IMUNO-SEROLOGI

IMUNO-SEROLOGI

PERSIAPAN SAMPEL

☼ Sampling darah
a. Palpasi
b. Disenfikasi
c. Pembendungan → jangan telalu lama, ± 3 menit.
d. Penusukan jangan berkali-kali.
e. Lepaskan tourniquet terlebih dahulu, baru lepaskan jarum, tutup
luka dengan kapas.
f. Letakkan:
- Tabung sentrifuge → Non-antikoagulan→ SERUM
- Botol sample →Antikoagulan → PLASMA

☼ Pengolahan serum
a. Darah dalam tabung sentrifuge (Non-antikoagulan )
→ inkubasi 30 menit.
b. Sentrifuge : 2000-3000 rpm selama 10-20 menit.
c. Sebaiknya lakukan pensentrifuge-an 1x saja.
d. Jangan melakukan pensentrifuge-an/ pengaduk-
adukan berkali-kali → mempengaruhi komposisi.
e. Jangan sampai terjadi hemolisa / serum
mengandung sel eritrosit.

☼ Penyimpanan
a. Suhu 2-8 derajat celcius.
b. Freezer : beku → tempat : AlliQuot
c. Serum yang beku harus dihangatkan sebelum
digunakan, yakni dengan cara:
 Rotator → lebih baik
Peningkatan dari suhu tersebut tidak terlalu ekstrim ditambah lagi
dilakukan pengocokan.
 Diletakkan pada suhu kamar.
 Dihangatkan dengan air hangat

☼ Pengiriman
a. Diletakkan di termos dengan es batu,
serum diletakkan pada jarum vacuntainer tapi hanya dapat bertahan
selama ± 2hari.
b. Diletakkan pada semacam alat yang
terdapat Nitrogen Cait / ICE yang tidak mudah meleleh → digital.
---------------------------------------------------------------------------------------------------
TES KEHAMILAN
DIRECT PREGNANCY LATEX TEST
Tujuan

88
 IMUNO-SEROLOGI

Menentukan ada atau tidaknya HCG dalam urin dengan cara langsung
sehingga dapat diketahui seseorang tersebut hamil atau tidak.

Prinsip
Fertitex Mono adalah tes kualitatif untuk mendeteksi HCG dalam urin sedini
mungkin. HCG dalam urin (non-dillution) bereaksi secara imunologis dengan
antibody anti-HCG monoclonal bagian dari partikel latex. Reaksi ditandai
dengan adanya gumpalan yang tampak pada partikel latek pada tes yang
dilakukan di atas objek glass.

Prosedur kerja

60 µl urine + 30 µl reagen Goyang di atas

latex rotator (100
rpm) ± 2 menit

BACA

Interprestasi hasil
HCG (+) : Aglutinasi
HCG (-) : Tidak beraglutinasi
---------------------------------------------------------------------------------------------------
RHEUMATOID FACTOR
LATEX AGGLUTINATION SLIDE TEST

Tujuan
Menentukan adanya antibody terhadap penyakit rheumatoid arthritis pada
serum yang diperiksa.

Prinsip
Humatex RF tes adalah reaksi aglutinasi antara faktor rheumatoid pada
spesimen pasien atau serum kontrol dengan immunoglobulin G yang
dilapiskan pada partikel polystyrene.
Reaksi positif diindikasi oleh adanya aglutinasi yang tampak pada partikel
lateks dalam pemeriksaan.

Prosedur kerja
KUALITATIF

40 µl serum + 1 drop Goyang di atas

reagen latex rotator (100
rpm) ± 2 menit

BACA

89
 IMUNO-SEROLOGI

SEMI-KUANTITATIF

Pengenceran RF (IU/ml pada spesimen non-diluted)

1+1 (1:2) 24
1+3 (1:4) 48
1+7 (1:8) 96
1+15 (1:16) 192
1+31 (1:32) 384
Sambungan pemeriksaan sama dengan prosedur di atas

Interprestasi hasil
Kualitatif
RF (+) : Aglutinasi
RF (-) : Tidak beraglutinasi
Semikuantitatif
E.g. titer 1:16 → C.RF = faktor konversi x 16, dimana faktor konversi = 12.
---------------------------------------------------------------------------------------------------
C-REACTIVE PROTEIN
LATEX AGGLUTINATION SLIDE TEST

Tujuan
Menentukan adanya C-Reactive Protein yang timbul karena infeksi penyakit
tertentu yang kemungkinan yang terdapat dalam tubuh.

