13

In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air

Tawar dari Glochidia hingga Dewasa

Satit Kovitvadhi 1 dan Uthaiwan Kovitvadhi 2, *

1 Departemen Pertanian, Fakultas Sains

dan Teknologi, Bansomdejchaopraya

Universitas Rajabhat, Bangkok
2 Departemen Zoologi, Fakultas Sains,
Universitas Kasetsart, Bangkok
Thailand

1. Perkenalan

Budidaya kerang mutiara air tawar dibagi menjadi tiga tahap, yaitu glochidia, remaja dan dewasa. Ikan juvenil telah
berhasil dibudidayakan di laboratorium dengan cara menempelkan glochidia pada ikan sampai dapat berubah
menjadi tahap awal juvenil (Fukuhara et al., 1990; Panha, 1992; Buddensiek, 1995; Uthaiwan et al., 2003; Hanlon &
Neves, 2006 ). Lebih lanjut, media buatan yang disterilkan dapat digunakan untuk kultur glochidia (untuk melewati
tahap parasit); kemajuan teknik ini dapat diikuti dalam serangkaian laporan oleh Isom & Hudson (1982, 1984a, b),
Keller & Zam (1990), Uthaiwan et al. (2001, 2002), Kovitvadhi et al. (2006, 2007, 2008, 2009), Areekijeree et al.
(2006), Lima et al. (2006), Supannapong et al. (2008), Srakaew et al. (2010) dan Chumnanpuen et al. (2011).
Bahkan, Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana ( Kovitvadhi et al., 2006, 2008),

Chamberlainia hainesiana ( Kovitvadhi et al., Diserahkan) dan Hyriopsis (Hyriopsis) bialatus

(Kovitvadhi & Kovitvadhi., Dalam persiapan).

Oleh karena itu, pada bab ini penulis akan menjelaskan setiap tahapan dari persiapan dan kultur glochidia pada
media buatan serta semua teknik pemeliharaan remaja awal hingga dewasa. Selain itu, kualitas air dan makanan
yang sesuai untuk pemeliharaan dari remaja awal sampai dewasa akan dijelaskan termasuk perkembangan morfologi
di bawah mikroskop cahaya dan mikroskop elektron scanning.

2. Kultur glochidia di media buatan

Glochidia dibudidayakan dalam media buatan menurut Kovitvadhi, (2000); Uthaiwan et al., (2002) dan Kovitvadhi et al., (2006)
hingga mereka bertransformasi menjadi remaja berumur 0 hari. Rincian setiap tahapan pembiakan glochidia pada media buatan
adalah sebagai berikut:

*
Penulis yang sesuai

www.intechopen.com
270 Budidaya Perairan

2.1 Komposisi media buatan

Komposisi media artifisial untuk kultur glochidia ditunjukkan pada Tabel 1. Media artifisial didasarkan pada hasil
perbaikan Keller & Zam (1990) yang merupakan modifikasi dari rumus Isom & Hudson (1982). Perbedaan utama
menyangkut komposisi media komersial M199. Sedangkan sumber protein secara eksklusif adalah serum kuda di
Keller & Zam (1990) dan ikan mas, Cyprinus carprio plasma ikan digunakan sebagai media pendukung alternatif
untuk glochidia budidaya H. (L.) myersiana

(Uthaiwan et al., 2002; Kovitvadhi et al., 2006, 2007, 2008, 2009), Hyriopsis (Hyriopsis) bialatus ( Areekijeree et al.,
2006; Supannapong dkk., 2008; Srakaew dkk., 2010; Chumnanpuen et al., 2011; Kovitvadhi & Kovitvadhi.,
Persiapan), Chamberlainia hainesiana ( Kovitvadhi et al., Diserahkan) dan Anodonta cygnea ( Lima et al., 2006).
Glochidia dapat berubah menjadi juvenil pada media yang mengandung plasma ikan mas biasa sebagai sumber
protein. Glochidia ini sepenuhnya berubah dalam 8-11 hari dengan tingkat kelangsungan hidup hingga 93% kecuali
34% A. cygnea. Semua larva yang masih hidup berubah menjadi tahap remaja kecuali A. cygnea < 34%. Untuk
alasan ini, komposisi media buatan (Tabel 1) menurut Uthaiwan et al. (2002), berdasarkan Isom & Hudson (1982)
dan Keller & Zam (1990), diusulkan untuk budaya glochidia.

Komposisi media Rasio media buatan

M199 2

Antibiotik dan antimikotik plasma 1

ikan mas umum 0,5

Tabel 1. Komposisi media buatan untuk kultur glochidia

2.2 Persiapan media glochidia

2.2.1 Persiapan M199

Larutkan satu bungkus serbuk M199 (Gibco, No. 6231100-035) dalam volume 1 liter steril
akuades dan ditambahkan 2 g NaHCO 3. Setelah itu, M199 disaring melalui 0,45 dan
0,20 µm kertas saring, masing-masing disimpan pada suhu 4 ° C.

2.2.2 Persiapan plasma ikan

Ikan mas biasa dianestesi dengan 50 mg / l quinaldine. Darah ikan diambil dari vena ekor, di bagian ekor, menggunakan
jarum suntik no. 18 yang dilapisi dengan natrium heparin sebanyak 1000 unit / ml. Sampel darah ditempatkan ke dalam
tabung reaksi plastik steril dan disentrifugasi pada 1000 dan 3000 rpm masing-masing selama 10 menit. Porsi plasma
(berwarna kuning jernih) dipisahkan dan ditempatkan ke dalam tabung reaksi baru dan disentrifugasi pada 3000 rpm selama
10 menit. Kemudian plasma dipisahkan dan disaring menggunakan kertas saring 0,45 dan 0,20 µm, masing-masing pada
suhu -10 sampai -20 ° C.

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 271

2.2.3 Antibiotik dan sediaan antimikotik

Komposisi bahan kimia antibiotik dan antimikotik (Isom & Hudson, 1982) ditunjukkan pada Tabel 2.

Senyawa Konsentrasi ( • g / ml)

Antibiotik
Karbenisilin 100
Gentamisin sulfat 100
Rifampisin 100
Antimikotik
Amfoterisin B 5

Tabel 2. Kombinasi antibiotik dan antimikotik untuk kultur glochidia.

