ANALISA PENGUKURAN KADAR LARUTAN TEMULAWAK

MENGGUNAKAN METODE TLC (THIN LAYER CHROMATOGRAPHY)

( Zainal Abidin, Dr. Ir.Sekartedjo,MSc.)

Jurusan Teknik Fisika Fakultas Teknologi Industri

Institut Teknologi Sepuluh Nopember
Kampus ITS, Keputih Sukolilo, Surabaya 60111
Email : bidin_ws@yahoo.com

Abstrak
Berbagai kemajuan di bidang elektrokimia telah memberikan peranan penting dalam penentuan kandungan / unsur
zat didalam cairan. Contoh teknologi yang digunakan saat ini adalah penerapan metode kromatografi, yakni suatu teknik
pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya. Salah satu metode kromatografi dan
digunakan dalam penelitian ini adalah kromatografi lapisan tipis. Kromatografi lapisan tipis ( Thin Layer Chromatography )
ini menggunakan dua fasa, yaitu fasa diam (Stationary Phase) dan fasa gerak (Mobile Phase). Pada kromatografi lapisan
tipis, terdapat lapisan tipis / plat, yang digunakan sebagai tempat sampel yang diukur. Proses pengukuran sampel yang
berada pada permukaan plat menggunakan sistem scanner didalam alat TLC. Dalam penelitian ini, sampel yang diukur
adalah sampel temulawak dan ditentukan berapa besar kadar senyawa curcuminoid didalam sampel temulawak tersebut.
Sampel temulawak dipilih mengingat khasiatnya dalam menyembuhkan / mencegah beberapa penyakit, seperti penyakit liver.
Untuk mengetahui besar kadar senyawa curcuminoid terlebih dahulu dipersiapkan 12 macam senyawa yang diukur, terdiri
dari 9 sampel standar, yang digunakan sebagai acuan untuk mengetahui kandungan curcuminoid didalam sampel dan 3
macam sampel yang akan diukur kadar curcuminoidnya. Pengukuran standar dan sampel dilakukan dengan beberapa tahap,
yaitu pertama, pengukuran (scan) spektrum sampel pertama sampai sampel ke 12 menggunakan monokromator dan sumber
cahaya lampu Tungsten-Halogen (range panjang gelombang 350-800 nm) dengan setting 200-600 nm. Dari pengukuran
diperoleh panjang gelombang puncak 425 nm. Dengan panjang gelombang tersebut selanjutnya dilakukan
pemindaian(scanning) 9 sampel standar untuk penentuan kurva standar hubungan antara berat senyawa dan area yang akan
dipakai untuk acuan dalam menentukan kadar senyawa didalam sampel. Hasil perhitungan kadar yang diperoleh dari 3
sampel temulawak adalah 0.178125 %, 0.178453 %, 0.180887 %. Disarankan juga kemungkinan penggunaan kamera digital
sebagai pengganti scanner untuk menentukan jenis dan kadar zat/senyawa.

Kata Kunci: Sampel temulawak, Standard Curcuminoid, TLC

I. PENDAHULUAN adalah ; kromatografi kertas, kromatografi lapisan

tipis ( Thin Layer Chromatography ), kromatografi
1.1 Latar Belakang
gas ( Gas Chromatography ), dan kromatografi cair
Didalam sebuah produk seperti cairan vitamin
kinerja tinggi ( High Performance Liquid
atau obat sejenis lainnya terkadang sulit untuk
Chromatography ). Pada kromatografi lapisan tipis,
membedakan dengan benar tentang unsur / zat yang
terdapat lapisan tipis ( tebal 0.1-2 mm ) yang terdiri
terkandung didalamnya. Dengan adanya kemajuan
atas bahan padat yang dilapiskan kepada permukaan
teknologi dibidang elektrokimia saat ini telah
penyangga datar ( plat ), yang biasanya terbuat dari
memiliki peranan penting dalam menentukan berbagai
kaca, tetapi dapat pula terbuat dari plat polimer atau
kandungan / unsur zat didalam cairan. Adapun
logam. Lapisan yang melekat pada permukaan dengan
teknologi yang masih digunakan saat ini seperti
bantuan bahan pengikat, biasanya kalsium sulfat dan
penerapan metode kromatografi. Kromatografi
kromatografi lapisan tipis dapat digunakan untuk
(Chromatography) sebenarnya secara harfiah berasal
keperluan yang luas dalam pemisahan-pemisahan.
dari nama "warna menulis", namun tak ada hubungan
Seperti halnya, kromatografi lapisan tipis yang banyak
secara langsung kecuali senyawa pertama yang
digunakan akhir-akhir ini oleh sebagian besar
mengalami pemisahan dengan cara ini adalah pigmen
laboratorium di Indonesia menggunakan alat berupa
hijau tumbuhan, seperti klorofil. Kromatografi adalah
TLC Scanner 3 merk CAMAG ( Made in Switzerland
suatu nama yang diberikan untuk teknik pemisahan
) dengan metode kromatografi lapisan tipis, yang
tertentu. Pada dasarnya semua cara kromatografi
mana proses pengambilan sample yang berada pada
menggunakan dua fasa yaitu yang pertama, fasa tetap
permukaan plat (tempat sample yang telah dilakukan
( Stationary Phase ) dan kedua, fasa bergerak ( Mobile
pemisahan) menggunakan scanner didalam alat
Phase ). Dengan adanya penelitian-penelitian baru
tersebut kemudian hasilnya ditransfer ke PC dan
yang memungkinkan untuk menerapkan prinsip
dilakukan proses selanjutnya. Dan kelebihan dari TLC
kromatografi pada senyawa-senyawa yang tak
Scanner 3 CAMAG sendiri adalah mampu
berwarna termasuk gas. Adapun perkembangan pesat
dari beberapa jenis sistem kromatografi diantaranya

1
 menganalisa senyawa berwarna dan tak berwarna, (HPLC). Demikian juga peralatan yang digunakan.
membutuhkan waktu yang relatif cepat. Dalam kromatografi lapisan tipis, peralatan yang
digunakan lebih sederhana dan dapat dikatakan
1.2 Perumusan Masalah
hampir semua laboratorium dapat melaksanakan
Berdasarkan latar belakang diatas maka akan setiap saat secara cepat.
timbul permasalahan yaitu bagaimana menentukan
kadar senyawa temulawak dengan menggunakan
TLC.
1.3 Batasan Masalah
Adapun beberapa batasan masalah yang terdapat
dalam penelitian ini adalah :
1. Plat lapisan tipis yang akan dipakai adalah plat
yang siap digunakan dan tidak perlu untuk
membuatnya.
2. Tidak membahas perlakuan senyawa secara kimia
(a) (b)
dengan mendetail.
Gambar 2.1 Sampel yang terdapat pada plat
1.4 Tujuan Penelitian Tugas Akhir
(a) Sample yang telah diteteskan pada plate
Adapun tujuan dari tugas akhir ini adalah untuk (sebelum masuk bejana TLC).
menentukan kadar senyawa temulawak dengan
(b) Sample yang telah mengalami
menggunakan TLC serta menganalisa kadar tersebut.
pemisahan (setelah masuk bejana
1.5 Metodologi Penelitian TLC).(wikipedia,2009)
Beberapa keuntungan dari kromatografi lapisan
Metodologi yang digunakan untuk menyelesaikan
tipis ini:
tugas akhir ini adalah sebagai berikut :
1. Studi pustaka Kromatografi lapisan tipis banyak digunakan
Mempelajari bahan-bahan pustaka berhubungan untuk tujuan analisis.
dengan permasalahan yang dihadapi serta Identifikasi pemisahan komponen dapat
mempelajari metode TLC. dilakukan dengan pereaksi warna, fluorosensi
2. Pengambilan Data atau dengan radiasi menggunakan sinar
Untuk pengambilan data dengan menggunakan ultraviolet.
alat TLC Scanner 3 CAMAG. Data yang Metode pemisahan senyawa yang cepat, mudah
digunakan adalah standard curcuminoid dan dan menggunakan peralatan sederhana dalam
sampel temulawak. menentukan kadar.
3. Analisa data Dapat digunakan sampel yang sangat kecil
Yang meliputi analisa data hasil nilai kadar (mikro).
senyawa yang diambil oleh TLC.
4. Penyusunan laporan dan kesimpulan.
Pada tahap ini dilakukan penyusunan laporan
hasil analisis kedalam format penulisan tugas akhir
dengan disertai kesimpulan dan saran.

