Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Bioteknologi

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/jbiotec

Asam fenolat dan fl produksi avonoid dalam kultur mikro agar, agitasi dan bioreactorgrown dari Schisandra
chinensis CV. Sadova No.1 - tanaman obat yang berharga

Agnieszka Szopa Sebuah , • , Marta Klimek-Szczykutowicz Sebuah , Adam Kokotkiewicz b , Micha ł Dziurka c ,
Maria Luczkiewicz b , Halina Ekiert Sebuah
Sebuah Ketua dan Departemen Botani Farmasi, Universitas Jagiellonian, Collegium Medicum, ul. Medyczna 9, 30-688 Kraków, Polandia
b Ketua dan Jurusan Farmakognosi, Fakultas Farmasi, Medical University of Gdansk, al. gen. J. Hallera 107, 80-416 Gda ń sk, Polandia
c Akademi Ilmu Pengetahuan Polandia, Institut Fisiologi Tanaman Franciszek Górski, ul. Niezapominajek 21, 30-239 Kraków, Polandia

ARTICLEINFO ABSTRAK

Kata kunci: In vitro budaya dan bahan mentah (buah dan daun) dari spesies tanaman obat yang berharga - Schisandra chinensis kultivar Sadova No.1 ( SchS)
Kultivar tanaman anggur magnolia Cina - dievaluasi untuk produksi dua kelompok senyawa fenolik, asam fenolik dan fl avonoid, dan potensi antioksidannya. Serangkaian percobaan
Schisandra telah dilakukan, bertujuan untuk mengoptimalkan kondisi kultur untuk pertumbuhan maksimum dan produksi fenolik di SchS microshoots. Di ff konsentrasi
Kultur organ
zat pengatur tumbuh yang tidak sama (6-benzyladenine - BA dan asam 1-naftalenasetat - NAA, dari 0 sampai 3mg / l) dalam media
Senyawa fenolik
Murashige-Skoog (MS) diuji di beberapa sistem budidaya (agar, diaduk, bioreaktor) selama berbagai periode pertumbuhan (10, 20, 30, 40, 50
Sistem Perendaman Sementara Bentuk Tanaman Elisitasi
dan 60 hari). Selanjutnya, percobaan elisitasi dilakukan di mana microshoots bioreaktor yang ditumbuhkan dipaparkan dengan ekstrak ragi.
Analisis HPLC-DAD con fi rmengurangi keberadaan delapan asam fenolik - chlorogenic, cryptochlorogenic, gallic, neochlorogenic,
protocatechuic, salicylic, syringic dan vanillic, dan dua fl avonoids: kaempferol dan quercitrin, dalam in vitro biomassa. Total asam fenolat
tertinggi (357.93mg / 100 g DW) dan fl kandungan avonoid (105.07mg / 100 g DW) diperoleh dalam ekstrak kultur agar yang dibudidayakan
selama 30 hari pada media MS yang mengandung 2mg / l BA dan 0,5mg / l NAA dan selama 50 hari pada media MS yang mengandung 0.1mg
/ l BA dan 2mg / l NAA, masing-masing. Jumlah ini

1,59- dan 5,95 kali lipat lebih rendah daripada ekstrak daun tanaman induk (569,66mg / 100 g DW), dan 4,30- dan 1,25 kali lipat lebih tinggi daripada
ekstrak buah (83,17mg / 100 g DW), masing-masing. Microshoots yang ditanam dalam bioreaktor bentuk tumbuhan juga terbukti menjadi sumber
senyawa fenolik yang baik, namun, perlakuan elisitor tidak ff dll pada akumulasi mereka. Kapasitas antioksidan yang dinilai dengan uji Folin-Ciocalteu,
FRAP, DPPH dan CUPRAC menunjukkan hasil yang signifikan. fi potensi yang jauh lebih tinggi dalam ekstrak dari in vitro biomassa dan daun tanaman
induk, dibandingkan dengan ekstrak buah tanaman induk.

1. Perkenalan
Schisandra chinensis ( Turcz.) Baill. ( Schizandra chinensis, Anggur magnolia Cina),
Schisandraceae, adalah spesies tumbuhan obat Asia Timur yang dikenal secara tradisional ( Bensky
dan Gamble, 1993 ) dan fitoterapi modern di Asia, Amerika Utara dan Eropa ( Szopa dkk., 2017a ).
Monograf bahan bakunya, yaitu buah dari pohon anggur magnolia Cina - Schisandrae chinensis
fructus - muncul untuk fi pertama kali pada tahun 2008 dalam Suplemen 6.3 pada European
Pharmacopoeia 6 ( Orang eropa
Direktorat Mutu Obat, 2008 ). Bahan bakunya telah digunakan selama bertahun-tahun di o ffi perawatan
kesehatan resmi negara-negara Asia, terutama Jepang ( Komite Evaluasi Farmakope Jepang dan
Divisi Perizinan Farmasi dan Keamanan Pangan, 2006 ), Korea ( Farmasi Sentral A ff airs Council of
Korea, 2002 ) dan China ( Komisi Farmakope Cina, 2005 ). Ia juga dikenal di Amerika Utara, di mana ia
telah terdaftar di American Herbal Pharmacopoeia sejak 1999 ( Upton dkk., 2011 ). Sejak 2007, S.
chinensis monograf telah dimasukkan dalam Internasional

Singkatan: BA, 6-benzyladenine; cv., kultivar; HPLC-DAD, kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi larik dioda; DW, berat kering; FC, FolinCiocalteu; FW, bobot segar; Gi, indeks pertumbuhan; LS,
Linsmayer dan Skoog; MS, Murashige dan Skoog; NAA, asam 1-naftalenasetat; ZPT, pengatur tumbuh tanaman;
SchS, Schisandra chinensis kultivar Sadova No. 1; YE, ekstrak ragi
• Penulis yang sesuai.

Alamat email: a.szopa@uj.edu.pl (A. Szopa).

