Nama : Josephine Grace

Kelas : Obat Bahan Alam E

NPM : 2017210120

Penelitian Artikel

Evaluasi Penggunaan Pelarut yang Berbeda untuk Konstituen

Fitokimia, Antioksidan, dan Aktivitas Anti-Peradangan In Vitro dari
Severinia buxifolia
Severinia buxifolia (Rutaceae) adalah sumber yang berasal dari senyawa senyawa aktif karena
telah digunakan secara konvensional untuk perawatan berbagai penyakit. Penelitian ini bertujuan untuk
mengevaluasi dampak pelarut yang berbeda pada hasil ekstraksi, konstituen fitokimia dan antioksidan,
dan aktivitas anti-inflamasi in vitro dari S. buxifolia. Hasil penelitian menunjukkan bahwa solvents yang
digunakan mengambil peran penting dalam hasil ekstraksi, kandungan komponen kimia, dan aktivitas
biologis yang diuji. Metanol diidentifikasi sebagai zat yang paling efektif untuk mencegah ekstraksi,
sehingga menghasilkan ekstraksi tertinggi (33,2%) serta kandungan fenolik tertinggi (13,36 mg GAE / g
DW), flavonoid (1,92 mg QE / g DW), alkaloid (1,40mg AE / g DW), alkaloid (1,25 mg / E, g / w,%). w).
Ekstrak yang diperoleh dari metanol yang dilarang memiliki kapasitas antioksidan yang tinggi (nilai
IC5016.99μg / mL) dan aktivitas anti-inflamasi in vitro (yaitu, denaturasi albumin: IC50 28.86μg / mL;
aktivitas antiproteinase: IC50 414.29μg / mL; dan stabilisasi membran: IC50 419 g / mL; mL). Aktivitas
antioksidan ekstrak S. buxifolia ditemukan 3 kali lipat lebih tinggi dari asam askorbat, dan aktivitas anti-
inflamasi ekstrak S. buxifolia sebanding dengan aspirin. Oleh karena itu, metanol direkomendasikan
untuk mengoptimalkan pelarut untuk mendapatkan konstituen yang tinggi dari unsur-unsur kimia dan
juga mengandung antioksidan yang tinggi dan konstituen anti-inflamasi in vitro dari cabang S. buxifolia
untuk pemanfaatan dalam farmakognosi.

1. Pendahuluan

Stres oksidatif dan autoksidasi lipid dan lipoprotein manusia menghasilkan pembentukan
senyawa yang berpotensi toksik, menyebabkan berbagai masalah kesehatan manusia seperti penuaan,
penyakit kardiovaskular, diabetes, dan kanker [1, 2]. Untuk mengatasi masalah ini, antioksidan sintetik,
seperti propilgallate, butylated hydroxyanisole, tert-butylhydroquinone, dan butylated hydroxytoluene,
telah banyak digunakan untuk menghindari stres oksidatif dan proses autoksidasi [3]. Namun demikian,
penggunaan senyawa tersebut dibatasi karena efeknya terhadap kesehatan manusia, oleh karena itu,
upaya telah dilakukan untuk mencari agen alami sebagai alternatif antioksidan sintetik [3, 4]. Alhasil,
pemakaian alami antioksidan dari tanaman telah menarik perhatian dalam beberapa tahun terakhiR
karena tanaman adalah salah satu sumber terbaik antioksidan alami seperti senyawa flavonoid, fenolik,
danalkaloid [3, 5]. Senyawa ini memiliki kemampuan untuk memadamkan radikal bebas, logam katalitik
kelat, dan mengais oksigen [3, 5]. Agen antioksidan ini telah terbukti menjadi produk obat yang
menjanjikan untuk mencegah stres oksidatif, penyakit, dan menjaga kesehatan serta menunda proses
penuaan. Selain itu, antioksidan alami ini diakui sebagai agen antiinflamasi potensial, yang aman
melindungi tubuh manusia terhadap peradangan, sehingga mencegah penyakit dan gangguan yang
disebabkan oleh peradangan [6-8]. Oleh karena itu, menemukan zat alami baru dengan antioksidan dan
aktivitas inflamasi adalah tujuan dari studi lanjutan. Severinia buxifolia (Atalantia buxifolia), yang
termasuk keluarga Rutacea, adalah negara mana pun yang pernah menjadi petani di Cina, Kamboja,
Laos, Vietnam, dan Taiwan [9, 10]. S. buxifolia digunakan sebagai obat tradisional untuk mengobati
batuk, gigitan ular, malaria, kelumpuhan, pembengkakan traumatis, rematik kronis, dan nyeri [11, 12].
Manfaat kesehatan dari S. buxifolia dikaitkan dengan konstituen fitokimia yang memiliki tindakan
fisiologis pada tubuh manusia [12, 13]. Berbagai senyawa bioaktif ditemukan dari cabang dan akar S.
buxifolia termasuk alkaloid asridon, tetranorterpenoid, kumarin, limonoid, dan seskuiterpen [11, 12].
Senyawa-senyawa ini memiliki berbagai aktivitas biologis seperti antifeedant, antiallergic, antibakteri,
antimalaria, antivirus, antioksidan, dan aktivitas anti-inflamasi [12,14]. Ekstraksi adalah proses utama
dimana senyawa bioaktif dapat diperoleh dari bahan biomassa. Tujuan dari ekstraksi
prosesisimaksimenghitung jumlah senyawa target dan untuk mendapatkan aktivitas biologis tertinggi
dari ekstrak ini [15]. Hasil ekstraksi dan aktivitas biologis dari ekstrak dieksklusikan tidak hanya dari
teknik ekstraksi tetapi juga oleh pelarut ekstraksi [16, 17]. Banyak pelarut, termasuk metanol, etanol,
aseton, dan air, telah digunakan untuk mengekstraksi senyawa bioaktif dari bahan tanaman. Karena
berbagai bahan bioaktif yang terkandung dalam senyawa yang terikat dan sifat kelarutannya yang
berbeda dalam pelarut yang berbeda, pelarut optimal untuk ekstraksi tergantung pada bahan tanaman
tertentu, dan senyawa ini yang terisolasi [16,17]. Oleh karena itu, rekomendasi pelarut ekstraksi yang
cocok untuk bahan tanaman individu umumnya sulit. Untuk S. buxifolia, sebagian besar penelitian
berfokus pada penyaringan dan identifikasi senyawa bioaktif. Namun, belum ada penelitian yang
melaporkan efek pelarut pada ekstraksi senyawa bioaktif dari S. buxifolia dan aktivitas biologis ekstrak.
Penelitian ini meneliti efek air suling dan pelarut organik (metanol, etanol, kloroform, diklorometana,
dan aseton) pada hasil ekstraksi dan kandungan fenolik, alkaloid, dan flavonoid. Itu Aktivitas antioksidan
dan peradangan aktif ekstrak yang dihasilkan juga diselidiki.