Prinsip
Tes CRP Humatex adalah reaksi imunologis antara CRP pada spesimen
pasien atau serum kontrol dengan CRP antibodi yang dilapiskan pada partikel
lateks.
Reaksi positif diindikasi oleh adanya aglutinasi yang tampak pada partikel
lateks dalam pemeriksaan.

Prosedur kerja
KUALITATIF

40 µl serum + 1 drop Goyang di atas

reagen latex rotator (100
rpm) ± 2 menit

BACA

90
 IMUNO-SEROLOGI

SEMI-KUANTITATIF

Pengenceran CRP (mg/L pada spesimen non-diluted)

1+1 (1:2) 12
1+3 (1:4) 24
1+7 (1:8) 48
1+15 (1:16) 96
1+31 (1:32) 192
Sambungan pemeriksaan sama dengan prosedur di atas

Interprestasi hasil
Kualitatif
RF (+) : Aglutinasi
RF (-) : Tidak beraglutinasi
---------------------------------------------------------------------------------------------------
ANTI STREPTOLISIN-O
LATEX AGGLUTINATION SLIDE TEST

Tujuan
Menentukan adanya antibody ASO Protein yang timbul karena infeksi
penyakit tertentu yang kemungkinan yang terdapat dalam tubuh.

Prinsip
Tes ASO Humatex berisi partikel lateks polystrene yang mengandung
streptolisin-O yang stabil sebagai antigen kemudian beraksi secara imunologis
dengan kumpulan antistreptolisin-O (ASO) antibodies pada spesimen pasien
atau kontrol serum.
Reaksi positif diindikasi oleh adanya aglutinasi yang tampak pada partikel
lateks dalam pemeriksaan.

Prosedur kerja
KUALITATIF

40 µl serum + 1 drop Goyang di atas

reagen latex rotator (100
rpm) ± 2 menit

BACA

91
 IMUNO-SEROLOGI

SEMI-KUANTITATIF
Pengenceran ASO (IU/ ml pada spesimen non-diluted)
1+1 (1:2) 400
1+2 (1:3) 600
1+3 (1:4) 800
1+4 (1:5) 1000
Sambungan pemeriksaan sama dengan prosedur di atas

Interprestasi hasil
Kualitatif
ASO (+) : Aglutinasi
ASO (-) : Tidak beraglutinasi
---------------------------------------------------------------------------------------------------
PEMERIKSAAN WIDAL
LATEX AGGLUTINATION SLIDE & TUBE TEST

Tujuan
Untuk mngetahui ada tidaknya zat-anti dan mengukur titer zat anti terhadap
kuman Salmonella, sp dalam serum penderita tersangga thypus abdominalis.

Prinsip
Pemeriksaan antigen febril Humatrex dari bakteri yang berbeda, strain yang
vital, in-aktif dan suspensi yang telah distandarisasi dengan solusi antigen
(Ag).
Deteksi riketsia yang berhubungan dengan penyakit didasari oleh karakteristik
Ag yang memiliki hubungan erat dengan pertumbuhan bakteri Proteus OX
(Weil-felix reaction). Kultur riketsia lebih sulit dilakukan.
Pemeriksaan dilakukan oleh inkubasi suspensi selain dengan spesiman yang
tidak diketahui. Aglutinasi yang tampak pada suspensi stain diindikasikan
adanya koresponden antibody dan sebagai tanda pada masing-masing bakteri.
Spesimen dibandingkan dengan kontrol positif dan negatif yang terdapat
dalam KIT untuk memudahkan dalam membedakan ada-tidaknya aglutinasi
yang terbentuk.
Prosedur kerja
KUALITATIF SLIDE