https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2019.08.021
Diterima 9 Mei 2019; Diterima dalam bentuk revisi 12 Agustus 2019; Diterima 31 Agustus 2019
Tersedia online 05 September 2019
0168-1656 / © 2019 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
A. Szopa, dkk.
Farmakope yang dikeluarkan oleh WHO ( Organisasi Kesehatan Dunia, 2007 ). Kultivar anggur
magnolia Cina yang sangat produktif, S. chinensis
CV. Sadova No. 1 (selanjutnya disebut sebagai “ SchS ”), dipilih di Ukraina oleh Ivan Szajtan di MM
Gryshko National Botanic Garden di Kiev
(Ukraina: H ациональный ботанический сад им. H. Г CC ишко).
Dibuat dari benih liar pilihan S. chinensis spesimen yang tumbuh di Primorsk, kultivar SchS memasuki
Daftar Tanaman Negara di Ukraina pada tahun 1998 ( Shaitan, 2005 ). Ini di ff ers dari spesies asli
terutama dalam ciri-ciri buah: the SchS buah lebih besar dan kusam. Tambahan lagi,
SchS ditandai dengan produktivitas buah yang lebih tinggi. Apalagi, berbeda dengan spesies aslinya,
yang merupakan kultivar SchS adalah monoicous, penyerbukan sendiri dan lebih tahan terhadap
perubahan iklim ( Saunders, 2000 ; Shaitan, 2005 ). Ada minat yang berkembang dalam penggunaan
terapeutik dan kosmetik S.
chinensis buah-buahan, tidak hanya di negara-negara Asia Timur, tetapi juga pasar Amerika dan Eropa.
Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa bene fi kesehatan fisik e ff dll
Schisandra yang meliputi sifat adaptogenik, hepatoprotektif dan antikanker, telah banyak diilhami fi terbukti
secara resmi dalam berbagai penelitian ( Szopa dkk., 2017a , 2016 ). Selain itu, penelitian modern
terus mengungkap khasiat baru anggur magnolia Cina, seperti antioksidan, imunostimulan, anti-in fl ammatory
dan neuroprotektif. Ekstrak buah juga memiliki efek positif e ff dll pada sistem kardiovaskular dan
membantu menjaga berat badan normal ( Hancke dkk., 1999 ; Szopa dkk., 2017a ).
S. chinensis Berutang sifat biologisnya dengan adanya lignan dibenzocyclooctadiene (alias
schisandra lignans), sekelompok Schisandra
spesies-speci fi c metabolit sekunder ( Hancke dkk., 1999 ; Opletal dkk., 2004 ; Szopa dkk., 2017a ).
Namun, fenolat yang ada di tanaman diyakini bertindak secara sinergis dengan schisandra lignans ( Mocan
dkk., 2016a , b , 2014 ; Szopa dan Ekiert, 2012 ). Mengingat besarnya minat S. chinensis, ada alasan
kuat untuk menyelidiki kultivarnya yang sangat produktif SchS sebagai sumber terapi. Sejauh ini,
scienti tersedia fi c informasi tentang SchS langka. Sejauh pengetahuan kami, hanya ada satu
publikasi mengenai komposisinya di mana studi kualitatif dan kuantitatif pada lignan
dibenzocyclooctadiene di SchS telah dilakukan untuk fi pertama kali oleh grup kami ( Szopa dkk.,
2018b ). Senyawa fenolik, sebaliknya, telah dilaporkan di S. chinensis ( Szopa dan Ekiert, 2012 ) tetapi
tidak dalam SchS.
Studi saat ini berfokus pada asam fenolat dan fl avonoid pro fi ling dan evaluasi aktivitas
antioksidan SchS. Penelitian tersebut meliputi bahan nabati - buah dan daun, juga SchS in vitro budaya
yang diteliti sebagai sumber berkelanjutan dari senyawa tersebut di atas. Eksperimen bioteknologi
melibatkan optimalisasi kondisi pertumbuhan untuk SchS microshoot dalam hal pemilihan jenis kultur
yang tepat (agar, agitasi, bioreaktor - Sistem perendaman sementara bentuk tanaman), komposisi zat
pengatur tumbuh (ZPT) (BA dan NAA; dalam kisaran konsentrasi dari 0 hingga 3mg / l) dalam media
Murashige dan Skoog (MS) ( Murashige dan Skoog, 1962 ) dan durasi periode pertumbuhan (10, 20,
30 40, 50, 60 hari). Selain itu, percobaan elisitasi dengan ekstrak ragi (YE) dilakukan dengan
bioreaktor yang ditanam di Plantform SchS microshoot untuk menguji kemungkinan peningkatan skala
produksi senyawa fenolik. Kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi diode array (HPLC-DAD)
diterapkan untuk memantau kandungan fenolik dari sampel tanaman. Sejauh pengetahuan kami, ini
adalah fi laporan pertama yang menjelaskan analisis fitokimia asam fenolat dan fl avonoid dalam bahan
tanaman mentah dan di ff jenis yang berbeda dari SchS in vitro budaya.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Kultur in vitro eksperimental
SchS kultur microshoot dimulai dan dipelihara seperti yang dilaporkan sebelumnya ( Szopa dkk.,
2018b ). Kultur eksperimental dipertahankan pada media MS ( Murashige dan Skoog, 1962 ) dengan
3% ( w / v)
sukrosa dan, dalam kasus kultur stasioner, 0,8% ( w / v) agar (agar tanaman, Duchefa). In vitro kultur
dipertahankan pada 25 ± 2 ° C, di bawah
62
Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70
arti berkelanjutan fi iluminasi resmi pada 2.75W / m 2 intensitas (cahaya putih, siang hari, lampu LF-
40W, Pi ł a), dan disubkultur dengan interval 30 hari.
2.2. Sistem kultur in vitro
2.2.1. Kultur agar
Kultur mikro agar-agar ditanam dalam wadah kaca khusus jaringan tanaman (Sigma-Aldrich No.
V8630). Untuk percobaan, inokulum 0,5 g per bejana digunakan. Media yang diuji di ff ered
sehubungan dengan konsentrasi zat pengatur tumbuh (ZPT) - BA dan NAA (mg / l): 0,1 dan 2 (varian
B), 0,5 dan 2 (varian C), 2 dan 0,5 (varian
D), 2 dan 1 (varian E), 2 dan 2 (varian F) dan 3 dan 1 (varian G). Media tanpa ZPT (kontrol)
ditetapkan sebagai varian A. Biomassa dikumpulkan setelah 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 hari siklus
pertumbuhan. Percobaan terdiri dari 3 seri, masing-masing 10 sampel.
2.2.2. Budaya yang gelisah
Kultur microshoot yang diaduk dipertahankan dalam 300ml Erlenmeyer fl meminta berisi 100ml
media MS, pada pengocok berputar (Altel, Polandia) pada 140 rpm. Untuk inokulum, 1,5 g
microshoots digunakan. Kultur agitasi ditanam dalam dua varian media MS cair standar yang
dilengkapi dengan BA dan NAA (mg / l): 2 dan 2 (varian F) dan 3 dan 1 (varian G). Media nutrisi dan
sampel biomassa dari kultur agitasi dikumpulkan setelah 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 hari siklus
pertumbuhan (3 seri, n = 10).
2.2.3. Kultur bioreaktor
SchS microshoot ditanam selama 30 hari dalam sistem perendaman sementara Plantform
(Bentuk Tanaman, Swedia), mengikuti protokol yang dijelaskan sebelumnya ( Szopa dkk., 2017c , 2018b
). Bioreaktor diinokulasi pada 15/500 (g / ml) microshoots dengan rasio medium (varian G -
3mg / l BA dan 1mg / l NAA, dari media MS). Siklus pencelupan diatur ke 5 menit setiap 1,5 jam,
pada laju aerasi 1,0 vvm (4 seri, n = 3).
Untuk percobaan elisitasi bioreaktor Plantform, 1000mg / l ekstrak ragi (YE) (kultur sel tanaman
diuji, Sigma-Aldrich) diaplikasikan, ditambahkan pada hari ke 20 dari periode pertumbuhan 30 hari,
sesuai dengan protokol yang dijelaskan sebelumnya ( Szopa dkk., 2017c , 2018c ). YE untuk
perawatan elicitor disterilkan dengan uap (120 ° C, 20 menit, 1 bar) sebelum digunakan. Untuk
elisitasi, salah satu bukaan samping dari bioreaktor Plantform diadaptasi sebagai lubang masuk.
Sampel microshoot dan medium dikumpulkan pada hari ke-30 percobaan (seri 4, n = 3).
2.3. Bahan tanaman induk
Bahan tanaman induk diperoleh bekerja sama dengan ' Clematis
- Ź tongkat ł o Dobrych Pn Sebuah czy ' dengan o ffi ce terdaftar di Pruszków (alamat: Duchnicka 27,
Pruszków, Polandia), yang menyediakan daun dan buah SchS. SchS spesimen diidentifikasi fi ed oleh
Dr. Eng. Szczepan Marczy ń ski, pemilik arboretum Clematis. Untuk tujuan analisis fitokimia
komparatif, buah dan daun ca. Tanaman merambat berumur 10 tahun (10 spesimen) dari SchS dikumpulkan.
SchS daun dipanen pada Mei 2016 dan dikeringkan dengan udara (25 - 30 ° C) sedangkan buah
dikumpulkan pada September 2016 dan diliofilisasi (Labconco lyophilizer, USA).
2.4. Analisis kromatografi
Lyophilized, bubuk biomassa, 0,3 g DW (berat kering) per sampel, ditempatkan dalam tabung
15ml dan dilakukan ekstraksi dengan 10ml metanol (STANLAB, Polandia) dengan sonikasi (3 × 30
menit pada 30 ° C) dalam penangas ultrasonik (Sonic- 2, POLSONIC; daya ultrasonik 2 × 100W, 40
kHz, dimensi penangas air 150 × 135 × 100mm, volume 1,6 l). 10 sampel disonikasi secara
bersamaan dan untuk mencegah kenaikan suhu selama sonikasi, air ditukar sebelum setiap siklus
ekstraksi. Ekstraknya adalah fi disaring menggunakan kertas Whatman dan dibiarkan dalam alat
kristalisasi untuk menguapkan metanol pada suhu kamar. Kering
A. Szopa, dkk.
residu dilarutkan dalam 2ml metanol (Merck - Kemurnian tingkat HPLC).
Sampel kering-beku dari media eksperimen dari kultur agitasi dan bioreaktor dilarutkan dalam
5ml metanol. Ekstrak yang diperoleh adalah fi disaring melalui jarum suntik sterilisasi fi filter (0,22 μ m,
Millex ® GP, Millipore) sebelum analisis HPLC.
Quanti fi kation fenolik dalam ekstrak metanol dilakukan dengan metode HPLC tervalidasi ( Ellnain-Wojtaszek
air bersih 5/2 v / v) dan setelah 10 menit, 0,45 ml Na jenuh 2 BERSAMA 3 telah ditambahkan. Sampel
dan Zgorka, 1999 , Su ł kowska-Ziaja dkk., 2017 ) menggunakan kromatografi cair Merck-Hitachi
(LaChrom Elite) dengan detektor DAD L-2455. Pemisahan dilakukan pada Purospher RP-18e (250 ×
4mm; 5 μ m, Merck). Fase gerak terdiri dari A - metanol, B - metanol:
0,5% asam asetat 1: 4 ( v / v). Itu fl laju aliran adalah 1ml / menit dan suhu kolom diatur ke 25 ° C.
Gradiennya adalah sebagai berikut: 100% B untuk 0 - 20 menit; 100 - 80% B untuk 20 - 35 menit; 80 - 60%
B untuk 35 - 55 mnt; 60 - 0% B untuk 55 - 70 menit; 0% B untuk 70 - 75 menit; 0 - 100% B untuk 75 - 80
menit; 100% B untuk 80 - 90 menit. Volume injeksi adalah 20 μ l dan senyawa yang diinginkan
terdeteksi pada 254 nm. Identi fi kation dan quanti fi kation dilakukan dengan perbandingan dengan
standar, berdasarkan waktu retensi dan kurva kalibrasi. Standar asam fenolat berikut diterapkan:
asam benzoat dan turunannya - 3,4-dihydroxyphenylacetic, ellagic, gallic (y = 711.080x + 0.114, R 2 = 0,999),Lalu, ke 150 μ l campuran itu 50 μ l ekstrak tumbuhan ditambahkan. Sampel dicampur dan diinkubasi
gentisic, p-hydroxybenzoic, protocatechuic (y = 1357.761x-2.599, R 2 = 0,999), salisilat (y =
94,923x-1,212, R 2 = 0,997), jarum suntik (y = 628,954x
+ 0,574, R 2 = 0,999), dan vanili (y = 1276,874x-1,692, R. 2 = 0,990)
AC id; asam sinamat dan turunannya: ca ff eic, o-coumaric, m-coumaric, p-coumaric, ferulic, hydroca ff eic, stabil ( Blios, 1958 ). 50 μ l ekstrak tumbuhan ditambahkan ke 150 μ l dari 100 μ Larutan metanol M
isoferulic, dan sinapic acid; dan depsides: kaftarik, klorogenik (y = 447.904x-0.452, R 2 = 0,999),
kriptoklorogenik (y = 255,781x-3,343, R 2 = 0,990), isoklorogenik, neoklorogenik (y = 294,878x-3,685, R 2
= 0,999) dan asam rosmarinic (kemurnian HPLC ≥ 98,0%, Sigma-Aldrich). Itu fl standar avonoid
termasuk: aglycones - kaempferol (y = 597.972x-31.461, R 2 = 0,999), luteolin, quercetin, myricetin dan
glikosida - apigetrin, cynaroside, hyperoside, quercitrin (y = 579.113x-14.468, R 2 = 0,998), rutoside,
trifolin dan vitexin (kemurnian HPLC ≥ 95,0%, Sigma-Aldrich).
2.5. Aktivitas antioksidan
2.5.1. Persiapan sampel
Untuk analisis aktivitas antioksidan, sekitar 0,05 g DW (berat kering) dari masing-masing bahan
yang digunakan: microshoots agar tumbuh, kultur tunas agitasi dan bioreaktor non-elicited
dipertahankan selama 30 hari pada media MS. - varian G (3mg / l BA dan 1mg / l NAA), serta daun
dan buah tanaman induk. Sampel yang dihomogenisasi diekstraksi menggunakan metanol selama 6
menit pada 30 Hz (MM400, Retch, Jerman). Setelah sentrifugasi (3 menit, 15 ° C, 33.000 × g, 32R,
Hettich, Jerman), supernatan dikumpulkan dan digunakan untuk analisis lebih lanjut. Semua analisis
dilakukan dalam format 96-piring, menggunakan pembaca Synergy II (Biotek, USA). Untuk tujuan
kalibrasi larutan asam askorbat, trolox dan asam galat digunakan termasuk blanko reagen. Semua
bahan kimia adalah kelas analitik (Sigma-Aldrich).
Gambar 1. In vitro budaya SchS.
SEBUAH. Kultur mikro agar-agar, media MS varian G, setelah 50 hari budidaya.
B. Kultur microshoot agitasi, MS medium varian F, setelah 40 hari budidaya.
C. Kultur microshoot pada bioreaktor bentuk tumbuhan MS medium varian G, setelah 60 hari budidaya.
63
Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70
2.5.2. Uji Folin-Ciocaletu (FC) dari total fenolik
Uji Folin-Ciocaletu (FC) dilakukan sesuai dengan metode Singleton et al. ( Singleton dkk., 1999 )
dengan modi fi kation yang dilaporkan oleh Bach et al. ( Bach dkk., 2015 ). Sebuah alikuot dari ekstrak
(100 μ l) ditambahkan ke 0,45ml reagen Folin-Ciocalteu encer (reagen FC: deio-
dicampur, diinkubasi selama 2 jam dalam kegelapan (25 ° C),
disentrifugasi dan dipindahkan ke pelat 96-sumur. Absorbansi dibaca pada 760 nm dan hasilnya
dinyatakan sebagai mmol per 1 g DW setara asam galat.
2.5.3. Kemampuan pereduksi besi (FRAP)
Kemampuan reduksi besi ekstrak tumbuhan dilakukan berdasarkan metode FRAP (kemampuan
reduksi besi plasma) yang diberikan oleh Benzie dan Strain ( Benzie dan Strain, 1996 ). Solusi 10mM
TPTZ (2,4,6-Tris (2-pyr-
idyl) -s-triazine) dalam 40mMHCl dicampur dengan 20mM FeCl 3 × 6H 2 O dan 300mM asetat bu ff eh
pada 1/1/10 v / v / v rasio (pH yang dihasilkan adalah 3,6).
selama 5 menit pada 25 ° C. Pembacaan absorbansi diambil pada 593 nm. Kandungan antioksidan
dinyatakan sebagai trolox dan / atau setara asam askorbat (mmol per 1 g DW).
2.5.4. DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) aktivitas pemulungan radikal
Pengukuran aktivitas pembersihan radikal bebas dilakukan dengan menggunakan radikal DPPH
DPPH. Sampel diinkubasi dalam kegelapan pada pengocok horizontal (60 menit, 25 ° C), dan
absorbansi dibaca pada 517 nm. Kandungan antioksidan dinyatakan sebagai trolox dan / atau setara
asam askorbat (mmol per 1 g DW).
2.5.5. Uji CUPRAC dari kapasitas antioksidan total
Metode CUPRAC ( Özyürek dkk., 2007 ) diadopsi oleh Biesaga-
Ko ś cielniak dkk. ( Biesaga-Ko ś cielniak dkk., 2014 ) digunakan. 50 μ l alikuot dari ekstrak dipindahkan ke
wellplate 96-wellplate sebelumnya fi diisi dengan 50 μ l alikuot dari 10mM Cu 2+, 7,5 juta neokuprin dan
1 juta amnonia-asetat bu ff er (pH 7.0). Pelat diinkubasi selama 15 menit pada 25 ° C dan absorbansi
terbaca pada 450 nm. Kandungan antioksidan dinyatakan sebagai trolox dan / atau setara asam
askorbat (mmol per 1 g DW).
2.6. Analisis statistik
Hasilnya dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi (SD) dari tiga seri independen (n = 10, n =
3) dan pengukuran. ' Statistika versi 12 PL ' paket perangkat lunak (StatSoft) digunakan untuk analisis.
3. Hasil
3.1. Karakteristik biomassa dalam sistem kultur in vitro
E ff dll dari PGRs (enam varian medium MS) dan durasi
A. Szopa, dkk. Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70

