4.

Hasil studi yang dipilih dari penggunaan SLN untuk pemberian obat
sitotoksik
Dalam hal stabilitas obat, biodistribusi obat, farmakokinetik, dan aktivitas antikanker,
formulasi SLN agen antikanker telah terbukti lebih unggul dari larutan obat bebas yang sesuai,
dan setidaknya sebanding dengan sistem pembawa obat lainnya. Sejumlah hasil penting dalam
penelitian-penelitian SLN dibahas dalam bagian berikut.
4.1. Peningkatan stabilitas senyawa sitotoksik oleh enkapsulasi SLN

Banyak senyawa sitotoksik yang reaktif dan relatif tidak stabil. Penggabungan molekul
obat lipid padat dapat meminimalkan eksposur mereka ke lingkungan berair dan sebagian
melumpuhkan molekul obat dalam matriks lipid - baik yang dapat melindungi obat dikemas
terhadap degradasi. Bahkan, telah ditunjukkan dalam sejumlah formulasi SLN kosmetik yang
SLN mampu memperpanjang kehidupan senyawa sensitif seperti retinol dan vitamin E [69,70] .
Kualitas ini juga telah ditunjukkan untuk sejumlah senyawa antikanker sitotoksik yg relatif tidak
stabil.

Gambar. 2. Diagram Skema untuk menggambarkan proses pelepasan obat dari polimer lipid
hybrid nanopartikel obat-loaded (PLN). D + merupakan molekul obat kationik dan garis kurva
partikel yang dilepaskan, meninggalkan molekul polimer relatif hidrofilik; (C) beberapa muatan
residu pada polimer yang tidak sepenuhnya di netralkan dapat mempercepat erosi lipid, dan
memungkinkan pelepasan molekul obat yang lebih tinggi dari bagian dalam nanopartikel. (A)
PLN obat-loaded; (B) molekul obat didekat permukaan dilepaskan, meninggalkan molekul
polimer yang relative hidrofilik di belakang.
 senyawa antikanker sitotoksik adalah bahan kimia yang cukup reaktif. Salah satu contoh
adalah senyawa berbasis camptothecin [71] . Camptothecin adalah senyawa prototipe dari kelas
yang relatif baru dari agen antikanker yang dikenal sebagai inhibitor topoisomerase (misalnya
irinotecan, topotecan), yang menstabilkan pengikatan topoisomerase I di DNA dan kemudian
menyebabkan fragmentasi DNA pada G2-fase dari siklus sel dan kematian sel. Aktivitas
antikanker inhibitor topoisomerase sangat berkorelasi dengan fungsi dari cincin lakton dari
molekul obat tersebut. cincin lakton ini dapat dibuka dan diubah menjadi karboksilat. ( Gambar.
3 ). Hal ini menunjukkan bahwa molekul camptothecin yang dimuat di SLN dikonversi ke dalam
bentuk karboksilat tidak aktif hanya setelah obat dibebaskan dari nanopartikel ke dalam media
buffered netral [27] . Namun, ketika dilepaskan dalam medium asam obat tetap sebagai bentuk
lakton. Dengan kata lain SLN menjaga obat dari hidrolisis sampai ke titik yang dilepaskan. Hasil
yang sama diperoleh dalam sistem SLN lain memuat SN-38, prodrug yang relatif hidrofilik dari
irinotecan yang juga membawa struktur lakton yang labil seperti camptothecin [44] . pada stydi
in vivo nudemice menunjukkan t½ yang diperpanjang dari bentuk obat lakton aktif dalam
seluruh darah. Semua temuan ini menunjukkan bahwa SLN mampu melindungi obat antikanker
labil diketahui rentan terhadap hidrolisis.

Temuan serupa diamati dalam studi doxorubicin, yang mudah terdegradasi ketika
terkonsentrasi terutama ketika terkena cahaya [72] . Dalam sebuah studi dari formulasi PLN
doxorubicin-loaded, aktivitas biologis doxorubicin dilepaskan dari PLN dan dibandingkan
dengan larutan doxorubicin segar terhadap sel kanker payudara manusia [34] . Tidak ada
perbedaan yang signifikan antara dua perlakuan. Persiapan nanopartikel dan proses pelepasan
obat tidak mengurangi aktivitas antikanker doxorubicin, bahkan prosedur ini tidak
dilakukan dalam suasana gelap.