2. Bahan dan Metode

2.1. Bahan kimia. Metanol (kadar HPLC) (MeOH), etanol (99%) (EtOH), kloroform (kadar HPLC) (CHCl3),
diklorometana (kadar HPLC) (CH2Cl2), aseton (kadar HPLC) (Me2CO), Folin-Ciocalteu, quercetin , asam
galat, asam askorbat, 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), dan pereaksi lainnya adalah analitik (grade
HPLC).

2.2. Identifikasi Bahan Tumbuhan. Cabang S. buxifolia dikumpulkan dari distrik Phu Loc (provinsi Thua
Thien Hue, Vietnam). Pabrik diidentifikasi secara taksonomi. Bahan cabang diperoleh dengan
menghilangkan daun dan duri, mencuci dengan air leding, dan pengeringan pada suhu 60 ° C selama 72
jam. Sampel kering yang dihasilkan digiling menggunakan penggiling (Jehmlich, Jerman) dan digunakan
untuk percobaan lebih lanjut.

2.3. Persiapan Ekstrak Tanaman. Sebuah studi perbandingan dilakukan untuk menyelidiki efek pelarut
pada hasil ekstraksi dan kandungan fenolik, flavonoid, alkaloid, dan terpenoid. Ekstrak. [4] dengan
beberapa modifikasi kecil. Sampel tanaman (1g) direndam dalam pelarut yang berbeda (air suling (H2O),
MeOH, EtOH, CHCl3, CH2Cl2, danMe2CO) di atas: solventratio1: 20 (w / v) selama 24 jam pada 60 ° C.
Campuran kemudian dihomogenisasi pada 60 ° C selama 4 jam menggunakan penghomogen (IKA,
Jerman). Ekstrak kemudian disaring menggunakan kertas filter, dipekatkan pada 60 ° C menggunakan
rotary evaporator (Polylab, India) dan dikeringkan-beku selama 24 jam. Semua ekstrak beku-kering
disimpan pada suhu 4 ° C sebelum percobaan lebih lanjut. Semua percobaan diulang dalam rangkap tiga.

2.4. Penentuan Yield Ekstraksi. Hasil ekstraksi (%) dihitung sebagai berikut:

hasil ekstraksi (%) = berat ekstrak setelah penguapan pelarut dan bekukan pengeringan dibagi berat
kering sampel x 100%

2.5. Penentuan Konten Fenolik, Flavonoid, Alkaloid, dan Terpenoid total. Ekstrak beku-kering (1g) yang
diperoleh oleh masing-masing pelarut dilarutkan dalam etanol absolut (1: 10, b / v) dan selanjutnya
digunakan untuk penentuan fenolik, flavonoid, alkaloid, dan terpenoid.

2.5.2. Total Flavonoid (TFC). Flavonoid total ditentukan dengan menggunakan metode kolorimetri
aluminium klorida yang dimodifikasi dari Chang et al. [15] Secara singkat, campuran ekstrak 2mL dan
0,5mL dari 5% AlCl3 dan 0,5mL dari larutan 1M kalium asetat diinkubasi pada suhu kamar selama 15
menit. Absorbansi dari sampel contoh diukur pada 415nm menggunakan V-730 UV-Vis
spektrofotometer (Jasco, USA). Quercetin digunakan sebagai standar referensi untuk menghitung
konten flavonoid. Total konten flavonoid (TFC) ditunjukkan sebagai setara setara kuercetin (QE) per
gram ekstrak (berat kering). Persamaan kurva standar adalah y 0.0289x + 0.1722, di mana R2 0.995.

2.5.3.Total Alkaloid (TAC). Alkaloid total diukur dengan metode kolorimetri. [16] Satu mililiter ekstrak
tanaman dicuci 3 kali dengan kloroform 10 mL sebelum menyesuaikan pH menjadi netral. Ekstrak
kemudian dicampur dengan 5 mL bufer fosfat dan 5 mL larutan hijau bromocresol. Campuran itu
kemudian diguncang dengan kuat dengan kloroform dan dikumpulkan dalam cairan volumetrik 10 mL.
Absorbansi larutan diukur pada 470nm menggunakan spektrofotometer (V-730 UV-Vis
Spectrophotometer, Jasco, USA). Atropin digunakan sebagai standar referensi untuk menghitung
kandungan alkaloid. Total kandungan alkaloid (TAC) dihitung sebagai mg setara atropin (AE) per gram
ekstrak (berat kering). Persamaan kurva standar adalah y 0,0031x + 0,028, di mana R2 0,9952.

