Tanaman Industri & Produk 108 (2017) 470-479

0926-6690 / © 2017 Elsevier-undang.

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Industri Tanaman & Produk

homepagejurnal: www.elsevier.com/locate/indcrop

Evaluasi in vitro dan in vivo keselamatan dari produk sampingan dari sisalana Agave
sebagai bahan baru kosmetik baku: Pengembangan dan evaluasi klinis dari nanoemulsion
untuk memperbaiki kulit pelembab
Stella Maria Andrade Gomes Barretoa, Mayara Saatmãn Maiaa, Alvaro Moreira Benicáa, Hugo Raphael
Bezerra Silva de Assisa, Vânia Rodrigues Leite-Silvab, Pedro Alves da Rocha-Filhoc, Marília Medeiros
Fernandes de Negreirosd, Hugo Alexandre de Oliveira Rochad , Elissa Arantes Ostroskya, Patricia Santos
Lopesb, Valeria Soraya de Farias Salesa, Raquel Brandt Giordania, Márcio Ferraria, ⁎
College of Pharmacy, Universitas federal Rio Grande do Norte - UFRN, Rua Gustavo Cordeiro de Farias, s / n, Petrópolis,
Natal, RN, 59012-570, Brasil b Departamento de Ciencias Exatas e da Terra, Universitas federal Sao Paulo - UNIFESP, Rua
São Nicolau, 210, Centro, Diadema, SP, 09913- 030, Brasil c Departemen Ilmu Farmasi, Fakultas Farmasi Ilmu Ribeirão Preto,
University of São Paulo, Avenida do Café, s / n, Monte Alegre, Ribeirão Preto, SP, 14.040-903, Brasil d Departemen Biokimia,
Universitas Federal Rio Grande do Norte - UFRN, Avenida Salgado Filho s / n, Natal, RN, 59078-970, Brasil
PASAL INFO
Kata kunci: Agave sisalana oleh-produk kosmetik Keselamatan nanoemulsion Moisturizing
ABSTRAK
Agave sisalana (sisal) adalah sumber global yang penting hard serat, yang secara luas digunakan dalam produksi kabel, tali, dan
kerajinan. Proses dekortikasi daun A. sisalana menghasilkan sejumlah besar oleh-produk yang dibuang dan dapat menyebabkan
kerusakan lingkungan. Penelitian telah menunjukkan potensi produk-oleh dari A. sisalana dalam aplikasi yang berbeda. Tujuan
dari penelitian ini adalah untuk memperoleh fraksi polisakarida-diperkaya (EF) dari produk sampingan dari A. sisalana, menilai
keamanan in vitro dan in vivo, untuk mengembangkan nanoemulsion kosmetik dan untuk mengevaluasi kemanjuran klinis
pelembab. EF diperoleh dan gula total, jumlah fenolik, dan kandungan protein yang diukur. Keamanan EF ditentukan dengan
menggunakan in vitro dan in vivo tes. Nanoemulsions yang veloped de- dan stabilitas mereka dievaluasi selama 90 hari pada
kondisi suhu yang berbeda. Khasiat pelembab klinis dievaluasi dengan teknik biofisik menggunakan pengukuran kapasitansi dan
transepidermal kehilangan air. Fraksi yang dipamerkan konsentrasi tinggi gula (65,49 ± 0,51%) dan adanya senyawa fenolik
(2,53 ± 0,04%) serta protein (0,04 ± 0,01%). EF tidak menunjukkan potensi sitotoksik atau phototoxic efek dan tidak menyajikan
potensi untuk menginduksi kulit reaksi iritasi dalam uji klinis. Nanoemulsion con- taining fase 40% minyak, 50% fase air dan
10% surfaktan, menambahkan fraksi atau tidak (kendaraan), stabil selama 90 hari. The nanoemulsion mengandung 0,5% dari
fraksi peningkatan kadar air dari stratum korneum oleh 10,13% vs kendaraan dan 19,28% vs nilai-nilai dasar dan dipelihara
fungsi sawar kulit setelah 5 jam dari satu aplikasi. EF yang diperoleh dari industri produk sampingan dari A. sisalana
menunjukkan profil yang menjanjikan sebagai bahan baku kosmetik pelembab. Hal ini penting karena menunjukkan
kemungkinan untuk meningkatkan nilai komersial untuk industri oleh-produk dari sisal, dan dengan demikian mengurangi
dampak lingkungan yang disebabkan oleh pembuangan bahan ini.
1. Pendahuluan
Agave sisalana Perrine, dikenal sebagai sisal, merupakan tanaman herba yang milik keluarga Agavaceae. Tanaman ini berasal
dari
Meksiko dan disesuaikan dengan daerah semi-kering. Di Brazil, spesies ini tersebar luas di Caatinga bioma, dan terutama
dibudidayakan untuk mendapatkan serat untuk produksi kabel, tali, dan kerajinan (Gutiérrez et al, 2008;. Maran dan Priya, 2014).
Sekitar 5% dari berat tanaman ini
⁎ Sesuai penulis.
Alamat E-mail: smagbarreto@gmail.com (SMAG Barreto), maysaatman@hotmail.com (MS Maia),
alvarobenica@hotmail.com (AM Benica), hugorbassis@gmail.com (HRBS de Assis), vania.leite @ unifesp.br (VR Leite-Silva),
pedranjo@fcfrp.usp.br (PA da Rocha-Filho), marilia_negreiros16@yahoo.com.br (MMF de Negreiros), hugo@cb.ufrn.br (HA de
Oliveira Rocha ), aranteselissa@gmail.com (EA Ostrosky), patricia.lopes@unifesp.br (PS Lopes), vsales10@gmail.com (VS de
Farias Penjualan), raquebg@hotmail.com (RB Giordani), ferrarimarcio @ UOL. com.br (M. Ferrari).
http://dx.doi.org/10.1016/j.indcrop.2017.06.064 Diterima 2 Maret 2017; Diterima dalam bentuk direvisi 27 Juni 2017; Diterima
29 Juni 2017
MARK
SMAG Barreto dkk. Tanaman Industri & Produk 108 (2017) 470-479
471 digunakan untuk memproduksi serat, dan oleh-produk
dibuang dari produksi
(OptiphenTM) yang disediakan oleh Ashland Inc
(Brazil), Disodium EDTA (DEG dapat menjadi masalah lingkungan (Maran dan Priya ., 2014)
Importacao de Produtos Químicos, Brasil),
Butylatedhydroxytoluene - Studi telah menunjukkan potensi A. sisalana oleh-produk sebagai
BHT (Galena QUIMICA e FARMACEUTICA Ltda,
Brazil) dan air suling. bahan baku untuk aplikasi di in farmasi dan kosmetik
Untuk di penilaian keamanan vitro: dustries Medium
Dulbecco Modified Eagle. Sastra melaporkan kehadiran kelas metabolit yang berbeda
(DMEM), EDTA, penisilin, streptomisin, amfoterisin,
glutamin dan komposisi kimia dari ini dengan-produk, terutama karbohidrat
serum janin sapi yang dibeli dari Vitrocell® (Brazil).
Netral Merah (Zhang et al., 2014), flavonoid (Chen et al., 2009) dan saponin
(Sigma-Aldrich, Brasil), solusi tripsin, dapar fosfat pH
7,4. (Ribeiro et al., 2015a).
Oklusif perangkat tes patch dari 1 cm2 (IPI KAAS Brazil,
Brazil) digunakan Polisakarida, terutama berasal dari alam atau bioteknologi, memiliki
untuk in vivo evaluasi keselamatan. telah digunakan
sebagai bahan pelembab (Bonte, 2011). Studi plasebo terkontrol yang berbeda telah dikaitkan aktivitas pelembab untuk ini com-
2.2. Ekstrak kasar dan polisakarida-diperkaya pound
fraksi (Damasceno et al, 2016;. Ribeiro et al, 2015b.). Zhang et al. (2013, 2014) disebabkan kegiatan antioksidan untuk senyawa
ini di
The sisal oleh-produk yang digunakan dalam
penelitian ini disediakan oleh Sisaltec ekstrak tumbuhan.
Industri (Natal, Brazil). Sebuah spesimen voucher dan
oleh-produk yang Uji toksisitas dari bahan nabati dikombinasikan dengan tren
yang dikumpulkan dari sebuah peternakan sisal di kota
Pedra Grande, Rio Grande do menggunakan ekstrak tanaman telah membaik upaya ilmiah dalam mencari
Norte Negara, Brasil ( 5 ° 07'56.3 ''S 35 ° 54'31.7''W)
pada tanggal 8 Agustus 2015. bahan baku baru untuk produk kosmetik. Namun, produk alami
oleh-produk dikumpulkan langsung dari mesin
dekortikasi. Yang belum tentu aman dan efektif, karena ini dapat menyebabkan kerusakan pada
spesimen voucher diendapkan di Herbarium kesehatan
Federal, seperti iritasi, sensitisasi, dan / atau Fotoreaksi
University of Rio Grande do Norte di bawah nomor
UFRN- 20544. (Nohynek et al., 2010). Oleh karena itu, keamanan dan kemanjuran harus
Serat alami (sisal) mekanis dihapus dari A. Si-
dievaluasi untuk memastikan kondisi terbaik penggunaan, dan in vitro dan in vivo
daun Salanah dan bahan sisa dari proses ini (oleh-
produk) studi diperlukan untuk menjelaskan manfaat dari A. sisalana oleh-produk di
ditekan affording bagian cair (kita beri nama mentah-
ekstrak - CE) perawatan kulit.
dan sebagian padat (serat terutama sisa yang dibuang).
