FITOKIMIA 1

TIM DOSEN FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS INDONESIA
 Pemurnian
Senyawa Metabolit Sekunder
apt. Roshamur Cahyan Forestrania, M.Sc., Ph.D.
Outline
• Definisi Pemunian senyawa
• Tujuan Pemurnian senyawa
• Metode Pemurnian senyawa
• Pengujian kemurnian senyawa
 Proses memperoleh
senyawa metabolit murni
1. Pengumpulan
2. Pengeringan
3. Penyerbukan
4. Ekstraksi
5. Filtrasi
6. Penguapan ekstrak
7. Pengeringan ekstrak
8. Pemisahan (partisi dan/ atau fraksinasi)
9. Pemurnian
10. Pengujian kemurnian
11. Identifikasi & Elusidasi struktur
 Garcinia cowa
Proses Isolasi
Simplisia → Ekstrak

Pemisahan
Fraksi-Fraksi → Isolat

Ekstraksi

Ekstrak Fraksi Subfraksi Isolat

 Garcinia cowa
Proses Isolasi
Pemurnian adalah proses pemisahan
campuran senyawa dari pengotornya
hingga diperoleh senyawa murni
(tunggal) dari senyawa yang dimaksud

Tujuan senyawa murni

95-100%

Ekstraksi
Purifikasi

Ekstrak Fraksi Subfraksi Isolat

 Rekristalisasi
Sublimasi
Metode
Pemurnian Dekantasi
Senyawa
Destilasi
Kromatografi
Rekristalisasi
• Metode yang paling umum
untuk memurnikan senyawa
organik padat dari suatu
cairan.
• Perinsip: senyawa padat murni
dilarutkan dalam pelarut dan
kemudian dibiarkan perlahan-
lahan mengkristal → molekul-
molekul dari senyawa lain akan
terlarut dalam larutan →
senyawa padat murni
 Rekristalisasi
Pengertian Prinsip Tujuan
• Teknik • Perbedaan kelarutan • Memurnikan suatu
pemurnian atau antara zat yang
dimurnikan dengan zat/senyawa
pemisahan zat
padat
zat pencemarnya dengan
• Kelarutan suatu zat membentuk suatu
• Dilakukan meningkat dengan
dengan cara: kristal dari
peningkatan suhu
mengkristalkan larutan/solut
• Saat suhu turun
kembali zat kristal terbentuk.
pembawanya.
setelah Senyawa dalam • Memisahkan suatu
dilarutkan dalam bentuk kristal
pelarut yang campuran tertentu
memiliki afinitas yang
sesuai pda suhu lebih besar pada dari larutan
tertentu senyawa sejenis, multikomponen
sehingga dapat sehingga
terjadi proses
pemisahan dari didapatkan produk
pengotor. dalam bentuk
kristal.
Rekristalisasi

Sarker, S. D., dan Nahar, L. (2012) Natural Product Isolation 3rd Edition. Heidelberg, London: Springer Science+Business Media.
 Piper nigrum

Kristal piperin
Pure Piperine Xtals from black pepper. https://mycotopia.net/topic/57764-pure-piperine-xtals-from-black-pepper-pix/. Diakses 27 Oktober 2021
Sublimasi
• Sublimasi adalah proses terjadinya konversi bentuk
padatan dari suatu senyawa menjadi bentuk gas tanpa
melalui fase cair.
• Proses ini terjadi Ketika terdapat zat padat dengan
tekanan uap relative tinggi pada suhu dibawah titik
lelehnya.
• Proses: senyawa dimasukkan pada suatu system vakum,
pada tekanan rendah padatan akan membentuk gas dan
terkondensasi menjadi senyawa murni
• Diaplikasikan untuk pemisahan senyawa campuran dalam
bentuk padatan yang memiliki perbedaan titik didih yang
besar. Ditujukan untuk memurnikan senyawa organik
padat yang dapat menguap.
Sublimasi

Experiment 5 - Extraction of Caffeine from Tea. ochemonline.pbworks.com/f/05_caffeine.pdf. Diakses 27 Oktober 2021. Sumber asal:
http://ull.chemistry.uakron.edu/organic_lab/cola/ The extraction of caffeine from 10 mL of cola syrup
 Sublimasi

Experiment 2 – Isolation and Sublimation of Caffeine from Tea Leaves. cpb-us-e1.wpmucdn.com/sites.ucsc.edu/dist/9/291/files/2015/11/Exp-2-Isolation-and-

Sublimation-of-Caffeine-from-Tea-Leaves-4.pdf. Diakses 27 Oktober 2021
 Camellia sinensis Coffea sp.

