TIROID

By. KELOMPOK 7
 Our Team
1 • ASEP S MAULID 4 • JEFRIYANTO LADO
(E623001) PURA (EF23003)

2 • ENI RUSTINI
(EF23002)
5 • SINTA SEPTIANI
(E523003)

3 • NITA PERMATASARI
6 • EMA SETIAWATI
(EF23001)
(E523002)

7 • GINA FITRI L
( )
 Penyakit/Kelainan
Tiroid
Penyakit tiroid adalah masalah kesehatan yang dipicu oleh
kelainan bentuk dan fungsi kelenjar tiroid.

Kelainan tiroid memberikan pengaruh ke hampir seluruh tubuh

karena hormon tiroid mempengaruhi banyak organ
 H o rm o n
e ri k s a a n
P e m
d
n
i
d a
o S H
Tir 3 , T 4 , T
k s a a n T n g
p e m e r i r k e m b a
e li p u t i u la i b e a l
t i ro i d m t i r o i d m p a d a a w
o r m o n o r m o n ( R I A ) ,
k s a a n h h a d a p h o a s s a y IR M A )
e m e r i a n t e r i m m u n s s a y (
P m e r i k sa i k r a d i o m e t r i c a
f T 4 . P e a n t e k n o r a d i o l i n k e d
k e n a l k i m m u n z y m e -
d i p e r e n g a n A ) , e n a s s a y
se te la h - a n , d i i k u t i d
o a s s a y ( E L I S
y m e i m m u n o
A ).
n 1 9 7 0 m m u n a n e n z ( E C L I
t a h u i n k e d i L F A ) d t a s s a y
z y m e - l s a y ( E n e s c e n n y a n g
en e n c e a s m i l u m i d i n g k a
l u o r e s c c t ro c h e a d i b a n
m u n o f a r u e l e i n g p e k
im n g t e r b a n g p a l
s e rt a y a t o d e y
e
( E IA ), A m e n j a d i m
t e r d a h u l u .
a E C L I
C a r
 FAAL
TIROID
Kelenjar tiroid terletak di daerah leher
depan, di depan trakea, tepat di bawah
laring, berwarna merah coklat dengan 2
lobus yang dihubungkan oleh isthmus,
bentuknya menyerupai kupu-kupu.
 Jaringa
n Sasar Pengaruh Mekanisme
an

Jantun Meningkatkan jumlah dan

l k u b u s Kronotropik
e l e p i t e g afinitas reseptor B- adrenergik
a s s e l -s t u n g -
r d i ri a t k k a n
i r o i d t e m b e n t u a n Meningkatkan respon terhadap katekol
j a r T n m e r u p a k
Ke l e n n g t e r s u s u
l , y a n g m e
j a r
Inotropik amin Meningkatkan produksi alfa-
y a o l i k e e l e n miosin rantai berat
r e nda h c i l , f o l i k e l - f
a n s e k r e s i k
t u n g k e i o n a l d
k a n , f u n g s Jaringa
u k t u r a l h n Adip Katabolik Merangsang lipolisis
t r o l e
uni t s d i s e k re s i osa
i d . a y a n g = T 4
tir o o n u t a m r o x i n e
h o r m i n ( T h y a n
2 je n i s T i ro k s ) d Otot Katabolik Meningkatkan pemecahan protein
A d a y a i t u h y r o n i n
t i r o i d , a i o d o t , 5 , 3 ’ -
e l e n j a r t e tr L -3 Mempromosi pertumbuhan tulang nor
k ’ ,5 ’ - = Tulan Perkembangan da
L -3,5,3 ( T 3
b o l i s m e g n metabolic
mal Mempercepat pertukaran (turnove
= ro n i n e r m e t a r) tulang
o d o t h y e n g a t u s e l ,
T r i i n e ) . d a l a h m s e m u a
t h y r o n ai T 3 a d a l a m h i Sistem Mempromosi perkembangan otak nor
o
tFriuinogdsi uta m e i n d i e n g a r u Perkembangan
n p r o t m e m p saraf mal
r a t d a d a p a t k u l e r ,
a r b o h i d h a n T 3 d i o v a s
k p e r u ba a k a r
i t u e r u t a m Usus Metabolik Meningkatkan laju serapan karbohidrat
k a re n a a n t u b u h , t
u a o rg o d u k s i .
se m a n r e p r Lipopr
Metabolik
Merangsang pembentukan reseptor LD
i m u n d otein L
sa r a f ,
Pengaturan Hormon Tiroid (Harun
Yahya, 2008)
Mekanisme umpan balik (Harun Yahya,
2008)
 Hi p o t i r o
Hipotiro
i d s ub kl
id KELAI
Hipotiro in is
p e r t i r o i d
i d kl i n i s H i

NAN
/overt

P e mb e s
k e l en j a
a ra n K e l
i
a
d
i n
t
a
a
n
n p
h
a
o
d
r m
i s e
o n
r tTIROI
a i
r t i ro i d t i ro n k l i n i s
g u a
g an g
(e u t i r o i d )
D