II. TEORI PENUNJANG

Dalam bab ini akan dipaparkan mengenai teori
teori dasar yang dipergunakan untuk menunjang
penelitian Tugas Akhir ini.
2.2 Kromatografi Lapisan Tipis (Thin Layer
Chromatography)
Kromatografi adalah teknik pemisahan
campuran didasarkan atas perbedaan distribusi dari
komponen-komponen campuran tersebut diantara
dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase
gerak (cair atau gas).
Bila fase diam berupa zat padat yang aktif, maka
dikenal dengan istilah kromatografi penyerapan
(adsorption chromatography). Kromatografi lapisan
tipis dalam pelaksanaannya lebih mudah dan lebih
murah dibandingkan dengan kromatografi kolom
Gambar 2.3 Chamber/bejana TLC (proses
pemisahan) (The Story TLC, Wikipedia, 2009)
Semua alat kromatografi bekerja berdasarkan
metode kromatografi. Kromatografi juga
merupakan pemisahan camuran senyawa menjadi
senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya.
Pemisahan senyawa biasanya menggunakan
beberapa teknik kromatografi. Pemilihan teknik
kromatografi sebagian besar bergantung pada sifat
kelarutan senyawa yang akan dipisahkan. Semua
kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa
padatan, atau kombinasi cairan-padatan) dan fase
gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerak mengalir

2
 melalui fase diam dan membawa komponen- permukaan dari plat yang bersih dengan jari tangan
komponen yang terdapat dalam campuran. karena bekas jari tangan yang menempel akan
Komponen-komponen yang berbeda bergerak merubah tebal dari permukaan penyerap pada plat.
pada laju pergerakan yang berbeda. Kromatografi Untuk membuat penyerap, pertama bahan
kebanyakan digunakan sebagai alat analisa penyerap dicampur dengan air sampai menjadi
kuantitatif tetapi dapat juga dipakai secara kualitatif bubur, biasanya dengan perbandingan x gram
(pembandingan terhadap senyawa-senyawa penyerap dan 2x ml air. Bubur diaduk sampai rata
referensi) dan dituangkan diatas plat dengan berbagai cara.
Pemisahan secara kromatografi dilakukan Tebal lapisan merupakan faktor yang paling penting
dengan beberapa sifat fisika umum dari molekul, dalam kromatografi lapisan tipis. Tebal standard
yaitu sebagai berikut : adalah 250 mikron. Lapisan-lapisan yang lebih tebal
Kecenderungan molekul untuk melarut dalam ( 0.5 - 2.0 mm ) digunakan untuk pemisahan-
cairan (kelarutan). pemisahan yang sifatnya besar, dengan
Kecenderungan molekul untuk melekat pada menggunakan penyerap hingga 250 mg untuk plat
permukaan halus (adsorpsi/penyerapan). dengan ukuran 20 x 20 cm. Salah satu kesukaran
Kecenderungan molekul untuk menguap atau dengan lapisan tebal ialah adanya tendensi
berubah ke keadaan uap. mengelupas bila kering.
Kromatografi Lapisan Tipis (KLT) merupakan Tabel 2.1 Perbandingan untuk membuat bubur
cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa penyerap
murninya dan mengetahui kuantitasnya. Bahan
lapisan tipis seperti silika gel adalah senyawa yang Perbandi
Medium bubur
tidak bereaksi dengan pereaksi pereaksi seperti Penyerap ngan, gram
penyerap
asam sulfat. dalam ml
Data yang diperoleh dari KLT adalah nilai Rf yang Silika gel G Metilena klorida : 35 gr dalam
berguna untuk identifikasi senyawa. Nilai Rf untuk metanol 100 ml
senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai Rf (2 : 1, v/v)
dari senyawa standar. Nilai Rf dapat didefinisikan Serbuk Metilena klorida : 50 gr dalam
sebagai jarak yang ditempuh oleh senyawa dari titik selulosa metanol 100 ml
asal dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut (50 : 50, v/v)
dari titik asal. Oleh karena itu bilangan Rf selalu Alumina Metilena klorida : 60 gr dalam
lebih kecil dari 1,0. metanol 100 ml
(70 : 30, v/v)
2.2 Pembuatan Lapisan Tipis ( Thin Layer )
(Gritter, Bobbitt, and Schwarting, 1991)
Penyerap dituangkan diatas permukaan plat
2.2.1 Penyerap-penyerap
yang kondisi bentuknya baik, biasanya digunakan
plat kaca / aluminium. Ukuran yang digunakan Sifat yang terpenting dari penyerap adalah
tergantung pada jenis dari pemisahan yang akan besar partikel bubur penyerap dan homogenitasnya,
dilakukan dan jenis dari bejana kromatografi. karena adhesi terhadap plat sangat tergantung pada
Seringkali bentuk plat kaca / aluminium dijual kedua sifat tersebut. Besarnya partikel yang biasa
digunakan adalah 1 25 mikron. Partikel yang
butirannya sangat kasar tidak akan memberikan
hasil yang memuaskan dan salah satu alasan untuk
menaikkan hasil pemisahan adalah menggunakan
penyerap yang butirannya halus. Sedangkan dalam
kolom partikel yang sangat halus akan
mengakibatkan aliran pelarut menjadi lambat, pada
lapisan tipis butiran yang halus memberikan aliran
pelarut yang lebih cepat.
Beberapa contoh penyerap yang digunakan
untuk pemisahan-pemisahan dalam kromatografi
lapisan tipis adalah sebagai berikut :
dengan ukuran 20 x 5 cm atau 20 x 20 cm, dua Tabel 2.2 Macam-macam penyerap untuk
ukuran ini dianggap sebagai standard. Hal yang kromatografi lapisan tipis
penting yaitu bahwa permukaan dari plat harus rata.
Zat padat Digunakan untuk memisahkan
Plat-plat kaca / aluminium sebelum dipakai
dicuci terlebih dahulu dengan air dan detergent
Silika Asam-asam amino, alkaloid, gula,
kemudian dikeringkan. Terakhir, dapat dicuci
asam-asam lemak, lipida, minyak
dengan aseton, tetapi hal ini tidak mesti dilakukan.
esensial, anion, dan kation organic,
Satu hal yang perlu diperhatikan jangan menyentuh
sterol, terpenoid.

