ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI FRAKSI AKTIF DARI

KULIT BATANG SIKKAM (Bischofia javanica Blume) TERHADAP TIKUS

ABSTRAK

Obat antiinflamasi yang ada yaitu golongan steroid dan non-steroid

memiliki efek samping. Beberapa efek samping yang timbul antara lain tukak
lambung, osteoporosis, memperberat diabetes melitus, lemah otot, anemia hingga
kerusakan ginjal. Karena itu perlu dilakukan penelitian untuk mendapatkan
alternatif obat.
Tumbuhan sikkam (Bischofia javanica Blume) secara tradisional
digunakan sebagai antiradang dan antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui efek antiinflamasi ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan
fraksi air kulit batang sikkam serta mengetahui karakteristik isolat dengan
spektrofotometri ultraviolet (UV) dan infrared (IR).
Serbuk simplisia dimaserasi menggunakan etanol, selanjutnya ekstrak
etanol difraksinasi dengan pelarut n-heksan dan etilasetat. Ekstrak diuji skrining
fitokimia dan karakterisasi. Selanjutnya dilakukan uji aktivitas antiinflamasi
terhadap tikus. Tikus dibagi empat belas kelompok, tiap kelompok terdiri atas lima
ekor tikus. Dosis pengujian 50, 100 dan 200 mg/kgbb dengan metode uji paw
edema pada tikus diinduksi dengan λ karagenan. Kontrol negatif Na CMC 0,5%
dan kontrol postif Natrium diklofenak. Fraksi yang aktif sebagai antiinflamasi
diisolasi menggunakan kromatografi kertas dan preparatif. Isolat diuji dengan
kromatografi kertas dalam fase gerak BAA (n-butanol: asam asetat: air = 4:1:5),
HCl 1 %, dan asam asetat 15%. Isolat dikarakterisasi dengan spektrofotometri UV
dan IR.
Hasil karakterisasi terhadap kulit batang sikkam adalah kadar air 5,99;
kadar sari larut dalam air 17,47; kadar sari larut dalam etanol 11,84; kadar abu total
4,07; kadar abu tidak larut asam 6,06. Ekstrak etanol, fraksi n-heksana, dan fraksi
etil asetat kulit batang sikkam tiap dosis memberikan aktivitas sebagai
antiinflamasi. Hasil uji antiinflamasi yang memberikan aktivitas sama dengan
Natrium diklofenak yaitu EEBS 100 dan 200 mg/kgbb, FEABS 100 dan 200 mg/kg
bb dari menit ke 240 sampai 360. Persen inhibisi radang yang paling tinggi adalah
FEABS 100 mg/kgbb. Isolat berwarna kuning, hasil pengujian spektrofotometri UV
terdapat puncak pada λ maksimum 283,8 nm. Hasil spektrofotometri IR
menunjukkan adanya gugus -OH, C=O, C=C, C=H dan C-H alifatis.
Ekstrak etanol, fraksi n-heksana dan fraksi etil asetat mempunyai efek
antiinflamasi dan isolat yang diperoleh adalah senyawa golongan flavonoid.

Kata kunci: antiinflamasi, Bischofia javanica Blume, flavonoid

 ISOLATION AND ANTI-INFLAMMOTORY ACTIVITY OF ACTIVE
FRACTION FROM SKIN STICK (Bischofia javanica Blume) ON RATS

ABSTRACT

Antiinflammatory drugs that are steroids and non-steroids have side

effects. Some side effects include stomach ulcers, osteoporosis, aggravating
diabetes mellitus, muscle weakness, anemia and kidney injury. Because it needs to
be done research to get alternative drugs.
The sikkam plant (Bischofia javanica Blume) is traditionally used as an
anti-inflammatory and antibacterial. This study aimed to determine the anti-
inflammatory effects of ethanol extract, n-hexane fraction, ethylacetate fraction and
water fraction of sikkam bark skin and determine the characteristics of isolates by
ultraviolet (UV) and infrared (IR) spectrophotometry.
Simplisia powder macerated using ethanol, ethanol extract was
fractionated with n-hexane and ethylacetate. The extracts were examined for
phytochemical screening and characterization. Furthermore, anti-inflammatory
activity tests on rats were carried out. Rats were divided into fourteen groups, each
group consisting of five rats. Test doses of 50, 100 and 200 mg/bw with the paw
edema test method in rats induced with λ carrageenan. The negative control was
0.5% CMC Na and positive control was diclofenac Sodium. The active fraction as
an anti-inflammatory was isolated using paper and preparative chromatography.
The isolates were tested by paper chromatography in the mobile phase of BAA (n-
butanol: acetic acid: water = 4: 1: 5), 1% HCl, and 15% acetic acid. Isolates were
characterized by UV and IR spectrophotometry.
The results of characterization of the sikkam bark are water levels of
5.99; water soluble extracts 17.47; levels of soluble extract in ethanol 11.84; total
ash content of 4.07; acid insoluble ash content 6.06. Ethanol extract, n-hexane
fraction, and ethyl acetate fraction of sikkam bark skin at each dose gave anti-
inflammatory activity. Antiinflammatory test results that provide the same activity
with Sodium diclofenac are EEBS 100 and 200 mg / kgbw, FEABS 100 and 200 mg
/ kgbw from minutes 240 to 360. The highest percentage of inflammation inhibition
was FEABS 100 mg / kgbw. Yellow isolates of UV spectrophotometry testing peak
at a maximum λ of 283.8 nm. The results of IR spectrophotometry showed the
presence of -OH, C = O, C = C, C = H and C-H aliphatic groups.
Ethanol extract, n-hexane fraction and ethyl acetate fraction had anti-
inflammatory effect and the isolates obtained were flavonoid compounds.

Keywords: anti-inflammatory, Bischofia javanica Blume, flavonoids

ii
 DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL......................................................................................................................i

ABSTRAK ..............................................................................................................ii

ABSTRACT .........................................................................................................iii

DAFTAR ISI .........................................................................................................iv

DAFTAR SINGKATAN.........................................................................................x

DAFTAR GAMBAR .............................................................................................xi

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................xiii

BAB I PENDAHULUAN .......................................................................................1

1.1 Latar Belakang ..............................................................................................1

1.2 Perumusan Masalah.......................................................................................6

1.3 Hipotesis .......................................................................................................6

1.4 Tujuan ...........................................................................................................7

1.5 Manfaat Penelitian.........................................................................................7

1.6 Kerangka Pikir Penelitian ............................................................................8

BAB II TINJAUAN PUSTAKA.............................................................................9

2.1 Inflamasi (Peradangan) ..........................................................................24

2.1.1 Mekanisme Terjadinya Radang ...............................................................27

2.1.2 Mediator Peradangan...............................................................................28

2.2 Obat-Obat antiinflamasi...........................................................................30

2.2.1 Antiinflamasi golongan Steroid................................................................31

2.2.2 Obat antiinflamasi Non-Steroid ...............................................................32

iii
2.3 Aktivitas Farmakologi AINS....................................................................33

2.4 Efek Samping.........................................................................................14

2.5 Metode Uji Antiinflamasi.......................................................................41

2.6.1 Uraian Tumbuhan ..................................................................................16

2.6.1 Klasifikasi tumbuhan .............................................................................16

2.6.2 Nama lain ..............................................................................................17

2.6.3 Morfologi tumbuhan ..............................................................................17

2.6.4 Kandungan kimia tumbuhan ..................................................................18

2.6.5 Khasiat dan kegunaan tumbuhan ...........................................................22

2.7 Simplisia.................................................................................................23

2.8 Ekstrak....................................................................................................23

2.8.1 Ekstraksi ................................................................................................23

2.9 Fraksinasi ...............................................................................................26

2.10 Kromatografi Lapis Tipis.......................................................................26

2.11 Spektrofotometri....................................................................................30

BAB III METODE PENELITIAN........................................................................33

3.1 Tempat Pelaksanaan Penelitian..............................................................33

3.2 Metode Penelitian...................................................................................33

3.3 Alat Alat.................................................................................................33

3.4 Bahan Bahan...........................................................................................34

3.5 Pembuatan Pereaksi................................................................................34

3.5.1 Pereaksi Bouchardat...............................................................................34

3.5.2 Pereaksi Mayer.......................................................................................34

3.5.3 Pereaksi dragendorff...............................................................................34

iv
3.5.4 Pereaksi molisch ....................................................................................34

3.5.5 Larutan Asam Klorida 2 N....................................................................35

3.5.6 Larutan Asam sulfat 2 N.........................................................................35

3.5.7 Larutan Asam Nitrat 0,5 N.....................................................................35

3.5.8 Larutan Timbal (II) Asetat 0,4 N............................................................35

3.5.9 Pereaksi besi (III) klorida 1% b/v...........................................................36

3.5.10 Larutan Pereaksi liebermann-burchard...................................................36

3.5.11 Larutan Pereaksi Kloralhidrat 70%........................................................36

3.5.12 Larutan Floroglusinol HCl.....................................................................36

3.6 Pengumpulan bahan, Identifikasi tumbuhan, pembuatan simplisia dan

karakterisasi kulit batang sikkam.
36

3.6.1 Pengumpulan Bahan...............................................................................36

3.6.2 Identifikasi Tumbuhan............................................................................36

3.6.3 Pembuatan Simplisia..............................................................................36

3.7 Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol ........................................................37

3.7.1 Pemeriksaan Alkaloid ............................................................................37

3.7.2 Pemeriksaan Flavonoid .........................................................................37

3.7.3 Pemeriksaan Tanin.................................................................................37

3.7.4 Pemeriksaan Glikosida ..........................................................................38

3.7.3 Pemeriksaan Saponin..............................................................................38

3.7.6 Pemeriksaan triterpenoid/steroid ...........................................................38

3.8 Karakterisasi Simplisia dan ekstrak........................................................39

3.8.1 Pemeriksaan Makroskopik.....................................................................39

3.8.2 Penetapan Kadar air................................................................................40

v
3.8.3 Penetapan kadar Sari larut dalam air......................................................40

3.8.4 Penetapan kadar sari larut dalam etanol.................................................40

3.8.5 Penetapan kadar abu total.......................................................................41

3.8.6 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam..........................................41

3.9 Pembuatan ekstrak Kulit Batang Sikkam...............................................41

3.10 Pembuatan Fraksi n-heksan kulit batang sikkam, Fraksi Etil asetat dan
Fraksi Air Kulit batang Sikkam
42

3.11 Pengujian Farmakologi...........................................................................42

3.11.1 Pembuatan Indikator radang...................................................................42

3. 11.2 Pembuatan Suspensi Bahan Uji..............................................................42

3. 11.3 Pembuatan Suspensi Na- CMC..............................................................42

3. 11.4 Pembuatan Suspensi Na- diklofenak......................................................43

3. 11.5 Pembuatan Suspensi Fraksi n-heksan, Pembuatan Suspensi Fraksi etil

asetat, Fraksi air
................................................................................................................
43

3.12 Uji Antiinflamasi....................................................................................44

3.12.1 Uji Antiinflamasi pada ekstrak etanol....................................................44

3.12.2 Uji PAW edema pada Fraksi Etil asetat, Fraksi n-heksan dan Fraksi
Air
................................................................................................................
45

3.13 Analisa Data

................................................................................................................

46

3.14 Analisis Fraksi aktif Secara KKT...........................................................47

3.15 Isolasi Senya Fraksi Aktif Secara KKT Preparatif.................................47

3.16 Uji Golongan Isolat................................................................................48

vi
3.16.1 Uji Golongan Isolat dengan KKT Satu arah...........................................48

3.16.2 Uji Golongan Isolat Dengan KKT Dua arah..........................................48

3.17 Karakterisasi Isolat.................................................................................49

3.11.1 Karakterisasi Isolat Dengan Spektrofotometri UV.................................49

3.11.2 Karakterisasi Isolat Dengan Spektrofotometri IR..................................49

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...............................................................50

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan..................................................................59

4.2 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi................................................................50

4.3 Hasil Karakterisasi..................................................................................50

4.4 Hasil Skrining Fitokimia .......................................................................52

4.5 Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi...........................................................53

4.6 Hasil Analisis Fraksi Etil Asetat Kulit Batang sikkam (Bischofia
javanica Blume) Secara Kkt
................................................................................................................
77

4.7 Hasil Isolasi Senyawa Flavonoid Secara KKT Preparatif

4.8 Hasil Uji golongan isolat........................................................................78

4.8.1 Uji golongan isolat dengan Kkt satu arah ..............................................79

4.8.2 Uji golongan isolat dengan Kkt dua arah...............................................79

4.9 Hasil Karakteristik Isolat........................................................................79

4.9.1. Karakterisasi isolat dengan spektrofotometri UV..................................79

4.9.2 Karakterisasi isolat dengan spektrofotometri IR....................................80

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN................................................................82

5.1 Kesimpulan .............................................................................................82

5.2 Saran........................................................................................................82

DAFTAR PUSTAKA

vii
 DAFTAR SINGKATAN

ASA : Air suling agar

ND : Natrium diklofenak

EEBS : Ekstrak etanol Kulit Batang sikkam

Fn-HBS: Fraksi n-heksana Kulit Batang sikkam bosi

FEABS : Fraksi etil asetat Kulit Batang sikkam

KKt : Kromatografi kertas

KLT : Kromatografi lapis tipis

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Hasil Karakterisasi serbuk simplsia dan ekstrak etanol kulit batang
sikkam ..........................................................................................................61

4.2 Hasil Skrining Fitokimia serbuk simplsia dan ekstrak etanol kulit
batang sikkam.................................................................................................62

4.3 Data Hasil analisis Kromatogram Fraksi Etil Asetat Kulit Batang
sikkam...................................................................................................................78
............................................................................................................

4.4 Data Hasil KKt Preparatif Dari Fraksi Etil Asetat Kulit Batang
sikkam.....................................................................................................................78

4.5 Data Hasil KKt Satu Arah Isolat Flavonoid....................................................79

ix
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.6 Skema Kerangka Penelitian............................................................................8

4.1 Gambar Grafik Perlakuan Terhadap Persen Radang.....................................64

4.2 Gambar Grafik Perlakuan Terhadap Persen inhibisi Radang.........................65

4.3 Gambar hasil Spektrofotometri Ultraviolet....................................................80

4.4 Hasil Spektrofotometri Inframerah (IR).........................................................81

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran

1 Hasil Identifikasi sampel....................................................................................88

2 Tumbuhan Batang sikkam (Bischofia javanica Blume...........................................89

3 SimplisiaKulit Batang sikkam (Bischofia javanica Blume)....................................90

4. Serbuk Simplia kulit batang sikkam (Bischofia javanica Blume)..............................91

5 Bagan Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Batang sikkam......................................92

6 Bagan Pembuatan Fraksi n-heksana, Etil Asetat Kulit Batang sikkam

(Bischofia javanica Blume)....................................................................................93

7. Perhitungan hasil karakterisasi serbuk simplisia dan ekhtrak etanol kulit

batang sikkam......................................................................................................98

8 Tabel Konversi Dosis Hewan Dengan Manusia dan Volume Maksimal

Larutan Sediaan Uji Yang Diberikan Pada Hewan.............................................100
.............................................................................................................................
.............................................................................................................................

9 Contoh Perhitungan Persen Radang dan Persen Inhibisi Radang.......................01

10. Hasil pengaruh terhadap rata – rata persen radang............................................103

11 Hasil Pengaruh perlakuan Persen Inhibisi Radang Dengan SPSS ..................105

12. Hasil analisis ANOVA Persen Radang Dengan SPSS.....................................107

xi
13 Hasil analisis ANOVA Persen Inhibisi Radang Dengan SPSS..........................118

14 Kromatogram Hasil KKt Fraksi Etilasetat..........................................................120

15 Kromatogram Hasil KKt Preparatif ...................................................................130

16 Kromatogran Hasil KKT Satu Arah ..................................................................133

17 Kromatogran Hasil KKT Dua Arah....................................................................134

20 Spektrum Ultraviolet (UV) Isolat ......................................................................136

21 Spektrum Infra Red (IR) Isolat ..........................................................................137

xii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Inflamasi merupakan suatu respon protektif normal terhadap luka jaringan

yang disebabkan oleh trauma fisik, zat kimia yang merusak, atau zat-zat

mikrobiologik (Mycek, 2001). Respon inflamasi ditandai oleh kondisi berupa

rubor (kemerahan), kalor (panas), dolor (nyeri), tumor (pembengkakan) dan

gangguan fungsi. Inflamasi dapat bersifat lokal dan sistemik, dapat juga terjadi

secara akut atau kronis yang menimbulkan kelainan patologis (Corwin, 2008).

Peradangan disebabkan oleh berbagai rangsangan termasuk kerusakan fisik,

iradiasi ultra violet, invasi mikroba dan kekebalan tubuh.

Pengobatan inflamasi mencakup dua aspek, yang pertama adalah

meredakan nyeri yang seringkali menjadi gejala dan yang kedua adalah upaya

penghentian proses kerusakan jaringan. Pengurangan peradangan atau respon

inflamasi menggunakan obat golongan steroid dan antinflamasi non steroid

(AINS) sebenarnya dapat meredakan reaksi inflamasi dengan baik tetapi

penggunaan dalam jangka waktu lama dapat memberikan efek samping. Beberapa

efek samping obat steroid berupa penurunan sintesis glukokortikoid endogen,

menurunkan respon imun tubuh terhadap infeksi, osteoporosis, moonface dan

hipertensi(Tabassumaj, 2015). Penggunaan obat antiinflamasi non steroid (AINS)

secara sistemik dalam jangka waktu yang lama juga dapat memberikan efek

samping berupa gangguan saluran pencernaan seperti ulkus peptik, analgesik

nephropathy, mengganggu fungsi platelet dan menghambat induksi kehamilan

(Goodman, 2003). Studi tentang sifat anti-inflamasi produk alami telah

mendapatkan popularitas, yang ditujukan untuk menemukan agen baru dengan

efek samping minimal (Tabassumaj, 2015 ).

Pada saat ini penggunaan bahan alam baik sebagai obat maupun tujuan

lain cenderung meningkat. Penelitian terhadap berbagai tanaman yang berkhasiat

terus dilakukan terutama untuk pengobatan tradisional ketika pengobatan modern

perlahan beralih dari masyarakat. Menurut Winda (2015) bahwa masih ada bahan

obat tradisional yang berbahaya jika penggunaannya melewati dosis dan

konsentrasi yang tidak aman. Namun hingga saat ini pemanfaatan tanaman obat

sebagai obat tradisional belum optimal.

Saat ini minat masyarakat terhadap pengobatan dengan obat alam semakin

meningkat. Pemanfaatan tanaman baik sebagai obat maupun tujuan lain

merupakan salah satu fenomena saat ini. Tanaman obat mengandung banyak

komponen senyawa aktif dan memiliki berbagai efek farmakologis yang perlu

dibuktikan kebenarannya secara ilmiah.

Obat tradisional telah lama digunakan baik di negara berkembang maupun

negara maju termasuk di Indonesia (Sari, 2006). Menurut WHO (1992), sekitar

65% dari penduduk negara maju dan 80% dari penduduk negara berkembang telah

menggunakan obat tradisional. Dukungan WHO terhadap konsep back to nature

dibuktikan dengan adanya rekomendasi untuk menggunakan obat tradisional atau

herbal dalam pemeliharaan kesehatan masyarakat dan pencegahan penyakit,

terutama untuk penyakit kronis, penyakit degeneratif dan kanker.

Salah satu tumbuhan obat yang telah dikenal sejak zaman dahulu adalah

sikkam (Bischofia javanica Blume) yang digunakan sebagai pewarna alami pada

anyaman rotan dan bambu (Bachheti, et al., 2013). Harmida, dkk., (2011)

68
menyebutkan masyarakat Desa Lawang Agung Kab. Lahat Sumatera Selatan

menggunakan daun sikkam sebagai antiinflamasi. Sari kulit batang juga

digunakan sebagai antiinflamasi (Pradhan dan Badola, 2008). Selain itu sikkam

dapat digunakan sebagai pereda demam, pereda nyeri, anti radang, menurunkan

tekanan darah, mengencerkan dahak, dan mematikan cacing usus. (Otshudi, et al.,

2000).

Kandungan senyawa aktif yang terdapat pada tumbuhan sikkam antara lain

golongan flavonoida, tanin, glikosida, alkaloida, saponin, dan

steroida/triterpenoida (Indra, et al., 2013; Rajbongshi, et al., 2014; Tambunan,

2014). Kandungan senyawa aktif beberapa tanaman obat seperti golongan tanin,

flavonoid, alkaloid, saponin dan steroid/triterpenoid bertanggung jawab atas

khasiat antiinflamasi (Otshudi, et al., 2000). Tanin bersifat sebagai antibakteri dan

menciutkan dinding usus (Nurdjanah dan Christina, 2005; Ajaib dan Khan, 2012).

Senyawa flavanoid dan terpenoid juga dapat berkhasiat sebagai antidiare

(Otshudi, et al., 2000) selain itu, tumbuhan ini dapat juga berkhasiat sebagai

antileukimia dan antiinflamasi. Senyawa kimia ini dapat diperoleh melalui proses

ekstraksi menggunakan pelarut etanol (Hanani, 2016).

Saragih (2011) telah membuktikan bahwa ekstrak kulit kayu sikkam

memiliki potensi sebagai antibakteri E.coli, B.cereus, P.aureginosa, S.aureus dan

S.thypimurium. Spot terbesar fraksi teraktif dari ekstrak etil asetat pada

konsentrasi di bawah 35 µl/ml bersifat bakteristatik pada E.coli dan B.cereus.

sedangkan pada konsentrasi 35 µl/ml bersifat bakterisid pada kedua jenis bakteri

bakteri tersebut. Ekstrak pengepresan pada konsentrasi 50 µl/ml dapat

menghambat aktivitas kelima jenis bakteri tersebut. Sedangkan pada konsentrasi

69
50-70 µl/ml ekstrak sikkam dapat memberikan efek bakteridal pada kelima jenis

bakteri tersebut.

Menurut Yuniarti et al., (2007) antioksidan dalam kaitannya dengan

antiinflamasi yaitu antioksidan merupakan agen antiinflamasi yang bekerja

melalui penangkapan radikal bebas oksigen dan dapat menghambat segala tipe

sikloksigenase (COX) dan lipooksigenase (LOX). Kandungan tumbuhan sikkam

adalah flavonoid, lenersetin, sitosterol, asam stearat, asam limolenat, asam

palminat, serat serta elektrolit seperti kalsium, kalium dan magnesium. Flavonoid

berfungsi sebagai antiinflamasi dengan cara menghambat enzim siklooksigenase

dan lipooksigenase dapat memberi harapan untuk pengobatan gejala peradangan

dan alergi (Bachheti,et.al., 2013)

Beberapa anggota flavonoid secara signifikan mempengaruhi fungsi sistem

kekebalan dan sel inflamasi. Sejumlah flavonoid seperti hesperidin, apigenin,

luteolin, dan quercetin dilaporkan memiliki efek anti-inflamasi dan analgesik.

Flavonoid dapat mempengaruhi secara khusus fungsi sistem enzim yang secara

kritis terlibat dalam proses inflamasi, terutama tirosin dan protein kinase serin-

treonin. Penghambatan kinase disebabkan oleh ikatan kompetitif flavonoid dengan

ATP di situs katalitik pada enzim. Enzim ini terlibat dalam transduksi sinyal dan

proses aktivasi sel yang melibatkan sel-sel sistem kekebalan tubuh (Abhay et al,

2013).

Beberapa bagian flavonoid, yaitu kuercetin, apigenin dan luteolin,

mengurangi ekspresi sitokin dan sekresi. Karena itu flavonoid memiliki potensi

terapeutik dalam pengobatan penyakit terkait peradangan sebagai modulator

sitokin. Aktivitas flavonoid dalam respon inflamasi meliputi penghambatan

70
mediator inflamasi seperti spesies oksigen reaktif (ROS) dan oksida nitrat (NO);

Pengaturan aktivitas enzim peradangan, seperti siklooksigenase (COXs) dan

inducible nitric oxide synthase (INOS), (Navely et al, 2016).

Berdasarkan hal tersebut maka dilakukan penelitian untuk mengisolasi dan

uji aktivitas antiinflamasi fraksi aktif dari kulit batang sikkam terhadap tikus

putih.