Hipotiroid
• Hipotiroid subklinis didefinisikan sebagai
keadaan dengan kadar TSH meningkat
ringan dan kadar fT3 dan T4 normal
disertai dengan sedikit/tanpa gejala klinis.
• Hipotiroid klinis/overt atau tiroid yang
kurang aktif merupakan kelainan klinis
yang paling umum, didefinisikan sebagai
kadar TSH tinggi dan fT4 rendah dalam
serum.
KELAINAN
TIROID
Hipertiroid
Hipertiroid juga dapat dibedakan antara klinis
jelas (overt) dan klinis tidak jelas (subklinis).
Hipertiroid klinis atau tirotoksikosis ditandai
dengan peningkatan kadar T3 dan T4 dan
penurunan kadar TSH serum.

Pembesaran
Kelenjar Tiroid
Pembesaran kelenjar tiroid (goiter) dapat
merata (difuse) atau nodular, tunggal atau
banyak (multinodular). Goiter bisaanya
disebakan oleh rangsangan berkepanjangan
oleh TSH atau zat serupa TSH (TSH-like
agent) baik pada hipotiroid maupun hipertiroid
dan dapat pula pada keadaan eutiroid.
KELAINAN
TIROID
Eutiroid
Kelainan kadar hormon tiroid dapat dijumpai
pada keadaan klinis normal (eutiroid).
Penyebabnya adalah keadaan fisiologis normal
atau terganggu atau oleh pengaruh obat-obatan.
 TEKNIK
Radioimmu enzyme
noas PEMERIKSAAN
say (RIA) immunoassay
TIROID (EIA)

PEM
ERIK i
r ad i omet HOR SAAN e m il u m
I mmu no MON electroch
ric assay TIRO nes-
Pe merik
ID
(IRMA) t i ro i d
s aan h
ormo ce n t a ssa y
peme me l i p n
(ECLIA)
riksaa uti
n T3,
dan fT T4, TSH
ed
4. enzyme
enzym e - l in k linked
immuno
n o a ssa y fluoresc
immu e
nt assay
(E L I SA )
(ELFA)
 PEMERIKSAAN T3
Hormon Thyroxine (T4) dan 3,5,3’ Pemeriksaan T3 juga dapat digunakan untuk
Triiodothyronine (T3) berada dalam sirkulasi monitoring pasien hipertiroid yang sedang
darah, sebagian besar terikat pada protein mendapatkan terapi maupun pasien yang telah
plasma Thyroxine Binding Globuline (TBG). berhenti menggunakan obat anti tiroid, dan
Konsentrasi T3 jauh lebih kecil daripada T4, sangat bermanfaat untuk membedakan pasien
namun memiliki potensi metabolik yang lebih eutiroid dan hipertiroid.
besar. Pengukuran T3 merupakan faktor penting
penyakit tiroid. Pada wanita, kadar T3 akan meningkat selama
untuk mendiagnosis
kehamilan, terapi estrogen, dan pemakaian
Pengukurannya dapat menentukan adanya
kontrasepsi hormonal. Jika peningkatan T3
varian pada kelainan hipertiroid pada pasien
diikuti oleh peningkatan TBG dan T4, maka
tirotoksik dengan peningkatan kadar T3 namun
perubahan ini tidak menggambarkan adanya
T4 nya normal. Peningkatan T3 tanpa adanya
kelainan tiroid.
peningkatan T4 kebanyakan merupakan gejala
awal dari tirotoksikosis rekuren pada pasien
yang telah mendapat terapi.
 METODE ECLIA
T3
• Prinsip • Prosedur
Pemeriksaan
Pemeriksaan T3 metode ECLIA pemeriksaan
• Inkubasi pertama: 15 µl sampel, antibodi spesifik T3
menggunakan prinsip kompetitif dengan dilabel dengan komplek ruthenium
waktu pemeriksaan selama 18 menit. • Inkubasi kedua: setelah ditambahkan T3 berlabel biotin
dan mikropartikel yang dilapisi streptavidin, komplek
yang terbentuk berikatan dengan fase solid melalui
interaksi biotin dengan streptavidin.
R e n t an g n i l a • Campuran reaksi diaspirasi dalam cell pengukur dimana
t i d a k i u n tu k T 3
a i kny a ad al a h 1 . 3 – mikropartikel secara magnetic ditangkap pada
s e b 3 . 1 n m o l/ L
S am p el a p as i e n y a ng
at au permukaan elektroda. Substansi yang tidak berikatan
p a d 0 . 8 -2 . 0
d i amb i l t er a p i d en g a n
n g / mL . dibuang melalui Procell. Aplikasi voltase (tegangan)
a p a t k a n > b at as
m en d g g i ( d e t e k si pada elektroda kemudian menginduksi emisi
o s i s t in t eren d ah a d
d an al ah 0 . 3 0 0
b io tin . P en g g u n a
n m o l / L a t au 0 chemiluminescent yang diukur oleh photomultiplier.
/ h a r i ) u g a . 1 9 5 n g / mL .
5 m g j • Hasil ditetapkan melalui kurva kalibrasi yang merupakan
o d a r o n e n a n
a mi a n pe n u r u instrument yang dihasilkan secara khusus oleh kalibrasi
y e b a b k
m e n 2 titik dan master kurva dihasilkan melalui reagen
a s i l T 3 .
p ad a h barcode.
 METODE ELFA
• Prinsip
Pemeriksaan
Pengujian T3 metode ELFA menggunakan
prinsip kompetitif dengan waktu
Pemeriksaan 40 menit. Sampel diambil dan
di transfer ke dalam SPR yang
mengandung antigen T3 berlabel fosfatase
alkalin ( conjugate). Kompetisi terjadi
antara antigen sampel dan antigen berlabel
untuk anti bodi T3 yang melapisi bagian
dalam SPR. Kemudian ditambahkan
substrat 4-methyl umbelliferyl fosfat,
enzim akan mengkatalisis reaksi hidrolisis
substrat menjadi 4-methyl-umbelliferon
sebagai produk fluoresen dan di baca pada
panjang gelombang 450 nm.
T3
• Prosedur
pemeriksaan
• Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke
temperatur ruangan paling tidak 30 menit.
• Gunakan satu T3 dan satu strip SPR T3 untuk setiap
sampel
• Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing
sebanyak 100 µl
• Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
• Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis
oleh alat dalam waktu kira – kira 40 menit.
• Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip
reagen dari alat.
METODE ELFA
T3
 METODE EIA
T3
• Prinsip
Pemeriksaan