3
 Alumina Alkaloid, zat warna, fenol, steroid,
vitamin-vitamin, karoten, asam-asam
amino.
Kieselguhr Gula, oligosakarida, asam-asam
lemak, trigliserida, asam-asam
amino, steroid.
Bubuk Asam-asam amino, alkaloid,
selulose nukleotida.
Pati Asam-asam amino.
Sephadex Asam-asam amino, protein.
Silika Gel. Merupakan penyerap yag paling
banyak dipakai dalam kromatografi lapisan tipis.
Sebagian besar silika gel bersifat sedikit asam maka
asam sering agak mudah dipisahkan. Adapun
pengikat yang digunakan adalah kalsium sulfat dan
kebanyakan biasanya pada saat membeli telah diberi
pengikat.
Alumina. Salah satu penyerap yang dipakai
untuk pemisahan basa dan terdapat dalam beberapa
bentuk modifikasi. Alumina dapat diperlakukan
memakai asam klorida untuk diubah menjadi bentuk
asam atau memakai asam nitrat untuk diubah
menjadi bentuk netral. Dalam menggunakan
alumina biasanya dapat ditambah dengan pengikat
saat membeli di toko-toko perdagangan kimia.
2.3 Nilai Rf Senyawa terhadap Pelarut
Senyawa-senyawa yang terpisah pada lapisan
tipis lebih baik dikerjakan dengan pereaksi kimia
dan reaksi-reaksi warna. Pada umumnya untuk
identifikasi senyawa menggunakan harga Rf. Harga
Rf didefinisikan sebagai berikut :
Harga Rf = Jarak yang ditempuh oleh senyawa dari titik asal
Jarak yang ditempuh oleh pelarut dari titik asal
(2.1)
Harga Rf untuk senyawa-senyawa murni dapat
dibandingkan dengan harga-harga standard. Perlu
diperhatikan bahwa harga-harga Rf yang diperoleh
hanya berlaku untuk campuran tertentu dari pelarut
dan penyerap yang digunakan, meskipun demikian
harga Rf untuk berbagai campuran dari pelarut dan
penyerap dapat diperoleh. Senyawa standard
biasanya memiliki sifat-sifat kimia yang mirip
dengan senyawa yang dipisahkan pada
kromatogram.
Dalam kromatografi lapisan tipis perlu
mengusahakan atmosfer bejana dalam keadaan
jenuh dengan uap pelarut. Bila atmosfer dalam
bejana tidak jenuh dengan uap pelarut dan
digunakan pelarut campuran maka akan terjadi
pengembangan dengan permukaan pelarut yang
berbentuk cekung dan fasa bergerak lebih cepat
dibagian tepi-tepi plat daripada dibagian tengahnya.
Keadaan ini harus dicegah karena dapat
menimbulkan tidak ratanya dalam memisahkan
tiap-tiap senyawa / sampel.
4
2.4 Sampel Temulawak
Temulawak telah lama diketahui
mengandung senyawa kimia yang mempunyai
keaktifan fisiologi, yaitu curcuminoid dan minyak
atsiri. Curcuminoid terdiri atas senyawa berwarna
kuning curcumin dan turunannya
(desmetoksikurkumin dan bis-
desmetoksikurkumin). Curcuminoid yang
memberikan warna kuning pada rimpang bersifat
antibakteria, anti-kanker, anti-tumor dan anti-
radang, mengandung anti-oksidan. Sedangkan
minyak atsiri berbau dan berasa yang khas.
Kandungan minyak atsiri pada rimpang temulawak
3-12% Sedangkan untuk curcuminoid, dalam
temulawak 1-2%. Untuk menentukan persentase ini
dilakukan pemanasan pada temperatur 50-55 C ,
supaya tidak merusak zat aktifnya dan untuk
mendapatkan warna yang baik dari curcuminoid.
Kajian dan penyelidikan atas temulawak
(Curcuma xanthorrhiza) membuktikan bahwa
rimpangnya mengandungi banyak zat kimiawi yang
memberikan pengaruh positif terhadap organ dalam
manusia seperti empedu, hati dan pankreas. Selain
itu dapat menambah selera makan, berkemampuan
merangsang perjalanan sistem hormon metabolisme
dalam tubuh. Komposisi kimia dari rimpang
temulawak adalah protein pati sebesar 29-30 persen,
curcumin satu sampai dua persen, dan minyak
atsirinya antara 6 hingga 10 persen. Daging buah /
umbi (rimpang) temulawak bentuknya bulat seperti
telur dan berukuran besar dan mempunyai beberapa
kandungan senyawa kimia antara lain berupa
fellandrean dan turmerol atau yang sering disebut
minyak menguap. Kemudian minyak atsiri, kamfer,
glukosida, foluymetik karbinol. Temulawak
mengandung minyak atsiri seperti limonina yang
mengharumkan, sedangkan kandungan flavonoida-
nya berkhasiat menyembuhkan radang. Minyak
atsiri juga bisa membunuh mikroba. Komponen
utama rimpang temulawak adalah :
Pati 48.18% - 59.64% : membantu proses
metabolism dan fisiologi organ badan.
Protein 29.00% - 30.00%
Serat kasar mineral 2.58% - 4.83% :
memulihkan kecergasan badan (bersifat tonik).
Curcuminoid 1.60% - 2.20% : melancarkan
proses pencernaan tubuh.
Minyak asiri 6.00% - 10.00% : meningkatkan
fungsi ginjal
Phelandren : melancarkan pengeluaran toksik
dalam tubuh melalui air kencing.
Turmerol : membantu proses metabolisme
Borneol : memulihkan kesehatan tubuh badan
akibat serangan penyakit.
2.5 Detektor
Detektor pada alat TLC Scanner 3 CAMAG
menggunakan photomultipliers. Komponen
didalam photomultipier (PMT) sendiri adalah
 photomultiplier tube (tabung vakum
photomultiplier), photocathode (katoda metalik
yang terbuat dari bahan logam multi alkali),
struktur dynode (berbentuk lempengan cekung)
dan anoda (memilki spectral sensitivity 185-850
nm).
Prinsip kerja dari PMT adalah permukaan
logam katoda disinari dengan seberkas cahaya
dan sejumlah elektron terpancar dari
permukaannya, yang biasa disebut dengan efek
fotoelektrik dengan kondisi hampa udara.
Gambar 2.5 Komponen Monokromator secara
umum

Gambar 2.4 Konstruksi photomultiplier tube dan

bentuk fisik photomultiplier.