2.5.4. Terpenoid Total (TTeC). Total konten terpenoid dalam ekstraksi kasar dari
S.buxifoliabagianditentukan oleh metode seperti yang dijelaskan oleh Ferguson [18] dengan beberapa
modifikasi kecil. Setelah melakukan pengambilan sampel dengan menggunakan serabut tunggal 24 jam,
ekstrak disaring dan kemudian filtrat diekstraksi dengan minyak eter menggunakan saluran pemisah.
Ekstrak eter diambil sebagai ukuran total terpenoid (TTeC):
total konten terpenoid (%)= berat akhir sampel − berat awal dari berat ekstrak dibagi sampel × 100.
2.5.5. Analisis Teknik Kromatografi Cair Kinerja Tinggi untuk Penentuan Asidon Alkaloid. Asidon alkaloid
ditentukan dengan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC-2160, Aligent, USA) yang
dilengkapi denganUVdetector (AgilentSeries1100) dananEclipsePlusC18 kolom (4,6 × 250mm). Metanol-
asetonitril (20/80, v / v) pada aliran0,5 mL / mntdigunakan dalam mobilobilase.
2.6. Penentuan Aktivitas Antioksidan. Aktivitas antioksidan dari ekstrak S. buxifolia ditentukan dengan
menggunakan DPPH-freeradical scavengingassay yang diuraikan oleh Mahdi-Pour et al. [17] dengan
sedikit modifikasi. Ekstrak diencerkan secara serial sampai konsentrasi 25, 50, 100, 200, dan 500μg / mL.
Satu mL setiap pengenceran dicampur dengan 1 mL larutan DPPH (0,004% inethanol) dan diinkubasi
pada suhu 37 ° C selama 30 menit. Absorbansi dari pencampuran setelah pengukuran diukur pada 1717
menggunakan spektrofotometer (V-730 UV-Vis Spektrofotometer, Jasco, AS) .Aboluteethanoldigunakan
sebagai kontrolegegatif. Aktivitas pemulungan DPPH dihitung sebagai berikut: Aktivitas pemulungan
DPPH (%) A0 − A A0 × 100, (4)

2.7. Penentuan Aktivitas Anti Inflamasi In Vitro. Aktivitas anti-inflamasi in vitro ekstrak S. buxifolia
didirikan oleh penilaian penghambatan denaturasi albumin, stabilisasi membran, dan aktivitas
antiproteinase, sebagaimana dijelaskan oleh studi sebelumnya dengan studi sebelumnya dengan sedikit
modifikasi [20, 21]. Ekstrak beku-kering yang diperoleh dari setiap pelarut secara serial diencerkan
dalam dimetil sulfoksida (DMSO) dari 25 hingga 500μg / mL. Aspirin (100μg / mL, Sigma-Aldrich,
Singapura), obat antiinflamasi standar, digunakan sebagai kontrol positif, sedangkan DMSO digunakan
sebagai kontrol negatif.

2.7.1. Penghambatan Denaturasi Albumin. Untuk menyiapkan campuran reaksi, 1 mL larutan 1% fraksi
albumin berair ditambahkan ke dalam 1 mL ekstrak yang diuji. Reaksi pH yang dicampur dengan air
harus disesuaikan dengan 6, 3 saat diinkubasi selama 20 menit pada 37 ° C dan dipanaskan hingga 51 ° C
selama 30 menit. Setelah pendinginan hingga suhu kamar, absorbansi sampel diukur pada 660nm
menggunakan V-730 UV-Vis spektrofotometer (Jasco, USA). Persentase penghambatan denaturasi
protein dihitung menggunakan persamaan berikut, dan hasilnya dilaporkan sebagai nilai IC50
(konsentrasi yang dibutuhkan untuk penghambatan 50%):

persentase penghambatan (%)

A control – Asample : Acontrol × 100

2.7.2. Aktivitas Antiproteinase.

Satu mL sampel ditambahkan ke dalam campuran reaksi yang mengandung 1mL 20 mM triHCl (pH 7,4)
dan trypsin 0,06mg. Campuran kemudian diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37 ° C sebelum
menambahkan 1 mL 0,7% (b / v) kasein. Campuran reaksi diinkubasi selama 20 menit tambahan dan 2
mL asam perklorat 70% (HClO4) kemudian ditambahkan untuk menghentikan reaksi. Campuran reaksi
disentrifugasi pada suhu 4 ° C, 6.000 rpm, selama 10 menit untuk mengumpulkan supernatan.
Supernatan diukur absorbansi pada 210nm menggunakan spektrofotometer (V-730 UV-Vis
Spectrophotometer, JASCO, USA). Persentase penghambatan proteinase dihitung menggunakan
persamaan berikut, dan hasilnya dilaporkan sebagai nilai IC50: persentase penghambatan (%) A control
– A sample dibagi A control × 100. 2.7.3. Stabilisasi Membran. Sampel darah diperoleh dari seorang
wanita yang menjadi relawan yang tidak menggunakan obat antiinflamasi nonsteroid selama 2 minggu.
Sel darah yang disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit, dicuci dengan salin normal (3 kali), dan
dilarutkan sebagai suspensi 10% dalam salin normal. Untuk melakukan uji hemolisis yang diinduksi oleh
panas, 1 mL sampel dicampur dengan 1 mL dari 10% tekanan sel darah merah dan inkubasi selama 30
menit 56 ° C. Campuran tersebut kemudian didinginkan dan disentrifugasi pada 2500rpm selama 5
menit untuk mendapatkan supernatant. Semua analisis dilakukan setidaknya dalam rangkap tiga, dan
nilai-nilai ini kemudian ditampilkan sebagai nilai bersama dengan derivasi standarnya (± SD). Perangkat
lunak Minitab digunakan untuk menganalisis data. Perbandingan statistik adalah dilakukan dengan
analisis varians (ANOVA) uji perbandingan berganda Tukey, dan nilai p <0,05 dianggap tepat. Analisis
analisis komponensial (PCA) dilakukan pada dataset yang berisi konten dari masing-masing kelompok
komponen kimia (fenolik, flavonoid, alkaloid, dan terpenoid) sebagai serta nilai penghambatan aktivitas
biologis (antioksidan dan antiinflamasi in vitro) ekstrak kasar cabang S. buxifolia. Komponen utama (PC)
dihitung menggunakan matriks korelasi.