2.3 Persiapan Media Glochidia

Medium199 (lihat Bagian 2.2.1), plasma ikan (lihat Bagian 2.2.2) dan antibiotik / antimikotik (lihat Bagian 2.2.3)
masing-masing dicampur dalam rasio 2: 1: 0,5 (Tabel 1). Media buatan dibagi menjadi tabung reaksi plastik steril dan
disimpan pada suhu -10 hingga -20 ° C untuk media kultur tebar.

2.4 Persiapan glochidia

Kerang air tawar dewasa dikumpulkan dari habitat aslinya. Mereka diidentifikasi secara seksual dengan pengamatan
mikroskopis dari sperma dan telur dalam cairan yang dihisap dari gonad dengan menggunakan jarum suntik steril. Lima
belas ekor kerang betina dan lima belas ekor jantan dewasa dibudidayakan bersama dalam kandang jaring silinder
(diameter 50 cm × tinggi 50 cm) di kolam tanah untuk produksi glochidia dewasa. Mereka diizinkan memberi makan
makanan alami secara bebas. Setelah 1-2 minggu, semua betina diamati warna marsupial dengan penjepit untuk
membuka cangkang sedikit, dimana warna marsupial menunjukkan perkembangan stadium larva. Pada tahap imatur,
glochidia berwarna kuning, sedangkan warna coklat sebagian berada pada awal kematangan. Hanya marsupia coklat
utuh dari kerang gravid yang dipilih untuk memeriksa glochidia yang kuat dan cocok untuk kultur di media buatan.
Setelah itu, cangkang kerang gravida marsupia yang benar-benar coklat dicuci dengan air ledeng dan kemudian air
ledeng steril. Glochidia disedot dengan menggunakan spuit 1 ml yang sudah disterilkan dan dibuang ke depresi atau
kaca sumur dengan air suling steril. Kemudian, glochidia diamati di bawah mikroskop cahaya (× 400). Jika cangkangnya
tertutup secara berkala, mereka akan terhisap sesuai dengan yang disebutkan di atas. Kemudian dibersihkan untuk
membasmi sisa jaringan, lendir dan pecahan cangkang glochidia dengan menyemprotkan air suling steril ke atasnya.
Pembersihan total dan glochidia yang lebih kuat digunakan untuk kultur. Glochidia dari kerang gravid harus
dibudidayakan di media buatan dalam waktu 5 jam setelah panen.

2.5 Budaya Glochidia

Sekitar 5000-6000 glochidia dipindahkan ke dalam cawan budaya (90 × 15 mm) berisi 10 ml media buatan (Tabel 1).
Hidangan budaya ditempatkan di tempat yang rendah
inkubator suhu pada 25 • C dengan 5% CO 2. Media kultur dibuang dan diganti dengan media segar di tengah
periode budidaya. Terakhir, 4 ml disterilkan

www.intechopen.com
272 Budidaya Perairan

air suling ditambahkan ke cawan kultur untuk merangsang transformasi ketika mantel (Gbr. 1A) diamati sebelum 1
hari transformasi dari glochidia menjadi remaja. Transformasi remaja diamati dengan mikroskop cahaya (× 400)
untuk pergerakan kaki remaja (Gambar 1B) dan juga pergerakan remaja sebagai indikator keberhasilan
transformasi glochidia ke tahap remaja.

Gambar 1. Mikroskop cahaya perkembangan glochidial sampai remaja awal. SEBUAH; Perkembangan glochidial dengan tepi
mantel berbatasan dengan shell di luar (panah). B; Remaja awal dengan kaki (panah). Batang = 100 • m (Uthaiwan et.al., 2001).

3. Seleksi spesies makanan fitoplankton untuk remaja

Fitoplankton telah terbukti menjadi sumber nutrisi penting bagi beberapa spesies remis air tawar (Hudson & Isom,
1984; Gatenby et al., 1996; Gatenby et al., 1997; ÓBeirn et al., 1998; Uthaiwan et al., 2001). Selain itu, Kovitvadhi
et al. (2000) melaporkan bahwa fitoplankton berkontribusi pada 99% kandungan saluran pencernaan dari kerang
mutiara air tawar dewasa, H. (L.) myersiana di habitat alami. Akibatnya, fitoplankton dari saluran gastrointestinal
orang dewasa dibudidayakan dan dipilih untuk pemberian makan remaja. Mengumpulkan kerang dengan ukuran
berbeda dari habitat aslinya, dimana fitoplankton terdapat pada saluran cerna kemudian dipotong dan dihisap untuk
dikultur dalam air steril dengan media f / 2 (Guillard & Ryther, 1962). Kemudian, mereka dibudidayakan di bawah
cahaya tidak kurang dari

10.000 Lux selama 12 jam serta campuran sekitar 3% karbon dioksida. Dari situ fitoplankton yang akan dibudidayakan
sedang dalam proses sub-kultur dan dimurnikan setiap 2-10 hari dengan teknik streak plating (Hoshaw & Rosowski, 1973).
Pelat coretan ditempatkan di bawah cahaya sampai koloni tunggal fitoplankton muncul yang mungkin bertahan selama
10-30 hari. Setelah itu, fitoplankton tersebut disimpan dalam tabung miring. Setiap kali fitoplankton diperlukan untuk
pemberian pakan pada remaja, fitoplankton tersebut dikalikan dalam botol 1 liter dengan menggunakan formula terpisah
yang sama. Kovitvadhi dkk. (2006) sebagaimana tersebut di atas menemukan sepuluh spesies

fitoplankton; Ankistrodesmus gracilis, Chlamydomonas sp., Chlorella sp.1, Chlorella sp.2,

Kirchneriella kurvata, Monoraphidium sp., Navicula sp., Scenedesmus sp., Stichococcus sp. dan
Coccomyxa sp. Setelah itu, semua fitoplankton dipilih untuk benih budidaya yang sesuai yang harus
dipertimbangkan berdasarkan 6 kriteria menurut Areekijseree et al. (2006); Kovitvadhi dkk. (2006); Supannapong et
al., (2008): (1) ukuran (2) kemampuan filter ke dalam saluran cerna dengan mengamati di bawah mikroskop dalam
waktu 30 menit dan 1,30 jam setelah pemberian fitoplankton (3) pergerakan silia pada insang, mantel dan kaki
dengan mengamati di bawah mikroskop (4) perubahan warna saluran cerna yang seharusnya dari hijau menjadi
kuning atau coklat dan bentuk dari normal menjadi puing (5) kandungan karbohidrat dan protein

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 273

fitoplankton (6) efisiensi mencerna karbohidrat dan protein fitoplankton dengan menggunakan ekstrak enzim kasar
dari juvenil ( in vitro kecernaan). Fitoplankton utama yang cocok untuk budidaya juvenil kerang air tawar yaitu Chlorella
sp. 2 dan K.
kurvata ( Tabel 3).

