Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

242

3.3
Persiapan Steroid Baru dengan Kimia
Mikrobiologi dan Kombinatorial

Christoph Huwe, Hermann Künzer dan Ludwig Zorn

3.3.1
pengantar

Steroid adalah perancah aktif farmakologis yang penting [1]. Relevansi

transformasi mikrobiologis untuk produksi obat steroid dan hormon pertama
kali diakui ketika 11 tahunSebuah-hidroksilasi progesteron olehRhizopus arrhizus
danR. nigrikansdikembangkan oleh Murray dan Peterson [2]; ini menghasilkan
peningkatan yang luar biasa dari sintesis kortikosteroid. Mulai dari asam
deoksikolat diperlukan 31 langkah untuk sintesis kimia kortison, sedangkan
prosedur mikrobiologis mulai dari diosgenin mempersingkat sintesis menjadi 13
langkah [3]. Sejak itu, transformasi mikrobiologi telah menemukan aplikasi luas
dalam sintesis obat-obatan dan produk alami [4].
Dalam kimia mikrobiologi seluruh sel digunakan sebagai pengganti enzim yang
diisolasi. Pendekatan ini sering terbukti bermanfaat, karena isolasi dan pemurnian
enzim [5] adalah prosedur yang membosankan dan seringkali tidak ekonomis yang
juga dapat mengakibatkan hilangnya aktivitas enzim secara signifikan. Aplikasi utama
dari reaksi mikrobiologi, yang dapat dilakukan dengan menggunakan sel tumbuh,
istirahat [6], atau amobil [7], termasuk hidroksilasi C non-aktif.SebuahIkatan H [8],
reaksi oksidasi [9], dehidrogenasi jenuh menjadiSebuah,B-keton tak jenuh [10],
reduksi gugus keto [11], dan degradasi parsial molekul kompleks [12] (dua contoh
tersebut dibahas dalam Bab 6.3 dan 6.4). Dalam contoh ini, enzim pengoksidasi atau
pereduksi diregenerasi oleh enzim lain di dalam sel. Meskipun enzim terisolasi sering
digunakan untuk reaksi hidrolisis, karena tidak ada koenzim yang perlu diregenerasi
[5, 13], juga dimungkinkan untuk menghidrolisis ester secara selektif menggunakan
sel utuh [14]. Mirip dengan reaksi enzimatik, transformasi mikrobiologis dapat
menjadi spesifik-substrat, sehingga membatasi fleksibilitas pendekatan. Mirip dengan
reaksi katalitik kimia, transformasi mikrobiologis sering membutuhkan optimasi
kondisi reaksi sebelum hasil yang tinggi dan kemurnian enansiomer yang tinggi dapat
diperoleh. Setelah mikroorganisme yang melakukan transformasi yang diinginkan
ditemukan, ada beberapa cara untuk meningkatkan hasil reaksi. Misalnya,
penambahan pelarut organik yang larut dalam air [15], siklodekstrin, surfaktan
 3.3.2 Hasil 243

tants, atau karbon organik atau sumber nitrogen [16], dan optimalisasi pH [17] dan kondisi
inkubasi sering menyebabkan hasil yang lebih tinggi. Transformasi juga dapat ditingkatkan
dengan mutasi dan seleksi [16].
Kimia kombinatorial [18], di sisi lain, adalah cara yang mapan untuk
mensintesis sejumlah besar analog yang relatif cepat (lihat juga Bab 2.3, 3.1 atau
5.4 untuk contoh). Penggunaan otomatisasi laboratorium [19], dalam
hubungannya dengan sistem kemoinformatika canggih yang diperlukan untuk
menangani sejumlah besar data terkait [20], memungkinkan eksploitasi penuh
prinsip ini. Teknologi ini baru-baru ini telah diterapkan secara luas untuk
program penemuan obat [21] dan untuk pengembangan kimia dan ilmu material
[22]. Dalam penemuan obat, pendekatan awal yang didorong oleh kimia yang
biasanya diarahkan pada sejumlah besar produk mentah telah banyak
ditambahkan atau diganti dengan strategi yang lebih terfokus, berbasis struktur,
dan bias properti [23].

Kombinasi kimia mikrobiologi, sering menghasilkan perancah yang tidak mudah

diperoleh dengan cara kimia murni, dan kimia kombinatorial, memungkinkan sintesis
analog yang cepat dan efisien, menyediakan alat yang berharga untuk menghasilkan
senyawa uji baru. Sebagai contoh [24] kami jelaskan di sini penerapan penaut
thioketal turunan asam lipoat kami [25] untuk sintesis fase padat dariD4-3-keto steroid
urea dariB-sitosterol.

