SEMINAR HASIL PENELITIAN

EFEK EKSTRAK ETANOL 70% DAUN Clinacanthus

nutans PADA GAMBARAN HISTOPATOLOGI
JANTUNG TIKUS MODEL DIABETES MELITUS
Oleh :
Firdaus Silahudin Fauzi
NIM 19910020
Dewan Penguji:
Penguji Utama : dr. Ermin Rachmawati, M.Biomed
Ketua Penguji : drg. Anik Listiyana, M.Biomed
Sekretaris Penguji : dr. Nurlaili Susanti, M.Biomed
Anggota Penguji : dr. Doby Indrawan, MMRS. 1
BAB 1 PENDAHULUAN

2
 3
LATAR BELAKANG
DM
(hiperglikemi
)
- 537 juta orang mengidap DM pada 2021,
ROS >>
diperkirakan meningkat menjadi 783 juta
pada 2045. (x) antioksidan
- 19,47 juta kasus terjadi di Indonesia, Stres
peringkat 5 urutan DM global. oksidatif
(IDF, 2022)

Kardiomiopati
- Penyakit kardiovaskular merupakan diabetik
penyebab kematian paling umum pada
penderita DM. - Salah satu bentuk komplikasi kardiovaskular DM yang
(Glovaci, Fan, dan Wong, 2019) sering terjadi adalah kardiomiopati diabetik.
(Salvatore, dkk. 2021)

IDF (2022) “13 Indonesia-diabetes-report.pdf.” Pune: IDF, hal. 1–2. Glovaci, D., Fan, W. dan Wong, N. D. (2019) “Epidemiology of Diabetes Mellitus and Cardiovascular
Disease,”
BPJS Kesehatan (2020) “INFO BPJS Edisi 104,” Jakarta Pusat: 56 BPJS Kesehatan, hal.
 LATAR BELAKANG

- Banyak di temukan di daerah tropis Asia Tenggara

antioksidan seperti Indonesia.
(Azemi, Mokhtar dan Rasool, 2020)

ROS

- Penggunaan tanaman herbal seperti daun Clinacanthus

nutans berpotensi sebagai sumber antioksidan yang
minim efek samping.
(Laha dan Paul, 2019)
Laha, S. dan Paul, S. (2019) “Gymnema sylvestre (Gurmar): A potent herb with anti-diabetic and antioxidant potential,”

Azemi, A. K., Mokhtar, S. S. dan Rasool, A. H. G. (2020) “Clinacanthus nutans Leaves Extract Reverts Endothelial Dysfunction in Type 2 Diabetes Rats by Improving Protein 4
Expression of eNOS,”
 LATAR BELAKANG

Dalam Islam, dasar dalam meneliti terapi herbal sebagai alternative pengobatan merujuk
pada Firman Allah SWT:

Artinya: “Dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya Kami
tumbuhkan di bumi itu pelbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik? [Ash Shu'ara":7].

5
Rumusan Masalah Tujuan

Rumusan masalah umum: Tujuan umum:

Apakah pemberian ekstrak etanol
daun Clinacanthus nutans
berpengaruh terhadap morfologi
jantung pada tikus model diabetes
melitus?
Rumusan masalah khusus:
Apakah pemberian ekstrak etanol
daun Clinacanthus nutans dapat
memperbaiki gambaran
histopatologi otot jantung tikus
model diabetes melitus?
Membuktikan bahwa ekstrak ethanol
daun Clinacanthus nutans berpengaruh
terhadap morfologi jantung tikus
model diabetes melitus.
Tujuan khusus:
Mengetahui efek ekstrak ethanol daun
Clinacanthus nutans dalam
memperbaiki gambaran histopatologi
otot jantung tikus model diabetes
melitus.