Elektron yang terpancar dan terlepas karena Gambar 2.6 Monokromator dengan grating
adanya sekumpulan energi yang timbul dan Fungsi prisma adalah untuk memisahkan sinar
dikuatkan oleh susunan komponen dynode (linier- polikromatis dari sumber cahaya menjadi sinar
focused type) secara berurutan dan keluar monokromatis. Bila seberkas cahaya dilewatkan
mengenai anoda. Elektron tersebut terikat dalam melalui sebuah prisma, maka cahaya tersebut akan
logam dengan energi W (eV), yang dikenal diuraikan menjadi beberapa warna (terdapat berbagai
sebagai fungsi kerja (work function), logam yang warna merah, jingga, hijau, biru, dll).
berbeda memilki fungsi kerja yang berbeda pula.
Dan logam katoda yang digunakan sebagai
permukaan fotosensitif, dibawah panjang
gelombang pancung (cutoff wavelength) c ,
sembarang sumber cahaya, selemah apapun, akan
menyebabkan terjadinya pemancaran
fotoelektron.
Cahaya yang masuk difokuskan dengan
melewati focusing electrode dan elektron
mengenai dynode pertama kemudian dipantulkan
dan dipancarkan ke dynode kedua sampai ke
dynode yang terakhir (proses pengalian) sehingga
terjadi muatan elektron yang lebih besar dan
timbul tegangan.
Gambar 2.7 Grating (modus refleksi)
2.6 Monokromator
Beda lintasan (modus refleksi) :
Monokromator adalah alat yang paling AB+CD = a(sin(m)+sin(i)) (2.2)
umum dipakai untuk menghasilkan berkas radiasi
dengan satu panjang gelombang. Monokromator Sehingga kondisi untuk puncak
untuk radiasi ultra violet, sinar tampak dan infra maksimum menjadi:
merah adalah serupa, yaitu mempunyai celah
a(sin(m)+sin(i)) = m (2.3)
(slit), lensa, cermin dan prisma atau grating.
Terdapat 2 macam monokromator yaitu 2.7 Absorbansi dan Transmitansi
monokromator prisma Bunsen dan monokromator
Penyerapan hanya terjadi jika energi foton yang
grating Czerney-Turney.
datang cocok dengan energi yang diperlukan untuk
memindahkan satu elektron terluarnya dari tingkat
dasar ke tingkat tereksitasi (atau dari pita valensi ke