The Awalnya, keselamatan dapat dievaluasi melalui uji praklinis in vitro,
ekstrak kasar ditambahkan ke etanol 95% untuk
mempromosikan curah hujan ac- alternatif penggunaan hewan, untuk memastikan keamanan sebelum
cording Santos et al. (2013). Proses ini dilakukan
dengan 95 ° uji klinis GL (Felippi et al., 2012). Dalam studi vivo kompatibilitas kulit,
etanol pada 1: 3 (v / v) residu / rasio pelarut dan
disimpan pada suhu 4 ° C selama 24 jam; seperti tes kontak semi-oklusif atau oklusal (Patch test), ulang
kemudian, dua sampel diperoleh: endapan dan super
menyajikan kontak pertama dari suatu zat atau produk dengan kulit.tersebut.
Natant Supernatan disaring, terkonsentrasi, dan
lyophilized dilakukan di bawah kondisi dimaksimalkan, dengan kontrol dari daerah
(Kristus, Jerman) affording sampel bernama aplikasi
dan kuantitas polisakarida-diperkaya diterapkan sedang alat penting yang digunakan dalamde-
fraksi(EF) ( Gambar. 1). Hasil dari EF dihitung dari
termining awal ketiadaan atau kehadiran alergen atau potensiirritatives
jumlahdari bagian cair (CE): Yield (%) = (Massa
polysaccharide- (Anvisa, 2012; Antignac et al, 2011).. dengan demikian, setelah in vitro dan in vivo
fraksi diperkaya / Mass dari bagian cair) × 100 (Santos
et al., 2013). tes dari bahan baku, bersama-sama dengan bukti adanya risiko, ekstrak dapat digunakan untuk pengembangan
formulasi dan / atau
2.3. Kuantifikasi total gula mengalami pengujian
khasiat tertentu in vivo.
Untuk mengatasi kelemahan dari penggunaan kosmetik yang mengandung
Kuantifikasi total gula di CE dan EF dilakukan
dengan menggunakan bahan-bahan botani, sebagai penetrasi yang lebih rendah dan senyawa tinggi in
the / metode asam sulfat Fenol (Dubois et al., 1956).
Alat tes yang stabilitas (Ganesan dan Choi, 2016), nanoemulsions dapat digunakan (Gianeti
dilakukan pada suhu kamar (25 ± 2 ° C) menggunakan
D-galaktosa sebagai ca- et al, 2012;.. Peshkovsky et al, 2013).
standar libration untuk pembangunan kurva kalibrasi.
Kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi dalam pengembanganre-
bacaan spektrometritercatat 490 nm. perangkat
pencarian untuk fungsi biologis dari kulit mengubah derstanding un- efek yang disebabkan oleh produk kosmetik,
memungkinkan
2,4. Kuantifikasi fenolik senyawa interpretasi hasil
yang diperoleh dalam kondisi aktual penggunaan dan sehingga memungkinkan evaluasi efikasi in vivo. Metode bioteknologi
Jumlah total senyawa fenolik dalam CE dan EF
adalah de- memungkinkan untuk menyelidiki respon yang berbeda dari kulit ke beberapa
termined dengan analisis spektrofotometri di daerah
tampak menggunakan rangsangan yang disebabkan, termasuk lapisan atas hidrasi kulit dan penghalang nya
metode Folin-Ciocalteu (Athukorala et al., 2006). Alat
tes yang berlaku (Byrne, 2010;. Dreno et al, 2014).
dilakukan pada suhu kamar (25 ± 2 ° C) dengan
perlindungan dari Dengan demikian, dengan prospek profil menjanjikan darioleh-produk
cahayadan menggunakan Galic asam sebagai standar
kalibrasi untuk pembangunan dari pengolahan A. sisalana sebagai bahan baku kosmetik, bersama-sama
kurva kalibrasi. Pembacaan spektrometri tercatat di
dengan kemungkinan menambahkan nilai komersial untuk residu industri,
765 nm. serta pengurangan kerusakan lingkungan, dan
tribution con untuk pembangunan berkelanjutan, tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk
2,5. Penilaian kandungan protein mengembangkan
pelembab nanoemulsion kosmetik con- taining fraksi polisakarida-diperkaya aman dan efektif oleh-produk dari
kandungan protein di CE dan EF dinilai dengan
metode Bradford industri pengolahan A. sisalana.
(1976) dengan analisis spektrofotometri. The tes dilakukan pada suhu kamar (25 ± 2 ° C) menggunakan bovine serum albumin
sebagai cali- 2. Bahan danmetode
standarbration untuk pembangunan kurva kalibrasi. Pembacaan spektrometri tercatat sebesar 595 nm. 2.1. Bahan
2.6. Bahan baku evaluasi keselamatan bahan berikut
digunakan untuk penyusunan mulations untuk-: kaprilat / CapricTriglyceride (CrodamolTM GTCC),
2.6.1. Evaluasi Keselamatan in vitro Polysorbate 80
(Tween® 80), sorbitan monooleat (Span® 80), Ethylhexyl palmitate (CrodamolTM OP) yang disumbangkan oleh Croda dari
Brasil Ltda
2.6.1.1. Budaya sel. BALB / 3T3 clone A31 (ATCC®
CCL163TM) yang (Brazil), isostearil Neopentanoate (EschercemolTM 185) yang disediakan oleh
garis sel fibroblast murine permanen digunakan dalam
sitotoksisitas dan Lubrizol Brasil Ltda (Brazil), Fenoksietanol, Caprylyl Glycol
tes fototoksisitas. Sel dikultur di Dulbecco Modified Eagle
Medium (DMEM) dilengkapi dengan serum janin bovine (10% v / v), glutamin (4mm) dan antibiotik dan kemudian dipelihara
dalam kondisi standar (5% CO
2,
37 ° C, 97% UM untuk 24 h). Proses pelepasan sel dilakukan dengan menggunakan larutan tripsin 0,05% (b /
v) /0.02% EDTA (w / v) dalam dapar fosfat pH 7,2; sel-sel terpisah dihitung dan berlapis di piring 96-baik (P96w) dengan 20.000
sel per sumur (ISO 10.993-5, 2009; OECD 432, 2004).
2.6.1.2. Penelitian sitotoksisitas. Efek sitotoksik CE dan EF dievaluasi menggunakan 3T3 netral uji penyerapan warna merah.
Setelah 2 jam inkubasi, absorbansi diukur pada 540Nm (ICCVAM, 2006; OECD 129, 2010). CE dan EF yang larut dalam air dan
dievaluasi pada konsentrasi yang berbeda (0,15, 0,3, 0,6, 1,25, 2,5, 5,0, 10,0 dan 20,0 mg / mL). Nilai-nilai IC10 dan IC50
dihitung. Viabilitas sel dihitung sesuai dengan Persamaan. (1):
VC
=
⎡ ⎢ ⎣
1-
ODOD
sampel
kontrol
⎤ ⎥ ⎦
× 100
(1)
Dalam yang: VC adalah kelangsungan hidup sel, OD
sampel
adalah densitas optik dari ekstrak,OD
kontrol
adalah densitas optik tes sel kontrol.
2.6.1.3. Studi fototoksisitas. Efek phototoxic CE dan EF dievaluasi menggunakan 3T3 netral penyerapan merah assay (OECD TG
432, 2004) pada konsentrasi ditentukan dengan alat tes sitotoksisitas. Sampel terkena radiasi (UVA +) selama 1 jam dan 50 menit
untuk mencapai dosis 5 J / cm2. Selain itu, sampel juga dievaluasi pada konsentrasi yang sama dengan tidak adanya cahaya
(UVA-). Setelah periode ini, sel-sel menjadi sasaran netral uji serapan merah, dan hasilnya diukur pada 540 nm. Data dianalisis
dengan Phototox®, dan Photo Iradiasi Factor (PIF) dan Rata fototoksik Effect (MPE) (OECD TG 432, 2004) kemudian
ditentukan.
2.6.2. Evaluasi keselamatan divivo
kompatibilitas Cutaneousdari EF dinilai sesuai dengan pedoman Internasional Dermatitis Kontak Research Group. Hal itu
dievaluasi oleh sebuah aplikasi tunggal untuk 18 relawan dari usia 22-46 tahun setelah menerima persetujuan tertulis mereka.
Para relawan yang terlibat dalam penelitian ini adalah dengan phototype jenis kulit II ke IV. The lunteers vo- dipilih sesuai
dengan kriteria inklusi dan eksklusi untuk penelitian. Penelitian itu dilakukan dengan persetujuan dari Komite Etika Penelitian
dari University of Cuiaba (195,680 / 2013). Dalam rangka untuk mengevaluasi keselamatan, 3 perangkat uji tempel dari 1 cm2
tertanam dengan 20 uL dari 0,5%, 1,0% dari EF dan air (kontrol negatif) yang diterapkan pada kulit normal punggung atas. Patch
telah dihapus setelah 48 jam dari aplikasi. Tanggapan iritasi kulit
SMAG Barreto dkk. Tanaman Industri & Produk 108 (2017) 470-479
472
Gambar. 1. Skema ekstraksi dan didapatkannya dari ekstrak kasar dan fraksi polisakarida-diperkaya dari Agave sisalanaAgave
sisalana oleh-produk.
dievaluasi pada 30 menit dan 24 h dan 48 jam setelah pengangkatan Patch (Felippi et al, 2012;. Kligman dan Wooding, 1967;
Wilkinson et al, 1970.).