3. Hasil

3.1. Efek Pelarut yang Berbeda pada Hasil Ekstraksi. Pelarut (methanol, ethanol, chloroform,
dichloromethane, acetone) tidak terpengaruh efek samping pada hasil ekstraksi S. buxifolia. Hasil
menunjukkan perbedaan yang signifikan dalam hasil ekstraksi menggunakan pelarut yang berbeda. Di
antara pelarut yang diuji, metanol menghasilkan hasil ekstraksi tertinggi (33,2%), diikuti oleh air suling
(27,0%), etanol (12,2%), aseton (8,6%), kloroform (7,2%), dan diklorometana (4,9%) ( Gambar 1),
menunjukkan bahwa efisiensi ekstraksi berpihak pada siswa yang sangat tinggi.

3.2. Efek Pelarut pada Isi Fenolik, Flavonoid, Alkaloid, dan Terpenoid. Ekstrak terlarut yang kuat dari
cabang S. buxifolia digambarkan pada Gambar 2 dan Tabel 1. Perbedaan yang signifikan dalam
kandungan komponen bioaktif (mis., Fenolat, flavonoid, alkaloid, terpenoid) di dalam penelitian. Analisis
komponen utama (PCA) mengkonfirmasi variasi kandungan senyawa-senyawa tersebut di dalam ekstrak
dari S.buxifolia berikut menggunakan pelarut yang berbeda (Gambar 2). PC Menggunakan konten
konstituen fitokimia individu diambil 92,0% dari total variansi pada plot skor yang dibangun dengan dua
PC pertama (PC1 76,5% dan PC1 76,5%) %). Sebagian besar ekstraksi pelarut berkerumun di satu sisi plot
sebaran kecuali MeOH dan EtOH (Gambar 2).
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, MeOH sangat terpisah dari pelarut yang diuji lainnya.
Pengaruh pelarut yang berbeda pada komponen kimia dari cabang S. buxifolia juga dianalisis oleh
ANOVA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa metanol menunjukkan pelarut optimal untuk
mengekstraksi komponen bioaktif dari cabang S. buxifolia (p <0,001) karena kandungan fenolik tertinggi
(13,36 mg GAE / g DW), flavonoid (1,92 mg QE / g DW), alkaloid (1,40mg AE / g DW), dan terpenoid
(1,25%, b / b) diperoleh dengan menggunakan pelarut ini. Air suling juga menunjukkan efisiensi tinggi
dalam ekstraksi senyawa fenolik dengan 5,95 mg GAE / g DW fenolik diekstraksi. Namun, kadar
flavonoid, alkaloid, dan terpenoid yang rendah diperoleh dalam ekstrak air. Berbeda dari air suling,
meskipun etanol menghasilkan kadar fenolik yang lebih rendah (3,60mg GAE / g DW) daripada air suling
(5,95mgGAE / gDW), ini larut dalam ekstrak yang lebih tinggi (1,34mg AE / g DW) serta terpenoid (0,97%,
berat / berat) ) dibandingkan dengan ekstrak air suling (0,16mg AE / g DW dan 0,43%, b / b, masing-
masing). Penelitian ini juga menemukan bahwa diklorometana dan kloroform memiliki kandungan
terpenoid total tinggi di cabang S. buxifolia (masing-masing 0,74% dan 0,46% b / b). Sebaliknya,
kandungan fenolik, flavonoid, dan alkaloid terendah dalam ekstrak kasar ditunjukkan oleh pelarut ini.
Aseton juga secara efektif mengekstraksi fenolik (2,65mg GAE / g DW), flavonoid (0,72mg QE / g DW),
alkaloid (0,88mg AE / g DW), dan terpenoid (0,47%, b / b).
3.3. Dampak Ekstraksi Larutan pada Antioksidan dan Inflasi Anti Inflamasi pada S. buxifolia. Untuk
menentukan pengaruh pelarut yang berbeda terhadap antioksidan dan kapasitas antiinflamasi in vitro
cabang S. buxifolia, empat uji penghambatan (yaitu, aktivitas pemulungan DPPH, denaturasi albumin,
penghambatan proteinase, dan stabilisasiembran) dari ekstrak kasar yang diukur dan diindeks dalam
nilai IC50 .Hasil penelitian menunjukkan bahwa pelarut yang digunakan secara signifikan mempengaruhi
antioksidan dan kapasitas antiinflamasi in vitro cabang S. buxifolia (p <0,001; Gambar 3; Tabel 2 dan 3).
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3, dua komponen pertama menyumbang 90,5% dari variasi yang
diamati (PC1 78,5% dan PC2 12,0%). Sebagian besar uji aktivitas biologis yang teruji mengungkapkan
bahwa konsentrasi penghambatan 50% ekstrak kasar S. buxifolia dalam urutan meningkat dengan
pelarut yang sesuai digunakan: H2O <CHCl3 <CH2Cl2 <CH2Cl2 <Me2CO <EtOH <MeOH, kecuali dalam
aktivitas penghambatan protease. Metanol dan EtOH sangat terpisah dalam hasil PCA (Gambar 3). 3.3.1.
Aktivitas Antioksidan Ekstrak S. buxifolia. Aktivitas antioksidan dari ekstrak S. buxifolia yang berbeda
diindeks oleh aktivitas pembersihan radikal DPPH. Seperti diilustrasikan dalam Tabel 2, ekstrak yang
berbeda memiliki berbagai aktivitas freeradical scavenging (p <0,001). Di antara ekstrak yang diuji,
ekstrak metanol adalah ekstrak yang paling poten dengan nilai IC50 16,99 μg / mL. Dibandingkan dengan
ekstrak metanol, meskipun ekstrak etanol dan ekstrak kloroform menunjukkan aktivitas pemulungan
radikal yang lebih rendah dengan nilai IC50 masing-masing 27,08 μg / mL dan 33,44 μg / mL, ekstrak
tersebut memiliki aktivitas pemulungan radikal yang secara signifikan lebih tinggi daripada asam
askorbat (IC50 50,94 μg / mL ).
3.3.2. Aktivitas Anti-Peradangan (1) Inhibisi dari Alenaturasi Denaturasi .Peningkatan jenuh adalah
proses oleh mana zat yang terstruktur dengan adanya senyawa lain, tekanan eksternal, atau panas,
sehingga memimpin fungsi protein dan fungsi biologis. Oleh karena itu, denaturasi protein jaringan
diakui sebagai penanda inflamasi [22]. Dalam penelitian ini, aktivitas antiinflamasi ekstrak S. buxifolia in
vitro diukur untuk aktivitas penghambatan terhadap denaturasi protein. Tabel 3 menyajikan efek
penghambatan ekstrak S. buxifolia berbeda pada denaturasi protein. Seperti yang ditunjukkan pada
Tabel 3, aktivitas penghambatan tertinggi terhadap pematangan jenuh yang diamati pada ekstrak
metanol (IC50 28,86 μg / mL), diikuti oleh ekstrak etanol dan ekstrak aseton dengan nilai IC50 masing-
masing 35 μg / mL dan 91,6 μg / mL. Ekstrak ini menunjukkan perlindungan protein yang secara
signifikan lebih tinggi daripada aspirin, suatu obat antiinflamasi standar, karena aspirin hanya
menghambat 33,61% dari populasi manusia yang mengalami pematangan pada konsentrasi 100 μg / mL.
Namun, ekstrak diklorometana, kloroform, dan air menunjukkan kemampuan yang rendah untuk
menghambat denaturasi albumin dengan nilai IC50 masing-masing sebesar 592,00μg / mL, 623.08μg /
mL, dan 769.67μg / mL.