Tabel 3. Karakteristik isolasi fitoplankton dari saluran pencernaan kerang air tawar dewasa di habitat alami dan in
vitro kecernaan karbohidrat (µg maltosa mg plankton- 1) dan protein (µg DL-alanine ekuivalen mg plankton- 1) dari
sepuluh spesies alga pada umur tujuh hari, menggunakan ekstrak enzim kasar dari remaja berumur 30 hari. 1 Kovitvadhi
dkk. (2006), 2 Supannapong dkk. (2008).

www.intechopen.com
274 Budidaya Perairan

4. Budidaya remaja

Setelah glochidia bertransformasi menjadi juvenil dalam media buatan, ditambahkan air sistem resirkulasi akuakultur
dengan perbandingan medium terhadap air sama dengan 3: 1, 1: 1, 1: 3 selama 30 menit, ditambahkan K.Durvata dan
Chlorella sp. dengan perbandingan 1: 1 dengan kepadatan 1 × 10 5 sel per ml dalam perbandingan sedang dengan air
sama dengan 1: 3. Dari sana, remaja yang dibudidayakan dipindahkan ke unit budaya. Tahap kultur juvenil dibedakan
menjadi 3 tahap, yaitu tahap pertama dimulai dari benih berumur 0 hari sampai dua cangkang kerang tertutup
seluruhnya. Kovitvadhi dkk. (2008) budidaya kerang air tawar berumur 0-120 hari, H. (L.) myersiana dengan sistem
resirkulasi akuakultur (Gbr. 2). Sistem ini terdiri dari tiga lemari filter yang terbuat dari akrilik setebal 6 mm (kabinet filter
partikulat, kabinet filter makrofit, dan kabinet filter biologis), satu kabinet penahan air (Gbr. 2E) dan sembilan unit kultur
plastik (Gbr. 2F). Ukuran kabinet filter partikulat (Panjang × Lebar × Tinggi × Ketinggian air = 46 × 35 × 51 × 42 cm)
dibagi menjadi dua bagian yang sama, bagian pertama diisi dengan filter nilon setebal 30 cm (Gbr. 2B). ). Air dialirkan
melalui filter ini dan melalui filter kedua ke kabinet filter macrophytes. Ukuran kabinet filter macrophytes (Panjang × Lebar
× Tinggi × Ketinggian air = 80 × 40 × 51 × 42 cm) dibagi menjadi empat unit yang sama. Setiap unit berisi 57 tanaman
ambulia, Limnophila heterophylla

(Raxb.) Bentham; ini, 228 tanaman total, diperkenalkan ketika mereka setinggi 6 cm dan memiliki berat rata-rata 2,69 ±
0,13 g (Gbr. 2C). Tanaman dicabut dan diganti ketika ujungnya mencapai permukaan air. Bagian atas lemari dilengkapi
dengan tiga lampu fluoresen (masing-masing 20 W) 25 cm di atas permukaan air (intensitas cahaya di permukaan air
sama dengan 5320 lux; 24 jam) (Gbr. 2G). Air kemudian dialirkan ke dalam lemari penyaring biologi (60 × 34 × 51 × 42
cm) yang diisi dengan bioball hingga kapasitas penuh (Gambar 2D) dan kemudian ke lemari istirahat (46 × 41 × 51 ×
42 cm). Di lemari peristirahatan terdapat dua pompa air: Yang pertama mengembalikan air ke lemari filter partikulat
dengan kecepatan 1 l per menit secara terus menerus dan yang kedua memompa air dengan kecepatan 20 ml per
menit ke sembilan unit kultur plastik (masing-masing 84 × 14 × 15 × 7 cm). Pompa ini dihentikan selama 1 jam setelah
fitoplankton dimasukkan ke dalam unit kultur. Bagian bawah unit kultur diisi dengan pasir (<120 µm) pada 0,27 g / cm3 2.
Bagian dalam unit kultur dibagi menjadi dua bagian, seperti dijelaskan sebelumnya, tetapi dengan ukuran berbeda
(bagian 1-66.1 × 14 × 15 × 7 cm; bagian 2-17.9 × 14 × 15 × 7 cm). Bagian pertama juga terdiri dari lima lembaran
akrilik yang menjorok dari dinding pada sisi yang bergantian. Remaja diberi makan Chlorella sp. dan K. kurvata. Tiap
spesies alga dikumpulkan dari 100 l dengan dipompa melalui filter keramik 0,3 µm dan kemudian dipisahkan dari air
dengan sentrifugasi pada 8000 × g. Sedimen kedua spesies alga dicampur dengan perbandingan berat basah 1: 1 dan
disimpan dalam freezer. Jika diperlukan, campuran dibawa ke suhu kamar kemudian dihisap dengan pipet Pasteur ke
dalam semua unit kultur plastik hingga kepadatan alga 1 × 10 5 sel per ml. Alga dipasok dua kali sehari (06.00 jam dan
18.00 jam), dan stok beku biasanya digunakan dalam 7 hari pengumpulan.

Tahap kedua, tiga puluh lima remaja (120 hari) dipindahkan ke unit kultur (20 × 12 × 72
cm). Unit budidaya memiliki keempat sisi vertikal yang dilapisi dengan jaring nilon (ukuran mata jaring 0,42 mm) dan
masing-masing memiliki tutup plastik dengan lubang untuk menutupi bagian atas. Bagian bawah unit kultur terdiri dari
bagian setinggi 2 cm, yang dipasang dengan pas ke dalam unit kultur, dari mana bagian tersebut dapat dilepas (Gbr. 3).
Bagian bawah ini mengandung 400 g pasir (ukuran <425 µm). Para remaja itu ditempatkan langsung di atas pasir. Unit
budidaya kemudian digantung di kolam tanah; dasar unit kultur disesuaikan dengan posisi kira-kira 50 cm di bawah
permukaan air. Para remaja diberi makan dengan cara menyaring fitoplankton dari air di kolam tanah. Semua kerang dari
unit budidaya dibilas setiap 10 hari.