50 µl serum + 50 µl reagen Goyang di atas

latex rotator (100
rpm) ± 1 menit

BACA

92
 IMUNO-SEROLOGI

SEMI-KUANTITATIF SLIDE

Pengenceran (dalam µl) No. 1 2 3 4 5 6

1 2
Tranfer 100 100 100 3 100 4 100 5
NaCl (9 gr/L) 100 100 100 100 100
Titer ½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64
Lanjutkan pemeriksaan seperti di atas pada setiap pengenceran

Skema pemeriksaan semi-kuantitatif slide

100 µl serum + 100 µl

NaCL

100 µl NaCL @ 1 drop R/L

Lanjutkan pemeriksaan seperti di atas

SEMI-KUANTITATIF TABUNG
Siapkan masing-masing antigen pada 6 tabung dan 2 tabung untuk kontrol.
Encerkan 0,1 ml spesimen dengan 1,9ml NaCl (9 gr/L)
Pengenceran (dalam ml) No. 1 2 3 4 5 6
1 2 3 4
Tranfer 1 1 1 1 15
NaCl (9 gr/L) 1 1 1 1 1
Titer 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640
Siapkan 1/10 (pengenceran 1/10) dari PC dan NC dari pengenceran 100 µl
PC/NC dengan 900 µl NaCl (9 gr/L)
Pengenceran sp (1-6)/ control dilution @ 1 ml per tabung
AG 1 tetes per tabung
Tutup tabung dengan selotif, campurkan. Inkubasi (37oC) selama 24 jam

Catatan:
Prosedur inkubasi pada tabung mungkin dapat dipercepat dengan inkubasi
sperti di bawah ini:
Somatic (O) dan Proteus antigen pada suhu 48-50oC selama 4 jam.
Antigen flagel (H) pada suhu 48-50oC selama 2 jam.

93
 IMUNO-SEROLOGI

Skema pemeriksaan semi-kuantitatif tabung

1,9 ml NaCl + 0,1 ml serum
1 ml

Buang

1 ml NaCl Lanjutkan
(tabung 2-4), dst pemeriksaan
seperti di atas
1/20 1/40 1/60 1/80

Interprestasi hasil
Kualitatif
Widal (+) : Aglutinasi
Widal (-) : Tidak beraglutinasi
Semi-kuantitatif
Titer dari pengenceran terakhir pada pemeriksaan slide atau tabung.
---------------------------------------------------------------------------------------------------
HEPATITIS B SURFACE ANTIGEN (HBsAg)
LATEX AGGLUTINATION SLIDE TEST

Tujuan
Menentukan adanya HBsAg pada sampel yang diperiksa.

Prinsip
Partikel lateks dilapisi dengan antibody yang sangat murni yang bereaksi
cepat dengan HBsAg. Dengan mencampurkan serum yang terdapat HBsAg
dengan reagen lateks akan terjadi aglutinasi yang tampak. Jika tida ada
aglutinasi berarti tidak ada HBsAg atau masih permulaan.

Prosedur kerja
KUALITATIF

serum non-diluted & Goyang di atas

serum-NaCl (1:40) @ 50 µl rotator (100
+ 1 drop reagen latex rpm) ± 5 menit

BACA

Interprestasi hasil
HBsAg (-)
Tidak ada aglutinasi pada serum dilusi dan serum non-dilusi.

94
 IMUNO-SEROLOGI

HBsAg (+) → Konsentrasi rendah

Aglutinasi pada serum non-dilusi.
HBsAg (+) → Konsentrasi medium
Aglutinasi pada serum non-dilusi dan serum dilusi.
HBsAg (+)→ Konsentrasi tinggi
Aglutinasi pada serum dilusi.
---------------------------------------------------------------------------------------------------
ANTI HEPATITIS B SURFACE (ANTI-HBs)
ELISA TEST

Tujuan
Menentukan adanya anti-HBs pada sampel yang diperiksa.

