Pembuatan Coomb`s Control Cells (CCC)
Oleh : Erlina Kusumastuti Faiz Mundzir A Febri Wulan Dari
Tujuan
Untuk mendapatkan Reagen Coomb`s Control Cells Positive
Dasar Teori
CCC adalah sel O normal Rh positif yang telah disensitisasi oleh Anti-D Ig G CCC digunakan untuk memastikan apakah prosedur kerja yang dilakukan pada Coomb`s Test benar atau tidak (untuk menghindari hasil negatif palsu pada Coomb`s Test ) CCC ditambahkan ke setiap hasil coomb`s test negatif , dan hasilnya harus positif setelah penambahan CCC.
Dasar Teori
Jika hasil tetap negatif menunjukkan coomb`s test tidak valid Negatif palsu dapat disebabkan oleh - Pencucian eritrosit sebelum penambahan serum coomb`s kurang sempurna - Salin terkontaminasi oleh protein/ globulin - Lupa menambahkan serum coomb`s - Reagen / serum coomb`s buruk
Prinsip
Anti-D Ig G diencerkan dan dilekatkan pada permukaan sel O normal 2-5% kemudian dilakukan pencucian dan dibuat suspensi sel 5%.
Alat
- Inkubator (waterbath) 37o C - Centrifuge - Mikroskop - Timer - Rak Tabung - Tabung reaksi ukuran 12 x 75mm - Pipet pasteur / pipet transfer - Botol semprot - Beaker glass ( gelas pembilas) - Wadah limbah
Bahan
1. Sel golongan darah O Rhesus positif normal 2 5 % 2. Anti-D IgG (monoclonal) 3. Coomb`s Serum ( A.H.G) 4. Saline (NaCl 0,9 %)
Prosedur
1. Titrasi Anti Rhesus (anti-D)
Anti-D Ig G adalah suatu antigen monoklonal yang bersifat sebagai antibodi inkomplit dan memiliki titer yang cukup tinggi Tujuan : Untuk mengetahui titer inkomplit Anti-D dan mendapatkan CCC yang ideal Titrasi terhadap anti-D dengan cara Double dilution (pengenceran berganda/serial) Nilai pengenceran anti-D (reaksi 2+) yang akan digunakan dalam pembuatan CCC
1. Titrasi anti Rhesus (anti-D)
Nomor tabung Pengenceran Saline (mL) 1 2 0,5 2 4 0,5 0,5 5 tts 3 8 0,5 dst.. 5 tts 5 tts 5 tts 5 tts 5 tts 5 tts 4 16 0,5 5 32 0,5 6 64 0,5 7 128 0,5 8 256 0,5 9 512 0,5 10 1024 0,5
Anti-D (mL)
Suspensi sel O Rh Pos 2-5% * 0,5 ml = 10 tetes
0,5
0,5 5 tts buang 5 tts 5 tts
Kocok dengan baik
Ink 37oC 30 menit
Cuci 3 kali dengan saline
Supernatan dibuang
Baca hasil reaksi (makroskopik) dan catat gradasi aglutinasi
Putar 2000 rpm 20 detik
Kocok dengan baik
+ 2 tetes AHG
Pelaporan Akhir Titrasi
Contoh hasil titrasi :
Double dilution anti-D IgG Titer Antibodi Inkomplit 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024
4+
4+
4+
4+
3+s
3+
2+s
2+
1+
Hasil : Titer inkomplit anti-D adalah 512 Pengenceran anti-D yang akan digunakan untuk pembuatan reagensia CCC adalah 1/128 Untuk mendapatkan hasil pembuatan CCC yang baik (reaksi optimal 2+, anti-D IgG tersebut harus diencerkan terlebih dahulu hingga 128 kali
2. Teknik Pembuatan CCC
1 tetes Anti-D IgG 127 tetes saline 64 tetes sel gol O Rh Positif 5%
Kocok dengan baik
Ink 37oC 30 menit
Cuci 3-4 kali dengan saline
Reaksi Aglutinasi minimal 2+
Diuji dulu dengan Coomb`s Serum
Sedimen sel disuspensikan menjadi 5 % dalam saline
Catatan
Perlu diperhatikan keadaan reagen yang digunakan (expired date,kejernihan) dan cara kerja pembuatan yang sesuai dengan SOP Pada pembuatan CCC digunakan sel O normal dikarenakan pada permukaan sel O normal tidak memiliki antigen Sel O yang digunakan dengan konsentrasi 2-5% agar pengamatan mikroskop jelas