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 275

Gbr. 2. Foto hasil resirkulasi yang digunakan untuk membudidayakan remaja kerang mutiara air tawar. SEBUAH; Sistem
akuakultur resirkulasi, B; Kabinet filter partikulat, C; Kabinet filter Macroplants, D; Kabinet filter biologis, E; Lemari
peristirahatan air, F; Unit kultur plastik, G; Kotak fluoresen.

Gambar. 3. Wadah pembesaran benih (Kovitvadhi et al., 2006).

www.intechopen.com
276 Budidaya Perairan

Tahap ketiga, anakan (umur 180 hari) dipindahkan untuk budidaya ke habitat alami atau kolam tanah dengan keramba
jaring silinder sampai dewasa.

5. Budaya orang dewasa

Saat ini, beberapa spesies dewasa kerang mutiara air tawar telah berhasil dibudidayakan di kolam tanah dan habitat aslinya.
Mereka memiliki kelangsungan hidup yang tinggi dan dapat menghasilkan tahap glochidia seperti H. (L.) myersiana ( Uthaiwan et
al., 2002; Kovitvadhi et al., 2006, 2007, 2008, 2009),
H. (H.) bialatus ( Areekijeree et al., 2006; Supannapong dkk., 2008; Srakaew dkk., 2010; Chumnanpuen et al., 2011;
Kovitvadhi & Kovitvadhi., Persiapan), C. hainesiana ( Kovitvadhi et al., Diserahkan). Lima belas ekor kerang betina dan lima
belas ekor jantan dewasa dibudidayakan bersama dalam kandang jaring silinder (diameter 50 cm x tinggi 50 cm). Kemudian,
digantung di bawah rakit (Gbr. 4) di
Pada kedalaman 1,5-2 m dari permukaan air terdapat fitoplankton yang cukup banyak. Kandang tersebut diguncang setiap minggu untuk
melindungi attachment biofouling yang dapat menyebabkan kematian massal.

Gambar 4. Rakit untuk budidaya kerang mutiara air tawar dewasa. (Kovitvadhi, 2008).

6. Analisis air

Sebelum budidaya kerang, kualitas air di habitat dipelajari dalam perbaikan air yang sesuai untuk pertumbuhan dan
kelangsungan hidup yang sesuai dengan Kovitvadhi et al. (2006, 2008) bahwa remaja dibudidayakan di
laboratorium dan kolam tanah di dekat habitat alami (Kovitvadhi et al., 1998) (Tabel 4). Parameter kualitas air harus
dianalisis untuk budidaya kerang mutiara air tawar: suhu air, pH, tubiditas, konduktivitas, oksigen terlarut, alkalinitas
total, karbon dioksida bebas, kekerasan total, total amonia nitrogen, nitrit, nitrat, fosfor, silika dan kalsium. Dalam
kaitan ini, tahap juvenil lebih sensitif terhadap perubahan lingkungan daripada tahap lainnya, terutama kualitas air
yang sesuai dan agak stabil; suhu air, pH, karbon dioksida bebas, oksigen terlarut, nitrat dan fosfor serta penurunan
nilai; total alkalinitas, total kekerasan, total amonia nitrogen, silika, dan kalsium kecuali nitrit yang mengalami
peningkatan nilai (Gbr. 5). Ketika nilai kualitas air rata-rata dihitung untuk hubungan dengan rata-rata nilai
kelangsungan hidup dan panjang cangkang

dengan persamaan: Y = b 0+ b 1 X + b 2 X 2+ b 3 X 3 dimana Y adalah kelangsungan hidup atau panjang cangkang, X adalah umur (hari),

dan B 0, b 1, b 2 dan B 3 adalah parameter. Ditemukan bahwa kelangsungan hidup remaja berumur 0-120 hari berhubungan
langsung dengan pH, alkalinitas total, kekerasan total, silika dan kalsium.
dengan perbedaan yang sangat signifikan (P <0,01) dan dengan hubungan terbalik dengan karbon dioksida dan nitrit bebas
(Tabel 5) (Kovitvadhi et al., 2008).

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 277

Budidaya remaja Budaya remis Budaya

Remis
di laboratorium 1 di bumi remis 1
Habitat 2
Kualitas air 0 - 60 60 - 120 kolam 1 0 -360 hari
(min. -
hari tua hari tua 120 -360 hari tua
maks.)
(berarti • SD) (rata-rata • SD) (berarti • SD) (berarti • SD)
Suhu air. (C) pH • 25 • 0.74 28 • 0,54 26.5 • 1.1 24.5-28.5 23.8-31.6
•
7.03 0.02 •
7,51 0,04 7.65 • 0.46 6.85-8.08 6.92-8.14
Oksigen terlarut 8.1 • 0,07 7.5 • 0,04 5.0 •0.6 4.2-8.2 2.5-9.0
(ppmO 2)
Alkalinitas total 52 • 1.41 52.75 • 0.35 83.7 • 20.3 50-114 62.5-115.0
(ppmCaCO 3)
Gratis 10 • 0,04 4.25 • 0.35 3.95 • 2.7 0-10.2 0-6.0
karbon dioksida
(ppmCO 2)
Kekerasan total 154 • 2.83 123 • 9.90 196.8 • 12.6 121-222 90-133
(ppmCaCO 3)
Amonia 0.42 • 0,02 0.28 • 0,01 0.44 • 0.19 0.20-0.82 0,22-0,88
nitrogen
(ppmNH 3- N)
Kalsium 139 • 9.9 89 • 4.24 101.1 • 5.1 86-142 65-105
(ppmCaCO 3)
Fosfor 0.12 • 0,06 0.19 • 0,07 0.17 • 0.1 0,01-0,45 0,08-0,88
(ppmP)
Silika (ppmSiO 2) 4.85 • 0.6 4.05 • 0,5 5.75 • 1.6 3-8 0,2-5,5
1 Kovitvadhi dkk. (2006), 2 Kovitvadhi dkk. (1998).

Tabel 4. Kualitas air selama budidaya benih berumur 0-360 hari dan habitat kerang dewasa H. (L.)
myersiana di Sungai Mae Klong, Provinsi Kanchanaburi.

