. Sterilisasi Alat

Sterilisasi dilakukan pada alat-alat gelas dan bedah yang terdiri dari tabung

reaksi, batang pengaduk, pinset, erlenmeyer dan pisau bedah dibungkus dengan

kertas. Alat-alat yang telah dibungkus dimasukan kedalam autoklaf dan

disterilkan selama 15 menit pada suhu 121oC (Waluyo, 2008).

b. Pembuatan Media

Pembuatan media dilakukan dengan cara menyiapkan bahan-bahan untuk

medium yaitu dengan menimbang media Nutrient Agar (NA) sebanyak 2,3 g

kemudian dilarutkan dengan aquades sebanyak 100 ml dalam erlenmeyer

kemudian ditutup dengan alumunium foil. Selanjutnya dipanaskan dan diaduk

menggunakan magnetik stirrer hingga mendidih. Kemudian disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 15 Psi selama 15 menit (Titaley, dkk.,

2014).

c. Penyiapan bakteri uji

Bakteri uji yang digunakan Staphylococcus aureus (SA) yang ditanam

pada media agar nutrien miring dan diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35-

370C (Nugroho, 2012).

d. Penyiapan suspensi bakteri uji

Bakteri S. aureus yang telah diinkubasi selama 24 jam, disuspensikan

dalam NaCl fisiologis 0,9%. Kekeruhan bakteri diukur sesuai dengan standar Mc

Farlan 0,5 menggunakan spektronik 20 D pada panjang gelombang 625 nm.

31
Larutan Mc Farlan dibuat dengan komposisi 0,05 ml BaCl2 1% dan 9,95 ml

H2SO4 (Ginting, 2012; Assidqi, dkk., 2012).

7. Pengelompokan hewan uji

Hewan uji dikelompokkan berdasarkan hasil perhitungan menggunakan

rumus federer (t-1) (n-1) ≥ 15, dengan n adalah jumlah hewan yang diperlukan

dan t adalah jumlah kelompok perlakuan (Ridwan, 2013).

(t-1)(n-1) ≥ 15

(6-1)(n-1) ≥ 15

5n-5 ≥ 15

5n ≥ 20

n ≥ 4.

Hewan uji dikelompokan menjadi 6 kelompok dimana setiap kelompok

terdiri dari 5 hewan uji. Kelompok tersebut terdiri dari kelompok perlakuan

(dosis 100 mg/kg BB, dosis 200 mg/kg BB, dosis 300 mg/kg BB, dosis 400 mg/kg

BB), kelompok kontrol positif (ekstrak meniran komersial®), dan kelompok

kontrol negatif (Na-CMC 0,5%). Kelompok kontrol positif digunakan sebagai

kelompok pembanding untuk melihat perbandingan pengaruh ekstrak dengan

obat/suplemen yang telah diketahui efektif dalam meningkatkan daya tahan tubuh,

sedangkan kelompok kontrol negatif digunakan untuk melihat perbandingan

peningkatan aktivitas fagositosis makrofag pada mencit antara kelompok yang

diberikan perlakuan dan yang tidak diberikan perlakuan.

32
8. Aklitimasi hewan uji

Sebanyak 30 mencit yang sehat (20-30 gram) dipilih untuk penelitian ini.

Mencit diberi makan dan minum, dan diaklitimasi selama 7 hari sebelum

melakukan percobaan (Chandu, dkk., 2011) dengan tujuan untuk memberi waktu

pada hewan uji agar beradaptasi dengan lingkungan nya yang baru (Haribi, dkk.,

2009). Hewan uji dikandangkan pada kondisi lingkungan standard (suhu 25±1oC,

kelembaban 55±5% dan fase terang gelap =12:12 jam (Warditiani, dkk., 2015).

9. Penyiapan bahan

a. Pembuatan suspensi Na-CMC 0,5%

Ditimbang Na-CMC sebanyak 0,5 g kedalam gelas kimia ditambahkan

100 mL aquades diaduk sambil dipanaskan di atas hot plate. Didinginkan selama

15 menit hingga diperoleh massa yang transparan, lalu diaduk sampai homogen.

b. Pembuatan Sediaan Uji

Sediaan uji dibuat dengan mensuspensikan ekstrak uji kedalam Na-CMC

0,5% dengan volume pemberian yang disesuaikan dengan berat badan hewan

coba. Suspensi yang telah siap diberikan per oral kehewan uji.

c. Pembuatan Sediaan Pembanding

Sediaan pembanding ekstrak meniran komersial diberikan dalam bentuk

suspensi dalam Na-CMC 0,5% sesuai dosis oral efektif manusia 50 mg/kgBB.

Dosis pemberian ekstrak herba meniran komersial pada mencit dikonversikan

berdasarkan perhitungan konversi dosis. Faktor konversi dosis manusia ke mencit

dengan berat badan 20 g adalah 0,0026.

33
10. Perlakuan hewan uji

Perlakuan dilakukan setiap 1 hari sekali selama 7 hari secara peroral sesuai

dengan volume pemberian. Kelompok I, mencit diberikan ekstrak dosis

100mg/kgBB. Kelompok II, mencit diberikan ramuan dosis 200mg/KgBB.

Kelompok III, mencit diberikan ramuan dosis 300 mg/KgBB. Kelompok IV,

mencit diberikan ramuan dosis 400 mg/KgBB, kelompok V sebagai kontrol

positif yang diberikan ekstrak meniran komersial dosis 0,13mg/kgBB, dan

kelompok VI sebagai kontrol negatif yang diberikan NaCMC 0,5%.

11. Uji fagositosis

Pada hari kedelapan setiap mencit diinfeksi dengan 0,5 mL suspensi

bakteri SA dan secara intraperitoneal, dibiarkan selama satu jam. Mencit

dianastesi dengan eter lalu dibedah perutnya dengan menggunakan gunting bedah

dan pinset steril. Jika ditemukan cairan peritoneum dalam jumlah sedikit pada

perut, maka ditambahkan larutan Phosphat buffered saline (PBS) pH 7,8 steril

sebanyak 1-2ml, digoyang-goyangkan secara perlahan kemudian diambil cairan

peritoneum dengan spoit 1 cc. Cairan peritoneal dipulas pada gelas obyek dan

difiksasi dengan metanol selama 5 menit, kemudian diwarnai dengan pewarnaan

Giemsa 10%, didiamkan 20 menit, dibilas dengan air mengalir. Setelah sediaan

kering, dilihat di bawah mikroskop menggunakan minyak emersi dengan

perbesaran (10x–1000x) (Nugroho, 2012).

12. Menghitung aktivitas fagositosis

Aktivitas imunostimulan ditentukan dengan menghitung aktivitas

fagositosis sel makrofag peritonium mencit. Nilai aktivitas fagositosis (SPA)

34
adalah persentase sel makrofag yang aktif melakukan proses fagositosis di antara

100 sel makrofag (Marusin dan Chairul, 2012)

Aktivitas fagositosis % = × 100%

13. Analisis Data

Metode analisis data yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode

Analysis of Variance (ANOVA) one-way, dengan taraf kepercayaan 95% dan

tingkat signifikansi (tingkat kesalahan 5% (α = 0,05). Metode ANOVA one way

digunakan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh ekstrak etanol buah wualae

terhadap peningkatan aktivitas fagositosis makrofag. Interpretasi data ANOVA

yang diamati yaitu nilai signifikansi (sig). Jika data sig ang diperoleh:

1. Sig > 0,05, maka data dikatakan tidak signifikan atau ekstrak buah wualae

tidak memberikan perbedaan bermakna terhadap peningkatan aktivitas

fagositosis sel makrofag.

2. Sig < 0,05, maka data dikatakan signifikan atau ekstrak buah wualae

memberikan perbedaan yang bermakna terhadap peingkatan aktivitas

fagositosis sel makrofag.

Analisis data dilanjutkan dengan analisis post hoc Tukey. Uji post hoc

dilakukan dalam penelitian ini untuk mengetahui konsentrasi efektif ekstrak buah

wualae yang mampu meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag. Uji ini

dilakukan apabila dari hasil uji statistik ANOVA one way menunjukan terdapat

pengaruh yang nyata (data sig < taraf kesalahan 0,05). Analisis data secara

ANOVA dan Tukey menggunakan aplikasi statistical product and service solution

(SPSS) versi 21.0 for windows 8.

35
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman wualae (Etlingera elatior (Jack) R.M Smith)

dilakukan untuk memastikan kebenaran sampel yang digunakan dalam penelitian.