1.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian diatas, maka permasalahan dalam penelitian adalah:

a. apakah fraksi aktif ekstrak kulit batang sikkam dapat digunakan sebagai

antiinflamasi?

b. manakah fraksi yang paling aktif menurunkan volume edema yang diinduksi

dengan karagenan?

c. apakah fraksi aktif kulit batang sikkam dapat diisolasi dengan kromatografi

kertas dan isolatnya dapat diidentifikasi secara spektrofotometri UV dan

spektrofotometri IR?

1.3 Hipotesis

Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis penelitian ini

adalah:

a. Fraksi aktif kulit batang sikkam memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi yang

diinduksi dengan karagenan.

b. Fraksi yang paling aktif menurunkan volume edema adalah fraksi etilasetat.

71
c. Fraksi aktif kulit batang sikkam dapat diisolasi dengan kromatografi kertas dan

isolatnya dapat diidentifikasi secara spektrofotometri UV dan IR.

1.4 Tujuan Penelitian

Tujuan khusus penelitian ini adalah:

a. menguji efek antiinflamasi fraksi aktif kulit batang sikkam pada hewan

percobaan tikus yang diinduksi dengan karagenan.

b. menemukan fraksi manakah diantara fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan

fraksi air, yang paling aktif menurunkan volume edema yang diinduksi

dengan karagenan.

c. melakukan isolasi dengan kromatografi kertas dan identifikasi fraksi aktif

dari kulit batang sikkam secara spektrofotometri UV dan IR.

1.5 Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini adalah memberikan informasi ilmiah kepada

tenaga kesehatan, khususnya farmasis. Bahwa kulit batang sikkam berfungsi

sebagai antiinflamasi. sebagai pengembangan menjadi sediaan obat herbal selektif

dan menunjang program pemerintah dalam pengembangan obat tradisional dan

dapat digunakan dalam pelayanan kesehatan masyarakat.

72
 1.6 Kerangka Pikir Penelitian

Penelitian dilakukan terhadap tikus jantan yang diinduksi karagenan pada

telapak kaki. Kerangka penelitian ini dibagi menjadi variabel bebas dan variabel

terikat, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1.1.

Variabel bebas Variabel Terikat Parameter

- Alkaloid
- Steroida/triperpenoida
Serbuk simplisia Kulit Golongan senyawa
- Glikosida
Batang sikkam kimia simplisia dan
ekstrak - Flavonoida
- Saponin
- Tanin

- Kadar air
- Kadar abu larut dalam
air
Ekstrak etanol Kulit Karakteristik simplisia - Kadar abu total
Batang sikkam dan ekstrak - Kadar sari yag larut
dalam air asam
- Kadar sari yang larut
Induksi dalam etanol
karagenan - Kadar abu tidak larut
asam
Penyuntikan ekstrak
etanol, Fraksi n-
heksan, Fraksi etil - Penurunan volume
asetat, dan fraksi air Tikus Aktivitas
antiinflamasi edema pada tikus
Bischofia javanica
yang diinduksi
Blume dosis 50, 100,
200 kg/bb

Spektrum Ultraviolet (UV)

Fraksi yang paling Karakterisasi isolat
aktif diuji dengan Spektrum infrared (IR)
KKt

Isolasi dengan

Gambar 1.1 Diagram kerangka pikir penelitian

73
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Inflamasi

2.1.1 Pengertian inflamasi

Berdasarkan pengamatan secara visual, inflamasi memiliki lima tanda

karakteristik utama, yaitu merah (rubor), bengkak (tumor), panas (calor), nyeri

(dolor), dan kehilangan fungsi (functio laesa). Empat karakteristik pertama

dinamai oleh Celsus di masa Romawi kuno (30-38 SM), dan karakteristik yang

terakhir dinamai oleh Galen (130-200 M) (Punchard, dkk., 2004).

Inflamasi saat ini diartikan sebagai proses perubahan yang terjadi dalam

jaringan hidup saat terjadinya luka atau cidera, asalkan cedera tersebut tidak

berupa kerusakan struktur dan vital atau dapat juga diartikan sebagai suatu reaksi

dari mikrosirkulasi dan jaringan hidup terhadap cedera. (Punchard, dkk., 2004).

Inflamasi di zaman kuno diakui sebagai bagian dari proses penyembuhan,

namun hingga akhir abad ke-19 peradangan dipandang sebagai respon yang tidak

diinginkan yang berbahaya bagi tubuh. Kemudian hal itu kembali kepada

kesimpulan awal, setelah banyaknya peneliti di abad ke-19 membuktikan adanya

kontribusi inflamasi dalam proses pertahanan dan penyembuhan tubuh. Selanjutya

saat ini peradangan dianggap sebagai landasan patologi dalam perubahan yang

diamati (simptom) dari indikasi cedera dan adanya gangguan atau penyakit

(Punchard, dkk. 2004).

74
2.1.2 Respon Inflamasi

Inflamasi biasanya dibagi dalam 3 fase, yaitu inflamasi akut, respon imun,

dan inflamasi kronis. Inflamasi akut merupakan respon awal terhadap cedera

jaringan. Respon imun terjadi bila sejumlah sel yang mampu menimbulkan

kekebalan diaktifkan untuk merespon organisme asing atau substansi antigenik

yang terlepas selama respon terhadap inflamasi akut serta kronis. Akibat respon

imun bagi tubuh mungkin menguntungkan, seperti menyebabkan organisme

penyerang difagositosis atau dinetralisir. Sebaliknya, akibat tersebut juga dapat

bersifat merusak bila menjurus kepada inflamasi kronis tanpa penguraian dari

proses cedera yang mendasarinya. Inflamasi kronis melibatkan keluarnya

sejumlah mediator yang tidak menonjol dalam respon akut (Furst dan Munster,

2002). Trauma cedera atau infeksi pada jaringan menyebabkan serangkaian reaksi

kompleks terjadi pada tubuh dalam upaya untuk mencegah kerusakan jaringan

yang sedang berlangsung, mengisolasi dan menghancurkan organisme infektif,

dan mengaktifkan proses perbaikan yang diperlukan untuk mengembalikan fungsi

normal. Proses homeostasis ini secara keseluruhan dikenal sebagai respon reaksi

awal atau sebagai acute phase response (APR). Sel yang paling sering dikaitkan

dengan inisiasi proses kaskade selama APR adalah sel makrofag atau monosit.

Makrofag ketika diaktifkan melepaskan beberapa mediator, seperti sitokin yang

diantaranya interleukin-1 (IL-1) dan tumor necrosis factor (TNF), memainkan

peran dalam memicu reaksi berikutnya yang terjadi secara lokal. Secara lokal sel-

sel stroma, misalnya fibroblas dan sel endotel diaktifkan menyebabkan pelepasan

sitokin yang meliputi IL-6, IL-1 dan TNF. Sitokin ini memperbesar stimulus

homeostasis semua sel dalam tubuh (Thurnham dan Mc. Cabe, 2012).

75
 Endotelium memainkan peran penting dalam komunikasi antara situs

peradangan dan leukosit yang beredar. Sitokin IL-1 dan TNF menginduksi

perubahan besar dalam regulasi dan ekspresi gen. Molekul-molekul ini

berinteraksi khusus dengan neutrofil dan leukosit lainnya, memperlambat laju

aliran darah, memicu perubahan endotel dan memungkinkan migrasi molekul-

molekul tersebut ke jaringan. Perubahan tonus vaskular juga merupakan fitur awal

dari APR. Jaringan yang meradang melepaskan mediator molekul rendah hingga

berat seperti oksigen reaktif, nitrous oxide dan produk asam arakidonat termasuk

prostaglandin. Pelebaran dan kebocoran dari pembuluh darah terjadi terutama di

venula postcapillary, sehingga terjadi edema dan kemerahan pada jaringan.

Agregasi trombosit dapat merangsang pembekuan dan pelepasan molekul lebih

lanjut seperti bradikinin yang menyebabkan rasa sakit (Thurnham dan Mc. Cabe,

2012).

2.2 Obat antiinflamasi

Obat antiinflamasi adalah golongan obat yang memiliki aktivitas menekan

atau mengurangi peradangan. Berdasarkan mekanisme kerjanya obat antiinflamasi

terbagi menjadi dua golongan. Golongan pertama adalah golongan obat

antiinflamasi steroid. Obat antiinflamasi yang kedua yaitu golongan obat

antiinflamasi nonsteroid (AINS).

2.2.1 Antiinflamasi golongan Steroida

Antiinflamasi golongan steroida bekerja menghambat sintesis prostaglandin

dengan cara menghambat enzim fosfolipase, sehingga fosfolipid yang berada pada

membran sel tidak dapat diubah menjadi asam arakidonat. Akibatnya

76
prostaglandin tidak akan terbentuk dan efek inflamasi tidak ada. Contoh obat

antiinflamasi steroid adalah deksametason, betametason dan hidrokortison (Tan

dan Rahardja, 2007).

2.1.2 Antiinflamasi Non Steroid

Pengobatan inflamasi mempunyai dua tujuan utama yaitu: pertama,

meringankan rasa nyeri yang sering menjadi gejala awal yang terlihat dan keluhan

utama yang terus-menerus dialami pasien. Kedua, memperlambat atau membatasi

proses perusakan jaringan. Pengurangan inflamasi dengan obat-obat antiinflamasi

nonsteroid (AINS) dapat meredakan rasa nyeri dan analgesik nonopioid juga

memiliki efek antiinflamasi, jadi obat-obat tersebut dapat digunakan untuk

pengobatan inflamasi akut maupun kronis (Furst dan Munster, 2002).

Obat golongan AINS adaalah salah satu kelompok obat yang banyak

diresepkan dan digunakan tanpa resep dokter. Obat-obat ini merupakan suatu

kelompok obat yang heterogen secara kimia. Walaupun demikian obat-obat ini

ternyata memiliki persamaan dalam efek terapi maupun efek samping. Klasifikasi

kimia obat golongan AINS dapat dillihat pada Gambar 2.1 Wilmana dan Gan,

(2007).

2.3 Aktivitas Farmakologi AINS

Aktivitas farmakologi yang dimiliki oleh obat golongan AINS ini didasarkan

pada aktivitasnya dalam penghambatan biosintesis prostaglandin (PG).

Mekanisme ini diketahui dan telah dilaporkan pada tahun 1971 oleh Vane, dkk.,

yang mana memperlihatkan secara invitro bahwa dosis rendah aspirin dan

indometasin dapat menghambat produksi enzimatik PG. Penelitian lanjutan

77
membuktikan bahwa produksi PG akan meningkat apabila sel mengalami

kerusakan (Wilmana dan Gan, 2007).

Obat AINS

Asam Karboksilat Asam Enolat

Derivat Derivat Derivat Derivat Derivat

sam Salisilat Asam Asam Oksikam
Propionat Fenamat Pirazolon

As. Mefenamat Azapropazon Piroksikam

Aspirin As.
Benorilat Tiaprofenat Meklofenamat Fenilbutazon Tenoksikam
Diflunisal Fenbufen
Fenoprofen Oksifenbutazon
Flurbiprofen
Asam Ibuprofen
Asetat Ketoprofen
Naproksen

Derivat Derivat Asam

Asam Asetat-Inden/
Fenilasetat Indol

Diklofenak Indometasin
Fenklofennak Sulindak
Tolmetin

Gambar 2.1 Klasifikasi kimia obat AINS (Wilmana dan Gan, 2007)

Saat membran sel mengalami kerusakan, fosfolipid akan diubah menjadi

asam arakidonat dikatalis oleh fosfolipase A2. Asam arakidonat ini selanjutnya

akaa dimetabolisme oleh lipoksigenase dan siklooksigenase (COX). Pada jalur

siklooksigenase inilah prostaglandin disintesis. Prostaglandin dapat meningkatkan

aliran darah ke tempat yang mengalami inflamasi, meningkatkan permeabilitas

kapiler dan merangsang reseptor nyeri. Sintesis prostaglandin ini dapat dihambat

78
oleh golongan obat AINS. Leukotrien merupakan produk akhir dari metabolisme

asam arakidonat pada jalur lipooksigenase. Senyawa ini dapat meningkatkan

permeabilitas kapiler selama cedera atau infeksi Jalur sintesis prostaglandin dapat

dilihat pada Gambar 2.2

Trauma/Luka pada sel

Gangguan membrane sel

Fosfolipid

Asam arakidonat

Lipooksigenase Siklooksigenase

Hidroperoksid Endoperoksid

Leukotrien Tromboksan A2 Prostasiklin

Prostaglandin

Gambar 2.2 Biosintesis prostaglandin oleh ( Wilmana, 2007)

2.4 Efek Samping

Efek samping obat golongan AINS didasari oleh hambatan pada sistem

biosintesis prostaglandin. Selain itu, kebanyakan obat dari golongan ini bersifat

asam, sehingga lebih banyak terkumpul dalam sel yang bersifat asam, misalnya

lambung, ginjal dan jaringan inflamasi (Wilmana dan Gan, 2007).

79
 Efek samping yang paling sering terjadi adalah induksi tukak lambung atau

ulkus peptik yang kadang-kadang disertai anemia sekunder akibat perdarahan di

saluran cerna. Beratnya efek samping ini berbeda-beda pada masing-masing obat.

Mekanisme terjadinya iritasi pada lambung ada dua tahap, yaitu; (1) iritasi yang

bersifat lokal yang menimbulkan difusi kembali asam lambung ke mukosa dan

menyebabkan kerusakan jaringan, (2) terjadinya perdarahan lambung yang

bersifat sistemik melalui hambatan PGE2 dan PGI2 (Wilmana dan Gan, 2007).

Efek samping lainnya adalah gangguan fungsi trombosit akibat

penghambatan biosintesis TXA2 dengan perpanjangan waktu perdarahan.

Efek ini telah dimanfaatkan untuk terapi profilaksi tromboemboli (Wilmana

dan Gan, 2007).

Penghambatan biosintesis prostaglandin di ginjal, terutama PGE2, berperan

dalam gangguan homeostasis ginjal yang ditimbulkan oleh obat golongan AINS.

Pada kondisi normal, efek samping ini tidak banyak mempengaruhi fungsi ginjal.

Namun, pada pasien yang mengalami hipovolemia, sirosis hepatitis, dan pasien

gagal jantung, aliran darah dan kecepatan filtrasi glomerulus akan berkurang,

bahkan dapat terjadi gagal ginjal akut. Penggunaan AINS secara habitual

bertahun-tahun dihubungkan dengan terjadinya nefrotik analgetik, dengan ciri

nefritis interstistial kronik dan nekrosis papilar ginjal (Wilmana dan Gan, 2007).

2.5 Metode Uji Antiinflamasi

Peradangan ditandai oleh Celsus dengan empat tanda, yaitu rubor, kalor,

tumor, dan dolor. Peradangan memiliki fase yang berbeda, yaitu pertama

disebabkan oleh peningkatan permeabilitas pembuluh darah yang mengakibatkan

80
eksudasi cairan dari darah ke dalam ruang interstitial, yang kedua oleh infiltrasi

leukosit dari darah ke dalam suatu jaringan, dan ketiga dengan pembentukan

granuloma. Dengan demikian, uji antiinflamasi harus dibagi menjadi mengukur

peradangan akut, subakut dan proses perbaikan kronis (Vogel, dkk., 2008).

Metode uji antiinflamasi dibagi atas dua cara, yaitu metode invitro dan

metode invivo. Metode invitro dilakukan dengan cara mengukur substansi

fisiologis atau senyawa autakoid yang berperan dalam proses inflamasi seperti

histamin, serotonin, bradikinin, golongan eikosanoid (prostaglandin, tromboxan,

dan leukotrien), faktor aktivasi platelet, sitokin dan limfokin. Ditemukannya

berbagai substansi fisiologis ini memungkinkan untuk dilakukannya pengujian

analgesik, antiinflamasi, dan antipiretik secara invitro (Vogel, dkk., 2008)

Metode invivo dilakukan berdasarkan tiga tahapan respon inflamasi, yaitu

fase akut, sub akut, dan kronis. Metode ini menggunakan induksi inflamasi

terhadap hewan uji dengan memberlakukan berbagai stimulus seperti memberikan

agen infeksi, iskemia, antigen-antibodi, kimia, cedera dengan cara panas dan

mekanik. Respon yang ditimbulkan oleh penggunaan metode ini adalah eritema,

udema, nyeri dan hiperalgesia (Vogel, dkk., 2008).

2. 6 Deskripsi Tumbuhan Sikkam (Bischofia javanica Blume)

Sikkam (Bischofia javanica Blume) adalah pohon besar dengan batang

silinder ketebalan 1,5 – 2,5 m yang berkembang di hutan lembah, lembab, dan

dibudidayakan di dataran, terutama di sepanjang tepi sungai, jalan, dan kebun

(Rajbongshi, et al., 2014). Pohon ini tumbuh di dataran rendah sampai ketinggian

± 1500 m dari permukaan laut, berasal dari Asia Selatan, Asia Tenggara,

81
Australia, dan China. Menyebar luas mulai dari barat India, Jepang Selatan, timur

Australia, Pasifik hingga kepulauan Nusantara Indonesia (Kundu, et al., 2012).

2.6.1 Klasifikasi tumbuhan

Sistematika tumbuhan sikkam menurut menurut Kundu, et al., (2012) adalah

sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Kelas : Dicotyledoneae

Ordo : Euphorbiales

Famili : Euphorbiaceae

Genus : Bischofia

Spesies : Bischofia javanica Blume

2.6.2 Nama lain:

Cingkam (Batak); tingkeum (Gayo); gadog, gintung, kerinjing (Jawa), di

negara-negara lain disebut sebagai jitang (Malaysia), tuai (Sabah, Filiphina.),

toem, pradu-som (Thailand), ’khom ‘fat (Laos), dan nhoi (Vietnam).(Seed Leaflet,

2012).

2.6.3 Morfologi tumbuhan

Pohon sikkam (Bischofia javanica Blume) merupakan pohon besar yang

tingginya dapat mencapai 40 m, diameter batang 95 - 150 cm, bercabang-cabang,

arah tumbuh tegak lurus, berkayu, biasanya keras dan kuat, bentuk batang bulat,

tanpa mata kayu, termasuk dalam tumbuhan menahun (Seed Leaflet, 2012).

82
Kulit batang luar memecah dan bersisik berwarna coklat kemerahan hingga

keunguan, di sebelah dalam berwarna merah jambu, menyerat dan mengeluarkan

getah merah bening, encer atau agak kental seperti jeli (Rajbongshi, et al., 2014).

Daun berwarna hijau dengan panjang 4 - 8 inci dengan ketebalan 7 - 22 mm,

bentuk daun lonjong berlekuk tiga serta meruncing ke ujung daun. Letak daun

spiral/melingkar, mempunyai tangkai daun panjang (3 - 8 inci), tepinya beringgit

hingga bergerigi halus, bertulang daun menyirip, sisi atas mengkilap. Buah tidak

memecah, bulat, bergetah, bergaris tengah 1,2 - 1,5 cm berwarna hitam kebiruan

jika masak, dengan 1 - 2 biji di setiap ruang, biji berwarna coklat, lonjong,

panjang 5 mm (Bachheti, et al., 2013).

2.6.4 Kandungan kimia tumbuhan

Kandungan sikkam adalah protein (18,69%), karbohidrat (18,91%), tanin

(16%) (Ajaib dan Khan, 2012), flavonoid, kuersetin, sitosterol, asam stearat

(3,89%), asam linolenat (56,76%), asam palmitat (12,28%), serat (5,32%),

kalsium, kalium, natrium, magnesium (Bachheti, et al., 2013), vitamin C, asam

elagit (8 - 10% ) (Rajbongshi, et al., 2014).

2.6.4.1 Flavonoida

Flavonoid merupakan salah satu golongan fenol alam yang tersebar luas

pada tumbuhan hijau. Mengandung 15 atom karbon dalam inti dasarnya, yang

tersusun dalam konfigurasi C6-C3-C6 yaitu dua cincin aromatik yang dihubungkan

oleh satuan tiga karbon yang dapat membentuk cincin ketiga. Umumnya senyawa

flavonoid dalam tumbuhan terikat dengan gula disebut sebagai glikosida

(Markham, 1988).

83
 Senyawa ini sering terdapat sebagai glikosida, sebagai pigmen bunga,

flavonoida berfungsi menarik burung dan serangga yang berperan untuk proses

penyerbukan bunga. Beberapa fungsi lainnya adalah untuk mengatur fotosintesis,

kerja antimikroba dan antivirus serta memiliki kemampuan dalam mengusir

serangga (Robinson, 1995).

Umumnya senyawa flavonoida dalam tumbuhan terikat dengan gula disebut

sebagai glikosida dan aglikon flavonoida yang berbeda-beda mungkin saja

terdapat pada satu tumbuhan dalam beberapa bentuk kombinasi glikosida. Oleh

karena itu dalam menganalisis flavonoida biasanya lebih baik memeriksa aglikon

yang telah dihidrolisis dibandingkan dalam bentuk glukosida dengan kerumitan

strukturnya. Flavonoida berkhasiat sebagai antioksidan, antibakteri dan inflamasi

(Harbone, 1987). Flavonoid adalah kelompok senyawa fenolik tanaman yang

paling umum dan terdistribusi secara luas, terjadi hampir di semua bagian

tanaman, terutama sel tanaman fotosintesis. Flavonoid adalah komponen pewarna

utama tanaman berbunga. Flavonoid adalah bagian integral dari makanan manusia

dan hewan (Abhay, 2013).

2.6.4.2 Glikosida

Glikosida adalah senyawa organik yang bila dihidrolisis akan menghasilkan

satu atau lebih gula yang disebut glikon dan bagian bukan gula yang disebut

aglikon.Keduanya dihubungkan oleh suatu bentuk ikatan berupa jembatan oksigen

(O – glikosida, dioscin), jembatan nitrogen (N-glikosida, adenosine), jembatan

sulfur (Sglikosida, sinigrin), maupun jembatan karbon (C-glikosida, barbaloin).

Gula yang paling sering dijumpai dalam glikosida adalah glukosa. Glikosida

berbentuk kristal atau amorf yang umumnya larut dalam air dan etanol kecuali

84
glikosida resin. Berdasarkan hubungan ikatan antara glikon dan aglikonnya,

glikosida dibagi (Robinson, 1995), (Nadjeeb, 2009):

a. O-glikosida, yaitu senyawa glikosida yang ikatan antara glikon dan aglikonnya

dihubungkan oleh atom O. Contoh: Salisin.

b. S-glikosida, yaitu senyawa glikosida yang ikatan antar glikon dan aglikonnya

dihubungkan oleh atom S. Contoh: Sinigrin.

c. N-glikosida, yaitu senyawa glikosida yang ikatan antara glikon dan aglikonnya

dihubungkan oleh atom N. Contoh: Krotonosid.

d. C-glikosida, yaitu senyawa glikosida yang ikatan antara glikon dan aglikonnya

dihubungkan oleh atom C. Contoh: Barbaloin.

2.6.4.3 Steroida/Triterpenoida

Steroid adalah suatu senyawa golongan yang mengandung inti siklopentano

perhidrofenantren yaitu terdiri dari tiga cincin sikloheksana dan sebuah cincin

siklopentana. Umumnya merupakan senyawa tidak berwarna, berbentuk kristal

(Harbone, 1987). Steroid terdapat dalam hampir semua tipe sistem kehidupan.

Dalam hewan banyak steroid bertindak sebagai kolesterol yang dijumpai hampir

dalam semua jaringan hewan dan steroid juga digunakan sebagai bahan obat

(Fessenden, 1986).

Triterpenoida adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam

satuan isoprene dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C 30 asiklik,

yaitu skualena. Tritepenoida kebanyakan berupa alkohol, aldehid, asam

karboksilat dan umumnya berupa senyawa tanpa warna, berbentuk kristal,

mempunyai titik leleh tinggi. Triterpenoida dapat dibagi menjadi sekurang-

kurangnya empat golongan senyawa yaitu triterpenoida sebenarnya steroida,

85
saponin dan glikosida jantung. Uji yang banyak digunakan untuk mendeteksi

senyawa ini adalah Lieberman-Burchard yang dengan kebanyakan triterpen dan

steroid memberikan warna hijau biru (Harbone, 1987), (Widiyati, 2005).