Parameter Bertahan hidup Panjang cangkang Tinggi cangkang

Suhu air - 0,093 ns 0,075 ns 0.107 ns

pH 0,716 ** - 0,597 * - 0,590 *

Oksigen terlarut - 0.118 ns - 0,055 ns - 0,035 ns

Alkalinitas total 0,841 ** - 0,849 ** - 0,827 **

Karbon dioksida bebas - 0,634 * 0.481 ns 0.476 ns

Kekerasan total 0,769 ** - 0,764 ** - 0,751 **

Total amonia nitrogen - 0.152 ns - 0,051 ns - 0,061 ns

Nitrit - 0,716 ** 0,709 ** 0,688 **
Nitrat 0.203 ns - 0,200 ns - 0,218 ns
Fosfor 0,003 ns - 0,085 ns - 0,091 ns
Silika 0,914 ** - 0,913 ** - 0,091 **

Kalsium 0,817 ** - 0,751 ** - 0,761 **

Tabel 5. Koefisien korelasi antara tingkat kelangsungan hidup rata-rata dan kualitas air; laju pertumbuhan rata-rata dan
kualitas air juvenil H. (L.) myersiana dibudidayakan dalam sistem akuakultur resirkulasi setiap 10 hari. (Kovitvadhi et al., 2008)
(* = P < 0,05, ** = P < 0,01, ns = bukan perbedaan yang signifikan, P> 0,05).

www.intechopen.com
278 Budidaya Perairan

Suhu air ( ° C) pH Karbondioksida Gratis ( ppm CO 2)

28.5 6
8.2

8.1 5
28
8 4

7.9
27.5 3
7.8
2
27 7.7

1
7.6

26.5 7.5 0
0

20

40

60

80

0
100

120

20

40

60

80
20

40

60

80

100

120
100

120
Hari Hari Hari

Oksigen Terlarut ( ppm O 2)

8 Total Alkalinitas ( ppm CaCO 3) 120
Kekerasan Total ( ppm CaCO 3)
90

115
85
7.5
80 110

75 105
7
70 100

65 95
6.5
60 90

55 85
6
50 80
0

20

40

60

80

100

120

20

40

60

80

0
100

120

20

40

60

80

100

120
Hari Hari Hari

Total Amonia Nitrogen

- -
Nitrit ( TIDAK 2- N)
0.18 (ppm NH -N) 0,006
Nitrat ( ppm TIDAK -N)3
3 0.6
0.16
0,005 0,5
0.14

0.12 0,004 0.4

0.1
0,003 0.3
0,08

0,06 0,002 0.2

0,04
0,001 0.1
0,02

0 0 0
0

20

40

60

80
0

100

120
20

40

60

80

0
100

120

20

40

60

80

100

120

Hari Hari Hari

Fosfat ( ppm PO -P)

3-
Kalsium ( ppm CaCO) 3
0,08
4
10
Silika ( ppm SiO 2) 76

74
0,07 9

8 72
0,06
7
70
0,05
6
68
0,04 5

0,03 4 66

3 64
0,02
2
0,01 62
1
0 0 60
0

0
20

40

60

80

20

40

60

80
100

120

100

120
20

40

60

80

100

120

Hari Hari Hari

Gambar 5. Kualitas air selama kultur selama 0-120 hari Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana
remaja dalam sistem resirkulasi akuakultur (Kovitvadhi et al., 2008).

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 279

7. Komunitas fitoplankton

Fitoplankton ditemukan pada saluran cerna yang merupakan sumber nutrien beberapa spesies kerang air tawar
(Hudson dan Isom, 1984; Gatenby et al., 1996; Gatenby et al., 1997; ÓBeirn et al., 1998; Kovitvadhi et al., 2000,
2001). Temuan ini konsisten dengan analisis isi usus dari spesies kerang lainnya (Gale & Lowe, 1971; Huca et al.,
1983; Paterson, 1986; Parker et al., 1998). Dari data di atas dipastikan bahwa kerang mutiara air tawar akan
menyaring fitoplankton sebagai makanan utama. Oleh karena itu, dalam budidaya kerang mutiara air tawar dari
juvenil hingga dewasa diperlukan adanya jenis fitoplankton yang tersedia untuk dijadikan pakan juvenil dan dalam
jumlah yang sesuai selama masa budidaya baik di laboratorium maupun di sumber daya alam karena kerang air
tawar harus selalu menyaring fitoplankton. Jadi,

8. Perkembangan morfologi kerang air tawar

Sejak kerang mutiara air tawar glochidia H. (L.) myersiana dibudidayakan di media buatan yang dapat berkembang
hingga dewasa (Kovitvadhi et al., 2006). Oleh karena itu, Kovitvadhi et al. (2007) dapat mempelajari perkembangan
morfologi remaja hingga dewasa H. (L.) myersiana. Kerang dikumpulkan dalam tahap perkembangan berurutan
antara 0 dan 360 hari. Perkembangan morfologi diamati dengan mikroskop cahaya dan SEM. Pengamatan SEM
dibuat dalam larutan fiksatif yang mengandung 10% formalin buffer netral selama 24 jam dan disimpan dalam
formalin buffer netral 5% untuk proses selanjutnya. Sampel untuk SEM dicuci bersih dengan air mengalir selama 30
menit dan kemudian didehidrasi dalam serangkaian etanol dan dikeringkan sampai titik kritis. Setelah itu, mereka
dipasang pada potongan spesimen SEM dengan cat perak konduktif dan dilapisi dengan emas dan diamati dengan
mikroskop elektron pemindaian Jeol Model JSM-5410LV yang dioperasikan pada 25 KV. Semua sampel sebelum
fiksasi dianestesi dalam 2% kloral hidrat untuk mengamati regio internal.