6
 MANFAAT PENELITIAN

Manfaat Akademis
1. Memberikan informasi potensi ekstrak ethanol daun Clinacanthus nutans dalam
memperbaiki gambaran histopatologi otot jantung pada tikus model diabetes melitus.
2. Menjadi dasar rujukan bagi penelitian selanjutnya terkait ekstrak ethanol daun
Clinacanthus nutans dalam memperbaiki gambaran histopatologi otot jantung pada
tikus model diabetes melitus.

Manfaat Aplikatif
1. Membantu pengembangan Clinacanthus nutans sebagai obat herbal yang bermanfaat
dalam pencegahan komplikasi jantung pada pasien diabetes melitus. 7
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

8
 DIABETES MELITUS
Pankreas tidak memproduksi cukup insulin, atau tubuh menjadi resisten.

KLASIFIKASI
DIAGNOSIS
1. DM tipe 1
Hasil pemeriksaan glukosa plasma
2. DM tipe 2
puasa (minimal 8 jam) lebih dari 126
3. DM gestasional
mg/dl disertai dengan trias gejala DM.
4. DM tipe lain
(Kemenkes, 2020)
(Perkeni, 2021)

KOMPLIKASI

Meliputi komplikasi akut seperti ketoasidosis diabetic (KAD),

komplikasi makrovaskular seperti PJK, komplikasi mikrovaskular
seperti retinopati, dan komplikasi lain seperti kardiomiopati diabetic
(KMD).
(Papatheodoru dkk., 2018)

PERKENI (2021) Pedoman Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2 Dewasa di Indonesia 2021. (2021). PB PERKENI. 7 ed, Global Initiative for Asthma. 7 ed.
Kemenkes (2020) “Infodatin tetap produktif, cegah, dan atasi Diabetes Melitus 2020,” Pusat Data dan Informasi Kementrian Kesehatan RI. 9
Papatheodorou, K. dkk. (2018) “Complications of Diabetes 2017 Konstantinos,” Journal of Diabetes Research, 2018, Arti, hal. 4.
 KARDIOMIOPATI DIABETIK

Perubahan structural dan fungsional otot jantung pada pasien diabetes melitus.

Peningkatan
Diabetes Kerusakan
radikal bebas Stres oksidatif
melitus (ROS) kardiomiosit

Terdapat tiga fase:

- Stase awal  kerusakan tingkat molekuler seperti apoptosis dan nekrosis,

asimtomatik.
- Stase intermediet  hipertrofi ventrikel kiri, disfungsi diastolic.
- Stase akhir  peningkatan massa dan ketebalan ventrikel kiri, disfungsi sistolik dan
diastolic.

Tan, Y. dkk. (2020) “Mechanisms of diabetic cardiomyopathy and potential therapeutic strategies: preclinical and clinical evidence,” 10
Murtaza, G. et al. (2019) “Diabetic cardiomyopathy - A comprehensive updated review,” Progress in Cardiovascular Diseases, 62(4), hal. 315–326.
 HISTOPATOLOGI KARDIOMIOPATI DIABETIK

a b.
. normal (a), gambaran sel otot jantung kardiomiopati diabetik yang mengalami
Gambaran sel otot jantung
degenerasi (b), ditandai dengan adanya degenerasi sitoplasma (area segi empat) dan inti piknotik (anak panah)

Al-Rasheed, Nawal M. dkk. (2017) “Simvastatin Ameliorates Diabetic Cardiomyopathy by Attenuating Oxidative Stress and Inflammation in Rats,” 11
 CLINACANTHUS NUTANS

Taksonomi

Kingdom : Plantae;
- Clinacanthus nutans (Burm. f.) Lindau, banyak digunakan di
Filum : Magnoliophyta;
Indonesia sebagai obat tradisional diabetes dan peradangan.
Kandungan fitokimia sebagai antioksidan menekan stress oksidatif.
Kelas : Magnoliopsida;
(Abdullah dan Kasim, 2017)
Subkelas : Asteridae;

Pesanan : Lamiales;

Keluarga : Acanthaceae;

Genus : Clinacanthus Lindau;

Spesies : C. nutans (Burm. f.)

