Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 17, No.

2, 2012, halaman 98-103 ISSN : 1410-0177

UJI EFEK SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL AKAR ASAM KANDIS (Garcinia

cowa Roxb.) PADA MENCIT PUTIH BETINA DENGAN METODE MICRONUCLEUS
ASSAY

Fatma Sri Wahyuni, Fitriyani Siregar, Surya Dharma

Fakultas Farmasi Universitas Andalas

ABSTRACT

The cytotoxic effect of ethanolic extract of Garcinia cowa Roxb. roots had been investigated
on female mice using Micronucleus Assay method. Sixty mice were grouped into five:
negative control, positive control, dosage I (extract 30 mg/kgBW), dosage II (extract 100
mg/kgBW), and dosage III (300 mg/kgBW) and then each group were grouped into three
groups based on the duration of treatment. The group of mice were induced by
cyclophosphamide 50 mg/kgBW intraperitoneally. After 30 hours, the treatment groups were
administered the extract orally during 3, 7, and 15 days. After that, mice were sacrificed and
the femur bone marrow was taken. Some of cytotoxic parameters were observed i.e
micronuclei cells and hematocrit level. The percentage of micronuclei (MN) cells was
calculated from the quantity of micronuclei cells of the slides of femur bone marrow by using
microscope. Results confirmed that ethanolic extract of Garcinia cowa Roxb. roots decreased
percentage of micronuclei cells not significantly (P > 0.05). The most lowering of micronuclei
cells was showed by the extract in the dosage of 100 mg/KgBW for 15 days.

Keywords: Garcinia cowa Roxb, micronuclei cell, Micronucleus Assay, Cytotoxic effect

PENDAHULUAN (Likhitwitaya-wuid, Phadungcharoen, &

Tumbuhan Garcinia cowa Roxb
atau yang dikenal dengan nama “Asam
Kandis” merupakan salah satu tumbuhan
yang digunakan masyarakat sebagai obat
disentri (India), antipiretik (Thailand),
tonikum (Malaysia), laksatif (Thailand),
ekspektoran (Thailand), dan antimikroba
(Thailand) (Na Pattalung, Thongtheerap-
arp, Wiriyachitra, & Taylor, 1994;
Poomipamorn & Kumkong, 1997).
Berdasarkan studi literatur tentang
kandungan kimia akar asam kandis,
diketahui bahwa akar asam kandis
mengandung cowaxanthon, cowanin,
cowanol, mangostin, β-mangostin, 1,3,6-
tri-hidroksi-7-metoksi-2,5-bis(3-metil-2-
butenil) xanton, maclura-xanton, 10-O-
metilmacluraxanton, isocudraniaxanton
B, cowagarci non B, dan stigmasterol
Krungkrai, 1998).
Kanker merupakan penyakit yang
ditandai dengan pertumbuhan sel
abnormal yang cenderung menyerang
jaringan disekitarnya dan menyebar ke
organ tubuh lain yang letaknya jauh
(Corwin, 2000). Kanker terjadi karena
proliferasi sel tak terkontrol yang terjadi
tanpa batas dan tanpa tujuan (Mosby,
2001). Oleh karena itu, kanker
merupakan salah satu jenis penyakit
mematikan yang menjadi tantangan bagi
dunia kesehatan. Kanker dapat
disebabkan oleh faktor endogen maupun
eksogen. Faktor endogen dapat berupa
faktor genetik, penyakit, dan hormon.
Sedangkan faktor eksogen dapat berasal
dari makanan, rokok, radiasi ultraviolet,
virus, senyawa-senyawa karsinogenik
seperti polusi udara, zat warna, dan
logam-logam karsinogen (Mosmann,