(2) Aktivitas Antiproteinase. Proteinase terlibat dalam reaksi inflamasi karena proteinase leukosit
memainkan peran penting dalam perkembangan kerusakan jaringan selama reaksi inflamasi. Akibatnya,
inhibitor proteinase dapat memberikan tingkat perlindungan yang signifikan. Dalam penelitian ini,
aktivitas anti-inflamasi ekstrak S. buxifolia adalah diukur sebagai diindeksikan oleh aktivitas detrotein
rendah. Dipresentasikan dalam Tabel 3, aktivitas tertinggi yang meningkatkan toksinotein disimpan
dalam ekstrak metanol dengan IC50 414,29 μg / mL, diikuti oleh ekstrak etanol (IC50 418,80 μg / mL),
ekstrak aseton (IC50 575,5 g / mL) air , ekstrak kloroform (IC50 611.75μg / mL), dan ekstrak
diklorometana (IC50 672.25μg / mL). Namun, semua ekstrak ini menunjukkan aktivitas penghambatan
yang lebih rendah terhadap proteinase daripada aspirin, yang menghambat 34,17% proteinase pada
konsentrasi 100μg / mL. (3) Stabilisasi Membran. Dalam studi ini, efek ekstraksi S.buxifolia stablilitas
membrane dan kemampuan untuk melindungi sel darah merah dari hemolisis akibat panas. Seperti
ditunjukkan pada Tabel 3, methanol menunjukkan penghambatan tertinggi terhadap hemolisis yang
diinduksi panas dengan IC50 sebesar 319μg / mL. Selain itu, ekstrak etanol secara efektif melindungi
membran terhadap hemolisis yang disebabkan oleh panas. Namun, aktivitas perlindungan rendah
diamati pada ekstrak lain. Dibandingkan dengan ekstrak S. buxifolia, aspirin menunjukkan perlindungan
29,26% pada konsentrasi 100μg / mL. Penelitian ini memberikan bukti nyata untuk menstabilkan efek
penstabil S.buxifoliamengeksploitasisebagai mekanisme tambahan untuk aktivitas antiinflamasi mereka.
3.4. Analisis HPLC dari Ekstrak Yang Diperkaya Cabang S. buxifolia. Analisis HPLC akan dikeluarkan
menggunakan ekstrak kaya cabang S. buxifolia, terutama dalam ekstrak metanol. 9 (10H) -Acridanone
diaplikasikan sebagai standar referensi dalam penelitian ini. Dari hasil HPLC (Gambar 4), senyawa ini
ditemukan dalam ekstrak metanol cabang S. buxifolia (0,016% b / b; waktu retensi: 5,108 menit). Selain
itu, beberapa puncak lain juga terdeteksi dalam ekstrak, yang selanjutnya dapat diidentifikasikan untuk
identifikasi dan juga untuk menyelidiki sifat-sifat mereka.
4. Diskusi