Alam, A. dkk. (2016) “Clinacanthus nutans: A review of the medicinal uses, pharmacology and phytochemistry,” Lindau 12
Abdullah dan Kasim, K. (2017) “In-Vitro Antidiabetic Activity of Clinacanthus nutans Extracts,”
KERANGKA TEORI

13
BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN
HIPOTESIS

14
KERANGKA KONSEP

15
 HIPOTESIS

H0
• Tidak terdapat pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Clinacanthus
nutans terhadap morfologi jantung tikus model diabetes melitus.

H1
• Pemberian ekstrak etanol daun Clinacanthus nutans dapat memperbaiki
gambaran histopatologi otot jantung tikus model diabetes melitus.

16
BAB 4 METODE PENELITIAN

17
 DESAIN PENELITIAN

- Desain Penelitian
• True experimental
- Variabel Penelitian
• Variabel Bebas : Dosis ekstrak etanol daun Clinacanthus
nutans
• Variabel Terikat : Gambaran histologi preparat jantung
tikus model diabetes melitus.
• Variabel Perancu : Stres, kondisi kandang, sterilitas pakan,
air minum, dan sanitasi.
18
 WAKTU DAN TEMPAT PENELITIAN

Waktu
• Mei – Oktober 2022
Lokasi
 Materia Medica Batu, untuk determinasi tumbuhan C. nutans.
 Laboratorium Fitokimia Prodi Farmasi UIN Malang, untuk dilakukan ekstraksi daun C. nutans.
 Laboratorium Hewan Coba Prodi Pendidikan Dokter UIN Malang, untuk dilakukan
pemeliharaan, pembuatan hewan coba tikus model diabetes melitus, dan pengambilan organ
jantung.
 Rumah Sakit dr. Sutomo Surabaya, untuk dilakukan pembuatan preparat jantung tikus.
 Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Maulana Malik Ibrahim
Malang, untuk pengamatan preparat jantung.

19
 POPULASI DAN SAMPEL PENE LITIAN

• Tikus Rattus novergicus galur Wistar yang

Po
pul memenuhi kriteria inklusi.
asi
• Menggunakan rumus Lemeshow (1997) = 6 +
Sa
mp (faktor koreksi 20%) = 8 ekor tikus per kelompok.
el

Kelompok kontrol Kelompok Kelompok Kelompok

(K) perlakuan 1 (P1) perlakuan 2 (P2) perlakuan 3 (P3)
Kelompok tikus model Kelompok tikus model Kelompok tikus model Kelompok tikus model
DM. DM yang diberikan DM yang diberikan DM yang diberikan
ekstrak CN dosis 100 ekstrak CN dengan ekstrak CN dengan
mg/kgBB. dosis 200 mg/kgBB. dosis 400 mg/kgBB.

20
 KARAKTERISTIK SAMPEL

Kriteria Inklusi Kriteria Eksklusi

1.Tikus putih galur wistar dengan 1.Tikus yang tidak terdiagnosis

jenis kelamin jantan. DM.
2.Usia sekitar ± 3 bulan. 2.Tikus mati pada saat perlakuan.
3.Berat badan ± 200 gram.
4.Tikus sehat, tidak cacat, dan
bergerak aktif.
5.Terdiagnosis DM dengan GDP
> 200 mg/dL pada hari ke-7
setelah induksi STZ.

21
 DEFINISI OPERASIONAL

No Variabel Definisi Operasional Alat Ukur Satuan Skala

1 Ekstrak Etanol Daun
Clinacanthus nutans
Daun Clinacanthus nutans diekstraksi Syringe dan neraca mg/kgBB Rasio
menggunakan metode UAE dengan pelarut analitik
etanol 70%, kemudian diberikan dosis 100,
200 dan 400 mg/kgBB tiap sonde setiap
hari selama 4 minggu.