Antibodi kedua (gout anti-mouse IgG) dilekatkan pada microwells. Serum pasien, monoklonal antibodi anti
T3 dari tikus dan T3 conjugated dengan horseradish peroxidase ditambahkan ke dalam microwells. Selama
inkubasi, anti T3 antibodi tikus akan terikat pada pada antibodi kedua dalam wells, dan T3 dan conjugated
T3 berkompetisi untuk berikatan dengan antibodi anti T3. Setelah inkubasi 60 menit pada suhu kamar, wells
dicuci 5 kali dengan air untuk menghilangkan konjugat T3 yang tidak terikat. Kemudian ditambahan larutan
substrat TMB dan diinkubasi selama 20 menit, sehingga timbul warna biru. Pembentukan warna biru
dihentikan dengan menambahkan stop solution dan absorbans diukur secara spektrofotometrik pada 450 nm.
Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan jumlah enzim yang ada dan berbanding terbalik dengan
jumlah T3 yang tak berlabel, selanjutnya kadar T3 dalam sampel dapat dihitung berdasarkan pemeriksaan
standar dengan cara yang sama.
 METODE EIA
T3
• Prosedur
pemeriksaan
• Siapkan microwells sesuai jumlah sampel
• Masukkan 50 µL standar, sampel dan kontrol pada wells yang sesuai
• Tambahkan 50 µL reagen antiodi dalam tiap well. Campur hingga rata selama 30 detik
• Tambahkan 100 µL working conjugate reagent pada tiap well. Campur hingga rata selama 30
detik.
• Inkubasi pada suhu kamar selama 60 menit.
• Buang campuran inkubasi dengan cepat.
• Cuci dan bilas 5 kali dengan distilled atau deionized water.
• Hilangkan sisa air dengan absorbent paper.
• Tambahkan 100 µL TMB substrate solution pada tiap well, campur selama 10 detik.
• Inkubasi pada suhu kamar selama 20 menit
• Hentikan reaksi dengan menambahkan 100 µL stop solution pada tiap well.
• Campur selama 30 detik
• OD dibaca pada 450 nm dengan microwell reader dalam 15 menit.
 METODE EIA
• Penghitungan hasil
• Hitung rata-rata absorbans (A450)
untuk tiap set standar, control dan
sampel.
• Buat kurva standar dengan meletakkan
mean absorbans yang diperoleh untuk
tiap standar terhadap konsentrasinya
dalam ng/mL pada kertas gambar
linear, obsorbans pada garis vertikal
(sumbu y) dan konsentrasi pada garis
horizontal (sumbu x)
• Konsentrasi T3 dalam ng/mL
ditentukan dengan memasukkan nilai
absorbans tiap sampel ke dalam kurva
standar.
T3
• Keterbatasan
• prosedur
Hasil yang benar dan akurat diperoleh jika
prosedur pemeriksaan dilakukan dengan
pemahaman penuh sesuai instruksi yang ada.
• Prosedur pencucian sangat penting. Pencucian
yang tidak benar akan menghasilkan presisi
yang buruk dan pembacaan absorbans yang
tinggi palsu.
• Sampel serum yang lipemik, hemolisis atau
keruh tidak dapat diperiksa.
• Hasil yang diperoleh harus digunakan bersama
dengan prosedur diagnosis yang lain dan
informasi yang diperoleh klinisi.
 PEMERIKSAAN T4
L-Thyroxine (T4) merupakan hormon yang disintesis dan disimpan dalam kelenjar tiroid. Proses
pemecahan proteolisis Thyroglobulin akan melepaskan T4 ke dalam aliran darah. Lebih dari 99%
T4 terikat pada 3 protein plasma secara reversibel, yaitu : Thyroxine binding globulin (TBG)
70%, thyroxine binding pre albumin (TBPA) 20% dan albumin 10%. Sekitar 0,03% T4 yang
berada dalam keadaan tidak terikat.
Penyakit yang mempengaruhi fungsi tiroid dapat menimbulkan gejala yang sangat bervariasi.
Pengukuran T4 total dengan immunoassay merupakan metode skrining yang paling
memungkinkan dan dapat dipercaya untuk mengetahui adanya gangguan tiroid pada pasien.
Peningkatan kadar T4 ditemukan pada hipertiroidisme karena Grave’s disease dan Plummer’s
disease pada akut dan subakut tiroiditis. Kadar T4 yang rendah berhubungan dengan
hipotiroidisme kongenital, myxedema, tiroiditis kronis (Hashimoto’s disease) dan beberapa
kelainan genetik.
 METODE ECLIA
T4
• Prinsip • Prosedur
Pemeriksaan
Pemeriksaan T4 metode ECLIA pemeriksaan
• inkubasi pertama: 15 ul sampel, dan antibodi spesifik T4
menggunakan prinsip kompetitif dengan yang dilabel dengan komplek ruthenium
waktu Pemeriksaan selama 18 menit. • Inkubasi kedua: setelah ditambahkan biotin dan
mikropartikel yang dilapisi streptavidin, komplek yang
terbentuk berikatan dengan fase solid melalui interaksi
biotin dengan streptavidin.
R e n t an g n i l a • Campuran reaksi diaspirasi dalam cell pengukur dimana
t i d a k i u n tu k T 4
a i kny a ad al a h 6 4 - mikropartikel secara magnetic ditangkap pada
s e b 1 6 4 n m o l/ L
S am p el a p as i e n y a ng
a t a u 4 . 8 -1 2 permukaan elektroda. Substansi yang tidak berikatan
p a d .7 μg/mL.
d i amb i l t er a p i d en g a n dibuang melalui Procell. Aplikasi voltase (tegangan)
a p a t k a n > b at as
m en d g g i ( d e t e k si pada elektroda kemudian menginduksi emisi
o s i s t in t eren d ah a d al ah
d
b io tin n m o l / L a t au 0 5 .4 0 chemiluminescent yang diukur oleh photomultiplier.
g / h a r i ). . 4 2 0 n g / mL .
5m • Hasil ditetapkan melalui kurva kalibrasi yang merupakan
instrument yang dihasilkan secara khusus oleh kalibrasi
2 titik dan master kurva dihasilkan melalui reagen
barcode.
 METODE ELFA
• Prinsip
Pemeriksaan
Pengujian T4 metode ELFA menggunakan
prinsip kompetitif dengan waktu
pemeriksaan 40 menit. Sampel diambil dan
di transfer ke dalam SPR yang
mengandung antigen T4 berlabel fosfatase
alkalin ( conjugate). Kompetisi terjadi
antara antigen sampel dan antigen berlabel
untuk antibodi T3 yang melapisi bagian
dalam SPR. Kemudian ditambahkan
substrat 4-methyl umbelliferyl fosfat,
enzim akan mengkatalisis reaksi hidrolisis
substrat menjadi 4-methyl-umbelliferon
sebagai produk fluoresen dan di baca pada
panjang gelombang 450 nm.
T4
• Prosedur
pemeriksaan
• Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke
temperatur ruangan paling tidak 30 menit.
• Gunakan satu T4 dan satu strip SPR T4 untuk setiap
sampel
• Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing
sebanyak 200 µl
• Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
• Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis
oleh alat dalam waktu kira – kira 40 menit.
• Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip
reagen dari alat.
METODE ELFA
T4
 METODE EIA
T4
• Prinsip
Pemeriksaan