5
 pita konduksi di dalam zat padat). Dengan
spektroskopi dari cahaya transmisi bisa diketahui
tingkat/pita energi dari suatu atom/molekul/zat
padat.
2.8
Gambar 2.8 Proses terjadinya energi dengan bahan
Berkas radiasi elektromagnet bila dilewatkan
pada sampel kimia maka sebagian akan terabsorpsi.
Energi elektromagnet yang ditransfer ke molekul
sampel akan menaikan tingkat energi (tingkat
tereksitasi). Molekul akan dieksitasi sesuai dengan
panjang gelombang yang diserapnya.
Rumus yang digunakan untuk menghitung besarnya
energi yang diserap:
E = h x = h x C / = h x C / v (2.4)
dimana, E = energi yang diserap
h = tetapan Planck = 6,626 x 10-34 Joule.det
v = frekuensi
C = kecepatan cahaya = 2,998 x 108 m/det
= panjang gelombang
= bilangan gelombang
Gambar 2.9 Hubungan antara absorbance dengan
penjang gelombang
Absorbansi dengan simbol A dari suatu
larutan merupakan logaritma dari 1/T atau
logaritma Io/It.
A = log (1/T) = log (Io/It) = - log (T) (2.5)
dimana, A = Absorbansi / serapan
I o = Intensitas sinar yang datang
It = Intensitas sinar yang diteruskan
T = Transmitance / transmitansi
Transmitansi
Apabila suatu berkas sinar radiasi dengan
intensitas Io dilewatkan melalui suatu larutan
dalam wadah transparan maka sebagian radiasi
akan diserap sehingga intensitas radiasi yang
diteruskan It menjadi lebih kecil dari Io.
6
Transmitansi dengan simbol T dari larutan
merupakan fraksi dari radiasi yang diteruskan
atau ditansmisikan oleh larutan, yaitu :
T = It/Io (2.6)
Transmitansi biasanya dinyatakan dalam persen
(%).
TLC Scanner 3 CAMAG
Alat TLC Scanner 3 CAMAG, terdiri atas
bagian-bagian elektronik, yaitu :
A compartment for plate positioning (with
motor driver).
Optical system.
Three light source ( Deuterium lamp,
Tungsten halogen lamp, Mercury vapor
lamp ).
Scanner setup.
Terdapat 2 macam cara sistem kerja / sistem
pengukuran TLC Scanner 3 CAMAG, antara lain:
1. Absorbance Mode.
2. Fluorescence Mode.
Gambar 2.10 TLC Scanner 3 (CAMAG) (Service Manual
Book TLC Scanner 3 CAMAG)
Absorbance Mode
Setelah sampel pada plat TLC mengalami
pemisahan, selanjutnya plat TLC dimasukkan
kedalam alat TLC Scanner untuk dilakukan
pengukuran. Dan ditentukan range panjang
gelombang, lalu di start/ dimulai. Prinsip kerja
dengan cara absorbance, yaitu energy cahaya dari
sumber lampu yang telah dipilih masuk ke
monokromator (M) kemudian cahaya yang keluar
dari monokromator akan mengenai mirror dan
dipantulkan menurun mengenai dan melalui Beam
Splitter dan langsung mengenai permukaan putih
pada plat TLC yang kemudian akan dipantulkan ke
detektor pengukuran. Sebagian cahaya yang
mengenai Beam Splitter dipantulkan ke reference
detektor. Reference detektor berfungsi untuk
mengatur sensitivity / kepekaan cahaya secara
otomatis pada detektor pengukuran sehingga
mendapatkan pancaran cahaya lampu yang tepat
pada panjang gelombang tertentu. Kedua detektor
memakai photomultiplers yang mana lebih sensitive
dengan range panjang gelombang yang besar.
 Energi cahaya yang dipantulkan dideteksi oleh
photomulplier, yang mana photon
memukul/mengenai katoda photomultiplier dan
dikuatkan oleh dynodes. Kemudian kromatogram
(sampel pada plat) discan dan timbul perbedaan
tegangan yang dihasilkan pada detektor yang mana
diplot sebagai fungsi posisi pengukuran untuk hasil
dari sebuah absorption scan. Jika background plat
discan, intensitas cahaya yang penuh dipantulkan
kembali dan menghasilkan sinyal 100% karena
disana tidak ada zat yang menyerap cahaya. Bila
daerah kromatogram discan kemudian akan
menyerap bagian penyinaran cahaya dan
memancarkan intensitas cahaya rendah daripada
background plat kemudian akan menghasilkan
sinyal pada detektor.
Sistem scanning bekerja berdasarkan pergerakan
plat TLC pada compartment secara otomatis dan
mempunyai posisi yang dapat diatur terhadap
sumbu x dan y. Plat TLC / objek pengukuran yang
berada pada compartment digerakkan oleh motor
stepper yang terletak dibawah sorotan lampu.
Gambar 2.11 Diagram TLC Scanner 3 absorbance
mode (Service Manual Book TLC Scanner 3 CAMAG)
Absorbance adalah perbedaan diantara cahaya
yang terjadi dan cahaya yang terserap diukur
sebagai fungsi karakteristik zat. Dengan kata lain,
absorbance adalah perbedaan diantara pantulan
cahaya yang diukur dari tempat yang kosong pada
plat TLC dan pantulan cahaya dari zat pada plat
TLC yang sama.
Flourescence Mode
Prinsip kerja dengan cara fluorescence sama
dengan cara absorbance, yaitu pada saat melakukan
scan pada suatu zat pada plat TLC, background plat
tidak ada sinyal karena adanya panjang gelombang
yang tidak diperlukan akan dihalangi oleh filter.
Jika daerah fluorescent (sampel pada plat)
mengalami scanning maka akan memancarkan
cahaya yang akan masuk dan melewati filter
kemudian menghasilkan sinyal pada detektor.
Pengukuran fluorescent ini hanya untuk
menganalisa zat yang tidak tampak.
7
ADC PC
Gambar 2.12 Diagram TLC Scanner 3
fluorescence mode (Service Manual Book TLC Scanner 3 CAMAG)
Hasil sinyal output dari detektor dihubungkan
dengan perangkat elektronik seperti amplifier dan
A/D Converter. Setelah sinyal output dari detektor
masuk ke A/D Converter, lalu sinyal output
(analog) ini akan diubah menjadi sinyal digital,
yang mana akan dihubungkan langsung ke PC
melalui connection serial interface RS232. Dengan
didukungnya software WinCATS maka dapat
mengetahui nilai konsentrasi zat dan dapat
menampilkan gambar Peak (puncak kromatogram),
yang mana gambar peak ini berbentuk mirip dengan
kurva Gaussian, yang menunjukkan karakteristik
tersendiri dari zat yang diukur.
2.9 Cara Menghitung Kadar
Setelah membuat kurva kalibrasi, maka area
sampel dapat dimasukkan kedalam persamaan
regresi linier pada kurva kalibrasi tersebut sehingga
didapatkan nilai dari berat senyawa sampel.
Selanjutnya untuk menentukan nilai kadar sampel
dengan menggunakan perhitungan sebagai berikut :
n = Volume Pelarut Sampel x Berat Sampel
Volume Inject Sampel
Kadar dalam serbuk = n x 100%
Berat Serbuk Sampel
(2.7)
3.0 Cara Membuat Kurva Kalibrasi
Setelah proses scan selesai maka didapat hasil
area dan peak kromatogram sampel dan selanjutnya
dibuat kurva kalibrasi dengan cara menggunakan
persamaan regresi linier :
Y = ax + b (2.8)
dimana, y = Area
a = Slope
x = Berat Senyawa
b = Intercept
Untuk membuat kurva kalibrasi, data hasil area
dan berat senyawa standard yang diketahui dari
konsentrasinya.
Untuk mengetahui berat senyawa yang didapat
dari besar inject sampel, yang kemudian
 diinjeksikan ke plat lalu terjadi proses penguapan 3.3 Prosedur Persiapan dan Inject Sampel
pelarut dalam sampel setelah dikeringkan sehingga
hanya terdapat berat senyawa pada plat dan dengan PERSIAPAN
menggunakan rumus : SAMPEL &
INJECT KE PLAT KERINGKAN
MICROPIPET 100
Berat senyawa = larutan standard x besarnya inject L
(2.9)
Gambar 3.2 Diagram Persiapan dan Inject Sampel
III. METODOLOGI PENELITIAN
Sebelum melakukan prosedur ini, plat lapisan
Pada bab ini akan dijelaskan metodologi dan tipis yang digunakan adalah dengan ukuran 20 x 10
prosedur percobaan yang digunakan dalam cm (dibagi menjadi 2 yang semula ukurannya 20 x
pelaksanaan penelitian tugas akhir ini. 20 cm) lalu menyiapkan standard curcuminoid dan
3.1 Metodologi Penelitian sampel temulawak masing-masing 1000 ppm dan
menginjeksikan sampel tersebut, yaitu sebagai
Adapun metodologi yang digunakan pada berikut :
penelitian ini dapat dilihat pada gambar. 3.1 sebagai 1. Ambil standard curcuminoid sekitar 5 l dari
berikut : 1000 ppm dengan menggunakan pipa kapiler
MULAI
kaca / micropipet.
2. Plat lapisan tipis diletakkan diatas permukaan
yang datar.
3. Tentukan jarak 10 mm dari bagian bawah plat
PERSIAPAN STANDARD,
SAMPEL, DAN PLAT LAPISAN
lalu batas kanan dan kiri 15 mm (untuk
TIPIS meneteskan 9 standard) dan batas sampel satu
dengan yang lain 15.4 mm dengan menggunakan
pensil.
4. Untuk penempatan sampel, ujung penetes
INJECT STANDARD DAN (micropipet) tepat sedikit diatas permukaan
SAMPEL PADA PLAT MENGHITUNG KADAR
lapisan tipis kemudian teteskan ( inject ) sampel
standard yang berada didalam pipa kapiler kaca /
micropipet tersebut sebesar 0.1 l (sampel
pertama).
PROSES PEMISAHAN Tidak 5. Biarkan beberapa saat hingga kering (untuk
ANALISA DATA
PERHITUNGAN sampel standard yang diketahui konsentrasinya)
sampai beberapa kali dengan nilai konsentrasi
Ya
yang berbeda-beda (0.1 0.9 l).
PROSES PENGUKURAN 6. Lakukan hal yang sama pada sampel yang belum
diketahui nilai konsentrasinya, yaitu sampel
HASIL ANALISA temulawak sebanyak 3 kali dengan meneteskan /
inject masing-masing sebesar 20 l).
BUAT KURVA
KALIBRASI
7. Setelah dilakukan prosedur diatas (langkah no.
1-6) maka secara langsung melanjutkan langkah
SELESAI prosedur pemisahan sampel.
Untuk membuat larutan standard 1000 ppm
Gambar 3.1 Diagram Alir Metodologi Penelitian dari melarutkan 10 mg serbuk standar curcuminoid
dengan pelarut metanol 10 ml sedangkan untuk
3.2 Peralatan dan Bahan sampel 1000 ppm dari melarutkan 100 mg serbuk
Terdapat beberapa peralatan dan bahan yang sampel temulawak dengan pelarut metanol 5 ml.
digunakan untuk menunjang penelitian ini.
Peralatan yang digunakan meliputi :
1. Plat lapisan tipis ukuran 20 x 20 cm, tebal 0.1-2
mm, yang terbuat dari plat aluminium tipis dan
telah dilapisi silika gel.
2. Serbuk standard curcuminoid.
3. Sampel yang akan dianalisa, berupa serbuk
temulawak.
4. Solvent / pelarut (sesuai dengan perlakuan
sampel tertentu).
5. Micropipet 100 l.
6. Bejana kaca.
7. TLC Scanner 3 CAMAG. Gambar 3.3 Standard curcuminoid dan sampel
temulawak yang diinjeksikan pada plat