Gambar 2.1. Kerangka inti siklopentano perihidrofenantren

2.6.4.4 Tanin

Tanin merupakan golongan senyawa polifenol yang berperan sebagai

antioksidan. Polifenol dilaporkan mampu menurunkan kadar kolesterol total dan

mampu menghambat pembentukan aterosklerosis. Ini ada hubungannya dengan

kemampuan senyawa fenol sebagai antioksidan yang dapat menghambat oksidasi

lipid. Senyawa tanin dapat mencegah peningkatan kadar kolesterol total melalui

mekanisme antioksidan, sehingga dapat meningkatkan mekanisme kolesterol

menjadi asam empedu dan meningkatkan ekskresi asam empedu melalui feses.

Rendahnya kolesterol dalam hati akan meningkatkan pengambilan kolesterol dari

darah ke hati yang selanjutnya berperan sebagai prekusor asam empedu dengan

demikian kadar kolesterol dalam darah akan berkurang (Umaruddin dan Ari,

2012).

Tanin terdapat luas dalam tumbuhan berpembuluh, dalam angiospermae

terdapat khusus dalam jaringan kayu. Menurut batasannya tanin dapat bereaksi

dengan protein membentuk kopolimer mantap yang tidak larut dalam air. Dalam

industri, tanin mampu mengubah kulit hewan yang mentah menjadi kulit siap

pakai karena kemampuannya menyambung silang protein. Tanin dapat

86
diidentifikasi dengan cara penambahan pereaksi ferri klorida, menghasilkan warna

hijau kehitaman atau biru kehitaman. Secara kimia terdapat dua jenis utama tanin

yang tersebar tidak merata dalam dunia tumbuhan, yaitu (Harborne, 1987):

a. Tanin terkondensasi

Tanin jenis ini hampir terdapat di dalam paku-pakuan dan gimnospermae serta

tersebar luas dalam angiospermae, terutama pada jenis tumbuhan berkayu. Nama

lain untuk tanin terkondensasi ialah proantosianidin karena bila direaksikan

dengan asam panas maka beberapa ikatan karbon-karbon penghubung satuan

terputus dan dibebaskanlah monomer antosianidin (Harborne, 1987).

b. Tanin terhidrolisis

Tanin yang terhidrolisiskan penyebarannya terbatas pada tumbuhan

berkeping dua. Tanin jenis ini terutama terdiri atas dua kelas, yang paling

sederhana ialah depsida galoilglukosa. Pada senyawa ini inti yang berupa glukosa

dikelilingi oleh lima gugus ester galoil atau lebih. Pada jenis kedua, inti molekul

berupa senyawa dimer asam galat yaitu asam heksahidroksidifenat dan berikatan

dengan glukosa (Harborne, 1987).

Kegunaan Tanin :

a. Sebagai pelindung pada tumbuhan pada saat masa pertumbuhan bagian

tertentu pada tanaman, misalnya buah yang belum matang, pada saat matang

taninya hilang.

b. Sebagai anti hama bagi tanaman sehingga mencegah serangga dan fungi.

c. Digunakan dalam proses metabolisme pada bagian tertentu tanaman.

d. Efek terapinya sebagai adstrigensia pada jaringan hidup misalnya pada

gastrointestinal dan pada kulit.

87
e. Efek terapi yang lain sebagai anti septic pada jaringan luka, misalnya luka

bakar, dengan cara mengendapkan protein.

f. Sebagai pengawet dan penyamak kulit.

g. Reagensia di Laboratorium untuk deteksi gelatin, protein dan alkaloid.

h. Sebagai antidotum (keracunan alkaloid) dengan cara mengeluarkan asam

tamak yang tidak larut (Nadjeeb, 2009).

2.6.5 Khasiat dan kegunaan tumbuhan

Sikkam merupakan salah satu pewarna alami yang telah dikenal dan

digunakan secara turun-temurun jauh sebelum mengenal zat pewarna sintetis

untuk mewarnai pakaian, jala dan anyaman dari bambu (Bachheti, et al., 2013).

Berbagai penelitian telah dilakukan untuk menguji manfaat sikkam (bischofia

javanica Blume), seperti antileukimia, antiinflamasi (Sutharson, et al., 2009),

antimikroba, antialergi (Rajbongshi, et al., 2014), mengobati luka bakar,

antihelmintik (Seed Leaflet, 2012), antidiare dan merangsang pertumbuhan

rambut (Pradhan dan Badola, 2008).

Berbagai penelitian yang telah dilakukan untuk menguji manfaat sikkam

manfaat sikkam (Bischofia javanica Blume) dapat digunakan sebagai

antiinflamasi (daun), antioksidan (daun), antileukimia (daun) (Lingadurai, et al.,

2007, 2009 dan 2011), antimikroba, antialergi, antitusif dan meredakan batuk

(daun) (Rajbongshi, et al., 2014), mengobati luka bakar (kulit kayu), anthelmintik

(daun) (Kundu, et al., 2012), antidiare antidiare (kulit batang), merangsang

pertumbuhan rambut (kulit batang dan daun) (Pradhan dan Badola, 2008;

Tambunan, 2014), dan sebagai pestisida serangga (Yang, et al., 2015).

88
2.7 Simplisia

Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang belum

mengalami pengolahan apapun juga kecuali dinyatakan lain berupa bahan yang

telah dikeringkan. Simplisia dikelompokkan menjadi tiga macam yaitu simplisia

nabati, hewani, dan mineral. Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa

tanaman utuh, bagian tanaman atau eksudat tanaman. Simplisia hewani berupa

zat-zat berguna yang dihasilkan oleh hewan dan belum berupa zat-zat kimia

murni. Simplisia mineral merupakan simplisia yang berasal dari bumi, baik telah

diolah atau belum, tidak berupa zat kimia murni(Depkes, 1995).

2.8 Ekstrak

Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair yang diperoleh dengan

mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani

menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir seua pelarut

diuapkan dan masa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga

memenuhi baku yang telah ditetapkan (Ditjen POM, 2000).

2.8.1 Ekstraksi

Ekstraksi adalah proses penarikan komponen atau zat aktif suatu simplisia

dengan menggunakan pelarut tertentu. Pemilihan metode ekstraksi dipengaruhi

oleh beberapa faktor, yaitu sifat jaringan tumbuhan, sifat kandungan zat aktif serta

kelarutan dalam pelarut yang digunakan. Prinsip ekstraksi adalah melarutkan

senyawa polar dalam pelarut polar dan senyawa non polar dalam pelarut non

polar. Ekstraksi bertingkat secara umum dilakukan secara berturut-turut mulai

dengan pelarut non polar (n-heksana), lalu pelarut kepolarannya menengah (diklor

89
metan atau etilasetat) kemudian pelarut bersifat polar (metanol atau etanol)

(Harborne, 1987). Metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut dibagi menjadi

2 yaitu cara dingin dan cara panas. (Ditjen POM, 2000).

A. Cara dingin

a. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan cara perendaman

menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada

temperatur ruangan. Maserasi sering digunakan dalam penelitian karena cara ini

tidak merusak zat kandungan simplisia. Proses ini sangat menguntungkan karena

dengan perendaman sampel tanaman akan mengakibatkan pemecahan dinding sel

dan membran sel akibat perbedaaan tekanan antara di dalam sel dan di luar sel

sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam

pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama

perendaman yang dilakukan. Pemilihan pelarut dalam proses maserasi akan

memberikan efektifitas yang tinggi dalam memperhatikan kelarutan senyawa

bahan alam dalam pelarut tersebut. Secara umum, pelarut etanol merupakan

pelarut yang paling banyak digunakan dalam proses isolasi senyawa organik

bahan alam karena dapat melarutkan golongan metabolit sekunder seperti

alkaloid, tanin, flavonoid. Lebih lanjut, untuk bahan serbuk dari tumbuhan dapat

juga diekstraksi dengan n-Heksana untuk memecahkan kandungan lemaknya dan

dengan pelarut etil asetat atau etanol untuk kandungan phenolnya. (Ditjen POM,

2000).

90
b. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna

yang umunya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan

pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya

(penetesan atau penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak

(perkolat). (Ditjen POM, 2000).

B. Cara panas

a. Infundasi

Infundasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

(bejana infus diatas penangas air mendidih, temperatur terukur 90oC) selama 15

menit. Cara ini biasa digunakan untuk zat yang akan diekstraksi tahan pemanasan.

Jika tidak ada ketentuan lain infus biasanya disaring panas. (Ditjen POM, 2000).

b. Dekoktasi

Dekoktasi adalah sama dengan infundasi pada waktu yang lebih lama (≥ 30

menit).(Ditjen POM, 2000).

c. Soxhletasi

Soxhletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru

dilakukan dengan alat soklet sehingga terjadi ekstraksi berkelanjutan dengan

jumlah pelarut konstan dengan adanya pendingin balik. Keuntungan cara ini

adalah pelarut yang digunakan lebih sedikit dan pelarut murni sehingga dapat

menarik senyawa dalam simplisia lebih banyak dalam waktu lebih singkat

dibanding dengan maserasi atau perkolasi. Kerugian cara ini adalah tidak dapat

digunakan untuk senyawa-senyawa termo labil (Ditjen POM, 2000).

91
d. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,

selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan

adanya pendingin balik. Umunya dilakukan pengulangan proses pada residu

pertama sampai 3-5 kali.(Ditjen POM, 2000).

e. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukkan kontiniu) pada

temperatur ruangan (kamar)(Ditjen POM, 2000).

2.9 Fraksinasi

Fraksinasi adalah suatu proses pemisahan senyawa-senyawa berdasarkan

tingkat kepolaran. Jumlah dan senyawa yang dapat dipisahkan menjadi fraksi

berbeda-beda tergantung pada jenis tumbuhan. Pada prakteknya dalam melakukan

fraksinasi digunakan dua metode yaitu dengan menggunakan corong pisah dan

kromatografi kolom.

2.10 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis adalah metode pemisahan fisikokimia. Lapisan yang

memisahkan, yaitu terdiri dari atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan

pada penyangga berupa pelat gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran

yang akan dipisahkan berupa larutan, ditotolkan berupa bercak atau pita (awal).

Setelah pelat atau lapisan disimpan di dalam bejana tertutup rapat yang berisi

larutan pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahaan terjadi selama

perambatan kapiler (pengembangan). Senyawanya, yang tidak berwarna harus

92
ditampakkan (dideteksi) (Stahl, 1985).Fase gerak akan bergerak sepanjang fase

diam karena pengaruh kapiler kapiler pada pengembangan secara menaik

(ascending) atau karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun

(descending) (Rohman,2007).

Pendeteksian bercak hasil pemisahan dapat dilakukan dengan beberapa cara.

Untuk senyawa tak tak berwarna cara yang paling sederhana adalah dilakukan

pengamatan dengan sinar ultraviolet. Bebrerapa senyawa organik bersinar atau

berflourosensi jika disinari dengan sinar ultraviolet gelombang pendek (254 nm)

atau gelombang panjang (366 nm). Jika dengan cara itu senyawa tidak dapat

dideteksi maka harus dicoba disemprot dengan pereaksi yang membuat bercak

tersebut tampak yaitu pertama tanpa pemanasan, kemudian bila perlu dengan

pemanasan (Gritter, et al., 1991; Stahl, 1985; Rohman, 2007).

a. Fase diam (lapisan penyerap)

Pada kromatografi lapis tipis, fase diam berupa lapisan tipis yang terdiri atas

bahan padat yang dilapiskan pada permukaan penyangga datar yang biasanya

terbuat dari plat gelas (kaca), logam atau lapisan yang cocok (Stahl, 1985).

Lapisan melekat pada permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya

kalsium sulfat atau amilum. Penyerap yang umum dipakai untuk kromatografi

lapis tipis adalah silika gel, alumina, kieselguhr dan selulosa. Lapisan itu biasanya

berfungsi sebagai permukaan padat yang dapat menyerap (Gritter, et al., 1991).

Dua sifat yang penting dari fase diam adalah ukuran partikel dan

homogenitasnya, karena adesi terhadap penyokong sangat tergantung pada kedua

sifat tersebut. Ukuran partikel yang biasa digunakan adalah 1-25 mikron. Partikel

yang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil yang memuaskan dan

93
salah satu cara untuk memperbaiki hasil pemisahan yang baik adalah dengan

menggunakan fase diam yang butirannya lebih halus. Butiran yang halus

memberikan aliran pelarut yang lebih lambat dan resolusi yang lebih baik. Ukuran

penyerap untuk kromatografi lapis tipis lebih halus (Stahl, 1985; Sudjadi, 1988).

b. Fase gerak (pelarut pengembang)

Fase gerak ialah medium angkut yang terdiri atas satu atau beberapa pelarut,

jika diperlukan sistem pelarut multi komponen, harus berupa suatu campuran

sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimum tiga komponen (Stahl, 1985).

Pemisahan senyawa organik selalu menggunakan pelarut campur. Tujuan

menggunakan pelarut campur adalah untuk memperoleh pemisahan senyawa yang

baik. Kombinasi pelarut adalah berdasarkan atas polaritas masing-masing pelarut,

sehingga dengan demikian akan diperoleh sistem pengembang yang cocok

polaritasya. Pelarut pengembang yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis

antara lain: n-heksan, karbontetraklorida, benzen, kloroform, eter, etilasetat,

piridian, aseton, etanol, metanol dan air (Gritter, et al., 1991).

c. Harga Rf

Untuk menggambarkan jarak pengembangan senyawa pada kromatogram

dipakai istilah harga Rf (Stahl, 1985; WHO, 1992).

Dalam mengidentifikasi noda-noda dalam kromatografi sangat lazim

menggunakan harga Rf yang dinyatakan dengan rumus berikut:

Jarak titik pusat bercak dari titik awal

Rf =
Jarak garis depan pelarut dari titik awal

Harga Rf beragam mulai dari 0 sampai 1. Faktor-faktor yang mempengaruhi

harga Rf (Sastrohamidjojo, 1985).

94
 a. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan

b. Sifat Penyerap

c. Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap

d. Pelarut dan derajat kemurniannya

e. Derajat kejenuhan uap pengembang dalam bejana

f. Teknik percobaan

g. Jumlah cuplikan yang digunakan

h. Suhu

i. Kesetimbanga.

2.10.1 Kromatografi Kertas (KKt)

Suatu keuntungan utama KKt ialah kemudahan dan kesederhanaannya pada

pelaksanaan pemisahan, yaitu hanya pada lembaran kertas saring yang berlaku

sebagai medium pemisahan dan juga sebagai penyangga. Keuntungan lain ialah

keterulangan bilangan Rf yang besar pada kertas sehingga pengukuran Rf

merupakan parameter yang berharga dalam memaparkan senyawa tumbuhan baru.

Kromatografi pada kertas biasanya melibatkan kromatografi pembagian atau

penjerapan. Pada kromatografi pembagian, senyawa terbagi dalam pelarut alkohol

yang sebagian besar tidak tercampur dengan air (missal n-butanol) dan dalam air.

Campuran klasik yaitu n-butanol-asam asetat-air (4:1:5), lapisan atas) (disingkat

BAA) (Harborne, 1996).

2.10.2 Kromatografi lapis tipis/kromatografi kertas dua arah/k(two-

dimensional TLC)

KLT/Kkt dua arah atau KLT/Kkt dua dimensi ini bertujuan untuk

meningkatkan resolusi sampel ketika komponen-komponen sampel mempunyai

95
karakteristik kimia yang hampir sama, karena nilai Rf juga hampir sama. Untuk

itu, dua sistem fase gerak yang berbeda polaritasnya dapat digunakan secara

berurutan untuk memisahkan sampel sehingga memungkinkan untuk melakukan

pemisahan analit yang mempunyai tingkat polaritas yang hampir sama (Rohman,

2009).

KLT/Kkt dua arah dilakukan dengan menotolkan sampel di salah satu sudut

lapisan lempeng tipis dan mengembangkannya sebagaimana biasa dengan fasa

gerak pertama. Lempeng kromatografi selanjutnya dikeluarkan dari chamber lalu

dikeringkan di udara. Plat KLT kemudian dikembangkan menggunakan eluen

kedua sehingga pengembangan dapat terjadi pada arah kedua yang tegak lurus

dengan arah pengembangan yang pertama. Suksesnya pemisahan tergantung pada

kemampuan untuk memodifikasi selektifitas eluen kedua dibandingkan dengan

selektifitas eluen pertama (Rohman, 2009).

2.11 Spektrofotometri

Spektrofotometri adalah metode pengukuran spektrum cahaya dimana

sumber energinya berupa sinar/cahaya dan sistem detektornya menggunakan sel

fotolistrik (Noerdin, 1985).

2.11.1 Spektrofotometri sinar ultraviolet

Spektrum ultraviolet adalah suatu grafik yang menyatakan hubungan antara

panjang gelombang terhadap intensitas serapan (absorbansi) Spektrofotometri

ultra violet merupakan suatu analisis yang berdasarkan atas pengukuran serapan

suatu larutan yang dilalui radiasi monokromatis ultra ungu. Spektrum ultra violet

96
dapat juga diartikan sebagai suatu grafik antara panjang gelombang serapan sinar

lawan intensitas serapan (absorbansi).

Serapan cahaya oleh molekul dalam daerah spektrum ultra violet tergantung

pada struktur elektronik dari molekul yang bersangkutan. Spektrum ultra violet

dan sinar tampak dari senyawa-senyawa organik berkaitan erat dengan transisi-

transisi antara dua tingkat energi elektronik molekul tersebut

Apabila suatu molekul menyerap radiasi ultraviolet, di dalam molekul

tersebut terjadi perpindahan tingkat energi elektron-elektron dari ikatan pada

orbital molekul paling luar dari tingkat energi yang lebih rendah ke tingkat energi

yang lebih tinggi.

Pelarut yang banyak digunakan untuk spektrofotometri UV adalah etanol

95% karena kebanyakan golongan senyawa larut dalam pelarut tersebut. Alkohol

absolut harus dihindari karena mengandung benzena yang dapat menyerap di

daerah sinar UV pendek. Pelarut yang sering digunakan ialah air, etanol, metanol,

n-heksan dan eter (Harborne, 1987).

2.11.2 Spektrofotometri sinar inframerah

Sinar inframerah bila dilewatkan melalui cuplikan senyawa organik maka

sejumlah frekuensi akan diserap sedangkan frekuensi yang lain diteruskan.

Daerah inframerah terletak antara spektrum elektromagnetik cahaya tampak dan

spektrum radio, yakni antara bilangan gelombang 4000-400 cm-1.

Daerah pada spektrum inframerah di antara bilangan gelombang 1200 cm -1

dan 400 cm-1 menunjukkan pita spektrum atau puncak yang disebabkan oleh

getaran ikatan kimia atau gugus fungsi dalam molekul yang ditelaah. Daerah di

bawah 1200 cm-1 menunjukkan pita yang disebabkan oleh getaran seluruh

97
molekul, dan karena kerumitannya dikenal sebagai daerah sidik jari (Noerdin,

1985).

Kenyataan yang menunjukkan bahwa banyak gugus fungsi dapat

diidentifikasi dengan menggunakan frekuensi getaran khasnya mengakibatkan

spektrofotometri inframerah merupakan cara paling sederhana dan paling

terandalkan dalam menentukan gugus fungsi yang terkandung dalam sebuah

molekul (Harborne, 1987).

BAB III

98
 METODE PENELITIAN

3.1 Tempat Pelaksanaan Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi

USU, Laboratorium Farmakologi USU dan Laboratorium Penelitian Fakultas

Farmasi USU.

3.2 Metode Penelitian

Metodologi penelitian ini adalah metode eksperimental. Penelitian

eksperimental dimaksudkan untuk mengetahui pengaruh atau hubungan antara

variabel bebas dengan variabel terikat. Dalam penelitian ini yang termasuk

variabel bebas adalah fraksi yang aktif sebagai antiinflamasi. Sedangkan variabel

terikat adalah skrining fitokimia, penentuan aktifitas antiinflamasi dan analisis

fraksi aktif. Tahap penelitian meliputi penyiapan bahan uji, identifikasi tumbuhan,

pemeriksaan skrining fitokimia, fraksinasi, , isolasi, identifikasi dengan UV dan

FT-IR dan analisa data.

3.3 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas

laboratorium, cawan penguap, spatula, blender (Panasonic), eksikator, chamber

KLT, plat KLT analitik, pipet kapiler, spray penampak noda kromatografi, oven

listrik (Stork), tanur, electric heating mantle (EM 2000), hair dryer (Maspion),

neraca analitik (Vibra AJ), neraca kasar (Saherand), penangas air (Yenaco), rotary

evaporator (Boeci 461), lemari pengering, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu),

spektrofotometer IR (IR-Prestige 21), stopwatch, plethysmometer, kandang tikus,

99
masker, sarung tangan, timbangan hewan, oral sonde, erlenmeyer, gelas beker,

gelas ukur, tabung reaksi, batang pengaduk, spatula, kaca arloji, pipet tetes, hot

plate, lumpang, label, dan alumunium foil.

3.4 Bahan-bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit batang

sikkam (Bischofia javanica Blume). Bahan kimia berkualitas proanalisis yaitu

aquades, etanol 96%, asam khlorida, kalium iodida, iodium, sublimat, asam sulfat,

bismut subnitrat, kertas saring Whatman no.1, pipa penotol, kromatografi kertas,

raksa ( II), seng serbuk, toluen, timbal (II) asetat, aquades, kloroform, metanol,

etil asetat, aseton, toluena, amoniak, n-heksan, Na CMC dan tablet Natrium

diklofenak.

3.5 Pembuatan pereaksi

3.5.1 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida P dilarutkan dalam air secukupnya, lalu

ditambahkan 2 g iodida P kemudian ditambahkan air hingga 100 ml (Depkes RI,

1995).

3.5.2 Pereaksi Mayer

Larutan raksa (II) klorida P 2,266% b/v sebanyak 60 ml dicampur dengan

10 ml larutan kalium iodida P 50% b/v, kemudian ditambahkan air secukupnya

hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.3 Pereaksi Dragendorff

100
 Larutan bismuth nitrat P 40% b/v dalam asam nitrat P sebanyak 20 ml

dicampur dengan 50 ml kalium iodida P 54,4% b/v, didiamkan sampai memisah

sempurna. Lalu ambil lapisan jernih dan diencerkan dengan air secukupnya

hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.4 Pereaksi Molish

Sebanyak 3 g α-naftol P, dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga

diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.5 Larutan Asam Klorida 2 N

Larutan asam klorida pekat sebanyak 17 ml ditambahkan air suling sampai

100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.6 Larutan Asam Sulfat 2 N

Larutan asam sulfat pekat sebanyak 9,8 ml ditambahkan air suling sampai

100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.7 Larutan Asam Nitrat 0,5 N

Sebanyak 3,4 ml asam nitrat pekat diencerkan dengan air suling hingga

volume 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.8 Larutan Timbal (II) Asetat 0,4 M

Sebanyak 15,17 timbal (II) asetat P dilarutkan dalam air bebas karbon

dioksida hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.5.9 Larutan Besi (III) Klorida 1% b/v

Sebanyak 1 g bes i (III) klorida dilarutkan dalam air secukupnya hingga 100

ml (Depkes RI, 1995).

3.5.10 Larutan Pereaksi Liebermann-Burchard

101
 Asam sulfat pekat sebanyak 5 ml dicampurkan dalam 50 ml etanol 96%,

lalu ditambahkan 5 ml asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut (Depkes

RI, 1995).

3.5.11 Larutan Pereaksi Kloralhidrat 70% b/b

Sebanyak 70 g kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 30 ml

air suling (Depkes RI, 1995).

3.5.12 Larutan Floroglusin HCl

Larutan floroglusin P 1% b/v dalam etanol (90%), kemudian ditambahkan

3 ml HCl pekat (Depkes RI, 1995).

3.6 Pengumpulan bahan tumbuhan, identifikasi tumbuhan, pembuatan

simplisia dan karakterisasi tumbuhan

3.6.1 Pengumpulan bahan tumbuhan

Metode pengumpulan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu

mengambil sampel tumbuhan dengan sengaja dari satu tempat tanpa

membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan yang

digunakan adalah kulit batang sikkam (Bischofia javanica Blume) yang diperoleh

dari daerah Kota Medan.

3.6.2 Identifikasi tumbuhan

Identifikasi tumbuhan dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia

(LIPI) Jl. Raya Jakarta – Bogor Km. 46 Cibinong 16911 Bogor – Indonesia.

3.6.3 Pembuatan simplisia

Kulit batang sikkam (Bischofia javanica Blume) telah dikumpulkan

dibersihkan dari kotoran dengan cara mencuci di bawah air mengalir hingga

102
bersih dan ditiriskan. Sampel ditimbang sebagai berat basah dan dikeringkan

dalam rak pengering pada suhu 40 C. sampel dianggap kering apabila sudah

rapuh. Sampel kering ditimbang dan sampel selanjutnya diserbuk dengan

menggunakan blender.