Hal tersebut dilakukan dengan memperhatikan ciri-ciri morfologi yang ada dalam

tanaman wualae dengan menggunakan petunjuk pustaka dibuktikan di Pusat

Penelitian Biologi, LIPI Cibinong (Rahayu, 2014). Hasil determinasi dapat dilihat

pada Lampiran 2.

B. Penyiapan sampel

Sampel buah wualae yang digunakan diperoleh dari Kelurahan Sambeani,

Kecamatan Abuki, Kabupaten Konawe. Buah wualae yang dikumpulkan

sebanyak 19,04 kg adalah buah yang masak yang ditandai dengan buah berwarna

merah. Tahap selanjutnya dilakukan sortasi basah pada saat tanaman masih segar

terhadap bagian buah yang rusak. Buah lalu dicuci di bawah air untuk

membersihkan kotoran yang melekat pada buah wualae (Prasetyo dan Inoriah,

2013). Sampel buah yang telah dicuci kemudian dipisahkan dari tangkai buah dan

dilakukan perajangan atau pengubahan bentuk untuk mempermudah proses

pengeringan, pengepakan, dan penghalusan yang dilakukan dengan pisau

(Prasetyo dan Inoriah, 2013). Sampel buah kemudian dikeringkan untuk

mengurangi kadar air yang dapat menjadi media pertumbuhan kapang dan jasad

renik lainnya sehingga simplisia tidak mudah rusak dan dapat disimpan lebih lama

(Prasetyo dan Inoriah, 2013). Pengeringan dilakukan dengan cara dijemur

36
dibawah sinar matahari dan ditutup dengan kain hitam agar sampel tidak terkena

sinar matahari secara langsung sehingga kandungan aktif dalam simplisia tidak

rusak dan juga memiliki sirkulasi udara yang baik sehingga mengoptimalkan

proses pengeringan (Utomo, dkk., 2009). Sampel kemudian disortasi kering

terhadap pengotor yang tertinggal dari proses sebelumnya. Sempel buah kemudian

dihaluskan dengan menggunakan blender untuk mengubah ukuran sampel

menjadi lebih kering dengan luas permukaan lebih besar hingga diperoleh serbuk

simplisia sebanyak 1870 gram.

C. Ekstraksi

Maserasi merupakan metode ekstrasi yang digunakan dalam penelitian ini.

Metode ekstraksi maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan

menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pegadukan pada

temperatur ruang (Depkes RI, 2000).

Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 96%. Pemilihan

etanol sebagai pelarut adalah karena etanol relatif kurang toksik dibandingkan

metanol, murah, mudah didapat dan ekstrak yang diperoleh tidak mudah

ditumbuhi jamur dan bakteri serta umum digunakan dalam pembuatan ekstrak.

Disamping itu, etanol bersifat semipolar sehingga memungkinkan senyawa polar

maupun non polar yang terdapat dalam simplisia dapat tertarik.

Pengulangan proses perendaman dalam maserasi merupakan upaya untuk

mendapatkan sebanyak mungkin senyawa yang terekstraksi. Selain itu,

penggantian pelarut dengan pelarut yang sama (remaserasi) juga dapat

mempengaruhi jumlah rendemen yang diperoleh. Maserasi pada penelitian ini

37
dilakukan selama 3 hari dan dilakukan remaserasi setiap 1x24 jam menggunakan

pelarut yang sama.

Hasil maserasi berupa maserat kemudian dipekatkan dengan menggunakan

vacum rotary evaporator untuk memisahkan maserat dari pelarutnya sehingga

dihasilkan ekstrak dengan kandungan kimia tertentu sesuai yang diinginkan

(Nugroho, dkk., 1999).

Ekstrak cair yang diperoleh kemudian disimpan dalam cawan porselen

yang kemudian dipekatkan menggunakan water bath pada suhu 60°C.

Penggunaan water bath untuk menguapkan pelarut etanol sehingga terpisah dari

ekstrak hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 96,2148 gram dengan nilai

rendamen 5,1451% (Lampiran 3). Rendemen ekstrak merupakan persentase berat

ekstrak dari berat kering sampel (Senja, dkk., 2014).

D. Skrining fitokimia

Skrining fitokimia dilakukan untuk memberikan gambaran tentang

golongan senyawa yang terkandung dalam tanaman yang sedang diteliti (Minarno,

2015). Komponen yang terdapat dalam ekstrak buah wualae dianalisis golongan

senyawanya dengan tes uji tabung dengan beberapa pereaksi untuk golongan

senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, dan terpenoid. Hasil skrining

fitokimia buah wualae disajikan pada Tabel 1.

38
 Tabel 1: Hasil skrining fitokimia buah wualae.

Uji Pereaksi Rujukan Hasil Kesimpulan

Fitokimia

Alkaloid Dragendorf Terbentuknya endapan coklat Terbentuk Positif

endapan
coklat

Flavonoid Mg + HCl P Terjadi perubahan warna Terjadi

menjadi merah atau jingga perubahan Positif
(Prashant, dkk., 2011). warna
menjadi
merah.

Saponin Air Timbulnya busa (Marliana, Tidak Negatif

dkk., 2005). terbentuk
busa.

Tanin FeCl3 Terbentuknya warna hijau Terbentuk Positif

kehitaman pada ekstrak setelah warna hijau
ditambahkan FeCl3 1% kehitaman
(Harborne, 1987).

Terpenoid Liebermann- Hasil positif yaitu Perubahan Positif

buchard terbentuknya warna coklat warna
(Siadi, 2012). menjadi
coklat

39
1. Alkaloid

Identifikasi alkaloid menggunakan uji Dragendorff ditandai dengan

terbentuknya endapan coklat atau kekuningan yang merupakan kompleks kalium-

alkaloid. Pada pembuatan pereaksi Dragendorff, bismuth nitrat dilarutkan dalam

HCl agar tidak terjadi reaksi hidrolisis karena garam-garam bismuth mudah

terhidrolisis membentuk ion bismutil (BiO+) yang reaksinya ditunjukkan pada

gambar 6.

Bi3+ + H2O BiO+ + 2H+

Gambar 6: Reaksi hidrolisis bismut

Agar Bi3+ tetap berada dalam larutan, maka larutan itu ditambah asam

sehingga kesetimbangan akan bergeser ke arah kiri. Selanjutnya, ion Bi 3+ dari

bismut nitrat bereaksi dengan kalium iodida membentuk endapan hitam Bismut

(III) iodida yang kemudian melarut dalam kalium iodida berlebih membentuk

kalium tetraiodobismutat (Svehla, 1990). Pada uji alkaloid dengan Dragendorff,

nitrogen digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang

merupakan ion logam. Reaksinya ditunjukan pada Gambar 7.

Bi (NO3)3 + 3KI BiI3 + 3KNO3

coklat

BiI3 + KI K [BiI4]
Kalium tetraiodobismutat

+ K[BiI4] + [BiI4]-
Oranye
N N
K+
Kalium-Alkaloid
endapan

Gambar 7: Reaksi uji Dragendorff

40
2. Flavonoid

Identifikasi flavonoid menggunakan uji Wilstater menunjukkan warna

jingga yang berarti positif adanya flavonoid. Magnesium dan asam klorida pada

uji Wilstater bereaksi membentuk gelembung-gelembung yang merupakan gas H2,

sedangkan logam Mg dan HCl pekat pada uji ini berfungsi untuk mereduksi inti

benzopiron yang terdapat pada struktur flavonoid sehingga terbentuk perubahan

warna menjadi merah atau jingga (Prashant, dkk., 2011). Jika dalam suatu ekstrak

tumbuhan terdapat senyawa flavonoid akan terbentuk garam flavilium saat

penambahan Mg dan HCl yang berwarna merah atau jingga. Mekanisme

pembentukan garam flavium ditunjukan pada Gambar 8.

O
O
HCl
+ Cl

OH
OH

O
OH

O O

Cl + Cl

OH OH

OH OH

Gambar 8: Mekanisme reaksi pembentukan garam flavilium

3. Saponin

Identifikasi adanya saponin menggunakan uji Forth menunjukkan pada

ekstrak tidak dibuktikan adanya saponin dengan tidak terbentuknya busa.

Timbulnya busa pada uji Forth menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai

41
kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan

senyawa lainnya (Marliana, dkk., 2005).

4. Tanin

Identifikasi tanin menggunakan pereaksi besi (III) klorida. Hasil yang

diperoleh adalah positif mengandung tanin dengan memberikan warna kehitaman.