8

3.4 Prosedur Proses Pemisahan Sampel
SIAPKAN MASUKKAN
MASUKKAN
BEJANA, PELARUT
PLAT KEDALAM
PELARUT, & KEDALAM
BEJANA
PLAT SAMPEL BEJANA
Gambar 3.4 Diagram Proses Pemisahan
Proses Pemisahan Sampel ini dimaksudkan
dengan cara pengembangan / penguraian sampel
didalam bejana, yaitu sebagai berikut :
1. Plat lapisan tipis yang telah ditetesi sampel
tersebut dimasukkan kedalam suatu bejana
yang berisi pelarut (heksane dan etil asetat ;
1:1) yang dalamnya sekitar 0.8 cm yang
bertindak sebagai fasa gerak.
2. Tinggi pelarut dalam bejana harus dibawah titik
sampel yang berada pada plat lapisan tipis.
Jangan sampai titik sampel tercelup dalam
pelarut.
3. Bejana ditutup dengan penutup dan pelarut
dibiarkan merambat naik melewati sampel
sampai kira-kira tiga perempat plat lapisan
tipis.
4. Setelah pelarut naik sampai hampir ujung atas
lapisan (sekitar 8 cm), lapisan tipis diambil
dari bejana sehingga terdapat penampakan
uraian/pengembangan sampel, waktu rata-rata
untuk plat lapisan tipis pada silika gel adalah
sekitar 20-30 menit. Biarkan beberapa saat
hingga kering.
Gambar 3.5 Hasil pemisahan standard curcuminoid
dan sampel temulawak pada plat
3.5 Proses Pengukuran (Scan) Standard dan Sampel
LAKUKAN HASIL BUAT KURVA
SCANNING (PEAK & AREA) KALIBRASI
LAMPU
TUNGSTEN- MONOKROMATOR SAMPEL DETEKTOR
HALOGEN
Gambar 3.6 Diagram Proses Pengukuran
Sebelum memulai scan spektrum terlebih
dahulu mengatur posisi scan pada sumbu y didalam
program WinCATS :
Batas scan awal = 21.6 mm
Batas scan akhir = 38.6 mm
Setelah itu, plat dimasukkan kedalam alat TLC
TUTUP BEJANA
Scanner dan terlebih dahulu melakukan pengukuran
spektrum. Pengukuran ( scan ) spektrum yang
dimaksud adalah perbedaan diantara pantulan
cahaya yang diukur dari tempat yang kosong pada
plat TLC dan pantulan cahaya dari zat / sampel
pada plat TLC yang sama.
Untuk pengukuran spektrum sampel pertama
dengan cara pilih sumber cahaya lampu Tungsten-
Halogen (range panjang gelombang 350-800 nm)
dengan setting 200-600 nm lalu start maka alat akan
mengukur spektrum sampel pertama sampai sampel
berikutnya. Pengukuran diawali dengan mengatur
panjang gelombang 200 nm oleh monokromator dan
secara bertahap berpindah ke panjang gelombang
berikutnya (210,220,dst) sampai mencapai panjang
gelombang terakhir (600 nm). Setelah selesai
sampai sampel yang terakhir maka akan
menampilkan gambar spektrum masing-masing
sampel. Kemudian pilih panjang gelombang puncak
dari gambar tersebut, yaitu 425 nm.
Setelah melakukan pengukuran spektrum
selanjutnya dilakukan scanning standard dan sampel
dengan cara energi cahaya dari sumber cahaya
lampu Tungsten-Halogen (range panjang
gelombang 350-800 nm) dengan setting 425 nm
masuk ke monokromator kemudian cahaya yang
keluar dari monokromator akan mengenai mirror
dan dipantulkan menurun mengenai dan melalui
Beam Splitter dan langsung mengenai permukaan
putih pada plat TLC yang kemudian akan
dipantulkan ke detektor pengukuran. Sebagian
cahaya yang mengenai Beam Splitter dipantulkan
ke reference detektor. Reference detektor berfungsi
untuk mengatur sensitivity / kepekaan cahaya secara
otomatis pada detektor pengukuran sehingga
mendapatkan pancaran cahaya lampu yang tepat
pada panjang gelombang tertentu. Kedua detektor
memakai photomultiplers yang mana lebih sensitive
dengan range panjang gelombang yang besar.
Pada saat proses scan, compartment pembawa
plat bergerak perlahan dari ujung sampel pertama
mengenai dan melewati cahaya slit sampai akhir
MENGHITUNG
sampel dan setelah itu akan menampilkan
SELESAI
KADAR peak/kurva (karena menghasilkan sinyal < 100%)
lalu bergerak kembali menuju sampel kedua tetapi
sebelum itu cahaya slit mengenai permukaan putih
pada plat / background plat dan tidak membentuk
peak/kurva (karena menghasilkan sinyal 100%).
Setelah selesai melewati permukaan putih,
selanjutnya cahaya slit mengenai sampel kedua
sampai akhir sampel dan menampilkan lagi
peak/kurva, begitu seterusnya sampai sampel yang
terakhir. Peak / kurva yang didapat adalah
berbentuk kurva terbalik karena pada saat scan
9
 sampel cahaya menyinari sampel lalu sampel
menyerap sebagian cahaya dan memantulkan
cahaya ke detektor sehingga menghasilkan energi
yang dipantulkan sampel lebih kecil daripada energi
datang saat menyinari sampel. Oleh karena itu,
detektor dilengkapi dengan rangkaian inverter, yang
berfungsi sebagai pembalik kurva menjadi keatas
sehingga menampilkan peak/kurva keatas seperti
kurva gaussian dan sekaligus untuk mempermudah
dalam pembacaan.
Hasil kedua sinyal output dari detektor timbul
perbedaan tegangan yang mana diplot sebagai
fungsi posisi pengukuran dan dihubungkan dengan
perangkat elektronik seperti amplifier sebagai
Gambar 3.8 Data Hasil Pengukuran Spektrum
penguatan sinyal lalu dihubungkan ke A/D
Converter, untuk mengubah sinyal analog Pada gambar spektrum diatas adalah hasil
(tegangan) dari amplifier menjadi sinyal digital pengukuran (scan) spektrum standard dan sampel
yang mana dapat dibaca dan dihubungkan langsung mulai dari panjang gelombang 200 600 nm, yang
ke PC melalui connection serial interface RS232. mana dapat ditentukan nilai panjang gelombang
Dengan didukungnya software WinCATS yang yang memiliki kesamaan pada puncak spektranya
terdapat pada PC maka dapat menampilkan gambar (425 nm).
peak (puncak kromatogram) dari sampel tersebut
serta area spektrum warna sampel dengan panjang
gelombang tertentu, yang mana gambar peak/kurva
ini berbentuk mirip dengan kurva Gaussian, yang
menunjukkan karakteristik tersendiri dari senyawa
yang diukur.
Sistem scanning bekerja berdasarkan
pergerakan plat TLC pada compartment secara
otomatis dan mempunyai posisi yang dapat diatur
terhadap sumbu x dan y. Plat TLC / objek sampel
pengukuran yang berada pada compartment
digerakkan oleh motor stepper yang terletak
dibawah sorotan lampu.