Prinsip
Pemeriksaan Anti-HBs adalah pemeriksaan imunologis dengan enzim pada
fase padat dengan metode sandwich untuk mendeteksi antibody anti-HBs
dalam serum plasma atau rekalsifikasi.
Pemeriksaan sampel dan peroksidase dikonjugasikan dengan HBsAg,
dimasukkan ke dalam mikrowell yang mengadung HBsAg murni. Jumlah
peroksidase-HBsAg yang berikatan dengan kandungan pada sumur sebanding
dengan konsentrasi anti-HBs pada spesimen yang bereaksi antara fixed dan
HRP yang berikatan dengan HBsAg.
Setelah diinkubasi konjugasi enzim (Unbound) dibuang. Substrat solution
ditambahkan dan diinkubasi hingga berwarna biru. Intensitas warna yang
berubah menjadi kuning setelah ‘stopping’ reaction dengan larutan asam ,
sebanding dengan jumlah anti-HBs dalam spesimen.
Dalam batas tertentu, panjang gelombang 450nm merefleksikan tingkatan
anti-bodi anti-HBs pada spesimen. Pada panjang gelombang 450 nm membaca
kurang dari nilai cutt-off pada anti-HBs (-).Pada panjang gelombang 450 nm
membaca lebih dari nilai cutt-off pada anti-HBs (+)/ re-active.

Prosedur kerja
STEP 1

@ 50µl NC/PC/Sp di tambah 50 µl enzim conjugate

A B C D E F G H

Blanko Kontrol (-) Kontrol (+) Sp

Campurkan dengan menggetarkan holder sumur selama 20 detik.

Tutup MIC (mikrowell) dengan selotif.
Inkubasi selama 60 menit (37oC).
Buang isinya ke dalam sodium hipoklorit 5% dan isi 400 µl WASH ke dalam
setiap sumur.
Setelah 30 detik buang lagi dan ulangi pencucian sebanyak 5 kali.

95
 IMUNO-SEROLOGI

STEP 2
Masukkan 50 µl substat R/A dan 50 µl substat R/B ke dalam semua sumur
termasuk A.
Campurkan dan inkubasi 30 menit pada suhu kamar, lindungi dari cahaya
langsung.
Masukkan 100 µl STOP ke setiap sumur dan campurkan hati-hati.
Ukur absorbansi kurang dari 30 menit λ 450 nm.
Validitas pemeriksaan
Hasil test dikatakan valid jika mengikuti kriteia seperti:
Mean Negative Control Value (MNC) < 0,200
Mean Positive Control Value (MPC) > 0,500
MPC - MNC ≥ 0,300
NC1 = 0,5 x MNC < MNC < 2,0 x MNC

Perhitungan
Cut-off value (COV) = MNC + 0,025

Interprestasi hasil
Positif
Nilai absorbansi sampel lebih dari 1,1 x COV : menandakan anti HBs (+).
Negatif
Nilai absorbansi sampel kurang dari 0,9 x COV : menandakan anti-HBs
(-).
Equivocal
Nilai absorbansi sampel kurang dari ±10% dari cut-off value hendaknya
test kembali untuk konfirmasi bacaan hasil yang tepat.
---------------------------------------------------------------------------------------------------
ENTEBE HIV-DIPSTICK
ELISA (IMUNO-DOT) TEST FOR ANTIBODI HIV-1 & HIV-2

Tujuan
Entebe HIV-Dipstick merupakan tes imunologik untuk mendeteksi antibody
terhadap Human Imunodeficiency Virus tipe 1 dan 2 (anti HIV-1 dan HIV-2)
yang berada dalam serum atau plasma.
Tes ini tidak memerlukan peralatan steril maupun peralatan yang mahal,
sedangkan interperstasi hasilnya ditentukan berdasarkan terjadinya perubahan
warna yang dapat dilihat dengan mata telanjang.

