Full

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
OPTIMASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI

PADA PEMISAHAN KLORAMFENIKOL DAN LIDOKAIN HCl
SEBAGAI ZAT AKTIF DALAM SEDIAAN OBAT TETES TELINGA
COLME®
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Felicia Putri Hernat
NIM : 088114007
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2011
OPTIMASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI

PADA PEMISAHAN KLORAMFENIKOL DAN LIDOKAIN HCl
SEBAGAI ZAT AKTIF DALAM SEDIAAN OBAT TETES TELINGA
COLME®
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Felicia Putri Hernat
NIM : 088114007
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2011
i
ii
iii
Halaman Persembahan
This is a tribute,
my
unpretentious
dedication.
I dedicated this
to Papi and
Mami.
I’d like to share

this bliss with
Ria Putri
Hernat and
Okevanrianus
Putra Hernat.
“Success is going from failure to failure without losing enthusiasm.”
Winston Churchill
“Inaction breeds doubt and fear. Action breeds confidence and courage. If
you want to conquer fear, do not sit home and think about it.Go out and get
busy! ”
Dale Carnegie
Twenty years from now you will be more disappointed by the things
that you didn’t do than by the ones you did so. So throw off the
bowlines. Sail away from the safe harbor. Catch the trade winds in
your sails.
EXPLORE. DREAM. DISCOVER!
iv
v
vi
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas rahmat, berkat, cinta,
ijin dan penyertaanNya yang begitu besar, sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan penyusunan skripsi berjudul “Optimasi Metode Kromatografi Lapis
Tipis Densitometri pada Pemisahan Kloramfenikol dan Lidokain HCl sebagai Zat
Aktif dalam Sediaan Obat Tetes Telinga Colme®”.
Penulis menyadari bahwa penelitian dan penyusunan skripsi ini dapat
terselesaikan oleh karena kritikan, saran, diskusi, arahan, dan bimbingan dari
berbagai pihak. Penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Rita Suhadi, M.Sc., Apt selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma periode 2006-2010 yang memberikan kesempatan kepada saya untuk
menuntut ilmu di fakultas ini.
2. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma periode 2010-2014 atas teladan dan dedikasi yang diberikan.
3. Christine Patramurti, M.Si., Apt selaku dosen pembimbing atas kesabaran dan
waktunya dalam memberikan arahan, kritik, saran, dan kesediaan beliau
membuka wawasan saya. Terima kasih atas pendampingannya dari awal
sampai akhir penelitian dan penyusunan penulisan skipsi.
4. Jeffry Julianus, M.Si. selaku dosen penguji atas bimbingan, diskusi,
semangatnya.
5. Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si. selaku dosen penguji atas bimbingan dan
arahannya.
vii
6. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. dan Phebe Hendra, M.Si., Apt. Ph.D.
atas waktu yang diluangkan untuk memberikan masukan selama penulisan
ini.
7. Siswanto Tanuatmojo atas waktu luang yang disediakan untuk berdiskusi via
internet dan terima kasih atas keterbukaan, keramahan bapak yang mengiringi
langkah penelitian ini.
8. dr. Fenty selaku dosen pendamping akademik atas pendampingan dan
perhatiannya terhadap perkembangan saya selama masa perkuliahan ini.
9. Semua dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas
ilmu, pengalaman, semangat dan persahabatan berharga yang dibagikan.
10. Prasilya dan Regina Clarissa sebagai rekan kerja dalam penelitian ini. Terima
kasih atas kesabaran, kerjasama, persahabatan, canda, dan semangat selama
ini.
11. Sari Tambunan, Theresia Wijayanti, Winarti H. Wibowo, Novi Chairio,
Helena Angelina Kurniawan, Citra Dewi Aryani, Ayesa Syenina, Dina
Christiana Dewi, Amelia Ernesta, Agnes Susianti, Florentina Sunaryo, Sandra
Ruby sebagai teman seperjuangan dalam satu lantai laboratorium Analisis
Instrumental. Terima kasih atas diskusi, semangat, dan keceriaan selama kita
bekerja bersama-sama.
12. Bimo Adithya, Parlan, Kunto, Fransiskus Otok dan segenap staf laboran yang
senantiasa siap membantu dan meluangkan waktunya dalam penyediaan
bahan dan alat selama penelitian.
viii
13. Teman angkatan 2008 yang bersedia mengisi sebagian cerita hidupku. Terima
kasih atas semua kebersamaan, dan bantuan selama perkuliahan.
14. Teman-teman kost Gracia, Lia, Fenny, Puji dan teman-teman UKM Kempo
yang selalu memberikan kepada saya limpahan saran, semangat, kasih, dan
kebersamaan.
15. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu, atas segala bantuan,
semangat, dan doa yang menyertai penulis dari awal penelitian sampai akhir
terselesaikannya penulisan skripsi.
Penulis menyadari adanya kekurangan dalam penyusunan skripsi oleh
karena keterbatasan wawasan dan kemampuan. Penulis membuka diri untuk
menerima saran yang membangun dari semua pihak. Penulis dengan segala
kerendahan hati mengharapkan skripsi ini memberi manfaat bagi para pembaca.
Akhir kata, penulis mempersembahkan skripsi ini dengan demi majunya ilmu
pengetahuan farmasi.
Penulis
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL…………………………………………………………... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING……………………………….. ii
HALAMAN PENGESAHAN…………………………………………………. iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ………………………………………………. iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ………………………………………. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ……….. vi
PRAKATA……………………………………………………………………... vii
DAFTAR ISI…………………………………………………………………… x
DAFTAR TABEL……………………………………………………………… xiv
DAFTAR GAMBAR…………………………………………………………... xv
DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………………… xvii
INTISARI………………………………………………………………………. xix
ABSTRACT……………………………………………………………………... xx
BAB I PENDAHULUAN……………………………………………………… 1
A. Latar Belakang………………………………………………………………. 1
1. Permasalahan……………………………………………………………… 3
2. Keaslian penelitian…………………………………...…………………… 3
3. Manfaat penelitian………………………………………………………… 4
B. Tujuan………………………………………………...……………………... 4
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA………………………………………….. 5
A. Kloramfenikol……………………………………...………………………... 5
B. Lidokain Hidroklorida……………………………………………………….. 6
x
C. Obat Tetes Telinga……………………………………………...…………… 7
D. Colme® Ear Drop………………………………………………...………….. 7
E. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ……………………………...…………….. 8
1. Tinjauan umum……………………...……………………………………. 8
2. Sistem KLT…………………………………...…………………………... 9
3. Aplikasi penotolan sampel…………………..…………………………… 11
4. Penilaian kromatogram……………………………...……………………. 11
F. Densitometri………………………………………………………...……….. 16
G. Landasan Teori……………………………………………………...……….. 17
H. Hipotesis…………………………………………………………...………... 18
BAB III METODE PENELITIAN…………………………………………….. 20
A. Jenis dan Rancangan Penelitian………………………...…………………… 20
B. Variabel Penelitian………………………………...………………………… 20
C. Definisi Operasional…………………………………………………………. 21
D. Bahan Penelitian……………………………………………………...……... 21
E. Alat penelitian…………………………………………………...…………... 22
F. Tata Cara Penelitian…………………………………………...……………... 22
1. Pembuatan larutan baku kloramfenikol………………………...…….…… 22
2. Pembuatan larutan baku lidokain HCl……….…………...…………….… 22
3. Pembuatan larutan campuran baku kloramfenikol dan lidokain HCl…….. 23
4. Preparasi sampel……………………………...…………………………… 23
5. Penentuan panjang gelombang pengamatan kloramfenikol dan lidokain
HCl…………………………...…………………………………………… 23
xi
6. Optimasi metode KLT densitometri………………..……………………... 24
G. Analisis Hasil………………………………………………………………... 25
1. Bentuk puncak…………………………………………………………...... 25
2. Faktor retardasi………………………………………………………...….. 26
3. Resolusi………………………………………………………………........ 26
4. Koefisien variansi ………………………………………………………… 26
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN………………………………………. 28
A. Jenis dan Komposisi Fase Gerak……………………………………………. 28
B. Pembuatan Larutan Baku……………………………………………………. 29
C. Optimasi Metode Pemisahan Kloramfenikol dan Lidokain HCl dalam
Sediaan Obat Tetes Telinga Colme® dengan KLT Densitometri……………. 30
HCl……..…………………………………………………………………. 30
2. Optimasi fase gerak untuk pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl
dalam sediaan obat tetes telinga Colme® dengan KLT
densitometri………..................................................................................... 34
a. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:etilasetat (8,75:16,75) ……………………………................. 36
b. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:toluena:dietilamin (3,75:19,75:1,5)…………………………. 38
c. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:6:1,5) ………………. 40
d. Hasil elusi dan pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl dengan
xii
fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)…. 41
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN………………………………………... 51
A. Kesimpulan……………………………………………………...................... 51
B. Saran………………………………………………………………………..... 51
DAFTAR PUSTAKA…………………………………………………………... 52
LAMPIRAN…………………………………………………………………….. 56
BIOGRAFI PENULIS………………………………………………………….. 90
xiii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Nilai sifat pelarut……………………………………………... 11
Tabel II. Jenis dan perbandingan komposisi fase gerak dan nilai indeks
polaritas fase gerak ………………...………………………… 24
Tabel III. Data pengukuran panjang gelombang pengamatan
kloramfenikol dan lidokain HCl……………………………… 33
Tabel IV. Tabel nilai Rf dan As larutan baku kloramfenikol dan lidokain
HCl pada berbagai komposisi fase gerak……………………... 35
Tabel V. Tabel nilai Rf, As, Rs dan AUC larutan baku campuran
kloramfenikol dan lidokain HCl serta sampel Colme® dengan
fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin
(3,75:19,75:5:1,5) ……...…………………………………….. 48
xiv
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur kloramfenikol (D-treo-(-)-2,2-dikloro-N-(β-
hidroksi-α-(hidroksimetil)-p)nitrofenetilasetamida)……. 5
Gambar 2. Struktur lidokain hidroklorida (2-(dietilamino)-2’,6’-
asetoksilidida monohidroklorida………………………... 6
Gambar 3. Struktur gel silika……………………………………….. 10
Gambar 4. Ilustrasi pengaruh difusi Eddy pada pelebaran puncak…. 13
Gambar 5. Ilustrasi pengaruh difusi longitudinal pada pelebaran
puncak…………………………………………………... 13
Gambar 6. Ilustrasi pengaruh transfer massa pada pelebaran
puncak…………………………………………………... 13
Gambar 7. Isoterm sorpsi dan profil puncak………………………... 14
Gambar 8. Menentukan puncak asimetris dan faktor pengekoran….. 14
Gambar 9. Pemisahan dua senyawa………………………………… 15
Gambar 10. Ilustrasi skematis model deteksi………………………... 17
Gambar 11. Menentukan puncak asimetris dan faktor pengekoran….. 26
Gambar 12. Gugus kromofor dan auksokrom kloramfenikol dan
lidokain hidroklorida…………………………………..... 31
Gambar 13. Pola spektra absorbsi seri larutan baku kloramfenikol
dan lidokain HCl pada panjang gelombang 200-400 nm.. 32
Gambar 14. Pola spektra absorbsi larutan baku kloramfenikol 600 ng
dan lidokain 6000 ng pada pengukuran panjang
gelombang pengamatan.……………………………….... 33
xv
Gambar 15. Puncak baku kloramfenikol 600 ng dan puncak baku
lidokain HCl 6000 ng dengan fase gerak n-heksana:etil
asetat (8,75:16,75) ……………………………………… 37
lidokain HCl 6000 ng dengan fase gerak n-
heksana:toluena:dietilamin (3,75:19,75:1,5)...………... 38
Gambar 17. Puncak baku kloramfenikol 300 ng, 600 ng dan puncak
baku lidokain HCl 6000 ng dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:6:1,5)… 40
lidokain HCl 6000 ng dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)… 42
Gambar 19. Interaksi kloramfenikol dengan fase diam……………… 43
Gambar 20. Interaksi lidokain dengan fase diam…………………….. 43
Gambar 21. Interaksi kloramfenikol dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5).... 44
Gambar 22. Reaksi asam basa antara lidokain HCl dengan dietilamin
dan interaksi lidokain dengan fase gerak n-
heksana:toluena: metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)... 45
Gambar 23. Hasil pemisahan baku campuran kloramfenikol 600 ng
dan lidokain HCl 6000 ng, serta pemisahan sampel obat
tetes telinga Colme® dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5).... 47
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran I. Sertifikat Analisis Baku Kloramfenikol ..……………………... 57
Lampiran II. Sertifikat Analisis Baku Lidokain Hidroklorida ...……………. 58
Lampiran III. Spektrum Baku Kloramfenikol dan Lidokain HCl pada 200-
400 nm…….………………………………………………….. 59
Lampiran IV. Perhitungan Kepolaran Fase Gerak ………..………..……….. 62
Lampiran V. Data Penimbangan Bahan...….……..………..………..…...…. 63
Lampiran VI. Sistem Kromatografi Lapis Tipis Densitometri yang
Digunakan ……....….……..………..………..…….……….… 65
Lampiran VII. Densitogram Hasil Elusi Kloramfenikol dan Lidokain HCl
dengan Fase Gerak N-heksana:Etilasetat
(8,75:16,75)…………...…...……………..………………….... 66
Lampiran VIII. Densitogram Hasil Elusi Kloramfenikol dan Lidokain HCl
dengan Fase Gerak N-heksana:Toluena:Dietilamin