siklus pertumbuhan (enam di ff waktu budidaya yang berbeda) pada pertumbuhan dan penampilan
biomassa diamati pada kultur agar-agar. Microshoot dikembangkan pada varian F dan G ( Gambar 1 A)
dikarakterisasi dengan riap biomassa tinggi dan warna daun hijau tua. Indeks pertumbuhan (Gi)
bervariasi dari 2,2 hingga 8,7. Nilai Gi tertinggi diperoleh pada microshoot yang dibudidayakan
selama 60 hari pada media MS varian G dan 2,23 kali lipat lebih tinggi dibandingkan pada kasus
kontrol. - varian A (tanpa ZPT).
dicatat dalam ekstrak dari microshoot yang dibudidayakan pada media agar varian D, dipanen
setelah 30 hari budidaya ( Gambar 2 , Tabel 1 , Tabel S3-S4).
3.2.1.2. Kultur microshoot yang gelisah. E ff Efek PGRs pada kandungan asam fenolik juga diselidiki
dalam kultur yang diaduk. Dari 25 senyawa yang diuji, 8 senyawa terdeteksi pada semua ekstrak
yang dibuat

Dalam mode budidaya agitasi, pemotretan mikro dipertahankan dalam varian F dan G media gelisah microshoots: tiga depsides - klorogenik,

MS, dipilih sebagai yang paling optimal berdasarkan hasil percobaan pada kultur agar-agar yang asam kriptoklorogenik dan neoklorogenik dan fi lima turunan asam benzoat - asam galat,

dijelaskan di atas. Juga dalam hal ini, kemunculan biomassa bergantung pada komposisi ZPT yang protocatechuic, salicylic, syringic dan vanillic ( Meja 2 , Tabel S7). Ini adalah asam fenolik yang sama

diterapkan dan durasi siklus pertumbuhan. Pemotretan mikro ( Gambar 1 B) yang dibudidayakan pada seperti pada kultur agar-agar. Ekstrak media pertumbuhan juga dianalisis, tetapi tidak ada asam

varian F dicirikan dengan riap biomassa yang tinggi dan jumlah tunas ketiak yang banyak. Seperti fenolik yang terdeteksi di dalamnya. Jumlah senyawa individu bervariasi dari 0,17 hingga 103,48 mg /

yang ditunjukkan di Meja 2 , Nilai Gi bervariasi dari 1.4 (microshoot dibudidayakan selama 10 hari 100 g DW dan tergantung pada varian medium dan durasi percobaan. Asam kriptoklorogenik dan

pada varian neoklorogenik adalah senyawa utama dalam semua sampel yang diuji: jumlahnya bervariasi dari
31,96 (60 hari, varian F) hingga 103,48 mg / 100 g DW (20 hari, varian F) dan dari 9,77 (10 hari,

G) hingga 7,5 (microshoot dibudidayakan selama 60 hari pada varian F). Kondisi terbaik untuk varian G) hingga

pemeliharaan SchS kultur microshoot, dipilih berdasarkan rasio pertumbuhan dan akumulasi asam
fenolat dan fl avonoid direkam untuk agar dan kultur agitasi, diaplikasikan dalam percobaan yang
melibatkan sistem Plantform. Untuk budidaya bioreaktor, media varian G dan periode pertumbuhan 91.33mg / 100 g DW (30 hari, varian F), masing-masing ( Meja 2 , Tabel S7).

30 hari digunakan, menghasilkan pertumbuhan biomassa yang meningkat dan perkembangan mikro
( Gambar 1 C). Untuk jenis budaya ini, Gi sama dengan 4,6.
3.2. Produksi asam fenolat
Jumlah total asam fenolat yang diperoleh bergantung pada varian medium dan fase
pertumbuhan kultur ( Gambar 3 ). Jumlah total terendah dari metabolit di atas (156,71mg / 100 g DW)
dicatat dalam microshoot yang dikumpulkan setelah 50 hari dari media varian G. Sebaliknya,
biomassa yang tumbuh pada varian F dan dipanen setelah 30 hari budidaya ditandai dengan jumlah
total tertinggi (269.73mg / 100 g DW, 1,72 kali lipat lebih tinggi dibandingkan jumlah total terendah)
asam fenolat ( Gambar 3 , Meja 2 , Tabel S7).

3.2.1. Sistem kultur in vitro

3.2.1.1. Kultur mikro agar-agar. E ff Efek PGRs pada kandungan asam fenolat terlihat pada
microshoots agar-tumbuh. Dalam semua ekstrak yang diperoleh dari kultur stasioner, 8 dari 25
senyawa yang diuji terdeteksi ( Tabel 1 , Tabel S1 - S6). Tiga depsides - asam klorogenat, 3.2.1.3. Kultur bioreaktor. SchS microshoots, ditanam di bioreaktor bentuk tumbuhan pada media MS
kriptoklorogenik dan neoklorogenik dan fi ve turunan asam benzoat - asam galat, protocatechuic, varian G mengandung asam fenolik yang sama seperti agar dan kultur agitasi. Asam salisilat
salicylic, syringic dan vanillic, diidentifikasi fi ed. Jumlah senyawa individu bervariasi dan tergantung (101.91mg / 100 g DW),
pada modi medium fi kation dan durasi periode pertumbuhan, berkisar antara 0,35 hingga 116,65 mg / neoklorogenik AC id (100.26mg / 100 g DW) dan
100 g DW. Senyawa utama dalam semua sampel yang diuji adalah asam neoklorogenik dan asam kriptoklorogenik (77.27mg / 100 g DW) merupakan senyawa yang dominan. Kandungan total
klorogenat: jumlahnya bervariasi dari 6,81 (40 hari, varian asam fenolat adalah 346,80mg / 100 g DW ( Tabel 3 ).

Dalam kultur yang diperoleh YE (1 g / l YE ditambahkan pada hari ke 20 dari periode

A) hingga 116,65 mg / 100 g DW (60 hari, varian G), dan dari 7,82 (40 hari, varian A) hingga 72,17
mg / 100 g DW (60 hari, varian G), masing-masing ( Tabel 1 , Tabel S1 - S6).
Jumlah total asam fenolat yang diperoleh bergantung pada varian medium dan fase
pertumbuhan kultur ( Gambar 2 ). Jumlah total terendah (72.08mg / 100 g DW) diperoleh dalam
biomassa yang dikumpulkan setelah 40 hari pertumbuhan di varian A. Jumlah total tertinggi (4,97 kali
lipat lebih tinggi dari kontrol) asam fenolat (357.93mg / 100 g DW) adalah
pertumbuhan 30 hari), jumlah beberapa senyawa individu sedikit meningkat, mencapai level 1,01-
hingga 1,34 kali lipat lebih tinggi daripada pada kelompok kontrol ( Tabel 3 ). Senyawa yang dominan
adalah sebagai berikut: asam salisilat (110.15mg / 100 g DW), asam neochlorogenic (106.05mg / 100
g DW) dan asam kriptoklorogenik (69.39mg / 100 g DW). Total konten sama dengan 362.58mg / 100
g DW, dan 1.05 kali lipat lebih tinggi daripada ekstrak dari microshoot yang tidak ditimbulkan ( Tabel 3 ).
Sampel media tumbuh yang dikumpulkan dari SchS Kultur tumbuhan tidak mengandung asam fenolik.