Studi stabilitas juga dilakukan pada muatan SLN dengan semua- trans retinoic acid (ATRA) [43]
, Senyawa lain yang sensitif terhadap cahaya. Selain ringan, ATRA juga sensitif terhadap panas
dan oksidan [73] , Dan dapat dengan cepat terdegradasi menjadi produk yang kurang aktif seperti
isotretinoin dan semua- trans- 4-okso. Setelah 3 bulan penyimpanan pada 4 ° C, lebih dari 90%
dari molekul obat ATRA di SLN tetap kimia utuh. Hal ini dapat dibandingkan dengan sekitar
50% degradasi obat ketika disimpan pada suhu yang sama dalam bentuk larutan metanol atau
larutan 1% polisorbat-80 untuk 1 bulan. Oleh karena itu, SLN berguna untuk melindungi
senyawa antikanker yang sensitif terhadap cahaya, dan mungkin panas dan oksidan.

4.2. Peningkatan farmakokinetik dan biodistribusi obat oleh SLN

4.2.1. farmakokinetik diubah obat sitotoksik yang diberikan oleh SLN
Seperti disebutkan dalam Bagian 3.3, “ non-stealth ” pembawa obat partikulat dapat
dibersihkan dari sirkulasi sistemik oleh RES dalam waktu yang sangat singkat, yaitu, menit.
Namun, fenomena ini tidak diamati pada hewan percobaan menggunakan SLN. tabel 3
merangkum parameter farmakokinetik dalam beberapa studi agen antikanker yang diberikan oleh
SLN. Semua formulasi SLN non-stealth menyebabkan tingkat signifikan lebih tinggi dari obat
yang tersisa dalam sirkulasi sistemik untuk waktu yang cukup lama. AUC obat disampaikan oleh
non-stealth SLN adalah sekitar tiga sampai lebih dari dua puluh kali lipat lebih tinggi daripada
yang larutan obat yang sesuai. Terminal paruh obat juga meningkat secara signifikan bila
diberikan melalui SLN. Dalam sebagian besar studi yang terdaftar, lesitin berbasis (misalnya
Epikuron 200) surfaktan yang digunakan untuk menstabilkan SLN. Sejauh ini tidak ada laporan
tentang kelas surfaktan ini yang berunding sifat stealth untuk sistem pengiriman obat.
kemampuan yang ditunjukkan ini socalled “ non-stealth ” sistem SLN untuk memperpanjang
peredaran narkoba mungkin bisa menjadi karakteristik yang melekat di SLN. Studi lebih pasti
diperlukan untuk memperjelas masalah ini.

Penyalutan SLN dengan PEG-2000 lebih meningkat kemampuannya untuk menghindari

clearance RES [26,29,31] . AUC meningkat secara signifikan setelah pelapisan SLN dengan
agen stealth ( tabel 3 ). Selain itu, sebagian besar studi menunjukkan waktu sirkulasi meningkat
untuk stealth dibandingkan partikel non-stealth. Namun, peningkatan waktu sirkulasi umumnya
tidak substansial dengan peningkataanya terlihat dalam larutan obat untuk SLN non-stealth.
Perlu dicatat bahwa tidak satupun dari studi ini memberikan informasi mengenai stabilitas in
vivo lapisan agen stealth. Apakah mereka polimer hidrofilik tetap secara fisik terkait dengan
score nanopartikel lipid dalam sirkulasi sistemik untuk kali dari urutan jam tidak diketahui.
penelitian yang lebih melibatkan penggunaan teknik stealth akan dibutuhkan untuk lebih
mendefinisikan perannya dalam farmakokinetik SLN.