69
(3,75:19,75:1,5)…………………....…...……………………...
Lampiran IX. Densitogram Hasil Elusi Kloramfenikol dan Lidokain HCl
dengan Fase Gerak N-heksana:Toluena:Metanol:Dietilamin
(3,75:19,75:6:1,5)…………………………..……….……........ 72
Lampiran X. Densitogram Hasil Elusi Kloramfenikol dan Lidokain HCl
(3,75:19,75:5:1,5)…………………………...…………….…… 75
Lampiran XI. Densitogram Hasil Elusi Baku Campuran Kloramfenikol dan
Lidokain HCl dengan Fase Gerak Optimum N-
xvii
heksana:Toluena: Metanol:Dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)…...... 77
Lampiran XII. Densitogram Hasil Elusi dan Pemisahan Sampel Sediaan Obat
Tetes Telinga Colme® dengan Fase Gerak Optimum N-
heksan:Toluena:Metanol:Dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)………. 81
Lampiran XIII. Perhitungan Peak Asymmetry Factor (As), Resolusi (Rs), Nilai
Koefisien Variansi (% KV) As, Rf, dan Rs Hasil Pemisahan
Campuran Kloramfenikol dan Lidokain HCl dengan Fase
Gerak Optimum N-heksana:Toluena:Metanol:Dietilamin
(3,75:19,75:5:1,5)…………………………………………….... 84
xviii
INTISARI
Kombinasi kloramfenikol dan lidokain hidroklorida terdapat dalam obat

tetes telinga Colme®. Penjaminan mutu obat menjadi perhatian penting agar
pasien mendapatkan manfaat dari pengobatan yang aman. Salah satu usaha
penjaminan mutu adalah penetapan kadar zat aktif berhubungan dengan aktivitas
farmakologi. Pada penelitian ini digunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT)
densitometri untuk pemisahan, analisis kualitatif, dan analisis kuantitatif
kloramfenikol dan lidokain HCl dalam waktu yang bersamaan.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kondisi optimum dari
KLT densitometri sehingga dapat menghasilkan pemisahan optimal dari campuran
dan penetapan kadar kloramfenikol dan lidokain hidroklorida dalam sediaan obat
tetes telinga Colme®. Penelitian ini merupakan jenis rancangan penelitian
eksperimental analitik yang pada subjek uji diberikan perlakuan yaitu jenis dan
komposisi fase gerak. Sistem KLT yang digunakan adalah fase normal
menggunakan fase diam silika gel dan fase gerak n-heksana:etil asetat, n-heksana:
toluena:dietilamin, dan n-heksana:toluena:metanol:dietilamin dengan variasi
komposisi. Pembacaan dilakukan pada panjang gelombang 242 nm.
Hasil penelitian menunjukkan kondisi yang optimum adalah fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5) dengan jarak elusi 10 cm.
Kondisi tersebut memberikan parameter pemisahan yang baik yakni bentuk
puncak simetris, sempit, dan runcing (nilai As 1), nilai Rf puncak kloramfenikol
dan lidokain HCl adalah 0,23 dan 0,48, nilai Rs 2,83, dan KV dari nilai Rf, As, dan
Rs 0%.
Kata kunci : kloramfenikol, lidokain hidroklorida, kromatografi lapis tipis

densitometri
xix
ABSTRACT
Combinations of chloramphenicol and lidocaine hydrochloride exist in

®
Colme ear drop. Quality assurance becomes an essence since patient have to get
the benefit of the safe medication. One kind of quality assurance involves the
active substances quantification related to the pharmacological effect. The
quantification of active substances in mixture requires the separation of the
substance from others. Thin layer chromatography (TLC) densitometry is method
used for separation and also for qualitative and quantitative analysis of substances
in simultant.
The objective of this study is to determine optimal condition to produce
the optimal separation and determination between chloramphenicol and lidocaine
hydrochloride in Colme® ear drop. This study is an analytical experimental study
in which the test subjects are subjected by treatments consisted of different types
and compositions of mobile phase. The optimization of TLC-UV densitometric
method was performed on normal phase silica gel plate using n-hexane:ethyl
acetate, n-hexane:toluene:diethylamine, n-hexane:toluene:methanol:dietihyamine
with various compositions as the developing solvent. Detection was carried out at
242 nm.
The optimum system was confirmed by n-
hexane:toluene:methanol:dietihyamine (3,75:19,75:5:1,5) as developing solvent
with 10 cm elution distance. The system gives symmetry, narrow, and pointed
shaped peak (As 1), Rf for chloramphenicol is 0,23, Rf for lidoacine HCl is 0,48, Rs
2,83, and CV of As, Rf, and Rs 0%.
Keywords : chloramphenicol, lidocaine hydrochloride, thin layer chromatography

densitometry
xx
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Salah satu obat yang digunakan untuk mengobati infeksi bakteri otitis
eksterna dan media adalah kombinasi kloramfenikol dan lidokain HCl dalam
sediaan obat tetes telinga Colme® (Anonim5, 2009). Prevalensi otitis eksterna dan
media relatif banyak di Indonesia oleh karenanya penjaminan mutu obat menjadi
perhatian penting agar pasien mendapatkan manfaat dari pengobatan yang aman.
Kloramfenikol dalam tetes telinga mengandung tidak kurang dari 90,0%
dan tidak lebih dari 130,0% C11H12Cl2N2O5 dari jumlah yang tertera pada etiket.
Kloramfenikol sukar larut dalam air, mudah larut dalam etanol, aseton dan dalam
etil asetat (United States Pharmacopeial Convention, 1995). Kloramfenikol dalam
air memiliki λmaks 278 nm, E1cm

1%
298 dan dalam natrium hidroksida memiliki λmaks
1%
276 nm, E1cm 200 (Clarke, 1986). Larutan topikal lidokain hidroklorida
mengandung lidokain hidroklorida C14H22N2O.HCl tidak kurang dari 95,0% dan
tidak lebih dari 105,0% dari jumlah yang tertera pada etiket. Lidokain HCl
bersifat sangat mudah larut dalam air dan dalam etanol (Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Lidokain dalam etanol memiliki λmaks
1%
263 nm, E1cm 13,5 dan λmaks 278 nm, E1cm
1%
2,2 (Clarke, 1986).
Penelitian mengenai kloramfenikol dilakukan Vovk dan Simonovska
(2005) dalam mengembangkan dan memvalidasi metode kuantifikasi residu
kloramfenikol pada peralatan farmasetika dengan metode KLT densitometri pada
1
2
280 nm. Penelitian mengenai lidokain dilakukan oleh Kiszka dan Madro (2002)
dalam mengembangkan metode KLT untuk pemisahan dan identifikasi lidokain,
kokain, dan benzoilecgonine. Penelitian yang akan dilakukan adalah optimasi
metode pemisahan campuran kloramfenikol dan lidokain HCl sebagai zat aktif
dalam sediaan obat tetes telinga Colme®. Dalam sediaan ini terkandung 2 zat aktif
sehingga digunakan metode KLT densitometri untuk pemisahan dan penetapan
kadar zat. Metode KLT densitometri digunakan untuk analisis kualitatif dan
kuantitatif dalam waktu yang bersamaan dan dapat mengukur beberapa senyawa
tidak hanya senyawa tunggal (Martono, 1996). Hal ini menjadi alasan penulis
untuk mencari metode analisis alternatif agar dapat digunakan secara regular
dalam uji kualitas obat tetes telinga yang mengandung kloramfenikol dan lidokain
HCl. Terdapat perbedaan analit dan perbedaan instrumen analisis yang dilakukan
dibandingkan penelitian terdahulu menyebabkan perlu dilakukan optimasi metode
analisis baru sehingga memungkinkan penetapan kadar dengan baik. Sebelum
diadakan analisis diperlukan optimasi kondisi atau sistem analisis agar tercapai
pemisahan optimal dari campuran kloramfenikol dan lidokain HCl sehingga dapat
dilanjutkan tahap analisis kuantitatif dengan densitometri.
Kualitas pemisahan dengan kromatografi dapat dikontrol dengan
melakukan serangkaian uji kesesuaian sistem meliputi resolusi dan simetrisitas
puncak (Rohman, 2009). Bentuk puncak yang baik yakni sempit, runcing, dan
simetris (nilai As berada dalam kisaran 0,95-1,10). Parameter lain dalam
pemisahan senyawa dengan metode KLT densitometri meliputi nilai faktor
retardarsi (Rf), nilai resolusi (Rs), dan koefisien variansi (KV) nilai As, Rf, dan Rs.
3
Nilai Rf solut terletak antara 0,2-0,8 akan memaksimalkan pemisahan (Rohman,
2009). Nilai resolusi harus bernilai lebih besar sama dengan 1,5, reprodusibilitas
nilai As, Rf, dan Rs yang diperoleh dari pemisahan ditunjukkan dengan KV ≤ 2%
(Snyder, Kirkland dan Glajch, 1997).
1. Permasalahan
Bagaimanakah jenis dan komposisi fase gerak yang dapat memberikan
bentuk puncak simetris, sempit, dan runcing (nilai As berada dalam kisaran 0,95-
1,10), nilai Rf antara 0,2-0,8, nilai Rs ≥ 1,5, dan KV dari nilai As, Rf, dan Rs ≤ 2 %
dalam pemisahan campuran kloramfenikol dan lidokain HCl sebagai zat aktif
dalam sediaan obat tetes telinga Colme® menggunakan metode KLT densitometri
fase diam silika gel 60 F254?
2. Keaslian penelitian
Penelitian pengembangan dan validasi metode kuantifikasi residu
kloramfenikol dilakukan oleh Vovk dan Simonovska (2005) dalam penelitiannya
“Development and Validation of A Thin Layer Chromatographic Method for
Determination of Chloramphenicol Residues on Pharmaceutical Equipment
Surfaces” dengan metode KLT densitometri. Plat dikembangkan horizontal
dengan menggunakan fase gerak n-heksana:etil asetat (35:65 v/v). Penelitian
pengembangan metode identifikasi lidokain, kokain, dan benzoilecgonine
dilakukan oleh Kiszka dan Madro (2002) dalam penelitiannya “The Usefulness
of The Thin Layer Chromatography Method in The Identification of Cocaine and
Its Metabolite Benzoylecgonine in Autopsy Material” dengan KLT densitometri
dan fase gerak n-heksana:toluena:dietilamin (65:20:5 v/v).

4
Penelitian yang akan dilakukan adalah optimasi pemisahan campuran
baku kloramfenikol dan lidokain HCl sebagai zat aktif di dalam obat tetes
telinga Colme® dengan menggunakan metode KLT densitometri. Belum adanya
sistem KLT densitometri untuk pemisahan dan kuantifikasi kloramfenikol dan
lidokain HCl yang tercantum dalam Farmakope Indonesia.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat metodologis. Hasil penelitian diharapkan memberikan
sumbangan bagi pengembangan ilmu pengetahuan dan teknologi KLT
densitometri mengenai jenis dan komposisi fase gerak yang optimum sebagai
metode alternatif pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl dalam sediaan obat
tetes telinga Colme®.
b. Manfaat praktis. Hasil penelitian diharapkan memberikan informasi
kondisi pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl yang optimal agar mampu
menetapkan kadarnya sehingga menjamin keamanan pemakaian sediaan obat tetes
telinga Colme®.
B. Tujuan
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis dan komposisi fase gerak
yang dapat memberikan bentuk puncak simetris, sempit, dan runcing (nilai As
berada dalam kisaran 0,95-1,10), nilai Rf antara 0,2-0,8, nilai Rs ≥ 1,5, dan KV
dari nilai As, Rf, dan Rs ≤ 2 % dalam pemisahan campuran kloramfenikol dan
lidokain HCl dalam sediaan obat tetes telinga Colme® menggunakan metode KLT
densitometri fase diam silika gel 60 F254.

BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Kloramfenikol
Kloramfenikol (D-treo-(-)-2,2-Dikloro-N-(β-hidroksi-α-(hidroksimetil)-
p)nitrofenetilasetamida) dalam tetes telinga adalah larutan steril kloramfenikol
dalam pelarut yang sesuai. Kloramfenikol mengandung tidak kurang dari 90,0%
dan tidak lebih dari 130,0% C11H12Cl2N2O5 dari jumlah yang tertera pada etiket.
Kloramfenikol memiliki berat molekul 323,13 g/mol. Pemerian hablur halus
berbentuk jarum atau lempeng memanjang, putih hingga putih kelabu atau putih
kekuningan. Kloramfenikol sukar larut dalam air, mudah larut dalam etanol,
dalam propilen glikol, dalam aseton dan dalam etil asetat (Direktorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).
Kloramfenikol dalam air memiliki λmaks 278 nm, E1cm

1%
298 dan dalam
natrium hidroksida memiliki λmaks 276 nm, 1%

E1cm 200 (Clarke, 1986).
Kloramfenikol memiliki nilai momen dipol 5,804 (Bartzatt, 2003). Kloramfenikol
adalah antibiotik yang mengikat subunit ribosom 50S sehingga efek primernya
adalah inhibisi pembentukan ikatan peptida (Anonim1, 1986).
Gambar 1. Struktur kloramfenikol (D-treo-(-)-2,2-dikloro-N-(β-hidroksi-α-(hidroksimetil)-

p)nitrofenetilasetamida) (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995)
5
6
B. Lidokain Hidroklorida
Larutan oral topikal lidokain hidroklorida (2-(Dietilamino)-2ꞌ,6ꞌ-
asetoksilidida monohidroklorida) mengandung lidokain hidroklorida
C14H22N2O.HCl tidak kurang dari 95,0% dan tidak lebih dari 105,0% dari jumlah
yang tertera pada etiket. Lidokain HCl memiliki berat molekul 207,80 g/mol.
Pemerian serbuk hablur putih, tidak berbau dan sedikit pahit. Lidokain HCl
memiliki kelarutan sangat mudah larut dalam air dan dalam etanol, larut dalam
kloroform, tidak larut dalam eter (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan
Makanan RI, 1995).
Lidokain dalam etanol memiliki λmaks 263 nm, E1cm