2.7. Pengembangan formulasi
2.7.1. Pseudo-terner diagram fase (PTPD)
Formulasi dikembangkan sesuai dengan metode diagram terner (Lo et al., 1976). Campuran Polysorbate 80 dan sorbitan
monooleat (9: 1 b / b) dengan saldo hidrofilik lipofilik (HLB) dari 14,0 sebagai surfaktan untuk mendapatkan minyak dalam air
(O / W) emulsi digunakan (Mahdi et al. 2011;. Silva et al, 2016). Diagram fase pseudo-ternary yang terdiri dari fase berminyak
dan berair dan surfaktan terstruktur (Rocha-Filho et al., 2016) dengan memvariasikan centrations con komponen sebesar 10% (b /
b). EF (0,5%) ditambahkan ke dalam fase air. Energi dipasok ke sistem dengan probe ultrasonik (NIC Jadi-, USA) selama 4
menit (30 W). Hanya wilayah diagram fase dengan konsentrasi 10,0% dari surfaktan dan konsentrasi minyak 10,0% untuk 40,0%
dipelajari.
2.7.2. Studi stabilitas awal
Sampel disimpan pada 45 ± 2 ° C dan 75% ± 5% RH (Nova ETICA, Brasil) selama 5 hari. Setelah 24 jam manipulasi tes
sentrifugasi dan analisis makroskopik dilakukan. Potensial zeta, nilai pH, ukuran partikel dan indeks polidispersitas (PI) diukur
pada 0 dan 5 hari.
2.7.2.1. Uji sentrifugasi. Sentrifugasi dilakukan pada persiapan 24 h berusia di 3000 rpm (Fanen, Brasil) selama 30 menit pada 25
° C (Ribeiro et al., 2015b). Setelah itu, penampilan sentrifugasi, homogenitas dan karakteristik organoleptik dievaluasi secara
makroskopis.
2.7.2.2. Aspek makroskopik. Perubahan organoleptik (warna dan bau) serta kehadiran fenomena ketidakstabilan nanoemulsion
(creaming atau pemisahan fasa) yang diamati secara visual.
2.7.2.3. analisis pH. Nilai formulasi pH (Hanna Instruments, mod. HI 21, Brazil) bertekad menjadi pengenceran air 1:10 (w / w)
dengan memasukkan elektroda langsung dalam sampel (Ribeiro et al., 2015b).
2.7.2.4. Ukuran tetesan dan indeks polidispersitas pengukuran. Diameter droplet dan droplet distribusi ukuran (dievaluasi oleh
indeks polidispersitas - PDI) diukur dengan Dynamic Light Hamburan (DLS) (Malvern, Inggris Raya) pada 25 ° C. Sudut
tersebar tetap di
SMAG Barreto dkk. Tanaman Industri & Produk 108 (2017) 470-479
Tabel 1
pada 1, 2, 3, 4, dan 5 jam setelah satu aplikasi dari
formulasi untuk Kuantifikasi total gula, senyawa protein dan fenolik di CE dan EF dariAgave
bidangA2 A4 dan untuk bidang kontrol tanpa
formulasi (A1). sisalana oleh-produk.
Sampel Jumlah gula (%) Protein (%) senyawa fenolik (%)
2,9. Analisis statistik
CE 41,31 ± 2,41 0,12 ± 0,01 1,27 ± 0,13
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan
software Grafik Pad EF 65,49 ± 0,51 0,04 ± 0,01 2,53 ± 0,04
Prism 6.01. Menganalisa antara kedua kelompok dilakukan oleh
Di mana: CE = ekstrak kasar dan fraksi = EF polisakarida-diperkaya. p-value <0,05 untuk t-test siswa (berpasangan).
473
tes t. Signifikansi statistik untuk dua atau lebih kelompok dievaluasi oleh analisis varians (ANOVA) dilanjutkan dengan uji
Tukey untuk perbandingan beberapa cara. p <0,05 dianggap statistik 173 °. Formulasi diencerkan dengan air suling oleh 200 kali
lipat
signifikan. sebelum pengukuran (Ribeiro et al.,
2015b). Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga.
3. Hasil dan diskusi
2.7.2.5. Pengukuran potensial zeta. Potensi zeta nanoemulsions diukur dengan hamburan cahaya tahap analisis, (Malvern, Inggris
Raya) pada 25 ° C. Formulasi diencerkan dengan air suling oleh 200 kali lipat sebelum pengukuran (Ribeiro et al., 2015b).
Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga.
CE dan EF disajikan warna kehijauan dan kuning kehijauan, re- spectively, dengan karakteristik bau tanaman. The
polysaccharide- yield fraksi diperkaya adalah 7.08%.
Karakterisasi bioaktif botani oleh penentuan gula total, fenol dan protein merupakan langkah penting dalam pengembangan
kosmetik. Komposisi kimia dapat menunjukkan penggunaan dan juga
2.7.3. Dipercepat studi stabilitas
memprediksi efek potensial tentang khasiat produk akhir (Garbossa dan Maia Campos, 2016). The nanoemulsions dianggap
stabil setelah tes awal yang dikemas dalam botol kaca tertutup rapat dan dikenakan ac-
Dengan menganalisis hasil penelitian menunjukkan pada Tabel 1, dapat dilihat bahwa fraksi (EF) menunjukkan konsentrasi yang
lebih tinggi dari gula dari CE (p- celerated tes stabilitas. formulasi dievaluasi awalnya
value <0,05). Kuantifikasi metodologi total gula yang
digunakan (t0 = 24 h) dan 90 hari setelah terpapar suhu yang berbeda ditions con: 4 ± 2 ° C (Konsul, Brasil), suhu kamar (25 ± 2
° C) dan
(Dubois et al ., 1956) diterapkan pada analisis dari setiap campuran gula dan telah terbukti dari nilai untuk analisis hidrolisat dari
oligo 45 ± 2 ° C (Odontobrás, Brazil) (Ribeiro et al., 2015b). Analisis makro scopic (penampilan, homogenitas dan acteristics
char- organoleptik) (2.7.2.2), ukuran tetesan dan indeks polidispersitas ukur yang
sakarida, polisakarida yang berbeda, gusi tanaman dan hemiselulosa (Dubois et al., 1956). Untuk mendapatkan fraksi dinilai,
kami menggunakan metodologi traksi mantan (Santos et al., 2013) yang biasa digunakan untuk memperoleh KASIH (2.7.2.4) dan
pengukuran potensial zeta (2.7.2.5) digunakan sebagai parameter evaluasi stabilitas.
polisakarida. Zhang et al. (2014) menggunakan metodologi yang sama untuk ekstraksi polisakarida dari A. sisalana oleh-produk.
Dengan cara ini, kita ekstrapolasi dan mata fraksi “polisakarida-diperkaya 2,8. Dalam evaluasi vivo darihidrasi
fraksikulit”.
 Polisakarida yang digunakan sebagai molekul
pelembab dalam kosmetik Penelitian ini dilakukan dengan persetujuan Etika Penelitian
produkkarena kapasitas mereka mempromosikan
peraturan Komite kulit dari University of Cuiaba (195,680 / 2013) di mana 18 vo-
kadar air, mampu untuk mempertahankan kelembaban
di kulit atau membentuk lunteers dipilih, berusia antara 22 dan 35 tahun dari kedua jenis kelamin,
lembut kelembaban Film (Bonte, 2011). Polisakarida
dapat bertindak sebagai emulsi yang menyatakan tidak ada riwayat penyakit kulit. Cedera yang tidak terlihat di
stabilisator, yang merupakan fitur menarik dalam
perkembangan waktu baru tes, di mana tujuan dan metode survei yang
produk (Shao et al., 2017). Senyawa ini juga dapat
menunjukkan anti dibuat jelas, dan para relawan setuju untuk berpartisipasi setelah membaca dan
oksidan sifat, aktivitas yang biasanya berhubungan
dengan fenolat com- menandatangani informed consent. Relawan ini dilarang untuk menggunakan
pound (Garbossa dan Maia Campos, 2016; Stojiljković
et al, 2016.). produk kosmetik selama dua minggu sebelum dan pada hari pengalaman- yang
Selanjutnya, manfaat protein dalam produk
perawatan kulit yang ment ob-, kecuali untuk produk pembersih seperti sabun. Penelitian ini mono
disajikan dalam studi protein sutra yang dilakukan
oleh Daithankar et al. (2005); blind, acak, dan terkontrol plasebo (Ribeiro et al., 2015b).
protein ini dipromosikan peningkatan pada kadar air kulit.
Protein Sebelum dimulainya tes, para relawan tetap dalamruangan
aksipelembab diamati dalam studi menggunakan
ekstrak protein dari setidaknya 30 menit untuk memungkinkan adaptasi kulit ke ruangan
gandum (Triticum vulgare) dan kedelai (Glycine soya )
(Gianeti dan suhu Maia (21 ± 2 ° C) dan kelembaban relatif (55 ± 5%) (Felippi
Campos, 2012). et al., 2012).