2 Tikus model diabetes Tikus Rattus novergicus strain Wistar Glukometer mg/dL Rasio
melitus yang diinjeksi STZ intraperitoneal dengan
dosis 45 mg/kgBB kemudian didiagnosis
DM apabila GDP > 200 pada hari ketujuh.

3 Kelainan morfologi Preparat jantung tikus yang diberi Mikroskop cahaya - Interval
jantung pewarnaan HE dan pengamatan Olympus BX51
mikroskopis dengan pembesaran 400x.

4 STZ Agen induksi diabetes melitus dengan Syringe mg/kgBB Rasio

injeksi 45 mg/kgBB intraperitoneal.

22
 PEMBUATAN EKSTRAK DAUN CN

Pembuatan Larutan
Determinasi Preparasi Ekstraksi UAE Ekstrak Daun CN
untuk Sonde
1.Daun CN 1.Daun dicuci dan 1.1g simplisia daun 1.Pembuatan Sediaan
dideterminasi di dikeringkan. CN + etanol 70% 10 NA CMC 0,5%.
Materia Medika 2.Dihaluskan dan ml. 2.Persiapan sediaan
Batu. diayak. 2.Disonifikasi ke larutan ekstrak
3.Dianalisis kadar air. dalam UAE dengan kedalam gelas baker.
frekuensi 42 kHz 3.Sonde sesuai berat
selama 10-30 menit. badan tikus.
3.Filtrat dimasukkan
ke dalam rotatory
evaporator.
4.Dioven pada suhu
400C.
23
 PERLAKUAN HEWAN COBA

Pengambilan dan
Perawatan Induksi DM Perlakuan
preparasi sampel
Tikus diaklimatisasi 1.Tikus dipuasakan 8- 1.Dilakukan 1.Terminasi tikus
selama 7 hari dengan 10 jam sebelum randomisasi tikus dilakukan dengan
12 jam siklus gelap injeksi STZ. menjadi 5 kelompok injeksi ketamine
terang. 2.STZ diinjeksi dengan perlakuan. intramuscular.
1.Pakan standar 40g per dosis 45 mg/kgBB 2.Tikus diperlakukan 2.Tikus difiksasi di
ekor setiap hari. yang dilarutkan sesuai pembagian papan datar dan
2.Minum menggunakan dengan buffer sitrat. kelompok selama 28 dibedah.
air. 3.Injeksi dilakukan di hari. 3.Organ jantung
3.Kandang dibersihkan abdomen secara diambil dan dicuci
setiap hari. intraperitoneal. dengan NaCl 0,9%.
4.Pengecekan BB dan 4.7 hari kemudian 4.Sampel difiksasi
GDP. dilakukan pengecekan dalam NBF 10%
BB dan GDP. sebelum dikirim ke
5.Diagnosis DM jika lab. RS Soetomo.
GD > 200 mg/dL.

24
 PENGAMATAN PREPARAT HISTOLOGI

- Untuk melakukan perhitungan kardiomiosit yang mengalami kerusakan

digunakan perbesaran 400 kali. Perhitungan dilakukan di lima lapang
pandang berbeda dan diambil searah jarum jam untuk tiap sampelnya. Hasil
persentase kelima lapang pandang dirata-rata.

25
Barış, V. Ö. et al. (2019) “Protective effect of taurine against doxorubicin-induced cardiotoxicity in rats: echocardiographical and histological findings,”
 ALUR PENELITIAN

Aklimatisasi tikus
Injeksi STZ
Pengajuan etik putih selama 7
intraperitoneal
hari

Diagnosis DM Pembedahan dan

Perlakuan sesuai
ditegakkan jika pengambilan
kelompok
GDP > 200 mg/dL organ jantung

Pengambilan data
Pembuatan
pengamatan Analisis Data
preparat
preparat jantung

26
 ANALISIS DATA

• Menggunakan statistic deskriptif hasil gambaran

uni preparat.
var
iat
• Normalitas dan homogen (p>0,05)  one way ANOVA.
bif • Normalitas dan homogen (p<0,05)  kruskal walis.
ari • Dilanjutkan dengan uji komparasi Post Hoc.
at