1%
13,5 dan λmaks 278
1%
nm, E1cm 2,2 (Clarke, 1986). Lidokain adalah senyawa basa lemah dengan nilai
pKa 7,86 yang bersifat polar (Malenović, Ivanović, Medenica, dan Jančić, 2004).
Lidokain Hidroklorida (lidokain HCl atau otopain) adalah anestetik lokal
tipe amida yang menghalangi rasa nyeri, gatal, terbakar pada kulit dan selaput
lendir (Tan, 2010). Anestetik lokal memiliki mekanisme aksi blokade konduksi
saraf impuls pada tempat aplikasi sehingga menghasilkan mati rasa (Anonim2,
2002).
Gambar 2. Struktur lidokain hidroklorida (2-(dietilamino)-2ꞌ,6ꞌ-asetoksilidida

monohidroklorida (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995)
7
C. Obat Tetes Telinga
Tetesan (guttae) adalah sediaan cair yang mengandung bahan obat atau
sediaan obat atau bahan obat dan sediaan obat terlarut, teremulsi, atau tersuspensi,
ditakar berdasar jumlah tetesan, digunakan untuk diminum dan diisikan ke dalam
wadah bertakaran ganda. Untuk tetesan tertentu yang digunakan di telinga,
dinamakan tetes telinga (otoguttae) (Voigt, 1994).
Menurut Farmakope Indonesia (1995), obat tetes telinga (guttae
auriculares) adalah obat tetes yang digunakan dengan cara meneteskan ke dalam
telinga. Kecuali dinyatakan lain, dibuat dengan menggunakan pembawa bukan air.
Pembawa dalam obat tetets telinga harus mempunyai kekentalan yang cocok
hingga obat mudah menempel. Pada umumnya digunakan gliseril dan
propilenglikol sebagai pembawa dalam obat tetes telinga, juga dapat digunakan
etanol, heksilenglikol, dan minyak lemak nabati.
D. Colme Ear Drop®
Kloramfenikol dan lidokain HCL terdapat dalam Colme® volume 8 ml
produksi Interbat (Anonim5, 2009). Tetes telinga Colme® mengandung
kloramfenikol 10% dan lidokain HCl 4%. Penggunaannya yakni 1 sampai 2 tetes,
3 sampai 4 kali sehari. Obat ini termasuk kategori obat telinga antiinfeksi dan
antiseptik untuk indikasi otitis ekserna dan media (Anonim3, 2006).
Otitis eksterna adalah infeksi saluran telinga yang bisa menyerang seluruh
saluran (otitis eksterna generalisata) atau hanya pada daerah tertentu sebagai bisul
(furunkel). Gejala yang timbul adalah gatal, nyeri, keluarnya cairan busuk, dan
8
gangguan pendengaran (Subarkah, 2010). Otitis media adalah inflamasi telinga
tengah yang dapat bersifat akut ataupun kronik. Penyakit ini diawali dengan
infeksi akibat sakit tenggorokan, flu, atau masalah pernafasan lain yang menyebar
ke telinga tengah (Perlstein, 2011). Menurut National Institute on Deafness and
Other Communication Disorders (2010), penyakit ini umumnya disebabkan oleh
bakteri yang terjadi ketika sejumlah cairan terperangkap di belakang gendang
telinga.
E. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
1. Tinjuan umum
Di tahun 1903, Tswett menemukan teknik kromatografi untuk
menguraikan suatu campuran (Khopkar, 1990). Kromatografi adalah metode
penentuan macam komponen terpisah (analisa kualitatif) dan menentukan jumlah
komponen-komponen tersebut (analisa kuantitatif) (Harjadi, 1986).
Pengembangan kromatogram terjadi ketika fase gerak melewati lokasi bercak dan
fase diam (permukaan partikel-partikel atau di dalam pori-pori partikel maupun
terbagi ke dalam sejumlah cairan yang terikat pada permukaan atau suatu pori).
Sampel melintasi plat dengan bantuan aksi kapilaritas fase gerak (Dean, 1995).
Ismailoff dan Schraiber mengembangkan teknik kromatografi lapisan
tipis (KLT) pada tahun 1938 yang disebut juga sebagai kromatografi kolom
terbuka. Metode ini sederhana, pemisahannya cepat, dan sensitif. Kelebihan lain
adalah mudah untuk memperoleh kembali senyawa-senyawa yang terpisahkan.
Untuk analisa kuantitatif dapat digunakan plot fotodensitometer (Khopkar, 1990).

9
Adsorpsi merupakan penyerapan pada permukaan yang melibatkan
interaksi-interaksi elektrostatik seperti ikatan hidrogen, penarikan dipol-dipol, dan
penarikan yang diinduksi oleh dipol (Rohman, 2009). Pada adsorben polar,
pelarut yang polar diadsorbsi lebih kuat dibanding yang kurang polar. Hal ini
berlaku sebaliknya pada adsorben non polar. Kompetisi terjadi antara substansi
yang dikromatografi dan pelarut pada permukaan adsorben. Semakin polar
substansi yang dikromatografi dibanding pelarut, semakin kuat substansi
diadsorbsi dibanding fase gerak. Hal sebaliknya, jika fase gerak lebih kuat
diadsorbsi maka fase gerak akan menggantikan molekul yang dikromatografi
sehingga dapat dielusi bersama fase gerak (Gasparic, 1978).
Kecepatan migrasi solut melalui fase diam ditentukan oleh perbandingan
distribusinya (D) dan besarnya D ditentukan afinitas relatif solut pada kedua fase.
Nilai D adalah perbandingan konsentrasi solut dalam fase diam (Cs) dan dalam
fase gerak (Cm). Semakin besar nilai D maka migrasi solut semakin lambat dan
sebaliknya. Jika perbedaan perbandingan distribusi solut cukup besar maka
campuran-campuran solut akan mudah dan cepat dipisahkan (Rohman, 2009).
2. Sistem KLT
a. Fase Diam. Biasanya sering digunakan sebagai materi pelapisnya
adalah silika gel, bubuk selulosa, tanah diatom, dan kieselguhr (Khopkar, 1990).
Mekanisme sorpsi desorpsi yang utama pada KLT adalah partisi dan adsorbsi
(Rohman, 2009). Gel silika adalah bentuk dari silikon dioksida (silika). Atom
silikon dihubungkan oleh atom oksigen dalam struktur kovalen yang besar. Pada
permukaan gel silika, atom silikon berlekatan pada gugus –OH (Clark, 2007).
10
Gambar 3. Struktur gel silika (Habtemariam, 2006)
b. Fase Gerak. Sistem paling sederhana dari fase gerak KLT adalah
campuran 2 pelarut organik yang diatur komposisinya sehingga memiliki daya
elusi tertentu agar pemisahan optimal. Berikut adalah petunjuk dalam memilih dan
mengoptimasi fase gerak:
1) fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi,
2) daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga nilai Rf solut
terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan,
3) pemisahan dengan fase diam polar seperti silika gel akan ditentukan pula oleh
polaritas fase gerak yang menentukan kecepatan migrasi solut (Rohman, 2009).
Untuk pemilihan fase gerak dalam kromatografi lapis tipis adsorbsi harus
dipenuhi aturan berikut:
1) semua substansi yang dikromatografi harus agak larut dalam fase gerak. Jika
substansi terlalu larut maka substansi tidak cukup untuk diadsorbsi.
2) Tingkat adsorbsi menengah. Jika substansi terikat terlalu kuat pada permukaan
adsorben maka substansi akan berada tetap di tempat penotolan. Sebaliknya,
jika substansi diadsorbsi secara lemah memungkinkan tidak adanya pemisahan.
3) Substansi yang dikromatografi dan solven tidak boleh beraksi satu sama lain
(Gasparic, 1978).
11
Berikut adalah tabel yang menampilkan indek polaritas pelarut:
Tabel I. Nilai sifat pelarut

(Anonim4, 2007)
Titik
ε° UV Indek Refractive Viskositas
Solven ε° SiO2 didih
Al2O3 cutoff Polaritas Index (cP, 20 °C)
(°C)
N-heksana 0,03 0,01 195 0,1 68,9 1,375 0,313
Etil asetat 0,38-0,48 0,58 256 4,4 77,1 1,37 0,46-0,47
Toluena 0,23 0,29 285 2,4 101,6 1,496 0,59
Metanol 0,73 0,95 205 5,1 64,7 1,329 0,6
3. Aplikasi penotolan sampel
Hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan KLT adalah
penotolan sampel. Penotolan sampel dalam jumlah banyak secara manual
membutuhkan waktu lama dan menghasilkan reprodusibilitas yang rendah.
Penotolan sampel secara otomatis lebih dipilih daripada penotolan secara manual
terutama jika sampel yang ditotolkan lebih dari 15 µl. Parameter aplikasi yang
direkomendasikan dalam penotolan sampel otomatis pada KLT tujuan
densitometri adalah diameter bercak 2 mm untuk volume sampel 0,5 µl,
konsentrasi sampel 0,02-0,2% dan banyaknya sampel 1-10 µg untuk KLT
konvensional, 0,1-1 µg untuk KLT kinerja tinggi. Untuk memperoleh
reprodusibilitas, volume sampel yang ditotolkan paling sedikit 0,5 µl (Rohman,
2009). Volume sampel yang dapat diaplikasikan sebagai titik adalah 0,5-5 µl
pada KLT konvensional (Sherma, 1996).
4. Penilaian kromatogram
Faktor retardasi (retardation factor atau Rf) adalah jarak yang ditempuh
senyawa dibagi dengan jarak yang ditempuh solven. Ketika membandingkan
senyawa berbeda dalam kondisi kromatografi yang sama, senyawa dengan nilai Rf
yang lebih besar bersifat kurang polar karena berinteraksi kurang kuat terhadap
12
adsorben polar dari plat KLT (Anonim6, 2010). Nilai Rf berguna untuk
mengidentifikasi senyawa. Nilai Rf untuk senyawa murni dapat dibandingkan
dengan nilai Rf dari senyawa standar (Clark, 2007).
(1)
Nilai Rf pada KLT dipengaruhi oleh banyak faktor seperti contohnya
aktivitas lapisan, ketebalan, keseragaman, jarak elusi, jumlah sampel yang
diaplikasikan, solven, kehadiran substansi lain, ukuran dan bentuk chamber,
perubahan temperatur, dan lain sebagainya. Bentuk bercak hasil pemisahan juga
dipengaruhi oleh banyak faktor seperti kelebihan jumlah sampel yang ditotolkan,
penguapan kontinu dari fase gerak selama pengembangan, kehadiran substansi
lain, perubahan temperatur, dan lain sebagainya (Gasparic, 1978).
Solut individual hasil pemisahan kromtografi akan membentuk profil
Gaussian dalam arah aliran fase gerak. Profil ini berbentuk puncak atau pita secara
perlahan akan melebar dan sering membentuk profil yang asimetrik karena solut
melanjutkan migrasi ke fase diam. Pelebaran pucak kromatografi disebabkan oleh
difusi eddy, difusi longitudinal atau aksial, dan transfer massa.
a. Difusi Eddy. Keadaan di mana beberapa molekul meninggalkan
kolom tidak bersamaan akibat diversi selama perjalanan. Fenomena ini dapat
dijelaskan dengan gambar 4.
b. Difusi longitudinal atau aksial. Spesies solut menyebar ke segala arah
dengan difusi ketika berada di dalam fase gerak. Difusi terjadi dengan arah yang
13
sama dan berlawanan dengan aliran fase gerak. Fenomena ini dapat dijelaskan
dengan gambar 5.
c. Transfer massa. Terjadi antara fase gerak, fase gerak stagnan, dan fase
diam. Profil konsentrasi dalam fase diam tertinggal sedikit dibanding profil
konsentrasi dalam fase gerak yang akan mengakibatkan adanya pelebaran puncak.
Desorpsi yang lambat juga menghasilkan puncak yang asimetris atau condong.
Distribusi aliran fase gerak yang mengalir di antara partikel fase diam dalam
gerakan laminar. Keceparan alir fase gerak lebih cepat jika melalui pusat saluran
dibanding fase gerak di dekat artikel fase diam (Rohman, 2009). Fenomena ini
terlihat pada gambar 6.
Gambar 4. Ilustrasi pengaruh difusi Eddy pada pelebaran puncak (Honrath, 1995)
Gambar 5. Ilustrasi pengaruh difusi longitudinal pada pelebaran puncak (Scott, 2008)
Gambar 6. Ilustrasi pengaruh transfer massa pada pelebaran puncak (Scott, 2008)
14
Profil konsentrasi solut yang bermigrasi akan simetris jika rasio distribusi
solut (D) konstan selama kisaran konsentrasi keseluruhan puncak, seperti
ditunjukkan oleh isoterm sorpsi yang linear berupa plot konsentrasi solut dalam
fase diam (Cs) tehadap konsentrasi solut dalam fase gerak (Cm). Adanya puncak
asimetri dapat disebabkan oleh ukuran sampel yang dianalisis terlalu besar,
interaksi yang kuat antara solut dengan fase diam dapat menyebabkan solut sukar
terelusi sehingga dapat menyebabkan terbentuknya puncak yang mengekor
(Gandjar dan Rohman, 2007).
Gambar 7. Isoterm sorpsi dan profil puncak. (a). isoterm linear (b). puncak tailing (c).
puncak fronting (Gandjar dan Rohman, 2007)
Parameter yang menyatakan bentuk puncak adalah peak asymmetry
factor atau As. Asimetri puncak diukur pada 10% tinggi puncak. Nilai untuk
puncak asimetris As adalah 1. Nilai As 0,95-1,10 masih dikatakan baik.
Gambar 8. Menentukan puncak asimetris dan faktor pengekoran (Snyder, Kirkland, dan
Glajch, 1997)
15
Resolusi (Rs) adalah parameter yang menggambarkan rentang pemisahan
2 puncak yang saling berdekatan. Nilai Rs harus mendekati atau lebih dari 1,5
karena akan memberikan pemisahan puncak yang baik (base line resolution)
(Gandjar dan Rohman, 2007).
2Rf
Rs  (2)
(W 1  W 2)
Dari persamaan (2) dapat diketahui bahwa yang sangat berpengaruh
terhadap pemisahan suatu komponen adalah Rf maksimum masing-masing solut
(max Rf1 dan max Rf2) serta lebar puncak masing-masing komponen yang
dipisahkan (W1 dan W2). W1 dihitung dari selisih nilai end Rf1 dikurangi start Rf1.
W2 dihitung dari selisih nilai end Rf2 dikurangi start Rf2. Pemisahan dua senyawa
dapat digambarkan sebagai berikut:
Gambar 9. Pemisahan dua senyawa (Sherma dan Fried, 1996)
Presisi merupakan ukuran derajat kesesuaian antara hasil uji individual
diukur melalui penyebaran hasil individual rata-rata jika prosedur diterapkan
secara berulang pada sampel- sampel yang diambil dari campuran yang homogen.
Presisi diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku relatif (koefisien
variansi). Kriteria seksama diberikan jika metode memberikan simpangan baku
relatif (RSD) atau koefisien variansi (KV) 2 % atau kurang (Riyadi, 2009).
16
F. Densitometri
Salganicoff, Polak, Goodall, Goldman, dan Ebel berhasil
mengembangkan densitometer sebagai alat untuk pengukuran kuantitatif in situ
dari substansi yang dipisahkan dengan KLT. Densitometri adalah metode analisis
instrumental berdasarkan interaksi radiasi elekromagnetik dengan analit berupa
bercak hasil pemisahan KLT. Densitometri mengevaluasi bercak analit hasil KLT
dalam kadar kecil secara kuantitatif. Bercak dideteksi dengan sumber sinar dalam
celah (slit) yang dapat diatur panjang dan lebarnya. Sinar yang dipantulkan atau
ditransmisikan diukur dengan fotosensor. Banyaknya analit yang terbaca adalah
berdasarkan perbedaan antara sinyal optik daerah yang tidak mengandung bercak
dengan daerah yang mengandung bercak dalam lempeng yang sama (Rohman,
2009).
Secara umum, densitometri terbagi menjadi 2 model pembacaan yakni
model refleksi dan transmitan (Sherma dan Fried, 1996). Model refleksi
mengukur jumlah cahaya yang dipantulkan dari permukaan dengan menggunakan
lampu yang berbeda sebagai sumber cahaya UV/Vis. Lampu halogen dan tungsten
untuk menghasilkan cahaya visibel sedangkan lampu xenon menghasilkan cahaya
UV. Lampu merkuri umumnya digunakan untuk menghasilkan cahaya dalam
kisaran UV dan visibel. Monokromator digunakan untuk menghasilkan cahaya
monokromatik. Cahaya yang direfleksikan kemudian diukur dengan
photomultiplier, fotodioda, dan fotoresistor. Hasil dari detektor dikonversikan ke
dalam sinyal tertentu. Kekurangan dari model ini adalah pengaruh posisi bercak
terhadap sinyal yang dihasilkan. Kesalahan yang signifikan juga disebabkan