Penambahan ekstrak dengan FeCl3 1% dalam air menimbulkan warna hijau,

merah, ungu, atau hitam yang kuat. Terbentuknya warna hitam pada ekstrak

setelah ditambahkan FeCl3 1% karena tanin akan bereaksi dengan ion Fe3+

membentuk senyawa kompleks (Harborne, 1987). Reaksi tanin dengan FeCl3

ditunjukan pada Gambar 9.

OH

OH

HO O
+ FeCl3

OH n

HO
OH

OH
HO

HO
Fe
OH
HO
OH

HO O
O

OH
OH

HO

Gambar 9: Reaksi antara Tanin dengan FeCl3

42
5. Terpenoid

Identifikasi terpenoid menggunakan uji Lieberman-Buchard (asetat

anhidrida-H2SO4 pekat). Identifikasi terpenoid memberikan hasil positif yaitu

terbentuknya warna coklat pada batas larutan saat ditambahkan dengan H2SO4.

Perubahan tersebut dikarenakan terjadinya oksidasi pada golongan senyawa

terpenoid melalui pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi (Siadi, 2012)

Gambar 10.

O O O
H2SO4
CH3 C O C CH3 CH3 C OH
O
OH O C CH3

Gambar 10: Reaksi uji Liebermann-Buchard

E. Karakterisasi Ekstrak

Karakterisasi ekstrak etanol buah wualae (E. elatior) dilakukan sebagai

upaya untuk menjamin bahwa ekstrak mempunyai nilai parameter tertentu yang

konstan dan ditetapkan (dirancang dalam formula) terlebih dahulu (Depkes RI,

2000). Karekterisasi yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi parameter

spesifik ekstrak dengan pemeriksaan organoleptik, penentuan kadar sari larut air

dan sari larut etanol, dan parameter non spesifik yang meliputi penentuan kadar

air dan kadar abu. Hasil karakterisasi dapat dilihat pada Tabel 2.

43
Tabel 2: Hasil karakterisasi ekstrak

Jenis karakterisasi Hasil

Organoleptis
Bentuk Kental
Warna Merah tua
Bau Khas
Kadar air 5,26%
Kadar abu 6,28%
Kadar sari larut etanol 61,07%
Kadar sari larut air 41,65%

Pemeriksaan organoleptik ekstrak yang meliputi bentuk, warna, rasa dan bau

diperoleh hasil ekstrak yaitu berkonsistensi kental, berwarna merah tua dan berbau

khas. Penentuan parameter organoleptik ekstrak ini bertujuan untuk memberikan

pengenalan awal ekstrak secara objektif dan sederhana yang dilakukan dengan

menggunakan panca indera (Angelina, dkk., 2015).

Penentuan kadar air ditetapkan untuk menjaga kualitas ekstrak yaitu untuk

menghindari pertumbuhan jamur dalam ekstrak (Angelina, dkk., 2015). Kadar air

pada ekstrak buah wualae adalah 5,26%. Kadar air ekstrak sudah memenuhi

persyaratan dimana kadar air ekstrak tidak boleh melebihi 10% (Ditjen POM,

2008). Kadar air dalam ekstrak yang melebihi 10% akan memudahkan tumbuhnya

jamur dan kemungkinan akan membahayakan kesehatan (Isnawati, 2013).

Penentuan kadar abu bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan

mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya

ekstrak. Menurut Farmakope herbal I kadar abu tidak lebih dari 7%. Kadar abu

44
ekstrak buah wualae adalah 6,28% yang menunjukkan bahwa ekstrak tidak

tercemar logam-logam.

Kadar sari larut air dan etanol menunjukkan senyawa kimia yang diduga

berperan dalam menentukan efek farmakologi. Semakin tinggi persentase kadar

sari maka semakin baik ekstrak tersebut (Isnawati, 2013) Kadar sari larut air

ekstrak buah wualae adalah 41,65% dan kadar sari larut etanol elstrak buah

wualae adalah 61,07%

F. Uji Efek Imunomodulator

Pengujian efek imunomodulator pada penelitian ini dilakukan untuk

mengetahui efek imunomodulator ekstrak etanol buah wualae (E. elatior)

terhadap peningkatan aktivitas fagositosis makrofag mencit jantan.

Ekstrak etanol buah wualae yang diujikan divariasikan menjadi 4 dosis,

yaitu dosis 100 mg/kgBB, dosis 200 mg/kgBB, dosis 300 mg/kgBB, dan dosis

400 mg/kgBB. Pemilihan variasi dosis ini didasarkan pada uji pendahuluan yang

telah dilakukan dengan menggunakan ekstrak etanol buah wualae dosis 50

mg/kgBB, 100mg/kgBB dan 200mg/kgBB. Pada uji pendahuluan tersebut pada

dosis 100 mg/kgBB menunjukan adanya peningkatan aktivitas fagosistosis namun

masih berbeda jauh dengan kontrol positif yang digunakan sehingga dilakukan

variasi dosis pada penelitian ini untuk mengetahui dosis efektif ekstrak etanol

buah wualae sebagai imunomodulator. Immunomodulator pembanding atau

sebagai kontrol positif digunakan meniran (Phyllantus niruri L.). Hasil riset

praklinik (Aldi, dkk., 2014) menunjukkan ekstrak Phyllantus niruri L. dapat

memodulasi sistem imun. Kontrol negatif yang digunakan adalah Na-CMC karena

45
Na-CMC bersifat plasebo (tidak memiliki efek farmakologi) sehingga tidak akan

memperngaruhi hasil yang diperoleh.

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit jantan. Hal

ini karena sistem imun mencit jantan tidak dipengaruhi oleh hormon esterogen

seperti halnya pada mencit betina (Aldi, dkk., 2013). Estrogen di duga dapat

menghambat dalam proses fagositosis oleh makrofag (Rasyid, dkk., 2008). Alasan

lainnya karena mencit mempunyai fisiologis mirip manusia dan mudah untuk

diperlakukan (Aldi dkk, 2013).

Pemberian ekstrak hewan uji dilakukan selama 7 hari berturut-turut secara

per oral sebanyak satu kali sehari dengan tujuan untuk menstimulasi sistem imun

dari masing-masing kelompok hewan uji. Pada hari kedelapan setiap mencit

diinfeksi dengan 0,5 mL suspensi bakteri S. aureus secara intraperitoneal dan

didiamkan selama 1 jam sebelum dilakukan pembedahan. S. aureus digunakan

karena merupakan bakteri gram positif yang dapat menyebabkan infeksi baik pada

manusia maupun hewan. Jenis bakteri gram positif ini mampu mengikat warna

giemsa dengan jelas sehingga memudahkan dalam perhitungan di bawah

mikroskop. Bakteri ini juga tidak mengandung protein A, yaitu protein yang

bersifat antifagositik sehingga S. aureus tidak dapat menghindar dari fagositosik

makrofag peritoneum (Hariyanti, dkk., 2015).

Peningkatan aktivitas makrofag ditandai dengan bentuk dan ukuran

makrofag yang bertambah besar dengan penjuluran pseudopodi yang sangat

bervariasi. Fagosomnya muncul membran yang menjadi lebih berliku-liku,

lisosom menjadi lebih banyak, aparat golgi membesar dan retikulum endoplasma

46
kasar berkembang (Tjahati, 2004). Perbedaan antara makrofag aktif dan tidak

aktif dapat dilihat pada Gambar 11 yang merupakan apusan darah tipis yang

diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000x.

Gambar 11: Apusan darah tipis perbesaran 1000x (A) Makrofag aktif,
(B) Makrofag tidak aktif

Nilai aktivitas fagositosis makrofag peritoneum mencit dapat dihitung dari

makrofag yang aktif melakukan fagositosis diantara 100 jumlah sel yang

dinyatakan dalam bentuk persen dan dapat dilhat pada Tabel 3.

Tabel 3: Hasil aktivitas fagositosis makrofag aktif

Kelompok/perlakuan Jumlah sel yang teraktivasi (%) %Rata-

1 2 3 4 rata
K.Negatif 36% 37% 35% 38% 38%
K.Positif 69% 61% 69% 56% 63.75%
Kelompok dosis I 47% 44% 41% 51% 45.75%
Kelompok dosis II 65% 58% 60% 56% 59.70%
Kelompok dosis II 62% 58% 64% 60% 61%
Kelompok dosis IV 68% 69% 69% 79% 71.25%

Berdasarkan tabel diatas dapat dilihat rata-rata persen aktivitas fagositosis

makrofag. Nilai rata-rata persen fagositosis makrofag dosis 100mg/kgBB adalah

45.75%, dosis 200mg/kgBB adalah 59.70%, dosis 300mg/kgBB adalah 61%,

47
dosis 400mg/kgBB adalah 71.25%, kelompok kontrol positif sebesar 63.75%, dan

kelompok kontrol negatif adalah 36.50%. Adapun grafik peningkatan aktivitas

fagositosis dapat dilihat pada Gambar 12.