4.2.2. Biodistribusi dari SLN dan obat SLN-encapsulasi

Gambar. 3. degradasi hidrolitik dari camptothecin. Struktur cincin lakton dari camptothecin
(kiri) dapat hydrolytically dibuka untuk membentuk karboksilat (kanan). Proses ini dipercepat
pada pH tinggi (di ion hidroksida).

tabel 3
farmakokinetik diubah obat antikanker yang ditampilkan oleh non-stealth dan stealth SLN
Hewan

Faktanya hanya ketika obat sitotoksik antikanker mencapai tumor ia dapat menjalankan
efek terapeutik. Oleh karena itu, dari perspektif klinis, itu lebih penting untuk mengetahui di
mana tepatnya obat antikanker telah didistribusikan bukan bagaimana lamanya bisa tinggal
dalam sirkulasi sistemik. Sampai sekarang, semua studi biodistribusi antikanker SLN obat-
loaded yang dihasilkan profil obat in vivo yang dapat dianggap terapi menguntungkan
[26,29,31,32,38] . Sayangnya, kecuali studi dalam jumlah terbatas , sebagian besar kelompok
digunakan hewan yang sehat bukan hewan tumor-bearing. Oleh karena itu, apakah SLN dapat
menyebabkan peningkatan konsentrasi obat tumor melalui efek EPR dijelaskan dalam
Pendahuluan adalah sejauh terbatas. Baru-baru ini, Reddy et al. [37] menggunakan limfoma tikus
yang menderita tumor Dalton untuk membandingkan biodistribusi bebas 99 m Teknesium
berlabel etoposid dan etoposid radio berlabel dimuat ke SLN. Meskipun signifikansi statistik
yang kuat ( p b 0,001) mengklaim dalam artikel masih harus dikonfirmasi, studi ini dilakukan
untuk menunjukkan konsentrasi obat tumor yg meningkat ketika intravena v.) diberikan
etoposid dimuat di SLN dibandingkan dengan obat bebas, (kenaikan sekitar 67% 1 jam pasca
injeksi, 30% kenaikan 24 jam pasca injeksi). Hal ini menjanjikan dalam hal kemoterapi kanker.
Menariknya, dalam studi yang sama, secara kualitatif serupa, tetapi secara kuantitatif
lebih besar perbaikan dalam akumulasi obat tumoral diamati ketika formulasi etoposid
disuntikkan intraperitoneal (ip) atau subkutan (sc) daripada iv administrasi subkutan bahkan
menyebabkan peningkatan multiplefold Tumor pada obat selama konsentrasi 24 h pasca injeksi.
Para penulis menyarankan bahwa lebih lambat dan progresif penetrasi nanopartikel (dan
karenanya obat dimuat) dari situs injeksi subkutan ke dalam tumor dapat mengakibatkan pola
yang lebih menguntungkan dari distribusi obat. Dalam studi oleh Zara et al. [31] , Administrasi
duodenum dari SLN idarubicin-loaded juga menyebabkan AUC lebih tinggi daripada ketika SLN
diberikan secara intravena. Jelaslah bahwa biodistribusi dari obat antikanker yang disampaikan
oleh SLN selanjutnya dapat dimanipulasi oleh rute injeksi untuk mencapai tujuan terapi yang
diinginkan. Cara pemberian dari formulasi SLN akan menjadi kunci aspek yang perlu
dipertimbangkan ketika merancang penelitian hewan atau klinik menggunakan SLN
untuk pemberian obat antikanker.
Secara keseluruhan, setiap studi biodistribusi Ulasan dalam bab ini menunjukkan
perubahan signifikan dalam distribusi obat ketika agen antikanker yang diuji disampaikan
menggunakan SLN. tabel 4 merangkum temuan beberapa studi ini. Kenaikan atau penurunan
tingkat obat di sejumlah organ penting berikutnya untuk penggunaan formulasi SLN tercantum
dalam tabel ini.
TABEL 4