Dengan demikian, fraksi polisakarida-diperkaya
mengandung fenolik com- Stratum konten berair corneum ditentukan olehnoninvasif
pounddan protein dapat digunakan bahan baku
multifungsi baru untuk biometrical pengukuran menggunakan meter kapasitansi kulit (Corneometer®
industri kosmetik. Oleh karena itu, uji klinis harus
dilakukan untuk con- CM 825, Keberanian & Khazaka, Electronic GmbH, Khöln, Jerman). Empat
perusahaan di aktivitas biologis vivo dari senyawa ini.
situs (9 cm2 masing-masing) pada kulit lengan bawah relawan dipilih secara acak (A1 ke A4): satu (A1) sebagai kontrol di mana
hanya pengukuran yang
3.1. Evaluasi Keselamatan in vitro diambil, dan yang
lainnya (A2 ke A4), yang formulasi yang berbeda tanpa fraksi (kendaraan), formulasi yang mengandung 0,5% polisakarida-
diperkaya
Menurut Nohynek et al. (2010), campuran dari
komponen fraksi hadir (A3) dan kontrol-komersial formulasi positif (A4) berada
di ekstrak tumbuhan dapat menghasilkan reaksi lokal
bila diterapkan pada kulit, diterapkan masing-masing. Semua formulasi yang diterapkan ke permukaan
danini dapat menjadi faktor penting untuk digunakan
sebagai bahan kosmetik. Kulit Cos- pada 2 mg / cm2 dengan pijatan ringan sekitar 10 s.
 produk metic yang mengandung bahan-bahan ini dapat
digunakan sering dan kehilangan air Transepidermal (TEWL) dari kulit dinilai oleh
mungkin dalam kontak dengan kulit untuk waktu yang
lama. Polisakarida adalah evaporimeter (Tewameter® TM 300, Keberanian & Khazaka, elektronik
biasanya dianggap non-toksik (Zhang et al., 2014),
meskipun irrita- GmbH, Jerman). Nilai TEWL terdaftar selama 2 menit setelah
potensial tive komponen ini harus dievaluasi. 30-s
periode equilibrium dari probe pada kulit.Satu membaca di
.Hasil untuk uji sitotoksisitas ditunjukkan pada
Gambar 2. Pada con- masing-masing bidang diambil untuk evaluasi TEWL, (Maia Campos et al, 2012;.
Centrations dari 0,128 dan 0,45 mg / mL, CE dan EF,
masing-masing , menunjukkan Ribeiro et al., 2015b).
Viabilitas sel 90% untuk BALB / c 3T3 sel. CE
menunjukkan nilai IC50 dari kapasitansi Kulit dan TEWL ditentukan sebelumnya (baseline), dan
0.252mg / mL, menunjukkan bahwa penggunaan konsentrasi yang lebih tinggi dapat
SMAG Barreto dkk. Industri Tanaman & Produk 108 (2017) 470-479
Gambar. 2. Evaluasi Sitotoksisitas dari ekstrak kasar dan fraksi polisakarida-diperkaya dari sisalana Agave oleh-produk. Di
mana: (A) Evaluasi Sitotoksisitas dari ekstrak kasar dari sisalana Agave oleh-produk; (B) evaluasi Sitotoksisitas fraksi
polisakarida-diperkaya dari sisalana Agave oleh-produk.
menyebabkan efek sitotoksik pada kulit. Dengan demikian, dari hasil ini, ekstrak kasar tidak dievaluasi dalam tes berikutnya.
Pendekatan menggunakan nilai IC50 dari tes basal sitotoksisitas in vitro untuk menentukan konsentrasi peracikan
mempromosikan viabilitas sel 50% secara luas digunakan (OECD 129, 2010). Kelangsungan hidup 0% dianggap toksisitas
maksimum dan 100% viabilitas dianggap sitotoksik non. Di semua konsentrasi diuji dievaluasi, itu tidak mungkin untuk
menghitung nilai IC50 untuk EF, menunjukkan bahwa ini adalah sebagian kecil non-sitotoksik sebagai konsentrasi maksimum
tidak menghambat 50% sel-sel yang digunakan dalam pengujian tersebut. Dengan kata lain, EF konsentrasi tertinggi yang diuji,
tidak disajikan toksisitas sel (20 mg / mL) dan itu jauh lebih tinggi dibandingkan dengan konsentrasi yang diusulkan (5mg / mL)
untuk pengembangan pelembab nanoemulsion kosmetik. Dengan demikian, polisakarida-en- fraksi diperkaya dari A. sisalana
oleh-produk dapat dianggap aman untuk aplikasi kosmetik, dan itu kemudian mungkin untuk melakukan keselamatan dalam tes
vivo.
Fototoksisitas adalah respon akut yang dihasilkan setelah menerapkan zat tive ac- ke sel-sel, dengan paparan berikutnya sinar
ultraviolet dan tidak adanya sitotoksisitas. Dengan demikian, sel-sel diperlakukan dengan konsentrasi ferent dif- dan terkena atau
tidak terkena cahaya UVA. Gambar. 3 menunjukkan hasil yang diperoleh untuk CE dan EF.
Sejumlah besar kasus iritasi atau sensitisasi disebabkan oleh paparan radiasi UVA, setelah kontak kulit manusia dengan
tanaman atau bahan botani, telah dilaporkan dalam literatur (Antignac et al., 2011). Sebuah fitur umum dari zat yang
menyebabkan efek toksik foto- adalah kemampuan mereka untuk menyerap radiasi ultraviolet (Freitas dan Gaspar, 2016).
The phototoxic potensi tiga senyawa yang berbeda (apigenin,
Gambar 3. Evaluasi Fototoksisitas dari ekstrak kasar dan fraksi polisakarida-diperkaya dari Agave sisalana oleh-produk Dalam
Yang:.. (A) Evaluasi Fototoksisitas dari ekstrak kasar; (B) evaluasi Fototoksisitas dari fraksi polisakarida-diperkaya dari sisalana
Agave oleh-produk.
474
chrysin e beta-karoten) dievaluasi oleh Freitas dan Gaspar (2016). Chrysin dan beta-karoten disajikan profil fototoksik ketika
nilai-nilai PIF lebih besar dari 1,0 dan MPE unggul 0,15; ini pon com- kemudian dianggap phototoxic. OECD TG 432 (2004) de-
ahli Taurat parameter untuk prediksi PIF dan MPE, berdasarkan studi validasi: zat dengan PIF <2 atau MPE <0,1 memprediksi:
“tidak ada fototoksisitas”. Nilai-nilai PIF> 2 dan <5 atau MPE> 0,1 dan <0,15 memprediksi: "mungkin fototoksisitas“dan PIF> 5
atau MPE> 0,15 memprediksi:" fototoksisitas”.
Kemungkinan paparan radiasi matahari ketika menggunakan produk kosmetik untuk perawatan kulit, menunjukkan
pentingnya evaluasi bidang baru ini untuk penggunaan topikal.
3.2. Evaluasi Keselamatan in vivo
Karena struktur kimia kompleks mereka, bahan-bahan tanaman mungkin mengandung zat-zat yang berpotensi alergi atau
iritasi. Penilaian kulit compat- ibility memberikan preview kemungkinan iritasi dan atau al mekanisme lergenic; ini adalah
keprihatinan utama ketika menilai keamanan bahan baru untuk perawatan pribadi (Antignac et al., 2011). Dalam konsentrasi
dievaluasi, tak satu pun dari relawan menunjukkan tanda-tanda eritema, edema atau papula pada kulit; oleh karena itu, dianggap
aman untuk digunakan dalam produk untuk penggunaan topikal. Namun, untuk mendapatkan lebih banyak data, maka perlu
untuk melakukan kompatibilitas kulit dan tes sensitisasi aplikasi petitive ulang dan untuk melakukan tes dengan jumlah yang
lebih besar dari lunteers vo-.
SMAG Barreto dkk. Tanaman Industri & Produk 108 (2017) 470-479
Gambar. 4. Pseudo-terner fase wilayah diagram yang menunjukkan formulasi dengan karakteristik nanoemulsion.
3.3. Pseudo-ternary diagram fase
Poin penting dalam pengembangan nanoemulsion adalah pilihan komponennya. Komposisi formulasi ditentukan sesuai
dengan nanoemulsions diperoleh Ribeiro et al. (2015b). Campuran emolien dipilih untuk meningkatkan Mance perfor- dari
sensorik dari formulasi. Pemilihan surfaktan campuran, Polysorbate 80 dan sorbitan monooleat, digunakan mengikuti hasil yang
dicapai ketika surfaktan ini digunakan untuk memperoleh O / emulsi W dengan nilai-nilai EHL yang berbeda (Ribeiro et al,
2015b;.. Mahdi et al, 2011 ; Silva et al, 2016).. Jenis emulsi (O / minyak W atau air-in - W / O) didasarkan pada sistem surfaktan
yang digunakan dalam proses emulsifikasi; konsentrasi setiap fase (cair dan berminyak) mempengaruhi proses pembentukan
nanoemulsions (Ribeiro et al., 2015b). Diagram fase pseudo-ternary formulasi adalah alat yang berguna dalam pengembangan
sistem tersebar, karena ada kemungkinan untuk memperoleh formulasi dengan peningkatan kinerja, yang mampu menghasilkan
sistem yang berbeda seperti gel, emulsi, mikroemulsi dan nanoemulsions antara lain (Amaral -Machado et al., 2016). Sebuah
wilayah noemulsion NA- diperoleh dalam diagram fase pseudo-ternary (Gambar. 4).