Tabel 1
Perbandingan kandungan maksimal (mg / 100 g DW ± SD) asam fenolat dan fl avonoid dalam SchS agar in vitro budaya.

Senyawa In vitro budaya

Konten maksimal (mg / 100 g DW ± SD) Siklus pertumbuhan (hari) Varian media MS * Indeks pertumbuhan (Gi)

Asam fenolat Asam galat 52,33 ± 2,59 30 D 3.50

Asam neoklorogenik 116.65 ± 9.32 60 G 8.70
Asam protocatechuic 53,81 ± 3,23 30 D 3.50
Asam klorogenat 72.17 ± 5.41 60 G 8.70
Asam kriptoklorogenik 43.30 ± 4.99 30 D 3.50
Asam jarum suntik 10.72 ± 1.16 60 SEBUAH 3.90
Asam vanilat 10.75 ± 4.65 30 D 3.50
Asam salisilat 75.92 ± 1.43 60 SEBUAH 3.90
Konten total 357.93 ± 32.47 30 D 3.50
Flavonoid Quercitrin 82,33 ± 8,51 50 B 5.20
Kaempferol 24,50 ± 1,26 30 D 3.50
Konten total 105,07 ± 8,72 50 B 5.20

* A- kontrol (tanpa ZPT); B - 0.1mg / l BA dan 2mg / l NAA; D - 2mg / l BA dan 0,5mg / l NAA; G - 3mg / l BA dan 1mg / l NAA.

64
A. Szopa, dkk. Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70

Meja 2
Perbandingan kandungan maksimal (mg / 100 g DW ± SD) asam fenolat dan fl avonoid dalam SchS gelisah in vitro budaya.

Senyawa In vitro budaya

Konten maksimal (mg / 100 g DW ± SD) Siklus pertumbuhan (hari) Varian media MS * Indeks pertumbuhan (Gi)

Asam fenolat Asam galat 33,38 ± 4,55 30 G 2.20

Asam neoklorogenik 91.33 ± 12.31 30 F 2.90
Asam protocatechuic 28,39 ± 1,82 30 G 2.20
Asam klorogenat 58.84 ± 2.66 50 F 2.30
Asam kriptoklorogenik 103.48 ± 8.20 20 F 2.30
Asam jarum suntik 5,46 ± 0,32 60 G 4.10
Asam vanilat 4.80 ± 1.81 20 G 2.50
Asam salisilat 33,50 ± 0,37 60 G 4.10
Konten total 269.73 ± 30.74 30 F 2.90
Flavonoid Quercitrin 64.46 ± 1.31 50 F 2.30
Kaempferol 30,81 ± 0,12 30 G 2.20
Konten total 87,89 ± 1,78 50 F 2.30

* F - 2mg / l BA dan 2mg / l NAA; G - 3mg / l BA dan 1mg / l NAA.

asam adalah metabolit dominan ( Tabel 4 ).

3.4. Produksi flavonoid

3.4.1. Sistem kultur in vitro

3.4.1.1. Kultur mikro agar-agar. Komposisi ZPT dan lamanya masa pertumbuhan a ff terpengaruh fl isi
avonoid dalam kultur agar. Sebelas fl avonoid disaring, dua senyawa ditemukan dalam ekstrak
biomassa: satu aglikon - kaempferol, dan satu glikosida -

Gambar 2. Dinamika akumulasi asam fenolik dalam agar SchS kultur microshoot berdasarkan total
isinya selama siklus pertumbuhan di di ff varian medium MS yang lain.
quercitrin ( Tabel 1 , Tabel S1 - S6). Jumlah senyawa individu bervariasi, mulai dari 17,92 hingga 82,33
mg / 100 g DW, dan bergantung pada varian medium dan waktu pertumbuhan. Konsentrasi quercitrin
tertinggi (82,33mg / 100 g DW) terdeteksi pada ekstrak dari biomassa yang dikultur pada media MS
varian B selama 50 hari. Kandungan kaempferol tertinggi (24.50mg / 100 g DW) adalah con fi rmed
dalam ekstrak dari microshoots dipertahankan pada varian D media MS selama 30 hari ( Tabel 1 ,
Tabel S1 - S6).

Jumlah total yang diperoleh fl avonoid bergantung pada varian medium yang digunakan dan fase
pertumbuhan kultur ( Gambar 4 ). Jumlah total terendah (35,89mg / 100 g DW) tercatat dalam ekstrak
biomassa yang dikultur selama 40 hari pada media varian A, sedangkan total tertinggi fl konten hindari
(105.07mg / 100 g DW) adalah con fi ekstrak dari microshoot yang dibudidayakan pada media varian B
selama 50 hari ( Gambar 4 , Tabel 1 , Tabel S1-S6).

3.4.1.2. Kultur microshoot yang gelisah. Analisis HPLC ekstrak dari microshoot yang diaduk
mengungkapkan adanya dua senyawa yang sama seperti pada kultur agar: kaempferol dan quercitrin
( Meja 2 , Tabel S7). Flavonoid tidak terdeteksi pada media pertumbuhan eksperimental. Jumlah
senyawa individu bervariasi, mulai dari 18,05 sampai

64.46mg / 100 g DW, dan bergantung pada varian medium yang digunakan dan durasi eksperimen.
Gambar 3. Dinamika akumulasi asam fenolat dalam keadaan gelisah SchS kultur microshoot
berdasarkan total isinya selama siklus pertumbuhan pada varian media MS yang berbeda. Ekstrak dari biomassa yang dibudidayakan pada medium varian F selama 50 hari mengandung
jumlah quercitrin tertinggi (64,46mg / 100 g DW), sedangkan kandungan kaempferol tertinggi
(30,81mg / 100 g DW) adalah con fi rmed dalam microshoot yang ditanam selama 30 hari dalam
medium varian G ( Meja 2 , Tabel S7). Jumlah seluruhnya fl kandungan avonoid yang diperoleh
3.3. Bahan tanaman induk
tergantung pada tipe sedang dan fase pertumbuhan ( Gambar 5 ). Jumlah total terendah (43.63mg /
100 g DW) dan tertinggi (87.89mg / 100 g DW) ditemukan dalam ekstrak dari biomassa yang ditanam
Kehadiran 8 dari 25 senyawa yang diuji adalah con fi rmed dalam ekstrak buah dan daun
selama 50 hari di media varian G dan F, masing-masing ( Gambar 5 , Meja 2 , Tabel S7).
tanaman induk: tiga depsides - asam klorogenat, kriptoklorogenik dan neoklorogenik dan fi lima
turunan asam benzoat: asam galat, protocatechuic, salicylic, syringic dan vanillic ( Tabel 4 ). Jumlah
total asam fenolat dalam ekstrak buah adalah

84,17mg / 100 g DW. Senyawa utamanya adalah galat (25.65mg / 100 g DW) dan asam
neochlorogenic (21.04mg / 100 g DW). 3.4.1.3. Kultur bioreaktor. Serupa dengan agar dan kultur yang diaduk, microshoot yang tidak

Dibandingkan dengan buah-buahan, daun SchS mengandung jumlah total senyawa yang ditimbulkan dan ditumbuhkan bioreaktor terbukti mengandung dua

dianalisis lebih tinggi (569,66 mg / 100 g DW). Klorogenik (208.79mg / 100 g DW) dan neoklorogenik fl avonoid: quercitrin dan kaempferol. Jumlahnya adalah sebagai berikut: quercitrin - 56.76mg / 100 g

(193.40mg / 100 g DW) DW, dan kaempferol - 20,36mg / 100 g DW. Jumlah seluruhnya fl konten hindari sama dengan
77.12mg / 100 g DW

65
A. Szopa, dkk. Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70

Tabel 3
Asam fenolat dan fl isi avonoid (mg / 100 g DW ± SD) dalam microshoots SchS dibudidayakan dalam bioreaktor Plantform pada media MS varian G selama periode pertumbuhan 30 hari. saya - microshoot tanpa
elisitasi (kultur bioreaktor); II-microshoots diperoleh dengan 1 g / l YE (ekstrak ragi) pada 20 th hari masa pertumbuhan (bioreaktor + YE).

Senyawa saya II Naik (+) / Turun (-) (lipat)

Asam fenolat Asam galat 28.78 ± 3.66 38,63 ± 3,90 + 1,34

Asam neoklorogenik 100,26 ± 9,57 106,05 ± 9,04 + 1.06
Asam protocatechuic 6.40 ± 0.37 6,96 ± 0,56 + 1.09
Asam klorogenat 22.06 ± 1.78 22,19 ± 1,59 + 1.01
Asam kriptoklorogenik 77.27 ± 5.14 69,39 ± 8,45 - 1.11
Asam jarum suntik 2,31 ± 0,42 1,25 ± 0,30 - 1.85
Asam vanilat 7.81 ± 0.66 7,96 ± 0,19 + 1.02
Asam salisilat 101.91 ± 6.35 110,15 ± 9,11 + 1.08
Konten total 346,80 ± 27,94 362.58 ± 33.14 + 1.05
Flavonoid Quercitrin 56.76 ± 3.64 55,58 ± 3,73 - 1.02
Kaempferol 20.36 ± 2.35 17.96 ± 0.41 - 1.13
Konten total 77,12 ± 5,99 73.54 ± 4.14 - 1.05

Tabel 4
Jumlah (mg / 100 g DW ± SD) asam fenolik dan fl avonoid dalam SchS
bahan tanaman induk.

Senyawa Buah Daun

Asam fenolat Asam galat 25,65 ± 1,98 27,17 ± 2,49

Asam neoklorogenik 21.04 ± 1.88 193,40 ± 18,89
Asam protocatechuic 7,25 ± 0,68 18,12 ± 1,77
Asam klorogenat 2.17 ± 0.19 208,79 ± 19,08
Asam kriptoklorogenik 5,83 ± 0,49 22.45 ± 2.11
Asam jarum suntik 1,15 ± 0,12 17.93 ± 1.53
Asam vanilat 4,28 ± 0,39 40.62 ± 3.89
Asam salisilat 15,80 ± 1,43 41.18 ± 4.01
Konten total 83.17 ± 7.16 569.66 ± 53.77
Flavonoid Quercitrin 59,65 ± 5,43 754.25 ± 74.89
Kaempferol 19,67 ± 1,99 29,62 ± 2,76
Konten total 79,32 ± 7,42 783,87 ± 77,65 Gambar 5. Dinamika fl akumulasi avonoid dalam keadaan gelisah SchS kultur microshoot
berdasarkan total isinya selama siklus pertumbuhan di di ff varian medium MS yang lain.

kira-kira 10 kali lebih banyak fl avonoid (783.87mg / 100 g DW). Sama halnya dengan buah-buahan,
quercitrin adalah yang utama fl avonoid metabolite (754.25mg / 100 g DW) (Tabel 4).