Penggunaan senyawa bioaktif dari sumber alami sebagai makanan fungsional yang mencegah
kesehatan manusia dan berbagai penyakit semakin menarik perhatian. Dalam penelitian ini, S. buxifolia
digunakan sebagai sumber alami senyawa metabolit sekunder seperti fenolik, alkaloid, flavonoid, dan
terpenoid. Untuk mendapatkan senyawa bioaktif dari tanaman, ada beberapa langkah termasuk
penggilingan, penggilingan, homogenisasi, dan ekstraksi [4]. Di antara langkah-langkah ini, ekstraksi
adalah langkah penting untuk memulihkan dan memecah senyawa aktivitas dari bahan Efisiensi
ekstraksi sangat dipengaruhi oleh metode ekstraksi, suhu, waktu ekstraksi, komposisi phytochemical,
dan pelarut yang digunakan [13,14,23].

Menurut hasil dari para penulis ini, di bawah kondisi ekstraksi yang sama, pelarut diakui sebagai salah
satu parameter yang paling penting. Air yang terdistribusi yang tidak digunakan dan pelarut organik
(metanol, etanol, kloroform, diklorometana, dan aseton) diekstraksi senyawa bioaktif dari cabang S.
buxifolia. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perbedaan pelarut yang dihasilkan menghasilkan variasi
ekstraksi yang berlebihan. ini karena perbedaan dalam polimeritas pelarut ekstraksi dapat menyebabkan
variasi yang luas pada tingkat senyawa bioaktif dalam ekstrak. Hasil ekstraksi yang lebih tinggi diamati
dalam ekstrak metanol, ekstrak air suling, dan ekstrak etanol dibandingkan dengan ekstrak kloroform,
diklorometana, dan aseton, menunjukkan bahwa efisiensi ekstraksi lebih disukai pelarut yang sangat
polar. Hasil ini konsisten dengan hasil ekstraksi beberapa tanaman obat lainnya [24]. Ini bisa jadi karena
bahan tanaman mengandung tingkat tinggi senyawa polar yang larut dalam pelarut dengan polaritas
tinggi seperti air, metanol, dan etanol. Untuk lebih memahami efek pelarut pada hasil ekstraksi, analisis
lebih lanjut dilakukan untuk mengukur kandungan senyawa bioaktif dalam ekstrak. Sesuai dengan hasil
ekstraksi, kandungan senyawa bioaktif (fenolik, alkaloid, flavonoid, dan terpenoid) bervariasi di antara
ekstrak. Tingkat fenolat, flavonoid, alkaloid, dan terpenoid tertinggi diamati dalam ekstrak metanol,
sehingga menghasilkan hasil ekstraksi ekstrak metanol tertinggi. Ini dapat disebabkan oleh kelarutan
yang lebih tinggi dari ini senyawa dalam metanol dibandingkan pelarut lain yang diuji [4]. Secara
keseluruhan, temuan ini menunjukkan bahwa metanol adalah pelarut terbaik untuk mengekstraksi
senyawa bioaktif dari cabang S. buxifolia. Pelarut ekstraksi memiliki efek terhadap hasil ekstraksi dan
kandungan senyawa bioaktif, sehingga secara signifikan mempengaruhi aktivitas biologis ekstrak [13, 14,
23]. Dalam penelitian ini, ekstrak yang diperoleh dari pelarut berbeda dipelajari untuk aktivitas
antioksidannya dengan menggunakan uji aktivitas pembersihan DPPH. Di antara ekstrak yang diuji,
ekstrak metanol adalah yang paling kuat dalam hal nilai IC50 dari aktivitas pembersihan DPPH. Ini bisa
jadi karena ekstrak ini mengandung senyawa fenolik, flavonoid, alkaloid, danpenpenoid tingkat tertinggi
[22,24,25]. Senyawa itu memiliki aktivitas antioksidan yang kuat dan akibatnya melindungi tubuh
manusia dari kerusakan oksidatif yang terjadi pada pembasmi hama yang bersifat radikal oksida, radikal
peroksida, hipoklorida, hipoklorida. asam, peroksinitrit, dan superoksida oksidasi [25] .Tampak jelas,
ekstrak metanol S. buxifolia menunjukkan aktivitas pemulungan DPPH tiga kali lebih tinggi dibandingkan
dengan asam askorbat. buxifolia adalah agen antioksidan potensial untuk pengembangan obat lebih
lanjut. Oleh karena itu, upaya telah dilakukan dalam beberapa tahun terakhir untuk mencari agen anti-
inflamasi baru dari sumber-sumber alami karena mereka umumnya diyakini lebih aman dan lebih
toleran terhadap risiko peradangan gononvensional [6-8]. Dalam penelitian ini, aktivitas antiinflamasi in
vitro dari ekstrak S. buxifolia dievaluasi, diindeks melalui aktivitas pelindung ekstrak terhadap denaturasi
albumin karena denaturasi protein jaringan adalah salah satu dari penyebab utama peradangan pada
serat. Selain itu, ekstrak ini ditemukan secara signifikan lebih tinggi melindungi protein dengan
protektifitas dibandingkan dengan aspirin, menunjukkan bahwa ekstrak S. buxifolia memiliki potensi
sebagai agen antiinflamasi baru. Aktivitas anti-peradangan ekstrak S. buxifolia juga diindeks melalui
aktivitas antiproteinase karena proteinase terlibat dalam peradangan. Hasil menunjukkan bahwa ekstrak
S. buxifolia menunjukkan aktivitas penghambatan potensial terhadap proteinase. Selain itu, stabilisasi
membran RBC dipelajari sebagai indeks lebih lanjut dari aktivitas antiinflamasi ekstrak S. buxifolia karena
membran RBC memiliki struktur yang mirip dengan membran lisosom. Proses peradangan melisiskan
lisosom dan menghasilkan pelepasan senyawa yang selanjutnya menyebarkan peradangan dan
akibatnya menghasilkan berbagai gangguan. Stabilisasi membran adalah proses menjaga integritas
membran lisosom terhadap hemolisis yang dipicu oleh panas, yang mencegah pelepasan cairan dan
protein serum ke dalam jaringan yang disebabkan oleh mediator inflamasi, sehingga menghambat
respon inflamasi [26]. Dalam penelitian ini,ekstrak metanolice S.buxifoliae ect ectivelyprotected
membran RBC terhadap hemolisis yang disebabkan panas, menunjukkan bahwa ekstrak dapat
menstabilkan membran lisosom dengan baik. Ada kemungkinan bahwa senyawa bioaktif dalam ekstrak
melindungi membran lisosom terhadap cedera dengan mengganggu aktivasi fosfolipase. Hasilnya
memberikan bukti untuk aktivitas anti-inflamasi ekstrak S. buxifolia melalui efek stabilisasi membran.
Aktivitas anti-peradangan ekstrak metanol mungkin disebabkan oleh konsentrasi fenolik, flavonoid,
alkaloid, dan terpenoid yang kuat dalam ekstrak. Penelitian telah menunjukkan bahwa senyawa ini
memiliki aktivitas antiradang yang kuat [27]. Temuan ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol dari S.
buxifolia adalah ekstrak yang paling potensial, dan ini adalah sumber yang menjanjikan dari agen anti-
peradangan dan antioksidan.