Prinsip
Entebe HIV-Dipstick merupakan tes imunologik atas dasar reaksi antigen-
antibodi sebagai dasar indikator dipergunakan reagensian signal yang mampu
memberikan perubahan warna yang dapat dilihat dengan mata telanjang.
Pemeriksaan ini memerlukan waktu 30 menit. Sisir (comb) dipstick dibuat
dari polystyrene yang dinbagian ujung-ujungnya dilektakan peptide sintetik

96
 IMUNO-SEROLOGI

sebagai antigen. Apabila comb dicelupkan ke dalam sampel yang mengandung

anti-HIV, akan terjadi ikatan antigen-antibodi yang spesifik.
Sesudah dicuci untuk menghilangkan protein yang tidak terikat dan diinkubasi
dalam reagensia signal (colloidal gold) ujung comb dimana peptide menempel
berubah warna menjadi merah muda, berate sampel mengandung antibody.
Bila tidak timbul warna berarti sampel tidak mengandung antibody HIV.

Prosedur kerja

STEP 1. Labelisasi

0 1 2
00 01 02
Labelisasi

SISIR (COMB)

Dot

STEP 2. Pembuatan Larutan Pencuci

80 cc aquadest + 20 cc larutan pencuci

pekat

STEP 3. Persiapan

@ 100 µl serum/PC/NC

Baris 1

@ 100 µl larutan pengencer

200 µl reagensia signal

(pemakaian 2 kali)
Baris 2

97
 IMUNO-SEROLOGI

STEP 4. Pengujian

Comb dinkubasi selama 10 Cuci bolak-balik (10x)

menit pada baris 1 di larutan pencuci.
Keringkan dengan tisue Keringkan dengan tisue

Cuci bolak-balik (10x) Comb dinkubasi selama 10

di larutan pencuci. menit pada baris 2
Keringkan dengan tisue Keringkan dengan tisue

Pembacaan Hasil
Hasil positif bila terdapat warna merah muda pada ‘Dot’
Interpertasi hasil
HIV (+) : Terbentuk ‘dot’ berwarna merah muda.
HIV (-) : Tidak terbentuk ‘dot’ berwarna merah muda
---------------------------------------------------------------------------------------------------
SYPHILIS RPR (RAPID PLASMA REAGIN)
FLOCULATION SLIDE TEST

Tujuan
Menentukan adanya antibody terhadap infeksi kuman Treponema pallidum
yang menyebabkan penyakit syphilis.

Prinsip
Pemeriksaan syphilis RPR adalah tes flokulasi non-treponemal yang
digunakan untuk mendeteksi dan mengukur antibody reagin yang bersatu
dengan syphilis. Antigen RPR yang digunakan dalam kit dalam adalah
modifikasi antigen VDRL yang berisi microparticulat choarcoal untuk
mempertinggi perbedaan visual antara hasil positif dan negatif. Untuk serum
yang berisi antibody-antireagin berflokulasi dengan antigen-choarcoal partikel
ditampakkan. Apabila spesimen tidak bereaksi sisa suspensi-antigen-spesimen
dihomogenkan.

98
 IMUNO-SEROLOGI

Prosedur kerja
KUALITATIF

serum 50 µl + 1 drop AGS Goyang di atas

rotator (100
rpm) ±8 menit

BACA

SEMI-KUANTITATIF
50 µl serum + 50 µl NaCl 0,9% Sediakan pengenceran terhadap sampel
dengan garam fisiologis 0,9%:
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
Proses dilakukan seperti pemeriksaan
kualitatif
½ ¼

50 µl NaCl 0,9%

Interprestasi hasil.
Kualitatif → (+) terbentuk aggregate kecil
(-) tidak terbentuk aggregate.
Semikuantitatif: Hasil dari pengenceran terakhir yang positif.
----------------------------------------------------------------------------------------------
VDRL (Venereal Diaseases Research Laboratory)
FLOCULATION SLIDE TEST
Tujuan
Untuk screening ter secara kualitatif untuk menegakkan diagnosa terhadap
infeksi penyakit syphilis.

Prinsip
VDRL-carnon partikel antigen adalah modifikasi bentuk dari antigen VDRL
yang berisi microparticulate carbon.Didesign dalam menggunakan
pemeriksaan flokulasi diagnosis syphilis pada serum. Partikel carbon
membantu pembacaan hasil secara makroskopis. Hasil reaksi lemah dapat
dengan mudah dan secara jelas penampakan dari bentuk non-reaktik yang
terlihat secara makroskopis, tampak halus dan penampilannya. Antigen cocok
pada keduanya baik tes manual slide dan automated regain.

