Spektrometri Massa

Elusidasi struktur
bahan alami

Pendahuluan
Spekrometri massa: menggunakan elektron
dengan energi tinggi untuk memecah
molekul menjadi fragmen2

Pemisahan dan analisis fragmen untuk

memberikan informasi
Bobot molekul
Konfirmasi struktur:
Fragmentasi
Exact mass

Teori
Semburan elektron dengan energi tinggi
menyebabkan molekul kehilangan elektron
dan membentuk Kation radikal
Spesies dengan muatan positif dan satu
elektron tidak bermuatan
H
H C H
H

H
H C H

+ 2e

H
Molecular ion (M+)
m/z = 16

Teori
Selain itu, elektron dengan energi tinggi
dapat memecah molekul atau kation
radikal menjadi fragmen2
H H

H C C H

molecular ion (M ) m/z = 30

H H
H H
H C C H

+ e

H H

H C C

H H

+ H

H H
m/z = 29
H

m/z = 15

H C
H

C H
H

(not detected by MS)

Teori
Molecular ion (parent ion):
Kation radikal yang menunjukkan massa
dari molekul asal
H H

H
H C H

H C C H

H H

Umumnya ditemui sebagai massa tertinggi

pada spektrum
Pengecualian: pada beberapa senyawa
molecular ion tidak terbentuk

Spektrometer massa
Kation yang terbentuk dipisahkan oleh
defleksi magnetik

Teori
Hanya kation yang terdeteksi.
Radikal tidak terlihat di SM.
Jumlah defleksi yang teramati tergantung
oleh mass to charge ratio (m/z).
Hampir semua kation memiliki muatan
+1, sehingga jumlah defleksi yang
teramati umumnya tergantung massa
ion.

Spektra massa

http://ionsource.com/tutorial/spectut/spec2.htm

Spektrum massa: etanol

base peak

M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/1/09)

Isotop
Sebagian besar elemen muncul sebagai
campuran isotop.
Keberadaan isotop yang lebih berat
dalam jumlah yang signifikan
menyebabkan puncak2 dengan
kelimpahan lebih kecil dengan massa
yang lebih besar dari puncak parent
ion
M+1
M+2

Kelimpahan Isotop

81Br

=>

Exercises

Kitson et al., 1996, Gas Chromatography and Mass Sectrometry:

A practical Guide, Academic Press, USA

Kitson et al., 1996, Gas Chromatography and Mass Sectrometry:

A practical Guide, Academic Press, USA

Kitson et al., 1996, Gas Chromatography and Mass Sectrometry:

A practical Guide, Academic Press, USA

Relative intensities of ions expected for

various combinations of Bromine and Chlorine

Br

Br2

Br3

Cl

Cl2

Cl3

BrCl

Br2Cl

BrCl2

M+

100

51

34

100

100

100

78

45

62

M+2

94

100

100

31

65

95

100

100

100

47

97

10

31

24

74

45

14

M+4
M+6

31

http://www.chemistry.ccsu.edu/glagovich/teaching/316/ms/brandcl.html

Tips untuk interpretasi spektrum MS

Identifikasi fragmen ion karakteristik
Identifikasi kehilangan fragmen dari
molecular ion
Database/literatur

Rule of Thirteen
Untuk mengidentifikasi kemungkinan
formula molekul CnHm.
Step 1: n = M+/13
Step 2: m = n + sisa step 1

Rule of Thirteen
Example: M+ =106
Step 1: n = 106/13 = 8 (Sisa = 2)
Step 2: m = 8 + 2 = 10
Formula: C8H10

Rule of Thirteen
Jika terdapat heteroatom,
BM-massa heteroatom
Hitung formula hidrokarbon
Tambahkan heteroatom pada formula

Elemen yang mudah dikenali:

Nitrogen Rule
Jumlah N ganjil = BM ganjil
+

CH3CN

M = 41

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)

Elemen yang mudah dikenali

Bromine:
M+ ~ M+2 (50.5%

79Br/49.5% 81Br)

2-bromopropane

M+ ~ M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of Advanced Industrial

Science and Technology, 11/1/09)

Elemen yang mudah dikenali

Chlorine:
M+2 is ~ 1/3 as large as M+
Cl

M+
M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)

Elemen yang mudah dikenali

Sulfur:
M+2 lebih besar dari biasanya (4% M+)
S

M+

M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/1/09)

Elemen yang mudah dikenali

Iodine
I+ 127
Jeda besar

ICH2CN

Large gap

I+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)

M+

Pola fragmentasi
Alkana
Fragmentasi biasanya
alkil sederhana
Kehilangan metil
Kehilangan etil
Kehilangan propil
Kehilangan butil

memecah grup
M+
M+
M+
M+

15
29
43
57

Alkana bercabang cenderung mengalami

fragmentasi menjadi Karbokation yang
paling stabil

Pola fragmentasi
2-metillpentana

Pola fragmentasi
Alkena:
Fragmentasi umumnya membentuk karbokation
alilik yang terstabilisasi dengan resonansi

Pola fragmentasi
Aromatik
Frgmen pada karbon benzilik, membentuk
karbokation benzilik yang distabilkan oleh
resonansi (mengalami rearrangement menjadi
ion tropylium)
H
H C Br

H C

H C
or

M+

Pola fragmentasi
Aromatik biasanya juga memiliki puncak pada m/z
= 77 untuk cincin benzene
NO2
77