Persen Aktivitas

71,25%
80,00% 63,75% 61,00%
59,70%
K.Negatif
K.Negatif
60,00% 46% K.Positif
K.Positif
36,00% K.D.100mg
Dosis 1
40,00% K.D.200
Dosismg2
20,00% D.300mg
K.Dosis 3
D.400mg
K.Dosis 4
0,00%
K.Negatif K.Positif K. Dosis K. Dosis K.Dosis 3 K.Dosis 4
1 2

Gambar 12: Grafik peningkatan aktivitas fagositosis sel makrofag.

Berdasarkan grafik diatas dapat dilihat bahwa aktivitas fagositosis

makrofag semakin meningkat seiring dengan peningkatan dosis sediaan. Pada

dosis 400mg/kgBB menunjukan persen aktivitas fagositosis tertinggi yaitu sebesar

71.25% yang lebih tinggi dari kelompok kontrol positif sebesar 63.75%, dan

kelompok dosis 100mg/kgBB, 200mg/kgBB, dan 300mg/kgBB yang secara

berturut-turut memiliki persen aktivitas fagositosis sebesar 45.75%, 59.70%, dan

61%. Persen aktivitas fagositosis terendah terdapat pada kelompok kontrol negatif

yang tidak diberi bahan yang berkhasiat sebagai imunomodulator yaitu sebesar

36%.

48
 Hasil uji skrining fitokimia buah wualae menunjukan bahwa buah wualae

memiliki kandungan senyawa flavonoid. Flavonoid memiliki kemampuan

meningkatkan sistem imunomodulator dengan meningkatkan efektivitas

proliferasi limfokin yang dihasilkan oleh sel T sehingga akan merangsang sel–sel

fagosit untuk melakukan respon fagositosis (Santoso, dkk., 2013). Pada penelitian

sebelumnya telah terbukti bahwa flavonoid meningkatkan aktivasi sel efektor

seperti limfosit, makrofag yang memproduksi dan melepaskan sitokin, interleukin

IL-1; IL-6; IL-12; tumor nekrosis faktor alpha (TNF alpha). Dosis flavonoid yang

lebih tinggi membuat sel leukosit (fagosit) lebih aktif terhadap sel bakteri fagosit,

dan lebih banyak bakteri yang dapat dirusak dan dicernaan dengan sel leukosit

(Zalisar, 2013).

Data aktivitas fagositosis yang telah diperoleh dari masing-masing

kelompok kemudian dilakukan pengujian statistik menggunakan SPSS (Statistical

Package For Social Science) ANOVA satu arah untuk mengetahui ada tidaknya

perbedaan pemberian ekstrak etanol buah wualae pada berbagai dosis terhadap

aktivitas fagositosis sel makrofag (Lampiran 13).

Pengujian normalitas merupakan syarat yang harus dilakukan sebelum

melakukan uji ANOVA. Berdasarkan uji normalitas pada Lampiran 12 diketahui

bahwa data terdistribusi normal. Uji homogenitas bertujuan untuk menentukan

apakah dari beberapa kelompok perlakuan memiliki varian yang sama atau tidak.

Dengan kata lain, homogenitas berarti bahwa himpunan data yang dimiliki

memiliki karakteristik yang sama (homogen) dan normal (sig >0,05), hasil data

yaitu dengan nilai sig. > 0,076 maka dapat dinyatakan bahwa data aktivitas

49
 fagositosis tiap kelompok bervariansi homogen, sehingga dapat dilanjutkan pada

pengujian ANOVA.

Pengujian ANOVA yang dilakukan bertujuan untuk melihat dosis efektif

dari empat variasi dosis pemberian ekstrak etanol buah wualae (E. elatior)

terhadap peningkatan aktivitas fagositosis makrofag. Berdasarkan hasil uji

ANOVA satu arah pada Lampiran 13 ditunjukan bahwa data memiliki nilai sig.

< 0,05 yang berarti bahwa hipotesis H0 (tidak terdapat perbedaan) ditolak dan

hipotesis H1 (terdapat perbedaan) diterima. Untuk melihat pemberian ekstrak

dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB, 400 mg/kgBB efektif dalam

meningkatan aktivitas fagositosis makrofag maka analisis statistik dilanjutkan

dengan analisis BNT dengan metode tukey Tabel 4.

Tabel 4. Hasil uji Tukey peningkatan aktivitas fagositosis makrofag.

Kelompok Perbandingan
Dosis Dosis Dosis Dosis K (+) K(-)
100mg/KgBB 200mg/KgBB 300mg/KgBB 400mg/KgBB
Dosis - -14.000(*) -15.250(*) -25.500(*) - 9.25
100mg/KgBB 18.000(*)
Dosis 14.000(*) - -1.25 -11.500(*) -4 23.250(*)
200mg/KgBB
Dosis 15.250(*) 1.25 - -10.250(*) -2.75 24.500(*)
300mg/KgBB
Dosis 25.500(*) 11.50000(*) 10.250(*) - 7.5 34.750(*)
400mg/KgBB
K (+) 18.000(*) 4.00000 4 2.75 - 27.250(*)
K(-) -9.25 -23.250(*) -24.500(*) -34.750(*) 27.250(*)
Keterangan :
* Perbedaan bermakna dengan sig < 0,05

Data hasil uji post hoc Tukey Tabel 4, menunjukan pada dosis

200mg/KgBB, 300mg/KgBB dan 400mg/KgBB tidak berbeda signifikan dengan

kelompok kontrol positif, yang artinya pada dosis 200mg/KgBB, 300mg/KgBB

50
dan 400mg/KgBB memiliki aktivitas yang sama dengan kontrol positif ekstrak

P.niruri L. Namun pada dosis 400mg/kgBB menunjukan peningkatan aktivitas

yang lebih baik dibanding dengan dosis 200mg/kgBB, 300mg/kgBB, dan kontrol

positif.

51
 BAB V
PENUTUP

A. KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan:

1. Kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam buah wualae adalah

alkaloid, flavonoid, tanin, dan triterpenoid.

2. Ekstrak etanol buah wualae memiliki efek sebagai imunomodulator yang

dapat meningkatkan aktivitas fagositosis sel makrofag mencit jantan.

3. Dosis ekstrak etanol buah wualae yang efektif sebagai imunomodulator pada

dosis 300mg/kgBB dan 400mg/kgBB dengan rata-rata nilai persen aktivitas

fagositosis sel makrofag masing-masing 61% dan 71,25%.

B. SARAN

Saran yang dapat diberikan penelitian ini adalah:

Perlu dilakukan penelitian lebih lebih lanjut untuk pengujian sitokin yang

dapat meningkatkan aktivitas dan fungsi makrofag, IL-1, IL-12, dan TNF.