27
 BAB 5 & 6
HASIL DAN PEMBAHASAN

28
 BB DAN GDP KELOMPOK
NORMAL

(a) Perbandingan BB H-7 dengan H0

• 188,33 ± 4,97 : 190,83 ± 4,58
• Sig 2-tailed 0,146 (p < 0,05) [Pair T test]
(b) Perbandingan GDP H-7 dengan H0
• 93,83 ± 3,43 : 95,50 ± 2,35
29
• Sig 2-tailed 0,164 (p < 0,05) [Pair T test]
 BB DAN GDP KELOMPOK
DIABETES MELITUS

Rendahnya kadar insulin menyebabkan

metabolism glukosa terganggu,
sehingga proses penyerapan dan
penyimpanan makanan tidak
maksimal.
(Petersmann et al., 2019)

(a) Perbandingan BB H-7 dengan H0

• 201,63 ± 25,04 : 191,67 ± 21,13
• Sig 2-tailed 0,004 (p < 0,05) [Pair T test]
(b) Perbandingan GDP H-7 dengan H0
• 85,33 ± 16,87 : 454,58 ± 87,61
• Asymp. Sig. (2-tailed) 0,000 (p < 0,05) [Wilcoxon test] 30
 PERSENTASE DEGENERASI
KARDIOMIOSIT

• K1-K2
Injeksi STZ menyebabkan DM sehingga terjadi SO yang dapat
merusak jaringan miokardium (Ighodaro, 2018).
• K2-P1,P2,P3
Gambar 1
Terdapat perbaikan jaringan secara tidak langsung dengan
Tabel 1
menekan SO oleh efek antioksidan CN (Zuraida et al., 2017).
P • Antar Perlakuan
Kelompok Hasil
K1 K2 P1 P2 P3
Karena tingkat efektifitas antar dosis yang serupa, maka
K1 61,58% 3,65 - 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* penggunaan praktis disarankan untuk memilih dosis yang
K2 85,52% 3,10 - 0,000* 0,000* 0,001*
terendah, sehingga efek toksisitas yang ditimbulkan minimal
(Manoj et al., 2020).
P1 72,73% 3,74 - 1,000 0,656
• K1-P1,P2,P3
P2 72,67% 4,79 - 0,639
Perbaikan yang ditimbulkan belum dapat menyerupai seperti
P3 75,74% 3,63 -
kondisi ketika masih sehat.
Ighodaro, O. M. (2018) “Molecular pathways associated with oxidative stress in diabetes mellitus,” Biomedicine and Pharmacotherapy
Zuraida, Z. et al. (2017) “FENOL, FLAVONOID, DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA EKSTRAK KULIT BATANG PULAI 31
Manoj, K. M. et al. (2020) “Acute toxicity of cyanide in aerobic respiration: Theoretical and experimental support for murburn explanation,”
 KETERBATASAN PENELITIAN

• Masih terdapat bagian lain dari jantung yang dapat diamati selain

miokardium.

• Penanda kerusakan jaringan otot jantung tidak hanya dari pengamatan

histopatologi.

32
 BAB 7
KESIMPULAN DAN SARAN

33
 KESIPULAN SARAN

1. Perlu dilakukan penelitian lanjutan

Berdasarkan hasil penelitian,
dengan mengamati struktur jantung
penulis dapat menyimpulkan lain seperti endokardium,
perikardium, atau infalamasi
bahwa pemberian ekstrak etanol
interstisial.
70% daun Clinacanthus nutans
2. Perlu dilakukan penelitian lanjutan
berpengaruh signifikan terhadap
dengan menggunakan penanda
perbaikan gambaran kerusakan akibat stress oksidatif
selain pengamatan histopatologi.
histopatologi otot jantung tikus
model diabetes melitus.

34
TERIMA KASIH

35