Pengaruh Polaritas Pelarut dan Kondisi pada Ekstraksi Antioksidan, Flavonoid dan Fenolik dari

Averrhoa bilimbi

Makalah ini menyajikan pengaruh polaritas pelarut dan kondisi ekstraksi pada ekstraksi total
flavonoid, total Fenolik dan antioksidan dari Averrhoa bilimbi. Percobaan dilakukan dengan
menggunakan pelarut yang berbeda pada ekstraksi yang berbeda. waktu ekstraksi (15-240 menit),
suhu (30-70 C) dan kecepatan agitasi (50-300 rpm). Hasil penelitian menunjukkan bahwa Hasil
ekstraksi bervariasi dengan polaritas pelarut. Ekstraksi menggunakan metanol berair 50%
memberikan aktivitas antioksidan tertinggi dan Isi flavonoid Kandungan flavonoid total tertinggi
(193,3 g kuersetin setara / g berat kering), kadar fenolik total (717,8 g Asam lambung setara / g
berat kering) dan aktivitas antioksidan (77%) dicapai dengan menggunakan metanol 50%, pada suhu
70 C dan kecepatan agitasi 300 rpm. Pekerjaan ini berguna untuk mendapatkan senyawa bioaktif
yang lebih tinggi selama proses ekstraksi A. bilimbi.

Pendahuluan

Studi ilmiah sebelumnya mengungkapkan bahwa ekstrak A. Bilimbi mengandung banyak senyawa
bioaktif yang berguna Seperti asam amino, asam sitrat, Sianida-3-O--D-glukosida, fenolat, kalium
Ion, gula dan vitamin A . A. bilimbi memiliki kandungan antioksidan yang tinggi, walaupun,
Karakteristik fisikokimia A. bilimbi tergantung Pada tahap kematangannya. Efektivitas dari A. Bilimbi
dalam mencegah penyakit tergantung pada Bioavailabilitas bahan aktif. Langkah pertama Untuk
memulihkan dan memurnikan senyawa bioaktif dari tumbuhan Bahan melibatkan proses ekstraksi.
Hasil panen Senyawa bioaktif dalam ekstrak tergantung pada Pelarut yang digunakan, metode
ekstraksi dan kondisinya. Pengambilan senyawa bioaktif yang sukses dari Bahan tanaman sangat
bergantung pada jenisPelarut yang digunakan Selama ekstraksi, pelarut berdifusi ke dalam Bahan
tanaman padat dan senyawa pelarut dengan Polaritas serupa . Diketahui bahwa ekstrak dari Bahan
tanaman yang sama dapat sangat bervariasi. Maserasi Teknik dipekerjakan oleh beberapa peneliti
Untuk mengekstrak polifenol dan antioksidan dari A.Bilimbi

Bahan dan metode

Bahan kimia : Metanol, etanol, propanol, n-heksana, Follin Reagen, natrium hidroksida, natrium
nitrat dan Aluminium klorida dibeli dari Merck (Darmstadt, Jerman). Asam gali dan kuersetin
Standarnya berasal dari Acros Organics (NJ, USA). 2,2-diphenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH) dan natrium
Karbonat diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Semua bahan kimia dan reagen
digunakan di Penelitian secara analitis.

Persiapan Sampel : Sampel buah dikumpulkan dari Jaya Gading, Kuantan. Sampel dicuci bersih
dengan menggunakan keran Air untuk menghilangkan kotoran dan bahan asing lainnya. Sampel
dipotong menjadi irisan dan disimpan pada suhu minus 80 C Sebelum liofilisasi menggunakan
pengering beku (model biotron Cleanvac 12S, Korea). Sampel lyophilised adalah Digiling menjadi
bubuk dan disimpan pada suhu minus 20 C sebelumnya Untuk proses ekstraksi.