77
M+ = 123

Pola fragmentasi
Alkohol

Mudah terfragmentasi sehingga seringkali

parent ion tidak terdeteksi
Dapat kehilangan radikal hidroksil atau air
M+ - 17 atau M+ - 18
Biasanya kehilangan gugus alkil yang
terikat karbon kabinol untuk membentuk
ion oxonium
1o alkohol biasanya memiliki puncak yang
signifikan pada m/z = 31 dari H2C=OH+

Pola fragmentasi
1-propanol
CH3CH2CH2OH

H2C OH

M+-18

M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)

Pola fragmentasi
Amina
M+ ganjil (nitrogen jumlah ganjil)
a-cleavage mendominasi membentuk ion
iminium
CH3CH2

CH2

N CH2
H

CH2CH2CH3

CH3CH2CH2N CH2
H
m/z =72

iminium ion

Pola fragmentasi
86
CH3CH2

CH2

N CH2
H
72

CH2CH2CH3

Pola fragmentasi
Eter
a-cleavage membentuk ion oxonium

Kehilangan gugus alkil membentuk ion oxonium

Kehilangan gugus alkil membentuk Karbokation

Pola fragmentasi
Dietil eter (CH3CH2OCH2CH3)
H O CH2

CH3CH2O CH2
H O CHCH3

Pola fragmentasi
Aldehid (RCHO)
Fragmentasi dapat membentuk ion
acylium
RC O
Fragmen yang lazim ditemui:
M+ - 1

RC O

M+ - 29

(i.e. RCHO - CHO)

Pola fragmentasi
Hidrosinamaldehid
105

91

H H O
C C C H
H H
133
91

M+ = 134
105

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)

Pola fragmentasi
O
Keton
RCR'
Fragmentasi menyebabkan pembentukan
ion acylium
Kehilangan R:

R'C O

Kehilangan R

RC O

Pola fragmentasi
2-pentanone

O
CH3CCH2CH2CH3

CH3C O

CH3CH2CH2C O
M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)

Pola fragmentasi
Ester (RCO2R)
Pola fragmentasi umum
Kehilangan OR
M+ - OR
Kehilangan R
M+ - R

Pola fragmentasi
105

77
O
C O CH3
105

77
M+ = 136

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)

Prinsip dasar:
Kehilangan /ketambahan 1 elektron:
menghasilkan ion dengan jumlah elektron
ganjil
atau
Kehilangan /ketambahan partikel
bermuatan: menghasilkan ion dengan jumlah
elektron genap

LC/MS vs GC/MS
LC/MS
Analit :
Polar-semi polar
Non volatile
Thermolabile

GC/MS
Analyte:
Volatile dan semi
volatile
Thermostable
Non volatile dan non
stable, dapat melalui
tahapan derivatization

43

http://www.shimadzu.com/an/lcms/support/intro/lib/lctalk/48/
48intro.html
44

Triana232 #611 RT: 17.12 AV: 1 NL: 8.53E8

T: + c ESI sid=25.00 Full ms [ 100.00-1000.00]
474.0

100
95
90
85

80

75
70

65

60

N
1

18
2

Br
6

Br

20

NH
7

14

10
11
9

55

472.2

50

13

12

15
16

475.9

45
40
35
30
25
20
229.2

15

301.3

10
5
146.0 172.0

0
100

200

246.2

327.2
300

476.9

392.8 430.4
400

521.8
500

603.8 647.7 678.7 744.9

600

m/z

700

883.1 928.3 969.4

800

900

N+H

1000

19
17

Triana232 #651 RT: 17.96 AV: 1 NL: 7.86E8

T: + c ESI sid=25.00 Full ms [ 100.00-1000.00]
520.1

100

521.9

95
90

85

80
75

70

65

20
O

N
1

18
2

I
6
NH
7

Br

60

13

12

14

10
11
9

15

55

16
50
45
40
35
30
25
349.2

20

522.9

229.2

15
10
5
150.2 174.0

0
100

200

292.3
232.2
293.2
300

350.3
400

474.3
463.8

543.9

500

641.5
600

m/z

695.8 709.2
700

796.6
800

855.8

928.4 960.1
900

47

1000

N+H
19

17

Multiple Charging
Peptida dengan BM 10000
ESI-MS, muatan dengan penambahan jumlah H+

M + nH+ MnHn+
Ion2 yang terbentuk adalah:
z = 1 m/z = (10000+1)/1 = 10001
z = 2 m/z = (10000+2)/2 =

5002

z = 3 m/z = (10000+3)/3 =

3334.3

z = 4 m/z = (10000+4)/4 =

2501

z = 5 m/z = (10000+5)/5 =

2001
48

Figure from The Expanding Role of MS

in Bio-technology G . Siuzdak

49

Multiple charge ion

http://www.astbury.leeds.ac.uk/facil/MStut/mstutorial.htm

Spektrum Lysozyme
For example, if the ions appearing at m/z 1431.6 in the lysozyme spectrum have "n"
charges, then the ions at m/z 1301.4 will have "n+1" charges
1431.6 = (MW + nH+)/n and 1301.4 = [MW + (n+1)H+] /(n+1)
These simultaneous equations can be rearranged to exclude the MW term:
n(1431.6) - nH+ = (n+1)1301.4 - (n+1)H+
n(1431.6) = n(1301.4) +1301.4 - H+
n(1431.6 - 1301.4) = 1301.4 - H+
n = (1301.4 - H+) / (1431.6 - 1301.4)
hence the number of charges on the ions at m/z 1431.6 = 1300.4/130.2 = 10.
Putting the value of n back into the equation:
1431.6 = (MW + nH+) n
gives 1431.6 x 10 = MW + (10 x 1.008)
and so MW = 14,316 - 10.08
therefore MW = 14,305.9 Da

51