3.5. Aktivitas antioksidan

Dalam penelitian ini, uji Folin-Ciocalteu (FC) dari total fenolat, FRAP, DPPH dan uji CUPRAC,
mengungkapkan bahwa ekstrak dari in vitro
biomassa (terutama kultur bioreaktor yang diperoleh YE) dan daun tanaman induk, menunjukkan
signi fi aktivitas antioksidan yang jauh lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak buah ( Tabel 5 ).

Gambar 4. Dinamika fl akumulasi avonoid dalam agar SchS kultur microshoot berdasarkan total isinya Uji FC menunjukkan kandungan fenolik tertinggi dalam ekstrak dari bioreaktor yang ditimbulkan
selama siklus pertumbuhan di di ff varian medium MS yang lain. (137,35 mmol asam galat / 100 g DW). Namun, jumlah ini serupa dengan yang diperoleh untuk
ekstrak daun (130,90 mmol asam galat / 100 g DW). Pada saat yang sama, nilai-nilai ini ca. 4,5 kali
lipat lebih tinggi dari hasil FC yang diperoleh untuk ekstrak buah (29.93mmol asam galat / 100 g DW)

( Tabel 3 ). ( Tabel 5 ).

Seperti yang ditunjukkan di Tabel 3 , elisitasi dengan YE diberikan negatif e ff dll

fl menghindari konten dari microshoot yang dikembangkan bioreaktor. Konsentrasi senyawa yang Tes FRAP, DPPH dan CUPRAC juga mengungkapkan potensi antioksidan yang lebih tinggi SchS

diteliti menurun 1,02- dan 1,13 kali lipat, dibandingkan dengan kelompok kontrol. Senyawa yang in vitro kultur dan ekstrak daun, dinyatakan sebagai trolox dan asam askorbat ( Tabel 5 ).

dominan adalah quercitrin (55.58mg / 100 g DW). Konten total (73.54mg / 100 g DW) adalah
Hasil dari: FRAP, DPPH dan CUPRAC masing-masing menjadi:

1,05 kali lipat lebih rendah daripada di microshoot non-elicited.
3.4.2. Bahan tanaman induk
Satu fl avonoid aglycone - kaempferol, dan satu glikosida - quercitrin, adalah penipu fi ekstrak
buah dan daun tanaman induk ( Tabel 4 ). Jumlah total fl avonoid dalam ekstrak buah tadi
79.32mg / 100 g DW) dengan quercitrin sebagai senyawa utama (59.65mg / 100 g DW).
Dibandingkan dengan buah-buahan, SchS daun terkandung
4.02, 118.42, 17.05mmol trolox / 100 g DW dan 8.36, 181.13,
41.30mmol asam askorbat / 100 g DW untuk kultur agar-agar; 4.74, 139.74,
20.12mmol trolox / 100 g DW dan 8.82, 191.14, 43.58mmol asam askorbat / 100 g DW untuk biakan
yang diaduk; dan 7,31, 215,43, 31,02 mmol trolox / 100 g DW dan 9,37, 202,93, asam askorbat 46,27
mmol / 100 g DW untuk ekstrak daun. Sedangkan ekstrak buah memiliki aktivitas antioksidan yang
rendah yaitu: 1,67, 49,25, 7,09 (mmol trolox / 100 g DW) dan 1,44, 31,22, 7,12 (asam askorbat mmol
/ 100 g DW) untuk FRAP, DPPH dan CUPRAC, masing-masing ( Tabel 5 ). Potensi antioksidan

66
A. Szopa, dkk. Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70

Tabel 5
Ekstrak aktivitas antioksidan dari: agar, agitasi dan bioreaktor-tumbuh (tanpa dan dengan elisitasi YE) SchS mikroshoot, dikultur selama 30 hari pada media MS varian G, dan dari bahan tanaman induk - buah
dan daun, dievaluasi dengan metode Folin-Ciocalteu (FC), FRAP, DPPH dan CUPRAC.

Bahan FC FRAP DPPH CUPRAC

mmol asam galat / mmol Trolox / mmol Askorbat mmol Trolox / 100 g mmol asam askorbat / mmol Trolox / mmol Askorbat
100 g DW 100 g DW asam / 100 g DW DW 100 g DW 100 g DW asam / 100 g DW

In vitro budaya
Kultur agar 71,95 ± 22,92 4.02 ± 1.28 8,36 ± 0,26 118.42 ± 37.73 181.13 ± 5.72 17,05 ± 5,43 41,30 ± 1,30
Budaya yang gelisah 84.90 ± 29.93 4.74 ± 1.67 8,82 ± 1,74 139.74 ± 49.26 191,14 ± 37,78 20.12 ± 7.09 43,58 ± 8,61
Kultur bioreaktor 74,73 ± 1,17 4,17 ± 0,07 3,41 ± 0,06 122,99 ± 1,93 73,89 ± 1,33 16,85 ± 3,00 17,71 ± 2,80
Bioreaktor 137,35 ± 10,29 7,67 ± 0,57 6.21 ± 0.46 226,06 ± 16,94 134,53 ± 9,95 30,67 ± 2,27 32,50 ± 2,44
budaya + YE
Tanaman induk
Daun 130,90 ± 2,75 7,31 ± 0,15 9,37 ± 0,30 215.43 ± 4.53 202,93 ± 6,47 31,02 ± 0,65 46.27 ± 1.47
Buah 29.93 ± 2.85 1,67 ± 0,16 1,44 ± 0,17 49.25 ± 4.69 31.22 ± 3.73 7.09 ± 0.67 7.12 ± 0.85

juga diuji untuk microshoot yang dikembangkan bioreaktor. Dalam ekstrak dari bioreaktor yang tidak
mengalami elisitasi, aktivitas antioksidan yang dievaluasi dengan metode di atas sama dengan 4,17,
122,99, 16,85 (mmol trolox / 100 g DW) dan 3,41, 73,89, 17,71 (asam askorbat mmol / 100 g DW),
masing-masing ( Tabel 5 ). Sebagai perbandingan, aktivitas antioksidan dalam ekstrak dari bioreaktor
yang diperoleh YE adalah: 7,67,
ditemukan seperti pada biomassa dari in vitro budaya. Namun, ada perbedaan yang jelas ff perbedaan
dalam kandungan kuantitatif dari senyawa yang diteliti. Kandungan total maksimum (365.04mg / 100
g DW) asam fenolik dalam ekstrak dari SchS in vitro kultur 4,39 kali lipat lebih tinggi dari pada
buah-buahan (83,17mg / 100 g DW) dan 1,56 kali lipat lebih rendah dari pada daun (569,66mg / 100
g DW) tanaman induk ( Tabel 1 - 4 ).

226.06, 30.67 (mmol trolox / 100 g DW) dan 6.21, 134.53, 32.50 (mM ascorbic acid / 100 g DW)
masing-masing untuk FRAP, DPPH dan CUPRAC. Nilai yang diperoleh adalah: 1,84, 1,05, 1,82 dan
1,82, 1,82, 1,84 kali lipat lebih rendah, masing-masing, daripada ekstrak dari microshoot yang tidak
ditimbulkan ( Tabel 5 ).
Kami berusaha untuk menghubungkan aktivitas antioksidan sampel dengan jumlah metabolit
sekunder yang dipilih. Hasil analisis korelasi antara senyawa tersebut ( yaitu asam fenolik dan fl avonoid)
dan aktivitas antioksidan ditampilkan di Gambar 6 . Korelasi negatif yang tinggi antara fl avonoid dan
sebagian besar asam fenolik, dan aktivitas antioksidan dari ekstrak tumbuhan mentah ditemukan.
Hanya kandungan total asam fenolat dan asam salisilat saja yang berkorelasi positif dengan potensi
antioksidan ekstrak tumbuhan pada tingkat R> 3.
4. Diskusi
kami dapat membantah bahwa produktivitas tinggi SchS kultivar memanifestasikan dirinya tidak hanya
Dalam penelitian kali ini, kandungan dua kelompok utama metabolit fenolik: asam fenolat dan fl avonoid
dalam produksi berlebih dari lignan dibenzocyclooctadiene ( ' Schisandra lignan '),
dalam S. chinensis CV. Sadova (kultivar anggur magnolia Cina; SchS), dievaluasi untuk fi pertama kali.
Percobaan mencakup bahan tanaman induk dan in vitro
Pada ekstrak daun, asam klorogenat (208.79mg / 100 g DW) merupakan asam fenolat yang
dominan, sedangkan asam neoklorogenik merupakan asam yang dominan (maks. 116.65mg / 100 g
DW) pada ekstrak dari in vitro
biomassa; isinya 5,54 kali lipat lebih tinggi dari pada buah-buahan dan 1,66 kali lipat lebih rendah dari
pada daun ( Tabel 4 ). Jumlah yang lebih tinggi dari asam syringic dan vanillic ditemukan pada ekstrak
daun (masing-masing 1,67- dan 3,78 kali lipat) dibandingkan dengan kandungan maksimum yang
diperoleh dalam ekstrak biomassa dari ekstrak daun. in vitro budaya ( Tabel 4 ). Isi dari semua asam
fenolik individu yang tercatat dalam ekstrak buah lebih rendah dibandingkan dengan jumlah yang
ditentukan di in vitro budaya.
Ditinjau dari komposisi kualitatif asam fenolat dan di ff erences dalam jumlah senyawa individu
dalam SchS Ekstrak daun dan buah, hasil penelitian kali ini serupa dengan yang diperoleh pada
penelitian sebelumnya pada S. chinensis varietas non-kultivar ( Szopa dkk., 2017b ). Namun, total
kandungan asam fenolik dalam daun (96,12 mg / 100 g DW) dan buah-buahan (47,64 mg / 100 g
DW) dalam ekstrak yang dianalisis pada penelitian sebelumnya masing-masing adalah 6,50- dan
1,77 kali lipat lebih rendah, daripada ekstrak yang dianalisis. dalam penelitian ini. Oleh karena itu,