17
perbedaan konsentrasi profil sampel dan standar. Begitu pula perlakuan terhadap
plat setelah dikromatografi juga menyebabkan adanya variasi (Sherma dan Fried,
1996).
Model transmitan mengukur absorbansi substansi dalam kisaran visibel.
Detektor fotometrik mengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan pada sisi
plat. Sinyal ini merupakan fungsi banyaknya molekul yang mengabsorbsi cahaya
dari lampu. Kelebihan model ini adalah fluktuasi transmisi akibat perbedaan
posisi dari bercak maupun akibat gradien konsentrasi dapat diabaikan. Model ini
juga lebih sensitif dibanding model refleksi karena semua molekul dalam bercak
mempengaruhi sinyal, tidak hanya molekul yang berada pada permukaan dalam
model refleksi. Kekurangan metode ini bahwa adanya interferensi latar belakang
yang dominan (Sherma dan Fried, 1996).
L
L
MC
F (MF)
MC
(MF)
P P
a b
F
Gambar 10. Ilustrasi skematis model deteksi. (a). refleksi dan (b). transmisi. L=lamp,
D=detector, F=cut-off filter (for fluorescence), P=plate, MF=monochromatic filter,
MC=monochromator (Sherma dan Fried, 1996)
18
G. Landasan Teori
Kombinasi kloramfenikol dan lidokain HCl membantu mengurangi rasa
nyeri infeksi bakteri otitis eksterna dan media. Salah satu produk yang
mengandung kombinasi kloramfenikol dan lidokain HCl adalah obat tetes telinga
Colme®. Kloramfenikol adalah basa yang sukar larut dalam air, mudah larut dalam
etanol, propilen glikol, aseton dan dalam etil asetat. Kloramfenikol dalam tetes
telinga mengandung tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 130,0%
C11H12Cl2N2O5 dari jumlah yang tertera pada etiket. Kloramfenikol dalam air
memiliki λmaks 278 nm, E1cm

1%
298 dan dalam natrium hidroksida memiliki λmaks 276
1%
nm, E1cm 200. Larutan topikal lidokain HCl mengandung C14H22N2O.HCl tidak
kurang dari 95,0% dan tidak lebih dari 105,0% dari jumlah yang tertera pada
etiket. Lidokain HCl adalah suatu garam yang sangat mudah larut dalam air dan
dalam etanol, larut dalam kloroform, tidak larut dalam eter. Lidokain dalam etanol
memiliki λmaks 263 nm, E1cm

1%
13,5 dan λmaks 278 nm, E1cm
1%
2,2.
Metode KLT densitometri dapat memisahkan dan mengevaluasi bercak
analit hasil pemisahan KLT. Bercak analit dikuantifikasi berdasarkan interaksi
radiasi elekromagnetik dengan analit. Dengan memvariasikan dan mengoptimasi
jenis dan komposisi fase gerak akan berpengaruh terhadap pemisahan senyawa
dengan metode ini. Parameter dalam pemisahan senyawa yang dituju dengan
metode KLT densitometri adalah bentuk puncak yang simetris, sempit, dan
runcing dengan nilai As berada dalam kisaran 0,95-1,10, nilai Rf antara 0,2-0,8,
nilai Rs ≥ 1,5, dan KV dari nilai As, Rf, dan Rs ≤ 2 % .

19
H. Hipotesis
Penggunaan jenis dan komposisi fase gerak yang optimum akan
menghasilkan bentuk puncak yang simetris, sempit, dan runcing dengan nilai As
berada dalam kisaran 0,95-1,10, nilai Rf antara 0,2-0,8, nilai Rs ≥ 1,5, dan KV dari
nilai As, Rf, dan Rs ≤ 2 % pada pemisahan campuran kloramfenikol dan lidokain
HCl dalam sediaan obat tetes telinga Colme® menggunakan metode KLT
densitometri fase diam silika gel 60 F254.

BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis rancangan penelitian eksperimental
analitik yang pada subjek uji diberikan perlakuan yaitu jenis dan komposisi fase
gerak.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah jenis dan perbandingan
komposisi fase gerak yaitu n-heksana:etil asetat, n-heksana:toluena:dietilamin,
dan n-heksana:toluena:metanol:dietilamin.
2. Variabel tergantung
Variabel tergantung pada penelitian ini adalah pemisahan puncak
kloramfenikol dan lidokain HCl dalam sediaan obat tetes telinga Colme® yang
dilihat dari bentuk puncak termasuk nilai As, nilai Rf, nilai Rs, dan KV dari nilai
As, Rf, dan Rs.
3. Variabel pengacau terkendali
a. Kemurnian pelarut yang digunakan, untuk mengatasinya digunakan pelarut
pro analysis.
b. Kemurnian bahan baku yang digunakan, untuk mengatasinya digunakan
bahan baku yang telah terjamin kualitasnya oleh Certificate of Analysis.
20
21
C. Definisi Operasional
1. Kloramfenikol dan lidokain HCl merupakan senyawa aktif yang berada dalam
sediaan obat tetes telinga Colme®.
2. Sistem kromatografi lapis tipis (KLT) yang digunakan adalah sistem KLT fase
normal dengan fase diam silika gel dan fase gerak n-heksana:etil asetat
(8,75:16,75), n-heksana:toluena:dietilamin (3,75:19,75:1,5), n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:6:1,5), dan n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5).
3. Optimasi dilakukan dengan mengubah-ubah jenis dan komposisi fase gerak.
4. Parameter pemisahan optimum komponen dengan KLT densitometri adalah
bentuk puncak termasuk peak asymmetry factor (As), nilai faktor retardasi (Rf),
nilai resolusi (Rs), dan KV dari nilai As, Rf, dan Rs.
D. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah baku kloramfenikol
(Chemo Lugano Branch, No. batch 8000225001, kemurnian 99,1%), baku
lidokain HCl (Megafine Pharma, No. batch ALH/449/10, kemurnian 99,20%),
etanol p.a. (E. Merck), n-heksana p.a. (E. Merck), etil asetat p.a. (E. Merck),
toluena p.a. (E. Merck), dietilamin p.a. (E. Merck), metanol p.a. (E. Merck),
lempeng KLT silika gel 60 F254 (E. Merck), obat tetes telinga Colme®.
22
E. Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah neraca analitik (OHAUS
Carat Series PAJ 1003, max 60/120 g, min 0,001 g, d = 0,01/0,1 mg, e = 1 mg),
densitometer (CAMAG TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485 SER. No. 160602),
autosampler (Linomat 5 No. 170610), perangkat lunak WinCats (V.1.4.4),
mikropipet Scorex, bejana kromatografi, dan alat-alat gelas.
F. Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan larutan baku kloramfenikol
a. Pembuatan larutan stok. Baku kloramfenikol ditimbang seksama lebih
kurang 10 mg. Baku kloramfenikol dimasukkan dalam labu takar 10 ml dan
dilarutkan dalam etanol sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan stok
kloramfenikol 1000 ppm.
b. Pembuatan seri larutan baku. Larutan stok baku kloramfenikol dipipet
sebanyak 1,5 ml, dimasukkan ke dalam labu takar 5,0 ml, dan dilarutkan dalam
etanol sampai batas tanda sehingga diperoleh konsentrasi 300 ppm. Larutan baku
siap untuk ditotolkan.
2. Pembuatan larutan baku lidokain HCl
Baku lidokain HCl ditimbang seksama lebih kurang 15 mg. Baku
lidokain HCl dimasukkan dalam labu takar 5,0 ml dan dilarutkan dalam etanol
sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan stok lidokain HCl 3000 ppm.
23
3. Pembuatan larutan campuran baku kloramfenikol dan lidokain HCl
Larutan stok baku kloramfenikol 1000 ppm diambil sebanyak 1,5 ml dan
dimasukkan dalam labu takar 5,0 ml bersama lebih kurang 15 mg baku lidokain
HCl kemudian dilarutkan dalam etanol sampai batas tanda 5,0 ml.
4. Preparasi sampel
Preparasi sampel dilakukan dua kali yakni preparasi larutan sampel untuk
analisis lidokain HCl dan kloramfenikol.
a. Larutan sampel untuk analisis lidokain HCl. Satu sampel obat tetes
telinga Colme® dikeluarkan isinya dan dihomogenkan. Sebanyak 0,75 ml sampel
dipipet dan dimasukkan ke dalam labu takar 5 ml, dilarutkan dalam etanol sampai
batas tanda (campuran A). Larutan ini siap untuk ditotolkan.
b. Larutan sampel untuk analisis kloramfenikol. Campuran A diambil 0,2
ml, dimasukkan ke dalam labu takar 5 ml, dan dilarutkan dalam etanol sampai
batas tanda. Larutan ini siap untuk ditotolkan.
HCl
Larutan baku kloramfenikol 300 ppm dan lidokain HCl 3000 ppm
masing-masing ditotolkan sebanyak 1 µl, 2 µl, dan 3 µl pada lempeng silika gel
berukuran 7x12 cm. Semua penotolan dilakukan pada jarak 1 cm antar totolan.
Plat dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi dengan fase
gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5). Pengembangan
dilakukan setinggi 10 cm. Lempeng silika gel dikeluarkan dan dikeringkan.
Penentuan panjang gelombang pengamatan dilakukan dengan merekam pola

24
spektra absorbsi masing-masing seri jumlah pada daerah panjang gelombang 200-
400 nm menggunakan densitometer. Menentukan overlapping spektra absorbsi
masing-masing seri jumlah kloramfenikol-lidokain HCl 300 ng-3000 ng, 600 ng-
6000 ng, dan 900 ng-9000 ng.
6. Optimasi metode KLT densitometri
a. Pembuatan fase gerak. Masing-masing fase gerak diambil sebanyak
volume yang tertera pada tabel II dan dicampur dalam labu takar 50 ml. Fase
gerak yang digunakan untuk optimasi adalah sebagai berikut:
Tabel II. Jenis dan perbandingan komposisi fase gerak dan nilai indeks polaritas fase gerak
Fase gerak (ml) N-heksana Toluena Metanol Dietilamin Etil Indeks
p.a. (IP = p.a. (IP = p.a. (IP = p.a. (IP = 1,8) asetat Polaritas
0,1) 2,4) 5,1) p.a. (IP (IP)
= 4,4)
Komposisi I 8,75 - - - 16,25 2,895
Komposisi II 3,75 19,75 - 1,50 - 2,019
Komposisi III 3,75 19,75 6,00 1,50 - 2,615
Komposisi IV 3,75 19,75 5,00 1,50 - 2,533
b. Optimasi pemilihan fase gerak pemisahan baku kloramfenikol dan
lidokain HCl sebagai zat aktif dalam obat tetes telinga Colme®. Larutan baku
kloramfenikol dan baku lidokain HCl masing-masing ditotolkan sebanyak 1 µl, 2
µl, dan 3 µl pada lempeng silika gel berukuran 20x12 cm. Semua penotolan
dilakukan pada jarak 1 cm antar totolan. Plat dikembangkan dalam bejana
kromatografi yang telah dijenuhi oleh masing-masing jenis dan fase gerak yang
akan dioptimasi. Pengembangan dilakukan setinggi 10 cm. Lempeng silika gel
dikeluarkan, ditunggu kering dan bercak analit dideteksi pada panjang gelombang
pengamatan hasil poin 4 menggunakan densitometer.
c. Reprodusibilitas dari fase gerak hasil optimasi. Larutan baku
kloramfenikol, larutan baku lidokain HCl, larutan campuran baku kloramfenikol

25
dan lidokain HCl masing-masing ditotolkan sebanyak 1 µl, 2 µl, dan 3 µl pada
lempeng silika gel berukuran 20x12 cm. Tiga replikasi larutan sediaan obat tetes
telinga Colme® yang telah dipreparasi juga ditotolkan sebanyak 1 µl pada
lempeng silika gel tersebut. Semua penotolan dilakukan pada jarak 1 cm antar
totolan. Plat dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi oleh
fase gerak dan jarak elusi hasil optimasi. Lempeng silika gel dikeluarkan,
ditunggu kering dan bercak analit dideteksi pada panjang gelombang pengamatan
hasil poin 4 menggunakan densitometer. Parameter optimum dihitung nilai KV
dari nilai peak asymmetry factor (As), faktor retardasi (Rf), dan resolusi (Rs)
puncak hasil pemisahan yang didapat dari 3 kali replikasi larutan sediaan obat
tetes telinga Colme®.
G. Analisis Hasil
Hasil optimasi metode pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl dalam
sediaan obat tetes telinga Colme® dinilai dari densitogram hasil pemisahan dengan
variasi jenis dan komposisi fase gerak. Parameter pemisahan yang baik dilihat dari
bentuk puncak, faktor retardasi, resolusi, koefisien variansi nilai As, Rf, dan Rs.
1. Bentuk puncak
Bentuk puncak yang simetris ditentukan dari nilai faktor asimetri puncak
(As) dapat dihitung dengan cara sebagai berikut:

26
Gambar 11. Menentukan puncak asimetris dan faktor pengekoran (Snyder, Kirkland, dan
Glajch, 1997)
di mana: As = faktor asimetris puncak
B = lebar setelah puncak pada ketinggian 10% dari bawah
A = lebar sebelum puncak pada ketinggian 10% dari bawah
2. Faktor retardasi
Nilai Rf dapat dihitung dengan cara sebagai berikut:
Rf = a/b (3)
di mana: Rf = faktor retardasi

a = jarak rambat bercak yang dihasilkan oleh fase gerak
b = jarak rambat elusi fase gerak (Clark, 2007).
3. Resolusi
Nilai resolusi dapat dihitung dengan cara sebagai berikut:
2Rf
Rs  (4)
(W 1  W 2)
di mana: Rs = nilai resolusi

Z1= max Rf 1
Z2 = max Rf 2
W1= selisih nilai end Rf1 dikurangi start Rf1
W2 = selisih nilai end Rf2 dikurangi start Rf2 (Gandjar dan Rohman, 2007).
4. Koefisien variansi
Nilai % koefisien variansi dari nilai peak asymmetry factor (As), faktor
retardasi (Rf), dan resolusi (Rs) puncak dihitung dengan cara sebagai berikut:
SD
% KV  x100% (5)
x
27
di mana: % KV = koefisien variansi