3.7 Skrining Fitokimia

3.7.1 Pemeriksaan alkaloid

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 500 mg dan 2g ekstrak etanol batang

sikkam kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling,

dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan lalu disaring. Filtrat

dipakai untuk percobaan berikut :

a. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer

b. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat

c. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff

Alkaloida dianggap positif jika terjadi endapan atau paling sedikit dua atau tiga

dari percobaan di atas (Depkes RI, 1995).

3.7.2 Pemeriksaan flavonoid

Sebanyak 10 g serbuk simplisia dan 2 g kemudian ditambahkan 100 ml air

panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang

diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml HCl

pekat dan 2 ml amil alkohol. Flavonoid positif jika terjadi warna merah, kuning,

jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

103
3.7.3 Pemeriksaan tanin

Sebanyak 0,5 g sampel disari dengan 10 ml air suling, disaring lalu

filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2 ml

larutan lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida. Terjadi

warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966).

3.7.4 Pemeriksaan glikosida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g kemudian disari dengan 30 ml

campuran 7 bagian volume etanol 96% dan 3 bagian volume air suling (7:3),

direfluk selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Pada 20 ml filtrat tambahkan

25 ml air, dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan selama 5 menit

lalu disaring. Filtrat disari sebanyak 3 kali, tiap kali dengan 20 ml campuran 3

bagian volume kloroform (p) dan 2 bagian volume isopropanolol (p).

Pada kumpulan sari tambahkan natrium sulfat anhidrida (p), disaring dan

diuapkan pada suhu tidak lebih dari 500C. Sisa dilarutkan dengan 2 ml metanol

(p), lalu dimasukkan 0,1 ml larutan ke dalam tabung reaksi, dan diuapkan di atas

penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes Molish, kemudian

ditambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat (p), terbentuk cincin berwarna ungu pada

batas cairan, menunujukkan adanya ikatan gula (reaksi Molish) (Depkes RI,

1995).

3.7.5 Pemeriksaan saponin

Sebanyak 0,5 sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat

selama 10 detik, terbentuk buih atau busa tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-10

104
cm. Penambahan 1 tetes larutan asam klorida 2 N, apabila buih tidak hilang

menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).

3.7.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid

Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, lalu

disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan 2 tetes

asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat. Timbul warna ungu atau

merah kemudian berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya

steroid/triterpenoid (Harbone, 1987).

3.7.7 Pemeriksaan glikosida antrakuinon

Sebanyak 0,2 g serbuk simplisia dicampur dengan 5 ml asam sulfat 2 N,

didihkan sebentar, setelah dingin ditambahkan 10 ml benzene, dikocok dan

didiamkan. Lapisan benzen dipisahkan dan disaring. Lapisan benzen dikocok

dengan 2 ml NaOH 2 N, didiamkan. Lapisan air berwarna merah menunjukkan

adanya glikosida antrakuinon (Depkes RI, 1995).

3.8 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak etanol

Karakterisasi simplisia seperti penetapan kadar air dilakukan menurut

prosedur WHO (1998); pemeriksaan makrokospik, penetapan kadar sari larut air,

penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total dan penetapan kadar

abu tidak larut asam, susut pengeringan dilakukan menurut prosedur Depkes

(1995).

3.8.1 Pemeriksaan Makrokospik

Pemeriksaan makrokospik dilakukan dengan mengamati morfologi luar

yaitu ukuran, bentuk, warna, bau dan rasa simplisia daun sambung rambat.

105
3.8.2. Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi

toluena) (Depkes, 2000).

Cara kerja:

Toluena 200 ml dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu alas bulat,

lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluena dibiarkan mendingin selama 30

menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml.

Kemudian ke dalam labu tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia, labu

dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluena mendidih, kecepatan tetesan

diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi,

kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air

terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluena. Destilasi dilanjutkan

selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu

kamar. Setelah air dan toluena memisah sempurna, volume air dibaca dengan

ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan

air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air yang didapat dihitung

dalam persen dengan rumus:

Kadar Air =

3.8.3 Penetapan kadar sari larut dalam air

106
 Sebanyak 5 g sampel dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-

kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu

bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, lalu dibiarkan selama

18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering

dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa dipanaskan

pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air

dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, 1995).

3.8.4 Penetapan kadar sari larut dalam etanol

Sebanyak 5 g sampel dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 96%

dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian

dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan

etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang

berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105 oC

sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96% dihitung

terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, 1995).

3.8.5 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 g sampel ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porselin

yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan

sampai arang habis, pijaran dilakukan pada suhu 600oC selama 3 jam kemudian

didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung

terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, 1995).

3.8.6 Penetapan kadar abu tidak larut asam

Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml

asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam

107
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas,

dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu

yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan

(Depkes, 1995).

3.9 Pembuatan ekstrak etanol Kulit batang sikkam

Serbuk simplisia sebanyak 1 kg dimasukkan ke dalam bejana bertutup,

ditambahkan 10 liter pelarut. rendam selama 6 jam pertama sambil sekali-sekali

diaduk, kemudian diamkan selama 18 jam. Maserat ditampung pada botol

gelaplalu dipisahkan dengan cara pengendapan, kemudian disaring. Proses

penyaringan dilakukan sebanyak dua kali.Ekstrak dikumpulkan dan dipekatkan

dengan menggunakan rotary evaporator, dikeringkan dengan freeze dryer

(Depkes, 2008).

3.10 Pembuatan fraksi n-heksan kulit batang sikkam,fraksi etilasetat kulit

batang sikkam dan fraksi air Kulit Batang Sikkam

Sebanyak 90 g ekstrak etanol kental dilarutkan dalam etanol 96% sampai

larut kemudian ditambahkan 40 mL air suling, dimasukkan ke dalam corong

pisah, lalu ditambahkan 100 mL n-heksan, lalu dikocok, dan didiamkan sampai

terdapat 2 lapisan yang terpisah (± 30 menit). Lapisan n-heksan (lapisan atas)

diambil dengan cara dialirkan, dan fraksinasi dilakukan sampai lapisan n-heksan

memberikan hasil negatif dengan pereaksi LB. Lapisan n-heksan yang

dikumpulkan dipekatkan dengan rotary evaporator. Kemudian pada residu (sisa)

ditambahkan 100 mL etilasetat, lalu dikocok, didiamkan sampai terdapat 2 lapisan

yang terpisah (± 30 menit), lapisan etilasetat (lapisan atas) diambil dengan cara

108
dialirkan, dan fraksinasi dilakukan sampai lapisan etilasetat memberikan hasil

negatif dengan pereaksi FeCl3. Lapisan etilasetat yang dikumpulkan dipekatkan

dengan rotary evaporator, sisa fraksinasi (fraksi air) juga di pekatkan (Bassett, et

al., 1994).

3.11 Pengujian Farmakologi

3.11.1Pembuatan indikator radang (lamda karagenan 1%)

Lamda karagenan ditimbang sebanyak 100 mg, dimasukkan kedalam

labu tentukur 10 ml kemudian dicukupkan dengan larutan NaCL 0,9%, sampai

garis tanda kemudian diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24 jam.

3.11.2 Pembuatan suspensi bahan uji

Ekstrak Kulit batang sikkam (Bischofia javanica blume) dibuat dalam

bentuk suspensi untuk diberikan secara oral pada tikus jantan. Suspensi adalah

sediaan yang mengandung bahan obat padat dalam bentuk halus dan tidak larut,

terdispersi dalam cairan pembawa (Depkes, 1979)

3.11.3 Pembuatan suspensi Na-CMC

Na-CMC sebanyak 0,5 g ditaburkan dalam lumpang yang berisi air suling

panas. Didiamkan selama 15 menit lalu digerus hingga diperoleh massa yang

transparan, diencerkan dengan air suling, dihomogenkan dan dimasukkan ke labu

tentukur 100 ml, dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 100 ml.

3.11.4 Pembuatan suspensi natrium diklofenak bahan uji

Natrium diklofenak sebanyak 20 tablet diambil, digerus, kemudian

ditimbang berat totalnya. Berat bahan aktif natrium diklofenak pada masing –

masing tablet yaitu mengandung 25 mg. Total kandungan bahan aktif dalam 20

109
tablet yaitu 500 mg. Ditimbang setara tablet dengan 2,25mg/kg, lalu dimasukkan

kedalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% b/v sedikit demi

sedikit sambil digerus sampai homogen, volume dicukupkan hingga 10 ml.

3.11.5 Pembuatan suspensi fraksi n-heksana, fraksi etil asetat dan fraksi air

Kulit Batang Sikkam

Ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat dan fraksi air kulit

batang sikkam masing-masing ditimbang 10 gram, kemudian dimasukkan

kedalam lumpang, dan ditambahkan suspensi Na-CMC lalu digerus hingga

merata. Sediaan suspensi ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat dan

fraksi air kulit batang sikkam dimasukkan kedalam labu tentukur 100 ml,

kemudian ditambahkan suspensi Na-CMC ke dalam labu hingga dicapai batas

volume untuk mendapatkan konsentrasi 100 mg/ml.

3.12. Uji Anti Inflamasi.

Pengujian efektivitas antiinflamasi pertama sekali dilakukan pada ekstrak

etanol. Setelah mendapatkan dosis yang efektif maka dosis tersebut dapat dipakai

pada fraksi n-heksana, fraksi etil asetat dan fraksi air yang mana dilakukan dengan

menggunakan parameter volume edema.

3.12.1 Uji antiinflamasi pada ekstrak etanol

Pengujian dilakukan pada lima kelompok dengan jumlah tikus putih

jantan masing-masing kelompok adalah 6 ekor dan diambil secara acak.

Pembagian kelompok tersebut adalah:

a. kontrol negatif, diberikan suspensi Na CMC 0,5%

b. kontrol positif, diberikan suspensi natrium diklofenak dosis 2,25 mg/kg

110
c. kelompok dosis 50 mg/kg, diberikan suspensi ekstrak etanol kulit batang

sikkam dosis 50 mg/kg.

d. kelompok dosis 100 mg/kg, diberikan suspensi ekstrak etanol kulit batang

sikkam dosis 100 mg/kg

e. dan kelompok dosis 200 mg/kg, diberikan suspensi ekstrak kulit batang

sikkam dosis 200 mg/kg.

Sediaan uji diberikan peroral. Beri tanda pada kaki tikus sebagai batas

pengukuran pada alat plethysmometer, ukur volume kaki normal pada menit ke 30

setelah pemberian sediaan uji masing-masing hewan diberikan 0,05 ml larutan

karagenan dengan konsentrasi 1% pada bagian telapak kaki. Selanjutnya volume

kaki tikus diukur pada menit ke-30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330

dan 360 setelah diinduksi karagenan. Berdasarkan hasil pengukuran didapat data

nilai edema dengan mengurangi volume edema yang terbentuk pada tiap waktu

pengukuran terhadap volume kaki normal, dan persen inhibisi edema dengan

menghitung persentase rasio edema yang terbentuk pada tiap waktu pengukuran

(Vogel, et al., 2008,; Yu, et al,2013)

Rumus pengukuran nilai edema dan persen inhibisi edema adalah sebagai berikut

(Yu, et al, 2013) :

Volume udema (ml) = V0 – Vt

% inhibisi udema = x 100%

Keterangan Vo = Volume kaki normal

Vt = Volume inflamasi setelah waktu (t)
Vc0 = Volume inflamasi kontrol negatif
Vs = Volume inflamasi sampel uji.

111
3.12.2 Uji paw edema pada fraksi etil asetat, fraksi n heksana dan fraksi air

Total kelompok pada pengujian ini ada sebelas kelompok dengan jumlah

tikus putih jantan masing-masing kelompok adalah 6 ekor dan diambil secara

acak. Pembagian kelompok tersebut yaitu:

a. Kontrol negatif, diberikan suspensi Na CMC 0,5%

b. Kontrol positif, diberikan suspensi natrium diklofenak dosis 2,25 mg/kg

c. Kelompok uji FEABS dosis 50 mg/kgBB

d. Kelompok uji FEABS dosis 100 mg/kgBB

e. Kelompok uji FEABS dosis 200 mg/kgBB

f. Kelompok uji FNHBS dosis 50 mg/kgBB

g. Kelompok uji FNHBS dosis 100 mg/kgBB

h. Kelompok uji FNHBS dosis 200 mg/kgBB

i. Kelompok uji FABS dosis 50 mg/kgBB

j. Kelompok uji FABS dosis 100 mg/kgBB

k. Kelompok uji FABS dosis 200 mg/kgBB

Sediaan uji diberikan peroral. Beri tanda pada kaki tikus sebagai batas

pengukuran pada alat plethysmometer, ukur volume kaki normal. Pada menit ke-

30 setelah pemberian sediaan uji masing-masing hewan diberikan 0,05 ml larutan

karagenan dengan konsentrasi 1% pada bagian telapak kaki. Selanjutnya volume

kaki tikus diukur pada ment ke-30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330

dan 360 setelah diinduksi karagenan. Berdasarkan hasil pengukuran didapat data

nilai edema dengan mengurangi volume edema yang terbentuk pada tiap waktu

pengukuran terhadap volume kaki normal, dan persen inhibisi edema dengan

112
menghitung persentase rasio edema yang terbentuk pada tiap waktu pengukuran

(Vogel, et al,2008; Yu, et al, 2013).

Rumus pengukuran nilai edema dan persen inhibisi edema adalah sebagai

berikut (Yu, et al, 2013):

Volume udema (ml) = V0 – Vt

% inhibisi udema = x 100%

Keterangan: Vo = Volume kaki normal
Vt = Volume inflamasi setelah waktu (t)
Vco = Volume inflamasi kontrol negatif
Vs = Volume inflamasi sampel uji.

3.13 Analisis Hasil

Data yang didapatkan dari hasil penelitian dianalisis dengan one way

analisys of variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji lanjut Tukey pada

program statistic product and service solutions (SPSS).

3.14 Analisis Fraksi Aktif Hidrolisis Asam Secara KKt

Fraksi aktif dihidrolisis dengan HCl 2N selama 30-40 menit pada suhu

1000C. larutan yang telah didinginkan diekstraksi dua kali dengan etilasetat, lalu

esktrak dipekatkan sampai kering. Sisanya dilarutkan dalam etanol untuk

dikromatografi (Harborne, 1996).

Cara kerja:

Fraksi aktif daun sambung rambat yang telah dihidrolis ditotolkan pada

kertas whatmann No.1, kemudian dimasukkan ke dalam chamber yang telah jenuh

dengan uap pengembang dan ditutup rapat. Sesudah pengembangan selesai plat

113
dikeluarkan dan dikeringkan di udara, disemprot dengan penampak bercak yang

sesuai lalu dihitung harga Rf.

3.15 Isolasi Senyawa Fraksi Aktif Secara KKt Preparatif

Isolasi senyawa fraksi aktif dilakukan secara KKt preparatif menggunakan

fase diam kertas Whatmann No.1 dan fase gerak yang sesuai.

Cara kerja :

Fraksi etilasetat ditotolkan pada kertas Whatmann No.1 berupa pita,

kemudian dimasukkan ke dalam bejana kromatografi yang telah jenuh dengan uap

fase gerak, lalu dikembangkan dengan jarak rambat 15 cm. kertas diangkat dan

dikeringkan, kemudian diamati dibawah sinar lampu UV. Bercak yang sesuai

diberi tanda dan digunting berupa potongan kecil-kecil, lalu direndam dalam

metanol selama 24 jam sambil sekali-kali dikocok kemudian disaring. Proses

perendaman diulangi hingga 3 kali sampai senyawa pada kertas Whatmann No.1

tersari, selanjutnya sari dikumpulkan dan dipekatkan.

3.16 Uji golongan isolat

3.16.1 Uji golongan isolat dengan KKt satu arah

Terhadap isolat hasil isolasi dilakukan uji golongan dengan KKt satu

arah menggunakan paling sedikit tiga macam fase gerak yang berbeda

kepolarannya, menggunakan penampak bercak yang sesuai.

Cara kerja:

Isolat hasil isolasi ditotolkan pada kertas whatmann No.1, kemudian

dimasukkan ke dalam bejana kromatografi yang telah jenuh dengan uap

pengembang yang sesuai, ditutup rapat. Sesudah elusi selesai kertas whatmann

114
No.1 dikeluarkan dari bejana kromatografi dan dikeringkan di udara, kemudian

disemprot dengan larutan penampak bercak yang sesuai. Hitung harga Rf yang

diperoleh.

3.16.2 Uji golongan isolat dengan KKt dua arah

Terhadap isolat dilakukan uji golongan dengan KKt dua arah

menggunakan fase diam kertas whatmann No.1, menggunakan fase gerak pertama

yang berbeda kepolarannya dengan fase gerak ke kedua, hasil elusi di semprot

dengan penampak bercak yang sesuai.

Cara kerja:

Isolat hasil isolasi ditotolkan pada kertas whatmann No.1, kemudian

dimasukkan ke dalam bejana kromatografi yang telah jenuh dengan uap

pengembang yang sesuai, ditutup rapat. Sesudah elusi selesai kertas whatmann

No.1 dikeluarkan dari bejana kromatografi dan dikeringkan di udara, kemudian

disemprot dengan larutan penampak bercak yang sesuai. Hitung harga Rf yang

diperoleh.

3.17 Karakterisasi Isolat

Karakterisasi isolat secara spektrofotometri ultraviolet dan spektrofotometri

infrared.

3.17.1 Karakterisasi isolat dengan spektrofotometri UV

Cara kerja:

Isolat hasil isolasi dilarutkan dalam pelarut metanol, kemudian

dimasukkan ke dalam kuvet yang telah dibilas dengan metanol. Absorbansi

larutan sampel diukur pada panjang gelombang 200-400 nm.

115
3.17.2 Karakterisasi isolat dengan Spektrofotometri IR

Cara kerja:

Karakterisasi isolat secara spektrofotometri IR dilakukan dengan cara

mencampurkan 1 mg isolat dengan 100 mg kalium bromida menggunakan alat

mixture vibrator. Kemudian bahan dicetak menjadi pelet dan dimasukkan ke

dalam spektrofotometer inframerah serta diukur pada bilangan gelombang 4000-

400 cm-1

116
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Identifikasi Sampel

Identifikasi sampel dilakukan di Herbarium Bogoriense, Pusat Penelitian

Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor. Hasilnya

menunjukkan sampel yang digunakan adalah benar kulit batang sikkam (Bischofia

javanica Blume).Terlihat pada Lampiran 1 dan gambar tumbuhan pada lampiran 2

4.2 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi

Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi dari serbuk simplisia kulit batang

sikkam sebanyak 1 kg. Ekstrak etanol kemudian dipisahkan dari pelarutnya

o
dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 60 C sehingga diperoleh

ekstrak kental yang kemudian dikeringkan dengan menggunakan freeze dryer

(340 g EEBS) lalu dilakukan fraksinasi terhadap 90 g ekstrak etanol menggunakan

corong pisah sehingga diperoleh fraksi n-heksana (10,7 g FNHBS), fraksi

etilasetat (31,5 g FEABS) dan fraksi sisa (15,55 g FSBS). Hasil rendemen pada

fraksinasi ini adalah 32,25 g

4.3 Hasil Karakterisasi

4.3.1 Pemeriksaan makroskopik

Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia kulit batang sikkammerupakan

potongan-potongan kulit yang lebar denganpermukaan luar berwarna coklat tua

sedangbagian dalam berseratberwarna coklat kemerahan dengan rasa kelat.

Gambar simplisia sikkam dapat dilihat pada Lampiran 3 .

117
 4.3.2 Pemeriksaan karakteristik

Karakteristik serbuk simplisia dan ekstrak etanol kulit batang sikkam

(EEKBS) yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia dan EEKBS

Hasil
No Karakterisasi Ekstrak etanol
Serbuk simplisia(%)
(%)
1 Kadar air 5,99 7,32
2 Kadar sari larut air 17,49 32,97
3 Kadar sari larut etanol 11,84 23,26
4 Kadar abu total 4,07 0,48
5 Kadar abu tidak larut asam 6,06 0,01

Karakteristik serbuk simplisia kulit batang sikkam tidak tercantum dibuku

Materia Medika Indonesia. Berdasarkan persyaratan umum, kadar air simplisia

memenuhi syarat dimana tidak lebih dari 10%, karena jika melebihi persyaratan,

memungkinkan terjadinya pertumbuhan jamur.

Penetapan kadar sari larut air dilakukan untuk mengetahui banyaknya

senyawa yang ikut tersari dengan air seperti glikosida, gula, protein, enzim, zat

warna, dan asam organik. Penetapan kadar sari larut etanol digunakan untuk

mengetahui banyaknya senyawa kimia yang terlarut dalam pelarut etanol seperti

glikosida, steroida, flavonoida, klorofil, dan dalam jumlah sedikit yang larut yaitu

lemak. Tujuan penetapan kadar abu adalah untuk memberikan gambaran

kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai

terbentuknya ekstrak(Depkes, 2000).

4.4 Hasil Skrining Fitokimia

118
 Skrining fitokimia dilakukan terhadap serbuk simplisia dan EEKBS

dimana hasilnya menunjukkan bahwa kulit batang sikkam mengandung senyawa

kimia golongan flavanoida, glikosida, tanin dan triterpenoid.

Flavanoida diskrining dengan penambahan sebuk Mg, asam klorida pekat

akan memberikan warna merah. Skrining glikosida ditunjukkan dengan

terbentuknya cincin ungu dengan penambahan Molish dan asam sulfat pekat.

Penambahan FeCl3 1% memberikan warna biru kehitaman yang menunjukkan

adanya tanin yaitu 3 buah gugus hidroksil. Warna merah muda atau ungu pada

penambahan beberapa tetes pereaksi Liebermann-Burchard menunjukkan adanya

triterpenoida. Senyawa kimia yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol kulit batang
sikkam
Hasil No
No Pemeriksaan
Serbuk simplisia Ekstrak etanol
1 Alkaloida - -
2 Flavanoida + +
3 Glikosida + +
4 Saponin - -
5 Tanin + +
6 Steroida/Triterpenoida + +

Keterangan:
(+) positif : Mengandung golongan senyawa
(-) negatif : Tidak mengandung golongan senyawa

4.5 Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi

119
 Uji antiinflamasi ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh antiinflamasi

ekstrak etanol, fraksi n-heksana dan fraksi etil asetat kulit batang sikkam terhadap

tikus putih jantan. Hewan uji dibagi menjadi 14 kelompok perlakuan yaitu

kelompok kontrol negatif yang diberi suspensi Na-CMC 0,5%, kelompok kontrol

positif yang diberi suspensi natrium diklofenak 2,25 mg/kg bb, kelompok uji

dibagi atas 12 kelompok dengan variasi dosis perlakuan (EEBS dosis 50, 100 dan

200 mg/kgbb; Fn-HBS dosis 50, 100 dan 200 mg/kg bb; FEABS dosis 50, 100

dan 200 mg/kgbb; FSBS dosis, 100 dan dosis 200 mg/kg bb).

Pengujian efek antiinflamasi dilakukan dengan menggunakan alat

pletismometer digital dengan prinsip pengukuran berdasarkan hukum Archimedes

yaitu benda yang dimasukkan ke dalam zat cair akan memberi gaya atau tekanan

ke atas sebesar volume yang dipindahkan. Metode ini dipilih karena memiliki

kelebihan dalam hal pelaksanaan yang lebih cepat, hasil pengamatan volume kaki

tikus yang diukur lebih akurat, sebab volume kaki tikus yang diukur tercatat pada

recorder secara digital, sensitivitas alat lebih tinggi dibandingkan alat

pletismometer air raksa. Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis variansi

(ANAVA) menggunakan program SPSS 22

Edema pada kaki belakang yang diinduksi karagenan adalah model

standar percobaan inflamasi akut (Chakraborty et al., 2004). Karagenan adalah

polimerlinear yang tersusun dari sekitar 25.000 turunan galaktosa yang

strukturnya tergantung pada sumber dan kondisi ekstraksi. Karagenan

dikelompokkan menjadi 3 kelompok ama yai kappa, io a, dan lambda karagenan

lamda (λ karagenan) adalah karagenan yang diisolasi dari ganggang Gigartina

pistillata atau Chondrus crispus, yang dapat larut dalam air dingin (Chaplin,

2005). Karagenan dipilih untuk menguji obat antiinflamasi karena tidak bersifat

120
antigenik dan tidak menimbulkan efek sistemik (Chakraborty et al., 2004).

