KIMIA KLINIK II

GLUKOSA DARAH
GOD-PAP METHOD
(Human 10.260)

Prinsip
Glukosa ditentukan setelah adanya oksidasi enzimatik oleh glukosa oksidasi. Terbentuknya
hydrogen peroksida di bawah katalisator peroksidase dengan fenopl & 4-aminofenazone
menghasilkan senyawa merah-ungu quinoneimine sbg indikator.

Reaksi
GOD
Glukosa + O2 + H2O → gluconic acid +H2O2
POD
H2O2 + 4-Aminofenazone + fenol → qinoneimine + H2O

Persiapan Reagen
Reagen dan standar sudah siap pakai

Kestabilan Reagen
Reagen yang telah dibuka akan tahan sampai batas kadaluarsa. Hindari kontaminasi.
Enzim reagen pada suhu 5-25oC tahan selama 2 minggu.

Cara Kerja
Pipet ke dalam kuvet (µl) Reagen Blank Standart Sample
Standart - 10 -
Sample - - 10
Reagen 1000 1000 1000
o o
 Campurkan. Inkubasi selama 10 menit (20-25 C) atau 5 menit (37 C).
 Ukur absorbansi standart dan sample terhadap absorbansi reagen blank kurang dari 60 menit
dengan λ = 546nm.
 Catat nilai absorbansinya.

Perhitungan
Δ sample
C = 100 (mg/dL) atau 5, 55 (µmol/L) x
Δ standart
Nilai Normal
Serum puasa : 75-115 mg/dL atau 4,2 – 6,4 µmol/L
Serum : 70-105 mg/L
---------------------------------------------------------------------------------------------------

TRIGLYSERIDA
 GPO-PAP METHOD
(Human 10 720)

Prinsip
Triglyserida ditentukan setelah hidrolisis enzimatik oleh lipase. Indikator quinoneimine dibentuk
dari hydrogen peroksidase, 4-amino-antipirin dan 4-chlorofenol di bawah pengaruh katalisis dari
peroksidase.

Reaksi lipase
Triglyserida → glycerol + asam lemak
GK
Gliserol + ATP → Glyserol-3-fosfat + ADP
GPO
Gliseril-3-fosfat + O2 → dihidroksi-aseton-fosfat + H2O2
POD
H2O2 + 4-amino-antipirin + 4-chlorofenol → qinoneimine +HCl + H2O

Persiapan Reagen
Reagen dan standar sudah siap pakai

Kestabilan Reagen
Reagen yang telah dibuka akan tahan sampai batas kadaluarsa, jika disimpan pada suhu 2-8 oC.
Pada suhu 5-25oC, reagen tahan selama 4 minggu.
Hindari kontaminasi.
Lindungi dari sinar.

Cara Kerja
Pipet ke dalam kuvet (µl) Reagen Blank Standart Sample
Standart - 10 -
Sample - - 10
Reagen 1000 1000 1000
 Campurkan. Inkubasi selama 10 menit (20-25oC) atau 5 menit (37oC).
 Ukur absorbansi standart dan sample terhadap absorbansi reagen blank kurang dari 60 menit
dengan λ = 546nm.
 Catat nilai absorbansinya.

Perhitungan
Δ sample
C = 200 (mg/dL) atau 2,28 (µmol/L) x
Δ standart
Nilai Normal
Dicurigai : > 150 mg/dL atau 1,71 µmol/L
Meningkat : > 200 mg/dL atau 2,28 µmol/L
Normal : < 150 mg/dL atau 1,71 µmol/L
 ALBUMIN
BCG METHOD
(Human 10 560)

Prinsip
Terbentuknya hijau bromocresol dengan albumin dalam buffer citrate menghasilkan senyawa
kompleks berwarna. Absorbansi dari senyawa kompleks sebanding dengan konsentrasi albumin
dalam sampel.

Persiapan reagen
Reagen dan standar sudah siap pakai

Kestabilan Reagen
Reagen dan standar bertahan sampai batas kadaluarsa, jika disimpan pada suhu 2-25 oC. Setelah
dibuka, hindari kontaminasi.

Cara Kerja
Pipet ke dalam kuvet (µl) Reagen Blank Standart Sample
Standart - 10 -
Sample - - 10
Reagen 1000 1000 1000
 Campurkan. Inkubasi selama 5 menit (20-25oC).
 Ukur absorbansi standart dan sample terhadap absorbansi reagen blank kurang dari 30 menit
dengan λ = 578nm.
 Catat nilai absorbansinya.