Hasil Sublimasi Kafein

https://twitter.com/mrwalkerlasa/status/1055274027554627585. Diakses 27 Oktober 2021
 Dekantasi
• Dekantasi atau pengendapan adalah proses pemisahan senyawa
berdasarkan sedimentasi (proses pemisahan campuran berdasar gaya
gravitasi) dan pemindahan pada wadah lain.
• Digunakan untuk memisahkan senyawa dalam bentuk cairan dan
padatan yang tidak bercampur.
• Komponen senyawa yang dimurnikan harus memiliki perbedaa masa
jenis dengan senyawa pengotornya.
• Metode ini kurang efektif untuk pemurnian karena masih dimungkinkan
adanya campuran senyawa dalam cairan yang tertinggal disedimen
ataupun sebaliknya.

Abubakar, A. R., & Haque, M. (2020). Preparation of Medicinal Plants: Basic Extraction and Fractionation Procedures for Experimental Purposes. Journal of
pharmacy & bioallied sciences, 12(1), 1–10.
Sedimentasi & Dekantasi

Sediments

Clear liquid

Sediments

Sedimentasi Dekantasi
Separation of Substances. https://www.learncbse.in/separation-of-substances-class-6-extra-questions/ Diakses 27 Oktober 2021
 Uncaria gambir

Purifikasi katekin dengan

pengendapan
Ferdinal, N. (2014). A Simple Purification Method of Catechin from Gambier. International Journal on Advanced Science
Engineering Information Technology, 4(6), 53-55
 Destilasi
• Destilasi atau penyulingan adalah proses pemisahan atau pemurnian
suatu kompnen yang mudah menguap dari campurannya berdasar atas
perbedaan titik didih (kemudahan menguap).
• Prinsip: Jika campuran dipanaskan maka komponen yang titik didihnya
lebih rendah akan menguap lebih dulu dan akan terpisah dengan
komponen lain sesuai titik didihnya, setelah itu diikuti dengan proses
kondensasi dari uap yang terbentuk. Hasil yang diperoleh kemudian di
tampung dan terpisah berdasar atas titik didihnya.
• Alat: Destilasi Fraksional
• Contoh: pemisahan senyawa hidrokarbon seperti pada minyak mentah,
citral dan eukaliptol.

Abubakar, A. R., & Haque, M. (2020). Preparation of Medicinal Plants: Basic Extraction and Fractionation Procedures for Experimental Purposes. Journal of
pharmacy & bioallied sciences, 12(1), 1–10.
 Destilasi Sederhana

Pentagon Chemistry - Illustrative and Explanative Series. https://www.researchgate.net/publication/344041237_Pentagon_Chemistry_-

_Illustrative_and_Explanative_Series/figures?lo=1&utm_source=google&utm_medium=organic. Diakses 27 Oktober 2021
 Destilasi Fraksional

Balaji, G. N., et al. (2017). Analysis of Various Liquid Components under Different Temperature and Density Constraints Pertaining To Fractional
Distillation. Imperial Journal of Interdisciplinary Research (IJIR), 3(6), 664-669
 Kromatografi
• Kromatografi adalah teknik pemisahan suatu komponen kimia dari suatu
campuranya berdasar atas ukuran, bentuk, dan muatan
• Kromatografi melibatkan dua komponen utama:
• Fase gerak yang merupakan solven untuk pemisahan
• Fase diam seperti silika gel atau Sephadex
• Beberapa mekanisme yang dapat digunakan untuk pemisahan senyawa secara
kromatografi adalah adsorpsi, partisi, afinitas, ion exchange dan size exclusion
• Baik tidaknya hasil pemisahan/ pemurnian tergantung dari kondisi atau sistem
kromatografi yang digunakan, termasuk pemilihan fase diam dan fase gerak
• Teknik kromatografi: HPLC, kromatografi kolom

Abubakar, A. R., & Haque, M. (2020). Preparation of Medicinal Plants: Basic Extraction and Fractionation Procedures for Experimental Purposes. Journal of
pharmacy & bioallied sciences, 12(1), 1–10.
Uji kemurnian
Profil KLT
• Pengembangan dengan 3 system pelarut, KLT 2 D.

Titik leleh
• Untuk isolat padat

Titik didih
• Untuk isolat cair

Rotasi optik
• Untuk senyawa aktif optik

HPLC
• Peak yang muncul pada kromatogram

NMR
• Peak dan nilai integrasi peak

MS
• Molecular ion peak dan pola fragmentasi
 KLT dua dimensi A (kloroform: diklorometana = 5:1)
B (etanol: etil asetat: n-heksana = 2:3:2)
Eluen etanol: etil asetat: nheksana (2:3:2) C (etanol: kloroform: n-heksana = 2: 2: 1)
etanol: kloroform: n-heksana (2: 2: 1)

Susmayantia, W., Fachriyaha, E., Kusrinia, D. Isolasi, Identifikasi dan Uji Sitotoksik Senyawa Flavonoid dariEkstrak Etil Asetat Daun Binahong
(Anredera cordiforlia (Tenns) Stennis). Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15(3), 88-93
Terimakasih