Perubahan biodistribusi obat antikanker yang dihantarkan oleh SLN

Obat Organ dengan konsentrasi Organ dengan konsentrasi

obat meningkat yang obat menurun yang
dihantarkan oleh SLN dihantarkan oleh SLN
Idarubicin Darah, otak Jantung, paru-paru, limpa,
ginjal
Etoposide Darah, otak, tumor, hati, paru- Jantung, hati, ginjal
parua, limpa, ginjala, tulang
Doxorubicin Darah, otak Jantung, hati, paru-paru,
limpa, ginjal
Camptothecin Darah, otak, hati, jantung,
limpa, paru-paru, ginjal
Doxorubicin Darah, otak Jantung, hati, paru-paru,
limpa, ginjal
a : obat yang konsentrasunya menurun satu jam setelah injeksi, tapi meningkat 24 jam setelah
injeksi

Selain darah, konsentrasi obat secara signifikan lebih tinggi terdeteksi di otak dalam
semua penelitian ketika obat di enkapsulasi dan dihantarkan dalam SLN. Sawar darah otak, yang
terutama dibentuk oleh sel-sel endotel microvessel otak, dikenal sebagai penghambat utama
untuk pengobatan kemoterapi tumor otak. Fitur anatomi yang unik dari penghalang ini, mis.
persimpangan ketat dan ekspresi tingkat tinggi P-glikoprotein dalam sel, keduanya mencegah
obat antikanker seperti taxanes dan anthracyclines mencapai tingkat terapi di otak. Oleh karena
itu, temuan menarik SLN mampu mengatasi hambatan ini. Beberapa studi menunjukkan bahwa
perubahan dalam pembuluh darah yang disebabkan oleh tumor otak dapat mengakibatkan
hambatan dalam struktur penyangga, namun kemungkinan ini tidak dapat diterapkan pada studi
yang disebutkan di atas karena penelitian yang dilakukan pada hewan sehat. Beberapa sistem
nanopartikel lainnya juga telah terbukti berguna dalam melewati sawar darah otak. Seperti
dibahas sebelumnya oleh penelitian lain, SLN memiliki keunggulan yang unik sebagai pembawa
obat. Toksisitas intrinsic yang rendah dan biodegradasi lipid yang digunakan dalam SLN
mungkin menjadi kelebihan dalam manajemen tumor otak mengingat sedikitnya pengetahuan
tentang cara sel-sel otak mengangani polimer dan produk degradasinya.
 Terkecuali pada penelitian Yang et al., semua sistem SLN membuat konsentrasi obat di
jantung berkurang dibandingkan dengan obat bebas. Anthracyclines, kelas obat sitotoksik
spectrum luas termasuk doxorubicin dan idarubicin, umumnya cardiotoksik, dan kardiotoksisitas
ini berkolerasi dengan dosis komulatif obat. Misalnya dalam kasus doxorubicin, batas dosis
seumur hidup manusia adalah 450mg. Dosis seumur hidup pasien ini mampu menghilangkan
nilai terapetik dan berguna sebagai kelas obat antikanker. Penggunaan SLN sebagai penghantar
Athracycline dapat menurunkan paparan obat terhadap jantung, dan dengan demikian berpotensi
dapat menghapus atau menaikkan dosis obat, sehingga dokter dapat memilihkan rejimen terapi.

4.2.3 Aktivitas signifikan obat antikanker enkapsulasi SLN

Tujuan utama dari kemoterapi kanker adalah untuk membunuh sebanyak mungkin sel
kanker sementara pada saat yang sama sel-sel yang sehat tidak terpengaruh. Untuk memprediksi
sitotoksisitas SLN bekerja hanya di sel kanker, hanya menentukan stabilitas kimia biasanya tidak
cukup. Dalam banyak formulasi, kurang dari setengah dari SLN dilepaskan, tetapi akan dibahas
dalam studi sitotoksisitas bahwa formulasi ini kadang lebih sitotoksik terhadap sel kanker
dibandingkan dengan obat bebeas yang sesuai. Dengan kata lain senyawa sitotoksik yang tetap
belum pernah dikeluarkan dan terkait dengan nanopartikel juga tampak efektif. Aktivitas
antikanker mereka meskipun identitas kimia tidak berubah setelah enkapsulasi. Oleh karena itu
penting untuk menetapkan sitotoksisitas tidak hanya obat yang dilepaskan, tetapi formulasi SLN
secara keseluruhan dalam sistem kanker secara in vitro atau in vivo.