tetapi juga peningkatan akumulasi fenolat. Asam klorogenat dan asam protokatekuat dominan dalam
microshoot yang disebarkan. Potensi antioksidan dari sampel juga dievaluasi. Mengingat cakupan
ekstrak dari S. chinensis
luas percobaan yang mencakup optimalisasi komprehensif kondisi budidaya sehubungan dengan
daun, sedangkan SchS ekstrak yang terutama mengandung asam klorogenik, neoklorogenik, salisilat
komposisi ZPT, durasi periode pertumbuhan, mode budidaya (solidagar, sistem bioreaktor agitasi dan
dan vanilik. Isi asam klorogenat, salisilat dan vanillic dalam SchS ekstrak adalah 4,38-, 4,09- dan
perendaman sementara) dan uji elisitasi, pekerjaan dapat dianggap tinggi. tanda bioteknologi fi tongkat.
23,75 kali lipat lebih tinggi, masing-masing, daripada ekstrak S. chinensis Daun-daun. Asam
protocatechuic paling melimpah di S. chinensis ekstrak buah, tetapi asam galat dan neoklorogenik
dominan di SchS ekstrak buah. Kandungan asam galat dan salisilat dalam S. chinensis ekstrak buah
4,65- dan 2,76 kali lipat lebih rendah dari pada SchS ekstrak buah ( Tabel 4 ). Pekerjaan ini juga
Dalam ekstrak yang dianalisis dari organ tanaman induk - SchS daun dan buah-buahan - komposisi
menipu fi mengurangi keberadaan asam kriptoklorogenik dan neoklorogenik di SchS ekstrak daun dan
kualitatif asam fenolat yang sama
buah. Kami tidak fi temukan mereka di daun dan buah S. chinensis dalam studi sebelumnya ( Szopa
dkk., 2017b ).

Komposisi kualitatif fl pecahan avonoid sama untuk keduanya in vitro biomassa dan organ
tanaman induk ( Tabel 2 dan 3 ). Namun, ada perbedaan yang mencolok ff perbedaan dalam isi
kuantitatif dari senyawa yang diteliti. Konten total maksimum fl avonoid dalam ekstrak dari agar dan
diaduk in vitro budaya (105.07 dan

87,89mg / 100 g DW, masing-masing) adalah 1,32- dan 1,11 kali lipat lebih tinggi dari pada
buah-buahan (79,32mg / 100 g DW) dan 7,46- dan 8,92 kali lipat lebih rendah dari pada daun
Gambar 6. Heat map korelasi antara metabolit sekunder terpilih dan aktivitas antioksidan yang
diperkirakan dengan metode Folin-Ciocalteu (FC), FRAP, DPPH dan CUPRAC, diplot menurut (783,87mg / 100 g DW) ( Meja 2 ). Konten total maksimum

koefisien korelasi. ffi nilai cient (R). fl avonoid dalam kultur bioreaktor (tidak ditimbulkan - 77,12mg / 100 g DW,