Pengukuran daya antiinflamasi dilakukan dengan cara melihat kemampuan batang

sikkam dalam mengurangi pembengkakan kaki hewan percobaan akibat

penyuntikan larutan karagenan 1%. Setelah disuntik karagenan, tikus-tikus

memperlihatkan adanya pembengkakan dan kemerahan pada kaki serta tikus tidak

dapat berjalan lincah seperti sebelum injeksi. Prinsip dalam metode ini mengukur

volume bengkak telapak kaki dari hewan uji yang telah diinduksi suatu agen

inflamasi.

4.5.1 Pengujian aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol kulit batang sikkam

(EEBS)

Hasil pengujian aktivitas antiinflamasi EEBS dapat dilihat pada tabel 4.3

dan grafik pada gambar 4.1

Tabel 4.3 Pengaruh pemberian EEBS terhadap persen radang

Kelompok 30 60 90 120 150 180
CMC Na 6.31 11.70 18.65 25.09 30.36 35.66
Na Diklofenak 3.39 5.65 8.28 13.73 19.25 25.61
EEBS 50 mg/Kg bb 5.17 9.04 15.17 20.39 26.36 31.33
EEBS 100 mg/Kg bb 4.26 6.66 10.94 15.13 22.43 27.72
EEBS 200 mg/Kg bb 3.81 6.52 9.68 14.50 20.47 26.27

Lanjutan Tabel 4.3 Pengaruh pemberian EEBS terhadap persen radang

Kelompok 210 240 270 300 330 360
CMC Na 41.07 45.46 50.59 54.65 60.93 62.68
Na Diklofenak 29.07 24.95 19.55 13.26 7.33 2.93
EEBS 50 mg/Kg bb 34.00 29.70 24.28 19.92 13.67 9.12
EEBS 100 mg/Kg bb 30.33 26.88 21.65 15.39 10.47 4.73
EEBS 200 mg/Kg bb 29.50 25.43 20.23 14.53 8.73 3.67

121
 Gambar 4.1 Pengaruh pemberian EEBS terhadap rata – rata persen radang

Pada kelompok kontrol negatif yang diberikan suspensi Na CMC 0,5%

tanpa adanya senyawa aktif di dalamnya, terlihat peningkatan volume kaki yang

sangat signifikan dengan volume yang jauh lebih besar dibandingkan kelompok

uji lainnya. Kelompok negatif ini menjadi acuan dalam membandingkan hasil

yang dicapai oleh kelompok lain. Kelompok uji dengan hasil yang berbeda secara

signifikan terhadap kelompok kontrol negatif menunjukkan adanya efek dari

senyawa atau bahan obat yang diberikan kepada hewan uji.

Kelompok kontrol positif diberikan suspensi Natrium Diklofenak

dengan dosis pemberian 2,25 mg/kg. Hasil yang diperoleh kelompok ini

berbeda secara signifikan terhadap kontrol negatif dalam tiap waktu

pengukuran yaitu menit ke-30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330

dan 360.

Kelompok uji yang diberikan ekstrak etanol kulit batang sikkam dosis 50,

100 dan 200 mg/kgbb memiliki perbedaan hasil. Berdasarkan hasil persen radang

122
rata-rata kaki tikus, bahwa terjadi peningkatan persen radang pada menit ke-30

hingga ke-210 setelah diberi perlakuan, selanjutnya terjadi penurunan pada menit

ke-240 hingga ke-360 pada kelompok EEBS 50, 100 dan 200 mg/kgbb. Seluruh

dosis EEBS berbeda signifikan terhadap kontrol negatif artinya dapat menurunkan

persentase radang.

Berdasarkan hasil rata-rata persen radang yang didapat selanjutnya

dihitung nilai persen inhibisi edema yang menggambarkan kemampuan sampel uji

dalam menahan inflamasi yang terjadi akibat induksi karagenan. Hasil

perhitungan persen inhibisi radang dapat dilihat pada tabel 4.4 dan grafik gambar

4.2

Tabel 4.4 Pengaruh pemberian EEBS terhadap rata-rata persen inhibisi radang
Kelompok 30 60 90 120 150 180
Na Diklofenak 52.64 51.94 53.11 43.74 36.20 27.89
EEBS 50 mg/Kg bb 28.55 29.57 17.87 17.62 13.06 13.56
EEBS 100 mg/Kg bb 29.97 40.09 39.02 38.51 25.92 21.90
EEBS 200 mg/Kg bb 35.15 42.20 47.34 41.38 31.94 25.64

Lanjutan Tabel 4.4 Pengaruh pemberian EEBS terhadap rata-rata persen inhibisi
Kelompok 210 240 270 300 330 360
Na Diklofenak 28.70 44.71 61.23 75.81 88.00 95.39
EEBS 50 mg/Kg bb 17.21 34.68 52.08 63.53 77.60 85.51
EEBS 100 mg/Kg bb 25.94 40.55 57.05 71.80 82.75 92.27
EEBS 200 mg/Kg bb 27.83 43.72 59.76 73.37 85.63 94.04

123
Gambar 4.2 Pengaruh pemberian EEBS terhadap persen inhibisi radang

Berdasarkan tabel dan grafik didapatkan bahwa EEBS dosis 200 mg/kgBB
memiliki kemampuan inhibisi radang mendekati kemampuan Na Diclofenac
dibandingkan dosis lainnya.

4.5.2 Pengujian aktivitas antiinflamasi fraksi n-heksan kulit batang sikkam

(FNHBS)

Untuk menilai pengaruh pemberian FNHBS terhadap persentase radang dapat

dilihat pada tabel 4.5 dan grafik 4.3

Tabel 4.5 Pengaruh pemberian FNHBS terhadap persen Radang

Kelompok V1 V2 V3 V4 V5 V6
CMC Na 6.31 11.70 18.65 25.09 30.36 35.66
Na Diklofenak 3.39 5.65 8.28 13.73 19.25 25.61
FNHBS 50 mg/Kg bb 5.97 11.29 17.72 24.25 28.36 34.34
FNHBS 100 mg/Kg
bb 5.41 10.53 16.52 22.27 25.60 33.55

124
 FNHBS 200 mg/Kg
bb 4.91 8.66 14.71 18.31 24.03 30.46

Lajutan tabel 4.5 Pengaruh pemberian FNHBS terhadap persen Radang

Kelompok V7 V8 V9 V10 V11 V12

CMC Na 41.07 45.46 50.59 54.65 60.93 62.68
Na Diklofenak 29.07 24.95 19.55 13.26 7.33 2.93
FNHBS 50 mg/Kg bb 37.35 31.84 28.21 23.38 16.95 13.15
FNHBS 100 mg/Kg
bb 36.28 31.22 26.56 20.67 13.92 11.15
FNHBS 200 mg/Kg
bb 33.54 28.04 24.08 19.16 11.74 8.52

Grafik 4.3 Pengaruh pemberian FNHBS terhadap persen Radang

Tabel 4.6 Pengaruh pemberian FNHBS terhadap persen inhibisi Radang

Kelompok V1 V2 V3 V4 V5 V6
Na Diklofenak 52.64 51.94 53.11 43.74 36.20 27.89
FNHBS 50 mg/Kg
bb 39.82 22.78 15.07 10.55 6.99 7.58
FNHBS 100 mg/Kg
bb 27.66 25.77 18.99 22.39 17.94 13.14
FNHBS 200 mg/Kg
bb 64.98 44.45 33.63 27.19 21.01 18.27

125
Lanjutan abel 4.6 Pengaruh pemberian FNHBS terhadap persen inhibisi
Radang
Kelompok V7 V8 V9 V10 V11 V12
Na Diklofenak 28.70 44.71 61.23 75.81 88.00 95.39
FNHBS 50 mg/Kg
bb 9.94 29.81 44.08 57.14 72.15 78.97
FNHBS 100 mg/Kg
bb 11.47 30.94 47.28 62.16 77.13 82.25
FNHBS 200 mg/Kg
bb 20.32 37.57 51.94 64.97 80.70 86.44

Grafik 4.4 Pengaruh pemberian FNHBS terhadap persen inhibisi Radang

Dari tabel dapat terlihat bahwa persentase radang mulai menurun sejak menit ke-
60 hingga menit ke-180 namun kembali mengalami kenaikan di menit 210. Untuk
menilai kemampuan inhibisi radang dapat dilihat pada grafik dan dapat dilihat
bahwa FNHBS dosis 200 mg/kgBB memiliki kemampuan inhibisi radang
mendekati Na Diklofenac.

126
4.5.3 Pengujian aktivitas antiinflamasi fraksi etilasetat kulit batang sikkam
(FEABS)

Untuk menilai pengaruh pemberian FEABS terhadap persentase radang dapat

dilihat pada tabel 4.6 dan grafik 4.4

Tabel 4.6 Pengaruh pemberian FEABS terhadap persen radang

Kelompok V1 V2 V3 V4 V5 V6
CMC Na 6.31 11.70 18.65 25.09 30.36 35.66
Na Diklofenak 3.39 5.65 8.28 13.73 19.25 25.61
FEABS 50 mg/Kg bb 5.21 9.49 15.33 21.28 27.19 32.45
FEABS 100 mg/Kg bb 4.45 7.30 12.63 17.55 22.93 29.11
FEABS 200 mg/Kg bb 4.32 6.86 11.34 16.74 21.40 28.21

Lanjutan Tabel 4.6 Pengaruh pemberian FEABS terhadap persen Radang

Kelompok V7 V8 V9 V10 V11 V12

CMC Na 41.07 45.46 50.59 54.65 60.93 62.68
Na Diklofenak 29.07 24.95 19.55 13.26 7.33 2.93
FEABS 50 mg/Kg bb 35.38 30.75 26.18 21.48 14.70 7.83
FEABS 100 mg/Kg bb 32.53 27.74 23.21 17.59 12.04 6.70
FEABS 200 mg/Kg bb 31.79 26.96 21.05 16.25 9.41 5.55

Gambar 4.4 Grafik pengaruh pemberian FEABS terhadap persen radang

127
 Kelompok uji yang diberikan fraksi etil asetat kulit batang sikkam dosis

50, 100 dan 200 mg/kgbb memiliki perbedaan hasil. Berdasarkan hasil persen

radang rata-rata kaki tikus, bahwa terjadi peningkatan persen radang pada menit

ke-30 hingga ke-210 setelah diberi perlakuan, selanjutnya terjadi penurunan pada

menit ke-240 hingga ke-360 pada kelompok FEABS 50, 100 dan 200 mg/kgbb.

Tabel 4.7 Pengaruh pemberian FEABS terhadap persen inhibisi Radang

Kelompok V1 V2 V3 V4 V5 V6
Na Diklofenak 52.64 51.94 53.11 43.74 36.20 27.89
FEABS 50 mg/Kg bb 28.82 29.20 16.49 14.24 10.20 11.83
FEABS 100 mg/Kg
bb 45.47 40.42 29.85 28.38 23.75 18.01
FEABS 200 mg/Kg
bb 32.68 39.16 37.31 32.48 29.08 20.67

Lanjutan Tabel 4.7 Pengaruh pemberian FEABS terhadap persen inhibisi

Radang

Kelompok V7 V8 V9 V10 V11 V12

Na Diklofenak 28.70 44.71 61.23 75.81 88.00 95.39
FEABS 50 mg/Kg bb 13.55 32.14 48.12 60.64 75.82 87.27
FEABS 100 mg/Kg
bb 20.42 38.62 53.82 67.79 80.15 89.08
FEABS 200 mg/Kg
bb 22.33 40.51 58.17 70.23 84.48 90.96

128
 Gambar 4.5 Grafik pengaruh pemberian FEABS terhadap persen radang

Dari tabel dan grafik dapat dilihat bahwa FEABS dosis 200 mg/kgBB memiliki
kemampuan inhibisi radang mendekati kemampuan Na Diklofenak dibandingkan
FEABS dosis lainnya.

4.5.4 Pengujian aktivitas antiinflamasi fraksi sisa kulit batang sikkam (FSBS)

Untuk menilai pengaruh pemberian FSBS terhadap persentase radang dapat

dilihat pada tabel 4.8 dan grafik 4.6

Tabel 4.8 Pengaruh pemberian FSBS terhadap persen radang

Kelompok V1 V2 V3 V4 V5 V6
CMC Na 6.31 11.70 18.65 25.09 30.36 35.66
Na Diklofenak 3.39 5.65 8.28 13.73 19.25 25.61
FSBS 50 mg/Kg bb 5.33 10.82 17.21 23.60 29.14 34.21
FSBS 100 mg/Kg bb 4.81 8.22 14.38 19.27 27.62 30.77
FSBS 200 mg/Kg bb 4.65 7.77 13.81 18.29 23.75 29.98

Lanjutan Tabel 4.8 Pengaruh pemberian FSBS terhadap persen radang

Kelompok V7 V8 V9 V10 V11 V12

CMC Na 41.07 45.46 50.59 54.65 60.93 62.68
Na Diklofenak 29.07 24.95 19.55 13.26 7.33 2.93
FSBS 50 mg/Kg bb 38.07 32.91 29.15 22.58 15.75 12.52

129
 FSBS 100 mg/Kg bb 33.70 28.59 23.65 20.33 12.67 8.18
FSBS 200 mg/Kg bb 31.44 27.28 22.09 18.06 11.81 7.23

Gambar 4.6 Grafik pengaruh pemberian FSBS terhadap persen radang

Berdasarkan hasil persen radang rata-rata kaki tikus, bahwa terjadi

peningkatan persen radang pada menit ke-30 hingga ke-210 setelah diberi

perlakuan, selanjutnya terjadi penurunan pada menit ke-240 hingga ke-360 pada

kelompok FSBS 50, 100 dan 200 mg/kgbb. Begitu juga pada control positif

didapatkan penurunan persen radang sejak menit ke-240.

Tabel 4.9 Pengaruh pemberian FSBS terhadap persen inhibisi Radang

Kelompok V1 V2 V3 V4 V5 V6
Na Diklofenak 52.64 51.94 53.11 43.74 36.20 27.89
FSBS 50 mg/Kg bb 42.70 27.90 16.28 9.98 6.86 5.26
FSBS 100 mg/Kg bb 32.50 26.67 21.92 22.79 8.69 13.54
FSBS 200 mg/Kg bb 24.80 32.42 27.23 25.66 21.07 15.66

Lanjutan. Tabel 4.9 Pengaruh pemberian FEABS terhadap persen inhibisi

Radang

Kelompok
V7 V8 V9 V10 V11 V12
Na Diklofenak 28.70 44.71 61.23 75.81 88.00 95.39
FSBS 50 mg/Kg bb 8.25 27.38 42.28 58.65 74.10 79.90
FSBS 100 mg/Kg bb 17.88 36.79 53.00 62.74 79.09 86.81
FSBS 200 mg/Kg bb 23.27 39.79 56.27 67.01 80.60 88.58

130
 Gambar 4.7 Grafik pengaruh perlakuan terhadap persen inhibisi radang.
Dari gambar 4.7 tampak bahwa FSBS 200 mg/kgbb memiliki

kemampuan menurunkan persentase radang mendekati kemampuan Na

Diklofenak.

Selanjutnya data persen radang masing-masing tikus pada semua kelompok

dilakukan perhitungan uji paw, kemudian dianalisis statistik menggunakan

program SPSS 22.

131
4.5.5 Perbandingan Uji Aktivitas Antiinflamasi EEBS, FNHBS, FEABS dan
FSBS
Untuk melihat pengaruh perlakuan terhadap persen radang dapat diamati pada
tabel berikut:

Tabel 4.10 Pengaruh perlakuan terhadap persen radang

Rata-rata persen radang (menit ke-)
kelompok
30 60 90 120 150 180
41,07± 45,46± 50,59± 54,65± 60,93 ±
CMC Na 62,68± 1.114#
1,07# 1.271# 1.422# 1.547# 1.275#
13,26
29,07± 24,95± 19,55 ± 7,33 ±
Na Diklofenak ± 2,93± 1.057*
0,783* 0.817* 0.686* 0.945*
0.715*
19,92±
EEBS 50 mg/Kg 34,00± 29,70± 24,28 ± 13,67±
1.214* 9,12± 1.904*#
bb 0.372* 0.896* 0.884*# 1.272*#
#
15,39±
EEBS 100 mg/Kg 30,33± 26,88± 21,65± 10,47±
0.914* 4,73± 0.885*#
bb 0.070* 0.449 1.014*# 0.431
#
14,53±
EEBS 200 mg/Kg 29,50± 25,43± 20,23± 8,73 ±
1.063* 3,67± 1.729*#
bb 0.288* 0.463* 0 .745* 1.547*#
#
23,38
31,84±
FNHBS 50 mg/Kg 37,35± 28,21± ± 16,95±
1.138* 13,15± 1.475
bb 0.837* 0.861* 1.233* 0.878
#
#
20,67±
FNHBS 100 mg/Kg 36,28± 31,22 ± 26,56± 13,92± 11,15±1.535*
1.354*
bb 0.301* 0.679* 0.520* 1.484*# #
#
33,54± 28,04± 19,16±
FNHBS 200 mg/Kg 24,08± 11,74±
1.055* 1.488* 1.276* 8,52± 2.374*#
bb 1.443*# 2.057*#
# # #
FEABS 50 mg/Kg 35,38± 30,75± 26,18± 21,48± 14,70± 7,83± 1.635
bb 0.877* 0.383* 0.737* 0.823* 1.319
FEABS 100 mg/Kg 32,53± 27,74± 23,21± 17,59± 12,04± 6,70± 1.003
bb 0.744* 0.819* 1.273* 0.749* 1.125
FEABS 200 mg/Kg 31,79± 26,96± 21,05± 16,25± 9,41±
5,55± 0.598*
bb 0.696* 0.597* 0.518* 0.675* 0.291*
38,07± 32,91± 29,15± 22,58± 15,75±
FSBS 50 mg/Kg bb 12,52± 0.938*
0.706* 0 .597* 0.539* 0.625* 0.616*
FSBS 100 mg/Kg 33,70± 28,59± 23,65± 20,33± 12,67± 8,18± 1.228
bb 0.297* 0.92* 0.818* 1.030* 1.127
18,06±
FSBS 200 mg/Kg 31,44± 27,28± 22,09± 11,81±
1.275* 7,23± 0.873
bb 0.604* 0.95* 1.439*# 1.487*#
#

132
 Rata-rata persen radang (menit ke-)
kelompok
210 240 270 300 330 360
41,07± 45,46± 50,59± 54,65± 60,93± 62,68 ±
CMC Na
1.166# 1.347# 1.289# 0.705# 1,149# 2,067#
29,07± 24,95± 19,55± 13,26± 7,33± 2,93 ±
Na Diklofenak
1.426* 1.414* 1.767* 1.448* 1.404* 0,723*
13,67±
34,00 ± 29,70± 24,28± 19,92± 9,12 ±
EEBS 50 mg/Kg bb 2,164*
1.663*# 1.995*# 1.437*# 2.107*# 1,068*#
#
30,33± 26,88± 21,65± 15,39± 10,47± 4,73 ±
EEBS 100 mg/Kg bb
0.547*# 0.681 0.824* 0.663* 0,908 0,838
8,73±
29,50± 25,43± 20,23± 14,53± 3,67 ±
EEBS 200 mg/Kg bb 1,052*
1.347*# 1.174*# 0.707* 0,506* 0.691
#
23,38±
37,35± 31,84± 28,21± 16,95± 13,15 ±
FNHBS 50 mg/Kg bb 1,067*
1.452*# 0.984*# 0.911*# 0,660* 1,207*#
#
FNHBS 100 mg/Kg 36,28± 31,22± 26,56± 20,67± 13,92± 11,15 ±
bb 1.349*# 0.732 0.587 0,056 0,745 0,877
19,16± 11,74±
FNHBS 200 mg/Kg 33,54± 28,04± 24,08± 8,52 ±
2,543* 1,106*
bb 2.725*# 2.788*# 2.961*# 1,286*#
# #
35,38± 30,75± 26,18± 21,48± 14,70± 7,83 ±
FEABS 50 mg/Kg bb
1.684*# 0.852* 0.878* 0,884* 0,491 1,108
12,04±
32,53± 27,74± 23,21± 17,59± 6,70 ±
FEABS 100 mg/Kg bb 1,059*
0.899* 0.694* 1.111*# 0,925* 1,261*#
#
31,79± 26,96± 21,05± 16,25± 9,41± 5,55 ±
FEABS 200 mg/Kg bb
0.844* 1.038 1.556 0,811 0,971 0,736
38,07± 32,91± 29,15± 22,58± 15,75± 12,52 ±
FSBS 50 mg/Kg bb
1.113*# 1.437*# 1.868*# 0,759* 0,899 1,184*#
20,33± 12,67 ±
33,70± 28,59± 23,65± 8,18 ±
FSBS 100 mg/Kg bb 0,874* 1,377*
1.284*# 1.113*# 1.472*# 1,470*#
# #
18,06±
31,44± 27,28± 22,09± 11,81 ± 7,23 ±
FSBS 200 mg/Kg bb 1,564*
0.573* 0.706* 1.235*# 0,965 1,287*#
#
Keterangan: * (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol negative CMC 0,5 %),
# (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol positif Na.Diklofenak 2,25
mg/kg). EEBS =(Ekstak etanol kulit batang sikkam), FNHBS =(Fraksi n-
heksana kulit batang sikkam), FEABS= (Fraksi etil asetat kulit batang
sikkam).FSBS (Fraksi sisa kulit batang sikkam).

133
 Gambar 4.8 Grafik perlakuan terhadap persen radang

Berdasarkan hasil ini dapat disimpulkan bahwa FEABS dengan dosis 50

mg/kgbb, EEBS 50 mg/kgbb, FNHBS 50, 100 dan 200 mg/kgbb memiliki

aktivitas antiinflamasi namun tidak potensial dalam menekan edema yang terjadi

pada kaki hewan uji, ditunjukkan dari hasil pengukuran yang berbeda secara

signifikan terhadap kontrol positif pada tiap pengukuran.

Kelompok FEABS 100 dan 200 mg/kgbb, EEBS 100 dan 200 mg/kgbb

menunjukkan adanya perbedaan efek terhadap kontrol negatif dan sebaliknya

tidak menunjukan adanya perbedaan signifikan terhadap kontrol positif. Diantara

semua kelompok uji dosis FEABS 200 mg/kg bb memiliki aktivitas antiinflamasi

yang paling potensial dalam menekan edema yang terjadi pada kaki hewan uji,

134
ditunjukkan dari hasil pengukuran yang hampir sama dengan natrium diklofenak

2,25 mg/kg sebagai kontrol positif.