52
 DAFTAR PUSTAKA

Adityo, R., Kurniawan, B., dan Mustofa, S., 2012, Uji Efek Fraksi Metanol
Ekstrak Batang Kecombrang (Etlingera elatior) Sebagai Larvasida
Terhadap Larva Instar III Aedes aegypti, ISSN 2337-3776.
Akrom, Widjaya, A., dan Armansyah, T., 2015, Ekstrak Etanol Biji Jintan Hitam
(Nigella sativa) Meningkatkan Aktivitas Fagositosis Makrofag Mencit
Swiss Yang Diinfeksi Lysteria monocytogenes, Jurnal Kedokteran Hewan,
9(2):94-100.
Aldi, Y., Rasyadi, Y., dan Handayani, D., 2014, Aktivitas Imunomodulator dari
Ekstrak Etanol Meniran (Phyllanthus niruri Linn.) terhadap Ayam Broiler,
Jurnal Sains Farmasi & Klinis, 1(1):20-26.
Angelina, M., Amelia., Irsyad, M., Meilawati, L., dan Hanafi, M., 2015,
Karakterisasi Ekstrak Etanol Herba Katumpangan Air (Peperomia Pellucida
L. Kunth), Biopropal Industri, 6(2):53-61.
Arifah, A.N., dan Nurkhasanah, 2014, Efek Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar
Pasak Bumi (Eurycoma longifolia, Jack) Terhadap Aktivitas Fagositosis
Makrofag Secara In Vitro, Pharmaçiana, 4(1):9-14.
Arrington, L, 1972, Introductory Laboratory Animal The Breeding, Care, and
Management of Experimental Animal Science, The Interstate Printers and
Publishing, Inc: New York

Asti, S.I.P., 2015, Skripsi Pengaruh Ekstrak Biji Kopi Robusta (Coffea robusta)
Terhadap Aktivitas Fagositosis Sel Monosit, Fakultas Kedokteran Gigi
Universitas Jember.
Assidqi, K., Wahyu, T., dan Setyawati, S., 2012, Potensi Ekstrak Daun Petikan
Kebo (Euphorbia hirta) sebagai Antibakteri terhadap Aeromonas
Hydrophila, Journal Of Marine and Coastal Science, 1(2):113-124
Bratawidjaja KG, 2002, Imunologi dasar:Jakarta.
Bratawidjaja, K.G., dan Rengganis, Iris, 2014, Imunologi Dasar, Badan Penerbit
Fakultas Ilmu Kedokteran Universitas Indonesia:Jakarta.
Cahyono, S.J.B., 2010, Vaksinasi Cara Ampuh Cegah Penyakit, Kanisius,
Yogyakarta Chairul dan Paptiwi, 2011, Uji Efektivitas Imunomodulator
Tiga Jenis Zingiberaceae Secara In-Vitro Melalui Pengukuran Aktivitas Sel
Makrofage Dan Kapasitas Fagositosis, Bidang Botani, Puslit Biologi LIPI,
Cibinong.
Chairul dan Praptiwi, 2011, Uji Efektivitas Imunomodulator Tiga jenis
Zingiberaceae Secara In-Vitro Melalui Pengukuran Aktivitas Sel Makrofag
Dan Kapasitas Fagositosis, Jurnal Botani, 2(1):1-5

53
Chan, E.W.C., Lim, Y.Y., dan Wong, S.K., 2011, Phytochemistry and
Pharmacological Properties of Etlingera elatior: A Review,
Pharmacognosy Journal, 2(22):6-10
Chandu, A.N., Kumar, S., Bhattacharjee, C., Debnath. S., dan Kannan, K.K.,
2011, Studies On Immunomodulatory Activity of Aloe vera (Linn),
International Journal Of Applied Biology And Pharmaceutical Technology,
2(1):19-22
Christiana, 2008, Formulasi Gel Antioksidan Ekstrak Buah Buncis (Phaseolus
vulgaris, dengan menggunakan Basis Aqupec 505 hv, Universitas
Padjajaran. Bandung.

Davagaran, T., dan Diantini, A., 2012, Senyawa Immunomodulator Dari

Tanaman, Student e-journal, 1(1):1-5.
Depkes RI, 2006, Pedoman Penatalaksanaan Kasus Malaria di Indonesia, Dirjen
PPM & PL:Jakarta
Direktorat Jendral POM, 2008, Farmakope Herbal Indonesia Edisi 1, Dep
Kesehat RI: Jakarta.

Djojodibroto, D.R., 2009, Respirologi, EGC:Jakarta.

Ginting, B., 2012, Antifungal Activity Of Essensial Oils Some Plants in Aceh
Province againts Candida Albicans, Jurnal Natural, 12(2):1-5.
Handayani, V., Ahmad, A.R., dan Sudir, M., 2014, Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Metanol Bunga dan Daun Patikala (Etlingera elatior (Jack)
R.M.Sm) Menggunakan Metode DPPH, Pharmaci Science Research,
1(2):86-93.
Haribi, R., Darmawati, S., dan Hartiti, T., 2009, Kelainan Fungsi Hati Dan Ginjal
Tikus Putih (Rattus norvegicus, L.) Akibat Suplementasi Tawas Dalam
Pakan, Jurnal kesehatan, 2(2) :11-19.
Hartini, Y.S., Wahyuno, A., Widyarini, S., dan Yuswanto, A., 2013, Uji Aktivitas
Fagositosis Makrofag Fraksi-fraksi dari Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah
(Piper crocatum Ruiz & Pav.) Secara In Vitro, Jurnal Ilmu Kefarmasian
Indonesia,11(2):108-114.
Hidayat, S.R., dan Napitupulu, R.M., 2015, Kitab Tumbuhan Obat, Penebar
Swadaya Grup:Jakarta.
Isnawati, A., Alegentina, S., dan Widowati, L., 2013, Karakterisasi Ekstrak Etanol
Biji Klabet (Trigonella foenum-graecum L) Sebagai Tanaman Obat
Pelancar Asi, Buletin Penelitian Kesehatan, 41(2):103-110.

54
Kurnianingtyas, E., Djati, M.S., dan Rifa'i, M., 2013, Aktivitas Imunomodulator
Polyscias obtusa Terhadap Sistem Imunitas Pada Bone Marrow Broiler
Setelah Pemberian Salmonella typhimurium, Jurnal Exp. Life. Science,
3(1):25-30.
Kusumawanti, D, 2004, Bersahabat dengan Hewan Coba. Gadjah Mada
University Press :Yogyakarta.

Malole, M., dan Pramono, C. S., 1989, Penggunaan Hewan Percobaan di

Laboratorium. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Direktorat
Jendral Pendidikan Tinggi:Bogor.

Marliana, 2005, Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis

Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium Edule Jacq. Swartz.) dalam
ekstrak Etanol, Biofarmasi , 3(1):26-31.

Mataram, K.A., 2011, Aspek Imunologi Air Susu Ibu, Jurnal Ilmu Gizi, 2(1):37-
48.
Masurin, S., Chairul, 2012, Efek Ekstrak Air Dan Alkohol Pada Siwak (Salvadora
Persica L.) Terhadap Peningkatan Aktivitas Dan Kapasitas Fagositosis Sel
Makrofag, Media Litbang Kesehatan, 22(1):38-44.
Minarno, E.B, 2015, Skrining Fitokimia Dan Kandungan Total Flavanoid Pada
Buah Carica pubescens Lenne & K. Koch Di Kawasan Bromo, Cangar,
Dan Dataran Tinggi Dieng, El-Hayah, 5(2):73-82.
Moriwaki, K., 1994, Genetic in Wild Mice Its Application to Biomedical
Research, Karger :Tokyo.

Naufalin, R., Jenie, B.S.L., Kusnandar, F., Sudarwamto, M., dan Rukmini, H.,
2005, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Bunga Kecombrang Terhadap Bakteri
Patogen dan Perusak Pangan, Jurnal Teknologi dan Indutri Pangan,
16(2):119-124.
Nugroho, Y.A., 2012, Efek Pemberian Kombinasi Buah Sirih (Piper Betle L)
Fruit, Daun Miyana (Plectranthus scutellarioides (L.) R. BR.) Leaf, Madu
Dan Kuning Telur Terhadap Peningkatan Aktivitas Dan Kapasitas
Fagositosis Sel Makrofag, Media Litbang Kesehatan, 22(1):1-5.
Prasetyo, dan Inoriah, E., 2013, Pengelolaan Budidaya Tanaman Obat-Obatan
(Bahan Simplisia), Badan Penerbitan Fakultas Pertanian, UNIB.
Prashant, 2011, Phytochemical Screening and Extraction, Internationale
Pharmaceutica Sciencia, 1(1):1-9.