3.3.2
Hasil

pitosterolB-sitosterol1tersedia dari minyak kedelai dan oleh karena itu, di samping

diosgenin, bahan awal yang paling penting untuk tumbuh kembali untuk sintesis
parsial steroid baru [26]. Senyawa ini mengalami oksidasi mikrobiologis (
Mycobacterium sp.)menghasilkanD1; 4-3-keto perantara2,diikuti oleh hidrogenasi
selektif (katalis Wilkinson) untuk memberikanD4-3-keto senyawa3, yang dipilih sebagai
perancah untuk perpustakaan model yang dijelaskan di sini. Pengenalan penaut
tioketal kami, perlindungan gugus hidroksil dari4sebagai eter TBS, dan hidrolisis
selektif metil ester5memberikan intermediet asam karboksilat6, siap dipasang pada
penyangga yang kokoh (Skema 3.3.1).
Imobilisasi6pada resin polistiren aminometilasi yang tersedia secara komersial [27]
mudah dilacak dengan menggunakan spektroskopi inframerah fase padat (IR@1660
cm-1) dan bahan yang dihasilkan dengan pemuatan resin@0,75 mmol g-1
[28]. Penghapusan kelompok pelindung konyol dari7 (IR@3410 cm-1) dan aktivasi
gugus hidroksil yang dihasilkan dari8sebagai mesilat (IR@1175 cm-1) memberikan
perantara9,siap untuk diversifikasi (Skema 3.3.2).
bahan ini9kemudian ditempatkan di 40 reaktor dari synthesizer otomatis
[29] dan, dalam arti sintesis matriks, diperlakukan secara berurutan dengan satu set lima
244 3.3 Persiapan Steroid Baru dengan Kimia Mikrobiologis dan Kombinatorial

OH

Sebuah B

HO HAI
1 2

OH OH

C
saya2C S
HAI S
3 4

OTBS

D e
saya2C S

S
5

OTBS

HO2C S

S
6
Skema 3.3.1.Sintesis perancah dari bahan kerja keras, CH2Cl2; 2. tambahkan3,BF3-Et2O, rt, 5
awal yang tumbuh kembali. Reagen dan hari (90%); (d) TBSCl, imidazol, THF, rt, 2 jam (@
kondisi: (a)Mycobacterium sp.; (b) H2, (PPh3)3 bergalah.); (e) NaOH, H2O, THF, rt, 16 jam (76%).
RhCl; (c) 1. (G)-Sebuah- metil ester asam
lipoat, NaBH4, MeOH, rt, 2 jam, lalu encer

amina primer (R1NH2), untuk memberikan amina sekunder amobil10,dan satu set delapan
isosianat (R2NCO), untuk menghasilkan matriks 5 - 8 dari 40 urea steroid amobil11.
Pemecahan produk dari pendukung padat [25], kemudian pemeriksaan berair, akhirnya
memberikan senyawa yang diinginkan12 (Skema 3.3.3) [30].
Ringkasnya, kimia mikrobiologi menyediakan sarana modifikasi cepat dan
sering selektif dari struktur kompleks dalam satu langkah, sehingga memberikan
senyawa sulit diperoleh dengan cara kimia murni. Meskipun tidak seluas
 3.3.2 Hasil 245

OTBS

Sebuah

HO2C S

S
6

OTBS

HAI B
S
n
H S
7

OH

HAI
C
S
n
H S
8

om

HAI
S
n
H S
9
Skema 3.3.2. Imobilisasi dan persiapan untuk derivatisasi
tion. Reagen dan kondisi: (a) aminomethylpolystyrene,
DIC, HOBT, DMF, rt, o/n; (b) Bu4nthF--H2O, DMF, rt, o/n; (c)
MsCl, piridin, CH2Cl2, rt, o/n.

dapat diterapkan sebagai sintesis kimia, kimia mikrobiologi sering terbukti sangat
berhasil jika ditemukan mikroorganisme yang melakukan transformasi yang
diinginkan. Penyempurnaan lebih lanjut dengan optimalisasi kondisi inkubasi dan
media nutrisi, serta pendekatan mutasi dan seleksi, sering kali menghasilkan sintesis
yang sangat efektif. Kimia kombinatorial generasi kedua, di sisi lain, memungkinkan
sintesis cepat sejumlah besar senyawa berkualitas tinggi. Oleh karena itu, kombinasi
kimia mikrobiologis dan kombinatorial merupakan strategi yang ampuh untuk
menghasilkan senyawa uji yang baru dan menarik.
246 3.3 Persiapan Steroid Baru dengan Kimia Mikrobiologis dan Kombinatorial

om

HAI
Sebuah

S
n
H S
9

NH
R1
HAI
B
S
n
H S
10

HAI

n NH
R1 R2
HAI
S C
n
H S
11

HAI

n NH
R1 R2

HAI
12
Skema 3.3.3.Diversifikasi kombinatorial dengan sintesis fase
padat otomatis. Reagen dan kondisi: (a) R1NH2, DMF, 80 C, 10
jam (set lima amina); (b) R2NCO, DMF, rt, 4 jam (set delapan
isosianat); (c) PhI(Tfa)2, CH2Cl2, EtOH, H2O, rt, 30 menit. (@10%
keseluruhan dari7).