Untuk menilai kemampuan inhibisi radang dapat dilihat pada tabel

berikut:

Tabel 4.11 Pengaruh Perlakuan Terhadap Inhibisi Radang

Persen inhibisi radang (menit ke-)

Kelompok
30 60 90 120 150 180
52,64±11,80 51,94± 53,11± 43,74± 36,20± 27,89±
Na Diklofenak
* 9,74* 8,25* 6,68* 4,32* 3,96*
28,55± 29,57± 17,87± 17,62± 13,06± 13,56±
EEBS 50 mg/Kg bb
9,01*# 8,26* 5,75*# 6,19* 3,70* 3,08*
29,97± 40,09± 39,02± 38,51± 25,92± 21,90±
EEBS 100 mg/Kg bb
9,30*# 8,12* 9,73* 6,30* 1,80*# 3,65*
35,15± 42,20± 47,34± 41,38± 31,94± 25,64±
EEBS 200 mg/Kg bb
7,66*# 5,46*# 4,16*# 5,06* 6,40*# 6,41*#
39,82± 22,78± 15,07± 10,552± 6,99± 7,58±
FNHBS 50 mg/Kg bb
16,15*# 5,51*# 5,38*# 2,52*# 2,36*# 1,95*#
27,66± 25,77± 18,99± 22,39± 17,94± 13,14±
FNHBS 100 mg/Kg bb
4,17*# 6,41*# 4,86*# 6,26* 5,78* 2,82*
64,98± 44,45± 33,63± 27,19± 21,01± 18,27±
FNHBS 200 mg/Kg bb
9,16*# 11,61*# 6,65* 7,83* 7,68*# 6,19*#
28,82± 29,20± 16,49± 14,24± 10,20± 11,83±
FEABS 50 mg/Kg bb
13,62*# 4,49*# 5,08*# 5,06*# 4,45* 3,86*
45,47± 40,42± 29,85± 28,38± 23,75± 18,01±
FEABS 100 mg/Kg bb
11,69 7,42* 9,87* 7,13* 6,01*# 3,98*
32,68± 39,16± 37,31± 32,48± 29,08± 20,67±
FEABS 200 mg/Kg bb
13,04 10,25* 6,42* 4,05*# 3,21*# 2,25*#
42,70± 27,90± 16,28± 9,98± 6,86± 5,26±
FSBS 50 mg/Kg bb
7,34 8,29* 5,43*# 3,53*# 1,30*# 1,91*#
32,50± 26,67± 21,92± 22,79± 8,69± 13,54±
FSBS 100 mg/Kg bb
6,83 9,13* 4,17*# 2,88*# 4,27* 3,49*#
15,66
24,80± 32,42± 27,23± 25,66± 21,07±
FSBS 200 mg/Kg bb ±
11,78 10,53* 8,51* 7,40 6,52*#
3,24*

Kelompok Persen inhibisi radang (menit ke-)

135
 210 240 270 300 330 360
28,70± 44,71± 61,23± 75,81± 88,00± 95,39±
Na Diklofenak
5,37* 4,28* 3,63* 2,49* 2,27* 1,04*
17,21± 34,68± 52,08± 63,53± 77,60± 85,51±
EEBS 50 mg/Kg bb
3,23*# 3,70* 2,08*# 3,88*# 2,69* 1,47*
25,94± 40,55± 57,05± 71,80± 82,75± 92,27±
EEBS 100 mg/Kg bb
2,41*# 3,00*# 2,16*# 1,33*# 1,61*# 1,60*#
27,83± 43,72± 59,76± 73,37± 85,63± 94,04±
EEBS 200 mg/Kg bb
4,36* 3,68*# 2,46*# 1,15*# 1,78*# 1,24*
9,94 ± 29,81± 44,08± 57,14± 72,15± 78,97±
FNHBS 50 mg/Kg bb
3,50*# 2,41*# 2,36*# 2,27* 1,10*# 1,90*
11,47± 30,94± 47,28± 62,16± 77,13± 82,25±
FNHBS 100 mg/Kg bb
4,45*# 3,43*# 2,25*# 0,51*# 1,22*# 1,22*
20,32± 37,57± 51,94± 64,97± 80,70± 86,44±
FNHBS 200 mg/Kg bb
6,91* 7,76*# 6,57*# 4,49*# 1,86*# 2,02*
13,55± 32,14± 48,12± 60,64± 75,82± 87,27±
FEABS 50 mg/Kg bb
4,91* 2,64*# 2,27*# 1,92* 1,02*# 2,20*#
20,42 ± 38,62± 53,82± 67,79± 80,15± 89,08±
FEABS 100 mg/Kg bb
3,80*# 3,21* 3,24* 1,75* 2,03* 2,31*#
22,33 ± 40,51± 58,17± 70,23± 84,48± 90,96±
FEABS 200 mg/Kg bb
3,05*# 2,76*# 3,55* 1,57* 1,75*# 1,50*
8,25± 27,38± 42,28± 58,65± 74,10± 79,90±
FSBS 50 mg/Kg bb
3,41*# 3,63* 3,81* 1,54* 1,65 2,46
17,88± 36,79 53,00± 62,74± 79,09± 86,81±
FSBS 100 mg/Kg bb
2,61*# ± 3,53* 3,67* 1,91*# 2,51* 1,88*
23,27± 39,79± 56,27± 67,01± 80,60± 88,58±
FSBS 200 mg/Kg bb
2,02*# 2,41*# 2,54*# 2,67*# 1,62*#

136
 Berdasarkan hasil dari perhitungan persen inhibisi edema dan setelah

dilakukan uji statistik didapatkan hasil yang sama terhadap nilai edema yang

terjadi. Persen inhibisi dari natrium diklofenak 2,25 mg/kg sebagai kontrol

menjadi acuan standar dalam melihat potensi senyawa obat dalam menekan

radang yang akan terjadi setelah hewan uji diinduksi karagenan.

Hasil dari uji statistik menunjukkan bahwa kelompok EEBS 50,100 dan

200 mg/kgbb, FNHBS 50,100 dan 200 mg/kgbb, FEABS 50 dan 100 mg/kgbb,

menunjukkan adanya aktivitas dalam menekan edema yang terjadi, namun kurang

dapat mendekati nilai dari natrium diklofenak 2,25 mg/kg pada tiap pengukuran.

Kelompok FEABS 200 mg/kg bb menunjukkan hasil yang baik, dimana

kelompok ini mampu mendekati nilai dari natrium diklofenak 2,25 mg/kg

berdasarkan dari uji statistik yang menyatakan bahwa hasil kelompok ini tidak

berbeda secara signifikan terhadap kontrol positif.

Hasil penelitian ini mendukung penelitian sebelumnya yang dilakukan

(Rajbongshi, et al., 2014) bahwa daun sikkam memiliki efek antiiflamasi. Selain

137
itu sikkam juga berpotensi menjadi obat antioksidan sebagaimana yang sudah

dibuktikan (Jambak, 2019).

Adanya efek antiinflamasi diduga karena aktivitas metabolit sekunder

yang terdapat dalam kulit batang sikkam yaitu, flavonoid, steroid dan tannin. Hal

ini didukung dengan hasil uji penapisan Fitokimia yang menunjukkan adanya

golongan senyawa tersebut. Sebagaimana juga diungkapkan (Hanani, 2016)

bahwa senyawa kimia ini dapat diperoleh dengan ekstraksi menggunakan pelarut

etanol. Mekanisme flavonoid dapat menjadi antiinflamasi juga sudah diteliti oleh

(Pradana,et al.,2016). Banyak tumbuhan yang mengandung flavonoid pada

akhirnya teruji memiliki aktivitas antiinflamasi seperti pada daun marbosi-bosi

(Nasution, 2019), daun sambung nyawa (Harnis, 2018), dan buah buni (Lintang,

2019).

Mekanisme antiinflamasi yang dilakukan oleh flavonoid dapat melalui

beberapa jalur yaitu:

1. Penghambatan aktivitas enzim COX dan/atau lipooksigenase, karena

penghambatan COX atau lipoooksigenase. Penghambatan jalur COX dan

lipooksigenase ini secara langsung juga menyebabkan penghambatan

biosintesis eikosanoid dan leukotrien, yang merupakan produk akhir dari jalur

COX dan lipooksigenase (Nijveldt et al., 2001).

2. Penghambatan akumulasi leukosit, dimana efek antiinflamasi flavonoid dapat

disebabkan oleh aksinya dalam menghambat akumulasi leukosit di daerah

inflamasi. Menurut Nijveldt et al., (2001), pada kondisi normal leukosit

bergerak bebas sepanjang dinding endotel. Selama inflamasi, berbagai

mediator turunan endotel dan faktor komplemen mungkin menyebabkan

138
 adhesi leukosit ke dinding endotel sehingga menyebabkan leukosit menjadi

immobile dan menstimulasi degranulasi netrofil. Nijveldt et al., (2001)

menyebutkan bahwa pemberian flavonoid dapat menurunkan jumlah leukosit

immobil dan mengurangi aktivasi komplemen sehingga menurunkan adhesi

leukosit ke endotel dan mengakibatkan penurunan respon inflamasi tubuh.

3. Penghambatan pelepasan histamin. Efek antiinflamasi flavonoid didukung

oleh aksinya sebagai antihistamin. Histamin adalah salah satu mediator

inflamasi yang pelepasannya distimulasi oleh pemompaan kalsium ke dalam

sel.
-
Mekanisme flavonoid dalam menghambat proses terjadinya inflamasi

melalui dua cara, yaitu dengan menghambat permeabilitas kapiler dan

menghambat metabolisme asam arakidonat dan sekresi enzim lisosom dari sel

neutrofil dan sel endothelial (Kurniawati, 2005). Flavonoid terutama bekerja pada

endothelium mikrovaskular untuk mengurangi terjadinya hipermeabilitas dan

radang. Beberapa senyawa flavonoid dapat menghambat pelepasan asam

arakhidonat dan sekresi enzim lisosom dari membran dengan jalan memblok jalur

siklooksigenase. Penghambatan jalur siklooksigenase dapat menimbulkan

pengaruh lebih luas karena reaksi siklooksigenase merupakan langkah pertama

pada jalur yang menuju ke hormon eikosanoid seperti prostaglandin dan

tromboksan (Fitriyani, dkk, 2011) Selain flavonoid, diketahui senyawa

teiterpenoid dan saponin diduga berperan dalam sebagai antiinflamasi (Pramono,

2005).
-
Aktivitas antiinflamasi saponin dari berbagai tumbuhan sudah banyak

dilaporkan namun belum banyak yang diketahui tentang mekanisme antiinflamasi

139
yang dilakukan oleh saponin secara pasti. Saponin terdiri dari steroid atau gugus

triterpen (aglikon) yang mempunyai aksi seperti detergen. Mekanisme

antiinflamasi yang paling mungkin adalah diduga saponin mampu berinteraksi

-
Saponin sebagai anti inflamasi, saponin diduga berinteraksi dengan

banyak membran lipid, seperti fosfolipid yang merupakan prekursor prostaglandin

dan mediator inflamasi lainnya. Hal ini didukung oleh penelitian sebelumnya oleh

(Hidayati, dkk, 2008) yang membuktikan bahwa ekstrak saliara yang mengandung

saponin memiliki efek anti inflamasi terhadap tikus yang diinduksi karagenan.

4.6 Hasil Analisis Fraksi Etilasetat Kulit Batang Sikkam Secara

Kromatografi Kertas
Hasil analisis fraksi etilasetat dengan kromatografi kertas menggunakan

berbagai macam fase gerak yaitu BAA (n-butanol: asam asetat: air = 4:1:5), HCl

1% dan asam asetat 15%, dengan fase diam kertas Whatman No. 1 dan penampak

bercak yaitu AlCl3,. Hasil analisis KKt diperoleh dua, tiga dan empat bercak

(noda) dengan semua fase gerak yang memberikan warna ungu, kuning, hijau

lemah dan Hijau kuning, setelah dilakukan penyemprotan dengan AlCl3. Harga Rf

dari masing-masing perbandingan fase gerak dapat dilihat pada Tabel 4.3 dan pola

kromatogram dapat dilihat pada Lampiran 14. Dari hasil yang diperoleh bahwa

senyawa bersifat non polar dilihat dari kromatogram dengan fase gerak BAA

(4:5:1) memiliki RF yang paling tinggi dibandingkan dengan fase gerak HCL 1%

dan asam asetat 15%

140
Tabel 4.3 Data hasil analisis kromatogram fraksi etilasetat kulit batang sikkam

Setelah Penyemprotan
No
Fase Gerak Harga Rf
.
AlCl3
0,30
HCl 1% Kuning lemah
1 0,50
0,19
2 Asam asetat 5 % 0,38 Ungu
0,50
0,28
0,46
3 BAA (4:1:5) 0,75 Kuning
0,85

4.7 Hasil Isolasi Senyawa Flavonoid secara Kromatografi Kertas Preparatif

Pemisahan dilakukan terhadap senyawa flavonoid dengan KKt preparatif,

untuk mendapatkan flavonoid dalam jumlah yang lebih banyak menggunakan fase

gerak BAA, fase diam kertas whatman No. 1 dan sebagai penampak bercak

digunakan AlCl3. Hasil KKt preparatif diperoleh 3 pita.

Tabel 4.4Hasil KKt preparatif dari fraksi etilasetat Kulit batang sikkam

Isolat Harga Rf Sinar lampu UV 336 nm

P1 0,5 Ungu
P2 0,71 Hijau kuning
P3 0,85 Hijau kuning
keterangan: Fase diam = kertas whatmann No.1 P1 = Pita 1; P2 = Pita 2,
P3 = Pita 3
4.8 Hasil Uji GolonganIsolat

Uji golongan isolat dilakukan dengan kromatografi kertas satu arah dan

kromatografi dua arah.

141
4.8.1 Uji golongan isolat secara kromatografi kertas satu arah

Isolat yang diperoleh selanjutnya dilakukan uji golongan dengan KKt satu

arah menggunakan fase diam kertas Whatman No.1 dan fase gerak BAA, HCl 1%,

dan asam asetat glasial 15% hasilnya menunjukkan satu bercak yang dapat

dianggap tunggal. Harga Rf dapat dilihat pada tabel 4.5.

Pada tabel 4.5 bahwa golongan senyawa flavonoid yang diisolasi dapat

dikatakan telah tunggal, karena hasil kromatografi kertas menunjukkan hasil satu

noda. Hasil kromatografi lapis tipis satu arah dapat dilihat pada Lampiran 16.

Tabel 4.5 Data hasil KKt satu arah isolat flavonoid

N Penampak noda dan Harga Rf

Isolat
o AlCl3 Rf UV Rf
1 Kuning
P3 0,71 Ungu 0,71

keterangan: Fase diam = kertas whatman No.1

Fase gerak = BAA; P3 = Pita 3

4.8.2 Uji golongan isolat secara kromatografi kertas dua arah

Isolat yang diperoleh di uji golongannya dengan KKt dua arah memakai

dua fase gerak yang berbeda. Fase gerak pertama dengan asam asetat 15 % dan

fase gerak kedua BAA. Kromatogram KKt dua arah menunjukkan satu bercak

(noda) warna bercak dengan sinar UV tanpa uap NH3: fluoresensi hijau muda dan

setelah diberi NH3: fluoresensi hijau kuning, sehingga dapat dikatakan bahwa

senyawa flavonoid yang diisolasi telah tunggal.

142
4.9 Hasil Karakteristik Isolat

Karakteristik isolat diuji menggunakan spektrofotometri ultraviolet dan

spektrofotometri inframerah.

4.9.1 Karakteristik isolat dengan spektrofotometriultraviolet

Gambar 4.3 Hasil spektrofotometri ultraviolet

Hasil analisis spektrofotometer Ultraviolet dengan pelarut metanol

memberika panjang gelombang maksimum(λ maks pada panjang gelombang

334,6 nm pada pita pertama (berada pada rentang serapan 330-360 nm)dan pita

143
kedua pada panjang gelombang 266,2 nm(berada pada rentang panjang

gelombang 250-280 nm)menunjukkan golongan flavonoid jenis flavonol. Hasil ini

diperkuat dengan informasi warna bercak isolat dari data Kromatografi Kertas

(KKt), pada hasil yang diperoleh dengan sinar UV tanpa NH 3 memberikan warna

kuning tipis dan dengan NH3 memberikan fluoresensi hijau-kuning, hal ini juga

menunjukkan bahwa adanya golongan flavonoid jenis flavonol (Markham, 1988).

4.9.2 Karakteristik isolat dengan spektrofotometri inframerah

Hasil analisis spektrofotometer infra merah dari kristal hasil isolasi

menghasilkan pita-pita serapan pada daerah bilangan gelombang yang dapat

dilihat pada Gambar 4.5

4
Pada data spektrum inframerah, terlihat bahwa pola spekturm senyawa

yang diperoleh menunjukkan serapan rendah dengan intensitas lemah pada daerah

-1
bilangan gelombang sebesar 3205,69 cm , yang diduga adalah serapan gugus

-OH, dugaan ini diperkuat oleh adanya pada daerah bilangan gelombang 1107.14

-1
cm dinyatakan sebagai gugus C-O yang dinyatakan sebagai alkohol/phenol. Pita

-1
serapan pada daerah gelombang 2924,09 cm diduga adalah C-H alifatik, dugaan

-1
ini diperkuat oleh adanya serapan pada bilangan gelombang 1396,46 cm yang

menunjukkan pula C-H3. Pita serapan pada daerah bilangan gelombang 1716,65

-1
cm adalah ciri khas adanya C=O. Pita serapan pada daerah bilangan gelombang

-1 -1
1716,65 cm dan 1631.78 cm menunjukkan adanya C=C.

144
 Gambar 4.4. Gambar hasil spetrofotometri IR

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan:

a. Ekstrak etanol, fraksi n-heksana dan fraksi etil asetat dapat menurunkan

volume edema pada kaki tikus yang diinduksi dengan karagenan

b. Fraksi etil asetat dengan dosis 100 mg/kg bb dimulai menit ke 240 hingga

menit ke 360 mempunyai aktivitas antiinflamasi yang paling efektif

terhadap menurunkan volume edema pada kaki tikus yang diinduksi dengan

karagenan.

c. Hasil identifikasi secara spektrofotometri ultraviolet dengan pelarut metanol

memberikan λ maks 283,8nm pada pita I dan pada bahu 310 nm pada pita

II,diperkirakan golongan senyawa flavonoid. Hasil pengukuran

145
 spektrofotometriIR menunjukkan adanya gugus –OH, C-O, C-H alifatik,

C=C, CH3 dan C=O.

5.2 Saran

Berdasarkan kesimpulan penelitian ini, disarankan pada peneliti selanjutnya:

a. Untuk melakukan uji toksisitas terhadap ekstrak dan fraksi dari Kulit batang

sikkam

b. Untuk melakukan analisis spektroskopi massa dan NMR agar diperoleh data-

data yang lebih mendukung untuk menentukan struktur seyawa flavonoida

yang diperoleh dari hasil isolasi.

DAFTAR PUSTAKA

Ajib, M. dan Khan, Z.U. 2012. Bischofia javanic: A New Record to The Flora of
Pakistan. Pakistan: Biologia. 58(1,2): 179-183.

Amutha,D., Shanthi, S., dan Mariappan, V. 2012. Antiflammatory Effect Of

Tarenna asiatica in Carrageenan Induced Lung Inflammation.
International journal Of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences Vol 4,
Supp l5.

Anonim. 2017. Sikkam. http://news.detik.com/berita/764891/sikkam-tumbuhan-

langka-makanan-sisingamangaraja-xii. Diakses tanggal 10 Oktober 2016.

Bachheti, R.K., Indra, R., dan Archana, J. 2013. Chemical Composition, Mineral
and Nutritional Value of Wild Bischofia javanica seed. Intenasional Food
Research Journal. 20(4): 1747-1751.

Depkes RI. 1979. Farmakope Indonesia, Edisi ketiga. Jakarta: Departemen

Kesehatan RI. Hal.81-82.

Depkes R.I. 1995. Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Ditjen POM. Hal.
300-306.

Ditjen POM. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan
Pertama. Jakarta: Depkes RI. Hal. 9-11.

146
Faigin, R. 2001. Meningkatkan Hormon Secara Alami. Natural Hormron
Enhancement. Penterjemah. Sugeng Hariyanto. Edisi I. Cetakan I. Jakarta:
PT. Raja Grafindo Persada. Hal. 89-91.

Furst, D.E., dan Munster, T. 2002. Obat-obat Antiinflamasi Nonsteroid, Obat-

obbat antireumatik Pemodifikasi Penyakit, Analgesik Nonopioid dan
Obat-obat untuk Pirai. Dalam: Farmakologi Dasar dan Klinik. Bertram G.
Katzung. Jakarta: Salemba Medika. Hal: 449-501.

Goodman , G.A. 1970., dalam Parmar, N.S., dan Gosh, M.N. 1978. Anti-
Inflammatory Activity of Gossypin A Bioflavonoid Isolated from
Hibiscus vitifolius Linn. Ind. J. Pharmac., 10(4): 277-293.

Hanani, E. 2016. Analisis Fitokimia. Cetakan Pertama. Jakarta: Penerbit Buku

Kedokteran EGC. Hal. 10-12 dan 103.

Harbone, J.B. 1996. Metode Fitokimia. Terbitan Kedua. Penerjemah: Kosasih

Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 152-153.

Hariana, A. 2007. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Seri I. Jakarta: Penebar

Swadaya. Hal.10.
Indra R., Bachheti, R.K., dan Archana, J. (2013). Chemical Composition, Mineral
and Nutritional Value of Wild Bioschofia javanica Seed. International
Food Research Journal 20(4): 1747-1751.

Katzung, B. G. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik. Buku II. Edisi 8. Jakarta:
Penerbit Salemba Medika. Hal. 449 – 450.

Kundu, M., Schmidt, L.H., dan Jorgensen. M.J. 2012. Seed Leaflet Biochofia
javanica Blume. Seed Leaflet. No. 157.

Lingadurai, S., Lila, K.N., Prasanna, K.K., Shila E.B., dan Rajan, V.J. (2007).
Antiinflammatory and Antinociceptive Activities of Methanolic Extract of
Leaves of Bioschofia javanica Blume on Experimental Animals. Asian
Journal of Chemistry. Vol. 19(7): 5150-5156.

Lingadurai, S., Sama R., Rajan V.J., dan Lila K.N. 2011. Antileukemic Activity
of the Leaf Extract of Bischofia javanica Blume on Human Leukemic Cell
Lines. Indian Journal of Pharmacology. Vol 43(2):143.

Markham. K.R 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Penerjemah Kosasih

padmawinata Bandung : penerbit ITB. Hal. 15 -19,42.

Mursito, B. 2003. Ramuan Obat Tradisional Untuk Pelangsing Tubuh cetakan 1.

Jakarta:Penebar Swadaya. Hal 30-32.

147
Mycek, M.J., Harvey, R.A., dan Champe, C.C. 2001. Farmakologi Ulasan
Bergambar. Lippincottt”s Illustrated Reviews; Pharmakology,
Penerjemah, Azwar Agus. Edisi kedua. Jakarta: Widya Medika.

Navely Levya-Lopez, Erick P. Gutierrez-Grijalva, Dulce L. Ambriz-Perez and J.

Basilio Heredia. 2016. Flavonoids as Cytokine Modulators A Possible
Therapy For Inflammation-Related Diseases. International Journal
Molecular sciences. Hal 2

Pradhan K.B. dan Badola K.H. 2009. Ethnomedicinal Plant Use by Lepcha Tribe
of Dzongu Valley, Bordering Khangchendzonga Biosphere Reserve, in
North Sikkim India. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine. 4(22):
1-18.

Price, S.A. and Wilson, L.M. (1995). Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-proses
Penyakit. Edisi 4. Cetakan pertama. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran
EGC. Hal. 35-50.

Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Hal. 323,
328- 329, 353

Rajbongshi, P.P., Kamaruz, Z., Sangeeta, B., dan Simanti, D. 2014. A Review on
Traditional Use and Phytopharmacological Potential of Bischofia javanica
Blume. International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and
Research. 24(2): 24-29.

Rustam, Erlina, Atmasari,I dan Yanwirasti, 2007. Efek Antiinflamasi Ekstrak

Etanol Kunyit (Curcuma domestica Val) Pada Tikus Putih Jantan Galur
Wistar. Jurnal Sains dan teknologi Farmasi Vol 12

Sastrohamidjojo, H. 1991. Kromatografi. Yogyakarta : Penerbit Liberty. Hal 22-

36.

Seed Leaflet. 2012. Bischofia javanica Blume. Copenhagen Forest & Landscape
Denmark. 157.

Subagyo, R. L. 2004. Pemilihan NSAID Untuk Berbagai Situasi Klinik. [on line].
http://www.pabmi.com. diakses pada 29 juni 2017

Tabassumaj Khan, Anjaria Jeet K, Dedhia Vanish, Gohel Anjali K. 2015.

Bioactivity Guided Fractination and Antiinflammatory activity of
Acacia Nilotica Pods. International Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences Vol 7

148
Tambunan, S. 2014. Uji Antidiare Ekstrak Etanol Kulit Batang Sikkam
(Bioschofia javanica Blume) dengan Metode Defekasi pada Tikus. Skripsi.
Program Studi Farmasi. Fakultas Farmasi. Medan: USU. Hal. i dan 32.

Tan, H.T., dan Rahardja, K. 2007. Obat-Obat Penting (Khasiat, Penggunaan, dan
Efek-Efek Samping). Edisi 6. Jakarta: Elex Media Komputindo. Hal. 327-
330.

Tjay, T.H., dan Rahardja, K. 2007. Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan dan
Efek-efek Samping. Edisi V. Jakarta: Penerbit PT. Elex Media
Komputindo. Hal. 48-49.