Prosedur Ekstraksi : Ekstraksi antioksidan dan polifenol dari A. Buah Bilimbi dilakukan melalui teknik
maserasi. Pertama, kemampuan pelarut yang berbeda (n-heksana, Etanol, metanol, propanol,
propanol 50%, 50% Etanol, 50% metanol) untuk mengekstrak polifenol dan Antioksidan diselidiki Itu
dilakukan di a Labu berbentuk kerucut (dibungkus dengan aluminium foil) oleh Pencampuran bubuk
buah lypolized dengan pelarut pada rasio 1:60 (b / v). Percobaan dilakukan pada suhu 50 C, Agitasi
pada 200 rpm selama 4 jam. Semua ekstrak itu Disentrifugasi (Eppendorf 5810 R) pada 10.000 rpm
selama 10 Min dan disaring menggunakan kertas saring (Whatman No. 1) ke Mendapatkan solusi
yang jelas Mereka dijaga pada suhu minus 20 C Sebelum analisis Analisis varians (ANOVA) dari Data
rangkap tiga dilakukan dengan menggunakan analisis data Alat di Microsoft Office 2010. Pelarut
yang mana Menghasilkan kandungan fenolik total tertinggi, flavonoid Aktivitas antioksidan dan
konten dipilih untuk Sisa penelitian ini untuk mengevaluasi pengaruh Waktu dan suhu ekstraksi.

Analisis

Kandungan Fenolik Total: Total kandungan phenolic content (TPC) dianalisis Menggunakan uji Folin-
Ciocalteau [7]. 40 L sampel adalah Dicampur dengan 1,8 mL lipid 10 kali lipat Folin-Ciocalteau
reagen. Setelah 5 menit, 1,2 mL natrium 7,5% Bikarbonat ditambahkan Solusinya dihomogenisasi
Dan dibiarkan berdiri pada suhu kamar selama 60 menit. Kemudian, absorbansi diukur dengan
menggunakan kalibrasi Spektroskopi ultraviolet-visible (Hitachi U-1800, Jepang) di = 725 nm.
Hasilnya dinyatakan sebagai mg Setara asam galat / g sampel kering melalui Kurva kalibrasi dengan
asam galat.

Total Konten Flavonoid: Total kandungan flavonoid (TFC) dianalisis Menggunakan uji kolorimetrik
aluminium klorida [8]. 1 mL Sampel diencerkan dengan 4 mL air suling dan Ditambahkan dengan 0,3
mL 5% (b / v) NaNO2. Setelah 5 menit, 0,3 ML (10% b / v) AlCl3 ditambahkan. Setelah 6 menit, 2 mL
Dari 1 M NaOH ditambahkan dan volumenya dibuat Sampai 10 mL segera dengan penambahan 2,4
mL air sulingan. Solusinya dicampur dengan kuat, dan Absorbansi larutan diukur a Spektroskopi
ultraviolet-visible yang dikalibrasi (Hitachi U-1800, Jepang) di = 510 nm. Hasilnya adalah
Dinyatakan dalam g kuersetin setara / g sampel kering oleh Perbandingan dengan kurva standar
kuersetin, yang mana Dibuat dalam kondisi yang sama.

Antioksidan: Aktivitas pemulung radikal bebas (antioksidan) Ekstrak diukur dengan cara uji DPPH [9].
0,1 mL sampel dilarutkan 10 kali lipat atau metanol (kosong) Ditambahkan ke 3,9 mL larutan DPPH 6
10-5 mol / L,Dalam metanol Campuran itu kemudian terguncang dengan kuat Dan diinkubasi
selama 30 menit pada suhu kamar dalam kegelapan Pengaruh Polaritas Pelarut dan Kondisi Ekstraksi
Antioksidan, Flavonoid dan Fenolik Konten dari Averrhoa bilimbi . Absorbansi ditentukan dengan
menggunakan a Kalibrasi ultraviolet-terlihat (Hitachi U-1800, Jepang) Di = 515 nm.

Analisis Statistik : ANOVA dari data rangkap tiga dilakukan oleh Menggunakan alat analisis data di
Microsoft Excel 2010, Dan tes perbedaan yang paling tidak signifikan (LSD) digunakan untuk
Bandingkan mean dengan interval kepercayaan 95%.