Perhitungan
Δ sample
C = 4 (gr/dL) atau 40 (grl/L) x
Δ standart

Nilai normal
Serum atau plasma : 3,8 - 5,1 gr/dL atau 38 - 51 gr/L
---------------------------------------------------------------------------------------------------
GLOBULIN
KALKULASI

Prinsip
Kadar globulin diperoleh dari hasil kalkulasi selisih antara kadar protein total dengan albumin.

Perhitungan
Globulin (gr/dL atau gr/L) = protein total - albumin
Nilai normal
> 10 gr/L atau 1,0 gr/dL (1,8-3,39 gr/dL)
---------------------------------------------------------------------------------------------------

KREATININ
JAFFE-REACTION WITHOUT DEPROTEINISATION
(Human 10 051)

Prinsip
Kreatinin dibentuk dalam suasana alkalis kompleks warna jingga-merah dengan asam picric.
Absorbansi dari kompleks sebanding dengan konsentrasi pada sampel.

Reaksi
Creatinin + picric-acid → kompleks kreatinin-pikrat
kuning

Persiapan reagen
Encerkan NaOH dengan aquadest dengan perbandingan 1:4. Simpan dalam botol plastic.
Campur PIC dan NaOH encer untuk reagen dengan perbandingan 1:1.
Standar siap digunakan.

Kestabilan reagen
Reagen / NaOH encer stabil setelah dibuka sampai batal kadaluarsa jika disimpan pada suhu 15-
25oC.
Reagen (working), lingdungi dari cahaya, stabil selama 4 minggu pada suhu 15-25oC.

Cara Kerja
-MAKRO-
Pipet ke dalam kuvet (µl) Reagen Blank Standart Sample
Standart - 200 -
Sample - - 200
Working reagen 2000 2000 2000
-SEMI-MIKRO-
Pipet ke dalam kuvet (µl) Reagen Blank Standart Sample
Standart - 100 -
Sample - - 100
Working reagen 1000 1000 1000
 Campurkan dan stopwatch dimulai. Setelah 20 detik, baca absorbansi A1.
 Baca absorbansi A2 tepat setelah 2 menit dengan λ = 578nm.
 A2 - A1 = A sampel atau A standar.
 Catat nilai absorbansinya.

Perhitungan
-Serum-
Δ sample
C = 2,0 (mg/dL) atau 176,8 µmol/L x
Δ standart

-Urine-
Δ sample
C = 100 (mg/dL) x
Δ standart

Nilai normal
Serum
♂ : 0,6 - 1,1 mg/dL atau 53-97µmol/L
♀ : 0,5 - 0,9 mg/dL atau 44-80µmol/L
Urin : 1000-1500 mg/24h
---------------------------------------------------------------------------------------------------

URIC ACID
PAP METHOD
(Human 10 690)

Prinsip
Asam urat ditentukan oleh reaksi uricase. Terbentuknya hydrogen peroksida di bawah katalisator
peroksidase dengan 3,5-dikloro-2-hidroksibenzensulfonic-acid dan 4-aminophenazone (PAP)
menghasilkan senyawa quinoneimine berwarna merah-ungu sebagai indikator.

Reaksi
uricase
Asam urat + H2O + O2 → allantoin CO2 + H2O
peroxidase
2 H2O2 + DCHBS + PAP → quinoneimine + HCl + 4 H2O

Persiapan Reagen
Reagen dan standar sudah siap pakai

Kestabilan Reagen
Reagen yang telah dibuka akan tahan sampai batas kadaluarsa, jika disimpan pada suhu 2-8 oC.
Hindari kontaminasi.
Pada suhu 15-25oC, terlindungi dari cahaya, reagen bertahan selama 2 minggu.

Cara Kerja
Pipet ke dalam kuvet (µl) Reagen Blank Standart Sample
Standart - 20 -
Sample - - 20
Reagen 1000 1000 1000
 Campurkan. Inkubasi selama 10 menit (20-25oC) atau 5 menit (37oC).
 Ukur absorbansi standart dan sample terhadap absorbansi reagen blank kurang dari 15 menit
dengan λ = 546nm.
 Catat nilai absorbansinya.

Perhitungan
Δ sample
C = 18 (mg/dL) atau 476 (µmol/L) x
Δ standart

Nilai Normal
♂ : 3,4 – 7,0 mg/dL atau 200-420 µmol/L
♀ : 2,4 – 5,7 mg/dL atau 140-340 µmol/L
Urin : 250-750 mg/24h atau 1,5-4,5 µmol/24h
---------------------------------------------------------------------------------------------------