Antibodi anti T4 dilekatkan pada microtiter wells. Serum pasien dan T4 yang telah dilabel dengan
horseradish peroxidase ditambahkan ke dalam microtiter wells. Selama inkubasi, T4 dan T4 yang telah
dilabel enzim akan berkompetisi untuk berikatan dengan dengan antibodi anti T4. Setelah inkubasi selama
60 menit pada suhu kamar, wells dicuci 5 kali dengan air untuk menghilangkan T4 berlabel enzim yang tidak
terikat. Larutan substrat TMB ditambahkan dan diinkubasi selama 20 menit, sehingga terbentuk warna biru.
Pembentukan warna biru dihentikan dengan menambahkan stop solution dan absorbans diukur secara
spektrofotometrik pada 450 nm. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan jumlah enzim yang ada
dan berbanding terbalik dengan jumlah T4 yang tak berlabel, selanjutnya kadar T4 dalam sampel dapat
dihitung berdasarkan pemeriksaan standar dengan cara yang sama.
 METODE EIA
T4
• Prosedur
pemeriksaan
• Siapkan microwells sesuai jumlah sampel.
• Masukkan 25 µL standar, sampel dan kontrol pada wells yang sesuai
• Tambahkan 100 µL working conjugate reagen dalam tiap well.
• Campur hingga rata selama 30 detik
• Inkubasi pada suhu kamar selama 60 menit
• Buang campuran inkubasi dengan cepat.
• Cuci dan bilas 5 kali dengan distilled atau deionized water.
• Hilangkan sisa air dengan absorbent paper.
• Tambahkan 100 µL TMB substrate solution pada tiap well, campur selama 10 detik.
• Inkubasi pada suhu kamar selama 20 menit
• Hentikan reaksi dengan menambahkan 100 µL stop solution pada tiap well.
• Campur hingga rata selama 30 detik
• Absorbans dibaca pada 450 nm dengan microwell reader dalam 15 menit.
 METODE EIA
• Penghitungan hasil
• Hitung rata-rata absorbans (A450)
untuk tiap set standar, kontrol dan
sampel.
• Buat kurva standar dengan meletakkan
mean absorbans yang diperoleh untuk
tiap standar terhadap konsentrasinya
dalam ng/mL pada kertas gambar
linear, absorbans pada garis vertikal
(sumbu y) dan konsentrasi pada garis
horizontal (sumbu x)
• Konsentrasi T4 dalam ng/mL
ditentukan dengan memasukkan nilai
absorbans tiap sampel ke dalam kurva
standar.
T4
• Keterbatasan
• prosedur
Hasil yang benar dan akurat diperoleh jika
prosedur pemeriksaan dilakukan dengan
pemahaman penuh sesuai instruksi yang ada.
• Prosedur pencucian sangat penting. Pencucian
yang tidak benar akan menghasilkan presisi
yang buruk dan pembacaan absorbans yang
tinggi palsu.
• Hasil yang diperoleh harus digunakan bersama
dengan prosedur diagnosis yang lain dan
informasi yang diperoleh oleh klinisi.
 PEMERIKSAAN TSH
Pemeriksaan kadar TSH plasma atau serum merupakan metode yang sensitif untuk mendiagnosis
hipotiroidisme primer atau sekunder. TSH disekresi oleh lobus anterior kelenjar hipofisis
(pituitary) dan mempengaruhi produksi dan pelepasan thyroxine dan triiodothyronine dari
kelenjar tiroid. TSH merupakan glikoprotein dengan berat molekul ± 28.000 dalton, terdiri dari 2
subunit yang berbeda, alpha dan beta.
Pelepasan TSH diatur oleh TSH-releasing hormon (TRH) yang diproduksi oleh hipotalamus.
Kadar TSH dan TRH berbanding terbalik dengan kadar hormon tiroid. Jika kadar hormon tiroid
dalam darah meningkat, maka hipotalamus akan mensekresi sedikit saja TRH sehingga TSH yang
disekresi oleh hipofisis juga sedikit. Hal sebaliknya akan terjadi jika ada penurunan kadar hormon
tiroid dalam darah. Proses ini dikenal sebagai mekanisme umpan balik (negative feed back
mechanism) yang bertanggung jawab untuk mempertahankan kadar hormon dalam darah yang
optimal.
TSH dan glikoprotein hipofisis seperti : Luteinizing Hormon (LH), follicle stimulating hormon
(FSH), dan human chorionic gonadotropin (hCG), memiliki rantai alpha yang identik. Rantai beta
berbeda namun mengandung regio dengan urutan asam amino yang identik. Regio yang homolog
ini dapat menyebabkan reaksi silang (cross reaction) dengan beberapa antisera TSH poliklonal.
Penggunaan antibodi monoklonal pada pemeriksaan TSH dengan metode ELISA akan dapat
 METODE ECLIA
• Prinsip • Prosedur
TSH
• inkubasi pertama: 50 ul sampel, antibodi spesifik TSH
Pemeriksaan
Pemeriksaan TSH metode ECLIA pemeriksaan
monoclonal biotinylasi dan antibodi spesifik T4 yang
menggunakan prinsip sandwich dengan dilabel dengan komplek ruthenium membentuk komplek
waktu pemeriksaan selama 18 menit. sandwich.
• Inkubasi kedua: setelah ditambahkan mikropartikel yang
dilapisi streptavidin, komplek yang terbentuk berikatan
dengan fase solid melalui interaksi biotin dengan
R e n t an g n i l ai streptavidin.
t i d a k u n tu k TS H • Campuran reaksi diaspirasi dalam cell pengukur dimana
b a i kny a ad al a h 0 . 2 7
s e 0 – 4 .2 0
S am p el a p as i e n y a ng
μIU/mL. de mikropartikel secara magnetic ditangkap pada
p a d n g an b a t a s
d i amb i l t er a p i d et ek s i t e r en permukaan elektroda. Substansi yang tidak berikatan
a p a t k a n > d ah a d a l a h
m en d s t in g g i (
0 . 0 0 5 μI U / m L dibuang melalui Procell. Aplikasi voltase (tegangan)
d o s i
b io tin pada elektroda kemudian menginduksi emisi
g / h a r i ).
5m chemiluminescent yang diukur oleh photomultiplier.
• Hasil ditetapkan melalui kurva kalibrasi yang merupakan
instrument yang dihasilkan secara khusus oleh kalibrasi
2 titik dan master kurva dihasilkan melalui reagen
 METODE ELFA
• Prinsip
Pemeriksaan
Pengujian TSH metode ELFA
menggunakan prinsip sandwich dengan
waktu Pemeriksaan 40 menit. Sampel
diambil dan di transfer ke dalam SPR yang
mengandung aantibodi TSH berlabel
fosfatase alkalin ( conjugate). Antigen
menangkap anti antibodi yang dilapisi SPR
dan membentuk komplek sandwich.
Komponen yang tidak terikat dieliminasi
pada langkah penyucian. Kemudian
ditambahkan substrat 4-methyl
umbelliferyl fosfat, enzim mengkatalisis
reaksi hidrolisis substrat menjadi 4-methyl-
umbelliferon (produk fluoresen) dan di
baca pada panjang gelombang 450 nm.
TSH
• Prosedur
pemeriksaan
• Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke
temperatur ruangan paling tidak 30 menit.
• Gunakan satu TSH dan satu strip SPR TSH untuk setiap
sampel
• Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing
sebanyak 200 µl
• Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
• Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis
oleh alat dalam waktu kira – kira 40 menit.
• Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip
reagen dari alat.
METODE ELFA
TSH
 METODE EIA
TSH
• Prinsip
Pemeriksaan