Hasil dan Diskusi

Hasil pada Tabel 1 menunjukkan bahwa Pelarut berair lebih disukai untuk fenolik, flavonoid Dan
ekstraksi antioksidan dari A. bilimbi sebagai lawan Untuk pelarut murni dengan polaritas rendah
seperti n-heksana Dan propanol. Pelarut murni seperti metanol dan Etanol, yang memiliki indeks
polaritas sekitar 5.1 dan menghasilkan hasil yang jauh lebih tinggi dari TFC, TPC dan Kandungan
antioksidan Penambahan air, yang memiliki Indeks polaritas 9.0 meningkatkan kelarutan keduanya
Senyawa metoksilasi dan hidroksilasi dan karenanya Meningkatkan hasil ekstraksi secara
keseluruhan. Perbedaan di P> 0,05 untuk TFC dan antioksidan yang diperoleh dengan menggunakan
50% Propanol, 50% etanol dan 50% metanol tidak Signifikan dan karenanya tidak cukup untuk
menolak null hipotesa. Namun demikian, hasil pada Tabel 1 menunjukkan Bahwa 50% metanol
memiliki hasil gabungan tertinggi Berarti TPC (setara asam 105,2 mg gallic / g kering Berat), TFC
(setara 341,2 g quercetin / g kering Berat) dan antioksidan (80,0%), dan karenanya Bekerja untuk
sisa pekerjaan ini. Pemulihan senyawa antioksidan yang lebih baik dengan Metanol konsisten
dengan penelitian sebelumnya [8, 10]. Polaritas pelarut memainkan peran penting dalam ekstraksi
Proses karena akan meningkatkan kelarutan Senyawa antioksidan. Sebagian besar pelarut murni
Memiliki kekuatan ekstraksi yang lebih lemah dalam penelitian ini. Hexane Ditemukan paling tidak
efektif untuk mengekstrak Senyawa bioaktif dari A. bilimbi yang mungkin Disebabkan oleh indeks
polaritas terendahnya. Pelarut berair memiliki kekuatan ekstraksi yang lebih baik dari pada Pelarut
murni karena pencampuran pelarut non polar dan Air dapat meningkatkan indeks polaritas pelarut
dan Maka selanjutnya dapat meningkatkan efisiensi ekstraksi .Hasil penelitian menunjukkan bahwa
50% aqueous Pelarut memberikan ekstraksi bioaktif yang lebih baik Senyawa dibandingkan dengan
pelarut murni. Ini adalah Karena perbedaan polaritas penggalian Pelarut, yang mempengaruhi
kelarutan bahan kimia Konstituen dalam sampel dan hasil ekstraksinya .Misalnya, Cacace dan Mazza
melaporkan a Peningkatan ekstraksi anthocyanin dari Blackcurrant menggunakan etanol berair
sampai air Komposisi mencapai maksimal 60% tapi Menurun setelah itu Ekstraksi makar
menggunakan Metanol berair 50% memberikan hasil fenolik tertinggi Senyawa dan antioksidan dari
A. bilimbi dibandingkan Ke pelarut lain yang diteliti.

Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Suhu

Waktu ekstraksi merupakan parameter penting dalam Proses ekstraksi untuk mengoptimalkan
pemulihan Komponen bioaktif dari sampel. Efek dari Waktu ekstraksi dipelajari pada 15-240 menit
dengan 50% Metanol berair pada 50 C dengan kecepatan agitasi 200 Rpm. Hasil menunjukkan TFC
meningkat dari 200-300 g Setara quercetin / g berat kering saat ekstraksi Waktu berkepanjangan
dari 15 menit sampai 60 menit. Namun, ekstraksi di luar 60 menit tidak menunjukkan apapun
Perbaikan karena degradasi flavonoid dari Paparan panas, cahaya dan oksigen [15]. TPC juga
Menunjukkan kecenderungan meningkat dari 62 mg asam gallic Setara / g berat kering sampai 110
mg asam gallic Setara / g berat kering saat ekstraksi Meningkat dari 15 menit menjadi 180 menit
Asam fenolik masuk Umumnya kurang rentan terhadap degradasi dan karenanya mungkin Manfaat
dari waktu ekstraksi yang berkepanjangan, bagaimanapun, Tidak ada keuntungan lebih lanjut
dengan memperpanjang ekstraksi di luar 180 Min. Waktu ekstraksi optimum untuk TPC dan TFC
berbeda Karena derajat polimerisasi fenolik yang berbeda, Interaksi fenolat dengan unsur lainnya
dan Kelarutan fenolat yang mempengaruhi Waktu keseimbangan antara sampel padat dan larutan
Antioksidan tidak terpengaruh secara signifikan oleh Waktu ekstraksi dengan hanya sekitar 10%
meningkat Meningkatkan waktu ekstraksi dari 15 menit sampai 240 menit. Hasil serupa telah
dilaporkan sebelumnya, Dalam penelitian ini, ekstraksi 60 menit Menunjukkan efek tertinggi pada
flavonoid total sedangkan untuk Fenolat dan aktivitas antioksidan. Ini ditandai adanya Perbedaan
yang signifikan dari yang tertinggi. Jadi, 60 Min ekstraksi dipilih untuk sisa ini kerja. Efek suhu pada
ekstraksi A. Bilimbi Diteliti dengan menggunakan metanol berair 50% pada Agitasi 200 rpm selama
60 menit. TPC, TFC dan Aktivitas antioksidan meningkat secara signifikan sebesar 50%, 45% Dan 29%,
saat suhu meningkat Dari 30 C sampai 70 C. Fenomena yang sama juga terjadi Dilaporkan oleh
Tagliazucchi dkk. [18] dalam ekstraksi Fenol dari kulit anggur. Suhu meningkat Ekstraksi yang
ditingkatkan dengan meningkatkan kelarutan Polifenol dan koefisien difusi. Pada saat ini Studi,
peningkatan suhu ekstraksi memiliki Mendorong efek total fenolat, flavonoid total Dan aktivitas
antioksidan. Temuan serupa berkaitan dengan hal tersebut Untuk meningkatkan kelarutan polifenol
pada tinggi Suhu juga dilaporkan di tempat lain [19-22]. Didalam Keadaan, diyakini bahwa senyawa
fenolik, Kandungan senyawa flavonoid dan antioksidan dari A. Bilimbi stabil secara termal dan waktu
ekstraksi Dipilih pada tahap kedua yang cocok untuk kedua moderat Ke suhu tinggi tanpa
menyebabkan tidak baik degradasi.