Perkembangan morfologi H. (L.) myersiana juvenil dalam kultur (umur 0-360 hari) ditunjukkan pada Gambar 6. Remaja awal H.
(L.) myersiana pada usia 0 hari setelah transformasi memiliki cangkang semi-oval, ekivalen dengan katup sama sisi, memiliki
ukuran dan bentuk yang sama seperti glochidium (Gbr. 6A). Pertumbuhan cangkang anterior terlihat jelas pada hari pertama
perkembangan juvenil (Gbr. 6B), sedangkan pertumbuhan cangkang posterior mengikuti setelahnya (Gbr. 6C). Cangkang
remaja berumur 0-40 hari tipis dan transparan seperti yang terlihat di bawah mikroskop cahaya (Gbr. 6D). Organ dalam (yaitu
perut, usus, insang, jantung, kaki, mantel, dan silia pada insang, mantel dan kaki) diamati dengan jelas melalui cangkang
pada periode ini (Gbr. 6E). Cangkang, bagaimanapun, menjadi lebih tebal selama proses perkembangan dan menutupi
semua organ dalam (Gbr. 6E-

L). Sayap anterior dan posterior pertama muncul pada remaja berusia 50 hari (Gbr. 6E), dengan sayap posterior
menjadi dominan relatif terhadap anterior sejak stadium 140 hari (Gbr. 6H). Lobus mantel dari remaja berumur 0-50
hari bergabung di punggung dan bebas di bagian perut (Gbr. 6F). Siphon yang timbul dan siphon yang keluar
muncul setelah 50 hari (Gbr. 6G-6L). Morfologi dewasa lengkap terlihat dari umur 160 hari (Gbr. 6I). Organ
reproduksi jantan dan betina dewasa secara seksual yaitu kerang berumur 270-360 hari yang bergantung pada
lingkungan (Kovitvadhi et al., 2006; Srakaew et al., 2010) (Gbr. 6K-6L).

www.intechopen.com
280 Budidaya Perairan

SEBUAH; Mikroskopi cahaya cangkang juvenil muda (setelah transformasi, umur 0 hari), perhatikan engsel cangkang (sh). B; SEMmikrograf remaja
umur 1 hari, penampilan regio anterior periostracum lunak baru (pe), perhatikan cangkang glochidium (gs). C; Remaja berumur 10 hari, muncul regio
anterior (a) sebelum dan tumbuh lebih banyak dari posterior (p), perhatikan garis pertumbuhan (gl). D; Mikroskopi cahaya perkembangan cangkang,
remaja 40 hari, catatan kaki (f), insang (g), otot adduktor posterior (pa). E; Mikroskopi cahaya perkembangan cangkang, remaja berusia 50 hari,
perhatikan sayap anterior (aw); sayap posterior (pw). F; SEM sisi perut remaja usia 50 hari. G; Mikroskopi cahaya morfologi eksternal remaja usia 90
hari, perhatikan siphon ekskurensi, siphon incurrent, umbo (u). H; Mikroskopi cahaya morfologi eksternal remaja usia 140 hari, perhatikan rektum (r).
IL;

Gambar. 6. Perkembangan morfologi remaja 0-360 hari dari Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana. ( Kovitvadhi
et al., 2006; 2007).

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 281

9. Ringkasan

Budidaya kerang mutiara air tawar dibagi menjadi tiga langkah berturut-turut: (1) budidaya larva glochidia di media buatan, (2) pembesaran juvenil dan (3)

pembesaran dewasa. Hasil beberapa penelitian menunjukkan bahwa glochidia pada beberapa spesies kerang air tawar dapat dibudidayakan pada media

buatan yang mengandung campuran M199, plasma ikan mas, antibiotik dan antimikotik, serta dapat berkembang sempurna dewasa dan gametogenesis

selesai. Faktor penting dalam budidaya remaja meliputi sistem budidaya, kualitas air, substrat (pasir) dan makanan. Sistem resirkulasi akuakultur berskala

laboratorium, dimana perubahan kualitas air agak stabil dan pasir dapat menempelkan bahan makanan seperti bahan organik atau mikroorganisme.

Selain itu, para remaja dapat menggali pasir seperti yang mereka lakukan di alam. dan ini membantu mereka mencegah keterikatan pada cangkang feses

dan pseudofeces dengan banyak protozoa dan kemudian cacing pipih dan akhirnya kematian anak-anaknya. Namun, ukuran pasir harus sesuai untuk

setiap ukuran juvenil. Fitoplankton merupakan salah satu sumber nutrisi yang sangat penting, memiliki ukuran dan bentuk yang sesuai untuk dipindahkan

ke dalam mulut remaja agar dapat dicerna oleh remaja. Sebelum dipindahkan ke luar ruangan, organ kerang harus berkembang sempurna untuk menelan

makanan, terutama insang, siphon yang keluar dan keluar, dan cangkangnya harus menutup sepenuhnya. Selain itu, kualitas air dan makanan juga

merupakan faktor penting untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup. ukuran pasir harus sesuai untuk setiap ukuran juvenil. Fitoplankton merupakan

salah satu sumber nutrisi yang sangat penting, memiliki ukuran dan bentuk yang sesuai untuk dipindahkan ke dalam mulut remaja agar dapat dicerna oleh

remaja. Sebelum dipindahkan ke luar ruangan, organ kerang harus berkembang sempurna untuk menelan makanan, terutama insang, siphon yang keluar

dan keluar, dan cangkangnya harus menutup sepenuhnya. Selain itu, kualitas air dan makanan juga merupakan faktor penting untuk pertumbuhan dan

kelangsungan hidup. ukuran pasir harus sesuai untuk setiap ukuran juvenil. Fitoplankton merupakan salah satu sumber nutrisi penting yang memiliki

ukuran dan bentuk yang sesuai untuk dipindahkan ke dalam mulut remaja agar dapat dicerna oleh remaja. Sebelum dipindahkan ke luar ruangan, organ

kerang harus sepenuhnya berkembang untuk menelan makanan, terutama insang, siphon yang keluar dan keluar, dan cangkangnya harus menutup sepenuhnya. Selain itu, kualit

10. Ucapan Terima Kasih

Kami berterima kasih kepada Departemen Budidaya Perairan Fakultas Perikanan Universitas Kasetsart yang telah
menyediakan kolam untuk budidaya kerang. Kami sangat berterima kasih kepada Direktur Pusat Pengembangan
Perikanan Darat Kanchanaburi, Departemen Perikanan dan Ibu Oodeum Meejui, yang memasok remis air tawar. Chamberlainia
hainesiana sangat dihargai.