3.6 Hasil Pengukuran ( Scan ) Standard dan Sampel

Gambar 3.9 Kurva Standard Curcuminoid 1

Gambar 3.7 Bentuk spektrum 12 sampel

yang diukur

Gambar 3.10 Kurva Standard Curcuminoid 2

10

Gambar 3.11 Kurva Standard Curcuminoid 3
Dari kurva standard diatas adalah hasil
pengukuran (scan) dengan menggunakan panjang
gelombang 425 nm.
Gambar 3.12 Kurva Sampel Temulawak 1
IV.
4.1
4.1.1 Data Senyawa Standard Curcuminoid dan Senyawa
Gambar 3.13 Kurva Sampel Temulawak 2
11
Gambar 3.14 Kurva Sampel Temulawak 3
Dari ketiga kurva sampel temulawak diatas
diukur dengan menggunakan panjang gelombang 425
nm dan gambar 3.21 dibawah ini adalah kurva
keseluruhan dari 12 macam sampel (9 standard dan 3
sampel) dengan tampilan 2 dimensi.
Gambar 3.15 Kurva Standard dan Sampel secara
keseluruhan
Untuk gambar kurva standard dan sampel
diatas dengan menggunakan panjang gelombang
425 nm. Panjang gelombang tersebut didapat dari
hasil pengukuran (scan) spektrum 12 sampel dan
diperoleh panjang gelombang puncak sebesar 425
nm.
ANALISA DATA DAN PEMBAHASAN
Analisa Data
Temulawak.
Untuk plat lapisan tipis menggunakan plat
aluminium tipis dengan ukuran 20 x 10 cm (dibagi
menjadi 2 yang semula ukurannya 20 x 20 cm), dan
membuat batas kanan dan kiri 1.5 cm, batas bawah
dan atas 1 cm dari titik sampel ke tepi plat.
 Tabel 4.1 Data berat senyawa dan area
Berat
No. Nama Senyawa senyawa Area
(ng)
1. Standard Curcuminoid 1 100 7500
2. Standard Curcuminoid 2 200 13132.34
3. Standard Curcuminoid 3 300 17018.33
4. Standard Curcuminoid 4 400 20668.43
5. Standard Curcuminoid 5 500 22902.21
6. Standard Curcuminoid 6 600 24620.62
7. Standard Curcuminoid 7 700 26447.63 Gambar 4.2 Pengaturan batas sampel pada plat
8. Standard Curcuminoid 8 800 27259.92 Setelah selesai ditentukan batas sampel pada
9. Standard Curcuminoid 9 900 28230.53 plat lalu plat diambil dan dilakukan proses
pemisahan. Selanjutnya setelah proses pemisahan
10. Temulawak 1 712.50 26110.21 selesai lalu plat dimasukkan kembali kedalam TLC
dan diletakkan di posisi compartment yang sama
11. Temulawak 2 713.81 26142.49
dengan sebelumnya sehingga didapatkan hasil Rf :
12. Temulawak 3 723.55 26382.93

Gambar 4.3 Jarak Rf sampel dengan pelarut

Gambar 4.1 Batas antara tepi plat dengan sampel
Setelah menentukan batas sampel plat dengan
tanda pensil lalu masukkan plat kedalam alat TLC
dan letakkan diatas compartment dan tentukan batas
kiri/kanan antara tepi plat dengan sampel (sumbu x)
dan tentukan pula batas bawah antara tepi plat
dengan sampel (sumbu y) menggunakan keypad
TLC atau dapat mengatur langsung dari program
(gambar 4.2), dengan nilai sumbu x sebesar 15 mm
dan sumbu y sebesar 10 mm dan jarak sampel satu
dengan yang lain 15.4 mm.
Besarnya nilai a dan b diketahui dari hasil
positioning yang dilakukan secara otomatis pada
TLC, yaitu nilai a = 2 cm dan nilai b = 8 cm
sehingga menghasilkan nilai Rf sebesar 0.25 untuk
posisi standard curcuminoid 1 sampai 9 dan sampel
temulawak 1 sampai 2, sedangkan nilai Rf = 0.26
untuk sampel 3. Adanya perbedaan Rf tersebut
karena posisi sampel temulawak 3 sedikit naik
dibanding dengan sampel temulawak 2 (gambar
4.9).
Setelah melalui proses pemisahan, sampel yang
berada dipermukaan plat menjadi bentuk berat
senyawa. Dengan demikian didapatkan nilai berat
senyawa dengan rumus : (seperti pada pers.2.9)
Berat senyawa = 1000 ppm x 0.1 l
= 1000 g x 0.1 l
1000 l
= 0.1g = 100 ng senyawa
(standard curcuminoid 1)

12
4.1.2 Hasil Pengukuran ( Scan ) Standard dan Sampel
Gambar 4.4 Kurva Standard Curcuminoid 1
Pada gambar peak/kurva standard diatas
terdapat garis merah disebabkan karena posisi slit
tidak memulai / mengawali scan dari tepi senyawa
melainkan langsung menuju bagian sampel
sehingga mempunyai peak yang tidak berawal /
tidak sejajar.
Sedangkan pada gambar peak sampel terdapat 2
peak disebabkan karena adanya ketidaktelitian
dalam menentukan batas scan didalam pengaturan
posisi scan sehingga ada sebagian senyawa lain
yang ikut masuk sewaktu melakukan scan (gambar
4.6).
Gambar 4.5 Kurva Sampel Temulawak 1
13
Gambar 4.6 Kurva Standard dan Sampel secara
keseluruhan
Gambar diatas adalah peak semua standard dan
sampel dengan panjang gelombang 425 nm.
4.1.3 Membuat Kurva Kalibrasi
Setelah melalui proses scan maka akan
mendapatkan nilai area standard yang akan
digunakan didalam persamaan regresi linier dan
disertai pula besarnya berat senyawa standard, yaitu
sebagai berikut:
Y = ax + b
dimana, y = Area
a = Slope
x = Berat Senyawa
b = Intercept
Untuk membuat kurva kalibrasi, terdapat 9 data
hasil area standard dan berat senyawa standard yang
diketahui sebelumnya.
Gambar 4.7 Kurva Kalibrasi Standard Curcuminoid
Dari hasil kurva kalibrasi diatas didapatkan
persamaan linier :
Y = 24.69x + 8522 ; r = 0.95870
 3. Temulawak 3 0.180887
Rata-rata 0.179155

