AKTIVITAS ANTIKANKER EKSTRAK KULIT

BUAH MANGGIS (GARCINIA MANGOSTANA

LINN) TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA
MCF-7 MELALUI REGULASI EKSPRESI
RESEPTOR ESTROGEN-α (ER-α)
Indah Safitri
1707045006
Page 1

XANTON
Garcinia mangostana
Pengobatan dengan target ERα
efektif untuk menyembuhkan
kanker payudara. Dalam jurnal
penelitian penelitian fokus pada
mekanisme molekuler aktivitas
antikanker ekstrak kulit manggis
pada sel kanker payudara MCF-
7 sebagai model in vivo ERα.
Introduction
Salah satu senyawa yang telah
banyak dilaporkan memiliki
aktivitas anti kanker adalah
xanton. Senyawa xanton yang
berhasil diisolasi dari tanaman
manggis (Garcinia mangostana),
diantaranya á-mangostin telah
terbukti bersifat sebagai anti
kanker
Jenis kanker yang paling sering
Kematian akibat kanker
didiagnosis di antara wanita pada
menunjukkan insiden yang
tahun 2012 adalah kanker
tinggi di dunia dan semakin
payudara dan kanker payudara
meningkat setiap tahunnya.
diperkirakan mencapai 29%
Menurut WHO, jumlah
(226,870) dari semua kasus
penderita kanker setiap tahun
kanker baru di kalangan wanita
bertambah sekitar tujuh juta
(Siegel et al., 2012). Salah satu
orang, dan dua per tiga di
biomarker kanker payudara
antaranya berada di negara-
adalah reseptor estrogen, lebih
negara yang sedang
dari 60% kanker payudara
berkembang.
mengekspresikan reseptor
estrogen subtipe α (ERα).
Page 2
 Material and Method
BAHAN
Korteks Fruktus Garcinia
mangostana Linn diekstraksi
menggunakan etanol 70%
dengan rasio botani ekstrak
10: 1 dan menggunakan
maltodextrine sebagai
eksipiennya.
METODE
Sel kanker payudara MCF-7
dikulturkan di laboratorium
Parasitologi, Fakultas
Kedokteran Universitas
Gadjah Mada.
MTT Cytotoxic Assay
Apoptosis Assay
Apoptosis pewarnaan
menggunakan etidium
bromida dan acridine
orange dari SIGMA.
Penelitian ini menggunakan
antibodi primer estrogen
BIO estrogen.
Page 3
 MTT Cytotoxic Assay

Sel MCF-7 sel 5x10³ sel ditanam dalam

Medium adalah fride
kanker payudara microplate dan diinkubasi
treatment control dari
disubkultur pada suhu 37 ° C dan CO2
tamoxifen tablet. MPE dan
5% selama 24 jam
tamoxifen dilarutkan dalam
DMSO sebagai larutan stok.