Referensi

1Fieser, LF; Fiers, M.steroid, Pers Akademik, New York,1967,P. 5; (B)

Verlag Chemie, Weinheim,1961. Smith, KE; Ahmad, F.; Antonio, T.
2 (Sebuah)Charney, W.; Herzog, W. Biokimia. Perkumpulan Trans. 1993,21,
Transformasi Mikroba Steroid, 1077.

3Fieser, LF; Fiers, M.steroid,
Verlag Chemie, Weinheim,1961,P.
705.
4 (Sebuah)Rufer, C.; Kosmol, H.; Schröder,
E.; Kieslich, K.; Gibia, H.Liebigs Ann.
Kimia1967,702,141; (B) Hofmeister,
H.; Anne, K.; Laurent, H.; Petzoldt, K.;
Wiechert, R.Obat Res.1986,36,781; (C)
Roberts, SMBiokatalis untuk Sintesis
Bahan Kimia Halus,John Wiley and
Sons, Chichester,1999.
5Drauz, K.; Waldmann, H.Enzim
Katalisis dalam Sintesis Organik,
VCH, Weinheim,1995,45.
6Drauz, K.; Waldmann, H.Enzim
Katalisis dalam Sintesis Organik,
VCH, Weinheim,1995,157.
7Drauz, K.; Waldmann, H.Enzim
Katalisis dalam Sintesis Organik,
VCH, Weinheim,1995,481.
8Petzoldt, K.Metode Organik
Kimia (Houben–Weyl),Jil. E21e,
Georg Thieme, Stuttgart,1995,P.
4857.
9Li, Z.; van Beilen, JB; Deutz,
WA; Schmid, A.; de Raadt, A.; Griengl,
H.; Tanpa, B.Curr. pendapat Kimia
Biol.2002,6,136.
10 (Sebuah)Charney, W.; Herzog, HL
Transformasi Mikroba Steroid, Pers
Akademik, New York,1967,P. 5; (B)
Pinheiro, HM; Cabral, JMS Mikroba
Enzim. teknologi.1992,14,619.
11Gottwald, M.Metode Organik
Kimia (Houben–Weyl),Jil. E21d,
Georg Thieme, Stuttgart,1995,P.
4143.
12Kunci.; Pan, C.-P.; Liu, W.-H.J.
Ind. Mikrobiol. Bioteknologi.2002,28,
280.
13Wong, C.-H.; Whitesides, GM
Enzim dalam Kimia Organik Sintetis,
Elsevier, Amsterdam,1994.
14Petzoldt, K.; Dahl, H.; Skuballa,
W.; Gottwald, M.Liebigs Ann. Kimia
1990,1087.
15Bortolini, O.; Medici, A.; Poli, S.
steroid,1997,62,564.
16Mahato, SB; Majumdar, I.
fitokimia1993,34,883.
Referensi 247
17Kunci.; Wu, K.-L.; Liu, W.-H.Makanan
Sci. pertanian. Kimia2001,3,30.
18 (Sebuah)Lazo, JS; Wipf, P.J. Farmasi. Eks.
Ada.2000,293,705; (B)Banding, K.;
Baldwin, JJ; Egan, WJSeptember Sains
teknologi.2001,3,23.
19 (Sebuah)Coates, WJ; Pemburu, DJ;
MacLachlan, WSDisk Obat. Hari ini
2000,5,521; (B)Zechel, C.Prinsip
Metode. Med. Kimia2000,9,243.
20 (Sebuah)Gedek, P.; Willet, P.Curr.
pendapat Kimia Biol.2001,5,389; (B)
jantan, CJ; Louise-Mei, S.; Palu, JD
Disk Obat. Hari ini2001,
6,1101.
21Seneci, P.; Miertus, S.mol. Div.
2000,5,75.
22Hagemeyer, A.; Jandeleit, B.; Liu,
Y.; Poojary, DM; Turner, HW; Volpe,
AF; Weinberg, HWaplikasi Katalis. A:
Umum2001,221,23.
23 (Sebuah)Böhm, H.-J.; Stahl, M.Curr. pendapat
Kimia Biol.2000,4,283; (B)Materi, H.;
Baringhaus, K.-H.; Nauman,
T.; Klabunde, T.; Pirard, B.Sisir. Kimia
Layar Throughput Tinggi.2001,
4,453.
24Huwe, CM; Kunzer, H.; Schlicht,
C.Kelima Int. Konferensi Elektronik
pada Kimia Organik Sintetis,2001,
Poster C0020.
25Huwe, CM; Kunzer, H.Segi empat
Lett.1999,40,683.
26Rompp Lexikon Chemie,George
Thiem, Stuttgart,1998.
27Resin polistiren aminometilasi
diperoleh dari Rapp Polymere
GmbH, Jerman.
28Pemuatan polimer ditentukan
secara gravimetri, yaitu dihitung dari
perubahan massa resin yang diamati.
29Synthesizer ASW2000 Chemspeed
dari Chemspeed, Swiss,
digunakan.
30Hasil ditentukan gravimetri-
Secara umum, produk dicirikan oleh
HPLC-MS.
31Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Ibu C.
Schlicht untuk bantuan teknis
yang terampil.