Thurnham, D.I., dan Mc. Cabe, G.P. 2012. Influence of Infection and
Inflammation on Biomarkers Nutritional Status with an Emphasis on
Vitamin A and Iron. In: World Health Organization Report: Priorities in
the assessment of vitamin A and iron status in populations, Panama City
15-17

Tyler, E., Brady, L.R., dan Robber, J.E. 1976. Pharmocognosy. Edisi ke-9.
Philadelphia: Lea and Febiger Publisher. Hal.197-200.

Umarudin, R.S dan Ari, Y. 2012. Efektivitas Ekstrak Tanin Seledri terhadap Profil
Hiperkolesterolemia Lipid Tikus Putih. Unnes Journal of Life Science.
1(2): 79.

Voigth R. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Edisi ke -5. Diterjemahkan

oleh Dr. Soendani Noerono. Gajah Mada University Press. Yogyakarta.
Hal 45

Vogel, H.G., Bernward, A.S., Jurgen, S., Gunter, M., dan Wolfgang, F.V. 2008.
Drug Discovery and Evaluation Pharmacological Assay. Edisi Kedua.
New York: Springer-Verlag Berlin Heidelberg. Hal. 759-760, 767-768.

Winda Oktiwilianti. 2015.Uji Aktivitas Antiinflamasi dari Ekstrak Etanol Daun

Asam Jawa (Tamarindus Indica L) Terhadap Tikus Winstar
Jantan.Prosiding Penelitian SpeSIA Unisba 2015, halaman 111

World Health Organization. 1998. Qualiity Control Methods For Medical Plant
Materils. Journal of WHO. Switzerland. Pages.25-28.

Yang, Z. D., Yan J.S., Shu Z.Y., dan Xia L.Z. 2015. Interaction Between
Bischofia javanica Blume (Euphorbiales, Euphorbiaceae) and Coloana
cinerea Dwarakowska (Homoptera: Cicadellidea): A Protective Enzyme
Perspective. J. Anim. Plant Sci.25(5):2015.

Yuniarti, T. 2008. Ensiklopedia Tanaman Obat Tradisional. Cetakan pertama

Yogyakarta: Media Presindo.

149
Lampiran 1. Hasil identifikasi sampel

150
Lampiran 2. Gambar tumbuhan sikkam (Bischofia javanica Blume)

151
 pohon sikkam

daun sikkam pohon sikkam

Lampiran 3. Gambar simplisia kulit batang sikkam (Bischofia javanicaBlume)

152
 Simplisia batang sikkam

Lampiran 4. serbuk kulit batang sikkam

Serbuk simplisia kulit batang sikkam

Lampiran 5. BaganPembuatan ekstrak Etanol kulit batang sikkam

153
 serbuk simplisia 1,2 kg
dimaserasi dengan etanol 80%
hingga serbuk terendam
dibiarkan selama 5 hari terlindung
dari cahaya sambil diaduk sesekali

disaring

maserat ampas

dicuci dengan etanol 80%

dan dibiarkan selama 2 hari

Maserat Ampas
Diuapkan dengan
rotary evaporator

Ekstrak etanol kental

dikeringkan dengan
freeze dryer

Ekstrak kering 112

Lampiran 6. Bagan pembuatan fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi

sisakulit batang sikkam

Ekstrak etanol kulit batang sikkam

154
 Ditambahkan dengan etanol 80%
dan aquadest
Dimasukkan dalam corong pisah
Diekstraksi dengan n-heksan
Dikocok dan didiamkan
sampaiterbentuk dua lapisan
dandipisahkan (negatif terhadap
LB)

Fraksi air Fraksi n-heksan

ditambahkan dengan etilasetat Dikumpulkan

Dipekatkandeng
an rotary
Dikocok dan didiamkan
sampai
terbentuk dua lapisan
dan dipisahkan (negatif
terhadap FeCl3) Fraksi n-heksan kental

Fraksi air Fraksi etilasetat

Dikumpulkan Dikumpulkan

Dipekatkan dengan Dipekatkan dengan

Rotary evaporator Rotary evaporator

Fraksi airkental Fraksi etilasetatkental

Lampiran 7. Perhitungan hasil karakterisasi serbuk simplisia dan ekstrak etanol

kulit batang sikkam
1. Penetapan kadar air

155
 Berat Volume Awal Volume Akhir
No
simplisia ekstrak simplisia ekstrak simplisia ekstrak
1 5,0025 5,0048 2,0 2,0 2,2 2,4
2 5,0022 5,0044 2,2 2,4 2,5 2,8
3 5,0025 5,0050 2,5 2,8 2,9 3,1

Kadar air simplisia:

18,61% + 16,66% + 17,49 %

% Kadar sari yang larut dalam air = =17,49%
3
Kadar air ekstrak:

% Kadar air rata-rata = 7,99% + 7,99% + 5,99% = 7.32%

3

156
 Lampiran 7.(Lanjutan)

2. Penetapan kadar sari larut air

Berat (g) Berat cawan kosong (g) berat cawan sari (g)
No
simplisia ekstrak simplisia ekstrak simplisia ekstrak
1 5,0047 5,0047 49,5950 51,9458 49,7813 52,2816
2 5,0042 5,0042 48,0379 49,9262 48,2047 50,2347
3 5,0022 5,0039 49,6782 46,2146 49,8504 46,5461

Kadar sari larut air simplisia:

% Kadar sari yang larut dalam air = 18,61% + 16,66% + 17,49 % =17,49%
3

Kadar sari larut airekstrak:

% Kadar sari yang larut dalam air = =32,97 %

157
 33,54% + 32,07% + 33,12%
3

Lampiran 7.(Lanjutan)

berat cawan kosong

berat (g) berat cawan sari (g)
No (g)
simplisia ekstrak simplisia ekstrak simplisia ekstrak
1 49,7003 49,8267
2 49,1459 48,2802
3 49,8025 46,5895
Penetapan kadar sari larut etanol

Kadar sari larut etanol simplisia:

% Kadar sari yang larut

dalam etanol rata-rata= 11,59% + 11,65% + 12,28%
3

Kadar sari larut etanol ekstrak:

158
 % Kadar sari yang
= 23,27% + 23,98% + 22,52 % = 23,26 %
larutdalam etanol rata-rata
3

3. Penetapan kadar abu total

berat (g) berat abu (g)
No.
simplisia Ekstrak simplisia ekstrak
1. 2,0235 2,0812 0,0961 0,0095

2. 2,0128 2,0352 0,0776 0,0118

3. 2,0132 2,0458 0,0731 0,0083

Kadar abu total simplisia:

% Kadar abu total rata-rata

= 4,74% + 3.85% + 3,63 %
3

159
 Kadar abu total ekstrak:

% Kadar abu total rata-rata = 0,48%

= 0,45% + 0,57% + 0,40%

3

berat (g) berat abu (g)

No.
simplisiaEkstrak Simplisia ekstrak
1. 2,0235 2,0812 0,1306 0,0001

2. 2,0128 2,0352 0,1226 0,0002

3. 2,0132 2,0476 0,1140 0,0003

4. Penetapan kadar abu tidak larut asam

Kadar abu tidak larut asam simplisia:

160
% Kadar abu tidak larut asam rata-rata = 6,45% + 6,09% + 5,66% = 6,06%
3

Kadar abu tidak larut asamekstrak:

% Kadar abu tidak larut asam rata-rata = 0,01% + 0,01% + 0,01% = 0,01%
3
Lampiran 8.Tabel konversi dosis hewan dengan manusia dan volume
maksimallarutan sediaan uji yang diberikan pada hewan

1. Tabel konversi dosis hewan dengan manusia

Mencit Tikus Marmot Kelinci Kera Anjing Manusia

20 g 200 g 400 g 1,5 kg 4 kg 12 kg 70 kg
Mencit
1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,3 387,9
20 g
Tikus
0,14 1,0 1,74 3,0 9,2 17,8 56,0
200 g

161
 Marmot
0,008 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5
400 g
Kelinci
0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2
1,5 kg
Kera
0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1
4 kg
Anjing
0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1
12 kg
Manusia
0,0026 0,018 0,031 0,07 0,16 0,32 1,0
70 kg

(Laurence, at al., 2008

2. Volume maksimal larutan sediaan uji yang diberikan pada hewan

Volume maksimal (ml)

Jenis
s
hewan uji i.v. i.m. i.p. p.o.
.c.
Mencit 0 1
0,5 0,05 1,0
(20-30 g) ,5-1,0 ,0
Tikus 2 5
1,0 0,1 2,5
(100 g) ,5 ,0
Hamster 2 2
- 0,1 1-2
(50 g) ,5 ,5

162
 Marmut 2 5
- 0,25
(250 g) -5 ,0
Merpati 2 2
2,0 0,5
(300 g) ,0 ,0
Kelinci 1 5
5-10 0,5
(2,5 kg) 0-20 -10
Anjing 1 2
10-20 5,0
(5 kg) 0,0 0-50
Kucing 1 5
5-10 1,0
(3 kg) 0-20 -10
(Harmita dan Radji, 2008).

Lampiran 9 : Contoh Perhitungan persen Radang dan Persen Inhibisi Radang

1. Persen Radang

Persen Radang (%R) = X 100%

dimana: Vt = volume radang setelah waktu t

Vo = volume awal kaki tikus

Misalnya: Ekstrak etanol daun marbosi-bosi dosis 50 mg/kg bb pada menit ke-30

163
 Diketahui : Vt = 03,75
Vo = 03,02

Persen Radang (%R) = x 100 = 24,17%

2. Persen inhibisi Radang

Persen inhibisi Radang (%IR) = x100%

Dimana : a = Persen radang rata-rata kelompok kontrol

b =Persen radang rata-rata kelompok perlakuan yang mendapat
bahan uji atau obat pembanding

Misalnya, diketahui a = 28,04 %, b = 24,41 %

Lampiran 10. Hasil Pengaruh Perlakuan Terhadap rata – rata persen radang

Rata-rata persen radang (menit ke-)

kelompok
30 60 90 120 150 180
41,07± 45,46± 50,59± 54,65± 60,93 ±
CMC Na 62,68± 1.114#
1,07# 1.271# 1.422# 1.547# 1.275#
13,26
29,07± 24,95± 19,55 ± 7,33 ±
Na Diklofenak ± 2,93± 1.057*
0,783* 0.817* 0.686* 0.945*
0.715*

164
 19,92±
EEBS 50 mg/Kg 34,00± 29,70± 24,28 ± 13,67±
1.214* 9,12± 1.904*#
bb 0.372* 0.896* 0.884*# 1.272*#
#
15,39±
EEBS 100 mg/Kg 30,33± 26,88± 21,65± 10,47±
0.914* 4,73± 0.885*#
bb 0.070* 0.449 1.014*# 0.431
#
14,53±
EEBS 200 mg/Kg 29,50± 25,43± 20,23± 8,73 ±
1.063* 3,67± 1.729*#
bb 0.288* 0.463* 0 .745* 1.547*#
#
23,38
31,84±
FNHBS 50 mg/Kg 37,35± 28,21± ± 16,95±
1.138* 13,15± 1.475
bb 0.837* 0.861* 1.233* 0.878
#
#
20,67±
FNHBS 100 mg/Kg 36,28± 31,22 ± 26,56± 13,92± 11,15±1.535*
1.354*
bb 0.301* 0.679* 0.520* 1.484*# #
#
33,54± 28,04± 19,16±
FNHBS 200 mg/Kg 24,08± 11,74±
1.055* 1.488* 1.276* 8,52± 2.374*#
bb 1.443*# 2.057*#
# # #
FEABS 50 mg/Kg 35,38± 30,75± 26,18± 21,48± 14,70± 7,83± 1.635
bb 0.877* 0.383* 0.737* 0.823* 1.319
FEABS 100 mg/Kg 32,53± 27,74± 23,21± 17,59± 12,04± 6,70± 1.003
bb 0.744* 0.819* 1.273* 0.749* 1.125
FEABS 200 mg/Kg 31,79± 26,96± 21,05± 16,25± 9,41±
5,55± 0.598*
bb 0.696* 0.597* 0.518* 0.675* 0.291*
38,07± 32,91± 29,15± 22,58± 15,75±
FSBS 50 mg/Kg bb 12,52± 0.938*
0.706* 0 .597* 0.539* 0.625* 0.616*
FSBS 100 mg/Kg 33,70± 28,59± 23,65± 20,33± 12,67± 8,18± 1.228
bb 0.297* 0.92* 0.818* 1.030* 1.127
18,06±
FSBS 200 mg/Kg 31,44± 27,28± 22,09± 11,81±
1.275* 7,23± 0.873
bb 0.604* 0.95* 1.439*# 1.487*#
#

Rata-rata persen radang (menit ke-)

kelompok
210 240 270 300 330 360
41,07± 45,46± 50,59± 54,65± 60,93± 62,68 ±
CMC Na
1.166# 1.347# 1.289# 0.705# 1,149# 2,067#
29,07± 24,95± 19,55± 13,26± 7,33± 2,93 ±
Na Diklofenak
1.426* 1.414* 1.767* 1.448* 1.404* 0,723*
13,67±
34,00 ± 29,70± 24,28± 19,92± 9,12 ±
EEBS 50 mg/Kg bb 2,164*
1.663*# 1.995*# 1.437*# 2.107*# 1,068*#
#
EEBS 100 mg/Kg bb 30,33± 26,88± 21,65± 15,39± 10,47± 4,73 ±

165
 0.547*# 0.681 0.824* 0.663* 0,908 0,838
8,73±
29,50± 25,43± 20,23± 14,53± 3,67 ±
EEBS 200 mg/Kg bb 1,052*
1.347*# 1.174*# 0.707* 0,506* 0.691
#
23,38±
37,35± 31,84± 28,21± 16,95± 13,15 ±
FNHBS 50 mg/Kg bb 1,067*
1.452*# 0.984*# 0.911*# 0,660* 1,207*#
#
FNHBS 100 mg/Kg 36,28± 31,22± 26,56± 20,67± 13,92± 11,15 ±
bb 1.349*# 0.732 0.587 0,056 0,745 0,877
19,16± 11,74±
FNHBS 200 mg/Kg 33,54± 28,04± 24,08± 8,52 ±
2,543* 1,106*
bb 2.725*# 2.788*# 2.961*# 1,286*#
# #
35,38± 30,75± 26,18± 21,48± 14,70± 7,83 ±
FEABS 50 mg/Kg bb
1.684*# 0.852* 0.878* 0,884* 0,491 1,108
12,04±
32,53± 27,74± 23,21± 17,59± 6,70 ±
FEABS 100 mg/Kg bb 1,059*
0.899* 0.694* 1.111*# 0,925* 1,261*#
#
31,79± 26,96± 21,05± 16,25± 9,41± 5,55 ±
FEABS 200 mg/Kg bb
0.844* 1.038 1.556 0,811 0,971 0,736
38,07± 32,91± 29,15± 22,58± 15,75± 12,52 ±
FSBS 50 mg/Kg bb
1.113*# 1.437*# 1.868*# 0,759* 0,899 1,184*#
20,33± 12,67 ±
33,70± 28,59± 23,65± 8,18 ±
FSBS 100 mg/Kg bb 0,874* 1,377*
1.284*# 1.113*# 1.472*# 1,470*#
# #
18,06±
31,44± 27,28± 22,09± 11,81 ± 7,23 ±
FSBS 200 mg/Kg bb 1,564*
0.573* 0.706* 1.235*# 0,965 1,287*#
#

Keterangan: * p<0,05 (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol negative CMC 0,5 %),
# p<0,05 (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol positif Na.Diklofenak
2,25 mg/kg). EEM =(Ekstak etanol daun marbosi-bosi), FnHM =(Fraksi n-
heksana daun marbosi-bosi), dan FEAM= (Fraksi etil asetat Kulit batang
sikkam).

Lampiran 11. Hasil Pengaruh perlakuan terhadap persen inhibisi radang

Persen inhibisi radang (menit ke-)

Kelompok
30 60 90 120 150 180
52,64±11,80 51,94± 53,11± 43,74± 36,20± 27,89±
Na Diklofenak
* 9,74* 8,25* 6,68* 4,32* 3,96*
28,55± 29,57± 17,87± 17,62± 13,06± 13,56±
EEBS 50 mg/Kg bb
9,01*# 8,26* 5,75*# 6,19* 3,70* 3,08*

166
 29,97± 40,09± 39,02± 38,51± 25,92± 21,90±
EEBS 100 mg/Kg bb
9,30*# 8,12* 9,73* 6,30* 1,80*# 3,65*
35,15± 42,20± 47,34± 41,38± 31,94± 25,64±
EEBS 200 mg/Kg bb
7,66*# 5,46*# 4,16*# 5,06* 6,40*# 6,41*#
39,82± 22,78± 15,07± 10,552± 6,99± 7,58±
FNHBS 50 mg/Kg bb
16,15*# 5,51*# 5,38*# 2,52*# 2,36*# 1,95*#
27,66± 25,77± 18,99± 22,39± 17,94± 13,14±
FNHBS 100 mg/Kg bb
4,17*# 6,41*# 4,86*# 6,26* 5,78* 2,82*
64,98± 44,45± 33,63± 27,19± 21,01± 18,27±
FNHBS 200 mg/Kg bb
9,16*# 11,61*# 6,65* 7,83* 7,68*# 6,19*#
28,82± 29,20± 16,49± 14,24± 10,20± 11,83±
FEABS 50 mg/Kg bb
13,62*# 4,49*# 5,08*# 5,06*# 4,45* 3,86*
45,47± 40,42± 29,85± 28,38± 23,75± 18,01±
FEABS 100 mg/Kg bb
11,69 7,42* 9,87* 7,13* 6,01*# 3,98*
32,68± 39,16± 37,31± 32,48± 29,08± 20,67±
FEABS 200 mg/Kg bb
13,04 10,25* 6,42* 4,05*# 3,21*# 2,25*#
42,70± 27,90± 16,28± 9,98± 6,86± 5,26±
FSBS 50 mg/Kg bb
7,34 8,29* 5,43*# 3,53*# 1,30*# 1,91*#
32,50± 26,67± 21,92± 22,79± 8,69± 13,54±
FSBS 100 mg/Kg bb
6,83 9,13* 4,17*# 2,88*# 4,27* 3,49*#
15,66
24,80± 32,42± 27,23± 25,66± 21,07±
FSBS 200 mg/Kg bb ±
11,78 10,53* 8,51* 7,40 6,52*#
3,24*

Persen inhibisi radang (menit ke-)

Kelompok
210 240 270 300 330 360
28,70± 44,71± 61,23± 75,81± 88,00± 95,39±
Na Diklofenak
5,37* 4,28* 3,63* 2,49* 2,27* 1,04*
17,21± 34,68± 52,08± 63,53± 77,60± 85,51±
EEBS 50 mg/Kg bb
3,23*# 3,70* 2,08*# 3,88*# 2,69* 1,47*
25,94± 40,55± 57,05± 71,80± 82,75± 92,27±
EEBS 100 mg/Kg bb
2,41*# 3,00*# 2,16*# 1,33*# 1,61*# 1,60*#
27,83± 43,72± 59,76± 73,37± 85,63± 94,04±
EEBS 200 mg/Kg bb
4,36* 3,68*# 2,46*# 1,15*# 1,78*# 1,24*

167
 9,94 ± 29,81± 44,08± 57,14± 72,15± 78,97±
FNHBS 50 mg/Kg bb
3,50*# 2,41*# 2,36*# 2,27* 1,10*# 1,90*
11,47± 30,94± 47,28± 62,16± 77,13± 82,25±
FNHBS 100 mg/Kg bb
4,45*# 3,43*# 2,25*# 0,51*# 1,22*# 1,22*
20,32± 37,57± 51,94± 64,97± 80,70± 86,44±
FNHBS 200 mg/Kg bb
6,91* 7,76*# 6,57*# 4,49*# 1,86*# 2,02*
13,55± 32,14± 48,12± 60,64± 75,82± 87,27±
FEABS 50 mg/Kg bb
4,91* 2,64*# 2,27*# 1,92* 1,02*# 2,20*#
20,42 ± 38,62± 53,82± 67,79± 80,15± 89,08±
FEABS 100 mg/Kg bb
3,80*# 3,21* 3,24* 1,75* 2,03* 2,31*#
22,33 ± 40,51± 58,17± 70,23± 84,48± 90,96±
FEABS 200 mg/Kg bb
3,05*# 2,76*# 3,55* 1,57* 1,75*# 1,50*
8,25± 27,38± 42,28± 58,65± 74,10± 79,90±
FSBS 50 mg/Kg bb
3,41*# 3,63* 3,81* 1,54* 1,65 2,46
17,88± 36,79 53,00± 62,74± 79,09± 86,81±
FSBS 100 mg/Kg bb
2,61*# ± 3,53* 3,67* 1,91*# 2,51* 1,88*
23,27± 39,79± 56,27± 67,01± 80,60± 88,58±
FSBS 200 mg/Kg bb
2,02*# 2,41*# 2,54*# 2,67*# 1,62*#

Keterangan: * p<0,05 (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol negatif Na CMC

0,5%),),
# p<0,05 (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol positif Na.Diklofenak
2,25 mg/kg), EEM =(Ekstak etanol daun marbosi-bosi), FnHM =(Fraksi n-
heksana Kulit batang sikkam), dan FEAM= (Fraksi etil asetat Kulit batang
sikkam).