55
Rahayu, M.P., 2014, Aktivitas Fagositosis Makrofag Dari Fraksi N-Heksan Herba
Sambiloto (Andrographis paniculata, (Burm.F) Nees) Terhadap Mencit
Yang Diinduksi Vaksin Hepatitis B, Pharmacy, 11(2):181-199.
Rasyid, R., Yanwirasti, dan Nasrul, E., 2008, Pengaruh Estrogen Terhadap
Aktifitas Sel Makrofag Dalam Menfagosit Candida Albicans Secara In
Vitro, Majalah Kedokteran Andalas, 32(1):79-87.
Ridwan, E., 2013, Etika Pemanfaatan Hewan Percobaan dalam Penelitian
Kesehatan, Jurnal Indonesia Medical Association, 63(3):112-116.
Santoso, T.A, Diniatik, dan Kusuma, A.M., 2013, Efek Imunostimulator Ekstrak
Etanol Daun Katuk (Sauropus androgynus L Merr) Terhadap Aktivitas
Fagositosis Makrofag, Pharmacy, 10(1):63-70.
Sastrawan, I.N., Sangi, M., dan Kamu, V., 2013, Skrining Fitokimia Dan Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Adas (Foeniculum Vulgare)
Menggunakan Metode Dpph, Jurnal Ilmiah Sains, 13(2):110-115.
Sartini, Y., Wahyuono, S., Widyarini, S., dan Yuswanto, A.G, 2013, Uji Aktivitas
Fagositosis Makrofag Senyawa Kode Pc-2 dari Daun Sirih Merah (Piper
crocatum Ruiz & Pav.) Secara In-vivo, JIFI, 11(2):1-13.
Senja, R.Y., Issusilaningtyas, E., Nugroho, A.K., dan Setyowati, E.P., 2014, The
Comparison Of Extraction Method And Solvent Variation On Yield And
Antioxidant Activity Of Brassica oleracea L. var. capitata f. rubra Extract,
Traditional Medicine Journal, 19(1):43-48.
Setyowati, W.A.E., Ariani, S.R.D., Ashadi, Bakti, M., dan Rahmawati, C.P.,
2014, Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia “Pemantapan Riset
Kimia dan Asesmen Dalam Pembelajaran Berbasis Pendekatan
Saintifik”.,UNS:Surakarta.
Siadi, K., 2012, Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropa curcas) Sebagai
Biopeptisida yang Efektif Dengan Penambahan Larutan NaCl, Jurnal Mipa
35(2):77-83.
Subowo, Efek imunomodulator dari tumbuhan obat, 1996, Warta Tumbuhan Obat
Indonesia, 3(1):5-10.
Sudjadi, 1988, Metode Pemisahan Kimia, Kanisius:Yogyakarta.

Suhirman, S., dan Winarti, C., 2007, Prospek Dan Fungsi Tanaman ObatSebagai
Imunomodulator, 121-122, Jurnal Penelitian, Balai PenelitianTanaman
Obat dan Aromatik.
Sukandar, D., Radiastuti, N., Jayanegara, I., dan Huyuda, A., 2010, Karakterisasi
Senyawa Aktif Antibakteri Ekstrak Air Bunga Kecombrang (Etlingera
elatior) Sebagai Bahan Pangan Fungsional, Valensi, 2(1):333-339.

56
Sumawinata, N., 2010, Senerai Istilah Kedokteran Gigi, EGC:Jakarta
Svehla, 1990, Vogel Buku Teks Analisis Anorganik Kualitatif makro dan
Semimikro, PT Kalman Media Pustaka:Jakarta
Tasia, W.R.N., dan Widyaningsih, T.D., 2014, Potensi Cincau Hitam (Mesona
Palustris Bl.), Daun Pandan (Pandanus amaryllifolius) Dan Kayu Manis
(Cinnamomum burmannii) Sebagai Bahan Baku Minuman Herbal
Fungsional, Jurnal Pangan dan Agroindustri, 2 (4):128-136.
Titaley, S., Fatimawali, dan Lolo, W.A., 2014, Formulasi Dan Uji Efektifitas
Sediaan Gel Ekstra Etanol Daun Mangrove Api-Api (Avicennia Marina)
Sebagai Antiseptik Tangan, Jurnal Ilmiah Farmasi, 3(2):99-106.
Tjitrosoepomo, G., 2005, Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta), UGM-Press:
Yogyakarta

Utomo, A.D., Rahayu, W.S., dan Dhiani, B.A., 2009, Pengaruh Beberapa Metode
Pengeringan Terhadap Kadar Flavonoid Total Herba Sambiloto
(Andrographis paniculata), Pharmacy, 6(1):58-68.

Wahid, S., dan Miskad, U.A., 2016, Imunologi, Brilian Internasional: Surabaya.
Waluyo, L., 2008, Teknik Metode Dasar Mikrobiologi, UMM Press: Malang.
Wiedosari, E., 2007, Peranan Imunomodulator Alami (Aloe vera) Dalam Sistem
Imunitas Seluler dan Humoral, Wartazoa, 17(4):165-171.
Winarsih, H., 2010, Protein Kedelain dan Kecambah dan Manfaatnya Bagi
Kesehatan, Kanikus:Yogyakarta
Yuliani, S., dan Satuhu, S.,2012, Panduan Lengkap Minyak Atsiri, Penebar
Swadaya Grup: Jakarta.
Yulinery, T., Nurhidayat, N., 2012, Penggunaan Ekstrak Fermentasi Beras Dari
Beberapa Jenis Monascus Purpureus Untuk Aktivitas Invitro Fagositosis
Sel Makrofag Dan Polimorfonuklear Peritoneum Mencit Sebagai
Immunomodulator, Berita Biologi, 11(2):263-273.
Zalizar, L., 2013, Flavonoids of Phylanthus Niruri as Immunomodulators A
Prospect to Animal Disease Control, Journal of Science and Technology,
3(5):529-532.

57
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Skema alur penelitian.

Buah wualae

Ekstrak kental

Skrining fitokimia Efek imunomodulator Uji karakteristik

Analisis profil Peningkatan Sari larut air

kandungan aktivitas sel Sari larut
etanol
metabolit makrofag
Kadar air
sekunder Kadar abu

Hasil

58
1. Diagram alur pembuatan ekstrak kental tanaman

Buah E. elatior

- Disortasi basah
- Dicuci hingga bersih
- Dipisahkan dari bonggol
- Dilakukan perajangan
- Dikeringkan
- Dilakukan sortasi kering
- Dihaluskan dengan blender

Serbuk simplisia buah E.elatior

- Dimaserasi dengan pelarut etanol

selama 3 x 24 jam
- Dievaporasi

Ekstrak kental

59
 2. Uji Efek Imunomodulator
a. Pengelompokan perlakuan hewan coba

Mencit jantan

Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3 Kelompok 4 Kelompok V Kelompok VI

kontrol (+) kontrol (-)
Diberikan Diberikan Diberikan Diberikan
pemberian pemberian pemberian pemberian Diberikan Diberikan
dosis ekstrak dosis ekstrak dosis ekstrak dosis ekstrak stimuno NaCMC
100mg/KgBB 200mg/KgBB 300mg/KgBB 400mg/KgBB 0,13mg/gBB 0,5%

- Diberikan perlakuan selama 7

hari berturut-turut secara peroral
- Hingga hari ke 8 seluruh
kelompok perlakuan diinfeksikan
secara IP suspensi bakteri S.
Aureus 0,5 ml, lalu dibiarkan 1
jam sebelum dibedah

Pembedahan hewan coba

60
b. Pembedahan hewan coba

Mencit jantan

- Dianastesi dengan menggunakan

eter
- Diletakan pada papan bedah
- Bagian perut mencit dibersihkan
menggunakan etanol 70%
- Dibedah bagian perut mencit
menggunakan alat bedah steril
- Ditambahakan PBS pada cairan
peritoneum mencit
- Diambil cairan peritoneum
mencit menggunakan spoit 1 ml

Cairan peritoneum

c. Pemeriksaan jumlah makrofag yang aktif melakukan fagositosis

Cairan peritoneum

- Diteteskan pada gelas objek

sebanyak 1 tetes
- Dibuat preparat apusan tipis lalu
difiksasi diudara hingga
mengering
- Diberikan cairan methanol dan
didiamkan 5 menit
- Diberikan pewarnaan giemsa
10% dan dibiarkan selama 20
menit
- Dibilas dengan air mengalir dan
dikeringkan
- Preparat ditambahkan minyak
emersi
- Diamati dibawah mikroskop
dengan perbesaran 400x dan
1000x
- Dihitung aktivitas fagositosis
makrofag

Hasil

61
Lampiran 2. Hasil Determinasi Tanaman.

62
Lampiran 3. Perhitungan Rendamen

1. Rendamen ekstrak

Berat simplisia kering = 1870 gram

Berat total ekstrak = 96,2148 gram

96,2148gram
Rendemen ekstrak = x 100%
1870 gram
= 5,1 %

63
Lampiran 4. Karakterisasi Ekstrak

a. Uji Kadar Sari Larut Air

Berat ekstrak (A) = 5,0113 gram
Berat cawan kosong (B) = 38,4255 gram
Berat cawan + ekstrak setelah diuapkan (C) = 38,8430 gram