98
Fatma S., et al.
1983; Behrman, Kliegman & Arvin,
2000).
Pengobatan kanker secara medis
dilakukan dengan terapi pembedahan,
radiasi, kemo
terapi,imunoterapi/bioterapi (Corwin,
2000). Obat antikanker yang digunakan
diharapkan dapat mematikan sel kanker
tanpa merusak sel jaringan normal,
namun sampai sekarang belum
ditemukan obat yang memenuhi kriteria
tersebut (Salmon & Sartorelli, 1997).
Penggunaan obat-obat anti kanker dapat
menimbulkan efek samping yang besar,
diantaranya timbulnya reaksi yang
merugikan pada sel-sel yang normal
mengalami pertumbuhan dengan cepat
seperti darah dan rambut (Kee & Hayes,
1993). Oleh karena itulah penelitian
terhadap obat kanker ini terus dilakukan
dan tumbuhan menjadi alternatif untuk
pengobatan kanker yang ideal karena
efek samping yang ditimbulkan lebih
kecil daripada senyawa sintetis
(Kardiman, 2003).
Pada penelitian ini dilakukan
pengujian efek anti kanker dari ekstrak
etanol akar “Asam Kandis” secara in vivo
dengan metode Micronucleus Assay.
Penginduksi pembentuk- an sel
mikronuklei mencit digunakan
siklofosfamida dengan dosis 50 mg/kg .
METODELOGI PENELITIAN
Persiapan hewan percobaan
`Hewan yang digunakan adalah mencit
putih (Mus musculus) betina galur DYY
yang berumur 2 - 3 bulan sebanyak 60
ekor dengan berat badan 20 – 30 gram.
Sebelum digunakan hewan diaklimatisasi
selama satu minggu.
Ekstraksi dan karakterisasi ekstrak
Akar kering asam kandis sebanyak 700 g
diekstraksi dengan cara maserasi dengan
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
etanol 70 %. Ekstrak yang diperoleh
kemudian dikarakterisasi.
Pembuatan sediaan uji
Sediaan uji yang digunakan
berbentuk suspensi ekstrak akar “Asam
Kandis ” yang dibuat dengan
menggunakan NaCMC 0,5%.
Persiapan hewan percobaan
Hewan percobaan yang
digunakan adalah mencit putih (Mus
musculus) betina galur DYY yang
berumur 2 - 3 bulan sebanyak 60 ekor
dengan berat badan 20 – 30 gram.
Pembuatan serum darah anak sapi
Serum diperoleh dari darah anak sapi
yang berumur sekitar 16 bulan. Darah
segar diambil dengan jarum injeksi
melalui vena leher.
Pengujian efek sitotoksik
Hewan percobaan dikelompokkan dalam
5 kelompok, terdiri dari 3 kelompok
dosis dan 2 kelompok kontrol. Masing-
masing kelompok dibagi lagi dalam 3
kelompok berdasarkan lama pemberian
sediaan uji. Lama pemberian sediaan uji
untuk masing-masing kelompok adalah 3,
7, dan 15 hari. Untuk semua kelompok
kecuali kontrol negatif, hewan diinduksi
dengan siklofosfamida 50 mg/KgBB
pada hari ke-0. Setelah 30 jam, hewan
diberikan sediaan uji berdasarkan
kelompok masing-masing. Perlakuan
masing-masing kelompok adalah sebagai
berikut:
1. Kelompok I : Kelompok kontrol
negatif yang diberi larutan NaCMC
0,5% secara oral setiap hari. Untuk 3
mencit pertama diberikan larutan
NaCMC 0,5% selama 3 hari dan pada
hari ke-4 dikorbankan. 3 mencit
kedua diberikan larutan NaCMC
99
Fatma S., et al.
0,5% selama 7 hari dan pada hari ke-
8 dikorbankan. 3 mencit sisanya
diberikan larutan NaCMC 0,5%
selama 15 hari dan pada hari ke-16
dikorbankan.
2. Kelompok II : Kelompok kontrol
positif yang diinduksi dengan
siklofosfamida dosis 50 mg/KgBB
pada hari ke-0. Setelah 30 jam, diberi
larutan NaCMC 0,5% secara oral
setiap hari dan dikorbankan pada hari
ke-4, hari ke-8 dan hari ke-16.
3. Kelompok III, IV, dan V : Kelompok
uji yang diinduksi dengan
siklofosfamida dosis 50 mg/KgBB
pada hari ke-0. Setelah 30 jam, diberi
sediaan uji dengan dosis (30, 100 dan
300) mg/KgBB secara oral setiap hari
dan dikorbankan pada hari ke-4, hari
ke-8 dan hari ke-16.
Setelah hewan percobaan
dibunuh, darahnya ditampung untuk
penetapan nilai hematokrit, kemudian
dilakukan pembedahan dan diambil
sumsum tulang femurnya. Sumsum
tulang ini kemudian dimasukkan ke
dalam campuran serum darah sapi
dengan buffer phospat (1:1 v/v), lalu
dikocok, dibiarkan selama 30 detik dan
disentrifus selama 5 menit dengan
kecepatan 2000 rpm. Sumsum dibuang
dan peletnya disuspensikan ke dalam 0,5
ml serum darah sapi-buffer phospat (1:1
v/v ).
Penetapan nilai hematokrit
1. Bilas tabung reaksi yang berskala 1
cc dengan Na sitrat 3,8%.
2. Masukkan darah ke dalam tabung
reaksi yang telah dibilas, darah
dicampur hingga homogen.
3. Tabung yang telah berisi darah
disentrifus selama 30 menit pada
kecepatan 2000 rpm.
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
Hasil penetapan hematokrit dibaca
dengan memperhatikan tinggi kolom
(Gandasoebrata, 2001).
Pembuatan preparat apusan sumsum
tulang femur
1. Suspensi sumsum tulang femur
dioleskan pada kaca objek, lalu
dikering anginkan.
2. Setelah kering, kaca objek yang telah
diolesi suspensi sumsum tulang femur
direndam dalam metanol selama 10
menit.
3. Kemudian kaca objek direndam
dalam 50 ml larutan May-Gruenwald
selama 3 menit.
4. Kemudian kaca objek direndam
dalam 100 ml larutan May-
Gruenwald-buffer phospat (1:1 v/v)
selama 2 menit. Kaca objek lalu
dicuci dengan buffer phospat.
5. Setelah kering, kaca objek direndam
dalam 70 ml larutan Giemsa-buffer
phospat (1:10 v/v) selama 15 – 20
menit. Kemudian kaca objek dicuci
dengan buffer phospat dan
dilanjutkan dengan aquadest.
6. Setelah kering, kaca objek direndam
dalam etanol 95% selama 45 detik
dan terakhir direndam dalam xylol
selama 3 menit. Setelah itu
dikeringkan dan diamati di bawah
mikroskop dengan perbesaran 10 x 40
dengan bantuan minyak immersi.
7. Penghitungan jumlah sel mikronuklei
pada kaca objek yang dihitung
sebanyak 5 kali pada tempat yang
berbeda. Sel mikronuklei berwarna
ungu gelap sedangkan sel normal
berwarna ungu terang. Setelah itu,
tentukan persentase jumlah sel
mikronukleinya.
Analisa data
Dari data hasil penelitian pada parameter
persentase jumlah sel mikronuklei dan
persentase hematokrit dianalisa secara
100
Fatma S., et al. J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012