Nanoemulsions yang tembus, sistem transparan atau buram, dengan ukuran tetesan antara 50 dan 500 nm. Mereka
diformulasikan pra dominan dengan fase air dan akibatnya hadir viskositas rendah, yang dapat diperoleh pada konsentrasi
surfaktan dalam kisaran 5-10% (Gianeti et al, 2012;. Izquierdo et al, 2002;. Mahdi dkk. 2011; Jafari et al, 2006;.. Tadros et al,
2004). Formulasi dengan konsentrasi surfaktan dari 10%, konsentrasi fase berminyak antara 10% dan 40%, dan 50% dari fasa air
adalah cairan dan aspek buram. Rocha-Filho et al. (: 2,5, rasio w / w 7.5), diperoleh dengan metode inversi fasa, diamati pada
pseudo-ternary fase wilayah diagram O / emulsi W sama dengan pipih fase kristal cair (2016) sistem yang mengandung minyak
bunga matahari dan minyak mineral yang digunakan. Amaral-Machado et al. (2016) obtained a stable nanoemulsion in an oil
concentration of 12% (bullfrog oil), 8% surfactants (Span 20® and Tween 80®), and 80% water. The composition of selected
formulations, and their respective vehicle formulations, are shown in Table 2.
3.4. Stability study
3.4.1. Preliminary stability
Initially, the nanoemulsions containing 0.5% of EF were light yellow, homogeneous and fluid. The nanoemulsions vehicle
was white, homogeneous and fluid.
The centrifugation test was performed to obtain information on possible instability processes (Ribeiro et al., 2015b). To
choose the best
475
formulation, nanoemulsion were subjected to centrifugation 24 h after of preparation. Except for formulation N3 v, the samples
showed no change in their initial characteristics and stability.
3.4.1.1. Droplet size, polydispersity-index, and zeta-potential measure- ments. The droplet size is an important parameter for
evaluating the stability of nanoemulsions. Due to the smaller droplet sizes, they present greater stability against instability
phenomena, considering that small droplets reduce gravitational force enabling the Brownian movement to overcome them
(Kabri et al., 2011; McClements and Rao, 2011). However, the Ostwald ripening phenomenon appears as the main instability
mechanism of these systems (McClements, 2012). Ostwald ripening causes increase in the droplet size through the absorption of
smaller droplets; thus, this phenomenon occurs due to differences in the Laplace pressure as well as the difference in solubility of
the droplets. Thus, the droplet size increases, affecting the stability of the system and can result in phase separation (Gianeti et al.,
2012; McClements and Rao, 2011). Nanoemulsions can be obtained by using low energy methods based on their physical or
chemical characteristics or high energy methods. The high pressure methods are considered superior because they provide
nanoemulsions of smaller droplet sizes and polydispersity, associated with better stability (Peshkovsky et al., 2013; Tadros et al.,
2004). The results of the preliminary stability tests are shown in Table 3.
After 24 h of the preparation (t0), the samples showed the mean droplet size from 83 nm to 155 nm. The formulations N1 and
N1v did not present significant increase in droplet size. For N3, N4 and N4v, we can observe the significant reduction (p > 0.05)
in the PDI values and a significant increase in droplet size, indicates relatively instability in formulations. The solubility of the
dispersed phase in the continuous phase is a critical factor in the formation of Ostwald ripening (Gupta et al., 2016). Wooster et
al. (2008) evaluated the influence of the oily composition on the formation of Ostwald ripening and stated that the insolubility of
the oils provides a kinetic barrier capable of preventing the appearance of this phenomenon of nanoemulsion instability, and
suggested that there were proportions of at least 50% of insoluble oils in the phase. McClements and Rao (2011) observed similar
results and reported that the addition of 10% of insoluble oils in their formulations was sufficient to maintain the stability of the
nanoemulsions.
The zeta potential is a parameter used to evaluate the nanoemulsion stability (Mahdi et al., 2011; Ribeiro et al., 2015b;
Tichota et al., 2014). It indicates the force of repulsion between adjacent equally charged droplets, and thus demonstrates the
important role of the surface layer of the droplets in the process of stabilization. High values of zeta po- tential (> ǀ30ǀ mV)
indicate resistance to particle aggregation and consequently a greater stability (Bali et al., 2010). However, in addition to
electrostatic stabilization, the addition of nonionic stabilizers to colloidal systems can promote steric stabilization achieved by the
sol- vation effect (Wu et al., 2011).
The formulations presented negative zeta potential values and less
Table 2 Nanoemulsion compositions (%, w/w).
COMPOUNDS N1 N2 N3 N4 N1v N2v N3v N4v
Caprylic/Capric Triglyceride
16.0 12.0 8.0 4.0 16.0 12.0 8.0 4.0
EthylhexylPalmitate 16.0 12.0 8.0 4.0 16.0 12.0 8.0 4.0 IsostearylNeopentanoate 8.0 6.0 4.0 2.0 8.0 6.0 4.0 2.0 Phenoxyetanol
(and)
Caprylic glicol
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
BHT 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 Sorbitan Monooleate 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 Polyssorbate 80 9.1 9.1 9.1 9.1
9.1 9.1 9.1 9.1 Dissodium EDTA 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 Enriched fraction (EF) 0.5 0.5 0.5 0.5 – – – – Distilled
Water 48.3 58.3 68.3 78.3 48.8 58.8 68.8 78.8
SMAG Barreto et al. Industrial Crops & Products 108 (2017) 470–479
Table 3 Mean droplet diameter (Z-average) polydispersity index (PDI) and zeta potential (ZP) values of preliminary stability tests
of nanoemulsions with and without the polysaccharide-enriched fraction.
Formulation Z-average (d.nm) PDI Zeta Potencial (mV) pH
(t0) (t5) (t0) (t5) (t0) (t5) (t0) (t5)
N1v 155.80 ± 3.99 158.60 ± 3.33 0.09 ± 0.02 0.07 ± 0.00 * −20.41 ± 2.58 −16.01 ± 0.43 5.01 ± 0.05 5.17 ± 0.06 N2v 130.0 ±
1.99 134.0 ± 1.92 * 0.12 ± 0.02 0.09 ± 0.01 −17.33 ± 1.51 −14.23 ± 1.13* 4.88 ± 0.32 5.24 ± 0.11 N3v PS PS PS PS PS PS PS
PS N4v 84.69 ± 1.64 160.01 ± 15.81* 0.24 ± 0.00 0.05 ± 0.03 * −13.57 ± 1.30 −12.70 ± 0.75 5.21 ± 0.04 5.33 ± 0.06 * N1 155.0
± 1.29 158.4 ± 2.91 0.10 ± 0.01 0.09 ± 0.01 −17.67 ± 0.40 −12.27 ± 1.88 4.47 ± 0.09 4.48 ± 0.01 N2 124.3 ± 4.50 PS 0.12 ± 0.01
PS −14.67 ± 1.24 PS 4.43 ± 0.02 PS N3 113.5 ± 1.24 133.2 ± 7.30 * 0.17 ± 0.00 0.09 ± 0.01* −13.02 ± 1.8 −11.30 ± 0.44 4.42 ±
0.02 4.45 ± 0.03 N4 83.57 ± 2.35 188.07 ± 7.30 * 0.23 ± 0.00 0.05 ± 0.00 * −10.64 ± 1.73 −10.67 ± 0.67 4.42 ± 0.02 4.44 ± 0.01
In Which: * = p-value < 0.05 for student's t-test (paired). PS = Phase separation.
than |30|Mv (Table 3). N2v showed significant reduction (p > 0.05) in
these authors increased the sonication time of the
samples from 15 to the zeta potential values after storage at 45 °C. Negative zeta potential
30 min, the formulations showed no change in the
droplet size in these values can be related to the adsorption of hydroxyl ions from the
temperature conditions. Thus, we can suggest that an
increase in the polyoxyethylene chains present in the surfactants used (Polysorbate 80
time of preparation of the our nanoemulsions could
inhibit the changes and Sorbitan Monooleate) (Mahdi et al., 2011).
caused by the exposure of nanoemulsions to higher
temperatures. Topical formulations must have a pH value compatible with skin
During storage time, there was no macroscopic
evidence of instability (4.5–6.0) (Ribeiro et al., 2015b). Except for formulation N4v, no change
phenomena such as cremation, coalescence or
flocculation, attributed was observed in the pH values after storage at 45 ± 2 °C; this indicates
to the droplet size remaining in the manometer scale
during the eva- that there were no modifications in the components of the formulations.
luation period. N1 e N1v formulations were considered
stable under conditions of
Despite the significant increase in droplet size at 45
°C, the PDI preliminary stability tests and were therefore evaluated by the ac-
values were not significantly altered and remained at
around 0.1. celerated stability tests.
Ribeiro et al. (2015b) and Saberi et al. (2013) observed changes in droplet size without significant changes in polydispersity
index values.
3.4.2. Accelerated stability assessment
Table 4 presents the results for the mean diameter (Z-average), polydispersity index (PDI), and zeta potential (ZP) values of
the na- noemulsions after 24 h of production and after 90 days of storage in different conditions.
No significant variations in mean diameter and polydispersity index values were observed at temperatures of 4°C and 25°C
indicating stability. In contrast, a variation in Z-average values was observed with nanoemulsions stored at 45 °C. The increase in
droplet size may cause instability in terms of phase separation (Saberi et al., 2013). According to Komaiko and McClements
(2014), these changes in droplet size may be associated with the sensitivity of nonionic surfactants to tempera- ture. Similar to
that observed in our studies, Luo et al. (2017) observed changes in droplet size in nanoemulsions due to exposure to higher
temperatures. These authors obtained stable nanoemulsions with changes in droplet size when stored at temperatures of 55 °C for
a period of 14 days, with a small droplet aggregation not observed for the samples stored at 4 °C and 25 °C.
