ENZYME LINKED FLUORESCENT

ASSAY (ELFA)
PRAKTIKUM IMUNOLOGI III

Patricia Gita Naully, S.Si., M. Si

 PRINSIP

Mendeteksi keberadaan antigen/antibodi menggunakan antigen/ antibodi

yang terkonjugasi dengan enzim

Substrat yang digunakan berupa senyawa fluorogenik

Kompleks antigen-antibodi  pendaran warna  fluorometer

 KEUNGGULAN

Dapat mendeteksi antigen

hingga konsentrasi pg

Sederhana, terpercaya, dan

ultrasensitif

100 kali lebih sensitif dari

ELISA atau RIA
 KEUNGGULAN

• ELISA memberikan reaksi positif nonspesifik dengan persentase tinggi,

sedangkan hasil ELFA lebih mendekati hasil PCR.

• Berdasarkan ELISA, terdapat 182 sampel yang positif, sedangkan

berdasarkan ELFA hanya 15% dari hasil tersebut yang terbukti positif.
 KEUNGGULAN DAN KELEMAHAN

• Berdasarkan cost-effectiveness, kebutuhan spesialis, dan waktu

pengulangan, ELFA merupakan metode yang baik untuk mendeteksi
EBV.

• Waktu pendeteksian ELFA 40 menit, IFA 190 menit, EIA dan

Immunoblot 130 menit, dan ICA 20 menit.
 KELEMAHAN

• ELFA tidak terlalu akurat untuk mendeteksi konsentrasi TSH yang

rendah dan tinggi.
TAHAPAN DAN KOMPONEN
 ENZIM - SUBSTRAT

• Enzim Alkaline Phosphatase (AP)

• 4-methylumbelliferyl phosphate

• Enzim Horse Radish Peroxidase (HRP)

• 4-Methyl umbelliferyl phosphate (MUP)
• p-hydroxyphenylacetic acid (PHPA)

• Enzim β-galactosidase
• 4-methylumbelliferyl-β-D-galacto-pyramoside
 PENGUKURAN SINYAL

Microplate buram berwarna hitam atau putih dengan bagian bawah yang
bersih

Fluorometric plate reader melakukan pengukuran dari atas atau bawah

plate

Lebih bagus menggunakan plate hitam agar backgroundnnya rendah

 TROUBLESHOOTING

Photo bleaching 
Photo-quenching 
Overexposure reagen
Dispersi energi 
fluorescent  Perlindungan
Pelabelan ulang
dari cahaya

Background tinggi 
Penggunaan pewarna hijau
 Ganti pewarna
INSTRUMEN BERBASIS ELFA
- VIDAS -
 KEUNGGULAN
• Mendeteksi Salmonella sp.,
Listeria spp, Listeria
monocytogenes, Escherichia coli
O157, Campylobacter sp., dan
Staphylococcal enterotoxins.
• Waktu deteksi yang cepat
• Dapat melakukan 1-60 uji per
jam
• Waktu inkubasi yang fleksibel
• Memungkinkan untuk
melakukan uji dengan
beberapa parameter secara
bersamaan
• Sedikit pemipetan
• Proses dapat dilacak
• Kuat
PRINSIP KERJA

video
CHEMILUMINESCENCE ENZYME
IMMUNOASSAY (CLIA)
PRAKTIKUM IMUNOLOGI III

Patricia Gita Naully, S.Si., M. Si

 PERKEMBANGAN

Generasi 2
berlabel enzim dengan
substrat berupa
Generasi 1 senyawa
chemiluminescent
berlabel senyawa
chemiluminescent
(luminol, isoluminol,
acridinium ester)
PRINSIP

Rekasi luminescent
diukur dalam relative
light units (RLU)
menggunakan
luminometer (λ= 425
nm)
 KEGUNAAN

• Pengukuran antigen dalam: • Diaplikasikan pada:

• Lisat sel • diagnosis klinis
• Plasma • pemantauan lingkungan
• Urin • keamanan pangan
• Saliva • analisis farmasi
• Jaringan
• Sampel medium kultur
CLIA VS ELISA
TAHAPAN DAN KOMPONEN
 ENZIM & SUBSTRAT

Enzim Substrat Enchancer

• AP • luminol • phenols
• HRP • isoluminol • naphthols
• luciferin • aromatic amines
• acridinium ester • benzothiazoles
• polyphenols
TERIMA KASIH