statistik dengan uji ANOVA dua arah. ke-4 adalah 40,56%, hari ke-8 adalah
Jika hasil data bermakna maka 43,22%, dan hari ke-16 adalah 48%.
dilanjutkan dengan uji Duncan New
Multiple Range Test. Hasil foto-foto
mikroskopis jumlah mikronuklei
merupakan data kualitatif (Bolton, 1978)

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil
1.Persentase jumlah sel mikronuklei pada
preparat sumsum tulang femur mencit
kelompok kontrol positif pada hari ke-4 Gambar 1. Foto pemeriksaan preparat apusan
adalah 70,57%, hari ke-8 adalah 76,20%, sumsum tulang femur mencit kelompok kontrol
positif setelah 15 hari penginduksian perbesaran
dan hari ke-16 sebesar 78,87%.
10 x 40
Kelompok kontrol negatif yang tidak
diinduksi dengan siklofosfamidaa,
persentase jumlah sel mikronukleinya
pada hari ke-4 adalah 19,56%, hari ke-8
adalah 25%, dan hari ke-16 sebesar B
A
16,44%. Kelompok yang diberi dosis 30
mg/KgBB pada hari ke-4 adalah 23,14%,
hari ke-8 adalah 25,65% dan hari ke-16
adalah 17,17%. Kelompok dosis 100 A
mg/KgBB pada hari ke-4 adalah 21,04%, B
hari ke-8 adalah 25,62%, dan hari ke-16 Gambar 2. Foto pemeriksaan preparat
adalah 16,50%. Kelompok dosis 300 apusan sumsum tulang femur mencit kelompok
dosis II (100 mg/kg BB) setelah 15 hari
mg/KgBB pada hari ke-4 adalah 21,43%, penginduksian perbesaran 10 x 40
hari ke-8 adalah 28,11%, dan hari ke-16
adalah 18,89%. Keterangan :
2.Nilai hematokrit rata-rata mencit putih A= Sel Mikronuklei
betina kelompok kontrol positif pada hari B= Sel Normal
ke-4 adalah 30,55%, hari ke-8 adalah
PEMBAHASAN
31,11%, dan hari ke-16 sebesar 44,44%.
Berdasarkan hasil tersebut,
Kelompok kontrol negatif yang tidak
terlihat bahwa telah terjadi penurunan
diinduksi dengan siklofosfamidaa, nilai
jumlah sel mikronuklei pada kelompok
hematokritnya pada hari ke-4 adalah
hewan percobaan yang diberi ekstrak
45,55%, hari ke-8 adalah 46,67%, dan
akar “Asam Kandis” dibandingkan
hari ke-16 sebesar 53,11%. Kelompok
dengan kontrol positif, dimana penurunan
yang diberi dosis 30 mg/KgBB pada hari
ini sebanding dengan kenaikan tingkat
ke-4 adalah 40,56%, hari ke-8 adalah
dosis. Namun, pada dosis 300 mg/kgBB
38,33% dan hari ke-16 adalah 41,89%.
terjadi peningkatan persentase sel
Kelompok dosis 100 mg/KgBB pada hari
mikronuklei dari hewan percobaan
ke-4 adalah 47,22%, hari ke-8 adalah
dibandingkan dengan dosis sebelumnya.
48,89%, dan hari ke-16 adalah 50,22%.
Seperti halnya siklofosfamid pada dosis
Kelompok dosis 300 mg/KgBB pada hari