Pemeriksaan TSH berdasarkan prinsip ELISA menggunakan antibodi monoklonal terhadap TSH. Mouse
monoclonal anti TSH antibody digunakan sebagai fase padat (dalam microwells). Anti TSH antibody dari
goat digunakan dalam larutan enzim konjugat (horseradish peroxidase). Sampel akan bereaksi dengan 2
antibodi tersebut, sehingga molekul TSH akan diikat diantara fase padat dan enzyme-linked antibody.
Setelah inkubasi 60 menit pada suhu ruang, wells dicuci dengan diluted wash buffer untuk menghilangkan
antibodi berlabel yang tidak terikat. Ditambahkan TMB substrate solution dan diinkubasi selama 20 menit,
sehingga terbentuk warna biru. Pembentukan warna biru dihentikan dengan menambahkan stop solution,
sehingga warna berubah menjadi kuning. Konsentrasi TSH berbanding lurus dengan intensitas warna
sampel. Absorbans diukur secara spectrophotometric pada 450 nm.
 METODE EIA
TSH
• Prosedur
pemeriksaan
• Siapkan microwells sesuai jumlah sampel
• Masukkan 100 µL standar, sampel dan kontrol pada wells yang sesuai
• Tambahkan 100 µL enzyme conjugate dalam tiap well.
• Campur hingga rata selama 30 detik
• Inkubasi pada suhu kamar (20-30oC) selama 60 menit
• Buang campuran inkubasi dengan cepat.
• Cuci dan bilas 5 kali dengan wash buffer concentrate (1x).
• Hilangkan sisa air dengan absorbent paper.
• Tambahkan 100 µL TMB substrate solution pada tiap well, campur selama 5 detik.
• Inkubasi pada suhu kamar selama 20 menit
• Hentikan reaksi dengan menambahkan 100 µL stop solution pada tiap well.
• Campur hingga rata selama 30 detik
• Absorbans dibaca pada 450 nm dengan microwell reader dalam 15 menit.
 METODE EIA
• Penghitungan hasil
• Hitung rata-rata absorbans (A450)
untuk tiap set standar, kontrol dan
sampel.
• Buat kurva standar dengan meletakkan
mean absorbans yang diperoleh untuk
tiap standar terhadap konsentrasinya
dalam ng/mL pada kertas gambar
linear, absorbans pada garis vertikal
(sumbu y) dan konsentrasi pada garis
horizontal (sumbu x).
• Konsentrasi TSH dalam µIu/mL
ditentukan dengan memasukkan nilai
absorbans tiap sampel ke dalam kurva
standar.
TSH
• Keterbatasan
• prosedur
Hasil yang benar dan akurat diperoleh jika
prosedur pemeriksaan dilakukan dengan
pemahaman penuh sesuai instruksi yang ada.
• Prosedur pencucian sangat penting. Pencucian
yang tidak benar akan menghasilkan presisi
yang buruk dan pembacaan absorbans yang
tinggi palsu.
• Hasil yang diperoleh harus digunakan bersama
dengan prosedur diagnosis yang lain dan
informasi yang diperoleh oleh klinisi.
 PEMERIKSAAN FREE T4
L-thyroxine (T4) atau 3,5,3’,5’-tetraiodothyronine merupakan hormon tiroid yang paling sering
diukur untuk diagnosis fungsi tiroid. T4 mempunyai pengaruh utama terhadap sintesis protein dan
konsumsi oksigen pada hampir semua jaringan, juga penting untuk pertumbuhan, perkembangan
dan maturasi seksual. T4 disintesis oleh kelenjar tiroid dan disekresikan ke dalam aliran darah.
Disini, T4 akan berikatan dengan protein serum untuk transport ke dalam sel. Protein transpor
yang utama adalah Thyroxine Binding Globulin (TBG) yang normalnya mengikat 80% T4.
Protein lainnya yang juga berikatan dengan hormon tiroid adalah TBPA dan Albumin. Hanya
0,03% T4 yang bebas, disebut sebagai Free T4 (fT4) yang merupakan metabolit aktif, sehingga