Pengaruh Kecepatan Agitasi

Pengaruh kecepatan agitasi dipelajari dengan 50% Metanol berair pada suhu 70 C selama 60 menit.
hasilnya menunjukkan bahwa TPC, TFC dan antioksidan Aktivitas meningkat secara signifikan sebesar
52%, 47% dan 10% Masing, ketika kecepatan agitasi meningkat dari 50 rpm sampai 300 rpm. Hal ini
sesuai dengan misa Teori transfer Pemindahan massa konvektif terjadi di Permukaan bila cairan
berada di luar padatan [18]. Itu Zat terlarut dari dalam padatan bergerak ke permukaan Melalui
difusi dan sekali di permukaan, itu terbatas Oleh pemindahan massa konvektif. Tingkat agitasi yang
lebih tinggi Menghasilkan koefisien perpindahan massa yang lebih tinggi dan meningkat Tingkat
perpindahan massa konvektif yang menyebabkan peningkatan Hasil ekstraksi. Temuan serupa juga
dilaporkan oleh Chan et al yang menyiratkan bahwa agitasi meningkat Hasil ekstraksi dengan
mempercepat gangguan dan Pembubaran senyawa aktif terikat pada sampel Matriks ke cairan.

Kesimpulan

Penelitian ini telah menunjukkan bahwa Kondisi pelarut polaritas dan ekstraksi mempengaruhi
ekstraksi Hasil total fenolik, flavonoid total dan antioksidan Dari A. bilimbi Pelarut berair, yaitu, 50%
berair Metanol menghasilkan kandungan fenolik yang jauh lebih tinggi, Kandungan flavonoid dan
aktivitas antioksidan dari A. Bilimbi, berlawanan dengan pelarut polar seperti heksana dan Propanol.
TFC tertinggi (193,3 g quercetin Setara / g berat kering), TPC (717,8 g asam galat Setara / g berat
kering) dan aktivitas antioksidan 77% Dicapai dengan menggunakan metanol 50%, pada suhu 70 C
dan Kecepatan agitasi 300 rpm. TFC, TPC dan Aktivitas antioksidan meningkat dengan kecepatan
agitasi Dan suhu. Temuan dari pekerjaan ini mungkin Membantu untuk meningkatkan ekstraksi
senyawa bioaktif Dari A. bilimbi di masa depan. Pekerjaan lebih lanjut harus Termasuk teknik
ekstraksi lainnya seperti Ekstraksi dengan bantuan ultrasonik dan bantuan gelombang mikro
Ekstraksi yang dapat memberikan ekstraksi yang lebih cepat Antioksidan dan polifenol dari A. Bilimbi

Nb : studi anova : Analisis of variance atau ANOVA merupakan salah satu teknik analisis
multivariate yang berfungsi untuk membedakan rerata lebih dari dua kelompok data dengan
cara membandingkan variansinya. Analisis varian termasuk dalam kategori statistik parametric.
Sebagai alat statistika parametric, maka untuk dapat menggunakan rumus ANOVA harus
terlebih dahulu perlu dilakukan uji asumsi meliputi normalitas, heterokedastisitas dan random
sampling