101
 Fatma S., et al.
2-8 mg/kgBB digunakan sebagai
antikanker. Namun, pada dosis tinggi
yaitu dosis tunggal 50 mg/kgBB dapat
menyebabkan kanker. Ekstrak akar asam
kandis ini dapat diberikan pada dosis
30–100 mg/kgBB, sedangkan pada dosis
300 mg/kgBB menyebabkan terjadinya
peningkatan jumlah sel mikronuklei
dibandingkan dosis sebelumnya namun
masih dibawah jumlah sel mikronuklei
pada kontrol positif. Hal ini disebabkan,
penggunaan antioksidan dengan dosis
tinggi pada hewan percobaan dapat
menyebabkan terjadinya
ketidakseimbangan antara oksidan dan
antioksidan dalam tubuh yang akan
menimbulkan kerusakan oksidatif dan
berdampak terhadap perkembangan
beberapa penyakit diantaranya adalah
kanker (Bagiana & Mahasucipta, 2005).
Penurunan terbesar persentase jumlah sel
mikronuklei dibandingkan terhadap
kontrol positif diperoleh pada dosis 100
mg/kg BB selama 15 hari pemberian
ekstrak, yaitu sebesar 79,08 %.
Terhadap Kontrol Positif
% Sel MN Dibandingkan
100
50
0 akar “Asam Kandis” dapat meningkatkan
3 7 15
hari hari hari
Lama Perlakuan
Gambar 3. Grafik hubungan persentase perubahan
jumlah sel mikronuklei terhadap kontrol positif
dengan waktu pada mencit putih betina
Turunnya persentase penurunan
jumlah sel mikronuklei pada waktu
pemberian sediaan selama 7 hari
dibandingkan waktu pemberian selama 3
hari menunjukkan bahwa jumlah sel
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
mikronuklei berfluktuatif pada waktu
pemberian 3 hari dan 7 hari. Jumlah sel
mikronuklei pada 7 hari pemberian lebih
besar daripada jumlah pada 3 hari
pemberian. Hal ini terjadi diduga karena
pembentukan sel mikronuklei pada
sumsum tulang mencapai laju optimal
pada waktu sekitar 7 hari. Siklofosfamida
aktif sebagai penginduksi kanker dalam
bentuk metabolitnya, sehingga besar atau
kecilnya efek induksi kanker sangat
dipengaruhi oleh proses metabolismenya
di hati yang terkait dengan jumlah
metabolitnya yang mencapai sirkulasi
sistemik (Ganiswara dan Nafrialdi,
1995).
Aktivitas sitotoksik berupa
penurunan jumlah sel mikronuklei ini
diduga disebabkan oleh kandungan
metabolit sekunder yang ada pada akar
“Asam Kandis”, yaitu xanton dan
fenolik. Hal ini menunjukkan bahwa
kemungkinan besar aktivitas sitotoksik
dari ekstrak akar “Asam Kandis” ini
berhubungan dengan aktivitasnya sebagai
antioksidan.
Dari hasil nilai hematokrit jika
dibandingkan terhadap kontrol positif,
dosis 30
mg/KgBB nilai hematokrit mencit betina meningkat
sebanding dengan peningkatan dosis dan
lama waktu pemberian ekstrak. Dengan
dosis 100
mg/KgBB demikian dapat diketahui bahwa ekstrak
dosis 300 nilai hematokrit mencit putih betina.
mg/KgBB Peningkatan nilai hematokrit ini diduga
karena ekstrak “Asam Kandis” bekerja
memperbaiki fungsi sel induk primordial
pada sumsum tulang sehingga dapat
menghasilkan sel-sel darah secara
normal, termasuk sel eritrosit.
Dari hasil penelitian diketahui