Serpe et al. [23] mengevaluasi sitotoksisitas dari formulasi SLN yang membawa
cholesteryl butyrate, doxorubicin atau paclitaxel pada sel kanker kolorektal manusia HT-28.
Cholesteryl butyrate adalah agen yang relatif baru yang diidentifikasi untuk pengobatan
antikanker. Hal ini diketahui menghasilkan perubahan dalam struktur kromosom, menghambat
pertumbuhan sel dan menginduksi kematian sel (atau apoptosis) dalam sel kanker usus .
Cholesteryl butyrate adalah prodrug dari butyrate. Paclitaxel dan doxorubicin adalah obat
sitotoksik antikanker spektrum luas yang digunakan untuk berbagai macam keganasan. SLN
cholesteryl butyrate dan doxorubicin menunjukkan sitotoksisitas yang secara signifikan lebih
tinggi daripada jumlah yang setara dari obat bebas. Nilai konsentrasi penghambatan 50% (yaitu
IC50) untuk pertumbuhan sel HT-28 dari formulasi obat SLN sama-sama lebih rendah daripada
larutan obat konvensional yang sesuai (butyrate: 0,3 mM vs N0,6 mM; doxorubicin: 81,87 nM
versus 126,57 nM).

Paclitaxel SLN juga lebih mirip sitotoksik dibandingkan dengan jumlah setara obat bebas
dalam larutan. Ini dianggap kelarutan paclitaxel yang buruk dalam air, yang menghasilkan
pelepasan obat yang rendah dari SLN [25,80]. Dalam penelitian ini, trypantes biru secara
eksklusif digunakan untuk evaluasi sitotoksisitas. Uji ini mengukur integritas membran sel dari
sel kanker yang diobati. Beberapa sel kanker mungkin kehilangan potensi reproduksi setelah
perawatan tetapi dapat mengecualikan pewarna dari memasuki sel. Oleh karena itu tes
pengecualian tripan biru bukan tes sitotoksisitas yang sangat sensitif. Terlepas dari itu, data
secara umum menunjukkan nilai terapi potensial SLN untuk pemberian obat antikanker. Selain
itu, meskipun HT-28 biasanya tidak dianggap sebagai sel yang resistan terhadap obat, seperti
kebanyakan sel kanker usus besar, tidak sensitif terhadap doxorubicin [81]. Data SLN yang
mengandung doxorubicin menyatakan bahwa SLN dapat meningkatkan efektivitas pengobatan
kemoterapi pada kanker yang relatif gagal terhadap terapi obat.

Hal ini telah dikonfirmasi dalam penelitian terbaru menggunakan PLN [34,35]. PLN
yang mengandung doksorubisin dievaluasi pada sel kanker payudara EMT6 / AR1 dan garis sel
kanker payudara manusia MDA435 / LCC6 / MDR1. Kedua garis sel membawa fenotip
resistensi multi-obat (MDR) sebagai akibat dari over ekspresi P-glikoprotein (P-gp). P-gp adalah
glikoprotein terkait-membran 170-kDa yang mampu secara aktif mengangkut substrat yang
beragam secara struktural, termasuk beberapa agen antikanker sitotoksik hidrofobik, amphipathic
alkaloid (vincristine, vinblastine), taxanes (paclitaxel, docetaxel), epipodilotoksin, teniposide),
anthracyclines (doxorubicin, daunorubicin, epirubicin), topotecan, dactinomycin, dan
mitomycin-C keluar dari sel [82,83], sehingga membuat kemoterapi tidak efektif. Selain tes
pengecualian tripan biru, uji klonogenik juga dilakukan untuk mengevaluasi aktivitas antikanker
dari PLN yang mengandung doxorubicin.

