ELISA

Definisi
Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay
(ELISA) adalah suatu
teknik biokimia yang
terutama digunakan
dalam bidang imunologi
untuk mendeteksi
kehadiran antibodi atau
 Pengikatan Spesifik Antigen-
Prins
Antibodi yang di labeli dengan
ip enzim
Mendeteksi adanya antigen /
Tuju
antibodi tertentu
an
Jenis Kualitatif (deteksi antigen
tertentu)
Kuantitatif (Konsentrasi/ kadar
Hasi Berupa optical
antibody density (OD),
tertentu)
l untuk mendapatkannilai cut-
off dalam menentukan hasil
+/ - suatu sampel (kualitatif)
serta untuk membuat kurva
standar untuk mendapatkan
 Elisa
reader

Elisa
reagent

Material and Equipment

Prinsip
Instrumen
 Jenis-jenis ELISA
Place Your Picture Here Place Your Picture Here Place Your Picture Here

Direct Indirect Sandwich Competiti

ve
Direct ELISA
 Direct Elisa

• Direct ELISA merupakan jenis ELISA yang

digunakan untuk mendeteksi dan mengukur
konsentrasi suatu antigen.
• Antigen yang akan dideteksi akan berikatan
langsung (direct) dengan antibodi detector
(antibodi yang telah dilabeli oleh enzim reporter).
• Antibodi yang digunakan pada teknik direct ELISA
berjumlah satu buah.
• Kelebihan dari direct ELISA yaitu Cepat dan tidak
terdapat Cross Reaksi dengan antibodi sekunder.
• Akan tetapi, direct ELISA memiliki kekurangan
yaitu harga pelabelan antibodi primer yang
mahal, tidak ada fleksibilitas pemilihan antibodi
primer, dan sinyal  amplifikasinya sedikit
(Walker & Rapley 2008: 668).
 Kelebihan &
kekurangan Direct
Elisa
Kelebihan direct ELISA Kekurangan direct ELISA

• pengujian cepat karena hanya • amplifikasi signal hanya sedikit

menggunakan satu jenis
antibody • immunoreaktifitas antibodi
kemungkinan akan berkurang
akibat bertaut dengan enzim
• kemungkinan terjadinya
kegagalan akibat reaksi silang • tidak memiliki fleksibilitas dalam
dengan antibodi lain (antibodi pemilihan tautan enzim (label)
sekunder) dapat diminimalisasi pada percobaan yang berbeda
Indirect ELISA
 indirect Elisa
• Indirect ELISA merupakan jenis ELISA yang
digunakan untuk mendeteksi dan mengukur
konsentrasi antigen atau antibodi.
• Teknik tersebut memiliki karakteristik yaitu
antigen tidak menempel langsung pada
antibodi detector (indirect).
• Antigen akan berikatan dengan antibodi lain
terlebih dahulu. Antibodi tersebut kemudian
akan berikatan dengan antibodi yang telah
dilabeli.
• Kelebihan indirect ELISA yaitu memiliki
sensitivitas tinggi dan sinyal amplifikasi yang
tinggi.
• Kekurangan indirect ELISA yaitu
membutuhkan waktu yang lama dan terjadi
cross reaksi.
(Walker & Rapley 2008: 66
 Kelebihan &
kekurangan Indirect
Elisa
Kelebihan indirect ELISA Kekurangan indirect
• antibodi sekunder
ELISA
mudah diperoleh
karena dijual bebas
• pengujian yang relatif lebih
• immunoreaktivitas antibodi primer tidak lama karena menggunakan 2
terpengaruh oleh tautan enzim pada
jenis antibodi sehingga
antibodi sekunder karena dilakukan pada
wadah berbeda membutuhkan waktu dua kali
inkubasi
• tingkat sensitivitas meningkat karena
setiap antibodi primer memiliki beberapa
epitop yang bisa berinteraksi dengan
• Antigen dari sampel harus
antibodi sekunder dimurnikan
Sandwich ELISA
 Sandwich Elisa

• Sandwich ELISA merupakan jenis ELISA yang dapat digunakan

untuk mengukur antigen maupun antibodi,.
• Karakteristik khas dari sandwich ELISA adalah menggunakan
antibodi penangkap atau primer antibodi.
• Antigen yang akan dideteksi dan diukur konsentrasinya
berikatan terlebih dahulu dengan antibodi penangkap. Antigen
akan berikatan kembali dengan antibodi sesuai jenis sandwich
ELISA yang digunakan.
• Sandwich ELISA dibagi menjadi dua jenis yaitu sandwich direct
ELISA (a) & sandwich indirect ELISA (b).
Kelebihan sandwich ELISA

• memiliki spesifitas yang tinggi Sandwich Elisa

dan cocok untuk jenis sampel
yang berupa campuran/tidak
murni karena antigen yang
digunakan tidak perlu
dimurnikan 
Competitive
ELISA
 Competitive Elisa
• ELISA kompetitif atau ELISA pemblok dapat
digunakan untuk mengukur antibodi
maupun antigen
• Prinsip dasar dari teknik ELISA kompetitif
adalah dengan menambahkan suatu
kompetitor ke dalam lubang microtiter/well
• ELISA dapat dilakukan secara kompetitif
langsung (direct competitive) dan
kompetitif tak langsung (indirect
competitive) ELISA.

(Walker & Rapley 2008: 668).

Kelebihan competitive ELISA

• tidak diperlukan purifikasi pada Competitive Elisa

sampel yng mengandung
antibody/antigen, tapi hasil yang
diperoleh tetap memiliki tingkat
sensitivitas tinggi akibat sifat
spesifisitas dari antibodi dan
antigen
Menggunakan Elisa reader dengan Panjang
gelombang tertentu

Perlu homogenisasi sebelum membaca

Nilai validitas selama interpretasi tes:

OD negative control
OD positive control
cut-off value
Jika hasil tidak valid → jangan
menginterpretasi hasil
 Test plate

St St 1 1

2 2

Stand
art Sampl
es
Duplo

Blan Bl Bl
ko

2
5
 ELISA test

Standart Sample Standart Sample

Sebelum stop reaksi Setelah stop reaksi

Result of Elisa Reader : OD (Optical

Density) value
2
6
Calculation of Ag/ Ab concentration

Perhitungan konsentrasi IFN-γ pada sampel:

Nilai OD sampel  konversikan ke persamaan
regresi kurva standart 2
7
 Thank You
Insert the Sub Title of Your Presentation