pemeriksan kadar fT4 menjadi indikator dari status tiroid pasien. Hipotiroidisme primer
menyebabkan produksi T4 oleh kelenjar tiroid berkurang, sehingga kadar fT4 yang ada di
sirkulasi juga rendah. Hipertiroidisme primer mengakibatkan produksi T4 yang berlebihan
sehingga kadar fT4 meningkat. Konsentrasi T4 total dalam serum tergantung pada kadar TBG
pada sirkulasi. Kadar TBG dapat dipengaruhi oleh beberapa obat, hormon steroid, kehamilan, dan
bermacam penyakit non tiroid. Tes fungsi tiroid generasi awal, efek variasi konsentrasi TBG
diatasi dengan menghitung Free Thyroxine Index (FTI). FTI merupakan produk konsentrasi T4
total dan Thyroid Uptake (TU), yang dapat menilai jumlah binding site pada TBG. Cara ini
membutuhkan dua jenis pemeriksaan yang berbeda (T4 Total dan TU) namun dapat memberikan
indikator yang lebih baik untuk status tiroid daripada T4 saja. fT4 dibuat untuk mengetahui secara
serum. Metode ini
 METODE ECLIA
FT4
• Prinsip • Prosedur
Pemeriksaan
Pemeriksaan fT4 metode
menggunakan prinsip kompetitif
ECLIA
dengan
pemeriksaan
• inkubasi pertama: 15 ul sampel, dan antibodi spesifik T4
yang dilabel dengan komplek ruthenium
waktu Pemeriksaan selama 18 menit. • Inkubasi kedua: setelah ditambahkan biotin dan
mikropartikel yang dilapisi streptavidin, komplek yang
terbentuk berikatan dengan fase solid melalui interaksi
biotin dengan streptavidin.
R e n t an g n i l a • Campuran reaksi diaspirasi dalam cell pengukur dimana
t i d a k i u n tu k f T 4 mikropartikel secara magnetik ditangkap pada
b a i kny a ad al a h 1 2 –
s e 2 2 p mo l/ L
S am p el a p as i e n y a ng
at au 0 . 9 3 permukaan elektroda. Substansi yang tidak berikatan
p a d – 1 .7 n g /d L ,
d i amb i l t er a p i d en g a n dibuang melalui Procell. Aplikasi voltase (tegangan)
a p a t k a n > b at as
m en d g g i ( d e t e k si pada elektroda kemudian menginduksi emisi
o s i s t in t eren d ah a d
d al ah 0 . 3 0 0
b io tin p m o l / L a t au 0 chemiluminescent yang diukur oleh photomultiplier.
g / h a r i ). .0 2 3 n g /d L . • Hasil ditetapkan melalui kurva kalibrasi yang merupakan
5m
instrument yang dihasilkan secara khusus oleh kalibrasi
2 titik dan master kurva dihasilkan melalui reagen
barcode.
 METODE ELFA
• Prinsip
Pemeriksaan
Pengujian fT4 metode ELFA menggunakan
prinsip kompetitif dengan waktu
Pemeriksaan 40 menit. Sampel diambil dan
di transfer ke dalam SPR yang
mengandung antigen fT4 berlabel fosfatase
alkalin ( conjugate). Kompetisi terjadi
antara antigen sampel dan antigen berlabel
untuk antibodi fT4 yang melapisi bagian
dalam SPR. Kemudian ditambahkan
substrat 4-methyl umbelliferyl fosfat,
enzim akan mengkatalisis reaksi hidrolisis
substrat menjadi 4-methyl-umbelliferon
sebagai produk fluoresen dan di baca pada
panjang gelombang 450 nm.
FT4
• Prosedur
pemeriksaan
• Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke
temperatur ruangan paling tidak 30 menit.
• Gunakan satu fT4 dan satu strip SPR fT4 untuk setiap
sampel
• Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing
sebanyak 100 µl
• Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
• Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis
oleh alat dalam waktu kira – kira 40 menit.
• Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip
reagen dari alat.
METODE ELFA
FT4
 METODE EIA
FT4
• Prinsip
Pemeriksaan