Pada hasil perhitungan diatas didapat kadar

curcuminoid didalam sampel temulawak 1 sebesar
0.178125 % dan didalam sampel temulawak 2
sebesar 0.178453 % serta didalam sampel
temulawak 3 sebesar 0.180887 %.
4.2 Pembahasan
Setelah melalui proses pemisahan, sampel yang
berada dipermukaan plat menjadi bentuk berat
senyawa dan tidak lagi terdapat pelarut didalam
Gambar 4.8 Data Kurva Kalibrasi Standard sampel karena pada saat selesai proses pemisahan
Curcuminoid dan telah dikeringkan maka pelarut dalam senyawa
Setelah membuat kurva kalibrasi, selanjutnya akan menguap secara sepenuhnya (sifat dari
dengan memasukkan nilai area sampel temulawak pelarut) sehingga dari besar inject 0.1 l yang
yang telah diketahui dari proses pengukuran diinjeksikan pada plat menjadi 100 ng setelah
sebelumnya kedalam persamaan regresi linier dan dikeringkan.
hasilnya akan didapat berupa berat senyawa sampel, Dalam menentukan besar inject diusahakan
yaitu sebagai berikut : mengambil sekecil mungkin dari larutan standard
(0.1 l) dan bila menentukan besar inject yang lebih
Tabel 4.2 Berat Senyawa Sampel besar maka akan terjadi tailing (spot sampel
Berat Senyawa mengekor) pada saat proses pemisahan dan
No. Nama Senyawa nantinya akan mempengaruhi pembacaan scanner
(ng)
ke luasan sampel. Spot sampel yang ideal adalah
1. Temulawak 1 712.50 spot sampel yag berbentuk bulat, elips, maupun
2. Temulawak 2 713.81 persegi. Besar inject pada sampel 20 l didapatkan
dari trial percobaan yang dilakukan lebih dari 3 kali
3. Temulawak 3 723.55 (untuk mengetahui masuk tidaknya sampel didalam
kurva kalibrasi).
Nilai atau jarak Rf pada standard dan sampel
4.1.4 Perhitungan Kadar yang timbul perbedaan nilai Rf itu tergantung pada
laju pergerakan pelarut dalam menggerakkan dan
Dari persamaan hasil regresi linier untuk kurva memisahkan sampel, biasanya hal ini sering terjadi
kalibrasi standard, didapat hubungan antara berat dan tidak mempengaruhi pengukuran (selisih Rf
senyawa standard dengan area. Setelah 1). Nilai Rf yang ideal atau yang dianjurkan
mendapatkan hasil dari kurva kalibrasi, area sampel sebesar 0.02 0.08 tetapi boleh diluar range
dimasukkan kedalam persamaan regresi linier lalu tersebut asalkan mempunyai kurva/peak yang bagus
akan mendapatkan berat senyawa sampel kemudian (kurva senyawa satu dengan yang lainnya terpisah
dilakukan perhitungan kadar senyawa. dan memiliki jarak) dan tidak boleh diluar range
Serbuk temulawak 100 mg dilarutkan kedalam 5 dan bila mempunyai kurva yang jelek / tidak bagus
ml metanol (MeOH) lalu mengambil sampel dari (kurva senyawa satu dengan yang lainnya saling
larutan tersebut sebesar 20 l dengan micropipet. berhimpitan dan tidak memiliki jarak) (ditunjukkan
(seperti pada pers.2.7) pada gambar 4.5).
Hasil pengukuran pada kurva standard dan
5000 l x 712.50 ng = 178125 ng = 0. 178125 mg
sampel yang tidak sejajar / berawal dari nol
20 l
disebabkan karena posisi slit tidak memulai /
Kadar dalam serbuk = 0. 178125 mg x 100 % mengawali scan dari tepi senyawa melainkan
100 mg langsung menuju bagian sampel dan adanya
ketidaktelitian dalam menentukan batas scan
= 0. 178125 %
didalam pengaturan posisi scan sehingga ada
Tabel 4.3 Hasil perhitungan kadar dengan TLC sebagian senyawa lain yang ikut masuk sewaktu
melakukan scan (ditunjukkan pada gambar 4.4).
No. Nama Senyawa Kadar (%) Keadaan ini sebenarnya tidak boleh terjadi karena
dapat mempengaruhi nilai luas area dan kadarnya.
1. Temulawak 1 0.178125 Oleh karena itu, penting bagi orang yang melakukan
2. Temulawak 2 0.178453 pengaturan batas scan harus dilakukan sebaik

14
 mungkin agar dapat memperoleh luas area dan
kadar yang lebih baik.
Pada proses pemisahan menggunakan
campuran pelarut heksane dan etil asetat dengan
perbandingan 1:1 maka standard curcuminoid tidak
akan pecah atau terpisah menjadi beberapa
golongan senyawa dan menjadi satu kesatuan yang
utuh (karena didalam standard curcuminoid masih
ada beberapa senyawa lain, yaitu
desmetoksikurkumin dan bis-desmetoksikurkumin).
Dalam memilih pelarut diharuskan untuk
menggunakan pelarut (fasa gerak) yang mempunyai
sifat polar yang lebih tinggi dari silika gel / fasa
diam (bahan yang melapisi plat) sehingga sampel
dapat dialirkan dan dipisahkan dari senyawa-
senyawa yang lain tetapi bila sifat polar dari pelarut
lebih rendah dari silika gel maka sampel tidak dapat
dialirkan dan dipisahkan (karena terjadi ikatan yang
saling mengikat antara pelarut dengan silika gel).
Silika gel / fasa diam mempunyai sifat polar yang
baik adalah mengandung banyak ikatan OH (plat
TLC yang saat ini dipakai).
V. KESIMPULAN
5.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat diambil dari tugas
akhir ini, adalah sebagai berikut :
1. Telah dapat ditentukan kadar curcuminoid dengan
menggunakan metode TLC.
2. Hasil penentuan kadar sampel yang diukur adalah
kadar senyawa temulawak 1 sebesar 0.178125 %
dan kadar senyawa temulawak 2 sebesar 0.178453
% serta kadar senyawa temulawak 3 sebesar
0.180887 %.
Padmawinata Bandung, penerbit ITB,
1991 ISBN 979-8001-45-1.
3. Sastrohamidjojo. Dr. Hardjono, Kromatografi, UGM
penerbit ; Liberty Yogyakarta-Yogyakarta,
1991 ISBN 979-499-079-5.
4. Touchstone, Joseph C and Dobbins, Murrell F.,
Practice of Thin Layer Chromatography, A
Wiley-Interscience publication, John Wiley
and Sons, Inc., Canada, 1978.
5. Thin Layer Chromatography A Laboratory
Handbook, E. Stahl (ed), Springer-Verlag,
Berlin, Germany, 1965.
6. J.G. Kirchner, Thin Layer Chromatography, 2nd edn,
Techniques in Chemistry, vol. XIV, Wiley-
Interscience, Chichester, UK, 1978.
7. E. Stahl, in Thin Layer Chromatography A
Laboratory Handbook, 2nd edn, E. Stahl
(ed), Springer-Verlag, Berlin, Germany,
1969, 5.
8. A. Zlatkis, R.E. Kaiser, in HPTLC ( high
performance thin layer chromatography ), A.
Zlatkis, R.E. Kaiser (eds), Elsevier,
Amsterdam, Netherlands, 1977, 12.
9. Laboratory of Analytical Chemistry, Zagreb, Croatia.
1999.
10. Operating manual TLC ( Thin Layer
Chromatography ) Scanner 3 CAMAG,
Switzerland.

5.2 Saran
Beberapa saran yang dapat disampaikan untuk
penelitian selanjutnya yaitu:
1. Pada tugas akhir ini terdapat ketidaktelitian dalam
menentukan batas scan pada plat. Disarankan agar
penelitian sejenis memperhatikan hal ini.
2. Pada tugas akhir ini kadar yang diketahui hanya
kadar curcuminoid. Penelitian dapat dikembangkan
dengan mengukur sekaligus kandungan unsur-unsur
lain dalam senyawa temulawak.
3. Dari penelusuran literatur dan studi selama
melakukan penelitian ini, diusulkan ide tentang
penggunaan kamera digital sebagai pengganti
scanner untuk menentukan jenis dan kadar
zat/senyawa, seperti dapat dilihat pada lampiran.

DAFTAR PUSTAKA

1. Rosita, Lifdiana. Perancangan Sistem Pencahayaan

Hybrid di Ruang Kelas C-122 Teknik Fisika
Tugas Akhir Jurusan Teknik Fisika FTI-
ITS Surabaya. 2009.
2. Gritter, Bobbitt, and Schwarting, Pengantar
kromatografi ; terjemahan Kosasih

15