Medium yang mengandung

Kultur medium dibilas
Berbagai konsentrasi MPE MTT dan 100μL SDS
dg PBS 10%, 100μL
dan tamoxifen dalam media ditambahkan untuk
mengandung MTm 5mg
ditambahkan ke dalam 96- melarutkan kerapatan dari
/ mL ditambahkan ke
well plate 100μL masing- larutan yang dihasilkan.
dalam masing-masing
masing dan diinkubasi sama
sumur dan diinkubasi
dengan kondisi sebelumnya
selama 4 jam.
selama 24 jam (Replikasi 3x)
The 96-well microplate
diinkubasi selama 24 jam
dan hindari kontak ringan.
Kristal formazan dideteksi
oleh pembaca ELISA
menggunakan panjang
gelombang 595nm.
Page 4
 Apoptosis Assay
Medium tersebut dibilas dg PBS. 17
MCF-7 ditanam 5x104 / dan 34μg / mL MPE dalam Medium
100μL ke dalam coverlip Modifikasi Eayle Dulbecco
24-well plate, kemudian ditambahkan ke dalam piring sumur
diadaptasi dalam 37 ° C dan diinkubasi selama 24 jam.
dan 5% CO2 selama 24 Konsentrasi ini ditentukan
jam perhitungan fariure IC50, karena
perkiraan konsentrasi mendekati
IC50.
Media dipindahkan dari sel
MCF-7 dan dibilas oleh PBS.
Coverlip dilepas dari piring
sumur dan dipindahkan ke kaca
objek, dan acridine orange-
ethidium bromide (AE) di
letakkan ke coverslip.
Kemudian segera diamati di
bawah mikroskop flouresence.
Immunocytostaining sel MCF-7
ER-α di DMEM diunggulkan
105 / 100μL pada lempeng 6-
sumur dan diinkubasi di bawah
5% CO2 selama 24
Page 5
 Imunocytostaining dari
ER-α
sel dikumpulkan dan dicuci di
Sel MCF-7 di DMEM
PBS. Mereka disuspensikan Antibodi monoklonal anti
ditanam 105 / 100μL
kembali di DMEM dan ER-α diinkubasi setidaknya
pada lempeng 6-well
ditempatkan di kaca objek selama satu jam dan dicuci
plate dan diinkubasi 5%
selama 5 menit, diinkubasi dalam 3x dengan menggunakan
CO2 selama 24 jam.
H2O2 selama 10-15 menit dan PBS.
MPE dalam konsentrasi
kemudian dicuci kembali dengan
17 dan 34μg / mlL
menggunakan PBS.
diaplikasikan pada sel
dan diinkubasi selama
24 jam
Antibodi sekunder dari biotinylated
larutan hematoxylin ditambahkan goat anti-polyvalent ditambahkan
dan diinkubasi selama 3-4 menit  dan diinkubasi pada suhu kamar
dikeringkan dan diamati di bawah selama 10 menit dan dicuci 4x di
mikroskop cahaya  Ekspresi ER- PBS. DAB sebagai kromogen,
α ditunjukkan dengan warna sel diinkubasi selama 3-8 menit, dicuci
coklat dengan aquadest..

Page 6
 Analisis Data

Data sitotoksik MPE dan tamoxifen

dianalisis dengan Excel. IC50 kemudian
dihitung dengan menggunakan analisis
probit

Page 7
Hasil dan Pembahasan

Penelitian ini menggunakan 0,02% v / v DMSO untuk MPE

dan tamoxifen. MTT diserap ke dalam sel hidup dan diubah
menjadi kompleks formazan berwarna ungu dengan suksinat
dehidrogenase di mitokondria (Doyle dan Grifith, 2000). MPE
menunjukkan profil parabola sitotoksik (Gambar 1), analisis
probit menghasilkan MPE IC50 45 μg / mL.

Page 8
 Lanjutan…..

Tamoxifen, juga diuji terhadap sel MCF-7 dengan prosedur yang sama.
Tamoxifen memiliki profil sitotoksik parabolik dan memiliki IC50 47μM
atau sama dengan 12,65.10-7 μg / mL dengan analisis probit.
Tamoxifen memiliki aktivitas sitotoksik yang kuat yang membuat sel
MCF-7 pecah menjadi puing(Gambar 2). Hal ini dapat dijelaskan
bahwa tamoxifen adalah senyawa kimia murni yang memiliki target
spesifik pada sel. MPE juga melakukan perubahan morfologi pada sel
MCF-7 meski tidak membuat sel pecah. MPE mengandung berbagai
senyawa alami sehingga tidak memiliki target spesifik dibandingkan
dengan tamoxifen. Page 9
Lanjutan…

Page 10
Lanjutan ….

Penelitian ini menggunakan metode pewarnaan ganda

dengan menggunakan acridine orange dan ethidium
bromide. Sel yang layak berwarna hijau dan sel
apoptosis berwarna merah. MPE menunjukkan induksi
apoptosis terhadap sel MCF-7 bergantung pada dosis.
Penelitian ini menggunakan sel apoptosis 17 dan 34μg /
mL MPE untuk mengetahui pewarnaan apoptosis. Sel
MCF-7 berwarna oranye dan integritas membran
terganggu (Gambar 3).