38,8430  38, 4255

Kadar sari larut air = x 100 %
5,0113

= 8,331 % x 5

= 41,655 % (dihitung terhadap100 mL pelarut)

b. Uji Kadar Sari Larut Etanol

Berat ekstrak (A) = 5,1876 gram

Berat cawan kosong (B) = 38,4261 gram

Berat cawan + ekstrak setelah diuapkan (C) = 39,0598 gram

(C  B )
Kadar sari larut etanol = x 100 %
A

(39,0598  38,4261)
= x 100%
5,1876

= 12,215 % x 5

= 61,075 % (dihitung terhadap 100 mL pelarut)

c. Uji Kadar Air

Berat ekstrak = 1,0793 gram

Berat cawan kosong = 30,3354 gram

Berat cawan + ekstrak setelah dikeringkan = 31,3579 gram

Kadar Air (%) = x 100%

1,0793  1,0225
= x 100%
1,0793

= 5,26 %

64
d. Uji kadar abu

Berat ekstrak = 1 gram

Berat cawan kosong = 30,2582 gram
Berat cawan + ekstrak setelah pemijaran = 30,3210gram
Berat abu = 30,3210 gram – 30.2582 gram
= 0,0628
Kadar abu (%) = x 100%

0,0628
= x 100%
1
= 6,28%

65
Lampiran 5. Pembuatan Pereaksi Skrining Fitokimia

1. Pereaksi Dragendrof

0,85 gram Bismuth 8 gram KI dalam 20

(III) nitrat dalam mL aquadest
dalam 10 mL asam
asetat P

Campur dan diamkan hingga

memisah sempurna, larutan yang
jernih kemudian diambil dan
encerkan dengan aquadest ad 100
mL

2. Pereaksi FeCl3

FeCl3

- Ditimbang 1 gram
- Dimasukan dalam labu takar 100 ml
- Ditambahkan samapi tanda tera

Pereaksi FeCl3 1%

3. Lieberman- bunchard

5 ml Asam Asetat

- Di tambahkan 5ml H2SO4

- Ditambahkan 50 ml etanol

Pereaksi Lieberman- bunchard

66
Lampiran 6. Tabel Konversi Perhitungan Dosis Antar Jenis Subjek Uji

Tabel 5. Konversi perhitungan dosis antara jenis subjek uji (Harmita dan Maksum
R., 2006).

Mencit Tikus Marmut Kelinci Kera Anjing Manusia

20 g 200 g 400 g 1,2 kg 4 kg 12 kg 70 kg
Mencit 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9
20 g
Tikus 0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0
200 g
Marmut 0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5
400 g
Kelinci 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2
1,2 kg
Kera 0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1
4 kg
Anjing 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1
12 kg
Manusia 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,16 0,32 1,0
70 kg

67
Lampiran 7. Tabel Volume Maksimal Pemberian Larutan Untuk Hewan Uji

Tabel 6. Volume maksimal larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada
beberapa hewan uji (Harmita dan Maksum R., 2006).

Volume maksimum (ml) sesuai jalur pemberian

Jenis Hewan Uji
i.v. i.m. i.p. s.c. p.o.
Mencit (20-30 g) 0,5 0,05 1,0 0,5-1,0 1,0
Tikus (200 g) 1,0 0,1 2-5 2-5 5,0
Hamster (50 g) - 0,1 1-2 2,5 2,5
Marmut (250 g) - 0,25 2-5 5,0 10,0
Kelinci (2,5 kg) 5-10 0,5 10-20 5-10 20,0
Kucing (3 kg) 5-10 1,0 10-20 5-10 50,0
Anjing (5 kg) 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0

Keterangan :

i.v. = Intra vena

i.m. = Intra muscular

i.p. = Intra peritoneal

s.c. = Subcutan

p.o. = Pemberian oral

68
Lampiran 8. Pembuatan Sediaan Banding

Perhitungan dosis stimuno yang akan diberikan pada mencit secara peroral (p.o).

a. Sediaan banding yang digunakan adalah stimuno dengan dosis 50 mg untuk

manusia dewasa. Maka perlu dilakukan konversi dosis untuk pemberian pada

mencit. Perhitungan konversi sebagai berikut:

Dosis mencit = 50 mg x 0,0026

= 0,13 mg.

Berat rata-rata mencit = 27,04 mg.

Jadi, dosis stimuno untuk mencit dengan berat rata-rata 27,04 mg adalah 0,13

mg.

Dosis untuk 1KgBB mencit = ,

0,13 = 4,807 mg/KgBB.

b. Menentukan jumlah stimuno yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml.

Volume dosis oral mencit : 0,5 ml.

Stimuno yang dibutuhkan = ( . )

x dosis mencit

Stimuno butuh = ,
x 0,13 mg

= 2,6 mg

 Menurut FI III, penetapan keseragaman bobot dilakukan dengan penimbangan

10 tablet satu per satu, maka diambil 10 stimuno digerus dan ditimbang berat

totalnya yaitu 2.294 mg dengan berat rata-rata stimuno 229 mg.

 Berat bahan aktif dalam stimuno yaitu 50mg/tab x 10 tab = 500 mg.

69
 Menentukan berat serbuk yang akan diambil untuk memperoleh 2,6 mg

.
Berat yang ditimbang = x berat rata-rata

,
= x 229 mg

= 11, 908 mg.

c. Menentukan volume pemberian untuk mencit dengan berat rata-rata 27,04 mg.

Volume pemberian = x volume pemberian oral

,
Volume pemberian = x 0,5

Volume pemberian = 0,45 ml

d. Pembuatan sediaan stimuno

Ditimbang 11, 908 mg stimuno, dimasukan kedalam lumpang, digerus,

disuspensikan dengan sedikit NaCMC 0,5% kemudian dimasukan kedalam

labu takar, dicukupkan volumenya hingga 10 ml dengan NaCMC 0,5%.

e. Pembuatan NaCMC 0,5%.

Ditimbang NaCMC sebanyak 0,5 g kedalam gelas kimia ditambahkan 100 mL

aquades diaduk sambil dipanaskan di atas hot plate. Didinginkan selama 15

menit hingga diperoleh massa yang transparan, lalu diaduk sampai homogen.

70
Lampiran 9. Pembuatan Sediaan Uji.

Dosis suspensi ekstrak etanol buah wualae (E. elatior) yang akan dibuat adalah

dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB.

Berat badan mencit rata-rata:

Kelompok dosis 100 mg/kgBB : 26,6 mg

Kelompok dosis 200 mg/kgBB : 25,5 mg

Kelompok dosis 300 mg/kgBB : 26,98 mg

Kelompok dosis 400 mg/kgBB : 26,84 mg

Perhitungan dosis pemberian :

a. Kelompok dosis 100 mg/kgBB

- Konversi dari kg ke gram : = 0,1 mg/gBB

Untuk mencit dengan berat rata-rata 26,6 mg = 0,1 mg/gBB x 26,6 gram = 2,66

mg

- Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml

Esktrak butuh = x dosis mencit

Ekstrak butuh = ,
x 2,66 mg

Ekstrak butuh = 53,2 mg.

Jadi, sebanyak 53,2 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10

ml NaCMC 0,5%.

- Menetukan volume pemberian

Volume pemberian = x volume pemberian oral

,
Volume pemberian = x 0,5

71
 Volume pemberian = 0,44 ml

b. Kelompok dosis 200 mg/kgBB

-Konversi dari kg ke gram : = 0,2 mg/gBB

Untuk mencit dengan berat rata-rata 25,5 mg = 0,2 mg/gBB x 25,5 gram =

5,1mg

- Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml

Esktrak butuh = x dosis mencit

Ekstrak butuh = ,
x 5,1 mg

Ekstrak butuh = 102 mg.

Jadi, sebanyak 102 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam 10

ml NaCMC 0,5%.

- Menetukan volume pemberian

Volume pemberian = x volume pemberian oral

,
Volume pemberian = x 0,5

Volume pemberian = 0,425 ml

c. Kelompok dosis 300 mg/kgBB

- Konversi dari kg ke gram : = 0,3 mg/gBB

Untuk mencit dengan berat rata-rata 26,98 mg = 0,3 mg/gBB x 26,98gram

= 8,094 mg

- Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml

Esktrak butuh = x dosis mencit

72
 Ekstrak butuh = ,
x 8,094 mg

Ekstrak butuh = 161,88 mg.

Jadi, sebanyak 161,88 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam

10 ml NaCMC 0,5%.

