BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN

3.1.Alat dan Bahan

Dibawah ini merupakan alat maupun bahan yang dibutuhkan untuk melakukan uji
kualitatif bakteri indikator sanitasi dan patogen
1. 1 cawan petri
2. Jarum ose
3. 1 botol larutan pengencer 90 ml
4. 4 tabung larutan pengencer 9 ml
5. 12 tabung lactose broth dengan tabung durham atau 12 tabung briliant
Green lactose bile broth dengan tabung durham
6. 15 ml medium EMBA
7. 2 tabung larutan pengencer 2 ml
8. 2 tabung medium tryptone broth (TB)
9. 2 tabung medium koser sitrat
10. 4 tabung MRVP
11. Pereaksi IMViC
12. Kontrol E. coli disediakan : 1 tabung TB, 2 tabung MRVP, dan 1 tabung koser
sitrat.

3.2.Cara Kerja
Terdapat beberapa uji yang akan dilakukan dalam praktikum kali ini, yaitu
A. Uji penduga
1. Lakukan uji koliform terhadap contoh air menggunakan 5 seri tabung dan
minuman menggunakan 3 seri tabung pada 4 tingkat pengenceran yaitu 10-0 –
10-3 dengan medium sebagai berikut
Contoh Medium Seri MPN
Es campur LB 3 seri tabung
Es degan BGLBB 5 seri tabung
Air keran BGLBB 5 seri tabung
AMDK (SWA) LB 3 seri tabung
AMDK (Cleo) LB 3 seri tabung

2. Inokulasi medium dengan 1 ml contoh dari masing-masing tingkat

pengenceran
3. Inkubasi semua tabung pada suhu 37֯C selama 2 hari
4. Hitung jumlah tabung positif yang ditandai dengan adanya pembentukan gas
pada tabung durham
5. Cocokkan hasil pengamatan dengan tabel MPN 3 seri dan 5 seri tabung,
hitung dan nyatakan dalam MPN koliform penduga / ml contoh

B. Uji penguat
 1. Pilih tabung positif dari uji penduga, kemudian ambil 1 – 2 ose dan gores
(goresan kuadran) pada cawan EMBA
2. Inkubasi cawan pada suhu 37֯C selama 2 hari
3. Amati adanya bakteri koliform fekal yang berbentuk kolobi berwarna
gelap dengan sinar hijau metalik berdiameter sekitar 0,5 – 1,5 mm dan
koloni bakteri koliform non fekal yang membentuk koloni warna merah
muda berdiameter 1 – 3 mm dengan bintik hitam atau gelap di bagian
tengahnya seperti mata ikan.

C. Identifikasi koliform
1. Pilih satu koloni fekal dan satu koloni non fekal
2. Suspensikan masing-masing koloni ke dalam 2 ml larutan pengencer
3. Inokulasikan sebanyak 0,5 ml suspensi bakteri tersebut masing-masing ke
dalam 1 tabung berisi trytone broth, 2 tabung berisi medium MRVP da 1
tabung berisi koser sitrat. Inokulasikan juga kultur murni E. coli sebagai
kontrol ke dalam tiga macam media tersebut.
4. Inkubasi semua tabung pada suhu 37֯C selama 2 hari, kecuali 1 tabung
MRVP selama 5 hari
5. Lakukan uji IMViC terhadap koliform dengan menambahkan pereaksi
sebagai berikut
Uji Medium Pereaksi Reaksi positif
Indol Trytone Kovaks Warna merah
Broth
Metil Merah MRVP Metil merah Warna merah
5%
Voges MRVP Alfa natol Warna merah
Proskuer tua
Sitrat Koser Sitrat 40% KOH Timbulnya
kekeruhan
6. Tuliskan hasil pengamatan pada bagian pembahasan
 RANCANGAN KERJA MODUL 1

A. Uji penduga

Uji koliform, air menggunakan 5 seri tabung inokulasi medium dengan

Minuman menggunakan 3 seri tabung 10-0 – 10-3 1 ml contoh

Cocokkan hasil pengamatan hitung jumlah tabung inkubasi suhu 37֯C

Dengan tabel MPN positif ditandai adanya gas selama 2 hari

B. Uji penguat

Pilih tabung positif ambil 1-2 ose lalu gores inkubasi suhu 37֯C
Dari uji penduga kuadran selama 2 hari

Amati adanya bakteri koliform fekal yang berebntuk koloni

berwarna gelap dengan sinar hijau metalik dan koloni bakteri non fekal yang membentuk
koloni berwarna merah muda dengan bintik hitam/gelap dibagian tengah
 C. Identifikasi koliform

Pilih satu koloni fekal suspensikan koloni dengan inokulasi 0,5 ml

Dan non fekal 2 ml larutan pengencer suspensi ke 1 tabung
TB dan 2 tabung MRVP

Tulis hasil pengamatan lakukan uji IMViC thdp inkubasi semua

Koliform dengan penambahan tabung pada suhu
Pereaksi 37֯C selama 2 hari,
Dan 1 tabung MRVP
Selama 5 hari