SD = standard deviasi
x = rata-rata nilai (Riyadi, 2009).
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Jenis dan Komposisi Fase Gerak
Optimasi metode pemisahan berarti memeriksa dan memperkirakan
faktor-faktor yang mempengaruhi sistem kromatografi. Faktor-faktor tersebut
termasuk jenis dan komposisi fase gerak. Optimasi menjadi hal yang penting
karena efektifitas metode KLT sangat ditentukan oleh optimalnya suatu prosedur
analitik yang memungkinkan pemisahan suatu analit terhadap yang lain. Variasi
jenis dan komposisi fase gerak akan memberikan perbedaan nilai indeks polaritas.
Perbedaan nilai indeks polaritas akan mempengaruhi pemisahan oleh karenanya
perlu dilakukan optimasi jenis dan komposisi fase gerak.
Jenis dan komposisi fase gerak yang akan dioptimasi dalam penelitian ini
tercantum dalam tabel II. Pemilihan komposisi fase gerak didasarkan pada
penelitian sebelumnya yaitu penelitian pengembangan dan validasi metode
kuantifikasi residu kloramfenikol yang dilakukan oleh Vovk dan Simonovska
(2005) dengan fase gerak n-heksana:etil asetat (35:65) dan penelitian
pengembangan metode identifikasi lidokain, kokain, dan benzoilecgonine yang
dilakukan oleh Kiszka dan Madro (2002) dengan fase gerak n-
heksana:toluena:dietilamin (65:20:5).
Modifikasi fase gerak bertujuan untuk mengubah polaritas fase gerak
sehingga memiliki kepolaran yang paling sesuai dengan kepolaran senyawa yang
akan dipisahkan. Fase gerak dengan kepolaran yang optimal mampu memutus
sebagian ikatan senyawa dengan fase diam, senyawa dapat terlarut dalam fase
28
29
gerak yang akan membawanya secara serentak dan terpisah dengan senyawa
lainnya.
B. Pembuatan Larutan Baku
Larutan baku dibuat dari baku kloramfenikol, baku lidokain HCl, dan
baku campuran kloramfenikol dan lidokain HCl. Larutan baku dibuat dengan
pelarut etanol. Larutan baku tunggal dibuat sebagai pembanding untuk
memastikan adanya analit yang dituju dalam sampel dengan menilai kesamaan Rf
baku dan sampel. Pembuatan larutan baku campuran bertujuan mensimulasi
keadaan sampel sediaan obat tetes telinga Colme® yang terdiri dari campuran
senyawa aktif kloramfenikol dan lidokain HCl. Optimasi dilakukan pada larutan
baku campuran karena apabila keadaan sistem yang optimal telah tertetapkan pada
campuran baku maka kondisi yang serupa juga dapat diaplikasikan pada sampel
untuk memperoleh pemisahan dan bentuk puncak yang dinilai optimal.
Larutan baku dibuat dengan 3 seri jumlah dengan tujuan melihat
kenaikan respon detektor terhadap jumlah senyawa analit yang dinyatakan dengan
luas area di bawah puncak analit (Area Under Curve/AUC). Larutan baku
campuran disiapkan dengan pencampuran baku kloramfenikol dan baku lidokain
HCl sehingga pada akhir larutan diperoleh perbandingan konsentrasi
kloramfenikol:lidokain HCl adalah 1:10, di mana kloramfenikol 300 ppm dan
lidokain HCl 3000 ppm. Masing-masing larutan baku dibuat dengan seri rendah,
menengah, dan tinggi (kloramfenikol 300 ng, 600 ng, 900 ng, dan lidokain HCl
3000 ng, 6000 ng, 9000 ng). Pembuatan seri jumlah ini dilakukan dengan
30
memvariasikan volume penotolan yakni untuk seri jumlah rendah, menengah, dan
tinggi dilakukan penotolan 1, 2, dan 3 µl.
Pembuatan larutan baku seharusnya mengikuti perbandingan konsentrasi
kloramfenikol dan lidokain HCl 5:2 dalam volume sediaan obat tetes telinga
Colme® 8 ml namun berdasarkan orientasi lidokain HCl tidak dapat terdeteksi
untuk konsentrasi serendah itu (0,8% b/v). Lidokain HCl dalam etanol memiliki
λmaks 263 nm, E1cm

1%
13,5 dan λmaks 278 nm, E1cm
1%
2,2 (Clarke, 1986). Nilai ε
lidokain HCl adalah 317,53 l/mol.cm. Nilai ε untuk memberikan absorbansi yang
dapat terbaca adalah minimal 1000 l/mol cm yang dinyatakan sebagai absorbansi
lemah. Lidokain HCl dalam sampel terdapat dalam jumlah yang kecil sehingga
ketika dideteksi dengan densitometer tidak terbaca sebagai puncak. Puncak yang
terlalu kecil dapat terganggu oleh noise alat dan plat.
C. Optimasi Metode Pemisahan Kloramfenikol dan Lidokain HCl dalam
Sediaan Obat Tetes Telinga Colme® dengan KLT Densitometri
HCl
Penentuan panjang gelombang pengamatan bertujuan menentukan
panjang gelombang yang akan digunakan dalam deteksi bercak kloramfenikol dan
lidokain HCl oleh densitometer. Densitometer akan mampu membaca puncak dari
kedua analit dalam satu kali deteksi. Pengukuran untuk mencari panjang
gelombang pengamatan dilakukan menggunakan fase gerak n-
31
Penentuan panjang gelombang pengamatan dilakukan dengan deteksi
masing-masing baku kloramfenikol dan lidokain HCl. Deteksi dilakukan pada
panjang gelombang 200-400 nm yang termasuk panjang gelombang ultraviolet
(UV). Syarat senyawa yang dapat dianalisis dengan panjang gelombang tersebut
harus memiliki gugus kromofor dan auksokrom (Rohman dan Gandjar, 2007).
Gugus kromofor akan memberikan serapan ketika dipaparkan sinar UV sehingga
terbaca sebagai puncak dalam densitogram. Gugus auksokrom berperan dalam
pergeseran panjang gelombang dan intensitas serapan maksimal senyawa. Berikut
ini merupakan gugus kromofor dan auksokrom yang terdapat pada struktur
kloramfenikol dan lidokain HCl:
Gambar 12. Gugus kromofor dan gugus auksokrom kloramfenikol dan lidokain
hidroklorida
32
Berikut adalah spektra absorbsi baku kloramfenikol dan lidokain HCl:
281 nm
B3
B2
B1
A3
A2
A1
263
nm
Gambar 13. Pola spektra absorbsi seri larutan baku kloramfenikol dan lidokain HCl pada
panjang gelombang 200-400 nm
A1. Spektra absorbsi baku kloramfenikol 300 ng (seri bawah)
A2. Spektra absorbsi baku kloramfenikol 600 ng (seri menegah)
A3. Spektra absorbsi baku kloramfenikol 900 ng (seri atas)
B1. Spektra absorbsi baku lidokain HCl 3000 ng (seri bawah)
B2. Spektra absorbsi baku lidokain HCl 6000 ng (seri menengah)
B3. Spektra absorbsi baku lidokain HCl 9000 ng (seri atas)
Panjang gelombang serapan maksimal (λmaks) dari kloramfenikol yang
diperoleh dari densitogram (gambar 13) adalah 281 nm. Menurut Clarke (1986)
serapan maksimal kloramfenikol dalam air adalah 278 nm. Hasil pengukuran yang
didapat menunjukkan adanya pergeseran sebesar 3 nm antara panjang gelombang
hasil pengamatan dan literatur. Pergeseran panjang gelombang hasil penelitian
adalah sebesar 1 nm dari pergeseran yang diijinkan yakni 278±2 nm (Direktorat
Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Pergeseran panjang gelombang
diakibatkan oleh perbedaan kondisi pengujian saat penelitian dengan kondisi
pengujian literatur seperti instrumen analisis. Dalam percobaan digunakan

33
densitometer untuk mengukur λmaks kloramfenikol sedangkan dalam literatur
digunakan spektrofotometer UV.
Lidokain HCl, dilihat dari densitogram (gambar 13), memiliki panjang
gelombang serapan maksimal (λmaks) sebesar 263 nm. Serapan maksimal lidokain
dalam etanol adalah 263 nm (Clarke, 1986). Hal ini menunjukkan tidak ada
pergeseran panjang gelombang yang diperoleh dibanding dengan panjang
gelombang literatur.
Setelah diperoleh spektra absorbsi masing-masing senyawa, maka dapat
ditentukan panjang gelombang pengamatan yakni dengan melihat spektra
overlapping dari kedua senyawa seperti berikut:
100,0
[AU]
80,0
60,0
40,0
Wavelength : 242,0 [nm] 20,0

Signal : 21,3 [AU]
0,0
200 250 300 [nm] 400
Gambar 14. Pola spektra absorbsi larutan baku kloramfenikol 600 ng dan lidokain 6000 ng
pada pengukuran panjang gelombang pengamatan
Tabel III. Data pengukuran panjang gelombang pengamatan kloramfenikol dan lidokain
HCl
Baku Panjang gelombang pengamatan
Baku kloramfenikol 300 ng dan lidokain HCl 3000 ng 242 nm
34
Pada penelitian ini panjang gelombang pengamatan yang digunakan
merupakan hasil perpotongan antara spektra absorbsi baku kloramfenikol dan
baku lidokain HCl pada masing-masing seri jumlah 300 ng, 600 ng, dan 900 ng
untuk kloramfenikol dan pada masing-masing seri jumlah 3000 ng, 6000 ng, dan
9000 ng untuk lidokain HCl. Berdasarkan data tabel III maka panjang gelombang
pengamatan yang digunakan adalah 242 nm. Penggunaan panjang gelombang 242
nm mempertimbangkan penampilan puncak kloramfenikol agar tidak terlalu besar
dan puncak lidokain HCl dengan tinggi yang hampir berbanding dengan
kloramfenikol.
2. Optimasi fase gerak untuk pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl
dalam sediaan obat tetes telinga Colme® dengan KLT densitometri
Optimasi dilakukan dengan KLT densitometri pada panjang gelombang
pengamatan 242 nm. Pelarut pada baku dan sampel adalah etanol. Kromatografi
teknik ascending digunakan dengan jarak pengembangan 10 cm dalam chamber
yang terjenuhkan oleh fase gerak. Puncak baku yang muncul dalam densitogram
digunakan untuk analisa reprodusibilitas data As, Rf, dan Rs sebagai respon untuk
mendefinisikan kondisi yang optimal.
Sistem kromatografi yang digunakan dalam analisis pemisahan
kloramfenikol dan lidokain HCl adalah fase normal yang artinya fase diam
bersifat lebih polar dibandingkan fase gerak yang digunakan. Suatu zat dapat
dipisahkan dari zat lain dengan KLT bila zat memiliki interaksi dengan fase diam
dan fase gerak. Beberapa jenis dan komposisi fase gerak dan pengaruhnya
terhadap baku kloramfenikol dan lidokain HCl dipaparkan dalam tabel IV.
35
Tabel IV. Tabel nilai Rf dan As larutan baku kloramfenikol dan lidokain HCl pada berbagai
komposisi fase gerak
Komposisi Baku Rf As Keterangan
fase gerak
kloramfeni lidokain kloramfeni lidokain
kol HCl kol HCl
n-heksana: Baku 0,23 Puncak 0,67 Puncak Bentuk puncak
etilasetat kloramfenikol mengekor mengekor kloramfenikol
(8,75:16,25) 300 ng dan runcing, namun
lidokain HCl tidak simetris
3000 ng (nilai As di
bawah 0,95).
Baku 0,24 Puncak 1 Puncak Puncak lidokain
kloramfenikol mengekor mengekor HCl mengekor.
600 ng dan
lidokain HCl
6000 ng
Baku 0,24 Puncak 0,75 Puncak
kloramfenikol mengekor mengekor
900 ng dan
lidokain HCl
9000 ng
n- Baku 0,01 0,47 - 1 Kloramfenikol
heksana:tolu kloramfenikol tidak terelusi.
ena:dietilami 300 ng dan Bentuk puncak
n lidokain HCl lidokain HCl
(3,75:19,75: 3000 ng simetris dan
1,5) runcing.
Baku 0,01 0,47 - 1
kloramfenikol
600 ng dan
lidokain HCl
6000 ng
Baku 0,01 0,47 - 1
kloramfenikol
900 ng HCl
dan lidokain
HCl 9000 ng
n- Baku 0,32 0,49 1,67 1 Bentuk puncak
heksana:tolu kloramfenikol kloramfenikol
ena:metanol: 300 ng dan tidak simetris,
dietilamin lidokain HCl lebar, dan tidak
(3,75:19,75: 3000 ng halus. Puncak
6:1,5) lidokain HCl
Baku 0,32 0,48 1,25 1 simetris.
kloramfenikol
600 ng dan
lidokain HCl
6000 ng
36
Baku 0,33 0,49 1,25 1

kloramfenikol
900 ng dan
lidokain HCl
9000 ng
n- Baku 0,25 0,46 1 1 Bentuk puncak
heksana:tolu kloramfenikol kloramfenikol
ena:metanol: 300 ng dan dan lidokain
dietilamin lidokain HCl HCl simetris
(3,75:19,75: 3000 ng dan runcing.
5:1,5)
Baku 0,25 0,47 1 1
kloramfenikol
600 ng dan
lidokain HCl
6000 ng
Baku 0,26 0,47 1 1
kloramfenikol
900 ng dan
lidokain HCl
9000 ng
Tabel IV memaparkan bentuk puncak, nilai Rf, dan As dari puncak hasil
elusi baku kloramfenikol dan lidokain HCl secara KLT dengan deteksi
densitometer pada beberapa jenis dan komposisi fase gerak. Perbedaan jenis dan
komposisi fase gerak menyebabkan perbedaan bentuk puncak, nilai Rf, dan As
karena adanya perbedaan indek polaritas fase gerak. Penjelasan di bawah akan
membahas hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan masing-masing
modifikasi jenis dan komposisi fase gerak.
a. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:etilasetat (8,75:16,75). Penggunaan fase gerak ini berdasarkan penelitian
Vovk dan Simonovska (2005) sebagai fase gerak untuk pemisahan kloramfenikol
terhadap senyawa lain. Berikut adalah densitogram baku kloramfenikol dan
lidokain HCl setelah dielusi:

37
A B
Gambar 15. Puncak baku kloramfenikol 600 ng dan puncak baku lidokain HCl 6000 ng
dengan fase gerak n-heksana:etil asetat (8,75:16,75)
A. Baku kloramfenikol 600 ng (seri menengah)
B. Baku lidokain HCl 6000 ng (seri menengah)
C. Puncak yang dihasilkan pada jalur plat silika gel tanpa totolan baku setelah dielusi
Komposisi fase gerak I ini tidak menghasilkan puncak baku
kloramfenikol dan lidokain HCl yang memenuhi persyaratan asimetrisitas yang
baik yakni 0,95-1,10. Puncak lidokain HCl tidak terelusi sempurna, masih
terdapat bercak lidokain HCl di area penotolan (Rf = 0) sehingga bercak
mengekor. Hal ini menunjukkan bahwa lidokain HCl terikat lebih kuat terhadap
fase diam dibanding fase gerak. N-heksana akan menurunkan polaritas fase gerak
sehingga senyawa akan terikat lebih kuat ke fase diam karena lidokain HCl
bersifat relatif polar. Fase gerak tidak memiliki elution strength dan kepolaran
yang cocok untuk mengelusi bercak lidokain HCl dan membawanya sebagai
bercak bulat utuh agar terdeteksi sebagai puncak yang simetris. Puncak di akhir
fase diam (gambar 15 C) merupakan kontaminan dari fase diam atau fase gerak
38
yang ikut menyerap sinar UV sehingga terbaca sebagai puncak. Puncak tersebut
bukan merupakan puncak baku karena memiliki bentuk, AUC, dan Rf yang sama
untuk tiap jalur pengembangan di fase diam yang digunakan. Berdasarkan hasil
elusi maka fase gerak ini tidak digunakan dalam penelitian ini untuk pemisahan
kloramfenikol dan lidokain HCl.
b. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:toluena:dietilamin (3,75:19,75:1,5). Penggunaan fase gerak ini
berdasarkan penelitian Kiszka dan Madro (2002) yang mengembangkan metode
pemisahan lidokain, kokain, dan benzoilecgonine. Berikut adalah densitogram
baku kloramfenikol dan lidokain HCl setelah dielusi dan gambaran plat KLT di
bawah sinar UV 254 nm setelah dielusi:
A B
dengan fase gerak n-heksana:toluena:dietilamin (3,75:19,75:1,5)
C. Puncak yang dihasilkan pada jalur plat silika gel tanpa totolan baku setelah dielusi
39
Komposisi fase gerak II membawa totolan lidokain HCl sebagai puncak
simetris (As 1) yang terbaca pada Rf 0,47 (masuk ke dalam kisaran Rf 0,2-0,8).
Fase gerak tidak mampu mengelusi kloramfenikol sehingga Rf totolan adalah
0,01. Nilai As puncak kloramfenikol tidak dapat ditentukan karena totolan belum
terelusi untuk terdeteksi sebagai puncak pada jarak pengembangan 10 cm. Tidak
terelusinya kloramfenikol dapat disebabkan karena komposisi fase gerak memiliki
kepolaran yang tidak cocok dengan kepolaran senyawa sehingga kloramfenikol
akan terikat lebih kuat kepada fase diam.
Berdasarkan hasil di atas maka perlu dilakukan usaha untuk
meningkatkan Rf kloramfenikol. Usaha-usaha yang dapat ditempuh meliputi
modifikasi fase gerak atau dengan meningkatkan jarak elusi. Usaha yang pertama
ditempuh adalah modifikasi fase gerak dengan pertimbangan efisiensi waktu
analisis dan pemakaian plat KLT. Untuk meningkatkan nilai Rf kloramfenikol
diperlukan peningkatan banyaknya interaksi kloramfenikol dengan fase gerak
sehingga dapat terelusi naik ke range Rf 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan
(Gandjar dan Rohman, 2007). Bercak hasil pemisahan yang berada dalam 1/5 dari
jarak elusi akan memberikan tempat atau kesempatan kemungkinan munculnya
puncak di belakang analit dan bercak yang berada dalam 4/5 dari jarak elusi akan
memberikan cukup tempat untuk kemungkinan munculnya puncak setelah analit.
Pada gambar densitogram di atas (gambar 16 C) diperoleh puncak selain
puncak baku. Puncak tersebut adalah serapan yang disebabkan oleh pengotor pada
fase diam ataupun fase gerak.

40
c. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:6:1,5). Fase gerak ini merupakan
hasil modifikasi untuk meningkatkan kepolaran fase gerak dari 2,019 menjadi
2,615 dengan penambahan 6,0 ml metanol yang memiliki indeks polaritas 5,1.
Metanol dapat melarutkan baik kloramfenikol dan lidokain HCl. Metanol perlu
ditambahkan karena fase gerak n-heksana:toluena:dietilamin belum memiliki
indeks polaritas yang sesuai dengan polaritas kloramfenikol. Berikut adalah
densitogram baku kloramfenikol dan lidokain HCl setelah dielusi:
A1 A2
Gambar 17. Puncak baku kloramfenikol 300 ng, 600 ng, dan puncak baku lidokain HCl 6000
ng dengan fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:6:1,5)
A1. Baku kloramfenikol 300 ng (seri bawah)
A2. Baku kloramfenikol 600 ng (seri menengah)
Komposisi fase gerak III meningkatkan nilai Rf kloramfenikol dan
lidokain HCl sehingga masuk dalam kisaran Rf 0,2-0,8. Puncak lidokain HCl hasil
elusi dengan fase gerak ini menghasilkan puncak yang simetris dengan nilai As 1.
Hasil elusi totolan kloramfenikol menampakkan puncak yang lebar, tidak halus,
41
dan tidak memenuhi persyaratan nilai As, berada di luar range 0,95-1,10. Hal ini
dapat disebabkan kepolaran fase gerak yang tidak sesuai dengan kepolaran
kloramfenikol.
Puncak kloramfenikol yang melebar, tidak halus, dan asimetris ini dapat
disebabkan karena kelarutan kloramfenikol yang besar pada fase gerak akibat
penambahan metanol yang terlalu banyak. Hal ini mengakibatkan interaksi
kloramfenikol terhadap fase diam berkurang. Untuk pencapaian puncak yang
simetri, runcing, dan sempit diperlukan kesetimbangan sorpsi dan desorpsi
senyawa pada fase diam yang paling optimal. Kesetimbangan ini dapat dicapai
bila fase gerak yang digunakan memungkinkan hal demikian, dalam artian bahwa
kloramfenikol harus agak larut dalam fase gerak namun tidak terlalu larut agar
dapat cukup untuk diadsorbsi fase diam. Fase gerak ini tidak dapat digunakan
untuk pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl sehingga perlu dilakukan
modifikasi lanjut yakni dengan mengurangi volume metanol untuk mengurangi
kepolaran fase gerak.
d. Hasil elusi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5). Fase gerak ini merupakan
hasil modifikasi untuk menurunkan indeks polaritas fase gerak III dari 2,615
menjadi 2,533. Berikut adalah densitogram baku kloramfenikol dan lidokain HCl
setelah dielusi:
42
A B
dengan fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)
Komposisi fase gerak IV memiliki kepolaran yang paling optimal untuk
dapat mengelusi kloramfenikol secara serentak, begitu juga halnya dengan
lidokain HCl sehingga menghasilkan puncak simetris dan runcing. Interaksi
kloramfenikol dan lidokain HCl terhadap fase gerak lebih besar dibanding fase
diam sehingga senyawa dapat terelusi dan terpisah dalam kecepatan migrasi serta
menghasilkan nilai Rf yang berbeda.
Berdasarkan hasil optimasi yang dilakukan, dari keempat komposisi fase
gerak, komposisi fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin
(3,75:19,75:5:1,5) memenuhi kriteria puncak yang paling baik sehingga
merupakan fase gerak yang optimal. Hasil elusi (gambar 18) menunjukkan bentuk
puncak yang simetris, sempit, dan runcing dengan nilai As berada dalam kisaran
0,95-1,10 dan nilai Rf yang berada dalam kisaran 0,2-0,8 yakni Rf 0,26 untuk baku
kloramfenikol dan Rf 0,47 untuk baku lidokain HCl.
Pemisahan antara senyawa dapat terjadi karena adanya interaksi antara
senyawa dengan fase diam dan fase gerak. Terdapat interaksi antara kloramfenikol
dan lidokain HCl dengan fase diam sehingga diperlukan fase gerak dengan
43
kepolaran yang sesuai untuk memutus sebagian interaksi ini. Berikut adalah
gambaran interaksi kloramfenikol dan lidokain HCl dengan fase diam:
O
O H
Si O
O Cl O H
Cl
CH
H H2C
O
Si O
O CH
NH OH
O CH
O H
Si O
O H
Si O
N O
O
O H O
Si O
Gambar 19. Interaksi kloramfenikol dengan fase diam

Interaksi hidrogen
O CH3
H3C
H
O Si O N H
O
O C
H
O Si O CH2
O
N
H
O Si O
Gambar 20. Interaksi lidokain dengan fase diam

Interaksi hidrogen
44
Kloramfenikol bersifat lebih polar dan memiliki interaksi hidrogen lebih
banyak dengan fase diam silika dibandingkan lidokain sehingga setelah elusi
dengan fase gerak, nilai Rf lidokain akan lebih besar dibanding kloramfenikol.
Gugusan polar dari kloramfenikol dan lidokain HCl akan mengadakan
interaksi hidrogen dengan metanol. Gugus non polar dari kloramfenikol dan
lidokain HCl mengadakan interaksi hidrofobik dengan toluena dan n-heksana.
Dari gambar interaksi (gambar 21 dan 22) dapat dilihat bahwa interaksi yang
terjadi antara lidokain HCl dengan penyusun fase gerak terbesar yakni toluena
adalah lebih banyak dibanding kloramfenikol. Lidokain, bersifat lebih non polar
dibanding kloramfenikol, akan terlarut dan terbawa oleh fase gerak lebih cepat
dibanding kloramfenikol sehingga Rf lidokain akan lebih besar dibanding
kloramfenikol. Penambahan dietilamin, suatu senyawa basa dengan pKb 2,9
(Quin, 2000), dalam fase gerak akan membentuk molekul lidokain basa sesuai
dengan reaksi pada gambar 22.

H
C2H5 N C2H5
CH3 H3C O H
H H
C2H5 N C2H5
O
H O CH3 H3C
CH2
O
H
N C CH O Cl
O O
HN C C Cl
H H
H O CH3 H3C
CH3 H3C O H
H
H C2H5 N C2H5
C2H5 N C2H5
Gambar 21. Interaksi kloramfenikol dengan fase gerak n-

heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)
Interaki van der Waals
Interaksi hidrogen
45
CH3 CH3
H2 HN C2H5 H2 Cl H
N C2H5
NH C C NH Cl + NH C C N +
C2H5 C2H5
O O
CH3 CH3
H
C2H5 N C2H5
CH3 H3C O H
CH3
H O
H2
N C C N
CH3
CH3
C2H5
CH3 H3C O H NH
C2H5
H
C2H5 N C2H5
Gambar 22. Reaksi asam basa antara lidokain HCl dengan dietilamin dan interaksi lidokain
dengan fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)
Interaki van der Waals
Interaksi hidrogen
Penentuan reprodusibilitas nilai Rf senyawa dilakukan dengan pemisahan
baku campuran kloramfenikol dan lidokain HCl (untuk masing-masing seri
rendah, menengah, dan tinggi) serta larutan sampel sebanyak tiga kali replikasi.
Sampel yang digunakan adalah sediaan obat tetes telinga Colme® volume 8 ml
yang terdiri dari zat aktif kloramfenikol 10% dan lidokain HCl 4% dengan
pembawa propilen glikol. Sediaan kental ini dipipet untuk mengambil sejumlah
volume sampel.
Dalam tahapan optimasi, sampel digunakan untuk tujuan kualitatif
artinya sampel ditotolkan dan dielusi seperti perlakuan baku untuk melihat apakah
jenis dan komposisi fase gerak yang ditetapkan optimal pada baku juga dapat
digunakan untuk memisahkan kloramfenikol dan lidokain HCl dari sampel

46
sediaan. Digunakannya sampel dalam tahapan optimasi bertujuan untuk
meyakinkan bahwa kondisi optimal yang diperoleh dapat digunakan untuk
tahapan selanjutnya yakni validasi metode dan pada akhirnya penetapan kadar
analit dalam sediaan.
Preparasi sampel diperlukan untuk memperoleh keseluruhan zat aktif
analit dari sediaan untuk dianalisis kadarnya. Preparasi sampel dilakukan dua kali
yaitu preparasi untuk analisis lidokain HCl dan preparasi lanjut untuk analisis
kloramfenikol. Preparasi sampel dimulai dengan mengambil sejumlah volume
sampel yang telah dicampur secara homogen, agar cuplikan yang dianalisis
menggambarkan keadaan keseluruhan analit dalam sediaan, kemudian diencerkan
(campuran A). Totolan 1 µl dari campuran A memiliki jumlah teoritis 6000 ng
lidokain HCl. Berdasarkan seri jumlah yang digunakan dalam tahap optimasi,
jumlah minimal 3000 ng sampai jumlah maksimal 9000 ng lidokain HCl
menampakkan puncak yang baik. Puncak nomor 2 dalam sampel (gambar 23 C2)
memiliki nilai Rf yang mirip dengan baku lidokain HCl sehingga puncak tersebut
adalah puncak lidokain HCl. Preparasi sampel untuk menampilkan puncak
lidokain HCl menghasilkan puncak simetris dan runcing sedangkan puncak
kloramfenikol mengekor. Totolan sampel mengandung jumlah kloramfenikol
yang terlalu banyak sehingga fase gerak tidak mampu mengelusi kloramfenikol
secara serentak.
Campuran A kemudian diambil dan diencerkan dengan etanol. Tujuan
pengerjaan tersebut adalah untuk memperkecil konsentrasi kloramfenikol 15000
ppm menjadi 600 ppm yang siap ditotolkan sebanyak 1 µl pada plat yang berbeda
47
agar menampakkan puncak kloramfenikol 600 ng yang tidak terlalu besar.
Berdasarkan seri jumlah yang digunakan dalam tahap optimasi, jumlah minimal
300 ng sampai jumlah maksimal 900 ng kloramfenikol menampakkan puncak
yang baik. Puncak dalam sampel (gambar 23 C1) memiliki nilai Rf yang mirip
dengan baku kloramfenikol sehingga puncak tersebut adalah puncak
kloramfenikol. Preparasi sampel untuk menampilkan puncak kloramfenikol
menghasilkan puncak simetris dan runcing. Densitogram hanya menampilkan satu
puncak yakni kloramfenikol karena preparasi sampel tahap ini menyebabkan
jumlah lidokain HCl yang terlalu kecil untuk dapat dideteksi sebagai puncak.
Hasil elusi larutan baku campuran kloramfenikol dan lidokain HCl serta
larutan sampel sediaan obat tetes telinga Colme® adalah sebagai berikut:
A B C1
D
C2
Gambar 23. Hasil pemisahan baku campuran kloramfenikol 600 ng dan lidokain HCl 6000
ng, serta pemisahan sampel obat tetes telinga Colme® dengan fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)
C1. Puncak kloramfenikol dalam sampel obat tetes telinga Colme® (plat I)
C2. Puncak lidokain HCl dalam sampel obat tetes telinga Colme® (plat II)
D. Puncak yang dihasilkan pada jalur plat II silika gel tanpa totolan sampel setelah dielusi
48
Puncak di akhir fase diam (gambar 23D) merupakan kontaminan dari
fase diam atau fase gerak yang ikut menyerap sinar UV sehingga terbaca sebagai
puncak. Berikut adalah penjabaran hasil elusi baku campuran kloramfenikol dan
lidokain HCl serta larutan sampel sediaan obat tetes telinga Colme®:
Tabel V. Tabel nilai Rf, As, Rs dan AUC larutan baku campuran kloramfenikol dan lidokain
HCl serta sampel Colme® dengan fase gerak n-heksana:toluena:metanol:dietilamin
(3,75:19,75:5:1,5)
Baku campuran
Sampel
Parameter
Replikasi
Seri rendah Seri menengah Seri tinggi