bahwa ekstrak etanol akar “Asam
Kandis” potensial untuk digunakan
sebagai antikanker, dimana aktivitasnya
dapat dilihat dengan penurunan jumlah
sel mikronuklei mencit putih betina yang
102
Fatma S., et al.
sudah diinduksi kanker setelah pemberian
ekstrak dibandingkan terhadap kontrol
positif.
KESIMPULAN
Ekstrak etanol akar asam kandis pada
dosis 30 dan 100 mg/kgBB mempunyai
aktivitas sitotoksik. Aktivitas sitotoksik
terbaik dari penelitian ini ditunjukkan
oleh pemberian ekstrak pada dosis 100
mg/KgBB selama 15 hari.
DAFTAR PUSTAKA
Bagiana, A., dan Mahasucipta, A. (2005).
Peran Antioksidan Untuk Mencegah
Beberapa Kelainan Jaringan Tubuh.
Majalah Kedokteran Indonesia.
Volume 55 (6), 456.
Bolton, S. (1978). “Statistic” in Gennaro,
A.R., Remington’s Pharmaceutical
Science. (18th ed.). Singapura :
Singapore United Press.
Busk, L., Sjostrom, B., Ahlborg, U.G.
(1984). “Effect of Vitamin A on
Cyclophospamida Mutagenicity In
vitro (Ames Test) and in vivo
(Mouse Micronucleus Test)”, Fd.
Chem, Toxic, 22.
Corwin, E.J. (2000). Buku Saku
Patofisiologi. (Edisi 3). Penerjemah:
N. Budi Subekti. Jakarta : Penerbit
Buku Kedokteran EGC.
Gandasoebrata, R. (2001). Penuntun
Laboratorium Klinik. Jakarta: PT.
Dian Rakyat.
Ganiswara, S., dan Nafrialdi. (1995).
“Antikanker dan Immunosupresan”
dalam Ganiswara, S., Farmakologi
dan Terapi. (Edisi 4). Jakarta: Bagian
Farmakologi FK UI.
J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012
Kardiman, A. (2003). Tanaman Obat
Penggempur Kanker. Jakarta: PT.
Agro Media Pustaka.
Kee, J.L., dan Hayes, E.R. (1993).
Farmakologi : Pendekatan Proses
Keperawatan. Penerjemah : P.
Anugerah. Jakarta: Penerbit Buku
Kedokteran EGC.
Likhitwitayawuid, K., Phadungcharoen, T.,
and Krungkrai, J. (1998).
“Antimalarial xanthones from
Garcinia cowa”. Planta Med 64: 70–
72.
Mosby. (2001). Aplikasi Klinis Patofisiologi
: Pemeriksaan dan Manajemen.
(Edisi 2). Penerjemah : Y. Kuncara.
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran
EGC.
Mosmann, T. (1983). "Rapid colorimetric
assay for cellular growth and
survival: application to proliferation
and cytotoxicity assays," Journal of
Immunological Methods, 65:55-63.
Na Pattalung, P., Thongtheeraparp, W.,
Wiriyachitra, P., and Taylor, W.C.
(1994). Xanthones of Garcinia cowa.
Planta Med. 60, 365–368.
Poomipamorn, S., and Kumkong, A. (1997).
Edible Multipurpose Tree Species.
FaungFa Printing (in Thai),
Bangkok, p. 486.
Salmon, S.E., dan Sartorelli, A.C. (1997).
”Kemoterapi Kanker” in Katzung, B.
G., Farmakologi Dasar dan Klinik.
(Edisi VI). Penerjemah : Staf Dosen
Farmakologi Fakultas Kedokteran
Universitas Sriwijaya. Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Thompon, E.B. (1985). Drug Bioscreening :
Fundamental of Drug Evaluation
Techniques in Pharmacology. New
York: Graceway Publishing
Company Inc.
103
Fatma S., et al. J. Sains Tek. Far., 17(2), 2012

104