Lampiran 12. Hasil analisis anova persen radang dengan SPSS

ANOVA
Sum of Mean
df F Sig.
Squares Square
Between Groups 40.954 13 3.150 1.332 .223
menit_30 Within Groups 132.456 56 2.365
Total 173.410 69
Between Groups 244.391 13 18.799 4.770 .000
menit_60 Within Groups 220.687 56 3.941
Total 465.078 69

168
 Between Groups 628.199 13 48.323 10.076 .000
menit_90 Within Groups 268.562 56 4.796
Total 896.761 69
Between Groups 867.642 13 66.742 11.599 .000
menit_120 Within Groups 322.239 56 5.754
Total 1189.881 69
Between Groups 748.511 13 57.578 7.939 .000
menit_150 Within Groups 406.148 56 7.253
Total 1154.659 69
Between Groups 627.233 13 48.249 4.980 .000
menit_180 Within Groups 542.590 56 9.689
Total 1169.823 69
Between Groups 784.599 13 60.354 6.209 .000
menit_210 Within Groups 544.325 56 9.720
Total 1328.924 69
Between Groups 1682.482 13 129.422 14.483 .000
menit_240 Within Groups 500.436 56 8.936
Total 2182.918 69
Between Groups 3862.117 13 297.086 28.108 .000
menit_270 Within Groups 591.891 56 10.569
Total 4454.008 69
Between Groups 6601.818 13 507.832 66.341 .000
menit_300 Within Groups 428.674 56 7.655
Total 7030.492 69
Between Groups 11451.732 13 880.902 136.428 .000
menit_330 Within Groups 361.587 56 6.457
Total 11813.319 69
1 1
Between Groups 14595.607 13 .000
122.739 60.467
menit_360 Within Groups 6
391.815 56
.997
Total 14987.423 69

169
 Lampiran 12. Lanjutan
Homogeneous Subsets
menit_30
Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok
Na Diklofenak
EEKBS 200 mg/kg bb
EEKBS 100 mg/kg bb
FEAKBS 200 mg/kg bb
FEAKBS 100 mg/kg bb
FSKBS 200 mg/kg bb
FEAKBS 100 mg/kg bb
FNHKBS 200 mg/kg bb
EEKBS 50 mg/kg bb
FEAKBS 50 mg/kg bb
FSKBS 50 mg/kg bb
NHKBS 100 mg/kg bb
FNHKBS 50 mg/kg bb
CMC Na
Sig.
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
N
1
5 3.3920
5 3.8100
5 4.2560
5 4.3200
5 4.4480
5 4.6500
5 4.8060
5 4.9120
5 5.1720
5 5.2020
5 5.3360
5 5.4100
5 5.9660
5 6.3060
.171

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

Lampiran 12. Lanjutan

menit_60

170
 Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok
N 1 2 3 4
Na Diklofenak 5 5.6520
EEKBS 200 mg/kg bb 5 6.5220
6.5220
EEKBS 100 mg/kg bb 5 6.6540
6.6540
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 6.8560
6.8560
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 7.2940
7.2940 7.2940
FSKBS 200 mg/kg bb 5 7.7720
7.7720 7.7720 7.7720
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 8.2220
8.2220 8.2220 8.2220
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 8.6640
8.6640 8.6640 8.6640
EEKBS 50 mg/kg bb 5 9.0440
9.0440 9.0440 9.0440
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 9.4920
9.4920 9.4920 9.4920
NHKBS 100 mg/kg bb 5 10.5320 10.5320 10.5320
FSKBS 50 mg/kg bb 5 10.8160 10.8160 10.8160
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 11.2940 11.2940
CMC Na 5 11.7000
Sig. .149 .062 .111 .127
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

Lampiran 12. Lanjutan

menit_120
Tukey HSDa

N Subset for alpha = 0.05

Kelompok 1 2 3 4 5 6 7 8
Na Diklofenak 13.736
5
0
EEKBS 200 mg/kg bb 14.502 14.502
5
0 0
EEKBS 100 mg/kg bb 15.128 15.128 15.128
5
0 0 0
FEAKBS 200 mg/kg bb 16.736 16.736 16.736
5 16.7360
0 0 0
FEAKBS 100 mg/kg bb 17.554 17.554 17.554 17.554
5 17.5540
0 0 0 0
FSKBS 200 mg/kg bb 18.288 18.288 18.288 18.288
5 18.2880 18.2880
0 0 0 0
FNHKBS 200 mg/kg bb 18.310 18.310 18.310 18.310
5 18.3100 18.3100
0 0 0 0
FEAKBS 100 mg/kg bb 19.268 19.268 19.268 19.268
5 19.2680 19.2680
0 0 0 0

171
 EEKBS 50 mg/kg bb 20.392 20.392 20.392
5 20.3920 20.3920 20.3920
0 0 0
FEAKBS 50 mg/kg bb 21.278 21.278
5 21.2780 21.2780 21.2780
0 0
NHKBS 100 mg/kg bb 22.276 22.276
5 22.2760 22.2760
0 0
FSKBS 50 mg/kg bb 23.604
5 23.6040 23.6040
0
FNHKBS 50 mg/kg bb 24.246
5 24.2460
0
CMC Na 5 25.0940
Sig. .164 .123 .055 .171 .132 .050 .088 .136
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

Lampiran 12. Lanjutan

menit_150
a
Tukey HSD

N Subset for alpha = 0.05

Kelompok 1 2 3 4 5 6
Na Diklofenak 5 19.3640
EEKBS 200 mg/kg bb 5 20.4640 20.4640
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 21.4040 21.4040 21.4040
EEKBS 100 mg/kg bb 5 22.4280 22.4280 22.4280 22.4280
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 22.9360 22.9360 22.9360 22.9360
FSKBS 200 mg/kg bb 5 23.7500 23.7500 23.7500 23.7500 23.7500
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 24.0280 24.0280 24.0280 24.0280 24.0280
NHKBS 100 mg/kg bb 5 25.6020 25.6020 25.6020 25.6020 25.6020
EEKBS 50 mg/kg bb 5 26.3580 26.3580 26.3580 26.3580 26.3580
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 27.1920 27.1920 27.1920 27.1920
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 27.6260 27.6260 27.6260
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 28.3620 28.3620 28.3620
FSKBS 50 mg/kg bb 5 29.1420 29.1420
CMC Na 5 30.3620
Sig. . . . . . .
286 056 066 053 117 257
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

172
 Lampiran 12. Lanjutan

menit_180
Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok
N 1 2 3

Na Diklofenak 5 25.6060
EEKBS 200 mg/kg bb 5 26.2740
EEKBS 100 mg/kg bb 5 27.7200 27.7200
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 28.2160 28.2160
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 29.1060 29.1060 29.1060

FSKBS 200 mg/kg bb 5 29.9760 29.9760 29.9760

FNHKBS 200 mg/kg bb 5 30.4600 30.4600 30.4600

FEAKBS 100 mg/kg bb 5 30.7700 30.7700 30.7700

EEKBS 50 mg/kg bb 5 31.3360 31.3360 31.3360

FEAKBS 50 mg/kg bb 5 32.4520 32.4520 32.4520

NHKBS 100 mg/kg bb 5 33.5520 33.5520

FSKBS 50 mg/kg bb 5 34.2060 34.2060

FNHKBS 50 mg/kg bb 5 34.3400 34.3400

CMC Na 5 35.6580

Sig. .054 .072 .079

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

173
Lampiran 12. Lanjutan

menit_210

Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N 1 2 3 4

Na Diklofenak 5 29.0420
EEKBS 200 mg/kg bb 5 29.4960 29.4960
EEKBS 100 mg/kg bb 5 30.3240 30.3240
FSKBS 200 mg/kg bb 5 31.4440 31.4440 31.4440
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 31.7920 31.7920 31.7920
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 32.5300 32.5300 32.5300
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 33.5440 33.5440 33.5440
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 33.7020 33.7020 33.7020
EEKBS 50 mg/kg bb 5 33.9980 33.9980 33.9980
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 35.3800 35.3800 35.3800 35.3800
NHKBS 100 mg/kg bb 5 36.2800 36.2800 36.2800
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 37.3480 37.3480
FSKBS 50 mg/kg bb 5 38.0740 38.0740
CMC Na 5 41.0740
Sig. .104 .059 .072 .214

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

174
 Lampiran 12. Lanjutan

menit_240
Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N
1 2 3 4
Na Diklofenak 5 24.9500
EEKBS 200 mg/kg bb 5 25.4340 25.4340
EEKBS 100 mg/kg bb 5 26.8800 26.8800 26.8800
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 26.9560 26.9560 26.9560
FSKBS 200 mg/kg bb 5 27.2740 27.2740 27.2740
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 27.7380 27.7380 27.7380
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 28.0420 28.0420 28.0420
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 28.5940 28.5940 28.5940
EEKBS 50 mg/kg bb 5 29.7040 29.7040 29.7040
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 30.7520 30.7520 30.7520
NHKBS 100 mg/kg bb 5 31.2240 31.2240 31.2240
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 31.8380 31.8380
FSKBS 50 mg/kg bb 5 32.9120
CMC Na 5 45.4640
Sig. .081 .068 .110 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

175
Lampiran 12. Lanjutan

menit_270
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N 1 2 3 4
Na Diklofenak 5 19.5460
EEKBS 200 mg/kg bb 5 20.2320
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 21.0520 21.0520
EEKBS 100 mg/kg bb 5 21.6520 21.6520
FSKBS 200 mg/kg bb 5 22.0880 22.0880 22.0880
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 23.2040 23.2040 23.2040
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 23.6480 23.6480 23.6480
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 24.0760 24.0760 24.0760
EEKBS 50 mg/kg bb 5 24.2800 24.2800 24.2800
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 26.1780 26.1780 26.1780
NHKBS 100 mg/kg bb 5 26.4600 26.4600 26.4600
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 28.2120 28.2120
FSKBS 50 mg/kg bb 5 29.1520
CMC Na 5 50.5900
Sig. .072 .053 .060 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

176
Lampiran 12. Lanjutan

menit_300
a
Tukey HSD

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N 1 2 3 4 5

Na Diklofenak 5 13.2620
EEKBS 200 mg/kg bb 5 14.5280 14.5280
EEKBS 100 mg/kg bb 5 15.3920 15.3920 15.3920
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 16.2480 16.2480 16.2480
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 17.5940 17.5940 17.5940 17.5940
FSKBS 200 mg/kg bb 5 18.0540 18.0540 18.0540 18.0540
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 19.1620 19.1620 19.1620 19.1620
EEKBS 50 mg/kg bb 5 20.1860 20.1860 20.1860
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 20.3280 20.3280 20.3280
NHKBS 100 mg/kg bb 5 20.6660 20.6660
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 21.4780 21.4780
FSKBS 50 mg/kg bb 5 22.5780
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 23.3780
CMC Na 5 54.6480
Sig. .071 .081 .054 .083 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

177
Lampiran 12. Lanjutan
menit_330
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N 1 2 3 4 5 6
Na Diklofenak 5 7.3280
EEKBS 200 mg/kg bb 5 8.7300 8.7300
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 9.4060 9.4060 9.4060
EEKBS 100 mg/kg bb 5 10.4720 10.4720 10.4720 10.4720
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 11.7380 11.7380 11.7380 11.7380 11.7380
FSKBS 200 mg/kg bb 5 11.8100 11.8100 11.8100 11.8100 11.8100
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 12.0400 12.0400 12.0400 12.0400 12.0400
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 12.6660 12.6660 12.6660 12.6660 12.6660
NHKBS 100 mg/kg bb 5 13.9240 13.9240 13.9240 13.9240
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 14.7020 14.7020 14.7020
EEKBS 50 mg/kg bb 5 15.0700 15.0700
FSKBS 50 mg/kg bb 5 15.7500 15.7500
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 16.9520
CMC Na 5 60.9260
Sig. .080 .100 .085 .088 .097 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

Lampiran 12. Lanjutan

menit_360

Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N 1 2 3 4 5 6

178
Na Diklofenak 5 2.9260
EEKBS 200 mg/kg bb 5 3.6700 3.6700
EEKBS 100 mg/kg bb 5 4.7280 4.7280
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 5.5500 5.5500 5.5500
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 6.7000 6.7000 6.7000 6.7000
FSKBS 200 mg/kg bb 5 7.2300 7.2300 7.2300 7.2300
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 7.8260 7.8260 7.8260 7.8260 7.8260
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 8.1760 8.1760 8.1760 8.1760 8.1760
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 8.5160 8.5160 8.5160 8.5160 8.5160
EEKBS 50 mg/kg bb 5 9.1260 9.1260 9.1260 9.1260
NHKBS 100 mg/kg bb 5 11.1460 11.1460 11.1460
FSKBS 50 mg/kg bb 5 12.5220 12.5220
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 13.1540
CMC Na 5 62.6800
Sig. .076 .093 .076 .053 .111 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

Lampiran 13. Hasil analisis anova persen inhibisi radang dengan SPSS
ANOVA

Sum of
df Mean Square F Sig.
Squares
menit_30 Between Groups 8023.788 12 668.649 1.190 .
315

179
 Within Groups 5
29217.733 561.879
2
Total 6
37241.521
4
menit_60 Between Groups 1 .
4621.597 385.133 1.100
2 380
Within Groups 5
18204.003 350.077
2
Total 6
22825.600
4
menit_90 Between Groups 1 .
9491.339 790.945 3.460
2 001
Within Groups 5
11886.140 228.580
2
Total 6
21377.478
4
menit_120 Between Groups 1 .
7417.030 618.086 3.790
2 000
Within Groups 5
8480.008 163.077
2
Total 6
15897.038
4
menit_150 Between Groups 1 .
5763.912 480.326 4.105
2 000
Within Groups 5
6084.456 117.009
2
Total 6
11848.368
4
menit_180 Between Groups 1 .
2610.351 217.529 2.941
2 003
Within Groups 5
3845.717 73.956
2
Total 6
6456.068
4
menit_210 Between Groups 1 .
2708.453 225.704 2.728
2 006
Within Groups 5
4302.023 82.731
2
Total 6
7010.476
4
menit_240 Between Groups 1 .
1745.520 145.460 2.001
2 043
Within Groups 5
3781.004 72.712
2
Total 6
5526.524
4
menit_270 Between Groups 1 .
2099.136 174.928 3.136
2 002
Within Groups 5
2900.340 55.776
2
Total 6
4999.476
4
menit_300 Between Groups 1 .
1998.688 166.557 5.964
2 000
Within Groups 1452.130 5 27.926
2

180
 Total 6
3450.818
4
menit_330 Between Groups 1 .
1262.908 105.242 6.165
2 000
Within Groups 5
887.717 17.071
2
Total 6
2150.626
4
menit_360 Between Groups 1 .
1535.101 127.925 7.673
2 000
Within Groups 5
866.984 16.673
2
Total 6
2402.085
4

Lampiran 13. Lanjutan

menit_30
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Kelompok
N 1
FSKBS 200 mg/kg bb 5 24.8040
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 27.6580
FEKBS 50 mg/kg bb 5 28.5460
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 28.8160

181
FEKBS 100 mg/kg bb 5 29.9680
FSKBS 100 mg/kg bb 5 32.4920
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 32.6800
FEKBS 200 mg/kg bb 5 35.1440
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 39.8180
FSKBS 50 mg/kg bb 5 42.6980
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 45.4720
NA Diklofenak 5 52.6440
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 64.9860
Sig. .292
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

menit_60
a
Tukey HSD

Subse
Kelompok t for alpha = 0.05
N 1
22.77
FNHKBS 50 mg/kg bb 5
80
25.76
FNHKBS 100 mg/kg bb 5
40
26.66
FSKBS 100 mg/kg bb 5
80

182

FSKBS 50 mg/kg bb
FEAKBS 50 mg/kg bb
FEKBS 50 mg/kg bb
FSKBS 200 mg/kg bb
FEAKBS 200 mg/kg bb
FEKBS 100 mg/kg bb
FEAKBS 100 mg/kg bb
FEKBS 200 mg/kg bb
FNHKBS 200 mg/kg bb
NA Diklofenak
Sig.
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.
a
Tukey HSD
Kelompok
FNHKBS 50 mg/kg bb
FSKBS 50 mg/kg bb
FEAKBS 50 mg/kg bb
FEKBS 50 mg/kg bb
FNHKBS 100 mg/kg bb
FSKBS 100 mg/kg bb
FSKBS 200 mg/kg bb
FEAKBS 100 mg/kg bb
FNHKBS 200 mg/kg bb
FEAKBS 200 mg/kg bb
FEKBS 100 mg/kg bb
FEKBS 200 mg/kg bb
NA Diklofenak
183
27.90
5
20
5 29.1960
5 29.5700
5 32.4240
5 39.1620
5 40.0920
5 40.4160
5 42.1980
5 44.4480
5 51.9360
.419
menit_90
Subset for alpha = 0.05
N 1 2
5 15.0660
5 16.2820
5 16.4880
5 17.8740
5 18.9880
5 21.9280 21.9280
5 27.2260 27.2260
5 29.8540 29.8540
5 33.6300 33.6300
5 37.3100 37.3100
5 39.0220 39.0220
5 47.3440 47.3440
5 53.1060
 Sig. .064 .085
Means for groups in homogeneous subsets are displayed

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

menit_120
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N 1 2 3 4
FSKBS 50 mg/kg bb 5 9.9780
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 10.5540 10.5540
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 14.2440 14.2440 14.2440
FEKBS 50 mg/kg bb 5 17.6180 17.6180 17.6180 17.6180
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 22.3900 22.3900 22.3900 22.3900
FSKBS 100 mg/kg bb 5 22.7920 22.7920 22.7920 22.7920
FSKBS 200 mg/kg bb 5 25.6640 25.6640 25.6640 25.6640
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 27.1900 27.1900 27.1900 27.1900
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 28.3800 28.3800 28.3800 28.3800
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 32.4760 32.4760 32.4760 32.4760
FEKBS 100 mg/kg bb 5 38.5120 38.5120 38.5120
FEKBS 200 mg/kg bb 5 41.3820 41.3820
NA Diklofenak 5 43.7420
Sig. .240 .051 .066 .090
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

184
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000

menit_150
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Kelompok
N 1 2 3
FSKBS 50 mg/kg bb 5 6.8600
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 6.9880
FSKBS 100 mg/kg bb 5 8.6940 8.6940
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 10.2000 10.2000
FEKBS 50 mg/kg bb 5 13.0660 13.0660 13.0660
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 17.9380 17.9380 17.9380
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 21.0120 21.0120 21.0120
FSKBS 200 mg/kg bb 5 21.0720 21.0720 21.0720
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 23.7460 23.7460 23.7460
FEKBS 100 mg/kg bb 5 25.9220 25.9220 25.9220
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 29.0800 29.0800 29.0800
FEKBS 200 mg/kg bb 5 31.9440 31.9440
NA Diklofenak 5 36.1960
Sig. .088 .060 .063
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

menit_180
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N
1 2 3
FSKBS 50 mg/kg bb 5 5.2620
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 7.5840 7.5840
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 11.8320 11.8320 11.8320
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 13.1360 13.1360 13.1360
FSKBS 100 mg/kg bb 5 13.5340 13.5340 13.5340
FEKBS 50 mg/kg bb 5 13.5600 13.5600 13.5600
FSKBS 200 mg/kg bb 5 15.6600 15.6600 15.6600
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 18.0120 18.0120 18.0120
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 18.2760 18.2760 18.2760
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 20.6680 20.6680 20.6680
FEKBS 100 mg/kg bb 5 21.8980 21.8980 21.8980
FEKBS 200 mg/kg bb 5 25.6420 25.6420
NA Diklofenak 5 27.8880
Sig. .136 .073 .171
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

menit_210

Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N
1 2

185
FSKBS 50 mg/kg bb 5 8.2560
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 9.9400 9.9400
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 11.4760 11.4760
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 13.5460 13.5460
FEKBS 50 mg/kg bb 5 17.2140 17.2140
FSKBS 100 mg/kg bb 5 17.8860 17.8860
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 20.3200 20.3200
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 20.4240 20.4240
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 22.3320 22.3320
FSKBS 200 mg/kg bb 5 23.2700 23.2700
FEKBS 100 mg/kg bb 5 25.9420 25.9420
FEKBS 200 mg/kg bb 5 27.8340 27.8340
NA Diklofenak 5 28.6980
Sig. .060 .085
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

menit_240
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N
1
FSKBS 50 mg/kg bb 5 27.3820
FNHKBS 50 mg/kg bb 5 29.8120
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 30.9420
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 32.1420
FEKBS 50 mg/kg bb 5 34.6800
FSKBS 100 mg/kg bb 5 36.7960
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 37.5680
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 38.6240
FSKBS 200 mg/kg bb 5 39.7940
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 40.5160
FEKBS 100 mg/kg bb 5 40.5520
FEKBS 200 mg/kg bb 5 43.7140
NA Diklofenak 5 44.7120
Sig. .095
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

186
 menit_270
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N
1 2 3
4
FSKBS 50 mg/kg bb 5
2.2760
4 4
FNHKBS 50 mg/kg bb 5
4.0840 4.0840
4 4 4
FNHKBS 100 mg/kg bb 5
7.2800 7.2800 7.2800
4 4 4
FEAKBS 50 mg/kg bb 5
8.1180 8.1180 8.1180
5 5 5
FNHKBS 200 mg/kg bb 5
1.9400 1.9400 1.9400
5 5 5
FEKBS 50 mg/kg bb 5
2.0820 2.0820 2.0820
5 5 5
FSKBS 100 mg/kg bb 5
2.9940 2.9940 2.9940
5 5 5
FEAKBS 100 mg/kg bb 5
3.8260 3.8260 3.8260
5 5 5
FSKBS 200 mg/kg bb 5
6.2720 6.2720 6.2720
5 5 5
FEKBS 100 mg/kg bb 5
7.0500 7.0500 7.0500
5 5 5
FEAKBS 200 mg/kg bb 5
8.1700 8.1700 8.1700
5 5
FEKBS 200 mg/kg bb 5
9.7580 9.7580

187
 6
NA Diklofenak 5
1.2340
. . .
Sig.
066 074 171
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

menit_300
Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N
1 2 3 4 5

FNHKBS 50 mg/kg bb 5 57.1400

FSKBS 50 mg/kg bb 5 58.6500 58.6500

FEAKBS 50 mg/kg bb 5 60.6400 60.6400 60.6400

FNHKBS 100 mg/kg bb 5 62.1580 62.1580 62.1580 62.1580

FSKBS 100 mg/kg bb 5 62.7400 62.7400 62.7400 62.7400

FEKBS 50 mg/kg bb 5 63.5280 63.5280 63.5280 63.5280

FNHKBS 200 mg/kg bb 5 64.9720 64.9720 64.9720 64.9720 64.9720

FSKBS 200 mg/kg bb 5 67.0140 67.0140 67.0140 67.0140 67.0140

FEAKBS 100 mg/kg bb 5 67.7880 67.7880 67.7880 67.7880 67.7880

FEAKBS 200 mg/kg bb 5 70.2320 70.2320 70.2320 70.2320

FEKBS 100 mg/kg bb 5 71.8000 71.8000 71.8000

FEKBS 200 mg/kg bb 5 73.3700 73.3700

NA Diklofenak 5 75.8080

Sig. .101 .051 .070 .067 .089

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

188
 menit_330
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05
Kelompok N
1 2 3 4 5

FNHKBS 50 mg/kg bb 7
5
2.1520
FSKBS 50 mg/kg bb 7 7
5
4.0960 4.0960
FEAKBS 50 mg/kg bb 7 7 7
5
5.8200 5.8200 5.8200
FNHKBS 100 mg/kg bb 7 7 7 7
5
7.1300 7.1300 7.1300 7.1300
FEKBS 50 mg/kg bb 7 7 7 7
5
7.5960 7.5960 7.5960 7.5960
FSKBS 100 mg/kg bb 7 7 7 7 7
5
9.0940 9.0940 9.0940 9.0940 9.0940
FEAKBS 100 mg/kg bb 8 8 8 8 8
5
0.1480 0.1480 0.1480 0.1480 0.1480
FSKBS 200 mg/kg bb 8 8 8 8 8
5
0.6040 0.6040 0.6040 0.6040 0.6040
FNHKBS 200 mg/kg bb 8 8 8 8 8
5
0.7020 0.7020 0.7020 0.7020 0.7020
FEKBS 100 mg/kg bb 8 8 8 8
5
2.7480 2.7480 2.7480 2.7480
FEAKBS 200 mg/kg bb 8 8 8
5
4.4760 4.4760 4.4760

189
FEKBS 200 mg/kg bb 8 8
5
5.6280 5.6280
NA Diklofenak 8
5
7.9960
Sig. . . . . .
083 075 075 087 059
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000

menit_360
Tukey HSDa

Subset for alpha = 0.05

Kelompok N
1 2 3 4 5

FNHKBS 50 mg/kg bb 5 78.9760

FSKBS 50 mg/kg bb 5 79.8980 79.8980
FNHKBS 100 mg/kg bb 5 82.2460 82.2460 82.2460
FEKBS 50 mg/kg bb 5 85.5060 85.5060 85.5060 85.5060
FNHKBS 200 mg/kg bb 5 86.4400 86.4400 86.4400 86.4400 86.4400
FSKBS 100 mg/kg bb 5 86.8120 86.8120 86.8120 86.8120 86.8120
FEAKBS 50 mg/kg bb 5 87.2680 87.2680 87.2680 87.2680 87.2680
FSKBS 200 mg/kg bb 5 88.5860 88.5860 88.5860 88.5860
FEAKBS 100 mg/kg bb 5 89.0860 89.0860 89.0860
FEAKBS 200 mg/kg bb 5 90.9580 90.9580 90.9580
FEKBS 100 mg/kg bb 5 92.2700 92.2700
FEKBS 200 mg/kg bb 5 94.0380 94.0380
NA Diklofenak 5 95.3860
Sig. .096 .066 .064 .076 .051
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000

190
Lampiran 14. Kromatogram KKt fraksi etilasetat Kulit batang sikkam

1. Fase gerak HCl 1%

BP

TP

A B

Keterangan : A= Sebelum penyemprot AlCl3, B= Sesudah penyemprot AlCl3, tp=

titik penotolan, bp= batas pengembang, fase diam= kertas whatman,
fase gerak= HCL 1%, jarak rambat 8 cm, H=hijau, K= kuning, U=
Ungu

191
Lampiran 14. (lanjutan)

3. Fase gerak asam asetat 15 %

BP

Tp

A B

Keterangan : A= Sebelum penyemprot AlCl3, B= Sesudah penyemprot AlCl3, tp=

titik penotolan, bp= batas pengembang, fase diam= kertas whatman,
fase gerak= Asan Asetat 15%, jarak rambat 8 cm, U=Ungu, K=
kuning, B= biru

192
Lampiran 14. (lanjutan)

4. Fase Gerak BAA (4:1:5)

Bp
K
U

Tp

A B

Keterangan : A= Sebelum penyemprot AlCl3, B= Sesudah penyemprot AlCl3, tp=

titik penotolan, bp= batas pengembang, fase diam= kertas

193
 whatman, fase gerak= BAA (4:1:5), jarak rambat 8 cm, U=Ungu,
K= kuning, B= biru

Lampiran 15. Kromatogram KKt preparatif fraksi etil asetat Kulit batang sikkam

194
Lampiran 16. Kromatogram KKt satu arah dengan pengembang BAA (4:1:5)

195
Lampiran 17. Kromatogram KKt dua arah dengan pengembang BAA (4:1:5)
dan asam asetat 15% dibawah lampu UV λ 336 nm

196
Lampiran 18. Spektrum ultraviolet (UV) isolat

197
Lampiran 19. Spektrum infra merah (IR) isolat

198