Page 11
MPE memiliki aktivitas induksi sitotoksik dan apoptosis
lebih rendah dibandingkan dengan tamoxifen, hal ini
mungkin disebabkan kompleksitas senyawa alami MPE.
Mekanisme molekuler induksi apoptosis MPE pada ER-α
dikonfirmasi dengan menggunakan metode
immunocytochemistry. Tamoxifen, sebuah Selective
Estrogen Receptor Modulatorators (SERMs), menekan
ekspresi ER-α. Ini menurunkan ER-α dengan mengubah
konformasi ER-α sehingga domain AF-2 disembunyikan
sehingga aktivator koordinat AF-2 tidak terikat pada
reseptor (Brufsky, 2011). Sel yang tidak diobati
menunjukkan ekspresi tinggi ER-α baik di nukleus dan
sitoplasma.
Page 12
Sel MCF-7 yang diolah dengan sel 34μg / mL yang
terpecah menjadi puing-puing di sana sehingga studi
MPE dengan konsentrasi 17μg / ml ini, digunakan untuk
mendeteksi ekspresi ER-α. Bahkan MPE memiliki
aktivitas induksi sitotoksik dan apoptosis yang kuat,
hampir tidak terjadi ekspresi ER-α. Menghambat jalur
sinyal ER-α dan mungkin memiliki target protein lain
pada MCF-7. Ada 83 gen yang terlibat dalam jalur sinyal
ER-α pada garis sel ER-α positif (Chisamore et al,
2009). Oleh karena itu, gen lain yang terlibat dalam jalur
sinyal ERD harus diselidiki.

Page 13
Mechanism of alfa-mangostin induced
cell death

Page 14
• Apoptosis yang disebabkan oleh α-Mangostin dimediasi
oleh jalur caspase-independent melalui mitokondria.
dengan rilis Endo-G.

• Endo-G, sebuah nuclease 30-kD yang dikenal berada di

dalamnya mitokondria, mampu menginduksi fragmentasi
DNA nukleosomal. Banyak protein kinase serine /
treonin mengendalikan pertumbuhan sel, proliferasi,
diferensiasi, sel siklus, kelangsungan hidup dan
kematian. Page 15
• Mitogen-activated protein kinases (MAPKs) dan Akt
kinase adalah kuncinya protein regulator dalam sel.

• MAPK adalah keluarga protein kinase serine / threonine

yang banyak dilestarikan terlibat dalam banyak proses
seluler seperti proliferasi sel, diferensiasi, motilitas, dan
kematian.

• Akt, protein kinase serine / treonin lainnya, dikaitkan

dengan kelangsungan hidup sel, pertumbuhan, dan
glikogen metabolisme. Page 16
 Kesimpulan
1. Hasil menunjukkan ekstrak mempunyai aktivitas
sitotoksik kuat dan memacu apoptosis dengan IC50
34μg/ml.
2. Hasil uji imunositokimia terlihat penurunan ekspresi
ERα pada IC50 ekstrak kulit manggis dan tamoxifen
sebagai kontrol positif.
3. Perlu diuji kembali menggunakan konsentrasi lebih kecil
untuk analisis kuantitatif. Ekstrak kulit manggis
potensial dikembangkan sebagai agen kemopreventuf
pada kanker payudara.

Page 17
 Referensi

• Setiwati, A., Riswanto, F., Yuliani Sri, H., Istyastono, EP., Anticancer
Activity Of Mangosteen Pericarp Dry Extract Against Mcf-7 Breast
Cancer Cell Line Through Estrogen Receptor-alfa, Indonesian J.
Pharm, Vol. 25, No:119 – 124. University of Sanata Darma,
Yogyakarta

Page 18