PEMERIKSAAN CANCER ANTIGEN 27.

29
(CA 27.29) DENGAN METODE
ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT
ASSAY (ELISA)

1
 PENDAHULUAN

Carcinoma mammae  salah satu

penyebab kematian pada perempuan

> 1.000.000 kasus ditemukan di

berbagai belahan dunia

Indonesia (2017)  26 kasus /

100.000 perempuan

2
 Carsinoma Mammae
Carsinoma mammae  Tumor ganas sel-sel
payudara  menyebar ke jaringan sekitarnya
(invasif) atau menyebar ke bagian tubuh yang lain
(metastasis)

Carsinoma mammae 
kondisi sel yang
kehilangan mekanisme
normal
Cepat Tidak
Pertumbuhan terkendali
yang tidak
normal

3
 Tumor Marker

Substansi yang dihasilkan oleh sel tumor itu sendiri

atau sel normal pada tubuh sebagai respon
terhadap sel tumor, paling banyak dihasilkan oleh
sel kanker.

Cancer
Antigen 15-3
Carcino
embryonic Cancer
Antigen Antigen 27.29
(CEA) (CA 27.29)

Tumor
marker
carcinoma
mammae

4
 Cancer Antigen 27.29
High molecular weight glycoprotein  produk dari mucin (glikoprotein
yang memiliki berat molekul besar yang diekspresikan pada sel epitel di
berbagai organ) dan dikode oleh gen MUC-1

MUC-1

Fungsi :
Protein inti - Hidrasi, proteksi 90% pada
apomisin di dan lubrikasi pada carsinoma
permukaan epitel mammae
permukaan lumen duktus
apikal epitel 10% pada beberapa
- Protektor karsinoma yaitu
sekretori carsinoma ovarium
(glandula - Terlibat dalam
interaksi antar sel, dan carsinoma
mamma) kolon
sinyal sel dan
metastasis
5
 TUJUAN
Tutorial ini bertujuan mengukur kadar
Cancer Antigen 27.29 metode Enzyme
Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

6
 Pra Analitik

Persiapan • Tidak ada persiapan

Pasien khusus

• Sampel berupa serum atau plasma

disentrifus selama 15 menit pada 1000
rpm
Persiapan • disimpan selama 2 jam pada suhu kamar
sampel • disimpan pada suhu 2°C sampai 8°C
sampai 5 hari dan dapat dibekukan pada
suhu -20°C (≤ 1 bulan) atau -80°C (≤ 2
bulan)

7
 Pra Analitik
Persiapan Alat dan Bahan
Standard Solution

HRP Conjugate

Biotinylated human CA27-29

Antibody

Sample Diluent

Wash buffer concentrate

8
 Pra Analitik
Persiapan Alat dan Bahan
Substrate A

Substrate B

Stop solution

User Instruction

Assay Plate (96 wells)

9
 Pra Analitik
Persiapan Alat dan Bahan

Inkubator 370C ± 0.50C

Mikropipet (100 µl dan 50 µl) dan tip

Microplate reader 450 nm ± 10 nm

10
 Pra Analitik
Persiapan Alat dan Bahan

Absorbent paper

Centrifuge

Distilled water

11
 Analitik
PRINSIP KERJA
Prinsip sandwich immunoassay 
Antibodi spesifik untuk CA 27.29
dilapisi ke dalam microplate.
Larutan standard dan sampel
diteteskan ke dalam well dengan
antibody Horseradish peroksidase
(HRP), konjugat antibody yang
spesifik terhadap CA 27.29 dengan
pencucian reagen yang tidak terikat,
substrat solution ditambahkan ke
dalam well dan akan tampak warna
dari ikatan CA 27.29 pada tahap awal.
Perubahan warna dihentikan dengan
menggunakan stop solution dan
intensitas warna yang dihasilkan
diukur.

12
 Analitik
CARA KERJA
1.
2. Disiapkan
Ditentukan
jumlah reagen
semua well yang
akansampel.
dan digunakan

3.
Di
ta
m
ba
hk
an
10
0
µl
lar
ut
an
st
an
da
r
di
se
tia
p
we
ll

13
 Analitik
CARA KERJA
4. Ditambahkan 100 µl
sample diluent dan 10
µl sampel pada setiap
well.

5.
We
ll
di
ho
m
og
en
ka
n
ke
m
ud
ian
in
ku
ba
si
sel
am
a
30
me
nit
pa
da
su
hu
37o
C.
14
 Analitik
CARA KERJA
6. Diaspirasi setiap well dan cuci,
ulangi proses tersebut sebanyak dua
kali dengan total tiga kali proses
pencucian. Pencucian dilakukan
dengan mengisi setiap well dengan
wash buffer (200 µl).

7.
Dita
mba
hka
n
100
µl
HRP
conj
ugat
e
dan
anti
body
pad
a
setia
p
well,
diho
mog
enk
an
kem
udia
n
inku
basi
sela
ma
30
men
it
pad
a
suh
u
37oC

15
.
 Analitik
CARA KERJA
8. Diaspirasi setiap well dan cuci,
9. Ditambahkan
ulangi proses tersebut
50 µl substrat
sebanyak A dua
dan
kaliµldengan
50 substrattotal
B pada
tigasetiap
kali proses
well,
pencucian. Pencucian
homogenkan well, in kubasi
dilakukan
pada
dengan
suhu 37 omengisi
C selamasetiap
15 menit
well dengan
wash buffer (200 µl)

10.
Dita
mb
ahk
an
50
µl
stop
solu
tion
dise
tiap
well
,
ket
uk
seca
ra
perl
aha
n
unt
uk
me
mas
tika
n
laru
tan
terc
am
pur
den
gan
ben
ar

16
 Analitik
CARA KERJA
11. Peng ukur an: b la nk well dipasang
dengan absor bansi nol, absorbansi ( OD)
tiap well diukur satu per satu deng an
panjang gelombang 450 nm, yang
diper iksa 10 menit setelah penambahan
sto p so luti o n .

12.
Berd
asark
an
kons
entra
si
stand
ard
dan
nilai
absor
bansi
yang
digu
naka
n,
persa
maan
regre
si
linea
r
diuk
ur
pada
kurva
stand
ard.
Kons
entra
si
pada
samp
el
dihit
ung
berd
asark
an
nilai
absor
bansi
samp
el

17
 Pasca Analitik

Nilai rujukan :
Nilai rujukan CA 27.29 : < 38 U/mL

Sensitivitas 90%
Spesifisitas 70%.

18
 Interpretasi
Peningkatan 2 kali dari nilai rujukan ditemukan pada :

O Tumor jinak mammae

O Hepatitis kronik
O Sirosis hepatis
O Tuberculosis
O Pelvic Inflammatory Disease
O Endometriosis
O Kista ovarium
O Systemic Lupus Eritematous
O Laktasi dan kehamilan

18
 Interpretasi
Peningkatan ≥ 3 kali dari nilai rujukan
ditemukan pada :

O Carcinoma mammae
O Carsinoma paru
O Carsinoma prostat
O Carsinoma hepar
O Carcinoma ovarium
O Carsinoma prostat

18