Carpenter and Saharan (2017) used the same methodology (ultra- sonication) of obtaining and the same surfactants, they
observed a proportional increase in the droplet size of nanoemulsions, when ex-
Table 4 Results of accelerated stability tests after 24 h and 90 days. Mean diameter (Z-average) polydispersity index (PDI) and
zeta potential (ZP) values of the nanoemulsion.
Evaluated parameters
476
Thus, it can be stated that because nanoemulsions do not present such changes, and when compared to their initial characteristics,
can be considered stable (Ribeiro et al., 2015b).
The droplet size distribution by intensity evaluation showed an occurrence of a high intensity peak, monomodal type (Fig. 5).
In ad- dition, a lower PDI values of the formulations indicated the stability of systems and the efficiency of the ultrasound
method to obtain stable nanoemulsions.
After 90 days of storage at 4 °C, 25 °C, and 45 °C, the formulations showed no change in the zeta potential values, indicating
stability for the nanoemulsions. The lower values of zeta potential can be due the steric stabilization mechanism (Wu et al.,
2011).
In this context we can consider that both the vehicle (N1v) and the formulation containing 0.5% polysaccharide-enriched
fraction (N1) were stable.
In the first stage of this research, we obtained the raw material and evaluated the safety of the polysaccharide-enriched
fraction from A. sisalana by-product. We then conducted the development of the stable nanoemulsions. Finally, formulations
added or not added with poly- saccharide-enriched fraction were subjected to clinical tests to evaluate their moisturizing efficacy.
posed to the temperatures of 40 °C, 60 °C and 80 °C for 90 days. When
Initial values (24 h) Nanoemulsion N1 Initial values (24 h) Nanoemulsion N1v
After 90 days After 90 days
4 °C 25 °C 45 °C 4 °C 25 °C 45 °C
Z-average
(d.nm)
171. 23 ± 3.49 165.0 ± 4.27 174.86 ± 2.29 237. 84 ± 3.84* 174. 81 ± 5.37 172.71 ± 10.6 175.97 ± 6.19 215.79 ± 11.11
PDI 0.12 ± 0.02 0.09 ± 0.02 0.09 ± 0.01 0.08 ± 0.03 0.11 ± 0.02 0.09 ± 0.03 0.10 ± 0.02 0.09 ± 0.04 ZetaPotential (mV)
−15. 77 ± 2.20 −18. 02 ± 1.78 −16. 10 ± 2.73 −18. 91 ± 3.14 −23. 03 ± 1.94 −20.78 ± 2.19 −22. 78 ± 3.04 −19.04 ± 2.31
In which: * = p < 0.05 for ANOVA (one –way); v = vehicle.
SMAG Barreto et al. Industrial Crops & Products 108 (2017) 470–479
Fig. 5. Droplet size distribution (intensity vs droplet diameter) obtained by Dynamic Light Scattering.
Table 5 Water content values of the stratum corneum (Arbitrary Units) before (baseline) and 1, 2, 3, 4 and 5 h after single
application of the formulations. The results are shown in mean values ± standard error of the mean.
Time A1 A2 A3 A4
Baseline 39.32 ± 1.86 37.51 ± 1.59 39.05 ± 1.87 37.86 ± 1.86abc 1 37.29 ± 1.84 41.74 ± 1.14 44.37 ± 1.57a 58.66 ± 2.56abc 2
38.66 ± 1.98 46.81 ± 1.09a 50.84 ± 1.22ab 58.64 ± 2.65abc 3 40.73 ± 2.05 49.74 ± 1.40a 53.07 ± 1.46ab 58.44 ± 2.75abc 4 42.74
± 1.91 47.99 ± 1.70a 52.18 ± 1.51ab 57.80 ± 2.47abc 5 44.30 ± 2.38 47.98 ± 2.03 52.84 ± 1.84ab 58.52 ± 2.89abc
In which: A1 – Negative control; A2 – Vehicle; A3- Nanoemulsion containing 0.5% of the polysaccharide-enriched fraction; A4
– Positive control (commercial moisturizer); a = statistically different from A1, b = statistically different from A2; c =
statistically different from A3; p-value < 0.05 for ANOVA + Tukey.
3.5. In vivo evaluation of skin hydration
The evaluation of the water content on the stratum corneum was assessed by corneometry based on the changes in the skin
capacitance caused by the increase or decrease in its aqueous content. The barrier function of the skin was evaluated by
transepidermal water loss, by measuring the density gradient of the water evaporation from the skin (Byrne. 2010). Table 5 shows
the results obtained for the water content
477
Table 6 Transepidermal water loss (g/m2/h) values before (baseline) and 1, 2, 3, 4 and 5 h after single application of the
formulations. The results are shown in mean values ± standard error of the mean.
of the stratum corneum.
Time A1 A2 A3 A4 When compared to the negative
control (A1), the vehicle (A2) sig- nificantly increased (p < 0.05) the aqueous content of the stratum corneum, and this effect
continued until the fourth hour of the study.
Baseline 1 2 11.33 ± 1.09 12.54 ± 1.05 12.90 ± 1.03 14.17 ± 1.20 11.61 ± 1.09 12.09 ± 1.12 12.13 ± 1.21 12.97 ± 1.15 12.06 ±
1.11 12.45 ± 1.17 12.92 ± 1.13 13.03 ± 1.06 However, the nanoemulsion containing 0.5% of the polysaccharide-
3 11.77 ± 0.95 12.84 ± 1.02 12.79 ± 0.98 13.32 ±
0.98 enriched fraction (A3) achieved hydration effect of the skin from the first hour and this property was maintained throughout
the study
4 5 11.57 ± 1.05 11.94 ± 1.00 12.33 ± 1.06 13.05 ± 1.13 12.22 ± 1.01 12.98 ± 0.93 12.98 ± 1.03 12.94 ± 1.09
period (5 h). From the second hour, the hydration values achieved by the nanoemulsion containing the fraction from the A.
sisalana (EF) by-
In which: A1 – Negative control; A2 – Vehicle; A3- Nanoemulsion containing 0.5% of the polysaccharide-enriched fraction; A4
– Positive control (commercial moisturizer).
product were significantly higher (p < 0.05) than the vehicle for- mulation. This result showed that the moisturizing property is
from polysaccharide-enriched fraction and not from vehicle components of the formulation.
The moisturizing capacity of the polysaccharide-enriched fraction can be related to the compounds present in the chemical
constitution such as polysaccharides (results no shown). Futrakul et al. (2010) evaluated the moisturizing capacity of a
polysaccharide gel obtained from Durio zebethinus Murr. and demonstrated the ability of these constituents to promote the
increase in the water content of the stratum corneum. Polysaccharides biotechnologically obtained from Klebsiella pneumoniae
and polysaccharides obtained from Myrtus communis extract promoted increased hydration of the skin (Camargo Junior et al.,
2012). According to Dal'Bello et al. (2006) the association of polysaccharides and amino acids (histidine, arginine, threonine,
serine, glycine and alanine) was able to promote increase of skin hydration. Table 6 shows the transepidermal water loss values
obtained from the treated areas (A2, A3 and A4) and untreated area (A1).
SMAG Barreto et al. Industrial Crops & Products 108 (2017) 470–479
478 There were no statistically significant changes in the
transepidermal
References water loss. Similar results were observed
by Ribeiro et al. (2015b) wherein nanoemulsions containing Opuntia ficus-indica hydroglycolic
Amaral-Machado, L., Xavier-júnior, FH, Rutckeviski,
R., Morais, ARV, Alencar, É.N., extract promoted increase in the water content in the superficial layer of the skin and maintained
unchanged the skin barrier condition. Ac- cording to Dal'Bello et al. (2006), the ability to increase the water levels
Dantas, TRF, Cruz, AKM, 2016. New trends on antineoplastic therapy research: bullfrog (Rana catesbeiana shaw) oil
nanostructured systems. Molecules 21 (5), 585. http://dx.doi.org/10.3390/molecules21050585. Antignac, E., Nohynek, GJ, Re,
T., Clouzeau, J., Toutain, H., 2011. Safety of botanical in the superficial layer of skin combined with non-modification in water
loss values may be related to the hygroscopic capacity of mono- and polysaccharides present in extracts.
ingredients in personal care products/cosmetics. Makanan Chem. Toxicol. 49 (2), 324–341.
http://dx.doi.org/10.1016/j.fct.2010.11.022. Anvisa, 2012. Guidelines for Safety Evaluation of Cosmetic. http://www.saocamilo-
sp.br/ biblioteca/ebooks/Guia_cosmeticos_grafica_final.pdf (Accessed 23 August 2016). The hygroscopic characteristic of these
compounds combined with
Athukorala, Y., Kim, KN, Jeon, YJ, 2006.
Antiproliferative and antioxidant properties the higher permeability obtained by the nanoemulsions can promote the permeation
of the active compounds by the stratum corneum and,
of an enzymatic hydrolysate from brown algae, Ecklonia cava. Makanan Chem. Toxicol. 44 (7), 1065–1074.
http://dx.doi.org/10.1016/j.fct.2006.01.011. Bali, V., Ali, M., Ali, J., 2010. Study of surfactant combinations and development of
a thus by extension, the retention of water (Dal'Bello et al., 2006; Lu
novel nanoemulsion for minimising variations in
bioavailability of ezetimibe. et al., 2014). However, it should be noted that the type of vehicle can influence the mechanism of
action by which the moisturizer active can
Colloids Surf. B Biointerfaces 76 (2), 410–420. http://dx.doi.org/10.1016/j.colsurfb. 2009.11.021. Bonté, F., 2011. Skin
moisturization mechanisms: new data. Ann. Pharm. Fr. 69 (3), act (Damasceno et al., 2016).