5. Kesimpulan

Penelitian ini melaporkan ekstraksi cabang S. buxifolia menggunakan pelarut yang berbeda. Di antara
pelarut yang diuji, metanol adalah pelarut terbaik untuk mengekstraksi senyawa bioaktif dari S. buxifolia
karena menghasilkan hasil ekstraksi tertinggi dan kandungan fenolik, alkaloid, flavonoid, dan terpenoid
tertinggi. Aktivitas antioksidan dan antiinflamasi ekstrak secara in vitro juga diselidiki. Dibandingkan
dengan ekstrak lainnya, ekstrak metanol S. buxifolia menunjukkan yang tertinggi antioksidan dan
aktivitas antiinflamasi in vitro. Hasil-hasil ini menunjukkan bahwa metanol adalah pelarut terbaik untuk
ekstraksi senyawa bioaktif dari cabang S. buxifolia dan metanol yang digunakan untuk menyedot
antioksidan dan bahan antiinflamasi untuk industri nutraceutical dan industri farmasi.

Ketersediaan

Data Data yang digunakan untuk mendukung temuan penelitian ini tersedia dari penulis yang sesuai
atas permintaan. Konflik

Kepentingan Para penulis

menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Ucapan Terima Kasih

Penulis berterima kasih kepada Universitas Ton Duc Thang untuk mendukung dengan laboratorium
untuk melakukan proyek ini.

Sumber

[1] H. C. Nguyen, K.-H. Lin, M.-Y. Huang et al., “Antioxidant activities of the methanol extracts of various
parts of Phalaenopsis orchids with white, yellow, and purple flowers,” Notulae Botanicae Horti
Agrobotanici Cluj-Napoca, vol. 46, no. 2, pp. 457–465, 2018.

[2] G.-C. Yen, C.-S. Chen, W.-T. Chang et al., “Antioxidant activity and anticancer effect of ethanolic and
aqueous extracts of the roots of Ficus beecheyana and their phenolic components,” Journal of Food and
Drug Analysis, vol. 26, no. 1, pp. 182–192, 2018.

[3] U.Złotek,S.Mikulska,M.Nagajek,andM.´Swieca,“Theeffect of different solvents and number of

extraction steps on the polyphenol content and antioxidant capacity of basil leaves (Ocimum basilicum
L.) extracts,” Saudi Journal of Biological Sciences, vol. 23, no. 5, pp. 628–633, 2016.

[4] Q.D.Do,A.E.Angkawijaya,P.L.Tran-Nguyenetal.,“Effect of extraction solvent on total phenol content,

total flavonoid content, and antioxidant activity of Limnophila aromatica,”
JournalofFoodandDrugAnalysis,vol.22,no.3,pp.296–302, 2014.

[5] Y.Zhao,S.Chen,Y.Wang,C.Lv,J.Wang,andJ.Lu,“Effectof drying processes on prenylflavonoid content

and antioxidant activity of Epimedium koreanum Nakai,”Journal of Food and Drug Analysis, vol. 26, no.
2, pp. 796–806, 2018.

[6] C. V. Moreno-Quir´os, A. S´anchez-Medina, M. V´azquezHern´andez, A. G. Hern´andez Reyes, and R.

V. Garc´ıaRodr´ıguez, “Antioxidant, anti-inflammatory and antinociceptive potential of Ternstroemia
sylvatica Schltdl. & Cham,” Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, vol. 10, no. 11, pp. 1047–1053,
2017.
[7] M. Shi, X. Guo, Y. Chen, L. Zhou, and D. Zhang, “Isolation
andcharacterizationof19polymorphicmicrosatellitelocifor
Atalantiabuxifolia(Rutaceae),atraditionalmedicinalplant,” Conservation Genetics Resources, vol. 6, no. 1,
pp. 857–859, 2014. [8] T. Zhang, Y.-B. Zeng, Z.-K. Guo et al., “A new tetranortriterpenoid fromthe rootsof
Atalantia buxifolia,”Journal of Asian Natural Products Research, vol.14, no. 6, pp. 581–585, 2012.