Pemeriksaan fT4 menggunakan prinsip solid phase competitive enzyme immunoassay. Sampel serum pasien,
standar dan Thyroxine Enzyme Conjugate Working Reagent ditambahkan pada well yang telah di-coated
dengan antibodi monoklonal anti T4. fT4 yang ada pada spesimen pasien dan T4 berlabel conjugate akan
berkompetisi untuk berikatan dengan antibodi. Setelah inkubasi selama 60 menit pada suhu kamar, wells
dicuci untuk menghilangkan T4 conjugate yang tidak terikat. Larutan H2O2/TMB ditambahkan dan
diinkubasi selama 20 menit hinggga terbentuk warna biru. Pembentukan warna biru dihentikan dengan
menambahkan 3N HCl dan absorbans dibaca secara spektrofotometrik pada 450 nm. Intensitas warna yang
terbentuk sebanding dengan jumlah enzim yang ada dan berbanding terbalik dengan jumlah fT4 pada
sampel, selanjutnya kadar fT4 dalam sampel dapat dihitung berdasarkan pemeriksaan standar fT4 dengan
cara yang sama.
 METODE EIA
FT4
• Prosedur
pemeriksaan
• Siapkan microplate wells untuk tiap standar, kontrol dan spesimen pasien untuk diperiksa secara
duplikat.
• Masukkan 50 µL standar, sampel dan kontrol pada wells yang sesuai
• Tambahkan 100 µL larutan Thyroxine enzyme conjugate dalam tiap well.
• Campur hingga rata selama 20-30 detik
• Inkubasi pada suhu kamar selama 60 menit
• Buang campuran inkubasi dengan cepat. Cuci dan bilas 5 kali dengan distilled atau deionized
water. Hilangkan sisa air dengan absorbent paper.
• Tambahkan 200 µL working substrate solution (reagen A:B= 1:1) pada tiap well, campur selama
10 detik.
• Inkubasi pada suhu kamar dengan kondisi gelap selama 20 menit
• Hentikan reaksi dengan menambahkan 50 µL stop solution (3N HCl) pada tiap well.
• Campur hingga rata selama 30 detik
• Absorbans dibaca pada 450 nm dengan microwell reader dalam 30 menit.
 METODE EIA
FT4
• Penghitungan hasil