135–141.
http://dx.doi.org/10.1016/j.pharma.2011.01.004. According to Lóden (2012), the reduction of transepidermal water loss is
dependent on the amount of lipid content present in the for-
Bradford, MM, 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72 (1–2), 248–254.
http://dx.doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3. mulations. Thus, the predominantly aqueous content of nanoemulsions
Byrne, AJ, 2010. Bioengineering and subjective
approaches to the clinical evaluation of may be the reason for the non-formation of film capable of reducing the loss of skin
water. On the other hand, the increase in water content caused by presence the actives that promote the retention of water in
dry skin. Int. J. Cosmet. Sci. 32 (6), 410–421. http://dx.doi.org/10.1111/j.1468- 2494.2010.00584.x. Camargo Junior, FB, Gaspar,
LR, Maia Campos, PMBG, 2012. Immediate and long- term effects of polysaccharides-based formulations on humam skin.
Brazilian. J. the stratum corneum may support the increase in the transepidermal water loss (Draelos, 2000; Ribeiro et al., 2015b).
Finally, through this work, it was possible to find that EF, a raw
Pharm Sci. 48 (3), 548–555. http://dx.doi.org/10.1590/S1984- 82502012000300022. Carpenter, J., Saharan, VK, 2017. Ultrasonic
assisted formation and stability of mustard oil in water nanoemulsion: effect of process parameters and their optimization.
material obtained from the by-product of the sisal industry, can be
Ultrason. Sonochem. 35 (Part A), 422–430.
http://dx.doi.org/10.1016/j.ultsonch. considered as a new raw material for the cosmetic industry with moisturizing efficacy. This
work contributes to the productive chain of
2016.10.021. Chen, PY, Kuo, YC, Chen, CH, Kuo, YH, Lee, CK, 2009. Isolation and im-
 munomodulatory effect of homoisoflavones and
flavones from Agave sisalana Perrine A. sisalana, thus proposing other uses for the by-product that can have
Ex Engelm. Molecules 14 (5), 1789–1795.
http://dx.doi.org/10.3390/ an environmental impact. This can also have socioeconomic contribu- tion, especially for families, who
are financially dependent on sisal
molecules14051789. Daithankar, AV, Padamwar, MN, Pisal, SS, Paradkar, AR, Mahadik, KR, 2005.
Moisturizing efficiency of silk protein hydrolysate:
silk fibroin. Indian J. Biotechnol. cultivation and production.
4, 115–121. Dal'Bello, SE, Gaspar, LR, Maia Campos, PMBG, 2006. Moisturizing effect of cos-
metic formulations containing Aloe vera extract in different concentrations assessed
4. Conclusion
by skin bioengineering techniques. Ski. Res. Technol. 12 (4), 241–246. http: //dx.doi. org/10.1111/j.0909-752X.2006.00155.x.
Damasceno, GAB, Silva, RMAC, Fernandes, JM, Ostrosky, EA, Langassner, SMZ, The industry of sisal (Agave sisalana)
produces a large amount of by- product that is disposed into the environment. This study has con-
Ferrari, M., 2016. Use of Opuntia ficus-indica (L.) Mill extracts from Brazilian Caatinga as an alternative of natural moisturizer
in cosmetic formulations. Braz. J. Pharm. Sci. 52 (3), 459–470. http://dx.doi.org/10.1590/s1984-82502016000300012. tributed to
the cosmetic and environmental area by enabling a dis- carded material to become a marketable raw material. A poly- saccharide-
enriched fraction was obtained from the crude extract of the
Draelos, ZD, 2000. Therapeutic moisturizers. Dermatol. Clin. 18 (4), 597–607. http: // dx.
doi.org/10.1016/S0733-8635(05)70210-2. Dreno, B., Araviiskaia, E., Berardesca, E., Bieber, T., Hawk, J., Sanchez-Viera, M.,
Wolkenstein, P., 2014. The science of
dermocosmetics and its role in dermatology. J. by-product of the processing of the leaves of A. sisalana. In vitro and in
Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 28 (11), 1409–
1417. http://dx.doi.org/10.1111/jdv. vivo tests have demonstrated that the fraction for topical use is safe, does not show
cytotoxicity or phototoxicity, and can be considered non-
12497. Dubois, M., Gilles, KA, Hamilton, JK, Rebers, PA, Smith, F., 1956. Colorimetric
method for determination of sugars and related
substances. Anal. Chem. 28 (3), irritating. A nanoemulsion formulation of 40% oily phase, 50% aqueous
350–356. http://dx.doi.org/10.1021/ac60111a017.
phase, and 10% surfactant additive with 0.5% of the fraction was ob- tained and assessed as stable for a period of 90 days. The
nanoemul-
Felippi, CC, Oliveira, D., Ströher, A., Carvalho, AR, Van Etten, EAMA, Bruschi, M.,
Raffin, RP, 2012. Safety and efficacy of antioxidants-loaded nanoparticles for an anti-aging application. J. Biomed. Nanotechnol.
8 (2), 316–321. http://dx.doi.org/ sions containing the polysaccharide-enriched fraction showed moist-
10.1166/jbn.2012.1379. urizing properties,
improving both the increase in the water content of the stratum corneum, and it maintained the skin barrier function after 5 h of a
single application. Thus, a nanocosmetic product was devel-
Freitas, JV, Gaspar, LR, 2016. In vitro photosafety and efficacy screening of apigenin,
chrysin and beta-carotene for UVA and VIS protection. Eur. J. Pharm. Sci. 89, 146–153.
http://dx.doi.org/10.1016/j.ejps.2016.04.032. Futrakul, B., Kanlayavattanakul, M., Krisdaphong, P., 2010. Biophysic evaluation
of oped and it will contribute to biodiversity appreciation and social- economic development, enabling the use of the industrial
residue to be a potential raw material for skin care.
polysaccharide gel from durian's fruit hulls for skin moisturizer. Int. J. Cosmet. Sci. 32 (3), 211–215.
http://dx.doi.org/10.1111/j.1468-2494.2009.00552.x. Ganesan, P., Choi, DK, 2016. Current application of phytocompound-based
nano-
cosmeceuticals for beauty and skin therapy. Int. J. Nanomed. 11, 1987–2007. http:// dx.doi.org/10.2147/IJN.S104701. Garbossa,
WAC, Maia Campos, PMBG, 2016. Euterpe oleracea, Matricaria chamo-
Acknowledgments
milla, and Camellia sinensis as promising ingredients for development of skin care formulations. Ind. Tanaman Prod. 83, 1–10.
http://dx.doi.org/10.1016/j.indcrop.2015. 11.026. The authors are grateful to Sisaltec Industry, Croda of Brazil Ltda., Lubrizol of
Brazil Ltda. and International Pharmaceutical Immunology
Gianeti, MD, Maia Campos, PMBG, 2012. Avaliação da eficácia de formulações
cosméticas contendo extratos proteicos de trigo e soja por técnicas de biofísica e microscopia confocal a laser. Rev. Bras. Med.
Especial Dermatol. 1, 12–18. do Brasil Ltda (IPI ASAC Brasil) for providing free sample materials. The
Gianeti, M., Wagemaker, TAL, Seixas, VC, Maia
Campos, PMBG, 2012. The use of authors would also like to thank the Laboratório de Sistemas Dispersos (LASID-UFRN). The
authors are thankful Federal University of Rio
nanotechnology in cosmetic formulations: the influence of vehicle in the vitamin a skin penetration. Curr. Nanosci. 8 (4), 526–
534. http://dx.doi.org/10.2174/ 157341312801784375. Grande do Norte (UFRN), Conselho Nacional de Desenvolvimento
Gupta, A., Eral, HB, Hatton, TA, Doyle, PS, 2016.
Nanoemulsions: formation, prop- Científico e Tecnológico (CNPq) and Comissão de Aperfeiçoamento de Pessoal do Nível
Superior (CAPES) for supporting this work.
erties and applications. Soft Matter 12, 2826–2841. http://dx.doi.org/10.1039/ C5SM02958A.
SMAG Barreto et al. Industrial Crops & Products 108 (2017) 470–479
479 Gutiérrez, A., Rodríguez, IM, del Río, JC, 2008.
Chemical composition of lipophilic
OECD, 2004. Guidelines for the Testing of Chemicals
Test No. 432: In Vitro 3T3 NRU extractives from sisal (Agave sisalana) fibers. Ind. Tanaman Prod. 28, 81–87. http: // dx.
Phototoxicity Test. http://www.oecd-
ilibrary.org/environment/test-no-432-in-vitro- doi.org/10.1016/j.indcrop.2008.01.008.
3t3-nru-phototoxicity-test_9789264071162-
en;jsessionid=1qqvzmv5d301o.x-oecd- ICCVAM, 2006. Peer Review Panel Report: the Use of in Vitro Basal Cytotoxicity Test
live-03 (Accessed 23 August 2016). Methods for
Estimating Starting Doses for Acute Oral Systemic Toxicity Testing. .