Uji klonogenik mengukur fraksi sel kanker yang diobati dengan obat yang mampu
berkembang biak membentuk koloni yang hidup. Oleh karena itu mengukur efek jangka panjang
dari agen yang diuji untuk kemampuannya menekan pertumbuhan kanker, dan sering dianggap
sebagai standar emas pengukuran aktivitas antikanker [84]. Pengujian menunjukkan bahwa PLN
yang mengandung doxorubicin mampu membunuh sel kanker MDR 8 kali lipat bila
dibandingkan dengan larutan doxorubicin pada dosis yang setara. Selain itu, ditemukan bahwa
PLN kosong dan formulasi eksipien (mis. Surfaktan) tidak memiliki aktivitas intrinsik yang
signifikan terhadap sel-sel kanker sendiri. Juga bahan-bahan ini juga tidak meningkatkan
sitotoksisitas larutan doxorubicin. Temuan menunjukkan bahwa obat harus secara fisik
dimasukkan dalam lipid untuk mendapatkan aktivitas antikanker tambahan ini. Salah satu
kemungkinan adalah, bahwa seperti beberapa sistem penghantaran obat lainnya [85,86],
nanopartikel lipid dapat membawa obat ke dalam sel kanker dengan endositosis, dengan
demikian melewati mekanisme penghabisan obat P-gp.

Gambar 4. Eksperimen uji klonogenik untuk toksisitas Dox pada Pg-lycoprotein manusia yang
diekspresikan secara berlebihan MDA435 / LCC6 / MDR1 garis sel kanker payudara. Efisiensi
pelapisan dinormalisasi (PE dinormalisasi) setelah 4 jam terpapar terhadap larutan doxorubicin
(Dox), agregat Dox-polimer (Dox-HPESO), nanopartikel lipid yang dimuat Dox (Dox-SLN) atau
larutan Dox + SLN kosong ditampilkan. Hasil dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari
pengukuran yang diperoleh dalam tiga percobaan terpisah (n = 6 dalam setiap percobaan).

Investigasi lebih lanjut menunjukkan bahwa sel-sel kanker MDR menumpuk dan
mempertahankan doxorubicin yang dihantarkan oleh PLN pada tingkat yang jauh lebih tinggi
daripada larutan doxorubicin [35]. Gambar. 5 menunjukkan profil serapan Dox dan retensi Dox
dalam garis sel EMT6 / AR1. Dua jam setelah akhir pengobatan, rasio tingkat doxorubicin
seluler yang dipertahankan oleh sel EMT6 / AR1 yang diobati dengan PLN versus larutan obat
bebas hampir 10 banding 1 (sekitar 2 banding 1 dalam MDA435 / LCC6 / MDR1 (data tidak
diperlihatkan)), menunjukkan tingkat eflux yang jauh lebih tinggi dari doxorubicin di bentuk
larutan. Mikroskopi fluoresensi menunjukkan bahwa molekul doxorubicin kemungkinan secara
fisik terkait dengan lipid intraseluler (data tidak ditunjukkan). Mempertimbangkan semua
temuan, ada kemungkinan bahwa PLN dapat meningkatkan sitotoksisitas obat antikanker dalam
sel kanker MDR dengan menghantarkan obat tersebut secara intraseluler oleh endositosis, dan,
yang lebih penting, dengan membuat obat lebih rentan terhadap mekanisme pelepasan obat yang
terikat membran karena obat tersebut dalam bentuk agregat obat-lipid. Hal ini diilustrasikan
secara skematis pada Gambar. 6. Karena sistem PLN sebenarnya didirikan pada SLN, ada
kemungkinan bahwa formulasi SLN lain mungkin memiliki sifat yang serupa.

Studi efikasi in vivo dari obat sitotoksik yang dimuat SLN sejauh ini jarang terjadi.
Dalam penelitian yang menggunakan model tikus xenografted dengan HT-29 tumor [44] untuk
membandingkan formulasi SLN SN-38 dengan larutan obat, tumor yang diobati dengan
formulasi SLN membutuhkan waktu lebih lama atau sebanding untuk mencapai berat tumor yang
terpotong (1). g) dengan dosis obat yang lebih rendah bila dibandingkan dengan larutan obat
gratis. Temuan ini lebih lanjut mendukung konsep bahwa SLN dapat digunakan untuk
meningkatkan efektivitas pengobatan obat antikanker pada kanker yang biasanya tahan terhadap
kemoterapi.