[9] F. Shan, Y.-Q. Yin, F. Huang, Y.-C. Huang, L.-B. Guo, and Y.-F. Wu, “A novel acridone akaloid from
Atalantia buxifolia,” Natural Product Research, vol. 27, no. 21, pp. 1956–1959, 2013.

[10] T.-S. Wu, C.-M. Chen, and F.-W. Lin, “Constituents of the
rootbarkofSeveriniabuxifoliacollectedinhainan,”Journalof Natural Products, vol. 64, no. 8, pp. 1040–
1043, 2001.

[11] Y.-Y. Yang, W. Yang, W.-J. Zuo et al., “Two new acridone alkaloids from the branch of Atalantia
buxifolia and their biological activity,” Journal of Asian Natural Products Research, vol. 15, no. 8, pp.
899–904, 2013.

[12] F.-R. Chang,P.-S. Li, R. HuangLiu et al., “Bioactive phenolic

componentsfromthetwigsofAtalantiabuxifolia,”Journalof Natural Products, vol. 81, no. 7, pp. 1534–
1539, 2018.

[13] N. Turkmen, F.Sari, and Y. S. Velioglu, “Effects of extraction solvents on concentration and
antioxidant activity of black andblackmateteapolyphenolsdeterminedbyferroustartrate andFolin-
Ciocalteumethods,”FoodChemistry,vol.99,no.4, pp. 835–841, 2006.

[14] S.McDonald,P.D.Prenzler,M.Antolovich,andK.Robards, “Phenolic content and antioxidant activity of

olive extracts,” Food Chemistry, vol. 73, no. 1, pp. 73–84, 2001.

[15] C.Chang,M.Yang,H.Wen,andJ.Chern,“Estimationoftotal flavonoid content in propolis by two

complementary colorimetric methods,”Journal of Foodand DrugAnalysis,vol.10, pp. 178–182, 2002.

[16] M. Ajanal, M. Gundkalle, and S. Nayak, “Estimation of total alkaloid in Chitrakadivati by UV-
Spectrophotometer,” Ancient Science of Life, vol. 31, no. 4, pp. 198–201, 2012.

[17] B. Mahdi-Pour, S. L. Jothy, L. Y. Latha, Y. Chen, and S. Sasidharan, “Antioxidant activity of methanol
extracts of different parts of Lantana camara,” Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, vol. 2, no.
12, pp. 960–965, 2012.

[18] N. M. Ferguson, “A textbook of pharmacognosy,” California Medicine, vol. 72, no. 1, p. 77, 1956.
[19] H. K. Hamid and E. J. Kadhim, “Extraction, isolation and characterization of Pyrrolizidine Alkaloids
present in Senecio vulgaris Linn grown in Iraq,” Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, vol. 5,
no. 6, pp. 28–37, 2016.
[20] O. O. Oyedapo and A. J. Famurewa, “Antiprotease and membrane stabilizing activities of extracts of
fagara zanthoxyloides, olax subscorpioides and tetrapleura tetraptera,” International Journal of
Pharmacognosy, vol. 33, no. 1, pp. 65–69, 2008.

[21] R. S. Eshwarappa, Y. L. Ramachandra, S. R. Subaramaihha, S. G. Subbaiah, R. S. Austin, and B. L.

Dhananjaya, “AntilipoxygenaseactivityofleafgallextractsofTerminaliachebula (gaertn.) retz.
(Combretaceae),” Pharmacognosy Research, vol. 8, no. 1, pp. 78–82, 2016.

[22] J. C. Ruiz-Ruiz, A. J. Matus-Basto, P. Acereto-Escoffie´, and M. R. Segura-Campos, “Antioxidant and

anti-inflammatory activities of phenolic compounds isolated from Melipona beecheii honey,” Food and
Agricultural Immunology, vol. 28, no. 6, pp. 1424–1437, 2017.

[23] T. V. Ngo, C. J. Scarlett, M. C. Bowyer, P. D. Ngo, and Q. V. Vuong, “Impact of different extraction
solvents on bioactive compounds and antioxidant capacity from the root of Salacia chinensis L.,” Journal
of Food Quality, vol. 2017, Article ID 9305047, 8 pages, 2017.

[24] P.Kuppusamy,M.M.Yusoff,N.R.Parine,andN.Govindan, “Evaluation of in-vitro antioxidant and

antibacterial propertiesofCommelinanudifloraL.extractspreparedbydifferent polar solvents,” Saudi
Journal of Biological Sciences, vol. 22, no. 3, pp. 293–301, 2015.

[25] P.-Y.Chao,S.-Y.Lin,K.-H.Linetal.,“Antioxidantactivityin extracts of 27 indigenous Taiwanese

vegetables,” Nutrients, vol. 6, no. 5, pp. 2115–2130, 2014.

[26] S.A.Oyeleke,A.M.Ajayi,S.Umukoro,A.O.Aderibigbe,and O. G. Ademowo, “Anti-inflammatory activity

of Theobroma cacao L. stem bark ethanol extract and its fractions in experimental models,” Journal of
Ethnopharmacology, vol. 222, pp. 239–248, 2018.

[27] T. K.-D. Hoang, T. K.-C. Huynh, and T.-D. Nguyen, “Synthesis, characterization, anti-inflammatory
and antiproliferative activity against MCF-7 cells of O-alkyl and O-acyl flavonoid derivatives,” Bioorganic
Chemistry, vol. 63, pp. 45–52, 2015.