PROSEDUR ELISA

Ns. Akub S.Kep., M.Kep

 ELISA
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
• Prinsip dasar Elisa adalah pemakaian enzim
untuk mendeteksi adanya ikatan Antigen-
Antibodi (Ag:Ab)

• Enzim akan merubah (mengkonversi)

substrate yang tidak berwarna (kromogen)
menjadi produk berwarna yang
mengindikasikan adanya ikatan Ag:Ab
 Ab Anti –Ig berlabel
enzim SUBSTRAT
Ag pada berkromogen
Fase padat

PRODUK
berwarna
Gambar 24. Prinsip dasar uji ELISA langsung
 Direct ELISA
• Untuk mendeteksi Ab

Enzim: AK (Alkalin fosfatase) atau HRPO (Horse Raddish

Peroxidase)

Substrate : TMB (Tetra methyl benzidine) atau NPP (p-

nitrophenyl phosphate)
 Ab II berlabel
Ag
enzim
SUBSTRAT
Ab I pada berkromogen
Fase padat
PRODUK
berwarna
Gambar 23. Prinsip dasar (tak langsung)
double antibody sandwich ELISA
 Indirect ELISA (Sandwich ELISA)
• Untuk mendeteksi adanya antigen (Ag)
 ELISA

Antibodi dilapiskan pada dasar sumuran

Bahan yg diperiksa ditambahkan → terjadi

reaksi Ag-Ab

Ditambahkan anti-antibodi ( Mo anti-Ab)

berlabel BIOTIN (biotinylated)

Ditambahkan streptavidin berlabel enzim

Ditambah kromogen → Warna, diukur secara

kolorimetri memakai Elisa-reader
Uji ELISA
Ag dlm serum

SUBSTRAT
BERKROMOGEN

Ag berlabel
Ab pada
enzim PRODUK
Fase padat
berwarna

Gambar 22. Prinsip dasar uji ELISA kompetitif

An example of the indirect and capture ELISA methods.

Fig. 17.16 Methods of ELISA testing.

TERIMA KASIH ATAS
PERHATIAN ANDA