• Hitung rata-rata absorbans (A450) untuk tiap set standar, kontrol dan sampel.
• Buat kurva standar dengan meletakkan mean absorbans yang diperoleh untuk
tiap standar terhadap konsentrasinya dalam ng/mL pada kertas gambar linear,
absorbans pada garis vertikal (sumbu y) dan konsentrasi pada garis horizontal
(sumbu x)
• Konsentrasi fT4 dalam ng/mL ditentukan dengan memasukkan nilai
absorbans tiap sampel ke dalam kurva standar.
 METODE EIA
FT4
• Keterbatasan
prosedur
• Kadar fT4 berkorelasi dengan status tiroid, namun ada beberapa situasi yang menyebabkan
interpretasi hasil fT4 menjadi sulit dan pemeriksaan fT4 tidak bisa menjadi satu-satunya dasar
penentuan status tiroid, meskipun pada pemeriksaan fT4 yang paling dapat dipercaya bisa tidak
benar pada variasi serum binding protein yang ekstrim dan faktor lainnya.
• Kadar hormon tiroid yang normal tidak menyingkirkan penyakit tiroid dan pembesaran
kelenjar tiroid difus atau nodular dapat terlihat pada pasien eutiroid.
• Banyak kasus selain kelainan tiroid yang memberikan kelainan konsentrasi fT4 di serum.
• Pada pasien yang mendapatkan terapi heparin, keseimbangan antara fT4 dan T4 terikat TBG
akan terpengaruh. Terapi heparin dapat meningkatkan konsentrasi non-esterified fatty acid
yang dapat menggantikan T4 pada serum binding protein dan hal ini menyebabkan
peningkatan nilai fT4. Phenytoin, salysilate dan beberapa obat lain juga dapat mempengaruhi
ikatan antara T4 dan TBG dengan cara yang hampir sama. Yang harus diperhatikan untuk
melakukan interpretasi terhadap hasil pemeriksaan fT4 pada pasien dengan terapi heparin atau
obat lain adalah efek terhadap ikatan T4 dengan serum protein.
 METODE EIA
FT4
• Keterbatasan
prosedur
5. Konsentrasi TBG akan terganggu dengan peningkatan estrogen, anabolic steroid, androgens,
glukocorticoids dan kehamilan. Penyakit yang berat, stress pascabedah, kelainan genetik dan
hepatitis, juga dapat mempengaruhi konsentrasi TBG, yang tentunya juga akan berdampak pada
kadar fT4.

6. Familial dysalbuminemic hyperthyroxinemia, auto-antibodi terhadap T4 dan analbuminemia

dapat menyebakan peningkatan T4 total namun tidak mempengaruhi kadar fT4 kecuali pasien
mendapatkan terapi T4.

7.Pengobatan hipotiroidisme dengan L-thyroxine dapat menyebabkan kelainan korelasi antara

status klinis dan fT4. Konsentrasi fT4 dapat meningkat pada kasus ini.

8. Sampel yang hemolisis berat, lipemik, atau ikterik dapat menyebabkan hasil tidak akurat. Jika
memungkinkan, sebaiknya diambil spesimen baru dengan kualitas yang lebih baik.
Thanks
KELOMPOK 7