67
A. Szopa, dkk.
setelah elisitasi - 73.54mg / 100 g DW) sebanding dengan buah-buahan (79.32mg / 100 g DW) dan
sekitar 10 kali lebih rendah dari pada daun (783.87mg / 100 g DW) ( Tabel 3 dan 4 ). Kualitatif dan
kuantitatif di ff erences di fl ditemukan kandungan avonoid di antara ekstrak daun dan buah dari SchS dan asam fenolat sama dengan 71,48 mg / 100 g DW (biakan agar dipanen setelah 30 hari budidaya) dan
spesies aslinya ( S. chinensis). Empat fl avonoid (myricetin, quercetin, quercitrin dan rutoside)
terdeteksi dalam ekstrak dari S. chinensis daun, sementara hanya dua
fl avonoid (kaempferol dan quercitrin) ditemukan dalam ekstrak dari
SchS Daun-daun. Pada saat yang sama, total konten fl avonoid dalam S. chinensis daun (213,12mg /
100 g DW) adalah 3,7 kali lipat lebih rendah dari pada SchS
ekstrak (783.87mg / 100 g DW) ( Tabel 1 ). Tidak fl avonoid terdeteksi di S. chinensis ekstrak buah ( Szopa (maks. 103.48mg / 100 g DW). Menariknya, keberadaan asam neoklorogenik dan kriptoklorogenik
dkk., 2017b ). Kuantitatif dan kualitatif di ff perbedaan kandungan metabolit sekunder antara di ff Berbagai
kultivar tanaman pangan telah dipelajari sebelumnya. Misalnya persamaan kualitatif dan kuantitatif di ff
erences di stroberi ( Fragaria × ananassa) dan Vaccinium kultivar berkaitan dengan fl avonoid
(quercetin, myricetin dan kaempferol) dan asam fenolat (ellagic, p-coumaric, ca ff komposisi asam eic
dan ferulic) telah kon fi rmed sebelumnya ( Häkkinen dan Törrönen, 2000 ). Kultivar di ff Dibandingkan
dengan kandungan total senyawa fenolik yang dianalisis: nilai yang tercatat dalam blueberry yang
dibudidayakan bervariasi dari 4,4 hingga 9,2 mg / 100 g berat segar (FW), dan di antara kultivar
stroberi, nilainya berkisar antara 42,1 hingga 54,4 mg / 100 g FW . Kadar fenolik juga diperiksa di di ff kultivarSchS in vitro kultur (maks. 357.93mg / 100 g DW).
kemangi ungu yang salah ( Ocimum basilicum) ( Flanigan dan Niemeyer, 2014 ). Studi tersebut
mengungkapkan bahwa kadar fenolik total serupa untuk di ff Kultivar yang berbeda, bagaimanapun,
mereka berbeda sehubungan dengan konsentrasi beberapa asam fenolik individu, termasuk asam
kaftarat dan chichoric. Kuantitatif di ff erences juga con fi rmed dalam studi tentang kandungan asam
fenolat pada tiga kultivar padi ( Oryza sativa) ( Zhou et al., 2004 ). Kadar ferulic dan asam p-coumaric
yang tinggi ditemukan pada beras merah dan kadar asam ferulic yang lebih rendah pada beras giling.
Apalagi, signi fi tidak bisa ff perbedaan diamati dalam kandungan asam fenolik individu di antara kultivar
kenari ( Juglans regia) ( Colaric dkk., 2005 ). Asam fenolat yang sama (chlorogenic, ca ff asam eic,
p-coumaric, ferulic, sinapic, ellagic, dan syringic) diidentifikasi fi Pada buah masak 10 kultivar kenari,
tetapi konsentrasinya sangat bervariasi fi terus-menerus. Di tertinggi ff Perbedaan jumlah senyawa yang
terdeteksi diamati antara buah kultivar ' Rasna ' dan ' Fernette ' kenari.
Eksperimen bioteknologi yang dilakukan dalam penelitian kami mengungkapkan dampak tinggi
dari in vitro kondisi kultur pada produksi senyawa fenolik. Selain itu, baik individu maupun total
kandungan asam fenolik dan fl avonoid masuk fl dipengaruhi oleh konten ZPT. Komposisi PGRs
dioptimalkan untuk tumbuh-agar SchS microshoots ( Tabel 1 , Tabel S1 - S6). Rasio terbaik BA
(sitokinin) terhadap NAA (auksin) dipilih untuk pertumbuhan biomassa dan produksi fenolik: ini adalah
varian F dan G dari media MS, yang mengandung 2mg / l BA dan 2mg / l NAA, dan 3mg / l BA dan
1mg / l NAA, masing-masing. Kedua varian medium MS ini juga diuji untuk agitasi SchS microshoot,
menghasilkan hasil yang sebanding ( Meja 2 , Tabel S7). Namun, signi fi tidak bisa ff Perbedaan dalam
individu dan total kandungan fenolik ditemukan antara microshoots tumbuh untuk di ff periode waktu
yang salah ( Gambar. 2 dan 3 , Tabel S1 - S7).
Percobaan pada microshoots yang ditanam dalam sistem perendaman sementara Plantform
dilakukan untuk mendemonstrasikan kemungkinan mengadaptasi SchS in vitro kultur untuk produksi
senyawa fenolik skala besar ( Tabel 3 ). Kami juga berusaha untuk meningkatkan produktivitas
microshoot yang dikembangkan bioreaktor dengan elisitasi YE, tetapi pendekatan ini tidak
menunjukkan hasil yang menjanjikan. Namun demikian, dalam fl pengaruh elisitor pada produksi
fenolik sudah diketahui ( Patel dan Krishnamurthy, 2013 ; Tashackori dkk., 2016 ), dan oleh karena itu,
efek faktor stres lainnya pada SchS budaya layak dipelajari di masa depan.
Studi kami menemukan di ff erences dalam asam fenolik dan fl produksi avonoid antara bahan
tanaman induk dan mikroshoot dari SchS,
dan in vitro dan in vivo biomassa spesies asli (non-kultivar) ( Szopa dkk., 2017b ). Adanya satu
kekurangan: asam klorogenat,
68
Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70
dan enam turunan asam benzoat: asam galat, p-hydroxybenzoic, protocatechuic, salicylic, syringic
dan vanillic, adalah con fi rmed di ekstrak dari S. chinensis in vitro budaya. Kandungan total maksimal
5 kali lipat lebih rendah dari kandungan total asam fenolat maksimal di SchS Ekstrak kultur agar.
Metabolit utama di semua sistem yang diuji adalah: asam protocatechuic (maks.
35.69mg / 100 g DW), asam klorogenat (maks. 13.05mg / 100 g DW); di
SchS, metabolit utama adalah tiga depsides: neochlorogenic (maks.
116.65mg / 100 g DW), asam klorogenik (maks. 72.17mg / 100 g DW) dan asam kriptoklorogenik
tidak
fi rmed dalam studi sebelumnya tentang S. chinensis ( Szopa dkk., 2017b ). Kehadiran tiga fl avonoids:
kaempferol, quercitrin dan rutoside, adalah penipu fi rmed in S. chinensis ekstrak kultur agar dan
agitasi, sedangkan dua fl avonoids: kaempferol dan quercitrin, terdeteksi di
SchS ekstrak. Isi total maksimal dari fl avonoids dalam ekstrak dari
S. chinensis kultur (29,37mg / 100 g DW) adalah 3,61 kali lipat lebih rendah dari pada
Kuantitatif di ff erences dalam asam fenolik dan fl tingkat avonoids ( Kwiecie ń dkk., 2018 )
ditemukan di antara kultur pucuk yang diaduk dari tiga kultivar St John ' s-wort ( Hypericum perforatum cvs.
Elixir, Helos dan Topas) ( Kwiecie ń dkk., 2015 ). Asam fenolat yang sama terdeteksi di semua ekstrak
kultivar: asam klorogenik, 3,4-dihidroksifenilasetat, p-coumaric, neochlorogenic, protocatechuic dan
syringic. Namun, jumlah senyawa individu dan jumlah total asam fenolat bergantung pada kultivar
yang dipelajari dan varian media yang diterapkan. CV. ' Helos ', dipertahankan pada media yang
mengandung konsentrasi NAA dan BA yang rendah (0,1 - 1.0mg / l), adalah sumber terkaya dari
senyawa yang disebutkan di atas ( Kwiecie ń dkk., 2015 ). Selain asam fenolik, enam fl avonoid
terdeteksi dalam kultivar yang diteliti: hiperosida, kaempferol, luteolin, quercitrin, quercetin dan
rutoside. Sama halnya dengan asam fenolat, jumlahnya bergantung pada kultivar dan media yang
digunakan, dengan jumlah con tertinggi fi rmed untuk pucuk yang dibudidayakan pada media LS dan
MS dengan jumlah ZPT yang rendah. Paling atas
fl konten menghindari (maks. total 328.53mg / 100 g DW) adalah con fi rmed untuk cv. ' Eliksir ' tunas
ditanam pada media MS ( Kwiecie ń dkk., 2018 ). Cheniany dkk. ( Cheniany dkk., 2013 ) melaporkan
pengamatan serupa tentang kultur pucuk ketiak agar-agar dari fi lima kultivar kenari ( Juglans
regia cvs. Chandler, Howard, Kerman, Sunland dan Z 63). Semua kultivar mengandung asam fenolik
berikut: chlorogenic, gallic dan p-cou-
asam maric dan a fl avonoid: quercetin, sedangkan asam syringic dan asam vanillic hanya ada di
microshoots dari cv. ' Howard '. Apalagi di ff erences dalam hasil dari senyawa yang terdeteksi
diperhatikan. Studi lain meneliti dalam fl pengaruh suplai nutrisi dan karbohidrat terhadap komposisi
fenolik pada kultur tunas agar dua kultivar apel ( Malus × domestica cvs. Jonagold dan J9) ( Lux-Endrich
dkk., 2000 ). Kultur ini mengakumulasi asam fenolik dan fl avonoid, yang konsentrasinya tidak hanya
bergantung pada jenis kultivar, tetapi juga faktor-faktor seperti kandungan sukrosa dan konsentrasi
makronutrien dalam media, serta lamanya masa pertumbuhan. Kouakou dkk. (2007)
mempelajari komposisi senyawa fenolik dalam kaitannya dengan induksi struktur embriogenik dalam
kultur suspensi dua kultivar kapas ( Gossypium hirsutum cvs. Coker 312 dan R405-2000) dan
menunjukkan bahwa cv. ' Coker 312 ' menghasilkan struktur embriogenik, tidak seperti cv.
' R405-2000 ', yang ditemukan sebagai kultivar non-embriogenik. Mereka menemukan bahwa induksi
embriogenesis di cv. ' Coker 312 ' sangat terkait dengan kandungan ca yang lebih tinggi ff Asam eic,
ferulic dan salicylic serta munculnya asam p-coumaric dan benzoic serta katekin dan naringenin yang
tidak ditemukan pada kultivar non embriogenik ( Kouakou dkk., 2007 ).
Senyawa fenolik umumnya dianggap sebagai metabolit tanaman utama yang bertanggung
jawab atas antioksidan peningkat kesehatannya. E ff dll ( Krishnaiah dkk., 2011 ; Procházková dkk.,
2011 ). Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi kapasitas antioksidan SchS bahan tanaman induk -
daun dan buah-buahan, serta sampel dari in vitro microshoot
A. Szopa, dkk.
kultur menggunakan metode FC, FRAP, DPPH dan CUPRAC. Hasil yang dinyatakan sebagai asam
galat, trolox dan asam askorbat setara, menunjukkan potensi antioksidan yang tinggi dari ekstrak
daun, sedangkan ekstrak buah menunjukkan potensi yang lebih rendah ( Tabel 5 ). Aktivitas
antioksidan dari kultur mikro, dinyatakan sebagai asam askorbat, beberapa kali lebih tinggi daripada
buah-buahan dan sebanding dengan ekstrak daun ( Tabel 5 ). Untuk estimasi potensi antioksidan
sampel, kami menerapkan komplementer dan banyak digunakan in vitro metode, masing-masing
menggunakan di ff tidak ada reagen redoks kromogenik dengan di ff potensi standar yang salah.
Pendekatan ini sering ditemukan dalam literatur, namun, masih belum ada uji antioksidan standar
yang dapat diterima secara luas yang sesuai untuk semua jenis sampel, terlepas dari komposisinya ( Apak
dkk., 2007 ;
Sebelum et al., 2005 ).
Korelasi negatif antara aktivitas antioksidan total
SchS ekstrak dan sebagian besar asam fenolik terukur dan fl avonoid bisa mengejutkan ( Gambar 6 ).
Namun, metabolisme sekunder tanaman begitu kaya dan kompleks sehingga sulit untuk dipahami ffi kultus
untuk menyimpulkan bahwa sifat antioksidan didorong hanya oleh satu kelompok senyawa.
Pekerjaan kami sebelumnya, dilakukan SchS bahan, mengungkapkan kandungan yang sangat tinggi
dari kelompok metabolit sekunder lainnya, yaitu lignan ( Szopa dkk., 2018a ). Lignan adalah metabolit
sekunder yang sangat melimpah SchS dan hasil penelitian kami menunjukkan bahwa mereka sangat
berkontribusi pada aktivitas antioksidan tanaman.
5. Kesimpulan
Singkatnya, pekerjaan kami menunjukkan hal itu SchS daun, buah-buahan dan khususnya in
vitro microshoot dapat dianggap sebagai sumber yang kaya akan senyawa fenolik. Hasilnya
mengungkapkan itu SchS ( kultivar Ukraina produktivitas tinggi) mengandung jumlah senyawa fenolik
yang lebih tinggi dan menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih kuat dibandingkan dengan yang
asli (non-kultivar) S. chinensis, yang telah kami pelajari sebelumnya. Selain itu, percobaan ekstensif