Kloram Lidokai Kloramfe Lidokai Kloramfe Lidokai
Kloramfe Lidokai
fenikol n HCl nikol 600 n HCl nikol 900 n HCl
nikol n HCl
300 ng 3000 ng ng 6000 ng ng 9000 ng
As
1 1 1 1 1 1 1 1
1 Rf 0,24 0,46 0,24 0,46 0,24 0,46 0,23 0,48
Rs 3,38 3,38 2,93 2,83
AUC 1560,7 3941,5 2389,9 6745,5 3421,9 9598,1 2717,8 6421,6
As
1 1 1 1 1 1 1 1
2 Rf 0,24 0,46 0,24 0,47 0,24 0,47 0,23 0,48
Rs 3,14 3,07 3,07 2,83
AUC 1511,1 3773,9 2487,9 6863,1 3556,8 9594,8 2840,0 6391,4
As
1 1 1 1 1 1 1 1
3 Rf 0,24 0,46 0,24 0,47 0,24 0,48 0,23 0,48
Rs 3,43 3,54 3,29 2,83
AUC 1452,8 3649,1 2602,1 6642,9 3662,6 9315,6 2624,6 6531,8
Berdasarkan data yang ditampilkan pada tabel V, semua hasil pemisahan
menampakkan bentuk puncak kloramfenikol dan lidokain HCl simetris dan
runcing. Puncak kloramfenikol dan lidokain HCl terpisah dengan nilai resolusi
yang memenuhi baseline resolution lebih dari 1,5 dan nilai Rf puncak
kloramfenikol dan lidokain HCl berada antara 0,2-0,8. Tiga seri jumlah yakni seri
rendah, menengah, dan tinggi yang digunakan dalam tahapan optimasi
menunjukkan adanya peningkatan respon detektor densitometer. Peningkatan
respon terbaca dari nilai AUC yang meningkat. Tiga seri jumlah ini dipilih dengan
melihat respon detektor terhadap sinyal atau puncak analit yang paling optimal.
49
Puncak yang dihasilkan tidak terlalu kecil sehingga tidak terganggu oleh noise
alat, puncak yang dihasilkan juga tidak terlalu besar sehingga memunculkan
puncak yang hampir sebanding antara kloramfenikol dan lidokain HCl. Seri
larutan baku tersebut dinyatakan sebagai seri jumlah. Tiga seri jumlah ini dapat
digunakan sebagai acuan dan batasan pengarahan seri jumlah larutan baku yang
digunakan dalam tahap validasi metode dan penetapan kadar. Tiga seri jumlah ini
juga dapat digunakan sebagai acuan pengarahan konsentrasi zat aktif
kloramfenikol dan lidokain HCl di dalam sediaan obat tetes telinga Colme® agar
memberikan hasil pemisahan optimal serupa dengan hasil yang digambarkan dari
tahapan optimasi.
Jarak elusi yang digunakan adalah 10 cm karena pada jarak elusi tersebut
dapat diperoleh pemisahan yang telah baik yakni nilai Rs ≥ 1,5 sehingga tidak
diperlukan jarak elusi yang lebih panjang yakni 15 cm. Jarak elusi 10 cm
digunakan untuk semua percobaan baik pada baku maupun sampel dengan
beberapa fase gerak yang akan dioptimasi. Hal ini bertujuan memastikan bahwa
perbedaan Rf yang muncul dari puncak kloramfenikol dan lidokain HCl adalah
karena akibat perbedaan jenis dan komposisi (indeks polaritas fase gerak) yang
digunakan dan bukan karena jarak elusi yang digunakan.
Optimalnya jenis dan komposisi fase gerak dinilai dari analisis
reprodusibilitas bentuk puncak densitogram termasuk peak asymmetry factor (As),
nilai Rf tiap puncak, dan nilai resolusi (Rs) tiap replikasi sampel. Nilai As puncak
kloramfenikol dan lidokain HCl dalam sampel adalah 1 dengan nilai KV 0% dari
tiga replikasi. Nilai Rf puncak kloramfenikol dan lidokain HCl berturut-turut

50
adalah 0,23 dan 0,48 dengan nilai KV 0% dari tiga replikasi. Nilai Rs puncak
kloramfenikol dan lidokain HCl dalam sampel adalah 2,83 dengan nilai KV 0%
dari tiga replikasi.

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Metode KLT densitometri dengan instrumen Camag TLC Scanner 3
CAT. No. 027.6485 SER. No.160602, fase diam silika gel, fase gerak n-
heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5), dan jarak elusi 10 cm
menghasilkan parameter optimum yaitu bentuk puncak yang simetris, sempit, dan
runcing dengan nilai As 1, nilai Rf kloramfenikol 0,23, nilai Rf lidokain HCl 0,48,
nilai Rs 2,83, dan KV dari nilai Rf, As, dan Rs 0%.
Berdasarkan hasil penelitian tersebut maka disimpulkan bahwa metode
KLT densitometri dapat digunakan untuk memisahkan campuran kloramfenikol
dan lidokain HCl dalam sediaan obat tetes telinga Colme®.
B. Saran
Perlu dilakukan validasi metode dan penetapan kadar kloramfenikol dan
lidokain HCl dalam sediaan obat tetes telinga Colme® dengan menggunakan
metode KLT densitometri dengan perbandingan komposisi fase gerak n-
51
52
DAFTAR PUSTAKA
Anonim1, 1986, Drug InformationTM 86, American Society of Hospital

Pharmacists, Inc., United States of America, pp.8:12.08, 24:04.
Anonim2, 2002, Handbook of Nonprescription Drugs An Interactive Approach to

Self-Care, 13th Edition, American Pharmaceutical Association, Washington,
DC, pp.760.
Anonim3, 2006, MIMS Ofiicial Drug Reference for Indonesian Medical

Profession, 104th ed., CMPMedica, Jakarta, hal. 408.
Anonim4, 2007, Properties of Solvents on Various Sorbents,

http://www.sanderkok.com, diakses tanggal 9 Maret 2011.
Anonim5, 2009, Informatorium Obat Nasional Indonesia 2008 Badan Pengawas

Obat dan Makanan Republik Indonesia, CV. Sagung Seto, Jakarta, hal. 757.
Anonim6, 2010, TLC : Retention Factor, http://orgchem.colorado.edu, diakses

tanggal 11 Maret 2011.
Bartzatt, R., 2003, Two Lead Drug Designs Based on Chloramphenicol As The
Parent Structure, Which Express Alkylation Activity With Potential For
Clinical Applications, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12831508,
diakses tanggal 10 September 2011.
Clark, J., 2007, Kromatografi Lapis Tipis, diakses dari http://www.chem-istry.org,

diakses tanggal 9 Maret 2011.
Clarke, E. G. C., 1986, Isolation and Identification of Drug in Pharmaceuticals

Body Fluid and Post-Material, The Pharmaceutical Press, London, pp. 246,
329.
Dean, J., 1995, Analytical Chemistry Handbook, Mc Graw-Hill Inc., USA, pp.
5.92 –5.93, 5.106.
Dibbern, H.W., Muller, R.M., Wirbitzki, E., 2002, UV and IR Spectra

Pharmaceutical Substances (UV and IR) and Pharmaceutical and Cosmetic
Excipients (IR)¸ Editio Cantor Verlag, German, pp 469.
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope

Indonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta,
hal.189-191, 497.
53
Djaafar, Z. A., 2005, Masalah Infeksi Kronis Telinga Tengah dan Tatalaksana
Bedah Mikro Telinga di Indonesia, http://www.majalah-
farmacia.com/rubrik/one_news.asp?IDNews=167, diakses tanggal 27
Februari 2011.
Gandjar I.G. dan Rohman A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar,
Yogyakarta, hal. 333-337, 359.
Gasparic, J. dan Churacek, J., 1978, Laboratory Handbook of Paper and Thin-
Layer Chromatography, Ellis Horwood Limited, England, pp. 56-57.
Habtemariam, S., 2006, Chromatographic Principles and Theory,

http://www.herbalanalysis.co.uk/Adsorption.html, diakses tanggal 22 Juni
2011.
Harjadi, W., 1986, Ilmu Kimia Analitik Dasar, Percetakan PT. Gramedia, Jakarta,
hal. 70-71.
Honrath, R.E.,1995, Mass Transpor Process, http://www.cee.mtu.edu, diakses

Khopkar, S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, Universitas Indonesia Press,
Jakarta, hal.128-129, 155-156.
King, M.W., 2011, Protein Synthesis, http://themedicalbiochemistrypage.org,

diakses tanggal 28 Februari 2011.
Kiszka, M. dan Madro, R., 2002, The Usefulness of The Thin-Layer

Chromatography Method in The Identification of Cocaine and Its
Metabolite Benzoylecgonine in Autopsy Material,
http://www.forensicscience.pl/component/option,com_jbook/task,view/Item
id,9/catid,36/id,236/lang,en/, diakses tanggal 3 Juli 2011.
Malenović, A., Ivanović, D., Medenica M., dan Jančić, B., 2004, Application of
The Response Surface Methodology for RP-HPLC Analysis of Lidocaine
and Cetrimonium Bromide, acta.chem-soc.si/51/51-3-559.pdf, diakses
tanggal 2 Juli 2011.
Martono, 1996, Penentuan Kadar Kurkumin secara Kromatografi Lapis Tipis

Densitometri, Buletin ISFI Yogyakarta, Vol. 2, No. 4, April 1996, 11-21.
National Institute on Deafness and Other Communication Disorders, 2010, Ear

Infections in Children, www.nidcd.nih.gov, diakses tanggal 27 Februari
2010.
54
National Physical Laboratory, 2010, UV-visible Spectroscopy,

www.kayelaby.npl.co.uk/chemistry/3_8/3_8_7.html, diakses tanggal 4 Juli
2011.
Perlstein, D., 2011, Otitis Media (Middle Ear Infection or Inflammation),

www.medicinenet.com, diakses tanggal 27 Februari 2011.
Quin, L.D., 2000, A Guide to Organophosphorus Chemistry, John Wiley & Sons,
United States of America, pp. 79.
Riyadi, W., 2009, Validasi Metode Analisis, www.chem-is-try.org, diakses

Rohman, A., 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, Graha Ilmu, Yogyakarta,
hal. 2-3, 47, 49-50, 53-54.
Scott, R.P.W., 2008, Principles and Practices of Chromatography,

http://www.chromatography-online.org, diakses tanggal 11 Maret 2011.
Sherma, J. dan Fried, B., 1996, Handbook of Thin-Layer Chromatography, 2nd

ed., Marcel Dekker Inc., New York, pp. 56, 57, 132, 287-289.
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., dan Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC Method
Development, 2nd ed., JohnWiley and Sons, Inc., New York, pp. 210, 488,
690.
Subarkah, A., 2010, Otitis Eksterna, www.klinikindonesia.com, diakses tanggal

23 Februari 2011.
Tan, H.T., dan Rahardja, K., 2010, Obat-Obat Sederhana untuk Gangguan
Sehari-hari : Cara menangani sendiri gangguan sehari-hari dengan
terutama obat-obat bebas sederhana (Self Care), PT Elex Media
Komputindo Kompas Gramedia, Jakarta, hal. 135.
United States Pharmacopeial Convention, 1995, The United States Pharmacopeia,

25th edition, United States Pharmacopeial Convention Inc., Rockville, pp.
335, 887.
Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Edisi V, Gadjah Mada
University Press, Yogyakarta, hal. 939.
Vovk, Irena, Simonovska, Breda, 2005, Development and Validation of a Thin-

Layer Chromatographic Method for Determination of Chloramphenicol
Residues on Pharmaceutical Equipment Surfaces,
http://business.highbeam.com/408580/article 1G1-180065937/development-
and-validation-thinlayer-chromatographic, diakses tanggal 2 Maret 2011.
55
Zivanovic, L., Kustrin, S.A., Vasiljevic, M., dan Nemcova, I., 1995, Comparision
of High-Performance and Thin-Layer Chromatographic Methods for the
Assay of Lidocaine, www.ncbi.nlm.nih.gov, diakses tanggal 2 Maret 2011.
56
LAMPIRAN
57
Lampiran 1. Sertifikat Analisis Baku Kloramfenikol

58
Lampiran 2. Sertifikat Analisis Baku Lidokain Hidroklorida

59
Lampiran 3. Spektrum Baku Kloramfenikol dan Lidokain Hidroklorida

pada 200-400 nm
a. Spektrum baku kloramfenikol
Track Baku λmaks

1 Kloramfenikol seri 283 nm
bawah
2 Kloramfenikol seri 281 nm
menengah
3 Kloramfenikol seri atas 281 nm
60
b. Spektrum baku lidokain HCl
Track Baku λmaks

1 Lidokain HCl seri bawah 263 nm
2 Lidokain HCl seri menengah 264 nm
3 Lidokain HCl seri atas 263 nm
61
c. Panjang gelombang overlapping kloramfenikol konsentrasi 300 ppm 1

mikro (seri bawah) dan lidokain HCl konsentrasi 3000 ppm 1 mikro (seri
bawah)
Wavelength : 242,0 [nm]

Signal : 19,2 [AU]
d. Panjang gelombang overlapping kloramfenikol konsentrasi 300 ppm 2

mikro (seri menengah) dan lidokain HCl konsentrasi 3000 ppm 2 mikro
(seri menengah)

Signal : 21,3 [AU]
62
e. Panjang gelombang overlapping kloramfenikol konsentrasi 300 ppm 3

mikro (seri atas) dan lidokain HCl konsentrasi 3000 ppm 3 mikro (seri
atas)

Signal : 21,3 [AU]
Lampiran 4. Perhitungan Kepolaran Fase Gerak

Indek Polaritas
N-heksana 0,1
Etil asetat 4,4
Toluena 2,4
Metanol 5,1
Dietilamin 1,8
a. n-heksana:etilasetat (8,75:16,75)
 8,75   16,75 
Indek polaritas =  x0,1   x 4,4   2,895
 25   25 
b. n-heksana:toluena:dietilamin (3,75:19,75:1,5)
 3,75   19,75   1,5 
Indek polaritas =  x0,1   x2,4    x1,8   2,019
 25   25   25 
63
c. n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:6:1,5)
Indek polaritas =
 3,75   19,75  6   1,5 
 x0,1   x2,4    x5,1   x1,8   2,6153
 31   31   31   31 
d. n-heksana:toluena:metanol:dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)
Indek polaritas =
 3,75   19,75   5   1,5 
 x0,1   x2,4    x5,1   x1,8   2,5325
 30   30   30   30 
Lampiran 5. Data Penimbangan Bahan