- Menetukan volume pemberian

Volume pemberian = x volume pemberian oral

,
Volume pemberian = x 0,5

Volume pemberian = 0,449 ml

d. Kelompok dosis 400 mg/kgBB

- Konversi dari kg ke gram : = 0,4 mg/gBB

Untuk mencit dengan berat rata-rata 26,84 mg = 0,4mg/gBB x 26,84gram

= 10,76 mg

- Menentukan ekstrak yang dibutuhkan untuk membuat 10 ml

Esktrak butuh = x dosis mencit

Ekstrak butuh = ,
x 10,736 mg

Ekstrak butuh = 214,72 mg.

Jadi, sebanyak 214,72 mg ekstrak etanol buah wualae disuspensikan kedalam

10 ml NaCMC 0,5%.

- Menetukan volume pemberian

Volume pemberian = x volume pemberian oral

,
Volume pemberian = x 0,5

73
Volume pemberian = 0,447 ml

74
Lampiran 10. Analisis Data Hasil Pengujian

Uji statistik peningkatan aktivitas fagositosis dengan menggunakan SPSS.

1. Uji Normalitas Dengan Grafik

Tujuan : Untuk mengetahui apakah data pengingkatan aktivitas fagositosis

hewan uji pada tiap kelompok terdistribusi normal atau tidak.

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

Unstandardized
Residual

N 24
a,b
Normal Parameters Mean ,0000000
Std. Deviation 12,44189809
Most Extreme Differences Absolute ,145
Positive ,121
Negative -,145
Kolmogorov-Smirnov Z ,713
Asymp. Sig. (2-tailed) ,690

a. Test distribution is Normal.

b. Calculated from data.

Kesimpulan : Dengan melihat grafik histogram, secara keseluruhan pada tiap

kelompok maka dapat dinyatakan bahwa peningkatan aktivitas fagositosis pada

tiap kelompok terdistribusi secara normal.

2. Uji Homogenitas (Uji Levene) Pada Data Hewan Uji Pada Tiap
Kelompok.

Tujuan : Untuk mengetahui kesamaan varian data fagositosis hewan

uji mencit.

Hipotesis :

H0 : Variansi data fagositosis makrofag homogen

Ha : Variansi data fagositosis makrofag tidak homogen

75
Syarat :

H0 diterima bila nilai sig. > 0,05

Ha ditolak bila nilai sig. < 0,05

Test of Homogeneity of Variances

jumlah makrofag

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

2,419 5 18 ,076

Kesimpulan : Dengan melihat nilai sig. secara keseluruhan pada tiap

kelompok dimana nilai sig. 0,076 > 0,05 maka H0 diterima. Dengan demikian,

dapat dinyatakan bahwa data fagositosis makrofag pada tiap kelompok perlakuan

homogen, sehingga dapat dilanjutkan pada pengujian ANOVA.

3. Uji One Way ANOVA Pada Data Peningkatan Aktivitas Fagositosis

Makrofag Hewan UJi.

Tujuan : Untuk mengetahui apakah ada tidaknya perbedaan secara signifikan

keseluruhan kelompok.

Hipotesis :

H0 : Data peningkatan aktivitas fagositosis makrofag tidak terdapat perbedaan

yang signifikan pada keseluruhan kelompok.

H1 : Terdapat perbedaan signifikan peningkatan aktivitas fagositosis makrofag

pada keseluruhan kelompok.

76
Syarat :

H0 diterima bila nilai sig. > 0,05

H1 diterima bila nilai sig. < 0,05

ANOVA

jumlah makrogrof

Sum of Mean

Squares df Square F Sig.

Between 3265,333 5 653,067 35,839 ,000

Groups

Within Groups 328,000 18 18,222

Total 3593,333 23

Kesimpulan : Nilai sig. 0,000 < 0,05 sehingga H0 ditolak yang artinya terdapat

perbedaan signifikan aktivitas fagositosis makrofag pada keseluruhan data pada

tiap kelompok.

Uji ANOVA dilakukan untuk melihat perbedaan antar kelompok perlakuan

secara keseluruhan. Jika ingin melihat perbedaan dari masing-masig kelompok

perlakuan dengan kelompok perlakuan lainnya, maka perlu dilakukan pengujian

lanjutan seperti uji

4. Uji Post Hoc Tukey Pada Data Peningkatan Aktivitas Fagositosis

Makrofag Antar Kelompok.

Tujuan : Untuk melihat apakah terdapat perbedaan aktivitas fagositosis yang

signifikan antar kelompok perlakuan.

77
Multiple Comparisons

Dependent Variable: persen aktifitas

Mean
Difference Std. 95% Confidence
(I) perlakuan (J) perlakuan (I-J) Error Sig. Interval
Lower Upper Lower Upper Lower
Bound Bound Bound Bound Bound
Tukey 100mg/kg bb 200mg/kg bb - 3.0184
.002 -23.5928 -4.4072
HSD 14.00000(*) 6
300mg/kg bb - 3.0184
.001 -24.8428 -5.6572
15.25000(*) 6
400mg/kg -
- 3.0184
.000 -35.0928 15.907
25.50000(*) 6
2
+ - 3.0184
.000 -27.5928 -8.4072
18.00000(*) 6
- 3.0184 18.842
9.25000 .062 -.3428
6 8
200mg/kg bb 100mg/kg bb 3.0184 23.592
14.00000(*) .002 4.4072
6 8
300mg/kg bb 3.0184
-1.25000 .998 -10.8428 8.3428
6
400mg/kg - 3.0184
.014 -21.0928 -1.9072
11.50000(*) 6
+ 3.0184
-4.00000 .768 -13.5928 5.5928
6
- 3.0184 32.842
23.25000(*) .000 13.6572
6 8
300mg/kg bb 100mg/kg bb 3.0184 24.842
15.25000(*) .001 5.6572
6 8
200mg/kg bb 3.0184 10.842
1.25000 .998 -8.3428
6 8
400mg/kg - 3.0184
.032 -19.8428 -.6572
10.25000(*) 6
+ 3.0184
-2.75000 .939 -12.3428 6.8428
6
- 3.0184 34.092
24.50000(*) .000 14.9072
6 8
400mg/kg 100mg/kg bb 3.0184 35.092
25.50000(*) .000 15.9072
6 8
200mg/kg bb 3.0184 21.092
11.50000(*) .014 1.9072
6 8
300mg/kg bb 3.0184 19.842
10.25000(*) .032 .6572
6 8
+ 3.0184 17.092
7.50000 .180 -2.0928
6 8
- 3.0184 44.342
34.75000(*) .000 25.1572
6 8
+ 100mg/kg bb 3.0184 27.592
18.00000(*) .000 8.4072
6 8
200mg/kg bb 3.0184 13.592
4.00000 .768 -5.5928
6 8
300mg/kg bb 3.0184 12.342
2.75000 .939 -6.8428
6 8
400mg/kg 3.0184
-7.50000 .180 -17.0928 2.0928
6
- 27.25000(*) 3.0184 .000 17.6572 36.842

78
 6 8
- 100mg/kg bb 3.0184
-9.25000 .062 -18.8428 .3428
6
200mg/kg bb -
- 3.0184
.000 -32.8428 13.657
23.25000(*) 6
2
300mg/kg bb -
- 3.0184
.000 -34.0928 14.907
24.50000(*) 6
2
400mg/kg -
- 3.0184
.000 -44.3428 25.157
34.75000(*) 6
2
+ -
- 3.0184
.000 -36.8428 17.657
27.25000(*) 6
2

Keterangan : Jika terdapat tanda * artinya terdapat perbedaan yang signifikan

antar kelompok dan jika tidak ada tanda * maka tidak ada perbedaan yang

signifikan.

Contoh : Kelompok dosis 100 mg/kgBB berbeda signifikan dengan kelompok

dosis 200mg/kgBB, 300mg/kgBB, 400mg/kgBB, dan kontrol positif namun tidak

berdeda signifikan dengan kelompok kontrol negatif.

79
Lampiran 11. Dokumentasi penelitian

Pencucian sampel Pemisahan buah dari tangkai

Perajangan Pengeringan

Penghalusan

80
 Maserasi Evaporasi

Ekstrak kental Kadar sari larut air

Kadar Sari larut etanol Kadar Abu

81
 Kadar Air Aklimatisasi hewan uji

Pembuatan sediaan uji Pemberian I.P

Euthanasi hewan uji Pembedahan hewan uji

Pembuatan apusan darah tipis Pewarnaan dengan giemsa

82
100mg/KgBB 200mg/KgBB

300mg/KgBB 400mg/KgBB

Kontrol Positif Kontrol Negatif

83