99
 IMUNO-SEROLOGI

Prosedur kerja
MANUAL SLIDE TEST

50 µl serum + 20 µl antigen Goyang di atas

rotator (100
rpm) ±8 menit

BACA

Interprestasi hasil.
Kualitatif →VDRL (+) terbentuk aggregate hitam
VDRL (-) tidak terbentuk aggregate (abu-abu)
---------------------------------------------------------------------------------------------------
TPHA (Treponema pallidum HEMA-AGLUTINATION)
HEMA-AGLUTINATION INDIRECT TEST

Tujuan
Menentukan adanya antibody terhadap infeksi kuman Treponema pallidum
yang menyebabkan penyakit syphilis.

Prinsip
Tes Syphillis TPHA Liquid adalah pemeriksaan hema-aglutinasi indirect
untuk mendeteksi antibody spesifik terhadap Treponema pallidum. Sela darah
merah unggas dilapiskan dengan antigen Treponema pallidum. Dalam hasil
yang ditunjukkan antibody syphilis yang peka sel akan menggalutinasi
membentuk pada karakteristiknya pada plate microtitrasi. Antibodi yang non-
pathogenic treponema diserpa ekstrak Reiter’s Treponema yang terkandung
dalam suspensi sel.

Prosedur kerja
STEP 1
25 µl sp/PC/NC 25 µl

25 µl dibuang

100 µl DIL 25 µl DIL

100
 IMUNO-SEROLOGI

STEP 2

75 µl SCC 75 µl STC
Jauhkan dari getaran
dan sinar langsung.
Diamkan 45-60 menit
sebelum dibaca hasil.

Interprestasi hasil.
Negatif result
Didefinisikan seperti kancing pada sel non-aglutinasi dengan atau tanpa
lubang yang sangat kecil ditengahnya.
Intermediat result
Sel kancing dengan lubang kecil ditengah (tampak jelas atau tegas, cincin
yang tebal dan latar belakang jernih). Sampel hendaknya dites kembali.
Positif result
Aglutinasi parsial atau total (tampak halus aglutinasi sel tersebut mungkin
disekeliling ada lingkaran pada tes sel). Positif sampel hendaknya
diperiksa kembali dengan tes kuantitatif.
SCC pada sumur II hendaknya tampak cincin ditengah dengan sel yang
non-aglutinasi. Reaksi pada sumur kontrol diindikasikan non-spesific
agglutinin pada sampel dan test hendaknya dialporkan sebagai in-valid.
Serum yang diberikan hasil harus diabsorbansi pada pemakaian SCC.
---------------------------------------------------------------------------------------------------
DENGUE HEMORRAGIC FEVER
IMUNO-KROMATOGRAFI (STRIP) TEST

Tujuan
Menentukan adanya IgG atau IgM antibody terhadap virus dengue pada
manusia.

Prinsip
Antibodi kelas IgG dan IgM yang ada dalam serum akan berikatan dengan
antikuman IgG dan IgM membentuk 2 garis yang memotong tes strip.
Colloida gold-label anti-dengue monoclonal antibody membentuk kompleks
dengan adanya antigen dengue yang ditandai dengan adanya dengue spesifik
IgG dan IgM. Dalam serum ini ditandai dengan garis merah muda atau ungu.
Prosedur kerja
PANBIO NOVA

3 tetes buffer + 1µl

serum

Buffer 3-4 drop 5µl serum

101
 IMUNO-SEROLOGI

Interprestasi hasil.
Invalid : Strip C tidak berwarna merah muda
Negatif : Strip C berwarna merah muda
Positif (primer) : Strip C dan Ig M berwarna merah muda
Positif (sekunder) : Strip C dan Ig G berwarna merah muda
Akhir primer dan awal sekunder : Strip C, Ig Mdan Ig G berwarna merah
muda

102