Replikasi Bobot Kloramfenikol (g) Bobot Lidokain HCl (g)
1 0,0099 0,0151
2 0,0100 0,0150
3 0,0099 0,0150
a. Perhitungan seri baku kloramfenikol
0,0099g
Konsentrasi stok =  990 ppm
10,0ml
Konsentrasi baku yang dibuat adalah 300 ppm
C1.V1 = C2.V2
990 ppm. 1,5 ml = C2. 5 ml
C2 = 297 ppm
 Seri bawah kloramfenikol :
Volume penotolan = 1 l
297ng
297 ppm = 0,297 mg 
ml 1l
 Seri menengah kloramfenikol:
64
594ng
297 ppm = 0,297 mg 
ml 2l
 Seri atas kloramfenikol:
891ng
297 ppm = 0,297 mg 
ml 3l
b. Perhitungan seri baku lidokain HCl
0,0151g
Konsentrasi stok =  3020 ppm
5,0ml
Konsentrasi baku yang dibuat adalah 3000 ppm
 Seri bawah lidokain HCl :
3020ng
3020 ppm = 3,020 mg 
ml 1l
 Seri menengah lidokain HCl:
6040ng
3020 ppm = 3,020 mg 
ml 2l
 Seri atas lidokain HCl:
9060ng
3020 ppm = 3,020 mg 
ml 2l
Perhitungan data penimbangan replikasi 2 dan 3 mengikuti cara yang sama
dengan penyesuaian jumlah bahan yang ditimbang.
Lampiran 6. Sistem Kromatografi Lapis Tipis Densitometri yang Digunakan

65
66
Lampiran 7. Densitogram Hasil Elusi Kloramfenikol dan Lidokain HCl

dengan Fase Gerak N-heksana:Etilasetat (8,75:16,75)
a. Densitogram kloramfenikol seri rendah (300 ppm 1 mikroliter)
b. Densitogram kloramfenikol seri menegah (300 ppm 2 mikroliter)

67
c. Densitogram kloramfenikol seri atas (300 ppm 3 mikroliter)
d. Densitogram lidokain HCl seri bawah (3000 ppm 1 mikroliter)

68
e. Densitogram lidokain HCl seri menengah (3000 ppm 2 mikroliter)
f. Densitogram lidokain HCl seri atas (3000 ppm 3 mikroliter)

69
g. Blanko hasil elusi jalur tanpa totolan baku

dengan Fase Gerak N-heksana:Toluena:Dietilamin (3,75:19,75:1,5)
70
b. Densitogram kloramfenikol seri menengah (300 ppm 2 mikroliter)

71
d. Densitogram lidokain HCl seri rendah (3000 ppm 1 mikroliter)
e. Densitogram lidokain HCl seri menegah (3000 ppm 2 mikroliter)

72

(3,75:19,75:6:1,5)
73

74

75

(3,75:19,75:5:1,5)

76

77
Lampiran 11. Densitogram Hasil Elusi dan Pemisahan Baku Campuran

Kloramfenikol dan Lidokain HCl dengan Fase Gerak Optimum N-
heksana:Toluena:Metanol:Dietilamin (3,75:19,75:5:1,5)
a. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri rendah (300 ppm 1
mikroliter dan 3000 ppm 1 mikroliter) replikasi 1
b. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri menengah (300 ppm 2

78
c. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri atas (300 ppm 3

d. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri rendah (300 ppm 1

79
e. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri menengah (300 ppm 2

f. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri atas (300 ppm 3

80
g. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri rendah (300 ppm 1

h. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri menengah (300 ppm 2

81
i. Densitogram kloramfenikol dan lidokain HCl seri atas (300 ppm 3

Lampiran 12. Densitogram Hasil Elusi dan Pemisahan Sampel Sediaan Obat
Tetes Telinga Colme® dengan Fase Gerak Optimum N-
a. Densitogram kloramfenikol replikasi 1
82
b. Densitogram kloramfenikol replikasi 2
c. Densitogram kloramfenikol replikasi 3
d. Densitogram lidokain HCl replikasi 1

83
e. Densitogram lidokain HCl replikasi 2
f. Densitogram lidokain HCl replikasi 3

84
g. Blanko hasil elusi jalur tanpa totolan sampel
Lampiran 13. Perhitungan Peak Asymmetry Factor (As), Resolusi (Rs), Nilai
Koefisien Variansi (% KV) As, Rf, dan Rs Hasil Pemisahan Campuran
Kloramfenikol dan Lidokain HCl dengan Fase Gerak Optimum N-
a b
10% tinggi puncak
tinggi puncak = 1,5 cm

10% tinggi puncak = 0,15 cm
85
a. Perhitungan nilai Peak Asymmetry Factor (As)

Diketahui : .
a = 0,2 cm
b = 0,2 cm
b 0,2 cm
As   1
a 0,2 cm
Nilai As larutan baku campuran kloramfenikol dan lidokain HCl serta sampel
Colme®
Replikasi Baku/sampel As
I, II, dan III Baku kloramfenikol 300 ng 1

(seri rendah)
Baku lidokain HCl 3000 ng
(seri rendah)
Baku kloramfenikol 600 ng 1
(seri menengah)
(seri menengah)
Baku kloramfenikol 900 ng 1
(seri atas)
(seri atas)
Sampel 1
b. Perhitungan nilai resolusi (Rs) antara puncak kloramfenikol dan lidokain

HCl
86
Diketahui : Rf kloramfenikol = 0,24

: Rf lidokain HCl = 0,47
: end Rf kloramfenikol = 0,28
: start Rf kloramfenikol = 0,22
: end Rf lidokain HCl = 0,51
: start Rf lidokain HCl = 0,42
2(max Rf 1  max Rf 2)
Resolusi =
(endRf 1  startRf 1)  (endRf 2  startRf 2)
2(0,24  0,47)
Resolusi =  3,07
(0,28  0,22)  (0,51  0,42)
Nilai Rf dan Rs larutan baku campuran kloramfenikol dan lidokain HCl serta
sampel Colme®
Replikasi Baku/sampel Rf Rs
I Baku kloramfenikol 300 ng 0,24 3,38

(seri rendah)
Baku lidokain HCl 3000 ng 0,46
(seri rendah)
Baku kloramfenikol 600 ng 0,24 3,38
(seri menengah)
(seri menengah)
(seri atas)
(seri atas)
Sampel kloramfenikol 0,23 2,83

lidokain HCl 0,48
II Baku kloramfenikol 300 ng 0,24 3,14

(seri rendah)
(seri rendah)
(seri menengah)
87
(seri menengah)
Baku kloramfenikol 900 ng 0,24 3, 07
(seri atas)
(seri atas)

lidokain HCl 0,48
III Baku kloramfenikol 300 ng 0,24 3,43

(seri rendah)
(seri rendah)
(seri menengah)
(seri menengah)
(seri atas)
(seri atas)

lidokain HCl 0,48
c. Perhitungan nilai koefisien variansi (% KV) As hasil pemisahan campuran

kloramfenikol dan lidokain HCl dalam sediaan obat tetes telinga Colme®
Diketahui : nilai As kloramfenikol dan lidokain HCl replikasi 1 = 1
: nilai As kloramfenikol dan lidokain HCl replikasi 2 = 1
: nilai As kloramfenikol dan lidokain HCl replikasi 3 = 1
SimpanganBaku 0
% KV = x100%   0%
NilaiRfRat a  Rata 1
d. Perhitungan nilai koefisien variansi (% KV) Rf hasil pemisahan campuran

Diketahui : nilai Rf kloramfenikol replikasi 1 = 0,23
: nilai Rf kloramfenikol replikasi 2 = 0,23
88
: nilai Rf kloramfenikol replikasi 3 = 0,23

SimpanganBaku 0
% KV = x100%   0%
NilaiRfRat a  Rata 0,23
Diketahui : nilai Rf lidokain HCl replikasi 1 = 0,48

: nilai Rf lidokain HCl replikasi 2 = 0,48
: nilai Rf lidokain HCl replikasi 3 = 0,48
SimpanganBaku 0
% KV = x100%   0%
e. Perhitungan nilai koefisien variansi (% KV) Rs hasil pemisahan campuran

Diketahui : nilai Rs kloramfenikol dan lidokain HCl replikasi 1 = 2,83
: nilai Rs kloramfenikol dan lidokain HCl replikasi 2 = 2,83
: nilai Rs kloramfenikol dan lidokain HCl replikasi 3 = 2,83
SimpanganBaku 0
% KV = x100%   0%
f. Plat hasil pemisahan campuran kloramfenikol dan lidokain HCl dalam

preparasi sediaan obat tetes telinga Colme® sampel untuk analisis lidokain
HCl
Lidokain HCl
Kloramfenikol mengekor
89
g. Plat hasil elusi campuran kloramfenikol dan lidokain HCl dalam preparasi
sediaan obat tetes telinga Colme® untuk analisis kloramfenikol
Kloramfenikol
90
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi berjudul Optimasi Metode Kromatografi

Lapis Tipis Densitometri pada Pemisahan
Kloramfenikol dan Lidokain HCl dalam Sediaan Obat
Tetes Telinga Colme® memiliki nama lengkap Felicia
Putri Hernat. Penulis dilahirkan di Pontianak pada
tanggal 12 September 1990 sebagai anak kedua dari tiga
bersaudara, dari pasangan Hermanius The Soi Hui dan
Natalia K. Ngiam Lie Tjhiu. Pendidikan formal yang
pernah ditempuh penulis adalah menyelesaikan
pendidikannya di SD Gembala Baik II Pontianak (1996-
2002), SMP Santo Petrus Pontianak (2002-2005), SMA
Santo Petrus Pontianak (2005-2008). Penulis
melanjutkan pendidikannya di Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2008. Selama menempuh
pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma penulis terlibat dalam
berbagai kegiatan dan organisasi, antara lain Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas
(BEMF) Farmasi sebagai koordinator divisi Penelitian dan Pengembangan
(LITBANG) tahun 2010-2011 dan sebagai gubernur tahun 2011-2012. Di bidang
akademik, penulis pernah menjadi asisten dosen praktikum Kimia Dasar dan
praktikum Kimia Organik. Penulis adalah peraih juara III untuk ajang Olimpiade
Nasional MIPA tingkat KOPERTIS V yang diselenggarakan oleh DIKTI tahun
2010, delegasi KOPERTIS V untuk ON MIPA tingkat nasional tahun 2010, juara
VIII tingkat nasional dalam lomba karya tulis ilmiah Scientific Fair yang diadakan
Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro tahun 2010, delegasi universitas
untuk ajang Association of Christian Universities and Colleges in Asia (ACUCA)
tahun 2010 di Korea Selatan, dan juara III Mahasiswa Berprestasi (MAWAPRES)
tingkat Kopertis V tahun 2011.

Full

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Full

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

OPTIMASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

OPTIMASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

I’d like to share

“Success is going from failure to failure without losing enthusiasm.”

penelitian dan penyusunan skripsi berjudul “Optimasi Metode Kromatografi Lapis

Aktif dalam Sediaan Obat Tetes Telinga Colme®”.

Penulis menyadari bahwa penelitian dan penyusunan skripsi ini dapat

berbagai pihak. Penulis mengucapkan terima kasih kepada :

Dharma periode 2006-2010 yang memberikan kesempatan kepada saya untuk

menuntut ilmu di fakultas ini.

2. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas

waktunya dalam memberikan arahan, kritik, saran, dan kesediaan beliau

membuka wawasan saya. Terima kasih atas pendampingannya dari awal

sampai akhir penelitian dan penyusunan penulisan skipsi.

4. Jeffry Julianus, M.Si. selaku dosen penguji atas bimbingan, diskusi,

atas waktu yang diluangkan untuk memberikan masukan selama penulisan

langkah penelitian ini.

8. dr. Fenty selaku dosen pendamping akademik atas pendampingan dan

perhatiannya terhadap perkembangan saya selama masa perkuliahan ini.

ilmu, pengalaman, semangat dan persahabatan berharga yang dibagikan.

kasih atas kesabaran, kerjasama, persahabatan, canda, dan semangat selama

11. Sari Tambunan, Theresia Wijayanti, Winarti H. Wibowo, Novi Chairio,

Helena Angelina Kurniawan, Citra Dewi Aryani, Ayesa Syenina, Dina

Christiana Dewi, Amelia Ernesta, Agnes Susianti, Florentina Sunaryo, Sandra

Ruby sebagai teman seperjuangan dalam satu lantai laboratorium Analisis

senantiasa siap membantu dan meluangkan waktunya dalam penyediaan

bahan dan alat selama penelitian.

kasih atas semua kebersamaan, dan bantuan selama perkuliahan.

terselesaikannya penulisan skripsi.

Penulis menyadari adanya kekurangan dalam penyusunan skripsi oleh

karena keterbatasan wawasan dan kemampuan. Penulis membuka diri untuk

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING……………………………….. ii

HALAMAN PENGESAHAN…………………………………………………. iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ………………………………………………. iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ………………………………………. v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ……….. vi

DAFTAR TABEL……………………………………………………………… xiv

DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………………… xvii

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA………………………………………….. 5

C. Obat Tetes Telinga……………………………………………...…………… 7

D. Colme® Ear Drop………………………………………………...………….. 7

E. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ……………………………...…………….. 8

3. Aplikasi penotolan sampel…………………..…………………………… 11

BAB III METODE PENELITIAN…………………………………………….. 20

A. Jenis dan Rancangan Penelitian………………………...…………………… 20

F. Tata Cara Penelitian…………………………………………...……………... 22

1. Pembuatan larutan baku kloramfenikol………………………...…….…… 22

2. Pembuatan larutan baku lidokain HCl……….…………...…………….… 22

3. Pembuatan larutan campuran baku kloramfenikol dan lidokain HCl…….. 23

5. Penentuan panjang gelombang pengamatan kloramfenikol dan lidokain

6. Optimasi metode KLT densitometri………………..……………………... 24

4. Koefisien variansi ………………………………………………………… 26

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN………………………………………. 28

A. Jenis dan Komposisi Fase Gerak……………………………………………. 28

B. Pembuatan Larutan Baku……………………………………………………. 29

C. Optimasi Metode Pemisahan Kloramfenikol dan Lidokain HCl dalam

Sediaan Obat Tetes Telinga Colme® dengan KLT Densitometri……………. 30

1. Penentuan panjang gelombang pengamatan kloramfenikol dan lidokain

2. Optimasi fase gerak untuk pemisahan kloramfenikol dan lidokain HCl

dalam sediaan obat tetes telinga Colme® dengan KLT