OECD, 2010. Guidance Document on Using Cytotoxicity
Tests to Estimate Starting Doses http://iccvam.niehs.nih.gov/docs/acutetox_docs/ATpanelrpt06/ATpanelrpt.pdf
for Acute Oral Systemic Toxicity Tests.
http://www.oecd.org/chemicalsafety/ (Accssed 04 April 2016).
testing/seriesontestingandassessmenttestingforhum
anhealth.htm (Accessed 23 ISO, 2009. Biological Evaluation of Medical Devices – Part 5: Tests for in Vitro
August 2016). Cytotoxicity.
http://www.iso.org/iso/catalogue_detail.htm%3Fcsnumber=36406
Peshkovsky, AS, Peshkovsky, SL, Bystryak, S., 2013.
Scalable high-power ultrasonic (Accssed 23 August 2016).
technology for the production of translucent
nanoemulsions. Chem. Eng. Proses. Izquierdo, P., Esquena, J., Tadros, TF, Dederen, C., Garcia, MJ, Azemar, N., Solans, C.,
Process Intensif. 69, 77–82.
http://dx.doi.org/10.1016/j.cep.2013.02.010. 2002. Formation and stability of nano-emulsions prepared using the phase inversion
Ribeiro, BD, Barreto, DW, Coelho, MAZ, 2015a. Use of
micellar extraction and cloud temperature method. Langmuir 18 (1), 26–30. http://dx.doi.org/10.1021/
point preconcentration for valorization of saponins
from sisal (Agave sisalana) waste. la010808c.
Food Bioprod. Proses. 601–609.
http://dx.doi.org/10.1016/j.fbp.2014.07.004. Jafari, SM, He, Y., Bhandari, B., 2006. Nano-emulsion production by sonication and
Ribeiro, RCA, Barreto, SMAG, Ostrosky, EA, Rocha-
Filho, PA, Veríssimo, LM, microfluidization-A comparison. Int. J. Food Prop. 9 (3), 475–485. http://dx.doi.org/
Ferrari, M., 2015b. Production and characterization of
cosmetic nanoemulsions 10.1080/10942910600596464.
containing Opuntia ficus-indica (L.) mill extract as
moisturizing agent. Molecules 20 Kabri, T., Arab-Tehrany, E., Belhaj, N., Linder, M., 2011. Physico-chemical character-
(2), 2492–2509.
http://dx.doi.org/10.3390/molecules20022492. ization of nano-emulsions in cosmetic matrix enriched on omega-3. J.
Rocha-Filho, PA, Maruno, M., Ferrari, M., Topan, J.,
2016. Liquid crystal formation from Nanobiotechnol. 9 (41), 1–8. http://dx.doi.org/10.1186/1477-3155-9-41.
sunflower oil: long term stability studies.
Molecules 21 (6), 680. http://dx.doi.org/ Kligman, AM, Wooding, WM, 1967. A method for the measurement and evaluation of
10.3390/molecules21060680. irritants on human skin.
J. Invest. Dermatol. 49 (1), 78–94. http://dx.doi.org/10.
 Saberi, AH, Fang, Y., McClements, DJ, 2013. Fabrication
of vitamin E-enriched na- 1038/jid.1967.106.
noemulsions: factors affecting particle size using
spontaneous emulsification. J. Komaiko, J., McClements, DJ, 2014. Optimization of isothermal low-energy nanoe-
Colloid Interface Sci. 391, 95–102.
http://dx.doi.org/10.1016/j.jcis.2012.08.069. mulsion formation: hydrocarbon oil, non-ionic surfactant, and water systems. J.
Santos, JDG, Espeleta, AF, Branco, A., Assis, SA, 2013.
Aqueous extraction of pectin Colloid Interface Sci. 425, 59–66. http://dx.doi.org/10.1016/j.jcis.2014.03.035.
from sisal waste. Carbohydr. Polym. 92 (2), 1997–
2001. http://dx.doi.org/10.1016/ Lóden, M., 2012. Effect of moisturizers on epidermal barrier function. Clin. Dermatol. 30
j.carbpol.2012.11.089. (3), 286–296.
http://dx.doi.org/10.1016/j.clindermatol.2011.08.015.
Shao, P., Zhu, Y., Jin, W., 2017. Physical and
chemical stabilities of β-carotene emulsions Lo, I., Florence, AT, Treguier, JP, Seiller, M., Puisieux, F., 1976. The influence of
stabilized by Ulva fasciata polysaccharide. Food
Hydrocoll. 64, 28–35. http: //dx.doi. surfactant HLB and the nature of the oil phase on the phase diagrams of nonionic
org/10.1016/j.foodhyd.2016.10.023. surfactant −oil
−water system. J. Colloid Interface Sci. 59 (2), 319–327.
Silva, AL, Marcelino, HR, Veríssimo, LM, Araujo, IB,
Agnez-Lima, LF, do Egito, Lu, WC, Chiang, BH, Huang, DW, Li, PH, 2014. Skin permeation of d-limonene-based
EST, 2016. Stearylamine-containing cationic
nanoemulsion as a promising carrier nanoemulsions as a transdermal carrier prepared by ultrasonic emulsification.
for gene delivery. J. Nanosci. Nanotechnol. 16 (2),
1339–1345. http://dx.doi.org/10. Ultrason. Sonochem. 21 (2), 826–832. http://dx.doi.org/10.1016/j.ultsonch.2013.
1166/jnn.2016.11671. 10.013.
Stojiljković, D., Arsić, I., Tadić, V., 2016. Extracts of
wild apple fruit (Malus sylvestris (L.) Luo, X., Zhou, Y., Bai, L., Liu, F., Deng, Y., McClements, DJ, 2017. Fabrication of β-
Mill., Rosaceae) as a source of antioxidant substances
for use in production of nu- carotene nanoemulsion-based delivery systems using dual-channel microfluidization:
traceuticals and cosmeceuticals. Ind. Tanaman Prod.
80, 165–176. http://dx.doi.org/10. physical and chemical stability. J. Colloid Interface Sci. 490, 328–335. http: //dx.doi.
1016/j.indcrop.2015.11.023.
org/10.1016/j.jcis.2016.11.057.
Tadros, T., Izquierdo, P., Esquena, J., Solans, C.,
2004. Formation and stability of nano- Mahdi, ES, Noor, AM, Sakeena, MH, Abdullah, GZ, Abdulkarim, MF, Sattar, MA,
emulsions. Adv. Colloid Interface Sci. 108–109, 303–
318. http://dx.doi.org/10. 2011. Formulation and in vitro release evaluation of newly synthesized palm kernel
1016/j.cis.2003.10.023. oil esters-based nanoemulsion
delivery system for 30% ethanolic dried extract de-
Tichota, DM, Silva, AC, Sousa Lobo, JM, Amaral, MH,
2014. Design, characteriza- rived from local Phyllanthus urinaria for skin antiaging. Int. J. Nanomed. 6,
tion, and clinical evaluation of argan oil
nanostructured lipid carriers to improve skin 2499–2512. http://dx.doi.org/10.2147/IJN.S22337.
hydration. Int. J. Nanomed. 9 (1), 3855–3864.
http://dx.doi.org/10.2147/IJN. Maia Campos, PMBG, Gianeti, MD, Camargo Jr., FB, Gaspar, LR, 2012. Application
 S64008. of tetra-isopalmitoyl ascorbic acid in cosmetic
formulations: stability studies and in
Wilkinson, DS, Fregert, S., Magnusson, B., Bandmann,
HJ, Calnan, CD, Cronin, E., vivo efficacy. Eur. J. Pharm. Biopharm. 82 (3), 580–586. http://dx.doi.org/10.1016/
Hjorth, N., Maibach, HJ, Malalten, KE, Meneghini,
CL, Pirilä, V., 1970. j.ejpb.2012.08.009.
Terminology of contact dermatitis. Acta Dermato
Venereol. 50 (4), 287–292. Maran, JP, Priya, B., 2014. Ultrasound-assisted extraction of pectin from sisal waste.
Wooster, TJ, Golding, M., Sanguansri, P., 2008. Ripening
stability. Langmuir 24 (22), Carbohydr. Polym. 115, 732–738. http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2014.07.058.
12758–12765. http://dx.doi.org/10.1021/la801685v.
McClements, DJ, Rao, J., 2011. Food-grade nanoemulsions: formulation, fabrication,
Wu, L., Zhang, J., Watanabe, W., 2011. Physical and
chemical stability of drug nano- properties, performance, biological fate, and potential toxicity. Crit. Rev. Food Sci.
partikel. Adv. Obat deliv. Rev. 63 (6), 456–469.
http://dx.doi.org/10.1016/j.addr. Nutr. 51 (4), 285–330. http://dx.doi.org/10.1080/10408398.2011.559558.
2011.02.001. McClements, DJ, 2012.
Nanoemulsions versus microemulsions: terminology, differ-
Zhang, X., Liu, L., Lin, C., 2013. Structural features,
antioxidant and immunological ac- ences, and similarities. Soft Matter 8 (6), 1719–1729. http://dx.doi.org/10.1039/
tivity of a new polysaccharide (SP1) from sisal
residue. Int. J. Biol. Macromol. 59, c2sm06903b.
184–191.
http://dx.doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.04.052. Nohynek, GJ, Antignac, E., Re, T., Toutain, H., 2010. Safety assessment of
personal care
Zhang, X., Liu, L., Lin, C., 2014. Isolation, structural
characterization and antioxidant products/cosmetics and their ingredients. Toxicol. Appl. Pharmacol. 243 (2),
activity of a neutral polysaccharide from Sisal waste.
Food Hydrocoll. 39, 10–18. 239–259. http://dx.doi.org/10.1016/j.taap.2009.12.001.
http://dx.doi.org/10.1016/j.foodhyd.2013.12.012.