11. Referensi

Areekijseree, M., Engkagul, A., Kovitvadhi, S., Kovitvadhi, U., Thongpan, A. &
Rungruangsak Torrissen, K. (2006). Perkembangan enzim pencernaan dan in vitro
kecernaan berbagai spesies fitoplankton untuk budidaya remaja awal dari kerang mutiara air tawar, Hyriopsis
(Hyriopsis) bialatus Simpson 1900. Reproduksi dan Perkembangan Avertebrata 49, hlm.255-262, ISSN
2157-0272
Buddensiek, V. (1995) Budidaya kerang mutiara air tawar remaja Margaritifera
margaritifera L. di kandang: kontribusi untuk program konservasi dan pengetahuan tentang persyaratan
habitat. Konservasi Biologis 74, hlm. 33-40, ISSN 00063207

Chumnanpuen, P., Kovitvadhi, U., Chatchavalvanich, K., Thongpan, A. & Kovitvadhi, S.

(2011) Perkembangan morfologi glochidia melalui media buatan sejak dini
remaja kerang mutiara air tawar, Hyriopsis (Hyriopsis) bialatus. Reproduksi dan Perkembangan
Avertebrata 55, hlm. 40-52, ISSN 2157-0272
Fukuhara, S., Nakai, I. & Nagata, Y. (1990) Perkembangan larva Anodonta woodiana
(Bivalvia) diparasit pada ikan inang. Venus 49, hlm. 54–61, ISSN 0042-3580

www.intechopen.com
282 Budidaya Perairan

Gale, WF & Lowe, RL (1971) Fitoplankton menelan kerang kuku, Sphaerium

transersum ( Katakanlah), di kolam 19, Sungai Mississippi. Ekologi 52, hlm. 507-512, ISSN 00129658

Gatenby, CM, Neves, RJ & Parker, BC (1996) Pengaruh sedimen dan makanan alga pada
kerang air tawar remaja yang dibudidayakan. Jurnal Benthological Amerika Utara
Masyarakat 15, hlm. 597–609, ISSN 0001-4966
Gatenby, CM, Parker, BC & Neves, RJ (1997) Pertumbuhan dan kelangsungan hidup pelangi remaja
kerang Villosa iris ( Lea, 1829) (Bivalvia: Unionidae), dipelihara dengan pakan alga dan sedimen. American
Malacological Society 14, hlm. 57–66, ISSN 1000-3207
Guillard, RRL & Ryther, JH (1962) Studi diatom planktonik laut. saya Cyclotella nana
Hustedt dan Detonula confervacea ( Cleve). Gran. Jurnal Mikrobiologi Kanada 8,
hlm. 229-239, ISSN 0008-4166
Hanlon, SD & Neves, RJ (2006) Pertumbuhan musiman dan kematian remaja Lampsilis
fasciola ( Bivalvia: Unionidae) dilepaskan ke tempat balapan pembenihan ikan. Buletin Malakologi Amerika 21,
hlm. 45–49, ISSN 0740-2783
Hoshaw, RW & Rosowski, JR (1973) Metode untuk alga mikroskopis. In: Stein, JR (ed.),
Buku Pegangan Metode Fisik, Metode Kultur dan Pengukuran Pertumbuhan. Cambridge University
Press, AS. ISBN 0-521-20049-0
Huca, GA, Brennerand, RR & Niveiro, MH (1983) Sebuah studi tentang biologi Diplodon
delodontus ( Lamarck, 1819). Veliger 25, hlm. 51–58, ISSN 0042-3211
Hudson, RG & Isom, BG (1984) Pemeliharaan juvenil kerang air tawar (Unionidae) di
pengaturan laboratorium. Nautilus 98, hlm. 129–135, ISSN 0028-1344
Isom, BG & Hudson, RG (1982) In vitro budidaya parasit glochidia kerang air tawar.
Nautilus 96, hlm. 147-151, ISSN 0028-1344
Isom, BG & Hudson, RG (1984a) Kerang air tawar dan ikan inangnya; fisiologis
aspek. Jurnal Parasitologi 70, hlm. 318-319, ISSN 0022-3395
Isom, BG & Hudson RG (1984b) Kultur glochidia remis air tawar dalam
habitat dengan menggunakan media pertumbuhan cair yang kompleks. KAMI Paten 4449480 Keller, AE & Zam, SG
(1990) Penyederhanaan in vitro teknik budidaya untuk Air Tawar
kerang. Toksikologi dan Kimia Lingkungan 9, hlm. 1291-1296, ISSN 0730-7268
Kovitvadhi, S. (2008) Kultur in vitro pada juvenil remis air tawar Hyriopsis (Limnoscapha)
myersiana (Lea, 1856). Ph.D. Tesis. Universitas Porto, Portugal.
Kovitvadhi S., Kovitvadhi U. & Meejui O. 2011. Pertumbuhan dan kelangsungan hidup mutiara air tawar
remis Chamberlainia hainesiana ( Lea, 1856) dari remaja sampai dewasa dipelihara dalam kepadatan dan lokasi yang
berbeda. Akuakultur ( diserahkan)
Kovitvadhi, S., Kovitvadhi, U., Sawangwong, P. & Machado, J. (2007) Morfologi
perkembangan remaja sampai dewasa dalam kerang mutiara air tawar,
Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana, di bawah budaya buatan. Reproduksi Invertebrata
dan pengembangan 50, hlm. 207–218. ISSN 2157-0272
Kovitvadhi, S., Kovitvadhi, U., Sawangwong, P. & Machado, J. (2008) Skala laboratorium
sistem resirkulasi budidaya untuk remaja kerang mutiara air tawar
Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana ( Lea, 1856). Budidaya Perairan 49, hlm. 255-262, ISSN
0044-8486
Kovitvadhi, S., Kovitvadhi, U., Sawangwong, P., Thongpan, A. & Machado, J. (2006)
Optimalisasi pakan dan lingkungan budidaya untuk larva dan juvenil air tawar

www.intechopen.com
In Vitro Budidaya Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa 283

kerang mutiara, Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana ( Lea, 1856). Invertebrata

Reproduksi dan Perkembangan 49, hlm. 61–70, ISSN 2157-0272
Kovitvadhi, S., Kovitvadhi, U., Sawangwong, P., Trisaranuwatana, P. & Machado, J. (2009)
Hubungan morfometri berat dan panjang kerang mutiara air tawar budidaya, Hyriopsis (Limnoscapha)
myersiana ( Lea, 1856) dalam kondisi laboratorium dan fase kolam tanah. Aquaculture International 17,
hlm. 57-67, ISSN 09676120