yang difokuskan pada pengoptimalan kondisi kultur memungkinkan kami untuk mengidentifikasi
faktor-faktor yang bertanggung jawab atas peningkatan produksi asam fenolat dan fl avonoid dalam SchS
microshoots.
Deklarasi Persaingan Minat
Semua penulis menyatakan bahwa mereka tidak menipu fl ict yang menarik.
Ucapan Terima Kasih
Pendanaan: Studi ini didanai oleh National Science Center, Polandia (2016/23 / D / NZ7 / 01316)
dan proyek yang didukung oleh Kementerian Sains dan Pendidikan Tinggi Polandia (K / DSC /
004297).
Lampiran A. Data tambahan
Materi tambahan terkait artikel ini dapat ditemukan, dalam versi online, di doi: https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2019.08.021
Opletal, L., Sovová, H., Bártlová, M., 2004. Dibenzo [a, c] cyclooctadiene lignan dari
.
Referensi
Apak, R., Güçlü, K., Demirata, B., Özyürek, M., Çelik, S., Bekta ş Hai ğ lu, B., Berker, K.,
Özyurt, D., 2007. Evaluasi perbandingan berbagai uji kapasitas antioksidan total yang diterapkan pada senyawa
fenolik dengan uji CUPRAC. Molekul 12, 1496 - 1547.
https://doi.org/10.3390/12071496 .
Bach, A., Kapczy ń ska, A., Dziurka, K., Dziurka, M., 2015. Senyawa fenolik dan car-
bohidrat dalam kaitannya dengan pembentukan bohlam di Lachenalia ' Ronina ' dan ' Rupert ' in vitro
budaya di bawah di ff lingkungan pencahayaan yang salah. Sci. Hortik. 188, 23 - 29. https: // doi. org / 10.1016 /
j.scienta.2015.02.038 .
Bensky, D., Gamble, A., 1993. Materia Pengobatan Herbal Cina. Eastland Press,
Vista .
Benzie, IF, Strain, JJ, 1996. Kemampuan mengurangi besi plasma (FRAP) sebagai ukuran
dari “ kekuatan antioksidan ”: uji FRAP. Anal. Biochem. 239, 70 - 76. https://doi.org/
10.1006 / abio.1996.0292 .
Biesaga-Ko ś cielniak, J., Dziurka, M., Ostrowska, A., Mirek, M., Ko ś cielniak, J., Janeczko,
A., 2014. Brassinosteroid meningkatkan kandungan antioksidan pada biji terpilih
Kacang polong tanaman. AJCS 8, 378 - 388 .
69
Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70
Blios, MS, 1958. Penentuan antioksidan dengan menggunakan radikal bebas yang stabil. Alam
181, 1199 - 1200. https://doi.org/10.1038/1811199a0 .
Farmasi Sentral A ff airs Council of Korea, 2002. Korean Pharmacopoeia. Seoul ,. . Cheniany, M., Ebrahimzadeh, H.,
Vahdati, K., Preece, JE, Masoudinejad, A.,
Mirmasoumi, M., 2013. Isi dari di ff kelompok lain dari senyawa fenolik dalam microshoots dari Juglans regia kultivar
dan studi tentang aktivitas antioksidan. Acta Physiol. Menanam. 35, 443 - 450. https://doi.org/10.1007/s11738-012-1087-7
.
Komisi Farmakope Cina, 2005. Farmakope Rakyat ' s Republik
Cina. China Chemical Industry Press, Beijing .
Colaric, M., Veberic, R., Solar, A., Hudina, M., Stampar, F., 2005. Asam fenolat, syr-
ingaldehyde, dan juglone dalam buah di ff kultivar yang keliru dari Juglans regia LJ Agric. Kimia Makanan. 53,
6390 - 6396. https://doi.org/10.1021/jf050721n .
Komite Evaluasi dan Perizinan Divisi Farmakope Jepang
Farmasi dan Keamanan Pangan, 2006. Farmakope Jepang. Biro Kementerian Kesehatan, Perburuhan dan
Kesejahteraan, Tokyo .
Ellnain-Wojtaszek, M., Zgorka, G., 1999. Kromatografi cair kinerja tinggi dan
Kromatografi lapis tipis asam fenolat dari daun Ginkgo biloba L. dikumpulkan selama periode vegetatif. J. Liq.
Kromatogr. Relat. Technol. 22, 1457 - 1471. https: // doi.org/10.1081/JLC-100101744 .
Direktorat Eropa untuk Kualitas Obat, 2008. Schisandrae chinensis fructus.
Farmakope Eropa 6.0. Strasburg .
Flanigan, PM, Niemeyer, ED, 2014. E ff dll dari kultivar pada tingkat fenolik, antosianin
komposisi, dan sifat antioksidan dalam kemangi ungu ( Ocimum basilicum L.). Kimia Makanan. 164, 518 - 526. https://doi.org/10.10
.
Häkkinen, SH, Törrönen, AR, 2000. Isi dari fl avonol dan asam fenolat terpilih dalam
stroberi dan Vaccinium spesies: dalam fl pengaruh kultivar, tempat dan teknik budidaya. Res Makanan. Int. 33,
517 - 524. https://doi.org/10.1016/S0963-9969(00) 00086-7 .
Hancke, JL, Burgos, RA, Ahumada, F., 1999. Schisandra chinensis ( Turcz.) Baill.
Fitoterapia 70, 451 - 471. https://doi.org/10.1016/S0367-326X(99)00102-1 .
Kouakou, TH, Wa ff o-Téguo, P., Kouadio, YJ, Valls, J., Richard, T., Decendit, A.,
Mérillon, J.-M., 2007. Senyawa fenolik dan embriogenesis somatik pada kapas ( Gossypium hirsutum L.). Kultus
Organ Jaringan Sel Tumbuhan. 90, 25 - 29. https://doi.org/10. 1007 / s11240-007-9243-2 .
Krishnaiah, D., Sarbatly, R., Nithyanandam, R., 2011. Tinjauan tentang po antioksidan
potensi jenis tumbuhan obat. Bioprod Makanan. Proses. https://doi.org/10.1016/j. fbp.2010.04.008 .
Kwiecie ń, I., Smolin, J., Beerhues, L., Ekiert, H., 2018. Dampak komposisi media terhadap produksi fl avonoid dalam
kultur tunas yang gelisah dari ketiganya Hypericum perforatum kultivar “ Eliksir "," Helos ” dan “ Topas ". Di Vitr. Sel.
Dev. Biol. - Pabrik 54, 332 - 340 .
Kwiecie ń, I., Szyd ł owska, A., Kawka, B., Beerhues, L., Ekiert, H., 2015. Akumulasi
asam fenolat aktif secara biologis dalam kultur pucuk tiga yang diaduk Hypericum perforatum kultivar: ' Eliksir ',' Helos
' dan ' Topas '. Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan. 123, 273 - 281. https://doi.org/10.1007/s11240-015-0830-3 .
Lux-Endrich, A., Treutter, D., Feucht, W., 2000. Dalam fl pengaruh nutrisi dan karbohidrat
suplai pada komposisi fenol kultur pucuk apel. Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan. 60, 15 - 21. https://doi.org/10.1023/A:
1006406527242 .
Mocan, A., Cri • sebuah, G., Vlase, L., Cri • an, O., Vodnar, DC, Raita, O., Gheldiu, AM, Toiu,
A., Oprean, R., Tilea, I., 2014. Studi komparatif tentang komposisi polifenol, aktivitas antioksidan dan
antimikroba Schisandra chinensis daun dan buah-buahan. Molekul 19, 15162 - 15179. https://doi.org/10.3390/molecules190915162
.
Mocan, A., Schafberg, M., Crisan, G., Rohn, S., 2016a. Penentuan lignan dan
komponen fenolik dari Schisandra chinensis ( Turcz.) Baill. menggunakan HPLC-ESI-ToF-MS dan HPLC-online
TEAC: kontribusi masing-masing komponen untuk aktivitas antioksidan secara keseluruhan dan perbandingan
dengan uji antioksidan tradisional. J. Funct. Makanan 24, 579 - 594. https://doi.org/10.1016/jj ff. 2016.05.007 .
Mocan, A., Zengin, G., Cri ş an, G., Mollica, A., 2016b. Tes enzimatik dan molekuler
studi pemodelan Schisandra chinensis lignan dan fenolat dari ekstrak buah dan daun. J. Penghambat Enzim.
Med. Chem. 6366, 1 - 11. https://doi.org/10.1080/
14756366.2016.1222585 .
Murashige, T., Skoog, F., 1962. Revisi media untuk pertumbuhan cepat dan bioassay dengan
kultur jaringan tembakau. Physiol. Menanam. 15, 473 - 479 .
marga Schisandra: kepentingan, isolasi dan determinasi. J. Chromatogr. B 812, 357 - 371. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.0
.
Özyürek, M., Güçlü, K., Bekta ş Hai ğ lu, B., Apak, R., 2007. Penentuan spektrofotometri
asam askorbat oleh modi tersebut fi ed Metode CUPRAC dengan pemisahan ekstraktif
fl avonoid - Kompleks La (III). Anal. Chim. Acta 588, 88 - 95. https://doi.org/10. 1016 / j.aca.2007.01.078 .
Patel, H., Krishnamurthy, R., 2013. Jurnal farmakognosi dan fitokimia eli
citors dalam kultur jaringan tanaman. J. Pharmacogn. Phyochem. 2, 60 - 65 .
Sebelumnya, RL, Wu, X., Schaich, K., 2005. Metode standar untuk penentuan
kapasitas antioksidan dan fenolat dalam makanan dan suplemen makanan. J. Agric. Kimia Makanan. 53, 4290 - 4302.
https://doi.org/10.1021/jf0502698 .
Procházková, D., Bou š ová, I., Wilhelmová, N., 2011. Prop-
erties dari fl avonoid. Fitoterapia 82, 513 - 523. https://doi.org/10.1016/j. fi tote. 2011.
01.018 .
Saunders, RMK, 2000. Monograf Schisandra (Schisandraceae). Botani Sistematis
Monograf. American Society of Plant Taxonomists, hal.1 - 146 .
Shaitan, I., 2005. Колбасина ЕИ: Актиндия и лимонник ( Aktinidia dan Cina
Anggur Magnolia). Moskow .
Singleton, VL, Orthofer, R., Lamuela-Raventós, RM, 1999. Analisis total fenol dan
substrat oksidasi dan antioksidan lainnya melalui pereaksi Folin-Ciocalteu. Metode Enzymol. 299, 152 - 178. https://doi.org/10.1016
.
Su ł kowska-Ziaja, K., Ma ś lanka, A., Szewczyk, A., Muszy ń ska, B., 2017. Secara fisiologis
A. Szopa, dkk.
senyawa aktif dalam empat spesies Phellinus. Nat. Melecut. Komun. 12, 363 - 366 .
Szopa, A., Dziurka, M., Warzecha, A., Kubica, P., Klimek-Szczykutowicz, M., Ekiert, H.,
2018a. Lignan pro yang ditargetkan fi ling dan anti-in fl sifat ammatory dari Schisandra rubri fl ora dan Schisandra
chinensis ekstrak. Molekul 23, 3103. https://doi.org/10. 3390 / molekul 23123103 .
Szopa, A., Ekiert, H., 2012. In vitro budaya Schisandra chinensis ( Turcz.) Baill. (Cina
magnolia vine) - sumber potensial yang kaya bioteknologi dari asam fenolat yang penting secara terapeutik.
Appl. Biochem. Biotechnol. 166, 1941 - 1948. https://doi.org/10. 1007 / s12010-012-9622-y .
Szopa, A., Ekiert, R., Ekiert, H., 2017a. Pengetahuan terkini tentang Schisandra chinensis ( Turcz.)
Baill. (Anggur magnolia Cina) sebagai spesies tanaman obat: tinjauan tentang komponen bioaktif, sifat
farmakologis, studi analitis dan bioteknologi. Fitokem. Wahyu 16, 195 - 218. https://doi.org/10.1007/s11101-016-9470-4
. 127, 187 - 194. https://doi.org/10.1007/s11240-016-1041-2 .
Szopa, A., Klimek-Szczykutowicz, M., Kokotkiewicz, A., Ma ś lanka, A., Król, A.,
Luczkiewicz, M., Ekiert, H., 2018b. Studi fitokimia dan bioteknologi pada
Schisandra chinensis kultivar Sadova No.1 - tanaman obat utilitas tinggi. Appl. Mikrobiol. Biotechnol. 102,
5105 - 5120. https://doi.org/10.1007/s00253-0188981-x .
Szopa, A., Klimek, M., Ekiert, H., 2016. Anggur magnolia Cina ( Schisandra chinensis) -
kepentingan terapeutik dan kosmetik. Polandia J. Cosmetol. 19, 274 - 284 .
Szopa, A., Kokotkiewicz, A., Bednarz, M., Luczkiewicz, M., Ekiert, H., 2017b. Belajar tentang
akumulasi asam fenolik dan fl avonoids di di ff erent in vitro sistem budaya
70
Jurnal Bioteknologi 305 (2019) 61-70
dari Schisandra chinensis ( Turcz.) Baill. menggunakan metode DAD-HPLC. Fitokem. Lett.
20, 462 - 469. https://doi.org/10.1016/j.phytol.2016.10.016 .
Szopa, A., Kokotkiewicz, A., Król, A., Luczkiewicz, M., Ekiert, H., 2018c. Peningkatan pro-
duksi lignan dibenzocyclooctadiene dalam kultur microshoot yang ditimbulkan
Schisandra chinensis ( Anggur magnolia Cina). Appl. Mikrobiol. Biotechnol. 102, 945 - 959. https://doi.org/10.1007/s00253-017-864
.
Szopa, A., Kokotkiewicz, A., Luczkiewicz, M., Ekiert, H., 2017c. Schisandra lignan pro-
duction diatur oleh di ff jenis bioreaktor yang salah. J. Biotechnol. 247, 11 - 17. https: // doi. org / 10.1016 / j.jbiotec.
2017.02.007 .
Tashackori, H., Shari fi, M., Ahmadian Chashmi, N., Safaie, N., Behmanesh, M., 2016. Induced-di ff perubahan erensial
pada senyawa asam lignan dan fenolat di Album Linum
akar berbulu dengan ekstrak jamur Piriformospora indica. Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan.
Upton, R., Gra ff, A., Jolli ff e, G., Länger, R., Williamson, E., 2011. Farmakope Herbal Amerika: Farmakognosi
Botani - Karakterisasi Mikroskopis Obat Botani. CRC Press .
Organisasi Kesehatan Dunia, 2007. Monograf WHO tentang Tanaman Obat Terpilih, vol. 3
Fructus Schisandrae, Jenewa .
Zhou, Z., Robards, K., Helliwell, S., Blanchard, C., 2004. Distribusi fenolik
asam dalam nasi. Kimia Makanan. 87, 401 - 406. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2003.
12.015 .