Kovitvadhi, U. (2000) Budidaya glochidia kerang mutiara air tawar Hyriopsis myersiana (Lea,
1856) di media buatan. Ph.D. Tesis. Universitas Porto, Portugal.
Kovitvadhi, U., Chaopaknam, B., Nagachinta, A., Jongrungwit, K. & Kulayanamit S. (1998)
Ekologi kerang mutiara air tawar, Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana ( Lea, 1856) di Sungai Maeklong,
Provinsi Kanchanaburi. Jurnal Kasetsart: Ilmu Pengetahuan Alam 32, hlm. 1-12, ISSN 0075-5192

Kovitvadhi, U., Nagachinta, A. & Aungsirirut, K. (2000) Komposisi spesies dan

kelimpahan plankton di isi usus kerang mutiara air tawar, Hyriopsis
( Limnoscapha) myersiana. Jurnal Malakologi Medis dan Terapan 10, 203–209,
ISSN 1053-6388
Lima, P., Kovitvadhi, U., Kovitvadhi, S. & Machado, J. (2006) In vitro budaya glochidia
dari kerang air tawar Anodonta cygnea. Biolologi Invertebrata 125, 34-44, ISSN 1077-8306

ÓBeirn, FX, Neves, RJ & Steg, MB (1998) Kelangsungan hidup dan pertumbuhan air tawar remaja
kerang (Unionidae) dalam sistem akuakultur bersirkulasi. Buletin Malakologi Amerika 14, hlm. 165–171
ISSN 1000-3207
Panha, S. (1992) Percobaan infeksi dari glochidium dari kerang mutiara air tawar
Hyriopsis myersiana ( Lea, 1856). Venus 51, hlm. 303–314, ISSN 0042-3580
Parker, BC, Patterson, MA & Neves, RJ (1998) Memberi makan interaksi antara native
kerang air tawar (Bivalvia: Unionidae) dan kerang zebra ( Dreissena
polymorpha) di Sungai Ohio. Buletin Malakologi Amerika 14, hlm. 173–179,
ISSN 1000-3207
Paterson, CG (1986) Selektivitas ukuran partikel. I Kerang air tawar Elliptio complanata
(Lightfoot). Veliger, 29, 235–237, ISSN 0042-3211
Srakaew, N., Chatchavalvanich, K., Kovitvadhi, S., Kovitvadhi, U. & Thongpan, A. (2010)
Struktur histologis perkembangan gonad pada kerang mutiara air tawar,
Hyriopsis (Limnoscapha) myersiana. Reproduksi dan Perkembangan Avertebrata 54, hal.
203-211, ISSN 2157-0272
Supannapong, P., Pimsalee, T., A-komol, T., Engkagul, A., Kovitvadhi, U., Kovitvadhi, S., &
Rungruangsak Torrissen, K. (2008) Enzim pencernaan dan in vitro kecernaan berbagai spesies
fitoplankton untuk budidaya kerang mutiara air tawar,
Hyriopsis (Hyriopsis) bialatus. Aquaculture International 16, hlm. 437-453, ISSN 0967-
6120
Uthaiwan, K., Noparatnaraporn, N. & Machado, J. (2001) Budaya glochidia dari
kerang mutiara air tawar Hyriopsis myersiana ( Lea, 1856) di media buatan.
Budidaya Perairan 195, hlm. 61-69, ISSN 0044-8486

www.intechopen.com
284 Budidaya Perairan

Uthaiwan, K., Pakkong, P., Noparatnaraporn, N., Vilarinho, L. & Machado, J. (2002) Studi
dari plasma ikan yang cocok untuk in vitro budaya glochidia Hyriopsis myersiana ( Lea,
1856). Budidaya Perairan 209, hlm. 197-208, ISSN0044-8486
Uthaiwan, K., Pakkong, P., Noparatnaraporn, N., Vilarinho, L. & Machado, J. (2003)
Studi tentang komposisi plasma ikan inang kerang air tawar,
Hyriopsis myersiana, dengan implikasi untuk perbaikan media budaya
dari glochidia. Reproduksi dan Perkembangan Avertebrata 44, hlm.53-61, ISSN 2157-
0272

www.intechopen.com
 Budidaya Perairan

Disunting oleh Dr. Zainal Muchlisin

ISBN 978-953-307-974-5

Sampul tebal, 390 halaman

Penerbit InTech

Dipublikasikan secara online 27 Januari 2012

Diterbitkan dalam edisi cetak Januari 2012

Buku ini memberikan pemahaman tentang berbagai macam topik terkait akuakultur. Buku ini diatur dalam empat bagian. Bagian pertama membahas nutrisi

ikan. Bagian kedua membahas penerapan genetik dalam budidaya; bagian tiga membahas teknik terkini untuk mengendalikan oksidasi lipid dan melanosis

dalam produk Akuakultur. Bagian terakhir difokuskan pada teknik dan manajemen budaya, yang merupakan bagian terbesar dari buku ini. Bab-bab buku

ditulis oleh para ahli terkemuka di bidangnya masing-masing. Oleh karena itu, saya cukup yakin bahwa buku ini akan berguna bagi pelajar dan profesional di

bidang akuakultur dan bioteknologi.

Bagaimana referensi

Untuk mereferensikan karya ilmiah ini dengan benar, silakan salin dan tempel yang berikut ini:

Satit Kovitvadhi dan Uthaiwan Kovitvadhi (2012). Kultur In Vitro Kerang Mutiara Air Tawar dari Glochidia hingga Dewasa, Budidaya, Dr. Zainal Muchlisin

(Ed.), ISBN: 978-953-307-974-5, InTech, Tersedia dari: http://www.intechopen.com/ buku / akuakultur /

in-vitro-culture-of-freshwater-pearl-remis-from-glochidia-to- adult

InTech Europe InTech China

Kampus Universitas STeP Ri Slavka Unit 405, Blok Kantor, Hotel Equatorial Shanghai No.65, Yan An Road

Krautzeka 83 / A (Barat), Shanghai, 200040, Cina

51000 Rijeka, Kroasia

Telepon: +385 (51) 770447 Fax: +385 Telepon: + 86-21-62489820

(51) 686166 www.intechopen.com Faks: + 86-21-62489821

© 2012 Penulis. Pemegang Lisensi IntechOpen. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di
bawah persyaratan Lisensi Creative Commons Attribution 3.0 , yang mengizinkan penggunaan, distribusi,
dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya aslinya dikutip dengan benar.